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糖基化分析

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糖基化分析相关的论坛

  • 抗体糖基化分析

    附件中是有关抗体IgG 的糖基化相关研究;希望对大家有用!祝新年好!

  • N-糖链/糖肽纯化与免疫球蛋白G Fc糖基化定量分析

    [b][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【序号】:4【作者】: 曹翠岩【题名】:N-糖链/糖肽纯化与免疫球蛋白G Fc糖基化定量分析[/back][/color][/font][/b][align=left][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【期刊】:大连理工大学 博士论文[/back][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【年、卷、期、起止页码】:2022[/back][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][/color][/font][font='微软雅黑',sans-serif][color=black][back=white]【全文链接】:[/back][/color][/font][url=https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C447WN1SO36whLpCgh0R0Z-ia63qwICAcC3-s4XdRlECrS5ECsmZMDd20ZXc0ZZUotUGtkXc-cNy_5YsXaID81b6&uniplatform=NZKPT]N-糖链/糖肽纯化与免疫球蛋白GFc糖基化定量分析研究 - 中国知网 (cnki.net)[/url][/align][align=left] [/align]

  • CE-SDS测高糖基化蛋白

    有没有同学用CE-SDS测高糖基化蛋白的?现有的方法多数是测单抗的,对我目前检测的蛋白不适用。想要改进方法又没有方向。希望有类似研究方向的同学交流一下,怎么能建立一个适用的方法。我用的仪器是贝克曼PA800plus

  • 【分享】大气中羰基化合物GC/MS分析方法

    [img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=152826]大气中羰基化合物GC/MS分析方法[/url]摘要:介绍了一种灵敏度高、可靠并且能同时检测大气中2O种羰基化合物(C 一C 。)的分析方法.该方法是采用涂布PFPH(衍生剂)的TenaxTA作为固体吸附剂采集大气样品,然后再经过溶剂洗脱和[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]/质谱(GC/MS)分离检测的一项分析技术.校正曲线的可决系数(R。)、检测限(LOD)、平行样标准偏差(RSD,n=6)、回收率分别为0.995—1.00,0.15—1.04ngm~ ,7.3% 一15.8% 和92.7% ~109.2%.该方法成功地应用到对大气中羰基化合物的定量检测.对羰基化合物浓度的日变化分析表明,上海大气中羰基化合物浓度变化与大气光化学反应的强弱有密切关系.

  • 如何解析带有糖基化合物的NMR?

    带有糖基的化合物,一般在溶液中有异构体,比如果糖基,在重水中有开环式、闭环式,其中闭环式又有a-呋喃式、a-吡喃式、b-呋喃式、b-吡喃式,这样造成H谱和C谱比较复杂,如何解析这样的化合物?

  • O-GlcNAc糖基化及其糖蛋白规模化的鉴定

    [align=center][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]基[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]化[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]及其[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖蛋白规模化的鉴定[/color][/size][/align]O- [size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖基化是一种发生在蛋白质丝氨酸或苏氨酸上的具有一个糖单元结构的翻译后修饰,广泛分布在细胞核和细胞质中,是一种重要的胞内修饰调控方式。它参与细胞的多种应激响应和细胞进程,如信号转导、转录、翻译、蛋白降解、基因调控与细胞周期调控等。目前,已发现的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]1000[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]多种[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖蛋白中,主要有细胞骨架蛋白、核孔蛋白、转录因子、激素受体、磷酸酶、激酶等。[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖基化异常与一些疾病,如糖尿病、帕金森病、阿尔兹海默症等有紧密联系。因此,系统地对[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖基化蛋白质进行鉴定与分析[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d],[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]对于研究其生物学功能和在疾病发生发展中的作用都具有重要意义。[/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#0d0d0d][1][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#0d0d0d]与目前磷酸化蛋白的鉴定规模相比,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]蛋白的鉴定尚处于初级水平。[/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#0d0d0d][2-4][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#0d0d0d]导致[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]难以鉴定的原因主要有:[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]1[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]修饰在胞内是动态变化的,并且在细胞裂解时糖苷键容易被破坏;[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]2[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]修饰蛋白表达丰度较低,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]且糖基[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]化水平不一;[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]3[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]修饰蛋白在进行质谱检测时容易发生中性丢失,难以被完全检测。[/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#0d0d0d][5][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#0d0d0d]由于[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]修饰具有表达丰度低、高度动态变化、容易分解等特点,常规质谱鉴定手段难以对其实现高灵敏度、规模化的分析鉴定,因此对[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]的鉴定往往需要先对糖蛋白[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]/[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽进行分离富集后方能成功进行。[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]在近年来发展了多种针对[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖基化修饰蛋白质和[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]肽段[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]的分离与富集新策略,已有的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽富集方法包括凝集素富集法、抗体富集法、代谢标签富集法、化学酶促反应标签富集法以及酰肼富集法等。[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]基于亲和作用的直接捕捉方法操作简便,但由于亲和力较弱,难以避免非特异性吸附,导致特异性差;而通过非天然糖基的代谢标记法或化学酶促标记法将生物兼容性的反应基团([/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]炔[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]基、叠氮基等)引入[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽,再由点击化学反应进行捕捉可以显著提高糖肽的富集特异性,但点击化学等反应不可逆,容易造成糖肽修饰基团的质量标签过大,影响糖肽的鉴定效率,而且操作复杂。[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]因此,应该开发特异性高、覆盖高度、操作简便,并且不会影响质谱鉴定的新方法实现[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖蛋白规模化的鉴定。[/color][/size]

  • 【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    【分享】生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用

    生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用项目完成人:桑志红 蔡 耘项目完成单位:国家生物医学分析中心 随着人们对糖蛋白参与生命活动机理的日益深入了解,对天然糖蛋白及重组糖蛋白类药物的分析越来越受到重视。重组糖蛋白类药物的质量控制更是直接关系到药物的疗效及至人类的健康。九十年代以来,随着带有反射功能的基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和纳升电喷雾串联质谱(nano-ESI-Q-TOF)等具有软电离方式的现代质谱 技术的发展,质谱以其高灵敏度和强有力的分析混合物的能力,提供了生物大分子的分子量、序列、一级结构信息以及结构转换、修饰等方面的信息,使糖基化分析有了重要的进展。 通常研究糖蛋白的方法是把蛋白链上的寡糖切下来,分别研究蛋白部分和寡糖部分的结构,因此无法研究与两部分共同相关的结构问题,也不能区分不同糖基化位点上切下来的寡糖。自90年代初,国外有人开始用质谱法研究糖蛋白的结构,同时描述了各个位点的不均一性。我们用建立的现代生物质谱技术研究糖蛋白一级结构的方法,将其应用与基因重组糖蛋白的结构分析。为糖蛋白结构分析及基因重组糖蛋白类药物的质量控制提供新的手段。一、 生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立实验所用仪器为:1.德国BRUKER 公司的REFLEXIII型基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪,N2激光器,波长337nm,线性飞行距离150cm,加速电压2kv。2.英国Micromass 公司Q-TOF型电喷雾串联质谱仪。源温80°C,气体流速40L/h,枪头电压650V,检测频率2.4S,氩气碰撞池压力6*10-5mbar。1. 基质的选择,在MALDI-TOF-MS分析中,基质起着相当重要的作用。不同的基质对不同类的物质响应不同,a-氰基-4-羟基肉桂酸用于测定糖蛋白核糖核酸酶B效果相对较好。2. 糖蛋白分子量的测定,糖蛋白核糖核酸酶B由124个氨基酸组成,在34位Asn处连有一个高甘露糖型N-糖链。由于糖链的微不均一性,与普通蛋白质及核酸不同,其分子离子峰在MALDI-TOF-MS 质谱图上表现为一簇峰,各峰之间约相差一个糖基。正是由于这种微不均一性,使得其分子离子峰变宽,灵敏度降低。糖链分子量越大,峰越宽,灵敏度越低,所以一般只有糖链较短,蛋白的质量不太大的糖蛋白才能测定其平均分子量。用MALDI-TOF可直接测定糖蛋白核糖核酸酶B的平均分子量为 15208.6Da。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211511_284179_1604317_3.jpg3. 糖含量的测定,采用O聚糖酶及内糖苷键酶F分别作用于核糖核酸酶 B,只有内糖苷键酶F能够是其分子量发生变化,表明核糖核酸酶B分子中不存在O-连接糖链存在着N-连接糖链。内糖苷键酶F切断N-糖链五糖核心最内侧的GlcNAc-GlcNAc糖苷键,得到含一个GlcNAc的肽链,减去GlcNAc,可以计算出准确的肽链分子量T=13695.6,与糖蛋白平均分子量之差为糖链的平均分子量G=1513.4,平均糖含量为:(糖链大小/糖蛋白分子量)×100%=9.95%。4. 糖基化位点的确定,研究糖基化类型及糖基化位点的策略:采用蛋白酶酶解与糖苷内切酶酶解相结合的方法,通过酶切前后含糖肽片的位移,结合网上数据库检索,可以确定糖基化类型和糖基化位点。以不同类型的糖苷内切酶作用于糖蛋白(N-糖苷键酶或O-糖苷键酶),在MALDITOF-MS 上观察其质量的变化,可以直接确定糖蛋白中是否含有响应类型的糖链,这是我们确定糖蛋白中糖苷键类型的基础。我们采用先将核糖核酸酶B还原烷基化,加Glu-C酶切,产物再用内糖苷肩酶F酶切,可观察到含糖肽段出现位移,将核糖核酸酶B的肽质量指纹图进行数据库检索,证实发生位移的肽段中含有N-糖链特异连接位点,由此确定34位Asn为糖基化位点。另外我们采用内糖苷键酶F及肽-N-聚糖酶F两种酶进行差位酶切法对含糖肽段进行验证,两种酶酶切后分子离子峰的差值除以GlcNAc的质量,结果就是N-糖基化位点的个数5. 质谱测定氨基酸序列, 我们对核糖核酸酶B肽质量指纹谱中的含糖肽段进行了串联质谱测定,首先在一级质谱图中选择离子4972.23,在串联质谱的碰撞活化室以氩气与其碰撞产生碎片,从碎片的质荷比推算出此肽片中的一段氨基酸序列,检索结果为核糖核酸酶B,从而判断其理论序列是否一致。6. 糖链结构的研究,凝集素对糖肽的亲和提取,进一步分析糖肽序列及糖链结构的关键是含糖肽段的提取。核糖核酸酶B中糖链为高甘露糖型,我们选用对其有特异性吸附的伴刀豆球蛋白对其进行提取利用这种简捷的亲和质谱的方法,对糖肽段进行了分析。建立了亲和质谱分析糖肽类物质的方法,为今后糖肽序列分析及糖链结构分析奠定了基础。二、基因重组糖蛋白人促红细胞生成素(rhEPO)的结构分析。 利用以上建立的方法,我们对样品重组人促红细胞生成素进行了分析,断定此样品为非完全糖基化,样品中只存在N-连接的糖链,无O-糖链。应用酶切法用肽-N-聚糖酶处理后,得到两个含糖肽段,进行数据库检索,测得38位及83位为N-糖基化位点,与文献报道相符,结果可靠。因此,该项课

  • 己烯-1中的羰基化合物分析,有用得很好的方法吗?

    我们有进厂原料己烯-1,需要分析其中的羰基化合物,燕山石化有分光光度测定法,但我们建项做曲线时发现空白的吸光度都非常大,颜色很深,无法调零,想请教有经验的老师,这是怎么回事?具体步骤因为家里没有,没记住,有做过的应该知道吧。

  • 【第三届原创参赛】金属羰基化合物的红外光谱及应用

    【第三届原创参赛】金属羰基化合物的红外光谱及应用

    曾经在工作中接触过一点金属羰化物的红外分析,当时为了做好这项工作,我做了不少案头工作,现在我要离开分析行业了,整理了一下自己曾经做过的一些东西,真的还是有点留恋,就拿这些内容整理一下,作为原创大赛的最后一篇告别文。我这人其实挺烦为发表而作的八股文的,所以更喜欢比较自由的论坛帖子。好了,下面言归正传:一.基础知识 金属羰基化合物是指羰基和金属原子形成含σ-π配键的配位化合物,几乎全部的过渡金属可以和一氧化碳形成稳定的羰化物。这种配合物中金属离子的氧化态一般很低,有的甚至等于零,如4]、Na[Co(CO)[sub]4]、[Mn(CO)[sub]5Br]、Co[sub]2(CO)[sub]8]等。有些金属羰化物及其衍生物在一些有机合成中用作催化剂,有的已用于工业生产中,例如工业上常在高温高压下由合成气(CO+H[sub]2)与金属铑、钴或它们的盐合成羰化物作为催化剂。这里是别人列出的一些金属羰化物.[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012142027_267014_1640192_3.jpg[/img] 我接触到的是合成中用于均相催化剂的钴\铑\铱的羰基化合物.[/size]

  • 【讨论】HPLC分析前的汤剂样品前处理

    一般液相分析需要有良好的样品前处理过程,比如中药传统水煎煮的汤剂,如果直接用汤剂进样的话肯定不行,文献中好多方法都是将汤剂蒸干,再用有机溶剂溶解,这还算好的,有的还要再蒸干,再溶解,总之一定要用有机体系过度下。大家有什么简单又快速的好办法吗?如果我取10ml汤剂,用甲醇定容至50ml,那醇沉过程算完全吗?我总觉得不够完全,可能进样过程中还会产生沉淀,大家以为呢?

  • 【“仪”起享奥运】理化分析法做好三七的质量控制

    理化分析法是借助现代仪器设备,如薄层色谱仪、高效液相色谱仪等,对三七中主要化学成分进行鉴别、含量测定或有毒有害物质的测定。特别对于含三七的中成药,如复方丹参片、血塞通滴丸、注射用血塞通、血栓通注射液等,理化分析更为重要。 皂苷类化合物是三七的主要有效化学成分之一,其总含量的高低是衡量三七内在质量优劣的重要标准,三七中皂苷类成分的苷元化学结构绝大多数属于达玛烷型四环三萜皂。根据其结构可分为两个基本类型,即20(S)-原人参 二醇型和20(S)-原人参三醇型。该类结构规律性强,主要区别在于R1、R2、R3的种类不同,如含氧糖基的数量、种类等。含氧糖基主要包括α-L-鼠李吡喃糖基(rha)、α-L-阿拉伯吡喃糖基ara(pyr)]、β-D-葡萄吡喃糖基(glc)、α-D-葡萄吡喃糖基(glc*),β-D-木吡喃糖基(xyl)、α-L-阿拉伯呋喃糖基[ara(fur)]等。迄今为止,从三七的根、根茎、侧根、茎叶、花芽、种子和果梗中分离得到的皂苷类成分达130余种。其中,三七药材中所含化学成分从皂苷角度分类,大致可分为人参皂苷、三七皂苷、绞股蓝皂苷和七叶胆皂苷等。 三七与同属的人参、西洋参在化学成分上既有相似性,又有差异性,三七特有的成分为三七皂苷R1,其他含量较高的成分主要为人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd等,三七茎叶中人参皂苷Rb3的含量较高,而三七根和根茎中基本不含此成分。

  • O-GlcNAc糖基化修饰蛋白质和肽段的分离与富集新策略

    [align=center][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖基化修饰蛋白质和[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]肽段[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]的分离与富集新策略[/color][/size][/align][size=16px][color=#0d0d0d]作为[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]成功鉴定的前提,糖肽的分离富集一直是国内外研究的重点。近年来,针对[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖基化修饰丰度低,质谱响应性差,难以实现高灵敏度、规模化分析等难点,发展了凝集素法、抗体富集法、亲水富集法等多种针对[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖基化修饰蛋白质和[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]肽段[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]的分离与富集新策略。[/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#0d0d0d][7-8][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#0d0d0d]凝集素作为一类糖结合蛋白,能专一识别某种单糖或聚糖结构,并与之可逆的共价结合,因此被广泛[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]应用于糖基[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]化蛋白的分离富集中,其中,小麦胚芽凝集素([/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]WGA[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])是富集[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽的常用策略。[/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#0d0d0d][9][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#0d0d0d]WGA[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]以二聚体形式作用,每个单体含有[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]4[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]个结合位点,识别专一性不高,对聚糖的亲和力高,对单糖亲和力比较低,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]对糖链末端[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]的唾液酸([/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]sialic acid[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])、[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]N-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]乙酰葡糖胺([/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]以及壳[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]二糖([/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]chitobiose[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])等结构均有识别。由于[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]是单糖修饰,直接用[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]WGA[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]富集特异性比较差。针对存在问题,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]Wosseller[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]等[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]人制[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]备了一种基于[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]WGA[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]的凝集素层析柱,发展了一种凝集素弱性亲和色谱法([/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]LWAC[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])对[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖蛋白进行分离富集鉴定。利用装有[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]WGA[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]偶联珠的长柱,用低流速等压洗脱分离[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]肽,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]肽[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]由于与材料的亲和作用[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]而被柱阻滞[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d],从而实现分离富集。除此以外,琥珀酰化后的小麦胚芽凝集素([/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]sWGA[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d])可以实现对末端[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖链的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]特异的亲和性,专一性有所改善,但结和力减弱。因此,凝集素方法依然存在制备困难、成本高、稳定性差、亲和力和选择性不足等缺点,影响[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽的高效分离富集。[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]基于抗体的富集方法比凝集素[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]法拥有[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]更好的亲和力和特异性,是最简单的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽富集方法之一,运用[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]泛特异性抗体,可以识别[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]连接的丝氨酸或者苏氨酸残基,目前用到的主要有两种[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]RL2[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]和[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]CTD110.6[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d],但是这些抗体往往具有位点依赖性,需要结合多个单糖才能表现出较强的亲和力,存在亲和力不够高的问题,多个抗体联合使用则会提高富集特异性。[/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#0d0d0d][10][/color][/size][/sup][/font][size=16px][color=#0d0d0d]Wells[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]等人通过对抗体富集策略进行改进发展,开发了新前处理方式等手段,从小鼠的突触组织样本中鉴定到[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]1750[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]个[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]修饰位点,大大提高了[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽鉴定的准确度和广泛性。抗体较凝集素而言,特异性更强,结合力更大,但价格昂贵,易产生非特异性吸附导致假阳性结果,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]且单抗[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]富集的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽具一定的选择性,每种抗体富集到的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽重合度不高,因此,普适性通用[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]性抗体的开发成为了基于抗体富集[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽研究的关键。[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]亲水富集方法利用糖肽中聚糖的羟基与固定相之间的亲水作用进行[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽的分离富集,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]Qian[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]等人利用表面引发原子转移自由基聚合[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d](SIATRP)[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]合成了亲水聚合物改性二氧化硅微粒,微粒子表面密集填充聚乙二醇,具有高度亲水性,为[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]肽的保留提供强大的[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]HILIC[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]相互作用。利用该材料从人的尿液样本鉴定到[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]470[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]个[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]肽,[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]457[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]个[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]蛋白,大大提高了[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]O-[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]GlcNAc[/color][/size][size=16px][color=#0d0d0d]糖肽鉴定的覆盖度。但仍然存在假阳性较高的问题。[/color][/size][font='times new roman'][sup][size=16px][color=#0d0d0d][11][/color][/size][/sup][/font]

  • 15.6 黄连解毒汤饮片汤剂和颗粒汤剂的指纹图谱比较

    15.6 黄连解毒汤饮片汤剂和颗粒汤剂的指纹图谱比较

    黄连解毒汤饮片汤剂和颗粒汤剂的指纹图谱比较刘韶 雷鹏 李新中 戴智勇 王海波(中南大学湘雅医院药剂科长沙410008)摘要目的:用指纹图谱对黄连解毒汤传统饮片汤剂和现代颗粒汤剂进行比较。方法:采用RP—HPLC梯度洗脱进行分析,色谱柱:Diamonsil(TM)一ClB柱-(250 mm×4.6 mm);流动相:水-甲醇一0.05%磷酸(梯度洗脱);检测波长:254 nm;柱温:35℃。结果:所建立分析方法得到的HPLC色谱图有较好重现性。结论:不同厂家饮片汤剂、颗粒汤剂指纹图谱存在一定的差异。关键词HPLC;指纹图谱;黄连解毒汤;饮片汤剂;颗粒汤剂http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207232331_379313_2355529_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207232332_379314_2355529_3.jpg

  • 多糖的HPLC分析

    多糖的分析是一个大问题啊!和大家讨论一下吧,经综合各种文献我认为多糖结构分析内容:要搞清1. 多糖的单糖组成(种类、比例)2. 每个单糖残基的D-、L-构型,吡喃环式或呋喃环式3. 羟基被取代情况(糖苷键的位置)4. 糖苷键及构型(α、β异头异构体)5. 重复单元方法:1、单糖组成:(对照品:葡萄糖、岩藻糖、半乳糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、鼠李糖)a:水解: 纸层析薄层层析气相色谱(糖氰乙酸酯衍生物、糖醇乙酸酯)液相色谱(ZORBAX-NH2、HRC-NH2、RID)首选气相,灵敏度高,液相RSD、ELSD灵敏度低b:TFA酸解:气相色谱(乙酰化物)c:甲醇解:气相色谱(三甲基硅醚)2:高碘酸钠氧化和Smith降解a:每摩尔己糖基的高碘酸消耗量、甲酸释放量。(目的:判断可氧化糖基与不可氧化糖基之比例)b:Smith降解完全水解,气相分析,如有葡萄糖(表示有1-3键糖基)、甘油(有1-6或1-2糖基)、甲酸(有1-6糖基)Smith降解部分水解,说明主干糖苷键类型。3:甲基化分析(Hakrmor法)-支链分布多糖—甲基化—水解—还原得甲基化单糖醇—乙酰化得糖醇衍生物—GC-MS检测。 对照品 2,3,4,6-四甲基葡萄糖 糖苷键类型 1—2,4,6- 三甲基葡萄糖 1—32,3,4-三甲基葡萄糖 1—62,4-二甲基葡萄糖 1—3,6 4:IR图谱解析a:吡喃环式或呋喃环式α、β异头异构体5:1HNMR及13CNMR解析(构型)6:纯度检查:a: 紫外吸收光谱(280、260)b:电泳(琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶、醋酸纤维素薄膜)c:薄层色谱(多糖不水解)7:X射线衍射,立体构型。好多啊!想和大家讨论讨论多糖的HPLC分析,我们试验室用的液相是C18柱,紫外检测器,做多糖含量及纯度检测,这样的装备够不够用呀?是不是做前必须衍生化或有其它方法,如用示差折射仪作检测器,是不是不需衍生化?多糖的HPLC分析,用得较多用HPGPC测分子量及分子量分布。一般纯多糖紫外吸收较弱,多用RID或ELSD。至于含量测定多用硫酸蒽酮比色或苯酚硫酸法。http://img.dxycdn.com/images_new/smiles/smile_angry.gif

  • 用于生物治疗药物的N-糖分析和唾液酸定量方案

    [align=center][size=11.0pt]用于生物治疗药物的N-糖分析和唾液酸定量方案[/size][/align][align=center][size=11.0pt]会议时间:2020年3月5日10:00[/size][/align][b]内容介绍:[/b]糖基化作为N-糖表征中公认的关键质量属性,是生物治疗糖蛋白开发过程中必不可少的一部分。在N-糖分析过程中,传统方法步骤繁琐、耗时长、结果重现性差等问题始终困扰着分析工作者。本次讲座将提供一种快速的N-糖分析工作流程以解决以上问题。糖蛋白分子中唾液酸化也很重要,我们也将同时介绍唾液酸定量的工作流程。[b]讲师介绍:[/b] 陆予菲:毕业于中国药科大学。在安捷伦公司工作期间,专注于液相色谱、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]中的色谱柱选择及方法开发等应用领域。在安捷伦期间,作为主要成员参与了2010年版和2015年版中国药典应用图谱集的工作,以及多个色谱应用方法开发项目。报名地址:[url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_10434.htmlhttp://]https://www.instrument.com.cn/webinar/meeting_10434.html[/url]

  • 【求助】测定甲醇中羰基化合物

    我们在测定甲醇中羰基化合物时,严格按照操作步骤进行,先制备无羰基甲醇,再按步骤一步一步进行,但当进行到加入氢氧化钠甲醇溶液时,过一会出现白色沉淀,如加入盐酸,沉淀又消失,为什么?白色沉淀是什么物质?

  • 葡萄糖基甜菊糖苷基线波动大

    单一的甜菊糖苷与瑞鲍迪A或者是纯度高的葡萄糖基甜菊糖苷的基线波动小,分离也不错。但是有时候做比较杂的葡萄糖基甜菊糖苷,会有小杂峰密集出现并带着基线波动。是按照国标方法做的,求方法解决

  • 34.6 黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂中小檗碱的药动学的比较

    34.6 黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂中小檗碱的药动学的比较

    作者:袁立; 李新中;(中南大学湘雅医院药剂科; 中南大学药学院;)摘要:目的比较黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂中盐酸小檗碱的药动学行为的一致性。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm,5μm);柱温:35℃;流速1 mL.min-1;流动相为甲醇-0.05 mol.L-1KH2PO4-冰醋酸(40∶60∶1,v/v),检测波长为345 nm。结果灌胃低、中、高剂量组的2种汤剂后,大鼠血浆中小檗碱Cmax分别为:1.952和2.195μg.mL-1,3.188和3.388μg.mL-1,4.10和4.54μg.mL-1;AUC0~∞分别为:10.468和11.841μg.h.mL-1,18.50和20.9μg.h.mL-1,23.16和25.20μg.h.mL-1;tmax均为3.0 h。结论经统计分析,2种汤剂中盐酸小檗碱的Cmax、tmax、AUCo~∞以及药时曲线均无显著差异性,显示小檗碱在2种汤剂中的药动学过程无显著性差异。谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/08/201208061034_381714_1606903_3.jpg

  • 19.7 黄连解毒汤传统汤剂与配方颗粒汤剂主要活性成分含量比较

    19.7 黄连解毒汤传统汤剂与配方颗粒汤剂主要活性成分含量比较

    【作者】 雷鹏; 刘韶; 李新中; 付文基;【机构】 中南大学湘雅医院药剂科; 中南大学湘雅医院药剂科 【摘要】 目的比较黄连解毒汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂中盐酸小檗碱、巴马亭、药根碱、黄芩苷和栀子苷的含量。方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Diamonsil C18柱(250×4.6 mm);流动相:水-甲醇-0.05%磷酸(梯度洗脱);柱温:35℃;流速1.0 mL/min;检测波长为345 nm、280 nm和238 nm。结果建立了同时对黄连解毒汤中的5个成分进行定量的测定方法,该方法快速、重现性好、灵敏度高。结论配方颗粒汤剂与传统饮片汤剂的色谱图基本一致,配方颗粒汤剂5个主要成分含量均比传统饮片汤剂高。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207231732_379274_2379123_3.jpg

  • 24.1 四物汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂指纹图谱比较

    24.1 四物汤传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂指纹图谱比较

    【作者】:雷艳青,雷 鹏,刘 韶,李新中【摘要】: 目的:为探讨中药配方颗粒在中药复方中应用的可行性,本研究选取补血名方“四物汤”为实验对象,对该方的传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂进行中药指纹图谱的比较。方法:采用高效液相色谱、二极管阵列检测器:色谱柱为C18(Dia-monsil 250 mm×4.6 mm,5 μL);流动相中,流动相组分A为水,B为甲醇,C为0.05%磷酸;梯度洗脱,条件为组分C保持10%不变,组分B从0到90%;检测波长为280 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温:35 ℃。结果:同一批药材的两种汤剂其HPLC指纹图谱相似性好,相似度0.924。6批不同厂家的汤剂间指纹图谱基本一致,相似度在0.70-0.98。结论:方剂四物汤的中药配方颗粒与传统饮片汤剂比较,指纹图谱相似性好,提示内在化学成分基本相同。【作者单位】:湖南省脑科医院,中南大学湘雅医院【关键词】: 四物汤;传统饮片汤剂;配方颗粒汤剂;HPLC指纹图谱http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/07/201207310921_380753_1838299_3.jpg

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