在液相色谱分析中梯度洗脱与等度洗脱差异？
我们在使用高效液相色谱仪做分析时通常会接触到多元泵。所谓几元，指的是能同时控制流路的多少。多元泵又分为高压混合与低压混合。高压混合又叫泵后混合，多元高压泵由多个泵构成，有几元则有几个泵，例如LabAlliance的PC2001型二元高压梯度泵、Series 4000系列的四元高压梯度泵等。低压混合又称泵前混合，其实就是一个泵，几元就是安装几路电磁阀，例如Agilent 1200型四元低压梯度泵等。为方便理解，附图如下（以四元泵为例）：http://img1.17img.cn/17img/images/201408/uepic/4a1125ae-ea25-4775-80f1-326341dd8e9e.jpg!t600x500.jpg如图所示，四元高压梯度：配置有四个可独立工作的泵+在线混合器。工作方式为四个泵并联，可同时有四个流动相，按照预先设定的配比进入，分别送液到泵后的混合室内，在高压下进行混合，混合配比更准确，不易产生气泡，不用为了转换流动相而反复清洗，不仅节省溶剂，也提高了工作效率。无需增加真空脱气机，降低了混合死体积（泵前混合时、混合管、泵头等体积，脱气机内死体积）。同时，可以做梯度洗脱：当待测样品成分复杂，用一个固定的流动相配比无法将样品中成分完全分开时，就需要用到梯度洗脱，在同一个分析过程中由仪器自动改变流动相配比，将样品中前期无法分离的物质进行洗脱，在同一谱图中得到分开的峰的效果。有助于提高分析准确性，避免了遗漏重要物质或对其进行错误定性定量。http://img1.17img.cn/17img/images/201408/uepic/75fdfc3c-6ecd-4e5b-bbd1-b2c676c90a64.jpg!t600x500.jpg然而，四元低压梯度：配置比较繁琐：由单泵+低压混合比例阀（电磁阀）+在线脱气机+混合器构成，它的工作方式也与高压梯度泵有很大区别：最多可同时有四个流动相进入流路，按照预先设定的配比进行混合，是依靠电磁阀的切换使泵分段输送不同流动相，由于在常压下混合，气泡很容易从溶剂中析出，较易产生气泡，因此必须配备在线脱气机，可消除气泡影响。可以做梯度洗脱，在仪器上进行设定之后，在同一样品分析工程中，相隔一段时间后，按照用户的设定自行改变流动相配比，将样品中组分分离开来。目前HPLC仪器制造厂家大都推出四元低压梯度（带在线脱气）系统，而在数年前大都是二元高压梯度，以往四元低压系统通常是进口仪器的专属产品，国内大多采取高压混合的方式，并没有涉及到低压系统的应用开发，在国内有些招标项目中也有明确提出选用四元低压的案例，广大客户可能会误以为四元低压是进口仪器的先进技术，实则不然，四元低压实际上是对二元高压的补充，也就是说当比例发生改变的流动相数量较多，二元高压不能满足分析的时候，四元低压弥补了这一不足。但如果比例发生改变的流动相数量在2个以内，包括2个，应该来说二元高压梯度系统在作高精度分析时优势明显。从目前的售价看，四元低压的泵比二元高压的并低不了太多，但他们节约的成本是不少的。四元低压梯度系统采用单泵加梯度比例阀来实现，因为比例阀是在泵前的，并且各流路的溶剂在比例阀里就混合在一起了，所以是泵前、低压混合。一般地，对于常规分析来说，四元低压梯度也可以满足需要；如果分析样品成份复杂、对重现性要求较高，或者需要在低流量下进行梯度分析，还是选择高压梯度好一些。当然，现在美国SSI（LabAlliance）公司推出的四元高压梯度泵，在保证高精度分析的同时，也解决了流动相数量受限制问题。液相色谱从性能上比较，四元高压肯定优于四元低压。四元高压的混合比例是通过改变泵的流速来获得的，通常泵的流速都是很准的，所以混合的精度也是很高的。四元低压梯度的混合比例是通过控制不同流路的电磁阀的开闭时间长短来控制的，理论上混合的比例也是准确的，但是实际上电磁阀的开闭会有一个延迟，无论它动作多么快，总还是需要一点时间的。比如A路和B路各50%混合，在单位时间内，A路和B路的电磁阀各开通50%的时间，这时问题不大，电磁阀的延迟影响可以通过调整补偿系数来尽量弥补。但是如果极端一点的情况，[
[align=center][size=29px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中的梯度淋洗[/size][/align][align=center][/align]1 等度淋洗与梯度淋洗进行高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]分析时，常用两种洗脱方式，即等度淋洗与梯度淋洗。其中等度淋洗在分析全过程中流动相的组成不变。而梯度淋洗中流动相组成随运行过程是变化的（例如氢氧根体系中氢氧化钾浓度由15mM增至50mM）。下图为几种不同的梯度形状。其中曲线梯度较为不常见。[img=,690,396]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270935486413_397_1809927_3.jpg!w690x396.jpg[/img]目前许多实验室对梯度淋洗有很大偏见。他们偏爱等度淋洗的原因有以下几点：①一些实验室尚不具备支持梯度淋洗的色谱仪（只有一个泵且没比例阀）。②梯度淋洗更复杂，似乎更难建立新方法。③某些HPLC检测器(如示差折光检测器)不能使用梯度淋洗。④每次运行梯度淋洗后需重新平衡色谱柱，耗时较长。⑤不同设备的分离结果可能不同，所以梯度淋洗法移植时会出现保留时间差异。⑥梯度淋洗中的基线噪声和基线漂移更大，更容易受到试剂纯度的影响。⑦某些色谱柱或流动相不适于梯度淋洗。实际上，梯度淋洗分离方法的建立和日常操作与等度淋洗相比并不太难。而且很多分离只适于使用梯度淋洗。2 梯度淋洗的优势用等度淋洗时，由于流动相全程保持不变，如果待分析物，的保留差异很大，则会出现弱保留组分扎堆洗脱且强保留组分很晚才洗脱，从而无法获得满意的分离。[font='times new roman']为了比较等度淋洗与梯度淋洗的不同，我们使用同一根色谱柱分离相同的样品，下图是等度淋洗与梯度淋洗的对比谱图，上半部分为等度[/font][font='times new roman']淋洗曲线，下半部分为梯度淋洗曲线。通[/font][font='times new roman']过对比我们可以发现，等度淋洗时[/font][font='times new roman']1~6[/font][font='times new roman']号峰分离度不太理想，[/font][font='times new roman']13[/font][font='times new roman']号峰保留时间过长，而在梯度淋洗时，为了改善[/font][font='times new roman']1~6[/font][font='times new roman']号峰的分离，我们采用较低的淋洗液浓度，为了快速洗脱强保留的[/font][font='times new roman']13[/font][font='times new roman']号峰，我们在[/font][font='times new roman']6[/font][font='times new roman']号峰后提高了淋洗液浓度，使得[/font][font='times new roman']13[/font][font='times new roman']号峰由原来的[/font][font='times new roman']80[/font][font='times new roman']分钟提前到[/font][font='times new roman']40[/font][font='times new roman']分钟。由此可见，梯度淋洗可有效改善弱保留组份分离度，快速洗脱强保留组份。此外，等度淋洗时，弱保留组份峰形比较窄而强保留组份峰形较宽，梯度淋洗时增强洗脱能力可以使强保留组份也获得尖锐的峰形。[/font][align=center][img=,690,390]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270936062924_2978_1809927_3.jpg!w690x390.jpg[/img][/align]3 使用梯度淋洗时的注意点3.1 基线漂移[align=left]在[font='times new roman']HPLC[/font]中，不同流动相（水、甲醇、乙腈）对于紫外吸收的程度不同，导致梯度淋洗时产生基线漂移，且不可避免。[/align][align=left]在碳酸盐体系[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中，抑制产物是碳酸，碳酸浓度不同其电导也不同。故梯度淋洗会产生基线漂移，且不可避免。[/align][align=left]对于氢氧根淋洗液和甲烷磺酸淋洗液，抑制产物是水，理论上在梯度淋洗时不会产生基线漂移；而实际上由于试剂纯度以及抑制不完全等原因，也是存在基线漂移的。[/align]3.2 流动相平衡每次梯度淋洗结束时，流动相的组成已经与分析开始时大不相同了。为了下一次的梯度淋洗，必须用初始浓度的流动相对色谱柱进行彻底平衡后，再进行梯度淋洗。色谱柱平衡时间不足时，色谱图早期被洗脱的峰的保留时间会发生改变，而后期被洗脱的峰通常不受影响。3.3 流动相浓度的滞后现象当确定了梯度淋洗程序后，开始梯度淋洗，但由于实现梯度淋洗的仪器设备结构或电子控制系统等多种原因，使得我们实际观测到底梯度淋洗向后平移了一段时间，此现象称为梯度系统的滞后时间。使用相同的梯度淋洗程序，对于同一个样品，在不同的色谱仪上进行梯度淋洗，由于仪器结构、电路控制以及管线长度的差异，表现出的滞后时间往往不同。4 梯度淋洗的类型传统上，梯度淋洗分为高压梯度（也叫内梯度）和低压梯度（也叫外梯度）。另外，在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]领域提出淋洗液发生器的概念后，使用淋洗液发生器时也可以进行梯度淋洗。4.1 高压梯度（内梯度）高压梯度又称内梯度，采用多个高压泵将不同的流动相增压后送入混合室混合后送入色谱柱。流动相中有几种变化组分就称为几元梯度。二元梯度淋洗需要两台高压输液泵；三元梯度淋洗需要三台高压输液泵；每台高压输液泵的输出量由程序控制，按照设定程序将不同量的溶剂送到混合室混合，产生任意形式的梯度淋洗曲线。高压梯度通常以二元高压梯度最为常见。下图为二元高压输液系统示意图。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270931283755_4332_1809927_3.jpeg[/img]泵A和泵B出来的流动相在混合器里面混合的时候，都是处于高压状态，这时候，流动相对气体溶解度较高，流动相中不容易析出气泡，从而避免导致[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]压力波动、流速不准、基线波动等种种问题。4.2 低压梯度（外梯度）低压梯度又称外梯度，是在常压下将流动相的不同组分混合后再用高压输液泵送入色谱柱的方法，利用电磁比例阀控制不同溶剂的流量变化，使溶剂按不同比例被输送入到混合室中混合，然后用一台高压输液泵将混合好的流动相输送到色谱柱中。低压梯度通常以四元低压梯度最为常见。流动相对气体的溶解度较低，如果流动相中溶解的气体比较多的话，在混合时就可能有小气泡形成，导致压力波动等种种问题。气泡永远是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]的天敌。下图为四元低压输液系统示意图。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270931284761_9930_1809927_3.jpeg[/img]低压梯度一定要配脱气机，先对流动相进行在线脱气，才能用电磁比例阀进行混合，要不然很容易产生气泡。而高压梯度一般情况下可以不用配在线脱气机就能在线混合，运行梯度方法。高压梯度的优势：优势1：混合精确性高从上面的介绍可以看到，两种梯度体系的混合方式完全不同。高压梯度相当直观，通过分别控制两个泵的流速，就能够准确控制两种流动相的比例。比如在1ml/min的流速下，要达到A：B两种流动相70：30的混合比例，那就设置A泵流速0.7ml/min，B泵流速0.3ml/min就可以了。当然这些都是系统和软件自动完成的。只要做到泵流速准确，比例就能准确。而低压梯度则通过电磁比例阀来控制混合比例，那比例阀又是如何工作的呢？一般来说，比例阀是通过控制入口通道分别打开时间的长短来控制混合比例的。举个例子可能更容易理解，仍然是A：B两种流动相70：30的混合比例。为了达到这个效果，B、C、D三个通道都关闭，A通道打开7ms，这时候进入系统的都是A；然后，A、C、D关闭，B通道打开3ms，这时候进入系统的都是B。这样就得到了70/30的流动相的比例。大家能感觉出来，进入系统的流动相其实是一段A、一段B这样的。如果两种流动相比例比较悬殊（比如某组分只占有1%），这种混合方式的误差相对比较大。优势2：延迟体积小使用高压梯度时，流动相混合后，经过混合器、压力传感器、阻尼器，放空阀，然后进入进样器。反观低压梯度，流动相混合后要经过整个泵头(包括主动入口阀、两个泵腔、出口阀、管路等等)，才能到达进样器。一般来说，我们把流动相从混合开始，最后到达柱头这段体积叫延迟体积。流动相梯度的变化要到色谱柱头，才能够对分离产生影响，所以有一定的延迟。延迟体积越大，梯度的变化到达柱头的时间越长，导致分析时间越长。我们可以看到，高压梯度先天地决定了其延迟体积远小于低压梯度。这就决定了在色谱分析时间要求很短的梯度方法中，比如各种小粒径的色谱柱的快速分析方法，都采用高压梯度方法。不同品牌、类型的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]之间的延迟体积差异，是方法转移后出现结果跟以前不一样了的最大的原因之一。低压梯度的优势：高压梯度这么多优势，但在实际上，还是低压梯度用得更多一些。低压梯度的优势是：便宜。低压梯度只需要一个输液泵就能运行梯度条件，，高压梯度最低需要两个泵才能运行梯度。在运行方法条件不是很苛刻的时候，低压梯度能达到跟高压梯度一样的分析效果，而价格可能要便宜得多。而且只有一个泵，后期保养成本也低。因为便宜，所以市场保有量更大，很多标准方法都是在低压梯度下开发的。用高压梯度需要进行方法移植。如果用一些三元甚至更高元梯度的方法，四元低压梯度可以直接拿来用，高压梯度需要购置三个甚至四个泵，成本进一步提高。四元低压梯度可以在进样程序中直接设置走完序列后冲洗瓶子；而高压梯度要达成这样的方法，需要购置阀控或者更多的泵。4.3 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]淋洗液发生器产生的梯度淋洗[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]使用的流动相以酸碱盐的水溶液为主，传统的配制方法是称量试剂并溶解定容。淋洗液发生器通过电解在线产生高纯度淋洗液，并支持梯度程序，是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]发展中的重大跨越。此处以[font='times new roman']KOH[/font]淋洗液发生器为例介绍淋洗液发生器的原理。淋洗液发生器通电时，阳极电解产生氢离子及氧气，氢离子和罐中的氢氧根离子反应生成水，导致罐中钾离子（阳离子）比氢氧根离子（阴离子）数量多。多出来的钾离子在电场及渗析作用的驱动下通过阳离子膜到达氢氧化钾发生室。阴极在氢氧化钾发生室的底部，电解产生氢氧根离子和氢气。[align=center][img=,591,290]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209270936253224_254_1809927_3.jpg!w591x290.jpg[/img][/align]随着超纯水不断流入氢氧化钾发生室，钾离子和氢氧根离子以及氢气随着水流入[font='times new roman']CR-ATC[/font][font='times new roman']（主要作用是去除杂质阴离子）[/font]和脱气盒，在脱气盒中氢气被去除。所产生的KOH溶液的浓度由施加电流与去离子水的流速决定。根据法拉第电解定律，在恒定流速下，施加电流和所产生的KOH浓度之间呈正比，可通过控制所加的电流得到准确浓度的KOH淋洗液，因此也可以实现梯度淋洗。操作鼠标即可设置淋洗液的浓度梯度，有效地简化了操作和缩短了运行时间，使其与等度淋洗一样方便，此项技术被称为“只加水”[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]技术。5 总结进行梯度淋洗可以达到以下目的：缩短分析周期；提高分离能力；峰型得到改善；增加灵敏度，但通常会引起基线漂移。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]中，使用淋洗液发生器产生的梯度淋洗精度通常高于高压及低压梯度，推荐使用。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中，高压梯度及低压梯度各有优势，可根据实验室条件及预算进行选配。6 参考文献牟世芬，朱岩，刘克纳.《[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]方法及应用》（第三版）化学工业出版社于世林.《图解高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术与应用》科学出版社R.施奈德，J.L.格莱吉克 著 王杰 赵岚峰 王树力 丁洁 译 《实用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法的建立》（第二版）科学出版社青岛睿谱分析仪器有限公司 《[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]实用手册》张新庆 “二元泵和四元泵哪个好”gz号
话说四元低压梯度洗脱的优势与缺陷 现在我们面对的样品复杂多样、千奇百怪，那我们检测这些样品所涉及到的仪器和方法也就多种多样各不相同了。比如很多混合化合物检测就得采用梯度洗脱的方式才能更准确、方便、快速的检测出来。然而梯度洗脱方法也有很多种，现在一般采用的有二元低压梯度洗脱、二元高压梯度洗脱、三元低压梯度洗脱、四元低压梯度洗脱、四元高压梯度洗脱，戴安还高调的推出一款双三元高压梯度洗脱等等，其中二元高压梯度与四元低压梯度应用的最为盛行。 这两种仪器在市场上都很多，各有优缺点。现在中国的国标中应用的仪器及方法最多也就用到二元梯度，四元梯度还没有具体国标方法。有的人可能认为买一套四元梯度没用，买二元的就足够了，买四元的纯粹是浪费钱和资源。其实不然，四元的有四元的优势。下面就一一说来听听。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410181613_518943_2498430_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410181619_518949_2498430_3.jpg http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410181614_518945_2498430_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410181614_518946_2498430_3.jpg 四元低压梯度洗脱不用说就是能同时走四种流动相，而且在不同时间下可以以任意比例走。它是由一台高压泵和一个四元比例阀组成的，通过程序控制比例阀来实现梯度洗脱。它的优势是只有一个泵，比二元高压梯度泵省一个泵，比四元高压梯度泵省三个泵，大大节省了实验仪器费用。四元低压梯度需要的高压泵少，那么该仪器的故障率相对也就少。一般情况下四元低压梯度洗脱时泵的流速不变，这样控制泵的脉动就容易的多，仪器的噪声小检出限也就低；一般的液相泵流速越小脉动越大，通常总流速都是1.0ml/min，这样的流速脉动很小、流速很稳。四元低压梯度和二元低压梯度相比只是比例阀一个是四元的一个是二元的，费用相差并不大，但除了日常梯度用的二元外，剩下的二元一元可以走过渡液（换流动相时不相容或有较剧烈反应等两种多多种流动相时，如含量较高的甲醇和含量较高的缓冲液相容可能会有盐结晶析出；含量较高的甲醇和含量较高的酸溶液相容可能会产生大量热量，甚至有较剧烈的反应等，损坏仪器甚至发生危险），反相色谱一般是5%-20%的甲醇水溶液，通常大家都选10%；另一元可以走纯甲醇等试剂，这样冲洗系统时非常方便，不用来回换流动相瓶，既能省时、提高效率又能省试剂、省费用。当然它也有不足的地方，那就是低压混合的流动相进入高压系统容易产生气泡，所以一般的四元低压泵都会加一个在线脱气机（这个和高压泵相比一般都不算贵）；它的混合是在高压泵之前，从混合处开始到进样阀的管路都是混合体积，虽然混合会很充分，但混合体积也会很大，混合滞后时间较长；四元低压梯度由于低压混合和混合体积较大等因素，它的准确度没有二元高压梯度高，但能满足绝大多数梯度洗脱要求。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410181615_518947_2498430_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410181615_518947_2498430_3.png 二元高压梯度洗脱是由两台高压泵同时走两种流动相，可以在不同时间下以任意比例走。它的优势是高压混合不容易产生气泡（相对四元低压梯度）；混合体积较小；混合准确度较高等。缺陷是价格较高；故障率较高；冲洗系统时需要经常换流动相瓶，相对麻烦；泵流速小时有时会产生较大的压力（流速）脉动，影响仪器的检出限等。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/10/201410181616_518948_2498430_3.png 总之四元低压梯度洗脱和二元高压梯度洗脱都能实现现有梯度洗脱要求，只是使用过程和结果各不相同，各有优缺点。 四元低压梯度价格便宜，梯度混合噪声小，故障率小，使用方便等优点是我所看好的，相比我更支持四元低压梯度洗脱。长期从事液相色谱分析的您呢？您的看法和我有多大的差别呢？您更看好那种洗脱方式呢？
各位大侠：请教一个问题，液相色谱仪梯度有高压和低压的区分，我一直弄不明白这两种梯度方式那种更具优势，梯度混合效果更好，请给一个好的答案！！！！！！！！！！！！！中国心中国心中国心
我们实验室的液相是四元梯压梯度系统，一般A通道是甲醇通道，B是水通道，C是乙腈通道，D是盐溶液通道。我要用CD两个通道测氨基酸含量，需要进行梯度洗脱，但是在工作站中梯度设置有个高压梯度和低压梯度设置，高压梯度设置里只有AB两个通道的设置（包括流速设置），低压梯度设置里有四个通道的设置，但没有流速的设置，我该如何进行设置，还有就是高压和低压梯度的区别是什么？请问哪位前辈有经验，能不能指导一下，感激不尽！
[color=#444444]液相色谱分析酚酸类物质，流动相A乙腈，B1%乙酸，梯度洗脱，结果出峰时间较晚并且有些地方峰连在一起，请教一下老师，这种情况怎么处理，若调节流动相配比怎么调节呢，原来20:80 [/color]
这两天进行实验室认可复评审，技术评审老师在液相实验现场发现，我实验室使用waters的2695高效液相色谱仪（四元低压梯度）所走的流动相，没有预混合，而是走的比例阀从不同溶剂瓶吸取试剂在线混合，对此开出了不符合项。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09509.gif 在这儿问问各位老师、版友，你们做液相，每次实验都是将不同试剂提前混合超声，然而走单一通道吗？ 不管是否，请大家谈谈自己的看法。…………………………………………………………………………………………补充：不符合依据的条款是：CNAS-CL01：2006第5.4.1。
我们在使用液相色谱仪时，经常会遇到梯度条件。那么用二元高压梯度使用时，最高的比例是多少呢？（二元高压使用的是静态混合器，四元低压一般使用的是动态混合器）希望大家积极讨论！
目前HPLC仪器制造厂家大都推出四元低压梯度（带在线脱气）系统，而在数年前大都是两元高压梯度，当然是用在梯度时。那么两元高压梯度和四元低压梯度（带在线脱气）系统比较一下，各有什么优缺点。讨论范围不仅是性能，还应考虑生产成本和销售利润。大家觉得如何。我目前还是觉得这是国外厂商的一种销售技巧，从目前的售价看，四元的比二元高压并低不了太多，但他们节约的成本是不少的。我认为高压梯度在作高精度分析时优势明显。
一个朋友要买液相色谱仪，配置如下：1200四元梯度泵（带脱气机），英国PL-380蒸发光检测器（包含工作软件）、VWD1200紫外检测器、流通池、主动柱塞清洗附件、1100手动进样器、气体调节器、原装二维液相色谱操作软件、过滤白头、water 8*100mm硅胶色谱柱、柱温箱等，其他还有一些要的东西，总之买来了就可以马上开机使用。报价54万，现在想能否再便宜点买下，大家看看可能不？还有一周就要写合同了，最后报价与大家分享，看看各位有什么高招。把积分给予报价价最接近的用户现在这个仪器肯定是要买的，价钱方面谈的也很低了，听说企业的大老板还不满意，所以还在拉锯，我发上来是想让大家看看仪器的价格里面到底有多少水分，哪位对仪器的报价看得比较准，不花冤枉钱。现在已经签下了，具体价格我不方便在这里讲，我把积分给最接近的用户，大家心里就明白了价位，以后买仪器就心里有数了。
各位同仁，我现在想配液相色谱仪，做化验用，工作量大，包括自动进样，四元梯度洗脱，柱温箱，全波长扫描检测器，脱气系统，中文工作站。我要从三个厂家waters，agilent和岛津中选一个，想买一个比较新的型号，请大家帮忙，从价钱和性能上，比较一下，哪个厂家哪个型号的更号，最基本要求是结实，耐用。精度，重现性，稳定性等其他方面的性能还请各位帮忙评价，谢谢!
本人查阅了一下由国家药典委员会编撰的中国药典高效液相色谱图集，据对３１１种中药的统计：其中等度系统占３０１例，２元高压梯度占１０例，四元低压系统占０例；紫外检测器占２３２例，二极管阵列７０例（但也是单波长检测，可用紫外代替），蒸发光散射占９例可见目前来说绝大多数的重要分析是可以通过紫外检测器的等度系统来完成的，用户在选择的时候了解的越详细，可以避免不必要的开支
中药是一个典型的复杂未知样品,其化学物质基础的阐明是中药现代化的关键科学问题之一。液相色谱是中药分析中应用最普遍的技术,也是进一步与质谱、核磁共振等联用的基本分离手段。本论文在总结了中药复杂体系的特点和分析中需要解决的问题后,提出了中药分析的思路,开展了线性梯度下的液相色谱保留值规律、峰形规律的研究,发展了快速获取液相色谱保留参数、峰形参数的方法,从而将未知样品快速转化为色谱已知样品。并以实际样品藏茵陈和黄芪为例,应用发展的方法建立了相应的液相色谱参数数据库,提供中药活指纹图谱的信息基础。同时,面向实际应用,发展了中药组分的目标优化方法。建立了液-质联用表征黄芪皂甙的方法,建立了高效液相制备色谱快速制备黄芪组分的方法并初步发现了具有诱导分化白血病细胞的组分。发展了用五次线性梯度快速、准确地获取液相色谱保留值方程的方法。以线性梯度a、c 值预测任意梯度下的溶质的保留时间,并发展了基于内标峰的校正方法。应用于藏茵陈和黄芪样品的色谱保留参数获取,对c-a 关系进行了考察。基于EMG模型和自动曲线拟合技术,首次建立了以线性梯度快速获取液相色谱液相色谱峰形参数和峰形规律的方法。以线性梯度峰形规律预测了任意梯度条...[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=31320]中药高效液相色谱分析方法发展的理论基础研究[/url]
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析中三个重要的体积概念：1、柱体积（Column Volume）：这是在色谱柱平衡和清洗的时候经常用到的一个概念。柱体积是指色谱柱内能容纳液体的最大体积，它和柱管内的体积、填料的孔隙率和粒径等有关，也被称为柱空体积/空隙体积（Column Void Volume）[b][font=微软雅黑, &][size=14px][color=#007aaa]2、死体积（Dead Volume）[/color][/size][/font][/b][font=微软雅黑, &][color=#595959]：一般是指由进样器开始到检测器流通池的体积总和。主要包括四个部分：进样器至色谱柱管路体积、色谱柱内固定相颗粒间隙占据的体积、柱出口管路体积、检测器流通池体积。[/color][/font]3、系统滞留体积（Dwell Volume）：仪器系统滞留体积是指从流动相混合点到色谱柱的柱头之间的所有的体积，也被称为延迟体积（Delay Volume），或者梯度延迟体积（Gradient Delay Volume）、驻留体积（Dwell Volume）。对于梯度方法，不同的滞留体积会让实际的梯度方法有差异，相当于在梯度开始时有不同的等度延迟。这种差异可能会影响梯度方法的重现。[color=#ff0000]重点：系统滞留体积可能会影响梯度方法的重现。[/color]
http://www.instrument.com.cn/show/Breviary.asp?FileName=C28714%2Ejpg&iwidth=200&iHeight=200 大连依利特分析仪器有限公司 的 P1201高效液相色谱仪(P1201)已参加“国产好仪器”活动并通过初审。自上市以来，这款产品已经被多家单位采用，如果您使用过此仪器设备或者对其有所了解，欢迎一起聊聊它各方面的情况。您还可以通过投票抽奖、参与调研等方式参与活动，并获得手机电子充值卡。【点击参与活动】 仪器简介： 彰显时尚、传承经典 P100、P200、P200Ⅱ、P230，一代代的液相色谱仪产品，近二十年液相色谱领域的奋斗历程，大连依利特分析仪器有限公司作为国产液相色谱产品的排头兵，以其扎实的技术功底、优良的产品品质，再次为液相色谱用户提供新一代“超高性价比的液相色谱仪器P1201高效液相色谱仪。 本仪器充分汲取我公司多年在仪器生产和开发的经验，加之重要部件经过长期的生产使用检验，性能更加稳定，产品更加值得信赖。 ■ 系统组合 等度系统、二～三元高压梯度系统、二～四元低压梯度系统任意选择，广泛应用于中控、质检及实验室的理想液相色谱系统。 ■ 多种配置 柱温箱、自动进样器、容剂管理器、紫外和紫外-可见可变波长检测器，示差折光检测器，二极管阵列检测器，激光诱导检测器以及ELSD检测器等配置，完全满足复杂样品体系的液相色谱分析。 特点：高灵敏度，宽线性范围，适合于生物医药，石油化工，食品安全，环境检测，科研院所和高校教学等不同领域的不用应用。 ■ 专用装置 以P1201谱仪为核心可以构建为ELITE－AAK基酸分析系统、凝胶色谱分析系统，以及其他专用分析仪器。 UV1201紫外-可见检测器 UV1201采用基于MSP430单片机的双CPU系统，分别进行系统管理和信号采集及数据处理。信号输出可通过RS-232 或USB转换接口直接与电脑连接，避免了信号的多重转换，使得性能更加稳定，降低检测器的基线噪声和漂移，提高检测灵敏度。 设置UV1201紫外-可见检测器的检测波长为254nm，响应时间为1.0s，在室温条件(温度：20℃，湿度：50%）下，开机预热60min后，采集数据并计算，基线噪声≤±0.5×10-5AU；漂移≤1×10-4，参照《JJG705-2002液相色谱仪》的测试方法测试，最小检测浓度（S/N=2）为4×10-9g/mL。 ● 极高的检测灵敏度 ● 极小的基线噪声与漂移 ● 时间波长程序 P1201高压恒流泵 P1201高压恒流泵采用由CPU控制的往复式双柱塞杆串联泵头。步进电机细分驱动，改进凸轮曲线公式，保证了小流量条件下的准确性，同时使流量更加稳定。具有流量系统误差补偿和高低压保护、报警功能。RS-485外部通讯接口设计，可由工作站实现外控，且工....【了解更多此仪器设备的信息】
对于二元，四元的概念，其实很多朋友都容易和泵的数量混淆。还有系统中低压和高压的具体所指概念也同样有此类问题。元，指的是流动相的管路 二元， 一般常规是配2个泵，在泵后混合，也就 混合器里是高压状态，这种梯度混合系统就是 二元高压梯度混合系统。 四元，一般只用一个泵来提供压力，混合器在泵前面，混合器里是低压状态（相对二元那种的高压，而不是和生活中那种所谓的 大气压对比，这里很容易混淆） 这种就是所说的 四元低压梯度混合系统。那么还要特别说一下以上的全称：二元高压梯度混合系统高压液相色谱仪 四元低压梯度混合系统高压液相色谱仪对，后面都是高压液相色谱仪， 这就是为什么会容易被人故意混淆概念。这里要说明一点：四元高压梯度混合系统高压液相色谱仪 这种是可以做的，但管路和柱子的压力几乎难以工作，何况常规液相流动相也就常规3种混合。举个浅显的例子：你会在家用汽车上装个喷气式发动机吗？！如果有人对 Q_Rrad 3600Q 这个系统有比较清楚的了解，请告知一下，诚心求教。
8月，赛智科技隆重推出了LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统——LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，此前，公司产品已经进入清华大学、中国地质大学、南方科技大学、中国检验检疫科学研究院、中科院青岛能源所、华大基因等机构，获得了广泛认可。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561917027136.jpeg[/img]近年来，在分析测试领域，高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术的应用需求日益增长，赛智科技紧跟市场需求，通过自主研发和生产，推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，此举不仅满足了用户的多样化需求，更丰富了公司的产品线。这是赛智科技的一小步，却是国产高端分析仪器市场的一大步。[b]长期坚持自主研发，推出国产高端新品[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是重要的科研分析仪器，可以对复杂的混合物样品进行分离并分析样品的成分及含量，在食品安全、药物分析、生命科学研究、环境监测、临床检测、工业制造等多个领域都有广泛应用。但是，由于国内企业起步较晚，我国的高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]市场长期被Waters、安捷伦、岛津、赛默飞等跨国公司垄断，国产厂商只能做中低端市场，产品附加值较低。《第十四个五年规划和2035年远景目标纲要》中明确提出，要深入实施制造强国战略，加强高端科研仪器设备研发制造。在此背景下，赛智科技坚持自主研发核心部件，积极公关技术难点，经过不懈努力，终于推出了拥有自主知识产权的国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，成为少数掌握高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]核心制造技术的国内企业。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561135690083.png[/img][b]深耕分析测试领域，树立中国制造业标杆[/b]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的研发和生产需要系统集成，比如，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）是由LC8100系列溶剂组织器、LC8200系列高压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器（或选配DAD检测器）等核心零部件组成，而LC8000四元低压自动系统则是由LC8245四元低压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器等核心部件组成，要想实现高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的整机研发，核心部件的制造和整机系统的设计都非常关键。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056712030640.png[/img]自成立以来，赛智科技长期专注于分析测试领域，公司创始人路文初先生拥有深厚的学术和科研背景，他和团队共同研发的N2000色谱工作站操作简单、性价比高，目前拥有的客户数已经突破十万，在国内市场的占有率高达80%以上。不仅如此，在过去的十多年时间里，赛智科技不断强化自研自产能力，多项技术打破了国外技术垄断，并且建立了全流程的自研产品线，在高壁垒的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]领域，逐步实现了溶剂组织器、高压输液泵、四元低压输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外-可见检测器等核心零部件的生产制造，实现了核心零部件全部国产化，树立了中国高端仪器制造业标杆。[b]掌握核心技术专利，积极开拓海内外市场[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是基础医学、药学、材料科学领域的基础科研仪器，随着中国产业升级的稳步推进，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]市场也从常规的色谱分离向高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析、二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析方向拓展，此次，赛智科技推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，未来将会成为市场主流。LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）具有卓越的梯度精度和优化的延迟体积，更加适合复杂的应用环境或与质谱等联用。凭借进样器带来的自动化进样便利和多种检测器，获得更多数据易如反掌，同时产品还具有超高性价比和良好的稳定性，且维护简单。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056203994952.png[/img]LC8000四元低压自动系统具有极佳的灵活性且高度自动化，可以轻松应对药物、环境、食品安全、石油化工、农林牧渔等各个领域的复杂需求。在Ultrachrom色谱工作站控制下，可以实现全自动分析、报告、系统冲洗和关机，大幅提高工作效率。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430571355364781.png[/img]虽然是国产高端新品，但是依托赛智科技长期自主研发积累的技术专利和制造能力，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，以卓越的梯度精度、高度自动化、超高性价比和功能强大的配套色谱软件，让所有用户都可以获得良好的产品性能，并能大幅提高工作效率，在药物分析、食品和环境中的污染物检测、生物医药等相关领域都有广泛的应用需求。赛智科技长期从事的是科学仪器的研发和生产，公司深知只有把核心技术掌握在自己手中，才能真正掌握竞争和发展的主动权。正因如此，赛智科技始终坚持自主研发与“产学研”相结合的创新方式，产品的国产化率一直处于国内行业前列地位，目前公司已打通了高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]研发、生产、销售、售后服务的发展全链条，未来该系统将会应用于国内的大专院校、科研单位、化工厂、医院、制药厂、生物科技公司、第三方检测机构等多个领域，并有望远销伊朗、印度尼西亚、印度、泰国等海外市场扩大销售份额。8月，赛智科技隆重推出了LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统——LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，此前，公司产品已经进入清华大学、中国地质大学、南方科技大学、中国检验检疫科学研究院、中科院青岛能源所、华大基因等机构，获得了广泛认可。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561917027136.jpeg[/img]近年来，在分析测试领域，高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]技术的应用需求日益增长，赛智科技紧跟市场需求，通过自主研发和生产，推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，此举不仅满足了用户的多样化需求，更丰富了公司的产品线。这是赛智科技的一小步，却是国产高端分析仪器市场的一大步。[b]长期坚持自主研发，推出国产高端新品[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是重要的科研分析仪器，可以对复杂的混合物样品进行分离并分析样品的成分及含量，在食品安全、药物分析、生命科学研究、环境监测、临床检测、工业制造等多个领域都有广泛应用。但是，由于国内企业起步较晚，我国的高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]市场长期被Waters、安捷伦、岛津、赛默飞等跨国公司垄断，国产厂商只能做中低端市场，产品附加值较低。《第十四个五年规划和2035年远景目标纲要》中明确提出，要深入实施制造强国战略，加强高端科研仪器设备研发制造。在此背景下，赛智科技坚持自主研发核心部件，积极公关技术难点，经过不懈努力，终于推出了拥有自主知识产权的国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，成为少数掌握高端[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]核心制造技术的国内企业。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430561135690083.png[/img][b]深耕分析测试领域，树立中国制造业标杆[/b]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的研发和生产需要系统集成，比如，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）是由LC8100系列溶剂组织器、LC8200系列高压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器（或选配DAD检测器）等核心零部件组成，而LC8000四元低压自动系统则是由LC8245四元低压输液泵、LC8320自动进样器、LC8400柱温箱、LC8500紫外-可见检测器等核心部件组成，要想实现高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]的整机研发，核心部件的制造和整机系统的设计都非常关键。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056712030640.png[/img]自成立以来，赛智科技长期专注于分析测试领域，公司创始人路文初先生拥有深厚的学术和科研背景，他和团队共同研发的N2000色谱工作站操作简单、性价比高，目前拥有的客户数已经突破十万，在国内市场的占有率高达80%以上。不仅如此，在过去的十多年时间里，赛智科技不断强化自研自产能力，多项技术打破了国外技术垄断，并且建立了全流程的自研产品线，在高壁垒的高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]领域，逐步实现了溶剂组织器、高压输液泵、四元低压输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外-可见检测器等核心零部件的生产制造，实现了核心零部件全部国产化，树立了中国高端仪器制造业标杆。[b]掌握核心技术专利，积极开拓海内外市场[/b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]是基础医学、药学、材料科学领域的基础科研仪器，随着中国产业升级的稳步推进，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]市场也从常规的色谱分离向高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析、二维[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]分析方向拓展，此次，赛智科技推出国产高端新品——LC8000系列高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统，未来将会成为市场主流。LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）具有卓越的梯度精度和优化的延迟体积，更加适合复杂的应用环境或与质谱等联用。凭借进样器带来的自动化进样便利和多种检测器，获得更多数据易如反掌，同时产品还具有超高性价比和良好的稳定性，且维护简单。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/20230831143056203994952.png[/img]LC8000四元低压自动系统具有极佳的灵活性且高度自动化，可以轻松应对药物、环境、食品安全、石油化工、农林牧渔等各个领域的复杂需求。在Ultrachrom色谱工作站控制下，可以实现全自动分析、报告、系统冲洗和关机，大幅提高工作效率。[img]http://objectmc2.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/yhdoc/20230831/202308311430571355364781.png[/img]虽然是国产高端新品，但是依托赛智科技长期自主研发积累的技术专利和制造能力，LC8000二元高压自动系统（紫外/DAD）和LC8000四元低压自动系统，以卓越的梯度精度、高度自动化、超高性价比和功能强大的配套色谱软件，让所有用户都可以获得良好的产品性能，并能大幅提高工作效率，在药物分析、食品和环境中的污染物检测、生物医药等相关领域都有广泛的应用需求。赛智科技长期从事的是科学仪器的研发和生产，公司深知只有把核心技术掌握在自己手中，才能真正掌握竞争和发展的主动权。正因如此，赛智科技始终坚持自主研发与“产学研”相结合的创新方式，产品的国产化率一直处于国内行业前列地位，目前公司已打通了高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]研发、生产、销售、售后服务的发展全链条，未来该系统将会应用于国内的大专院校、科研单位、化工厂、医院、制药厂、生物科技公司、第三方检测机构等多个领域，并有望远销伊朗、印度尼西亚、印度、泰国等海外市场扩大销售份额。
能得出梯度曲线是否证明液相色谱仪能做梯度洗脱！！我很想知道！！请知道的朋友尽快和我联系！！谢谢！！
蔬菜中毒死蜱与茚虫威的高效液相色谱分析 毕业论文做这个，实在不知道怎么入手，求高手赐教！
[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数(溶解度)的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配使原来只有微小的性质差异产生很大的效果而使不同组分得到分离。液相：高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上引用了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的理论。在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万)；同时，柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。 ?应用范围[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]:分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析，一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。液相:高效液相色谱法只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于400以上)的有机物(些物质几乎占有机物总数的75%~80%)原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%而能用液相色谱分析的约占70~80%。 仪器构造（一）[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。1.柱箱:色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此，进样器和检测器的下端(接头)均插入柱箱。柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱，并且操作方便。色谱柱(样品)需要在一定的温度条件下工作，因此，采用微机对柱箱进行温度控制。并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。2.进样器:进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化。因此，采用微机对进样器进行温度控制。根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供选择:填充柱进样器毛细管不分流进样器附件；毛细管分流进样器附件；毛细管分流/不分流进样器；六通阀气体进样器；
新买的 HYPRSIL SAX 液相色谱分析柱，用来分析草甘膦原药。请问要如何进行柱的活化和平衡呢？
[quote]原文由 [B]tkom123[/B] 发表:本人查阅了一下由国家药典委员会编撰的中国药典高效液相色谱图集，据对３１１种中药的统计：其中等度系统占３０１例，２元高压梯度占１０例，四元低压系统占０例；紫外检测器占２３２例，二极管阵列７０（但也是单波长检测，可用紫外代替），蒸发光散射占９例可见目前来说绝大多数的重要分析是可以通过紫外检测器的等度系统来完成的，用户在选择的时候了解的越详细，可以避免不必要的开支[/quote][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191650_622438_1618563_3.jpg[/img][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2007/01/200701261437_40198_1618563_3.jpg[/img]
[color=#3e3e3e]在液相色谱分析过程中，我们经常遇到的问题主要有二种，一种与液相色谱仪器本身因素有关，如,液相色谱的阀门、混合器、检测器的光源以及其它的一些硬件设备。出现这类问题后，如果能找出问题根源，解决起来一般很简单，而且这类问题可以通过对仪器的精心维护来避免；而另一类问题则是分析方法本身造成的问题，如，出现色谱峰形状不好、峰与峰之间不能分开、基线飘移等等。不幸的是，如果出现这类问题，看起来似乎很明显，但是要找出原因并解决这类问题却非常困难。为了减少出现这一类型的问题，就必须在分析之前，仔细研究并选择一个好的分析方法，有了一个好的分析方法，就很容易获得理想的分离效果，而且在出现问题是也很便于找出原因。要选择一个好的分析方法，就必须对液相色谱分析的一些基本原则要有一个很深的了解。[/color][color=#3e3e3e][b]（1）分析方法选择的基本原则[/b]假如你想做一顿丰盛的晚餐，首先必须看一下食谱，然后检查一下你所需的东西是否齐全，如果少了配料还必须去商店购买，这样你才可能做出一顿可口的晚餐。同样进行液相色谱分析时，也必须按照一定的程序进行，首先你必须要有专门的仪器和试剂，然后有目的地选择分析方法，这样你才可能得到好的分析结果，避免走一些弯路。[/color][color=#3e3e3e][b]（2）柱子的选择[/b]现在大部分液相色谱分析都是使用反相色谱柱，其中以C[sub]18[/sub]和C[sub]8[/sub]柱最为流行，然而，色谱分析并不是流行歌曲，这两种色谱柱之所以运用广泛是因为在大多数情况下，使用这两种柱子都能获得理想的分离效果。尽管一些样品的分离并不是这两种柱子(如，表一所示)，但C[sub]18[/sub]和C[sub]8[/sub]经常是最好的固定相，C[sub]18[/sub]和C[sub]8[/sub]柱两者之间并无明显的差别。色谱分析人员遇到的多数样品需要利用反相色谱柱进行分析，但一些样品可能需要其它的分析技术才能成功地分离，这些样品及分离方法在表一中作了简要的叙述。[/color][color=#3e3e3e][img=,527,121]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142201_01_3214098_3.png[/img][/color][color=#3e3e3e]表一：样品及分析方法[/color][color=#3e3e3e]在过去的15年中，高纯度、低金属杂质含量的硅胶基质色谱柱是最为实用的色谱柱之一。但传统色谱分析用的硅胶颗粒具有差异性及酸性表面，固定在柱子表面后，导致出现拖尾峰，而且柱与柱之间的重现性较差。最近硅胶基质中出现一种新的产品，这种硅胶具有Metal-free特性，因此，柱子性能更稳定，重现性也更好，分离后峰的形状也很不错。这种改性后的硅胶称为B型硅胶。由于具有上述优点，大多数色谱制造商都用不同的名称来表明它们与传统的产品之间的不同，如，Intertsil (日本)、 BDS(USA)、YMC--Base(USA)等等。大多数色谱柱制造商都生产以B型硅胶为基质的色谱柱，因此你可以选择你所喜欢的供应商提供的产品。由于这种产品具有上述特性，建议使用A型硅胶柱的改为使用B硅胶柱。[/color][b]（3）柱子尺寸规格的选择[/b][color=#3e3e3e]液相色谱分析时柱子选择的另一个因素就是柱子大小、及填充颗粒的直径(dp)的选择。最常用颗粒直径为5μm，但颗粒的直径(dp)为3.0及3.5μm的也适合分析使用，但大多数色谱工作者都喜欢使用颗粒直径为5μm的色谱柱，因为这种色谱柱具有很长的使用历吏。颗粒的dp小意味着可以获得较高的理论塔板数，但所需的柱压增大，而且dp为3.0μm的色谱柱易堵塞，所以一些色谱制造商又生产出dp为3.5μm的色谱柱。在实验室中经常使用的是150mm×4.6mm，dp为5μm的色谱柱。另一种可以选择 的色谱柱为75mm×4.6mm，dp为3.5μm的柱子，这种柱子的分离效果与前一种色谱柱分离效果相似，但使用时间减小一半。这两种柱子还有一个优点就是在合理的压力下(2000psi )，流速可以设定在1.5-2.0mL/min之间，而流速高意味着可以缩短分析时间。有些分析者建议使用30 or 50mm长的柱子作为前处理柱，但这种柱子不能提供足够的塔板数。另一种意见是使用窄孔柱(2mmid)或微孔柱(≤1mmid)，这两种柱子所需的溶剂少，但是这两种柱子所需的某些仪器与正常使用的色谱仪有些不同，而且正处在一个研究阶段，建议等这两种色谱柱研究成熟之后再使用。[b]150mm×4.6mm，dp为5μm的色谱柱最为常用，75mm×4.6mm，dp为3.5μm的色谱柱也中较常见，在一般情况下流速可设定为1.5mL/min。[/b][/color][color=#3e3e3e][b]（4）有机相的选择[/b]获得成功分离的另一个重要因素就是流动相有机溶剂的选择，如果使用反相色谱柱可以有三种有机溶剂可以选择，甲醇、乙腈和四氢呋喃。每一种溶剂都有其独特的优点，但色谱分析人员很少能预见哪一种溶剂更合适，所以具体选择哪一种溶剂你必须充分考虑同行的意见。分析药物中的成份时，其中有些样品的紫外吸收很弱，所以，分析时紫外检测器的波长为220nm甚至更低，但是四氢呋喃的紫外吸收比较强，所以在波长低于240nm时，就不能选择这种溶剂。尽管低浓度的甲醇在较低的波长下也可使用，但是在低于220nm时，甲醇的浓度不易控制。选择何种溶剂还必须考虑其与样品及空气之间不发生作用，而四氢呋喃易分解，形成过氧化物，所以使用这种溶剂时须格外小心。一些研究人员发现，在四氢呋喃中加入水可以解决这个问题，但它与色谱柱平衡所需的时间比甲醇、乙腈长，而且其不愉快的气味也是一个不利因素。与四氢呋喃相比，甲醇和乙腈的最大优点是在柱压较低的条件下，流速可控制在1-2mL/min之间。考虑到理想溶剂的特点，如粘度低、紫外吸收弱、与样品不相互作用，而且使用方便，所以首选的有机溶剂应是乙腈，当然利用甲醇作为有机溶剂的也较为常见。[b]（5）水相的选择[/b]假如样品为一般化合物，可以用水作为水相，然而离子化合物在药物分析时普遍存在，而这类化合物需要控制pH值才能得到很好的分离。如流动相的pH值必须高于或低于样品的PKA1.5个单位。在分析有机酸时，当pH值低于3时，色谱柱一般还比较稳定，然而当PH值高于8时，就需要缓冲液，因为此pH值已经超出了二氧化硅的有效使用范围。宽PH值的二氧化硅柱也比较常见，但是对高pH值物质的分离，很少有这方面的报道。所以建议使用缓冲液来减少二氧化硅的流失。考虑到样品的特性及柱子的稳定，建议在分析PH值较高的物质时应使用缓冲液，2.5mm的磷酸盐缓冲液 (pH=2.5)是非常合适的水相。如果在分析方法中使用了分光仪，那么就必须选择易挥发的缓冲液，尽管不如真正的缓冲液有用，但0.1%Trifluoroacetic酸和乙酸能够满足pH值的控制要[b]求。（6）其它因素[/b]在你选择液相色谱的分析方法时，必须考虑到其它的一些因素，比如，温度。因为温度变化1度，保留时间将变化1-3%，所以温度控制十分重要，温度的变化还影响色谱柱的选择性，这会使你更积极地投入到温度选择中去。在分析时柱温一般比室温高一点(如，35℃)，因为此温易控制，而且在低压下有利于降低溶剂的粘度，从而降低柱压。有时你需要利用其它的一些方法 ，如在流动相中加入部分特殊的物质，不过建议最好在你实在必须时才用这种方法，记住KISS原则(Keep it simple ，stupid)，不要使你的流动相过分复杂![/color][color=#3e3e3e][b]（7）总结[/b]在液相色谱分析时条件的选择非常重要，而且流动相是常年与之打交道的，所以必须慎重选择。一些较为常见的分析条件如表二所示：[/color][color=#3e3e3e][b][img=,529,146]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/05/201705142214_01_3214098_3.png[/img][/b]表二：分析条件内容[/color][color=#3e3e3e]（转载于：实验与分析）[/color]
[b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]与液相的概念[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left][/align][align=left][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]是一种物理的分离方法。利用被测物质各组分在不同两相间分配系数（溶解度）的微小差异，当两相作相对运动时，这些物质在两相间进行反复多次的分配使原来只有微小的性质差异产生很大的效果而使不同组分得到分离。[/align][b]液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上引用了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的理论。在技术上，流动相改为高压输送；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而,使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时，柱后连有高灵敏度的检测器可对流出物进行连续检测。[/align][align=left][/align][align=center][b][/b][/align][b]应用范围[/b][align=left] [/align][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left][/align][align=left]分离能力好、灵敏度高、分析速度快、操作方便等。。。[/align][align=left]受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析，一般对500℃以下不易挥发或受热易分解的物质部分可采用衍生化法或裂解法。。。[/align][align=left][/align][b]液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此，不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于400以上）的有机物（些物质几乎占有机物总数的75%～80%）。原则上，都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。据统计，在已知化合物中能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。[/align][align=left] [/align][b][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]仪器构造[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url][/b][align=left]由载气源、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。进样部分、色谱柱和检测器的温度均在控制状态。[/align][align=left][b]1.柱箱：[/b][/align][align=left]色谱柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的心脏，样品中的各个组份在色谱柱中经过反复多次分配后得到分离，从而达到分析的目的，柱箱的作用就是安装色谱柱。由于色谱柱的两端分别连接进样器和检测器，因此，进样器和检测器的下端（接头）均插入柱箱。柱箱能够安装各种填充柱和毛细管柱并且操作方便。色谱柱（样品）需要在一定的温度条件下工作，因此，采用微机对柱箱进行温度控制，并且由于设计合理，柱箱内的梯度很小。[/align][align=left]对于一些成份复杂、沸程较宽的样品，柱箱还可进行三阶程序升温控制。且程序设定后自动运行无需人工干预，降温时还能自动后开门排热。[/align][align=left][/align][align=left][b]2.进样器：[/b][/align][align=left]进样器的作用是将样品送入色谱柱。如果是液体样品，进样器还必须将其汽化。因此，采用微机对进样器进行温度控制。[/align][align=left]根据不同种类的色谱柱及不同的进样方式，共有五种进样器可供选择：[/align][align=left]填充柱进样器[/align][align=left]毛细管不分流进样器附件[/align][align=left]毛细管分流进样器附件[/align][align=left]毛细管分流/不分流进样器[/align][align=left]六通阀气体进样器[/align][align=left][/align][align=left][b]3.检测器：[/b][/align][align=left]检测器的作用是将样品的化学信号转化为物理信号（电信号）。[/align][align=left]检测器也需要在一定的温度条件下才能正常工作，因此，采用微机对检测器进行温度控制。[/align][align=left]根据各种样品的化学物理特性，共有五种检测器可供选择：[/align][align=left]氢火焰离子化检测器（FID）；[/align][align=left]热导检测器（TCD）；[/align][align=left]电子捕获检测器（ECD）；[/align][align=left]氮磷检测器（NPD）；[/align][align=left]火焰光度检测器（FPD）；[/align][align=left][/align][align=left][b]4.数据处理系统：[/b][/align][align=left]该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。[/align][b]高效液相仪器构造液相[/b][align=left][/align][align=left]高效液相色谱仪主要有：进样系统、输液系统、分离系统、检测系统和数据处理系统组成。[/align][align=left][b]1.进样系统[/b][/align][align=left]一般采用：隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。这对提高分析样品的重复性是有益的。[/align][align=left][/align][align=left][b]2.输液系统[/b][/align][align=left]该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。高压泵的一般压强为l.47～4.4×107Pa流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而改变，包括改变洗脱液的极性、离子强度、pH值或改用。。。[/align][align=left][/align][align=left][b]3.分离系统[/b][/align][align=left]该系统包括：色谱柱、连接管和恒温器等。。。[/align][align=left]色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管）内径为2～5mm，由优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，柱内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成），固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如，硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中固定相的制备一样）或者用化学法偶联各种基因（如，磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。。。[/align][align=left][/align][align=left]因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性，例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来。。。[/align][align=left][/align][align=left]另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。基质粒度小、微孔浅，样品在微孔区内传质短。这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的。根据柱效理论分析，基质粒度小，塔板理论数N就越大。[/align][align=left][/align][align=left]这也进一步证明基质粒度小，会提高分辨率的道理。再者，高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60℃通过改善传质速度，缩短分析时间，就可增加层析柱的效率。[/align][align=left][/align][align=left][b]4.检测系统[/b][/align][align=left]高效液相色谱常用的检测器有紫外检测器、示差折光检测器和荧光检测器三种：[/align][align=left][b](1)紫外检测器[/b][/align][align=left]该检测器适用于对紫外光(或可见光)有吸收性能样品的检测。[/align][align=left]其特点：使用面广（如，蛋白质、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用）；灵敏度高（检测下限为10-10g/mL）；线性范围宽；对温度和流速变化不敏感；可检测梯度溶液洗脱的样品。[/align][align=left][/align][align=left][b](2)示差折光检测器[/b][/align][align=left]凡具有与流动相折光率不同的样品组分，均可使用示差折光检测器检测；糖类化合物的检测使用此检测系统。这一系统通用性强、操作简单，但是，灵敏度低（检测下限为10-7g/mL），流动相的变化会引起折光率的变化；因此，它既不适用于痕量分析，也不适用于梯度洗脱样品的检测。[/align][align=left][/align][align=left][b](3)荧光检测器[/b][/align][align=left]凡具有荧光的物质，在一定条件下，其发射光的荧光强度与物质的浓度成正比。因此，这一检测器只适用于具有荧光的有机化合物（如，多环芳烃、氨基酸、胺类、维生素和某些蛋白质等。。。）的测定，其灵敏度很高（检测下限为10-12～10-14g/mL）痕量分析和梯度洗脱作品的检测均可采用。[/align][align=left][/align][align=left][b]5.数据处理系统[/b][/align][align=left]该系统可对测试数据进行采集、贮存、显示、打印和处理等操作，使样品的分离、制备或鉴定工作能正确开展。[/align][b]高效液相色谱与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法优点和不足分析[/b][align=left][/align][align=left]只有20%样品可不经化学处理而能满意地用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。[/align][align=left][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高分离的选择性；另外，可作流动相的化合物多，选择余地广。[/align][align=left][/align][align=left]与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]相比，高效液相色谱仪的另一个优点是：样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所分离的各组分收集。回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。[/align][align=left][/align][align=left]高效液相色谱不足的是，日前，检测器的灵敏度不及[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]。必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱分离的影响。[/align][align=left][/align][align=left][color=#888888](内容来源：互联网)[/color][/align]
[b][color=#444444]单位想购买台液相色谱仪[/color][color=#444444]想问下[/color][color=#444444]液相梯度泵二元的好还是四元的好[/color][/b]
想买台四元梯度是四元高压梯度液相好还是四元低压梯度好？
16种塑化剂的液相色谱方法开发终于算是完成了，整整一个月的时间，换过不同的柱子，尝试过各种不同的流动相种类和配比，250多次方法摸索和进样，一针一个多小时啊，项目逼得紧，周末无休，简直都快疯掉了。这16种塑化剂同时分离太难了，好不容易把这两个挨得很近的化合物分开，那两个又并一块儿去了，特别是第三组的四个峰DIBP、BBP、DBP和DBEP，真的是按下葫芦浮起瓢，如果流动相中乙腈多一点前两个峰分得开，可后两个峰却粘得更紧了，而甲醇多一点则前两个峰又粘一块儿去了，而且水的多少也是一个不可忽视的变量。由于是同时分析，所以每个峰必须都要能看得到，头大啊，一个月中大概有3/4的时间都是在解决这四个峰的分离度问题，最后把流动相调成A相是水：乙腈＝60：40、B相是甲醇：乙腈＝60：40的情况下才实现了这四个峰各自1.0以上的分离度。邻苯二甲酸二辛基酯和二壬基酯在C18上根本分不开，选择性不行，在C8上却很好的实现了基线分离，看来C8和辛基（也是8个碳原子）确实体现了比较好的选择性的一面。以下是谱图和数据，与大家一起分享。液相色谱仪：WUFENG LC100 二元高压梯度系统色谱柱：PntulipsTM BP-C18, 5um, 4.6×250mm流动相：梯度时间（min）A相：水/乙腈＝60/40B相：甲醇/乙腈＝60/4001000310002150[align=cent
甜菜碱、甜菜碱盐酸盐产品怎样用高效液相色谱分析？谁有分析方法？产品是甜菜碱（三甲胺乙内酯）、甜菜碱盐酸盐，还有维生素（A\B\C\D\E），这几样产品怎么用液相色谱分析纯度（含量）？维生素系列能不能用紫外检测器全做了？
我用液相色谱分析农药制剂含量，按配制的小样加入的原药量理论值应该是0.2%，但是用液相色谱分析结果为0.27%，请教高手分析可能原因，谢谢
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