检验平板

因建立实验室编写作业指导书，需平板、直角尺、V型铁等检验设备的检定规程，盼回复

[font=宋体][size=3]和大家分享几个微生物检验操作[/size][/font][size=3][font=Arial]Flash[/font][font=宋体]短片，请用暴风影音打开。[/font][/size][font=Arial][/font][font=宋体][size=3]之七平板划线[/size][/font]

检验纯化水微生物限度的平板，你们用的是玻璃的还是一次性的？玻璃的破碎率较高，一次性的用起来较贵，而且有时包装破了，也就不敢用了

[font=宋体][size=3]和大家分享几个微生物检验操作[/size][/font][size=3][font=Arial]Flash[/font][font=宋体]短片，请用暴风影音打开。[/font][/size][font=Arial][/font][font=宋体][size=3]之八涂布法平板计数[/size][/font]

[size=4][font=黑体]我们都知道：菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。但在水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时，为什么菌落总数报告方式不同？水质：若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。食品：若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l(1)乘以最低稀释倍数(l×10或lO)报告之。请各位朋友发表自己的看法或见解![/font][/size]

平板制作好后，你们测ph值吗?反正现在有平面电极可以使用了，你们测吗？

检验原始记录中含有:感官检验，净含量，可溶性固形物，菌落总数，大肠菌群（平板法），霉菌和酵母（平板法）该怎么制作?

[color=#5f9cef][b]二者范围不同：[/b][/color]GB4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》范围中规定：“本标准第一法适用于大肠菌群含量较低的食品中大肠菌群的计数；第二法适用于大肠菌群含量较高的食品中大肠菌群的计数。”[color=#f96e57]这里所说的含量高低通常以100CFU为准，即含量低于100CFU采用MPN法，含量高于100CFU采用CFU法。[/color][b][color=#5f9cef]概念不同：[/color][/b][color=#f96e57]• MPN（most probable number）法：[/color]即最近似数法，也称为最可能数法，是食品检验中常用的方法。1915年，McCrady首次发表了用MPN法 (最大可能数法) 来估算细菌浓度的方法， 这是一种应用概率理论来估算细菌浓度的方法。[color=#f96e57]• 平板计数法 (colony forming units）：[/color]CFU 即菌落形成单位，样品经过处理培养后我们数出平板上所生长出的菌落个数，从而计算出每毫升或每克待检样品中可以培养出多少个菌落，以CFU/ml或CFU/g报告之。[color=#f96e57]• 滤膜法（membrane filter method）：[/color]将一定量水样注入已灭菌的微孔薄膜的滤器中，经过抽滤，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴于培养基上，经培养后计数和鉴定滤膜上生长的菌落，依据过滤水样计算每升或每100毫升水样中的菌落总数。[color=#f96e57]• 菌落：[/color]是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。[b][color=#5f9cef]原理不同：[/color][/b][color=#f96e57]• MPN法：[/color]利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。因为细菌在样本内的分布是随机的，所以检测细菌时，可应用概率理论计算菌数，实验结果以MPN值表示，但MPN值并不能表示实际菌落数， 实际菌落数有可能落在置信区间内的任何一点，MPN值是落在这个置信区间内概率最大的一点。举例说：稀释度为 0.01，0.001，0.0001所对应的阳性管数分别为 2-0-0 ；查MPN检索表可知：MPN值为92 CFU/ml(g), 当置信度为95%，则其下限和上限分别为14，380，即对应的菌落浓度区间为14~380 CFU/ml(g)，意思是：这个检验结果显示细菌浓度落在14-380 CFU/ml(g)区间均有可能，只不过92 CFU/ml(g)出现的概率最大，概率为31.9%. [color=#f96e57]平板计数法[/color]：平板菌落计数法是根据微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的现象进行的,也就是说一个菌落即代表一个单细胞。计数时,先将待测样品作一系列稀释,样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。[color=#f96e57]滤膜法：[/color]在压力差的作用下，悬浮液中的液体（或气体）透过可渗性介质（过滤介质），直径大于网孔直径的菌体为介质所截留，从而实现样品和菌体的分离。然后将滤膜放在适当的培养基上进行培养，菌体可直接在膜上生长，从而可直接计数。[b][color=#5f9cef]MPN优缺点[/color][/b][color=#f96e57]优点：[/color]操作简便、灵敏度较高，时间短，可直接观察试管得出结论，每个接种稀释度均有重复，重复次数越多，误差就会越小。[color=#f96e57]缺点：[/color]要求样品具有均一性，适合检验液体样品，且只能用于检验在发酵培养基中产气的菌种。[color=#f96e57]注意事项：[/color]需选择合适的稀释度和接种量。[b][color=#5f9cef]平板计数法优缺点[/color][/b][color=#f96e57]优点：[/color]1、能测出样品中的活菌数，直观，能够直接读数2、平板菌落计数法通常做梯度稀释，所以计数的线性范围大。3、由于是菌悬液倾注或涂布，所以比较均匀，能较好的反应菌落的疏密程度。4、灵敏，平行性较好。[color=#f96e57]缺点：[/color]1、手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。2、厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，比较难检测出。3、菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。4、长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。5、检验时间长。[color=#f96e57]注意事项：[/color]样品需要充分均匀以及选择合适稀释度和接种量，检验过程必须严格无菌，以防污染杂菌。[b][color=#5f9cef]滤膜法优缺点 [/color][/b][color=#f96e57]优点：[/color]1、可以检测大量的样品。2、浓缩效应使微生物检测的准确度提高。3、带有菌落的滤膜，可作为检测的永久记录存档。4、可见的菌落和样品量直接对应，得出定量结果。[color=#f96e57]缺点：[/color]1、成本高。2、操作要求高。[color=#f96e57]注意事项：[/color]对样品的流动性要求比较高，并且含菌量不能太高。[b][color=#5f9cef]分类以及操作方法[/color][/b][color=#f96e57]MPN法：[/color]根据需要以及检验的精度不一样可使用9管法以及15管法；其中9管法通常用作食品检验，而15管法用在饮用水的检验（15管法的精度要高些）；基本操作：样品梯度稀释——接种——培养——观察结果——查表报告。[color=#f96e57]平板计数法：[/color]有平板倾注法，一般检验使用的方法；平板涂布法，用于细菌含量比较高，并且要求知道细菌菌落形态（只计数特定细菌）；以及滤膜法，检测特定种类菌常用方法，应用越来越广泛；基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。（滤膜法是：样品——过滤——贴滤膜——培养 ——计数报告。）[b][color=#5f9cef]适用性[/color][/b][color=#f96e57]MPN法：[/color]适用于具有特殊生理功能的微生物类群或者检测带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的含少量金黄色葡萄球菌的食品（土壤、污水、牛奶等）。[color=#f96e57]平板计数法：[/color]应用广泛，是检验、菌种分离、纯化等用得最多的方法（固体、液体样品均可）。[color=#f96e57]滤膜法：[/color]主要应用于洁净度较高的样品，并且样品的流动性决定了可操作性。[b][color=#5f9cef]卫生学意义[/color][/b]两者都是检测的活菌数，MPN是通过极大近似值然后估计，求出分布函数中的参数、置信区间，再估计；但是CFU通过数据直接求数学期望，平均值和方差。测定结果判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，一定程度反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

做微生物检验时，平板放在培养箱中培养时，为什么要倒置？培养基

一、实验目的了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放线菌、霉菌的菌落特征。二、实验原理 稀释平板计数是根据微生物在固体培养基上所形成的单个菌落，即是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些成品检定（如杀虫菌剂等）、生物制品检验、土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。三、实验器材 1．活材料：苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）菌剂。2．培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（附录三、1）3．器材：90ml无菌水、9ml无菌水、无菌平皿、lml无菌吸管、天平、称样瓶、记号笔、玻璃刮铲等。四、实验方法 1．样品稀释液的制备 准确称取待测样品l0g，放入装有90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇床上振荡20 min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10-1稀释液lml，移入装有9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2稀释液；再换一支无菌吸管吸取10-2稀释液1 ml，移入装有9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类推，连续稀释，制成10-4、10-5、10-6、10-7、10-8、10-9等一系列稀释菌液（图22-1）。图22-1 平板计数法中样品的稀释和稀释液的取样培养用稀释平板计数时，待测菌稀释度的选择应根据样品确定。样品中所含待测菌的数量多时，稀释度应高，反之则低。通常测定细菌菌剂含菌数时，采用10-7、10-8、10-9稀释度，测定土壤细菌数量时，采用10-4、10-5、10-6稀释度，测定放线菌数量时，采用l0-3、10-4、10-5稀释度，测定真菌数量时，采用10-2、10-3、10-4稀释度。2．平板接种培养 平板接种培养有混合平板培养法和涂抹平板培养法两种方法。 （1）混合平板培养法 将无菌平板编上10-7、10-8、10-9[fo

1.型面检验 光学零件的型面检验是指被检光学表面相对于参考光学表面的偏差。它包括二项内容：（1）半径偏差(N)；(2)象散偏差(△1N).l3；局部偏差〔△2N)。 型面偏差的检验有接触式和非接触式两种。接触式检验采用光学样板；非接触式检验主要应用各种于涉仪器。 2.表面质量检验 表面疵病一般采用目视法(常用4~5倍放大镜)。检验透镜、平板和小角度楔形镜等。需在透射光下进行，而棱镜、楔角较大的楔形镜多在反射光下进行。 3.角度和平行度校验 光学零件的角度侧盆有机械法、光学法和干涉法；平行度的测量常采用自准直法。

请大家指教：我有平板，上面沿圆周共插了300PCS钢针，要检验钢针表面的平行度，看是否有不平的针，精度0.02mm??????????/tks!MSN: thomastangxy@hotmail.com

请问，平时在测量罐体高度时，用作基准平面的花岗岩平板，也需要检定或是校准吗？谢谢

出口食品平板菌落计数 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0168-92代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export 1　主题内容与适用范围　　本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。　　本标准适用于各种出口食品及其原料,有专门规定检验方法的除外。2　设备和材料2.1 工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超过15个菌落。2.2　恒温培养箱：36±1℃。2.3　恒温水浴箱：45±1℃。2.4　均质器。 2.5　振荡器。2.6　吸管：1、10和25mL,具0.1mL刻度。2.7　平皿：直径为90 mm。2.8　稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶,容量为200 mL和500 mL。2.9　玻璃珠：直径为5mm左右。 2.10 天平：感量0.1g。3　培养基和试剂 3.1　平板计数琼脂。3.2 75％乙醇。3.3　稀释剂：磷酸盐缓冲稀释液。4　操作程序 4.1　样品制备 4.1.1　以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内,如有包装,则用75％乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.1.2　制备样品匀液4.1.2.1　固体或半固体食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。4.1.2.2　干燥或干粉食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500 mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1 : 10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.1.2.3　液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品, 放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中,按4.1.2.2条中所述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2～4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。4.2　稀释样品匀液 4.2.1　用10 mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10 mL,放入装有90 mL稀释剂的200mL, 稀释瓶中。按4.1.2.2条中所述的方法,迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。4.2.2　分别用10mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。4.3　平板接种4.3.1　对于每一个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2　分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3 min,应按4.1.2.2条所述方法再振摇该样品液。4.3.3　分别加12～15mL平板计数琼脂(已放45＋1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1 mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。4.4　培养 　　待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h。培养箱应 保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15％。4.5　菌落计数和记录4.5.1　培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25～250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0～4℃,但不得超过24 h。 4.5.2　如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内, 先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品1)。4.5.3　如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品2)。4.5.4　当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数,计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*), 表明该数系从菌落数在25～250这一范围之外的平板估计所得(下表,样品3)。4.5.5　当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4)(下表,样 品4)。4.5.6　如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4条) (下表,样品5)。4.5.7　同一稀释度的两个平板中,一个有25～250个菌落,另一个的菌落多于250个,两个平板都要计数。计算方法同4.5.2条(下表,样品6)。4.5.8　两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25～250个范围内,而另一个的菌落数高于250或低于25,四个平板都要计数。计算方法参照4.5.2条和4.5.3条(下表,样品7)。 4.5.9　某稀释度的两个平板都有25～250个菌落,而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在 25～250范围内。四个平板都要计数,计算方法参照4.5.2条和4.5.3条 (下表,样品8、9)。4.5.10 蔓延生长菌落 通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落,菌落之间没有明显界线,这些菌落是当琼脂和试验物混合时,一个细菌块被分散所致；第二种类型是在琼脂和 平皿底之间形成的水膜样菌落；第三种是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长,以致a.被蔓延菌落盖住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50％,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25％,这样的平板报告为“蔓延菌落”,不予计数。计数其他平板上的菌落数,将这些数值的算术平均值报告为平板菌落数（下表,样品10）。　　当有必要计数除以上a.和b.外的蔓延生长菌落时,将三种不同类型的蔓延菌落分别计数。对于第一种类型,如果仅有一条链,将它作为一个菌落计。如果有来源不同的几条链, 将每条链作为一个菌落计,不要把链上生长的各个菌落分开来数。第二种和第三种类型的蔓延生长形成易于鉴别的菌落,即按一般菌落计数,把计数的蔓延生长菌落数同一般菌落数加在一起,计算平板菌落数。4.5.11 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5％之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10％之内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6　计算和记录数字　　适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。　　记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式(见下表中的例子)。5　结果报告 　　报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。　　　　　　　　　　　　　　平板菌落数计算 样品号 菌 落 数 平板菌落数/g(mL) 1:100 1:1000 1:10000 1 多不可计 175 16 多不可计 208 17 190000(1.9×10**5) 2 多不可计 224 25 多不可计 245 30 250000(2.5×10**5)* 3 18 2 014 0 0 1600(1.6×10**3)* 4 多不可计 多不可计 523多不可计 多不可计 487 5100000(5.1×10**6)* 5 0 0 00 0 0 ＜100 (＜1.0×10**2)* 6 多不可计 245 23 多不可计 278 20 260000(2.6×10**5) 7 多不可计 225 21多不可计 255 40 270000(2.7×10**5) 8 多不可计 210 18多不可计 240 28 230000(2.3×10**5) 9 多不可计 260 30 多不可计 230 28 270000(2.7×10**5) 10 多不可计 245 35多不可计 230 蔓延菌落 290000(2.9×10**5) 注:带星号*者为估计数。附 录 A 培养基制备 (补充件) A1　平板计数琼脂 　　胰蛋白胨　　　　　 5.0g 　　酵母浸膏　　　　　 2.5g 　　葡萄糖　　　　　　 1.0g 　　琼　脂 　　　　　　15.0g 　　蒸馏水 　　　　　　1000mL 　　将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.1。A2　磷酸盐缓冲稀释液 贮存液：　　　　　磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 　　蒸馏水　　　　　　 500mL 　　用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。附加说明：　　本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。　　本标准由中华人民共和国河南进出口商品检验局、湖南进出口商品检验局负责起草　　　　本标准主要起草人李志培、邓明义。　　本标准主要参考美国食品和药物管理局(FDA)《细菌学分析手册》第6版第4章(1984年)。 中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施

定期检验无菌室空气污染情况，对改进灭菌措施，提高成品率是非常必要的。常用方法步骤如下： 1．平板检验法：用常规培养基，倒成平板，收入接种室。在事先熏蒸好的接种室，使用前半小时或1小时把供试的培养皿或试管打开，按预定时间盖好培养皿或试管。留对照皿不打开。然后一起放入30℃的温箱中培养48小时，检查有无菌殖生长，并由菌落形态，判断杂菌种类。一般要求平板培养基开盖5分钟，菌落不超过3个；叙面培养基开塞 30分钟者，以不出现菌落为合格。 2．斜面检验法：将常用的琼脂斜面培养基各取二管， 放入接种室，按无菌操作各将其中的一管的棉塞取出，放在灭菌的培养皿内。经过一定时间后，再将棉塞通过火焰，塞回试管，连同对照一起培养。经48小时后，检验有无杂菌生长。和上边方法同。 3．空气污染情况检验：在接种过程中，人员的出过、器材的搬放、接种操作的动作等原因造成空气污染，检验方法是在准备工作结束后，接种操作开始时，按上述方法打开培养皿盖子或试管塞，经5分钟、30分钟或直到工作结束时再盖好，以检验在不同的使用时间内，空气污染的程度。 如霉菌较多时；可先用5％石炭酸全面喷射后，再用甲醛熏蒸。如细菌较多时，可采取用乳酸和甲醛交替熏蒸的办法加以杀灭。

出口食品平板菌落计数 中华人民共和国进出口商品检验行业标准 SN 0168-92代替 ZB X09 001-86 Plate count for bacterial colonies in food for export 1　主题内容与适用范围　　本标准规定了出口食品平板菌落计数的方法。　　本标准适用于各种出口食品及其原料,有专门规定检验方法的除外。2　设备和材料2.1 工作台：超净工作台或放于清洁、光线充足的实验室里的水平工作台。琼脂平板在工作台上暴露15 min,每平板不得超过15个菌落。2.2　恒温培养箱：36±1℃。2.3　恒温水浴箱：45±1℃。2.4　均质器。 2.5　振荡器。2.6　吸管：1、10和25mL,具0.1mL刻度。2.7　平皿：直径为90 mm。2.8　稀释瓶：广口瓶或三角烧瓶,容量为200 mL和500 mL。2.9　玻璃珠：直径为5mm左右。 2.10 天平：感量0.1g。3　培养基和试剂 3.1　平板计数琼脂。3.2 75％乙醇。3.3　稀释剂：磷酸盐缓冲稀释液。4　操作程序 4.1　样品制备 4.1.1　以无菌操作取有代表性的样品盛于灭菌容器内,如有包装,则用75％乙醇在包装开口处擦拭后取样。4.1.2　制备样品匀液4.1.2.1　固体或半固体食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10的样品匀液。如样品均质时间超过2min,应在均质杯外加冰水冷却。4.1.2.2　干燥或干粉食品：以无菌操作取25 g样品,放入装有225mL稀释剂和适量玻璃珠的500 mL稀释瓶中。迅速振摇,将样品混匀,制成1 : 10的样品匀液。振摇时,幅度为30cm,7s内振摇25次,也可用机械振荡器振荡15s代替手摇。4.1.2.3　液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品, 放入装有225mL稀释剂的500mL稀释瓶中,按4.1.2.2条中所述方法迅速振摇,制成1:10的样品匀液。吸取样品时,吸管插入液面下不要超过2.5cm。吸管内液体要在2～4s内完全排入稀释剂中。不要在稀释剂中吹洗吸管。4.2　稀释样品匀液 4.2.1　用10 mL灭菌吸管准确吸取1:10的样品匀液10 mL,放入装有90 mL稀释剂的200mL, 稀释瓶中。按4.1.2.2条中所述的方法,迅速振摇。制成1:100的样品液。从容器中吸取样品匀液和以后的稀释操作中,吸管尖不要碰着瓶口。吸入的液体应先高于所要求的刻度,然后提起吸管使其尖端离开液面并贴在容器内壁将液体调至所要求的刻度。4.2.2　分别用10mL灭菌吸管按4.2.1条所述方法将样品匀液制成10倍递增稀释的样品液,如10**-3、10**-4、10**-5……。4.3　平板接种4.3.1　对于每一个样品,选用合适的三个连续稀释度的样品液进行平板计数。 4.3.2　分别用灭菌吸管吸取1mL样品液放入作了适宜标志的平皿内。每个稀释度的样品液用两个平皿。如果某一样品液在取出供试部分前的放置时间超过3 min,应按4.1.2.2条所述方法再振摇该样品液。4.3.3　分别加12～15mL平板计数琼脂(已放45＋1℃的水浴中恒温)到各平皿内。立即将平皿内的样品液和琼脂培养基充分混合。混合方法是将平皿倾斜和旋转。要防止把混合物溅到平皿壁和盖上。同时将平板计数琼脂倾入加有1 mL稀释剂的另一灭菌平皿作空白对照。将样品液加入平皿后应立即倾注琼脂培养基,每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过20min。4.4　培养 　　待琼脂凝固后将平皿翻转,立即放进36±1℃的恒温培养箱内培养48±2h。培养箱应 保持一定的湿度,经48h培养的琼脂培养基的失重不得超过15％。4.5　菌落计数和记录4.5.1　培养后,立即计数每个平板上的菌落数。25～250个菌落为合适范围。如果不能立即计数,应将平板存放于0～4℃,但不得超过24 h。 4.5.2　如只有一个稀释度的两个平板上的菌落在合适范围内, 先计算两个平板的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品1)。4.5.3　如有两个稀释度在合适范围内,先计算每个稀释度两个平板的平均值,再计算两个稀释度的平均值,然后计算每克(毫升)样品中平板菌落数(下表,样品2)。4.5.4　当最低稀释度的两个平板上都少于25个菌落时,计数这一稀释度两个平板上的实际菌落数,计算两个平板上的平均菌落数,将平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*), 表明该数系从菌落数在25～250这一范围之外的平板估计所得(下表,样品3)。4.5.5　当所有平板上的菌落都超过250时,则应将最高稀释度的两个平板的平均菌落数乘以稀释倍数,得到估计的平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4)(下表,样 品4)。4.5.6　如果所有稀释度的平板都没有菌落,则以小于1乘以最低稀释倍数报告平板菌落数。给这个数注上星号(*) (意义同4.5.4条) (下表,样品5)。4.5.7　同一稀释度的两个平板中,一个有25～250个菌落,另一个的菌落多于250个,两个平板都要计数。计算方法同4.5.2条(下表,样品6)。4.5.8　两个连续稀释度中的每个稀释度都有一个平板的菌落数在25～250个范围内,而另一个的菌落数高于250或低于25,四个平板都要计数。计算方法参照4.5.2条和4.5.3条(下表,样品7)。 4.5.9　某稀释度的两个平板都有25～250个菌落,而另一稀释度的两个平板中只有一个平板的菌落数在 25～250范围内。四个平板都要计数,计算方法参照4.5.2条和4.5.3条 (下表,样品8、9)。4.5.10 蔓延生长菌落 通常有三种不同类型的蔓延生长菌落。第一种类型是链状菌落,菌落之间没有明显界线,这些菌落是当琼脂和试验物混合时,一个细菌块被分散所致；第二种类型是在琼脂和 平皿底之间形成的水膜样菌落；第三种是在平皿边缘或琼脂表面形成的水膜样菌落。如果所选择的平板出现过量的蔓延菌落生长,以致a.被蔓延菌落盖住的地方,包括由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的50％,或b.由于蔓延菌落造成的抑制生长区面积超过平板面积的25％,这样的平板报告为“蔓延菌落”,不予计数。计数其他平板上的菌落数,将这些数值的算术平均值报告为平板菌落数（下表,样品10）。　　当有必要计数除以上a.和b.外的蔓延生长菌落时,将三种不同类型的蔓延菌落分别计数。对于第一种类型,如果仅有一条链,将它作为一个菌落计。如果有来源不同的几条链, 将每条链作为一个菌落计,不要把链上生长的各个菌落分开来数。第二种和第三种类型的蔓延生长形成易于鉴别的菌落,即按一般菌落计数,把计数的蔓延生长菌落数同一般菌落数加在一起,计算平板菌落数。4.5.11 操作者对同一平板复核自己的计数结果,其差异应在5％之内,而其他人对这一平板重复计数,其差异应在10％之内。否则,应找出原因,加以校正。 4.6　计算和记录数字　　适宜稀释度的两个平板的菌落数平均值或两个稀释度的平板菌落数平均值乘以相应稀释倍数计算出每克(毫升)样品中平板菌落数。　　记录时,只有在换算到每克(毫升)样品中平板菌落数时,才能定下两位有效数字,第三位数字采用四舍五入的方法记录。也可将样品的平板菌落数记录为10的指数形式(见下表中的例子)。5　结果报告 　　报告每克(毫升)样品中平板菌落数或估计的平板菌落数。　　　　　　　　　　　　　　平板菌落数计算 样品号 菌 落 数 平板菌落数/g(mL) 1:100 1:1000 1:10000 1 多不可计 175 16 多不可计 208 17 190000(1.9×10**5) 2 多不可计 224 25 多不可计 245 30 250000(2.5×10**5)* 3 18 2 014 0 0 1600(1.6×10**3)* 4 多不可计 多不可计 523多不可计 多不可计 487 5100000(5.1×10**6)* 5 0 0 00 0 0 ＜100 (＜1.0×10**2)* 6 多不可计 245 23 多不可计 278 20 260000(2.6×10**5) 7 多不可计 225 21多不可计 255 40 270000(2.7×10**5) 8 多不可计 210 18多不可计 240 28 230000(2.3×10**5) 9 多不可计 260 30 多不可计 230 28 270000(2.7×10**5) 10 多不可计 245 35多不可计 230 蔓延菌落 290000(2.9×10**5) 注:带星号*者为估计数。附 录 A 培养基制备 (补充件) A1　平板计数琼脂 　　胰蛋白胨　　　　　 5.0g 　　酵母浸膏　　　　　 2.5g 　　葡萄糖　　　　　　 1.0g 　　琼　脂 　　　　　　15.0g 　　蒸馏水 　　　　　　1000mL 　　将各成分加于蒸馏水中,煮沸溶解。分装试管或烧瓶,121℃高压灭菌15min。最终pH7.0±0.1。A2　磷酸盐缓冲稀释液 贮存液：　　　　　磷酸二氢钾(KH2PO4) 34.0g 　　蒸馏水　　　　　　 500mL 　　用大约175 mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000 mL后贮存于冰箱。 稀释液：用蒸馏水稀释1.25mL贮存液至1000mL,分装于合适容器,121℃高压灭菌15min。附加说明：　　本标准由中华人民共和国国家进出口商品检验局提出。　　本标准由中华人民共和国河南进出口商品检验局、湖南进出口商品检验局负责起草　　　　本标准主要起草人李志培、邓明义。　　本标准主要参考美国食品和药物管理局(FDA)《细菌学分析手册》第6版第4章(1984年)。 中华人民共和国国家进出口商品检验局1992-12-28批准 1993-05-01实施

在GB/T 5750.12-2006生活饮用水检验标准中说“对于生活饮用水在做菌落总数时只做一个稀释度，即直接从取1ml水样加入平板中”，那如果培养后平板上的菌落为“多不可计”该怎么报结果啊？

各位，在用平板沉降法（普通营养琼脂培养基）检测室内空气细菌时，标准规定的5min，经过平板采样培养后，菌落数偏少，基本在1-3个。可以把采样时间延长至10分钟的吧，或者各位，在对空气细菌检测过程中需要注意哪些？？

一、实验原理稀释平板测数是根据微生物在高度稀释条件下固体培养基上所形成的单个菌落是由一个单细胞繁殖而成这一培养特征设计的计数方法，即一个菌落代表一个单细胞。计数时，首先将待测样品制成均匀的繁殖稀释液，尽量使样品中的微生物细胞分散开，使其成单个细胞存在，否则一个菌落就不只是代表一个细胞，再取一定稀释度、一定量的稀释液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可计算出样品中的含菌数。此记数方法所计算的菌数是培养基上长出来的菌落数，故又称活菌计数。一般用于某些产品检定，如根瘤菌剂等产品检定，生物制品检验，土壤含菌量测定及食品、水源的污染程度的检验。自然条件下，微生物常以群落状态存在，这种群落往往是不同种类微生物的混合体。为了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。在自然界中，土壤是微生物生活的良好环境，其中生活的微生物数量和种类都是极其丰富的，因此土壤是人类开发利用微生物资源的重要基地。土壤中的微生物数量、种类与土壤肥力有关，肥沃的土壤中多，贫瘠土壤中少。其生理类群则与土壤的其它理化性质，如通气、pH有关，例如在通气良好的菜园土中，好气性微生物占有绝对优势。本实验以菜园土为材料分离土壤中的好气性细菌，并进行数量测定。分离微生物时，一般是根据该微生物对营养、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌种生长，不利于其它菌种生长的环境，从而淘汰不需要的菌种。分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法，根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单个菌落进一步分离纯化。在用稀释平板分离微生物时，还可以同时测定待分离的微生物的数量。放线菌与细菌同属原核微生物，是重要的抗生素产生菌，在土壤中的数量仅次于细菌，尤其是在有机质丰富、透气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。本实验采用高氏一号琼脂培养基分离和计数菜园土中的放线菌。真菌在土壤中的数量次于细菌和放线菌，主要在有机质丰富、透气性好的偏酸性土壤中较多。分离土壤中的真菌并不难，但由于其菌落大，容易扩展，计数准确性较低。本实验采用加有氯霉素或庆大霉素和孟加拉红的马丁氏培养基分离及计数菜园土中的真菌。按一般资料介绍为链霉素，但此种抗生素要先配成一定浓度的溶液，且应于倒平板前才加入培养基中。在此培养基上，放线菌和细菌被氯霉素或庆大霉素和孟加拉红所抑制，但大多数真菌能够生存，且其菌落受孟加拉红的抑制而较小，从而避免了某些真菌的扩散蔓延而带来的数量上的误差。

乳酸菌检验培养基中经常需加入番茄汁，但其制备比较麻烦，试着用番茄粉代替番茄汁，但是配制后平板的不溶性小颗粒太多，哪位有这方面的经验请谈谈阿

一、生物学性状　　根据最新分类原则，粪链球菌又叫粪肠球菌。应用C多糖抗原，根据兰氏（Lancefield）血清学分类，可将链球菌分成许多群。粪链球菌属于D群。D群链球菌分肠球菌和非肠球菌两类。前者包括粪链球菌（S.faecalis）、屎链球菌（S.faecium）和坚忍链球菌（S.durans）,后者有牛链球菌（S.bovis）和马肠链球菌(S.equinus)。　　粪链球菌菌形圆或椭圆，可顺链的方向延长,直径0.5-1.0微米,大多数成双或短链状排列,通常不运动。在丰富培养基上菌落大而光滑，直径1-2mm，全缘，罕见色素。其营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10℃或45℃ pH 9.6或含6.5%NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65℃ 30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。在简单的培养基上生长不需叶酸。　　　近年来，DNA-DNA杂交结果显示，肠球菌与链球菌属同源程度低，故有学者建议另立肠球菌属，与人类有关者为粪肠球菌（E.faecalis）和屎肠球菌（E.faecium）。二、致病性　　　粪链球菌引起的感染有尿路感染、化脓性腹部感染、败血症、心内膜炎和腹泻发烧等。其中败血症最常继发于生殖泌尿性感染，皮肤、胆道、肠道等感染也可作为原发病灶。从天然乳清培养物中分离的菌株，能产生一种细菌素，叫肠球菌素（Enterocin），对单增李斯特氏菌有杀灭作用。三、流行病学　　粪链球菌为条件致病菌，它来源于人和温血动物的粪便，偶尔出现于感染的尿道及急性心内膜炎。它能够通过食品对人类造成感染，因而常见于许多食品，如火腿肠、炸肉丸、布丁及经过巴氏消毒的牛奶等，粪链球菌进入食物链的主要原因是不卫生的加工条件所致的，一般与直接的粪便感染无关。粪链球菌引起的感染大多是由于它的侵袭所造成，感染剂量较高，一般大于107个细菌。人、禽感染率最高，亦见于猪、牛、马、山羊、绵羊及兔。四、检验与控制1、检验：　　样品制备 取25g或25mL样品，放入225mL灭菌生理盐水中，充分混匀，制成1：10样品稀释液。根据样品的污染程度，制成适当的10倍递增稀释液。　　a.多管法：　　用适当的稀释液接种一套叠氮化钠葡萄糖肉汤管。接种量为1mL或以下的，使用10mL单料管；接种量为10mL，使用10mL双料管。35℃培养24-48h，并检查记录各管的混浊情况。用接种环将浑浊管中的培养物划线于PSE平板上，倒置平板于36℃培养24h。平板上出现的带棕色环的黑色菌落，确证为粪链球菌。根据接种的样品量和确证为是粪链球菌的管数，查MPN表，报告每克样品中的粪链球菌MPN值。　　b.滤膜法：　　倾注融化的4-5mL的KF琼脂于平板上，若平板表面有气泡，可用火焰灼除。根据样品的污染程度，使用样液的量为100，10，1.0，0.1或0.01mL。使用灭菌滤膜过滤样液，以能在滤膜上生长出20-100个菌落为宜。将滤过样液的滤膜紧贴在KF琼脂培养基表面上，避免出现气泡。倒置平板于36℃培养48h。粪链球菌在KF平板滤膜上形成暗红色至粉红色菌落。将典型菌落接种于脑心浸液斜面上，36℃培养48h。用其培养物做过氧化氢试验，过氧化氢浓度为3%，阳性反应者为非粪链球菌群细菌。将阴性反应者接种于脑心浸液肉汤，置45.5℃培养48h；同样方式接种一管胆盐肉汤，置36℃培养3天。在上述两种情况下生长者为粪链球菌。选择生长20-100个菌落的滤膜，根据所使用的样品量，计算出样品每克（毫升）中的粪链球菌数。　　c.平板计数法：　　 取1mL适当稀释液加入培养皿内，倾入12-15mL的KF或PSE培养基，转动平板充分混合。凝固后置36℃培养，KF平板培养48h，PSE平板培养24h。粪链球菌在KF平板上形成暗红色至粉红色菌落，边缘整齐，琼脂表面下菌落呈椭圆或晶体状；在PSE平板上形成带棕色环的棕黑色菌落。选择有30-300个菌落的平板进行记数。按粪链球菌数/g(mL)报告结果。2、控制　　由于粪链球菌可通过食物对人类造成感染，所以应从以下几个方面加以控制：　　加强生产区域的卫生管理，由于粪链球菌主要来源于人畜粪便，所以厕所要合理布局，避免粪便直接污染；生产人员要严格执行个人卫生制度。　　在加工过程中，严格注意每个关键点的控制，掌握好诸如温度、水源卫生等要素。　　对摆放时间过长的食物，如熟食制品、牛奶或奶制品等，要彻底加热再食用，春夏季尤其要注意。

致病性微生物检验原始记录样 品 编号编 号样 品名 称检 测 环 境温度（T）： ℃ ；相对湿度（RH）： %检 测 项 目食 品微 生 物 指 标检 测 地 点高 洁 净 微 生 物 室检测起止日期年 月 日～ 月 日检 测 项 目及 依 据□沙门氏菌GB/T4789.4-2008 □志贺氏菌GB/T4789.5-2012 □致泻性大肠埃希氏菌GB/T4789.6-2003□副溶血性弧菌GB/T4789.7-2008 □金黄色葡萄球菌GB/T4789.10-2008 □溶血性链球菌GB/T4789.11-2003 □蜡样芽胞杆菌GB/T4789.14-2003 □霍乱弧菌WS289-2008 □变形杆菌《全国临床检验规范》第三版□其他检 测 仪 器□电子天平（型号：SC6010）编号00-2 □霉菌培养箱（型号：WJP-150）25～28℃编号04-16 □电热恒温培养箱（型号：DNP-9272）36±1℃编号□04-15 □04-24 □05-11□均质器（型号：BJ-IV）编号08-J3 转速8000r/min时间□1分钟□2分钟□3分钟检 测 流 程先将样品分别直接划线接种于相应的选择性分离平板；再根据检测项目将样品增菌后，划线接种于相应的选择性分离平板；按规定温度和时间培养后观察菌落形态及生化试验。检测项目前增菌增菌分离培养

摘要：为了更好开展食品微生物检验检测工作，提高食品卫生质量，保障饮食安全，就必须完善食品微生物检验检测体系，对食品微生物检验工作体制化、标准化，规范化，本文结合食品微生物检验检测的特点，结合笔者在县级质量技术监督检验测试中心工作经验，探寻目前食品微生物检验检测体系的现状及其存在的问题，提出对完善食品微生物检验检测体系的建议。 　　　关键词：食品微生物检验；体系；建议 　　随着工业化的快速发展，环境污染日益加剧，食品安全事件频发。在食品安全事件中，微生物污染造成的食源性疾病仍是世界食品安全中最突出的问题。加工食品过程中，病菌常常会随原料的生产、成品的加工、包装与制品贮运进入食品中，造成食品污染，影响饮食安全。因此食品微生物检验工作对评价食品卫生质量，保证消费者饮食卫生有着极为重要的作用，所以本文从人员、设施、环境等方面阐述了影响食品微生物检验的相关因素，从各个环节加强控制，以期完善食品微生物检验体系，更加高效、快捷地对食品微生物进行检验检测。 一、主观因素 为了保证微生物检验的高质量，要求检验人员的知识结构、专业技术能力和检验的高水平。微生物检验工作人员不仅要有专业知识和熟练的技术，而且还必须具备对工作的高度责任感和实事求是的科学工作作风。确保实验室人员得到及时培训及不断更新知识，学习和掌握新理论、新技术和新方法。保存技术人员有关资历、培训、技能和精力等技术业绩档案。 二、设施、环境 实验室应具有进行微生物检验适宜充分的设施条件，包括检测设施(专用于微生物检测和相关活动)及辅助设施(大门、走廊、管理区、样品区、清洁间)特殊的设备要在特殊的环境下放置和操作。 （一）无菌实验室的建设应符合GB19489的规定，符合无回路的原则。设有人流和物流通道。 （二）在时间和空间上有效隔离各种检测活动。 （三）为保证检测样品的完整性，操作时应按照规定的程序并采取预处理措施。 （四）无菌区(检验区)。 1.紫外线消毒：在室温下，220V，30W紫外灯下方垂直位置 lm处的253.7nm紫外线辐射强度应≥70μW／cm2，低于此值时应更换，适当数量紫外灯，确保平均每立方米应不少于1.5W。紫外线消毒时无菌室内应保证清洁干燥在无人条件下可采取紫外线消毒，作用时间为30min。人员在关闭紫外灯至少30min后方可入内作业。 2.臭氧消毒：封闭无菌室内，无人条件下，采用20mg／m3浓度的臭氧作用时间应≥30min，消毒后室内臭氧浓度≤0.2mg,／m2时方可人内作业。 3.无菌室空气灭菌效果验证方法(沉降法)：一般情况下无菌室面积≤30m2时从所设定的一条对角线上选取3点，即中心l点、两端各距墙1米处各取一点；无菌室面积≥30m2时选取东、南、西、北、中点均距墙lm各取一点。在所选位点，将平板(90mm2的)距地面80厘米处开盖暴露l5min，置于36±1℃，恒温培养48h±lh，确认平板上的菌落数，如大于所设定的风险值应分析原因并采取适当措施。

目的： 通过对食品中金黄色葡萄球菌检验方法进行验证，证明我公司采用标准GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》规定的方法对食品中金黄色葡萄球菌的定性和定量的测定满足检测要求。[b]1 实验室基本情况[/b][align=center]表1-1参加验证的人员情况表[/align] [table][tr][td] [align=center]姓名[/align] [/td][td] [align=center]性别[/align] [/td][td] [align=center]职务[/align] [/td][td] [align=center]所学专业[/align] [/td][td] [align=center]从事相关分析工作年限[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]A[/align] [/td][td] [align=center]女[/align] [/td][td] [align=center]微生物主管[/align] [/td][td] [align=center]食品科学与工程[/align] [/td][td] [align=center]8年[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]女[/align] [/td][td] [align=center]微生物组长[/align] [/td][td] [align=center]食品科学与工程[/align] [/td][td] [align=center]5年[/align] [/td][/tr][/table][align=center]表1-2使用仪器情况登记表[/align] [table][tr][td] [align=center]仪器名称[/align] [/td][td] [align=center]仪器型号[/align] [/td][td] [align=center]制造厂商[/align] [/td][td] [align=center]备注[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]生化培养箱[/align] [/td][td] [align=center]SPX-250B-Z[/align] [/td][td] [align=center]上海博迅实业有限公司医疗设备厂[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]立式压力蒸汽灭菌器[/align] [/td][td] [align=center]YXQ-LS-75SⅡ[/align] [/td][td] [align=center]上海博迅实业有限公司医疗设备厂[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]净化工作台[/align] [/td][td] [align=center]SW-CJ-2D[/align] [/td][td] [align=center]苏州博莱尔净化设备有限公司[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]生物安全柜[/align] [/td][td] [align=center]BHC-1300A2[/align] [/td][td] [align=center]苏州博莱尔净化设备有限公司[/align] [/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][align=center]表1-3使用试剂登记表[/align] [table][tr][td] [align=center]试剂名称[/align] [/td][td] [align=center]批号[/align] [/td][td] [align=center]生厂商[/align] [/td][td] [align=center]备注[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]7.5%氯化钠肉汤[/align] [/td][td] [align=center]170321[/align] [/td][td]北京陆桥技术股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]Baird-Parker平板[/align] [/td][td] [align=center]3105698[/align] [/td][td]北京陆桥技术股份有限公司[/td][td]添加亚碲酸钾卵黄增菌液[/td][/tr][tr][td] [align=center]血平板[/align] [/td][td] [align=center]180902[/align] [/td][td]北京陆桥技术股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]脑心浸液（BHI）肉汤[/align] [/td][td] [align=center]160307[/align] [/td][td]北京陆桥技术股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]冻干血浆[/align] [/td][td] [align=center]190423[/align] [/td][td]广东环凯微生物科技有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]革兰氏染色液[/align] [/td][td] [align=center]180108[/align] [/td][td]北京陆桥技术股份有限公司[/td][td] [align=center] [/align] [/td][/tr][/table][b]2 方法验证过程[/b]2.1 菌液制备：分别挑取一粒金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）和表皮葡萄球菌CMCC（B）26069瓷珠，至BHI液体培养基中，24 h过夜培养。2.2 样品制备：2.2.1 试验组：取1 mL2.1中制备的菌液，加入到100 mL无菌盐水中，制成样品原液，作为试验组。2.2.2 供试品组：不添加任何菌的相同样品。2.3 培养基/试剂制备：2.3.1按GB4789.28-2013食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求配制。2.3.2根据供应商提供的配制说明进行配制。2.4 实验操作：如下图1（第一法 定性检验）[align=center][img=,383,371]https://bbs.instrument.com.cn/xheditor/xheditor_skin/blank.gif[/img][/align][align=center]图1—金黄色葡萄球菌定性检验程序[/align]2.5 实验结果判断依据：Baird-Parker平板上：金黄色葡萄球菌的菌落直径2 mm~3 mm，颜色呈灰色到黑色，有光泽，边缘为淡色，周围绕以不透明圈，在其外层有一清晰带。用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感；表皮葡萄球菌：黑色菌落无光泽，菌落周围无透明圈，其外层无清晰带。血平板上：金黄色葡萄球菌菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈；表皮葡萄球菌：菌落周围没有透明溶血圈。镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5μm~1μm。血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌血浆呈现完全凝固或凝固体积大于原体积的一半，视为血浆凝固酶试验阳性；表皮葡萄球菌血浆不凝固，视为血浆凝固酶试验阴性。2.6 测试数据：方法验证采用人员比对、阳性对照、阴性对照方式进行方法验证，试验结果如下表1，详细结果见原始记录。[align=center]表1-定性检验结果[/align] [table][tr][td] [align=center]人员[/align] [/td][td] [align=center]试验组别[/align] [/td][td] [align=center]结果/25m[color=#C0504D]l[/color][/align] [/td][/tr][tr][td=1,2] A[/td][td] [align=center]试验组[/align] [/td][td] [align=center]检出[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组[/align] [/td][td] [align=center]未检出[/align] [/td][/tr][tr][td=1,2] [align=center]B[/align] [/td][td] [align=center]试验组[/align] [/td][td] [align=center]检出[/align] [/td][/tr][tr][td] [align=center]供试品组[/align] [/td][td] [align=center]未检出[/align] [/td][/tr][/table]实验结果符合标准要求。2.7是否对方法偏离？ □是 ■否2.8 结论根据GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》要求依法检测，结果符合规定。故我公司对食品中金黄色葡萄球菌的检测符合标准GB 4789.10-2016 《食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》的要求。

前 言本标准代替GB/T4789.11－2003《食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验》。本标准与GB/T4789.11－2003相比主要变化如下：—— 删除了以无菌生理盐水稀释样品的步骤；—— 增菌培养基以改良胰蛋白胨大豆肉汤代替了葡萄糖肉浸液肉汤和匹克氏肉汤；—— 分离培养基以哥伦比亚CNA血琼脂和哥伦比亚血琼脂代替了血琼脂平板；—— 完善了操作步骤；—— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆；—— 增加了规范性附录A。本标准的附录A为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为：—— GB4789.11－1984、GB/T4789.11－1994、GB/T4789.11－2003。食品安全国家标准食品微生物学检验 溶血性链球菌检验范围本标准规定了食品中溶血性链球菌（Streptococcushemolyticus）的检验方法。本标准适用于食品中β型溶血性链球菌的检验。2 术语与定义β型溶血：在菌落周围形成完全透明的溶血环，红细胞完全溶解。3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱： 36 ℃±1℃。3.2 冰箱：2 ℃～5℃。3.3 厌氧培养装置。3.4 天平：感量0.1 g。3.5 均质器。3.6 显微镜：10×～100×。3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01mL刻度）、10 mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。3.8 无菌锥形瓶：容量100mL、200 mL、2000 mL。3.9 无菌培养皿：直径90mm。3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11 水浴装置: 36 ℃±1 ℃。3.12 离心机：离心速度≥20000×g。

7寸平板，好大个。你买那个，还不如买个笔记本。同样配置的，笔记本肯定比平板便宜吧。要买平板，就买3.5寸的。支持多点触控，就行了。3.5寸的，看个文档，比如pdf,word文档，都没问题的。上网，应该没问题吧。关键这个尺寸正好。你拿个7寸的到处跑....也太扎眼了，呵呵。

[align=center][b][size=18px]关于向社会公开征集检验检测报告样式（模板）的通知[/size][/b][/align]各检验检测机构、实验室及相关单位：为提高检验检测报告的规范，提升检验检测报告质量，降低检验检测机构法律风险，受国家市场监督管理总局认可与检验检测监管司委托，中国认证认可协会现组织开展检验检测报告规范性研究，面向社会各类检验检测机构、实验室及相关单位，公开征集检验检测报告规范性样式（模板）。现将相关事项通知如下：[b]一、工作意义[/b]检验检测报告是检验检测机构依据标准、技术规范等对样品实施检验、检测得出的检验数据、结果后出具的证明文件，是检验检测机构的主要“产品”；也是检验检测生产性服务业支撑国家社会经济高质量发展的关键产出。检验检测结果的科学性、准确性、公正性和规范性，对于经济社会的发展、百姓日常生活的影响越来越大。目前，尽管相关国际标准、行业标准对于检验检测报告格式提出了一定要求，但通用性的规范要求尚难以满足不同行业领域的治理要求。从监管部门调查掌握的数据来看，近年来因检验检测报告格式不规范、不严谨引发的法律纠纷仍呈逐年上升趋势，主要包括标准依据列载不规范、不充分，样品描述信息不规范，报告编号等更正信息不严谨，法律救济措施说明不完整，法律责任不明确等，极易引发争议，严重影响检验检测机构及其检验检测报告的公信力和权威性。[b]二、征集领域[/b]涉及国民经济的各领域检验检测报告均可报送。包括机动车检验，环境监测，建筑材料，水质，食品及食品接触材料，材料测试，化工，机械（包含汽车），防雷检测，电子电器，能源，轻工，采矿、冶金，纺织服装、棉花，电力（包含核电），商品检验、验货，软件及信息化，宝玉石检验鉴定，环保设备等领域的检验检测机构出具的检验检测报告样式（模板）。[b]三、征集范围[/b]中国境内的各类检验检测机构、实验室，包括政府检验检测机构、民营检验检测机构、外资检验检测机构、第三方检验检测机构、科研院校检验检测机构等。[b]四、 报送材料要求[/b]请于2022年10月15日前将检验检测报告样式（模板）PDF 版和电子版（word）通过电子邮件反馈至中国认证认可协会技术标准部，无需纸质材料。[b]五、联系人[/b]傅斌友电子邮件：fu13810438407@163.com[align=right]中国认证认可协会2022年9月14[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=16px][color=#888888]信息来源：中国认证认可协会[/color][/size][/font][/align]

关于大肠菌群平板计数法还有哪些困惑？1.导读经常用来衡量食品卫生情况的重要指标，绝大部分食品都会要求检测的项目。在食品微生物实验室里，大肠菌群和菌落总数的检测频次应该是最高的，但检测过程中总会有一些小问题困扰着大家，以下来讲解一下大肠菌群平板计数法的注意事项。2.方法选择相比于MPN计数法，平板计数法更适用于大肠菌群含量较高的食品。但大肠菌群多少算是含量较高呢？国标里没有明确规定，但通常认为，产品大肠菌群以100CFU/g(mL)为界，超过这个含量一般认为是含量较高。但具体什么时候选用平板计数法进行大肠菌群的检测，大部分情况还是要看你的产品执行的标准。假如产品标准要求大肠菌群含量的单位为CFU/g(mL)，那必须选用平板计数法。若是/g(mL)或者MPN/100g(mL)，就应选择MPN计数法，MPN法具体选用哪版国标此处不再赘述。因此，根据自己产品的情况选择适当的检测方法。件、酸3.培养基的要求平板计数法使用的培养基为结晶紫中性胆盐琼脂培养基，简称VRBA。无论是国标，还是培养基的使用说明中都明确表示，VRBA是不需要进行灭菌的，煮沸2min即可使用。特地点出这一点是因为很多朋友都在问VRBA的灭菌条件，对不灭菌的培养基不信任，害怕出现检测异常，那是因为这些小伙伴们对其中的原理不清楚。大肠菌群的定义是在一定培养条件下能够在发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，因此大肠菌群是不能形成芽孢的，在VRBA培养基煮沸的过程中，即使有大肠菌群存在也会被杀灭，所以从培养基带入污染的可能性是没有的。当然盛装培养基的容器是需要进行灭菌的，以免容器引入污染。另外，VRBA是一种选择性的培养基，含有的结晶紫对革兰氏阳性菌有比较强的抑制作用而对革兰氏阴性菌几乎没有作用，而且平板培养产生的菌落还需要进行复发酵的验证，因此VRBA培养基就不需要进行灭菌了。但值得注意的是，VRBA需要现配现用，配制出的培养基应当在3h之内使用完毕。4.稀释度的确定国标中要求选择2-3个适宜的连续稀释度。什么样的稀释度是合适的呢？这要根据计数来决定。计数环节要求选择菌落数在15CFU-150CFU的平板进行计数，因此培养后菌落数在这个范围内的稀释度就是适宜的稀释度。实验室经常检测的产品的大肠菌群的水平检测人员可以预计的，但是对盲样，我们能做的只有根据实际情况多检测几个稀释度了。这里需要提一句，液体样品的检测稀释度可以包括原液。5.证实试验需要从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部的典型和可疑菌落进行BGLB肉汤管验证。这里挑取的菌落也是应当有选择的，典型菌落和可疑菌落的比例应当与平板上培养的两种菌落的比例相同或相近，这样能够降低检测过程中的误差。6.计数的报告报告过程是很多朋友存在疑问的地方，因为平板计数法的结果报告需要结合培养基菌落数和复发酵验证两方面进行计算。存在疑问的情况主要有以下几种：6.1、所有稀释度都不在计数范围内怎么办？这种情况一般都是最低稀释度的平板都小于15CFU，这种情况就是以最低稀释度的平板菌落数乘以验证试验的比例来计算。例如10倍稀释的两个平板上菌落数分别为10、8，菌落数为10的平皿挑取10个菌落复发酵中有8个菌落产气，菌落数为8的平皿挑取8个菌落复发酵中有7个菌落产气，则计算过程是这样的：(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g(mL)。6.2、连续两个稀释度的四个平皿的菌落数都在计数范围内怎么办？这个需要参考菌落总数检测国标里7.1.2里的公式计算。我们需要先计算每个平皿的验证后的菌落数，再代入公式计算即可。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为120和125,100倍稀释度两个平皿的菌落数为17和16，经过复发酵验证产气的管数分别为7、8、8、8，则我们先计算每个平皿上的菌落数分别为120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6（我们14）,16*8/10=12.8（我们计13）,然后将84、100、14、13四个数代入公式：（84+100+14+13）/（2+0.2）*10=959，结果应报告960 CFU/g(mL)。6.3、只有一个稀释度的一个平皿的菌落数在计数范围，其他均不在计数范围怎么办？这样我们只需要复发酵验证这一个平皿即可，根据这一个平皿的菌落数进行报告。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为160和142,100倍稀释度两个平皿的菌落数为12和13，则我们只需要从菌落数为142CFU的平皿里挑取10个菌落进行复发酵验证即可，假如共有7支发酵管阳性，则应计算142*7/10=99.4，结果报告99CFU/g(mL)。其实只要是平板菌落计数的相关问题，我们都应按照GB 4789.1-2016里要求的结果与报告要求进行计算和报告即可，无论那种情况，都是万变不离其宗的。