食品中族维生素分析液相色谱仪

[b][b]高效液相色谱仪测奶粉中的维生素D3 维生素D3的加标回收操作步骤和检测步骤有区别吗?[/b][/b]

国家卫生健康委员会、国家市场监管总局联合发布了85项食品安全国家标准和3项修改单的公告，其中包括了GB 5009. 296-2023《食品安全国家标准 食品中维生素D的测定》（以下称新标准）。新标准代替GB 5009.82-2016《食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》中第三法“食品中维生素D的测定[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱法”和第四法“食品中维生素D的测定高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法”。新标准最大的变化便是增加了在线柱切换反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法。在此背景下，为了进一步促进维生素D检测工作的交流与合作，仪器信息网特别发起“维生素D新标准解读与应对”话题。本文邀请到科诺美（北京）科技有限公司[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]产品经理公敬欣分享相关的技术及解决方案。[align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 01 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]引言[/b][/size][/align][b][color=#ff0000]维生素D[/color][/b]是机体维持正常代谢和调节机能所必须的脂溶性维生素，主要包括维生素D2（麦角钙化醇）和维生素D3（胆钙化醇），具有促进肠道对钙、磷的吸收和在骨骼中沉积，维持骨骼的正常生长与发育的作用，因此维生素D的准确测定对于产品质量控制具有重要的意义。在维生素D的测定中，由于添加量相对较低，且样品基质复杂，存在脂肪、蛋白等干扰物。[b][color=#ff0000]现行标准GB 5009.82-2016中第四法中，在对样品进行皂化、提取、洗涤、浓缩后，通过正相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]净化，浓缩复溶后再通过反相色谱法分离检测。[/color][/b]该方法分析单个样品的时间较长，降低了分析效率，并且过于繁琐的前处理操作，也会对回收率的结果产生较大影响。因此，在即将生效的《GB 5009.296-2023食品国家安全标准 食品中维生素D的测定》中，将在线柱切换-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法作为该标准的第二法，优化了样品前处理流程，提升检测灵敏度，更快速地获取分析结果，提高了样品的检测效率。面对新标准的即将实施，科诺美的技术应用团队制定了符合标准要求的解决方案。本方案采用Chromai Lotus C8作为一维色谱柱，Lotus PAH作为二维色谱柱，基于Chromai Leaps双三元二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]平台，建立了在线柱切换-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]测定食品中维生素D的方法，并通过实际样品的测试，确认该方法稳定可靠。[align=center][img=屏幕截图 2024-01-02 164918.png,1100,261]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/2601ecb0-472f-42f8-84ee-480896d81cbb.jpg[/img][img=屏幕截图 2024-01-02 164933.png,1100,207]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/8aa6ab48-bb22-4e68-8819-b009c9d9ad76.jpg[/img][/align][align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 02 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]实验方法[/b][/size][/align][color=#366092][b][size=18px]2.1 仪器[/size][/b][/color]Chromai Leaps高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统（1）一维、二维泵：Leaps双三元梯度泵（P60）（2）自动进样器：Leaps标准型自动进样器（带制冷）（A10C）（3）柱温箱：Leaps 标准加热型柱温箱（1个两位六通+1个两位10通）（C10V6）（4）检测器：Leaps紫外-可见检测器（D10）Leaps紫外二极管阵列检测器（D20）[color=#366092][b][size=18px]2.2 色谱柱[/size][/b][/color]一维色谱柱：Chromai Lotus C8（4.6*100 mm, 5 [font=&]μ[/font]m）二维色谱柱：Chromai Lotus PAH（4.6*150mm, 5 [font=&]μ[/font]m）富集柱：Chromai Louts TC C1（4.0*10mm，5 [font=&]μ[/font]m）[color=#366092][b][size=18px]2.3 软件[/size][/b][/color]Eyoulab CDS企业版[color=#366092][b][size=18px]2.4 色谱条件[/size][/b][/color][table][tr][td]流动相[/td][td]一维流动相：A：水，B：乙腈/甲醇（75/25,V/V)，梯度洗脱，流速：1 mL/min二维流动相：A：乙腈/水(95/5,V/V)，B：甲醇，等度洗脱，流速：0.6 mL/min[/td][/tr][tr][td]梯度洗脱及阀切换程序[/td][td]一维梯度洗脱程序[align=center][img=1.png,300,143]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/cdd17b53-d0d1-4f10-b07a-efb12beba8c4.jpg[/img][/align]二维等度洗脱[align=center][img=2.png,300,89]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/e426fbb1-ae7f-4698-82eb-06300ba0665a.jpg[/img][/align]阀切换程序[align=center][img=3.png,300,174]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/fd4fcf88-d89f-4f9c-9ba0-07589bd303f9.jpg[/img][/align][/td][/tr][tr][td]检测波长[/td][td]264 nm[/td][/tr][tr][td]进样量[/td][td]100 [font=&]μ[/font][font=&]L[/font][/td][/tr][/table][align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 03 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]实验结果[/b][/size][/align][color=#366092][b][size=18px]3.1 标准曲线的测定[/size][/b][/color]将不同浓度的标准系列工作溶液分别进样100 [font=&]μ[/font][font=&]L[/font][font=&]，得到[/font]维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准曲线结果见表3。在2.5 -100 [font=&]μ[/font][font=&]g[/font][font=&]/L[/font][font=&]浓度范围内，[/font]维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]线性良好，线性相关系数均大于0.999。[align=center]表3 维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准曲线测定结果[/align][align=center][img=屏幕截图 2024-01-02 165826.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/76fe96f6-21ee-4f43-b1b9-8b38e6811af4.jpg[/img][/align][align=center][img=,300,296]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/80e3e36e-2cc5-42f4-99ef-cd27783d6371.jpg[/img][img=,300,296]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/b2f0f2a6-2f7b-476f-a7e0-32739ec0bea5.jpg[/img][/align][align=center]图1 维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准曲线图[/align][align=center][img=,600,147]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/27b2dfe1-228d-4bf6-89b1-3c66bf4d99fe.jpg[/img][/align][align=center]图2 维生素D[font=calibri][sub][size=13px]2[/size][/sub][/font]和维生素D[font=calibri][sub][size=13px]3[/size][/sub][/font]标准溶液（2.5 ng/mL）二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]图[/align][color=#366092][b][size=18px]3.2 实际样品测定[/size][/b][/color]参考GB 5009.296-2023第二法对样品进行皂化、液液萃取等前处理操作，得到样品溶液后上机分析，计算得到样品含量结果见表4。[align=center][img=,600,166]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/af501539-75ae-4c3f-b845-c29bbd7b6cdf.jpg[/img][/align][align=center][img=,600,166]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/85b9d115-9d3d-43ee-93eb-c66b5b22b734.jpg[/img][/align][align=center]图3 某婴配粉样品1和2测定二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]图[/align][align=center]表4 某婴配粉样品测定结果[/align][align=center][img=屏幕截图 2024-01-02 165905.png,750,123]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/ab2bbd5e-f96d-4b5e-b768-e4302dc4e684.jpg[/img][/align][align=center][size=20px][color=#ff0000][back=#d7e3bc][b] 04 [/b][/back][/color][/size][size=20px][b]结论[/b][/size][/align]本解决方案采用科诺美自主研发的Leaps双三元[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，参考GB 5009.296-2023第二法在线柱切换-反相[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法，实现了维生素D测定中高效的样品前处理，检测效率显著提高。Leaps双三元[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统模块式组装，仅使用一个双三元泵就可以实现二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]操作，避免了两组泵模块组装占地面积大或者仪器系统高度过高、操作不便的弊端，该系统可作为维生素D测定的首选配置。对于需要一次进样实现样品中维生素A、维生素D及四种维生素E异构体的同时测定分析，科诺美也可以提供在线前处理—二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的完整解决方案。该方案灵敏度高、专属性强，可以有效去除样品中的杂质对维生素A、D、E的分析干扰。[align=center][img=,350,407]https://img1.17img.cn/17img/images/202401/uepic/1022a309-30f4-43ff-a564-db6f511fb862.jpg[/img][/align][align=center]供稿人：科诺美（北京）科技有限公司[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]产品经理 公敬欣[/align][b]科诺美[/b]（英文：Chromai），是中国领先的从事分析检测仪器与医疗诊断研发、生产、销售和服务的高科技技术企业。是中国仪器仪表学会、中国分析测试协会、中国医疗器械行业协会会员。公司旗下设立北京研发中心、苏州供应链中心等多家子公司。科诺美公司一直致力于脂溶性维生素测定方法的研究与应用，除了食品中维生素的测定外，Chromai二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统已经取得二类医疗器械注册证（苏械注准20222222069），该系统已经成功应用于血清中脂溶维生素的测定。[来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

[color=#444444]求助：[/color][color=#444444]GB5009.82-2016 [/color][color=#333333]食品安全国家标准[/color][color=#333333]食品中维生素[/color][color=#333333]A[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]D[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]E[/color][color=#333333]的测定[/color][color=#333333] [/color][color=#444444]中维生素[/color][color=#444444]D3[/color][color=#444444]的检测：第三法液相色谱[/color][color=#444444]-[/color][color=#444444]串联质谱法和第四法高效液相色谱法有什么区别？[/color]

实施的维生素K1新国标GB 5009.158-2016食品中维生素K1的测定高效液相色谱法用哪种方法提取效果好？具体该如何操作？新国标的色谱图没旧方法谱图好，求高手指教

赵榕 薛颖 吴国华 赵海燕 罗仁才 　　以含有体积分数为20%的0.95mol/L柠檬酸水溶液的二甲基亚砜作为维生素D的破壁溶液,利用Chroma-bond XTR固相萃取柱(14 500mg,70mL)对样品进行提取和净化,建立了测定钙强化食品中维生素D的固相萃取-高效液相色谱方法。方法的线性范围为0.1~100.0μg/mL,线性相关系数为0.999。方法的定性检出限为0.01μg/g,定量检出限为0.03μg/g。低(0.1μg/g)、中(0.5μg/g)、高(1.0μg/g)三个浓度水平的加标回收率分别为106.2%,99.5%和100.1%,相对标准偏差小于10%。【作者单位】：北京市疾病预防控制中心 北京100013【关键词】：高效液相色谱法 固相萃取 维生素D 钙强化食品【分类号】：TS207.3【DOI】：CNKI:SUN:SPZZ.0.2008-01-022【正文快照】：　　维生素D(VD)是甾醇衍生物,在自然界中以多种形式存在,如VD2,VD3,VD4,VD5,VD6,VD7等,其中以VD2和VD3最为重要,人们平时所说的VD主要指VD2和VD3。目前市场上复合型的钙强化食品很多。随着科学技术的进步,添加到钙强化食品中的VD已不再是普通型的原料,多数是经过包被的VD。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=107357]固相萃取-高效液相色谱法测定钙强化食品中的维生素D[/url]

有没有做过维生素A杂质的液相色谱分析？维生素A及其杂质维生素A环氧化物、维生素A醛、维生素A酸没有杂质对照品，以上物质在甲醇-水（90：10）流动相，C18*250mm柱能不能分的开？

[color=#00008B][B]该帖子为楼主原创，帖中所有楼主撰写的内容未经授权不得转载，否则属侵权违法行为！纯属个人意见，有疑问欢迎探讨！[/B][/color]近年来，随着市场经济的快速发展，食品问题也不断出现，食品的检测也倍受关注。目前，GB/T5009 理化检验系列标准就有200多个，包括食品中营养成分、保健食品中功效成分、食品添加剂、食品中有毒有害物质、食品容器和包装材料、食品中转基因成分的检验等等。其中液相色谱法就有几十个，作为液相色谱仪的操作者，我们又如何来做好这方面的分析工作呢？下面我根据自己多年的经验，对食品检验卫生方法理化部分（一）的液相色谱方法部分做了解析，有不合理之处还希望很大家交流探讨。因为精力有限，其他标准未写出来，如果对其他食品检验卫生方法理化部分的液相色谱标准方法有疑问，也欢迎探讨！[color=#DC143C]1楼：GB/T 5009.27-2003 食品中苯并(a)芘的测定2楼：GB/T 5009.28-2003 食品中糖精钠的测定；GB/T 5009.29-2003 食品中山梨酸、苯甲酸的测定3楼：GB/T5009.35-2003 食品中合成着色剂的测定 4楼：GB/T5009.82-2003 食品中维生素A和维生素E的测定 5楼：GB/T 5009.83-2003 食品中胡萝卜素的测定 [/color]

[color=#444444]近日，我使用日立液相色谱仪测定维生素A E D 含量，所用标准品为sigmar的，不知道为啥标准走出来的每一个单标峰旁边都会有一个与之相连很近的峰，难以分离，不好定量， 第一次做这个，不只是标准品的问题还是色谱仪的问题，希望有做过的朋友，能够给些建议或可能存在的问题，比较着急，不胜感激！！！[/color]

我按照GB5009.86测量食品中的维生素C出现出峰时间漂移和鬼峰，请大家给指点一下1,、仪器：普析的L600液相色谱仪，紫外检测器 色谱柱C18 5UM 250*4.6mm2、流动相：A：6.8克磷酸二氢钾和0.91克十六万级三甲基溴化铵，定容1L（用磷酸调整PH2.51） B,100%甲醇。A:B=98:2；流速 0.7ml/min（流量核实准确）；3.样品 维生素C10ug/ml 溶剂：20g/L的偏磷酸溶液过程 1、柱子先用甲醇冲洗4h，10%甲醇水溶液过度30分钟，用流动相平衡2h。 2.进样维生素C10ug/ml的样品，（六通阀进样）， 3、柱温25℃，检测波长245nm问题：1、从第一针后出峰时间逐个延后漂移 2.第五针在27min中出现鬼峰请问上述问题是什么原因造成的，如何排查。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是分析检测实验室中常见的仪器之一，由于其具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被普遍应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url](HPLC) 是目前常见的大型分析仪器，由于它具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，分析速度快，操作自动化，应用范围广“等优点，而被应用于多个领域普遍运用。 主要组成 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]由储液瓶、高压泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。 常见色谱柱种类：反向色谱柱，正向色谱柱，亲水[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱，阳离子交换色谱柱。 色谱柱的贮存:不可使用缓冲溶液贮存色谱柱，应使用至少含有20%以上的有机溶剂贮存，以防滋生微生物。 常见检测器 检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用的检测器有紫外吸收检测器(UVD)、二极管阵列检测器(DAD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)荧光检测器(FLD)。 基本应用 1、环境监测 可用于如有机农药、酚类、邻苯二甲酸酯类等分子量较大，挥发性低、热稳定性差的有机污染物的分离和检测。 2、食品检测: 可用于检测食品营养成分(如维生素、氨基酸等)、食品添加剂(如防腐剂、合成色素等)、食品污染物(如农药残留、黄曲霉素等)。

脂溶性维生素(Vitamine A, D, E, K)与水溶性维生素(Vitamine B, C等等)是动植物性样品或食品常规的检测项目。对于脂溶性维生素分析，我们推荐您使用Diamonsil C18(2)，该色谱柱的碳载量是目前C18柱中的最高者，对于脂溶性维生素具有极高的选择性和分离度，是脂溶性分析项目的最佳选择。对于水溶性维生素分析(维生素B族，维生素C等等)，由于水溶性维生素极性较大，其在普通C18柱上的保留较差，迪马科技推出的Spursil C18由于进行了极性基团修饰，增强了对极性化合物的保留能力和选择性，非常适合水溶性维生素分析项目。http://www.dikma.com.cn/Public/Uploads/images/fruits%20and%20vegetables.jpg蔬菜、水果、果汁、果酒及其他食品中的有机酸往往具有较强的极性，普通C18往往不能对其产生有效保留，迪马科技推出的Diamonsil C18以及极性修饰反相色谱柱Spursil C18以及spursil C18-EP很好地解决了这一问，能够对多种有机酸进行较好分离。测试项目基质推荐产品其他辅助产品应用参考脂溶性维生素谷物、动物组织、动植物油脂奶以及它们的其他制品等等反相柱：Diamonsil C18(2)正相柱：Inertsil Si、NH3ProElut SPEEasyGuard Column维生素E分析水溶性维生素水果、蔬菜、果汁、果酒等等Spursil C18ProElut SPEEasyGuard Column水溶性维生素分析有机酸水果、蔬菜、果汁、果酒等等Diamonsil C18Spursil C18ProElut SPEEasyGuard Column有机酸分析

如题，哪位仁兄有知道，液相色谱仪能分析粮油（谷物，小麦、玉米等）食品中的哪些项目，分别用到什么检测器，小弟在此拜谢了！！

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是分析检测实验室中常见的仪器之一，由于其具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被普遍应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url] [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url](HPLC) 是目前常见的大型分析仪器，由于它具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，分析速度快，操作自动化，应用范围广“等优点，而被应用于多个领域普遍运用。 主要组成 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]由储液瓶、高压泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。 常见色谱柱种类：反向色谱柱，正向色谱柱，亲水[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]柱，阳离子交换色谱柱。 色谱柱的贮存:不可使用缓冲溶液贮存色谱柱，应使用至少含有20%以上的有机溶剂贮存，以防滋生微生物。 常见检测器 检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，常用的检测器有紫外吸收检测器(UVD)、二极管阵列检测器(DAD)、示差折光检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)荧光检测器(FLD)。 基本应用 1、环境监测 可用于如有机农药、酚类、邻苯二甲酸酯类等分子量较大，挥发性低、热稳定性差的有机污染物的分离和检测。 2、食品检测: 可用于检测食品营养成分(如维生素、氨基酸等)、食品添加剂(如防腐剂、合成色素等)、食品污染物(如农药残留、黄曲霉素等)。

用维生素B2标准溶液在紫外分光光度仪上测其最大波长，和文献上紫外测定结果有点差异，再用高效液相色谱仪测定时的检测波长是用文献上紫外最大波长，还是用我自己紫外测定的波长

液相色谱测定维生素B2标准品，配成0.05μg/mL，0.10μg/mL，0.20μg/mL，0.50μg/mL，1.00μg/mL维生素B2标曲，只有0.50μg/mL和1.00μg/mL（峰高有3.6mAU，峰面积有71.99mAU*S）有出峰，而100μg/mL维生素B2标准品测得的峰高有317.9mAU，峰面积有7075.74mAU*S，出峰时间为5.889min,（色谱条件：0.05mol/L乙酸钠：甲醇＝65：35，30℃柱温，1mL/min,进样20μL，270nm的检测波长）怎么回事？问题：1.为什么前面三中浓度的标曲不出峰2.峰高合适么

一、保健食品中脂溶性维生素分析方法概况 保健食品中添加有维生素A、维生素D、维生素E、维生素K和b－胡萝卜素，一般情况下后两者使用相对较少 。鉴于脂溶性维生素的特点和样品基质情况，样品一般需要在皂化后经有机溶剂提取后测定。 1．维生素A 一般添加视黄醇醋酸酯和视黄醇棕榈酸酯两者之一或两种均添加。通常情况下成分复杂的样品需采用皂化反应后测定其中的视黄醇。成分相对简单的片剂和胶囊样品可采用溶剂提取直接测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。奶粉等产品可以使用胰酶或蛋白酶处理，溶剂提取后测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。 2．维生素E 一般情况下添加的是a－维生素E。成分相对简单的样品可采用溶剂提取直接测定。多数样品需要在皂化反应后测定其中的维生素E。 同时分析维生素E 4种结构并包括内标物，可使用如下正相柱： （1）Nucleosil-NH2 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二恶烷=85：15，295nm （2）Zorbax SIL 4.6×250mm, 5μm，正己烷：二恶烷：异丙醇=985：10：5，295nm （3） Lichrosorb-NH2 4.0×250mm，5μm，正己烷：异丙醇=99：1，295nm （4） YMC－Pac A－600 （NH2），3μm，正己烷：异丙醇=98：2 Ex：290nm Em：325nm 3.维生素D 一般情况下添加的是维生素D2和维生素D3中之一。目前维生素D的分析尚不如维生素A和维生素E成熟，主要原因为含量低，前处理过程损失多，与维生素E较难分离。现在采取的方法是采用乙腈＋甲醇＋水＝25+75+4作为流动相，根据样品中维生素D的情况，选择维生素D2和维生素D3互为内标。维生素D的分析对于色谱柱的要求较高，一般来讲250mm长度的Zobax SB-C18 比较适合分析要求。 4.b－胡萝卜素 b－胡萝卜素一般出现在植物性保健食品中，分析方法相对成熟。目前我们将维生素E、番茄红素和b－胡萝卜素通过采用不同的波长达到一次性分析的目的。样品采用二氯甲烷进行提取，分析过程需要加入抗氧化剂BHT对组分进行保护。 流动相为甲醇：乙腈＝50：50 色谱柱：Supelcosil RP C18 5.α－胡萝卜素 α－胡萝卜素目前也出现在保健食品中已有应用，初步将其与b－胡萝卜素一同分析。样品采用丙酮进行提取。 流动相为甲醇：甲基叔丁基醚：水＝310：76：14 色谱柱：Symmetry C18 检测波长：450nm 二．保健食品中水溶性维生素分析方法概况 目前建立并推广了一套的系统分析方法，通过选用多波长离子对高效液相色谱分析可以解决维生素B1、维生素B6、烟酸、烟酰胺、维生素C的分析。生物素、泛酸、叶酸需采用单独的高效液相色谱分析条件。维生素B2采用荧光分光光度法分析。 1．维生素B1（盐酸硫胺、硝酸硫胺） 分析维生素B1可采用盐酸苯海拉明作为内标。样品采用甲醇+水+磷酸提取。 流动相为硫酸月桂酯钠溶液（5g/530mL）：乙腈：磷酸＝530：470：0.4 色谱柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18 检测波长：260nm 2.维生素B1（呋喃硫胺） 有报道，呋喃硫胺是维生素B1的活性结构，在韩国、日本等产品中使用呋喃硫胺与盐酸硫胺、硝酸硫胺的色谱行为有较大区别。 流动相为甲醇：水：乙酸：PigB6＝450：530：20：20 色谱柱：m-Bondapak C18 检测波长：280nm 3.维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺 分析维生素B6、烟酸、烟酰胺可采用愈创木酚甘油醚作为内标。样品采用甲醇+水+磷酸提取。 流动相为1－癸烷磺酸钠溶液（1.22g/850mL）：乙腈：磷酸＝850：150：0.4 色谱柱：m-Bondapak C18或TSK Gel-C18 在维生素类保健食品中烟酸应用极少，基本上添加的均为烟酰胺。 检测波长：280nm 功能性饮料中添加的咖啡因和苯甲酸也可以同时检测。根据大量实验认为液体类样品应使用TSK Gel-C18，固体样品两者皆可。 4.维生素C 除颜色较深、含量较低、天然植物干制品外，一般样品中的维生素C均可以采用碘溶液滴定法进行测定。利用高效液相色谱法测定维生素C可利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流动相体系，因维生素C色谱保留时间较短，可以将降低其中乙腈的比例至5%。提取溶剂尽可能使用水，以避免在前面出现倒峰影响定量结果的准确。 检测波长：254nm 5.维生素B2 有关维生素B2的色谱分析方法有报道，但在实际样品分析过程中因保留时间较短且与其它峰难以较好分离，故采用将其转化为光黄素后进行荧光分光光度法分析。 6.泛酸（维生素B3） 泛酸采用液相色谱分析法进行检测，样品用水提取即可。 流动相：0.02M磷酸二氢钾溶液：乙腈=95：5，pH=3.0 色谱柱： m- Bondapak C18 300mm 检测波长：200nm 7.生物素 生物素的分析正在初步摸索阶段，目前采用pH=3.5 0.25M磷酸盐缓冲溶液：甲醇=77：23的流动相，检测波长200nm。 目前的需要解决的问题是保留时间较长，大约在30min左右；此外灵敏度较低。 8.叶酸 叶酸一般使用弱碱性水溶液提取，为保证提取效果可以在50℃水浴中加热10min。 流动相：磷酸二氢钾缓冲溶液：甲醇=460:40，pH=6.0 色谱柱： m- Bondapak C18 300mm 检测波长：280nm 叶酸的研究方向：通过大量实际样品检测研究，发现在虫草等天然产物中存在与叶酸色谱保留时间完全一致的物质；不少样品中叶酸含量较低，拟采用固相萃取等技术作为前处理手段。 9.维生素B12 维生素B12的化学分析目前还是一个难题，对于含量较高，组成简单的原料和添加剂进行高效液相色笱单的原料和添加剂进行高效液相色失杂的多种维生素样品的分析方法正在摸索之中。 维生素B12的研究进展：虽然维生素B12有3个特征波长，但样品在不经处理的情况下也很难分析；在溶液中钴胺素很容易出现氰钴胺素、甲钴胺素、羟钴胺素等几种形式共存的现象。为避免出现上述问题，更好地去除样品中的干扰杂质并对样品中的维生素B12进行富集，目前采用加入表面活性物质、盐析、有机溶剂萃取等方法去除杂质，再通过固相萃取法进行富集的手段。 三、类维生素分析方法概况 1.肉碱（维生素BT） 肉碱若采用分光光度法检测比较繁杂，高效液相色谱法测定相对简单。利用高效液相色谱法测定肉碱同样利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流动相体系，因肉碱色谱保留时间虽比维生素C长但相对仍较短，因此流动相可以同维生素C一样。提取溶剂尽可能使用水或pH=5~6的水，以避免在前面出现倒峰影响定量结果的准确。 检测波长：210nm 2.辅酶Q10 对于维生素类样品中辅酶Q10的检测采用液相色谱分析法。样品中辅酶Q10使用正己烷作为提取溶剂。 色谱柱：TSK Gel-C18 流动相：乙腈+四氢呋喃+水=55+40+5 检测波长：280nm 3.肌醇 对于维生素类样品中肌醇的检测建立了一套衍生化-气相色谱分析法。样品中肌醇经过提取，彻底去除水分后进行衍生化，正己烷提取后进行气相色谱分析。 衍生化试剂：三甲基氯硅烷：六甲基二硅氨烷：二甲基甲酰胺=1：2：8 色谱柱：BP-5弹性石英毛细管柱, 25m×0.32mm 色谱条件：载气 50mL/min 尾吹气 50 mL/min 氢气 40 mL/min 空气 500 mL/min 分流比 1：50 四、需要解决的问题及展望 1．解决样品前处理技术 （1）不少油性胶囊样品中加入了水溶性维生素，如何应用前处理手段解决提取、净化问题。 （2）对于含量较低的样品如何应用固相萃取等手段。 （3）对于目前原料微囊化制作技术如何应对。 2．解决色谱多组分分析技术 在目前现有的多组分分析技术的基础上，如何能将维生素B1并入维生素B6系列之中或创建新的流动相体系，再囊括维生素B2和叶酸等是今后研究的重要方面。 3. 解决分析过程快速化 在目前大量样品检测的基础上应归纳总结出样品前处理方法指南，确定样品组成和前处理方法之间的关系。

液相色谱法测定水果中的维生素B2含量，样品前处理时加入0.1mol/L HCl的作用是什么，也有的人用磷酸。这两个有什么区别啊？配置标准品溶液时为什么加入1：1的盐酸超声溶解

GBT30926-2014化妆品中7种维生素C衍生物的测定 高效液相色谱-串联质谱法

液相色谱仪的应用 现在液相色谱仪的应用很多、很广，液相能检测有机物的70%以上的物质，检测的项目很多。现在国家规定越来越严，尤其是在食品行业，药品行业，饲料行业，水质，土壤等，这样也是促进液相色谱仪发展的一个机会。在科研、医疗、医药、教学上用的也越来越多。在农业、石油、石化、炼钢、水利、商检、法检、环境、大气、卫生等很多行业都有很大的发展和需求。 市场需求大是液相色谱发展的动力，市场要求高是液相色谱发展的立足点。液相色谱能承受高压，能采用梯度洗脱，能很好的分离化合物，具有多种检测器，能满足各种化合物的检测，有着种类繁多的色谱柱，能满足不同需求及要求。 液相色谱还有一个很大的特点就是现在很多仪器和行业为了达到某种功能，逐渐采用了联用技术。比如液相色谱和原子吸收、原子荧光联用，叫形态分析。液相色谱与ICP联用，与质谱联用等。在很多像制备、纯化技术也在不同程度的采用了液相分离、检测技术。随着微量液相色谱，超高压、超高效液相色谱，手性液相色谱，亲和液相色谱，手性液相色谱，毛细管液相色谱等的发展，相信液相涉及的技术和市场领域还会越来越广，前景还会更好。当然像离子、凝胶色谱这几大类色谱也属与液相色谱范围，这样液相色谱的领域和覆盖面就相当广了吧。 所以液相色谱的市场很大、很好，前景一片光明。