1 美国wyatt 18角度激光光散射凝胶色谱系统（GPC-MALS） 做的数据，能否处理得到，以y(纵轴)=摩尔百分比，x(横轴)=分子量 这样的分子量分布曲线呢？如果可以，应该如何处理。如果不行，用什么设备能做呢？最近做一个聚合肽，想做一下分子量分布曲线，文献用的是 calibrated gel fitration column (Superose 12)，字面看是凝胶过滤色谱，它和GPC有什么区别？
自场流分离仪诞生之时，聚合物、生物大分子材料等溶解型的样品就是场流仪的重要应用领域，并且与凝胶渗透色谱仪产生了一定的竞争关系。国外一些用户先后开发了场流仪FFF与凝胶渗透色谱仪GPC并联和串联使用的方法，取得了不错的效果。非对称流动场AF4、离心场CF3和热场TF3，均可与GPC并联使用，从而对同一样品分别进行FFF与GPC对比分析。通过增加两个或三个多通阀，实现并联流路。FFF与GPC串联，是更加独特的分析方法。例如：GPC与离心场CF3串联，配合激光散射检测器、粘度检测器，可以用GPC先分析样品是否含有支化样品，再将分离后的样品继续进入离心场，对含有支化样品的组分段，进行继续分离，可实现将流体力学体积相同的直链和支化的样品分离开来，并进一步检测绝对分子量、特性粘度等深度结构信息。随着GPC逐渐向多检测器型方向发展，场流仪也随之逐渐与激光散射检测器、四毛细管粘度检测器结合而成为多检测器型场流仪。postnova公司在2012年的德国慕尼黑生化分析仪器展览会上推出了全新的21角度激光散射检测器PN3621，该检测器拥有7度、12度和20度三个小角度，采用了立体取光等众多最先进技术，是目前市场上唯一的拥有7度小角的多角激光散射检测器！了解激光散射检测原理的人都知道，散射取光角度越小，则对大、超大分子量的样品，具有极佳的灵敏度和响应。而场流分离仪恰恰是在超大分子量样品测试方面具有更好的分离分析能力。因此，7度小角与多角外推共同组成了几近完美的在线激光散射检测器，成为了场流仪的“最佳搭档”。需要指出的是，由于一般的示差折光检测器RI样品池不能承受反压/背压，因此，如果在多检测器GPC/多检测器FFF仪器上简单地采用串联方式连接三、四个检测器，那么此时RI检测器需要放在最后的位置上以避免反压，这样就产生了一个问题：多个检测器的样品池的总的死体积已经接近了进样量——分析型仪器多数采用200微升的最大进样量，从而造成了在GPC柱子上/场流分离通道上已经被分离的样品组分，在检测器样品池内再次发生混合，延迟了流出并进入下一个样品池的时间，造成了RI检测器的分子量分布数据变宽，也就是说，分子量分布数据失真。在此情况下，正确方法是：1 采用能承受反压的RI检测器，这个有难度，于是一般采用第二种方法；2 采用多检测器并联技术：激光散射、粘度等定性的检测器单独走一路流路，而示差RI则走另一路流路。并且，从GPC柱子/FFF分离通道流出后的样品，被平均分成两路，平均分配是通过三通阀和相同长度的两根流路管来实现的——即：两路流路的长度相同，则压降相同，于是就被平均分配成两路了。再分别标定各个检测器以准确计算各个数据即可。目前市场上的多检测器GPC中，只有马尔文 VISCOTEK 公司的M270系列多检测器GPC采用了正确的并联方式、M302/305系列GPC采用了可承受反压的RI 检测器，从而实现三检测器按照：激光散射LS-示差RI-粘度IV 的顺序布置。这样做，就不会因为多检测器联用而影响分子量分布数据的真实性。postnova的场流仪在结合多检测器技术的时候，也可以采用并联技术以保证分子量分布数据的准确性，并且为客户提供最佳的技术服务。希望广大用户不要被一些厂家的片面宣传所迷惑，不论是GPC还是场流仪，还是要找一些专业书籍以深入学习相关分析知识，如：高分子物理教材、仪器分析教材等等。我们也会充分利用仪器信息网及论坛这个平台，为大家深入、详细地介绍FFF/GPC及多检测器技术的，也请大家畅所欲言，我们一定有问必答。
[list][*][b]凝胶初辟本相对，打破传统需散射[/b][/list]终于写到了光散射部分，辉博士还是很兴奋的，毕竟搞了这些年色谱和光散射，很多陈谷子烂芝麻的往事和经验。静态光散射原理的发展快有一个世纪了吧，这项技术和GPC开始联用可以追溯到上个世纪八十年代，那是很多种新技术百花齐放、争相斗艳的年代。当然百花齐放不意味着每一朵花都能盛开到最后。国外很多公司设计出基于静态光散射和色谱连用技术的设备，有基于多角度外推的技术MALS（multi angle light scattering），也有基于小角度直接检测的技术LALS (low angle light scattering)。后来，呵呵，后来故事太多了，有些公司被收购，有些公司消失了，还有一些公司成长成为业内的翘楚！博士对于开发这些技术的先驱们一直充满了崇敬之情，因为如果不是当年他们面对困难所付出的勇气和努力，对了还有智慧（智慧最重要，呵呵），就没有今天我们坐在这里侃侃而谈。前面谈到单RI检测器通过校正只能得到相对分子量信息，对于想要了解高分子真实性能的科研工作者，这是远远不够的。在线光静态散射技术，不需要通过标准样品进行色谱柱校正，可以直接检测绝对分子量的结果，而高分子的绝对分子量直接决定了高分子的物理性能。在这一部分，我们聊聊在线光散射技术的原理和其功能。在线静态光散射检测器通常和RI检测器在GPC中连用，某些行业中，如蛋白质检测，光散射则和紫外检测器连用也经常用到。[b]静态光散射原理[/b][img=,578,325]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060943550725_4845_3200617_3.png!w578x325.jpg[/img]当一束光撞击到大分子或者颗粒的时候，一部分光会被吸收，并被重新向各个方向发射出去。当一个光子撞击到大分子的时候，光子的部分能量会引发大分子内部的偶极震荡。这部分能量随后以光的形式，向各个方向被重新发射出去。我们每天都可以见到这种现象，例如白云，日落，或者灰尘经过一束阳光或者投影。光散射方面的定律可以帮助我们测量很多和大分子相关的物理量。瑞利理论描述了散射光强度与大分子的尺寸和分子量的关系，定义了发生散射的大分子和颗粒对散射光的强度的影响[img=,230,74]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060944369098_7516_3200617_3.png!w230x74.jpg[/img]其中C为样品的浓度，θ为测量的角度（散射角），Rθ 为θ角方向的瑞利散射比（散射光与入射光的强度比），Mw 为重均分子量，A2 为第二维里系数，K和Pθ的定义式为[img=,191,65]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060945059868_192_3200617_3.png!w191x65.jpg[/img]其中λ0 为真空中激光的波长，NA 为阿伏加德罗常数，n0 为溶剂的折光指数，dn/dc为样品在溶剂中的折光指数随浓度增量[img=,253,54]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060945425178_8444_3200617_3.png!w253x54.jpg[/img]其中Rg 为大分子的旋转均方半径。瑞利散射方程阐述了一定的角度下散射光强度与几个因素有关，其中包扩分子量和分子尺寸，请注意是两个未知数哦。同时也可以发现，较大的分子量和分子尺寸会产生更强的散射光。散射光强的增加与分子量的增加成线性关系，但是不与分子尺寸成线性关系。[b]散射光的角度依赖性[/b]当分子具有较大的尺寸的时候，散射光的强度会随着散射角度的不同发生变化，这就是角度依赖性。瑞利散射方程中，P[sub]θ[/sub]是高分子的形状因子，是未知项，不同的光散射技术对它的处理也不相同。我们再次看看P[sub]θ[/sub]的定义：[img=,253,54]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060946211678_3558_3200617_3.png!w253x54.jpg[/img]其中n[sub]0[/sub]为溶剂的示差折光指数，R[sub]g[/sub]为大分子的旋转均方半径，λ[sub]0[/sub]为激光在真空中的波长，θ为散射角。从定义式中可知，1/P[sub]θ[/sub]受很多参数的影响，既包扩样品也包括实验条件，如溶剂的示差折光指数（n[sub]0[/sub]），激光在真空中的波长（λ[sub]0[/sub]）散射角（θ）和大分子的旋转均方半径（Rg）。这意味着对于大分子，散射光的强度与测试角度相关，这就是角度依赖性。产生角度依赖性的原因，是当分子的尺寸增加后，散射光的光子彼此之间会发生干涉等相互作用，如下图[img=,690,234]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060947188008_3081_3200617_3.png!w690x234.jpg[/img][list][*]各向同性的散射体的尺寸相对于激光的波长来说较小，各向散射光均匀分布。各向异性散射体的尺寸相对于入射激光的波长明显较大，各个方向的散射光强度不等。[*]当大分子的尺寸相对于激光的波长来说较小的时候，如上，散射的形式表现为单点散射，这时各个方向的散射光的强度相同，这样的大分子被称为各向同性散射体。[/list]当大分子的尺寸相对于激光的波长来说明显变大的时候，分子的尺寸和结构开始变得重要。来自激光的光子会在大分子中的不同部位发生散射。这种情况与大分子的Rg有关。这些发生散射的光子彼此之间相互作用，导致测量的光强受观测位置影响。这样的大分子被称为各向异性散射体。在各向异性散射中，所有的相互作用都是造成衰减的，因此散射光的强度相比于各向同性的散射是降低的。如果我们用这个散射强度去计算分子量，我们就会得到偏低的结果。那么怎么办呢？瑞利散射方程告诉我们如果可以在0度角测量散射光强度，那么sin[sup]2[/sup](θ/2)就等于0，1/Ｐ[sub]θ[/sub]的值就是1。不过由于0度存在强度很高的入射激光，所以我们很难分辨出单独的0度角高分子散射光的强度。由于不能够直接在0度角测量，我们需要一种替代的手段。于是就出现了市场上的两种技术，即多角光散射MALS和小角光散射LALS。万变不离其宗，他们的目的都是为了检测0度角附近的散射光强，从而得到准确的大分子的分子量的信息，只不过，MALS利用的是外推的方式，LALS直接在0度角附近检测而免除了外推的过程。总结：[list][*]Rg小于12nm（~入射激光波长1/40）的分子，散射光表现为各向同性，几乎不表现出角度依赖性，那么这时候任何角度检测的结果都是正确的，不需要多角MALS也不需要小角LALS，实际上一个单90度角得到的结果是非常好的[*]Rg大于12nm（~入射激光波长1/40）的分子，散射光表现出各向异性，散射光的强度与散射角有关，需要0度角的散射光强来准确计算分子量，此时需要多角MALS或者小角LALS技术[/list][b] 旋转均方半径Rg的计算[/b][img=,690,357]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060948475418_2265_3200617_3.png!w690x357.jpg[/img][align=center][b]Guinier图表示KC/R[sub]θ[/sub]对应sin[sup]2[/sup]（θ/2）的函数关系。其截距为1/Mw，起始部分的斜率与Rg有关[/b][/align][b] [/b][list][*]Rg可以从角度依赖性曲线（Guinier 图）中起始部分的斜率中计算[*]必须要足够显著的角度依赖性来计算曲线的斜率[/list]曲线起始部分的斜率可以表示为[img=,139,51]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060949118845_5780_3200617_3.png!w139x51.jpg[/img]Rg可以从这个公式中得到，然而，对于较小的大分子，曲线的斜率可能非常小，甚至淹没在噪音当中。只有当大分子的尺寸相对入射光波长非常显著的时候，曲线的斜率才会被精确的计算，从而获得可信的Rg。入射波长为633nm激光可以计算的Rg的下限约为12nm左右。但是，绝对的下限可能高于或低于12nm，这与样品，溶剂和测试条件都有关系。很多MALS仪器制造商提出的Rg下限为10nm（甚至更低），这通常是对于标准样品或者具有较高dn/dc或者浓度的样品的理想情况。实际使用的过程中，很多样品无法达到这样的下限。另外极端条件如样品的dn/dc很低或者不在理想条件下，其Rg的下限都会远高于12nm的理论值。[b] GPC/SEC与静态光散射连用[/b][img=,690,60]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060949352365_2620_3200617_3.png!w690x60.jpg[/img]GPC/SEC可以使我们轻松的将光散射数据和浓度检测器提供的数据联系起来进行计算。最常用的浓度检测器是示差折光检测器RI或者紫外检测器UV。现在常用的静态光散射仪器有2种，分别RALS与LALS联用，和多角光散射MALS。[b] 光散射检测器1 - RALS/LALS直角和小角联用光散射检测器[/b]RALS与LALS具有一定的互补性的。RALS灵敏度高，适合测量散射光各向同性的样品，LALS适用于测量散射光各向异性的样品，可以提供非常准确的结果。如下图，RALS/LALS联用检测器将两种检测器整合在一个流通池当中。在Zimm图上，RALS主要测试分子尺寸小于临界半径12nm的各向同性散射体，LALS则精确测试分子尺寸大于临界半径12nm的各向异性散射体。软件会自动根据检测器的信号在RALS与LALS之间进行切换。对于各向异性散射体，两个检测器计算的分子量的比值可以用于估计Ｐθ，这样再对分子结构进行假设（无规线团或刚性球），就可以估计分子的Rg了。[img=,687,252]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060950302655_7653_3200617_3.png!w687x252.jpg[/img][b]左图，RALS/LALS联用检测器结构与流通池流路。激光从流通池末端进入，检测器布置在90度和小角度方向。右图，使用RALS/LALS联用时，对应的Zimm图为两个点，其中RALS为各向同性散射体提供高灵敏度的检测，LALS为各向异性散射体提供高精确度的检测[/b]RALS/LALS联用的特点：[list][*]对于分子体积不大的大分子，RALS可以提供最高的灵敏度[*]对于分子体积较大的大分子，LALS可以提供最好的准确性[*]可以比较两个角度的散射光强度[*]对两个角度的数据进行分析，可以计算Zimm曲线的斜率，进而计算Rg，当然这个Rg的准确程度比MALS得到的Rg要差一些，毕竟只有两个点的外推[*]RALS/LALS联用检测器具有很小的流通池，这其实是相对MALS检测池的优势之一，毕竟检测池小了，扩散效应会降低很多[b][/b][/list][b]光散射检测器2 - 多角光散射MALS[/b]如名称所示，MALS检测器在多个角度检测散射光的强度，如下图。将这些角度的数据点添加在Zimm图中，通过最合理的拟合曲线外推至0度角，就可以计算分子量。曲线起始部分的斜率可以精确的计算分子尺寸Rg。[img=,686,252]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060951288805_6810_3200617_3.png!w686x252.jpg[/img][align=left][b]左图：MALS检测器结构与流通池流路。激光从流通池末端进入，检测器布置在多个角度方向上 。右图：使用MALS时，可以得到一条完整的拟合曲线 ，这条曲线外推至0度可以计算大分子的分子量，曲线起始部分的斜率可以计算Rg[/b][/align][b] 多角光散射的外推模型小分子[/b] 小分子线团、蛋白质、单克隆抗体等样品为均匀散射，不需要外推。[b] 大分子[/b] 外推模型包括： [list][*]Zimm外推，Kc/R[sub]θ[/sub]对于 sin[sup]2[/sup](θ/2)外推拟合，适用于适用于适中分子大小 Rg ~ 20-50 nm的分子线团 [*]Deby外推，R[sub]θ[/sub]/Kc 对于 sin[sup]2[/sup](θ/2)外推拟合，在一个比较宽的Rg范围内使用，是一种广谱的拟合模型，其适合范围比Zimm模型更加宽泛 [*]Berry外推，（Kc/R[sub]θ[/sub]）[sup]0.5[/sup]对于 sin[sup]2[/sup](θ/2)外推拟合，适用于比较大的分子 Rg 50 nm[/list][img=,634,189]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060951554498_5952_3200617_3.png!w634x189.jpg[/img][b]左图：为小分子量聚合物的Zimm曲线，散射光为均匀散射，没有角度依赖性右图：为高分子量聚合物的Zimm曲线，散射光为非均匀散射，具有角度依赖性，需要外推得到0度角的散射光[/b] 其中在拟合过程中，用户可以适当删除一些与拟合曲线偏差较大的光散射数据点，以及使用1-5阶指数拟合方式（线形好尽可能用低阶指数），以达到更好的拟合效果。MALS特点：[list][*]由于可以获得多个角度的散射光强度，使用者可以通个比较相邻的角度的数据更好的确定结果的准确性[*]MALS可以测量各种大分子的分子量，因为计算过程已经将角度依赖性考虑在其中了[*]通过多个角度的数据，可以精确的计算Rg[*]根据Zimm曲线的形状，MALS可以洞察散射光的角度依赖性的情况[*]需要选择合适的模型，这点非常重要，毕竟Zimm，Debby，Berry的最适合的范围不同[*]如果某个角度的数据不合理或者噪音太高，计算过程中可以将其去掉，这样做不会对结果造成太大的影响[*]光学元件的设计导致散射池体积较大，这会造成比较大的扩散效应[/list]当使用MALS时候，最为关键的一点是能不能确定拟合曲线的类型，而精确的拟合曲线主要是由精确的低角度的数据的数量决定的。因此一台MALS应该配置尽可能多的低角度接收器，这有助于提高外推至0度角的准确性。总体上对于不同类型的MALS而言，角度越多，外推过程的准确性就越好。[b]趣谈1 光散射检测器角度越多分子量检测越准？[/b]这真的是一个需要很多前提条件的论断。首先，12nm以下的小分子散射是均匀的，任何一个信噪比良好的角度得到的散射光强计算分子量都可以得到准确的结果，不必需要0度角的信号意味着既不需要多角度MALS的外推也不必需小角度LALS的信号。这在众多通过90度角单角度检测蛋白（如人学白蛋白HA，单克隆抗体）的用户实际检测中得到了验证。不但单抗单体150KDa检测极为精确，而且其他的寡聚体峰，如二聚体300KDa，三聚体450KDa都没有任何问题。而在检测大分子的过程中，小角光散射LALS的准确度并不比多角差。实际上，因为不需要像MALS一样选择模型进行外推（外推过程中的选点，选模型，选择拟合阶次都是具有一定主观性的），在检测分子量的角度，小角度的准确性甚至更高。很多GPC的专业书籍都对此有所描述：[img=,690,338]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/09/201909060952216648_8096_3200617_3.png!w690x338.jpg[/img] 所以，我的观点是只有当您：1选择了多角光散射MALS作为检测器，2检测大分子的时候，角度越多分子量越准。毕竟角度越多越有利于外推的准确性。但是话说回来，如果您特别在意Rg的检测的话，那么多角度还有有其优势的。 [b]趣谈2光散射检测器不需要校正[/b] 很多厂商都是这么说的，但是，实际上完整的表述是，光散射检测器不需要做传统校正曲线！在不同的流动相下，其光散射检测器的光学常数不同，这个光学常数以及检测器之间的保留体积需要通过一个窄分布的标准样品校正出来，而一旦校正出来常数，做任何样品都是一样的。据博士所知，所有厂商都是如此！！！[align=left][b]趣谈3装了光散射检测器的GPC是不是所有样品都可以检测？[/b][/align]光散射检测器不是万能的，也有其限制。限制1. 分子量或者dn/dc极低的样品。这时候散射光强会很弱，有可能散射信号的信噪比很差，此时光散射结果会有较大偏差限制2. 多组分混合物，这里指的是不同化学结构单元的混合物，如聚苯乙烯PS和聚氯乙烯PVC的混合物。由于不同组分的dn/dc不同，而软件只能输入一个dn/dc值，所以检测出来的数据必定不那么“绝对”。一个例子就是沥青的分子量检测，其标准方法就是相对分子量，因为成分太复杂了，没法符合光散射的基本要求。限制3. 荧光样品。具有荧光发射的样品对于散射光信号是一种干扰，如木质素，通常会使得散射光增强，也就是分子量偏高。一个治标不治本的方法是在检测器前加入荧光滤光片，然而，先不谈荧光滤光片会降低检测器的灵敏度，其得到的散射光强也是有偏差的。解决之道是使用RI和粘度检测器连用，进行普适校正，这个后面我们到粘度检测器再慢慢聊。 [b]趣谈4光散射检测器好贵呀，我一定要检测绝对分子量吗？[/b]当然不是。每一种检测方式都有其存在的必然。如果您面对的工作是工厂中的QAQC，或者研发中的初步判断和比较，应该传统校正的相对分子量就够了。但是如果您面对的工作是高端的研发，以及需要分子量和其他物理化学性能相关联，那么绝对分子量无疑会更好。最近会写一个番外篇，也是一个预告：[b]为什么凝胶渗透色谱需要光散射技术[/b] 好了，先聊到这里，开学了，家长和孩子们的惊悚大片即将上映，祝大家心平气和！
1、凝胶渗透色谱GPC的概念2、凝胶渗透色谱GPC的原理3、凝胶渗透色谱GPC的用途4、聚合物的各种平均分子量计算 5、凝胶渗透色谱GPC 的仪器组成6、影响凝胶渗透色谱数据置信度的因素分子量的一般定性关系之一： 性质/工艺参数 随MW增加§融化粘度 向上§冲击强度 向上§加工温度 向上§脆性 向上§拉伸能力(纤维) 向下§融流 向下G聚合物的支化度及粘度系数--------------粘度检测器G聚合物的功能基团，如短链支化--------------红外检测器G聚合物的绝对分子量及回转半径------------------激光光散射检测器
凝胶渗透色谱(Gel Permeation Chromatography、GPC)) http://chemlab.gzhu.edu.cn/gzhugfz/fenxishouduan/4.jpg 1964年，由J.C.Moore首先研究成功。不仅可用于小分子物质的分离和鉴定，而且可以用来分析化学性质相同分子体积不同的高分子同系物。(聚合物在分离柱上按分子流体力学体积大小被分离开） 1.基本原理1.1.分离原理：让被测量的高聚物溶液通过一根内装不同孔径的色谱柱，柱中可供分子通行的路径有粒子间的间隙（较大）和粒子内的通孔（较小）。当聚合物溶液流经色谱柱时，较大的分子被排除在粒子的小孔之外，只能从粒子间的间隙通过，速率较快；而较小的分子可以进入粒子中的小孔，通过的速率要慢得多。经过一定长度的色谱柱，分子根据相对分子质量被分开，相对分子质量大的在前面（即淋洗时间短），相对分子质量小的在后面（即淋洗时间长）。自试样进柱到被淋洗出来，所接受到的淋出液总体积称为该试样的淋出体积。 当仪器和实验条件确定后，溶质的淋出体积与其分子量有关，分子量愈大，其淋出体积愈小。（1） 体积排除 （2） 限性扩散 （3） 流动分离 1.2.校正原理：用已知相对分子质量的单分散标准聚合物预先做一条淋洗体积或淋洗时间和相对分子质量对应关系曲线，该线称为“校正曲线”。聚合物中几乎找不到单分散的标准样，一般用窄分布的试样代替。在相同的测试条件下，做一系列的GPC标准谱图，对应不同相对分子质量样品的保留时间，以lgM对t作图，所得曲线即为“校正曲线”。通过校正曲线，就能从GPC谱图上计算各种所需相对分子质量与相对分子质量分布的信息。聚合物中能够制得标准样的聚合物种类并不多，没有标准样的聚合物就不可能有校正曲线，使用GPC方法也不可能得到聚合物的相对分子质量和相对分子质量分布。对于这种可以使用普适校正原理。1.2.1.普适校正原理:由于GPC对聚合物的分离是基于分子流体力学体积，即对于相同的分子流体力学体积，在同一个保留时间流出，即流体力学体积相同。两种柔性链的流体力学体积相同： 1M1=2M2k1M1α1+1=k1M2α2+1 两边取对数：lgk1+(α1+1)lgM1=lgk2+(α2+1)lgM2即如果已知标准样和被测高聚物的k、α值，就可以由已知相对分子质量的标准样品M1标定待测样品的相对分子质量M2。 2.实验部分直接法：在测定淋出液浓度的同时测定其粘度或光散射，从而求出其分子量。间接法：用一组分子量不等的、单分散的试样为标准样品，分别测定它们的淋出体积和分子量，则可确定二者之间的关系。2.1.仪器：GPC仪的组成：泵系统、（自动）进样系统、凝胶色谱柱、检测系统和数据采集与处理系统。1.1.泵系统：包括一个溶剂储存器、一套脱气装置和一个高压泵。它的工作是使流动相（溶剂）以恒定的流速流入色谱柱。泵的工作状况好坏直接影响着最终数据的准确性。越是精密的仪器，要求泵的工作状态越稳定。要求流量的误差应该低于0.01mL/min。 2.1.2.色谱柱：GPC仪分离的核心部件。是在一根不锈钢空心细管中加入孔径不同的微粒作为填料。每根色谱柱都有一定的相对分子质量分离范围和渗透极限，色谱柱有使用的上限和下限。色谱柱的使用上限是当聚合物最小的分子的尺寸比色谱柱中最大的凝胶的尺寸还大，这时高聚物进入不了凝胶颗粒孔径，全部从凝胶颗粒外部流过，这就没有达到分离不同相对分子质量的高聚物的目的。而且还有堵塞凝胶孔的可能，影响色谱柱的分离效果，降低其使用寿命。色谱柱的使用下限就是当聚合物中最大尺寸的分子链比凝胶孔的最小孔径还要小，这时也没有达到分离不同相对分子质量的目的。所以在使用凝胶色谱仪测定相对分子质量时，必须首先选择好与聚合物相对分子质量范围相配的色谱柱。2.1.3.填料（根据所使用的溶剂选择填料，对填料最基本的要求是填料不能被溶剂溶解）：交联聚苯乙烯凝胶（适用于有机溶剂，可耐高温）、交联聚乙酸乙烯酯凝胶（最高100℃，适用于乙醇、丙酮一类极性溶剂）多孔硅球（适用于水和有机溶剂）、多孔玻璃、多孔氧化铝（适用于水和有机溶剂) 2.1.4.柱子：玻璃、不锈钢2.1.5.检测系统：通用型检测器：适用于所有高聚物和有机化合物的检测。有示差折光仪检测器、紫外吸收检测器、粘度检测器。2.1.6.示差折光仪检测器：溶剂的折光指数与被测样品的折光指数有尽可能大的区别。2.1.7.紫外吸收检测器：在溶质的特征吸波长附近溶剂没有强烈的吸收。2.1.8.选择型检测器：适用于对该检测器有特殊响应的高聚物和有机化合物。有紫外、红外、荧光、电导检测器等。2.2.操作：2.2.1.溶剂的选择： 能溶解多种聚合物；不能腐蚀仪器部件；与检测器相匹配。2.2.2.把激光光散射与凝胶色谱仪联用，在得到浓度谱图的同时，还可得到散射光强对淋出体积的谱图，从而计算出分子量分布曲线和整个试样的各种平均分子量2.2.3.激光光散射实验中必须对样品严格除尘，溶液中的灰尘会产生强烈的光散射，严重干扰聚合物溶液光散射的测量。溶液除尘是光散射成败的关键。首先是溶剂除尘，配置测试样品的溶剂应进行精馏，并经过0.2μm超滤膜过滤后方可使用。配好的溶液也要用0.2μm的超滤膜过滤。另外，测试中所用的器械，如：注射器等，使用前要用洗液浸泡，清水强力冲洗
近日，德国postnova分析仪器公司推出了完全自主知识产权的、带温控的四毛细管粘度检测器、以及配套的多检测器GPC软件：NovaSEC，结合原有的单泵、自动进样器、带半导体制冷功能的柱温箱、21个角度或9个角度的激光散射检测器、各型浓度型检测器（示差、紫外、紫外荧光、蒸发光散射等等）、馏分收集器等产品，就组成了SC2000型中温型多检测器凝胶渗透色谱仪 Multi-Detector GPC。目前，已经有价格表了，欢迎广大中国用户来电来函咨询！SC2000型仪器，全套设备，都是postnova公司自己生产的，因此，包括激光散射检测器、粘度检测器、自动进样器、馏分收集器在内的所有硬件，都在NovaSEC软件控制之下，不像有些厂家，自己无法生产泵、自动进样器等设备，还需要跟其它HPLC厂家配套使用，就带来了硬件和软件兼容性问题、软件操作复杂等等的问题。SC2000型GPC，还可以很方便地升级成非对称流动场场流分离仪——客户只需要再购买交叉流泵和样品聚集泵、升级软件到NovaFFF即可。PN3310型四毛细管粘度检测器、SC2000GPC的英文版产品资料，我们会在“最新版产品资料”那个帖子中贴出来，请大家稍等些日子。
[color=red]凝胶[/color][color=red]色谱[/color]-光散射联用法对壳聚糖及其产品的分子质量及分布的测量[table=100%,#ffffff][tr=#f5f5f5][td=1,1,132]【英文篇名】[/td][td]Accurate Measurement of Molecular Mass and Molecular Mass Distribution of Chitosan and Its Products by GPC-Laser Light Scatter Method[/td][/tr][tr=#ffffff][td=1,1,132]【作者中文名】[/td][td]任玲玲 祁欣 莫洪波 [/td][/tr][tr=#f5f5f5][td=1,1,132]【作者英文名】[/td][td]REN Ling-ling1 QI Xin1 MO Hong-bo2（1.National Institute of Metrology Beijing 100013 China 2.Chongqing Institute of Metrology and Quality Inspection Chongqing 400020 China） [/td][/tr][tr=#ffffff][td=1,1,132]【作者单位】[/td][td]中国计量科学研究院 重庆市计量质量检测研究院 [/td][/tr][tr=#f5f5f5][td=1,1,132]【文献出处】[/td][td][url=http://dlib.edu.cnki.net/KNS50/Navi/Bridge.aspx?LinkType=BaseLink&DBCode=cjfd&TableName=cjfdbaseinfo&Field=BaseID&Value=TEST&NaviLink=%e5%88%86%e6%9e%90%e6%b5%8b%e8%af%95%e5%ad%a6%e6%8a%a5]分析测试学报[/url], [url=http://dlib.edu.cnki.net/KNS50/Navi/Bridge.aspx?LinkType=BaseLink&DBCode=cjfd&TableName=cjfdbaseinfo&Field=BaseID&Value=TEST&NaviLink=%e5%88%86%e6%9e%90%e6%b5%8b%e8%af%95%e5%ad%a6%e6%8a%a5]Journal of Instrumental Analysis[/url], [email=TEST@chinajournal.net.cn]编辑部邮箱[/email] [url=http://dlib.edu.cnki.net/KNS50/Navi/Bridge.aspx?LinkType=IssueLink&DBCode=cjfd&TableName=cjfdyearinfo&Field=BaseID*year*issue&Value=TEST*2010*01&NaviLink=%e5%88%86%e6%9e%90%e6%b5%8b%e8%af%95%e5%ad%a6%e6%8a%a5]2010年 01期[/url] 期刊荣誉：中文核心期刊要目总览 ASPT来源刊 CJFD收录刊[/td][/tr][tr=#ffffff][td=1,1,132]【关键词】[/td][td]壳聚糖 术后防粘连隔离膜 分子质量 凝胶色谱 激光光散射 [/td][/tr][tr=#f5f5f5][td=1,1,132]【英文关键词】[/td][td]chitosan the separate membrane to prevent adhesions molecular mass gel permeation chromatography laser light scatter [/td][/tr][tr=#ffffff][td=1,1,132]【摘要】[/td][td]采用国家基准物质氯化钠和甲苯校准了示差折光仪和增强光系统的仪器常数,用超纯水重量法校准了激光光散射仪到示差检测器之间的延时体积,用葡聚糖标准物质对各角度的光强进行归一化处理,研究了[color=red]凝胶[/color][color=red]色谱[/color]-激光光散射联用方法中设备的校准和溯源。上述校准途径使仪器溯源到国际SI单位,从而确保了测量结果准确可靠。采用激光光散射仪测得壳聚糖及其产品术后防粘连隔离膜的光折射增量dn/dc值分别为0.118、0.092 mL/g,[color=red]凝胶[/color][color=red]色谱[/color]-激光光散射联用方法测得壳聚糖及其产品术后防粘连隔离膜的重均分子质量分别为8.897×104、1.168×105g/mol 分子质量分布Mw/Mn分别为1.148±0.026和3.132±0.377。[/td][/tr][tr=#f5f5f5][td=1,1,132]【英文摘要】[/td][td]The differential refraction detector and enhanced optical system of laser scatter instrument were calibrated by the primary standard NaCl and the certified reference material toluene,respectively.The delay volume between enhanced optical system and differential refraction detector was also calibrated by the certified reference material polystyrene.The light strength of different angles was normalized by the certified reference material of glucan.All of these processes ensured the measurement results to be a...[/td][/tr][tr=#ffffff][td=1,1,132]【基金】[/td][td]中国计量科学研究院博士专项基金资助项目(ATGQDB0811)[/td][/tr][tr=#f5f5f5][td=1,1,132]【DOI】[/td][td]CNKI:SUN:TEST.0.2010-01-009[/td][/tr][/table]
[align=center][b]我与凝胶色谱的故事[/b][/align][align=right][/align][b]阴差阳错，走入色谱仪器[/b]2005年2月的一天，春节刚过。我便乘坐T290次火车只身前往首都北京------我谋生的第一份工作地。记得到达北京西站之后，当时还在读研的同学张*亮接待了我。在大运村的学生宿舍度过了一个不眠之夜，叙旧有之，最终的是走上工作的岗位的激动之情难以自控。迈入社会，以后的路怎么走？我是被学校的教导员推荐到北京这家公司的，公司虽然不是很大，是一家中外合资的高新科技企业做HPLC液相色谱仪……我所学的是教育专业，本来的志向是教书育人……懵懵懂懂的就走上了工作岗位。我的第一个手机，还是用我同学的学生证作为担保买了电卡，从此有了属于我的手机号码：15881963923。怎么进的公司，怎么做的自我介绍，怎么办的入职手续……这些我都忘记了。第二天我便在海淀区的某栋大厦上开始了第一份工作。鉴于工作需要，了解公司的工作流程，首先，在每个部门轮岗。期间，在市场部做过英文资料的翻译，在研发部，做原理的认识，学习；在生产部做仪器设备的组装调试。在忙碌了20多天之后，我拿到了人生的第一份工资：820块。[b]初识HPLC液相色谱，GPC凝胶色谱[/b]定岗之后，我成了一名所谓的工程师。其实主要的工作就是组装和测试色谱泵的工作。一开始很不适应，觉得大材小用了。我是抱着教书树人的抱负走出学校，结果却做了一个流水工人……思想波动很大。最后，我决定还是静下心来做事情。年轻人有理想是好的，但是重要的还是用热诚和冲劲去认识和了解你的职业和行业。慢慢地，我认识到什么是HPLC，高效液相的产生以及商业化其实也不过是短短五、六十年的光景，是很有发展前途的行业。[align=center][img=,690,522]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808270945430228_8391_1608025_3.png!w690x522.jpg[/img]心情图[/align][align=left]在两年时间里，了解熟悉了每个组成部分的原理，结构以及仪器的应用发展。逐渐从生产线走向了客户现场，在第一现场往往会遇到意想不到的问题，需要随机应变。[b]蜜蜂八种黄酮检测试验[/b]2007年左右在蜂蜜出口中，加入了八种黄酮含量的测试。当时，日本的标准是全球最高的。中国企业都需要购买进口设备，来满足分析的需求。由于市场的需求，我们开始接触到这个行业。在新郑附近的产蜂蜜基地，我们和当地农户。开始摸索试验。由于实验室条件很差，时间和紧张。我和另外一名同事披着大裳，在严寒的冬天坚持做了4天3夜的试验。终于在凌晨5点左右做出了重复结果。我们小心的呵护着柱温箱，生怕温度变化影响洗脱梯度，我们试过很多种色谱柱，寻找了最佳分离效果；我们不停的变换着流动相比例来寻求最佳效果；我们不辞辛苦去北京林业研究所追寻实验条件。但是，一个行业标准需要付出很大努力……最终，试验结果终于出来了。满心欢喜！就像在学校实验室做出重大发现一样的高兴。虽然，我没有真正意义上的试验导师。但是，最终的结果并不好。由于种种原因，用户最终还是选择了某日本品牌，匹配当时的行业标准HB。[/align][align=center][img=,690,250]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271109336762_3661_1608025_3.jpg!w690x250.jpg[/img] 北京林业研究所 八种黄铜之4，图片来自网络[b]分析与制备中的GPC/SEC凝胶色谱[/b]公司的一楼试验车间，同事们在紧张的等待试验结果。这是某天然提纯项目在我们新的DAC设备上的最后测试。结果试验成功了。大家欢欣鼓舞，公司在天然多糖和蛋白提纯设备上迈出了一大步，订单纷纷踏来。对于，我们来说，加班也不可避免。其中，我比较感兴趣的是在每一步除试，放大，中试，再放大，分离制备产品，收集前后，都要测试纯度。这就要用到凝胶色谱。这也是我第一次接触到这个名词。从HPLC到PHPLC再到GPC，这是一个顺其自然的过程。我们现有的设备也很简单。自己搭了一台泵，一个手动7725i进样阀，一个简陋的柱温箱，一个多糖分离的色谱柱，和一个简单的折光分光检测器。软件是在某软件的基础上改进的。有了这些，简简单单的组成了一套设备。我们在这台设备上经历了很多，有成功也有失败……[/align][align=center][img=,449,605]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271056049009_2558_1608025_3.jpg!w449x605.jpg[/img][/align][align=left][b]驰骋在凝胶色谱路上[/b]1，分离净化凝胶色谱随着时间的推移，我从最传统的GPC色谱接触，只能做简单的相对分子量QC开始。慢慢地读了一些关于色谱以及凝胶色谱的一些书籍。这些特别感谢化学工业出版社出版的一系列色谱技术丛书，一共13本。我能接触到的只有4-5本。不过就是这些让我学到了很多。在08年有一次机会。我专门开始做GPC维修工作。对凝胶色谱有了进一步认识和提高。我主要负责两种设备GPC设备。一种是分离净化，应用于样品的前处理。样品前处理是一件非常重要，同时也非常复杂繁琐的一件事情。处理不好往往对后续试验造成影响，要么对分析仪器造成影响，要么对试验结果产生影响。甚至产生假的数据，假阳性或者假阴性。GPC尤其对痕量微量检测有很大帮助，在农残方面比较有名的秦皇岛商检单位就用到了这一分离净化技术。做维修应用等技术工作往往都是枯燥的无味的，来不得半点虚假。如果做不到位，仪器不会工作，数据不会撒谎。这些要求我一定要细心和谨慎判断问题以及解决问题。GPC分离净化往往涉及到回收率问题。而回收率又和分离色谱柱，进样系统，回收系统有很大关系。记得有一个用户，因为氮气量不足导致了回收浓缩设备问题，也破费了一些周折，才得以解决：原因是连接氮气的管路和氮气调节阀之间微漏造成了浓缩体积增大，回收时间增加温度过高而影响了回收率。在08-09年的三聚氰胺测试中，分离GPC扮演了非常重要的角色。面粉中的13种添加物之一测试 馏分收集及浓缩装置2，分析测试凝胶色谱另一种就是我们更加熟悉的GPC/SEC体积排阻色谱。它是化学物理材料合成以及天然高分子生物分子结构研究的利器。目前商品化的主要有三种类型。第一种是我前面提到的传统校正分子量，结构简单。但是越来越有数据不足，信息少的缺点；第二种是带有在线黏度检测器的凝胶色谱，具有较好的分析机构构型的功能；第三种就是在前面两种检测器基础上添加了光散射检测器。在原理上解决了分子量准确性的问题，而且操作越来越方便。光散射的加入，使色谱有了飞跃发展。光散射的种类也非常多。有信噪比准确性能高的小角度光散射，也有应用于药物研究的多角度光散射。得到的有用信息更多更详实……[/align][align=left][img=,690,245]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271108346983_8221_1608025_3.jpg!w690x245.jpg[/img]市场上的GPC/SEC产品，图片来源于网络多检测器联用越来越多的被应用到实验室中，对于我来说需要了解的东西也很多。目前，正在做的是HPLC/GPC/SEC与DLS联用的试验连接。[b]努力前行，做一名合格的小学生[/b]我与凝胶色谱相识相处也有十几年的光景。这些年来，我越来越发现自己的只是储备不够，需要加强学习。在色谱行业从业者中，我不过是一名小学生，是GPC/SEC激励着我，给我学习的动力，敢于学习新知识畅游于书的海洋；给我游历祖国的机会，每次出差在完成工作之余，我都在感慨中华地大物博；给我结实新朋友的契机，工作上遇到的每一位都是我的老师……是它陪伴我，虽然仪器不会说话，它却默默地陪我度过了最美的青春十年。[/align][align=center][img=,690,401]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/08/201808271110435272_9524_1608025_3.jpg!w690x401.jpg[/img][/align][align=center]祖国大好河山[/align]说到色谱感谢崔*臣，沈*刚两位老师把我领进门，说道凝胶色谱感谢王*、顾*粮两位前辈的指导，说道光散射感谢*辉博士的指导学习……还有我最好的行业伙伴们庞*辉，忘不了学习英语时的青涩，忘不了关于结构讨论的激烈，忘不了试验成功的喜悦……最后感谢仪器信息网有这么一次活动，可以让我静下心来，回顾过去的自己。我只不过是最普通的”三无人员”的一个，努力做一名合格的小学生，道阻且长，不畏风雨；道阻且跻，一往直前；道阻且右，淡然处之……
1、凝胶色谱仪有哪几部分组成？2、凝胶色谱仪采用什么样的检测器？3、凝胶色谱仪的基本操作跟普通液相的区别在哪里？4、凝胶色谱仪跟液相色谱仪的不同点在哪里？谢谢大家，今天刚接触到这个东西，老外说要用凝胶色谱，所以就过来问问请各位帮个忙阿！！
最近有个实验要用到凝胶色谱仪净化样品，可我公司没有，对这个也不太懂。请问有没有其他可替代的办法？能否买方法中要求的凝胶色谱柱，接到液相上分离？样品基质中有大量高分子脂类，试过SPE小柱，效果不佳，干扰太大。或者有没有类似SPE小柱那样的凝胶色谱小柱，可以起到分离大分子物质的东西？
质检总局近日发布公告，新版的《液相色谱仪》、《离子色谱仪》、《凝胶色谱仪》计量检定规程正式发布。3个新规程将于今年8月14日起实施，实施后将分别替代原有的3个旧规程。 全国物理化学计量技术委员会的何雅娟介绍，色谱仪的应用遍及工矿生产、环境保护、食品安全、医疗卫生、科学研究等诸多领域。为了仪器检测的准确可靠，仪器本身首先要测量准确，这就离不开对其进行计量检定。液相色谱仪的计量检定规程距离上次修订已经十多年;离子色谱仪和凝胶色谱仪的检定规程自实施至今，已经20年没有修订。随着科学的发展，仪器科学不断进步，运用最新检测原理的检测器不断被开发应用，色谱仪的检测范围不断扩大，检测精度不断提高。对这些科学仪器进行更准确、更全面、更科学地计量检定，确保其本身的量值准确，已经成为一项迫在眉睫的任务。 据介绍，本次修订，对近年来新出现并广泛运用的新设备提出了计量检定要求。例如，在液相色谱仪中，蒸发光检测器是近年来广泛运用的新型检测器。尤其是在我国药典将抗生素类药物的检测方法定为蒸发光散射法后，蒸发光检测器在制药和药检行业应用尤为广泛。制定旧版《液相色谱仪》计量检定规程时，还没有成熟的条件将蒸发光散射检测器的检定内容纳入规程中，而新规程的一项重要内容就是增加了蒸发光散射检测器的检定内容;在《离子色谱仪》检定规程的修订中，特意增加了紫外可见检测器和电化学检测器的相关内容。正是有了这些检测器的不断发展，离子色谱仪的检测范围才由最初只能检测部分离子强度高的离子，到现在还能检测I-、CN-、CrO4-、有机酸和糖类等弱离子。 旧版规程实施已近20年，很多技术指标已经与现在仪器发展不相适应。调整有关技术指标，成为本次规程修订的重要内容。例如，随着科技的发展，凝胶色谱仪的示差检测器和紫外检测器的信号稳定性和灵敏度都大大提升，原检定规程中对检测器基线的技术指标已大大落后于实际水平。修订后的检定规程对检测器基线检测结果进行了相关修订，使这些技术指标更加符合新版国际标准的要求。 检定色谱仪的主要标准器是各种标准物质，不同标准物质的选择可能会影响检定工作的效率和准确性，本次修订还对检定用标准物质进行了调整。2002年版的《液相色谱仪》检定规程中，荧光检测器检定用标准物质为硫酸奎宁/高氯酸水溶液。由于各种原因，检定中经常出现信号不理想等情况，导致检定不能顺利进行。本次修订将其改为萘/甲醇溶液，避免了上述问题的出现，同时还提高了检定效率;在1993年版的《凝胶色谱仪》检定规程中，对标准物质只是规定“窄分布聚苯乙烯标准物质”，但这样的规定导致对以水作为流动项的凝胶色谱仪无法进行检定。修订后的规程对标准物质的规定进行了补充，增加了葡聚糖标准物质，使检定规程可用于检定有机流动项和水流动项的凝胶色谱仪。==================================================众所周知，我们的《气相色谱仪检定规程》 JJG 700-1999，到现在也出了15年了。很多方面的内容都不适合现在的仪器了，比如标准里基本上只有填充柱，检测器噪声、信号的单位使用电流A很难计算（大部分现代的仪器是电压mV或者uV，也有不少是Hz这类没法换算成电流的单位）还有没有关于DID、PID这类最近才比较流行的新型检测器的指标，为嘛还不赶快也来更新一下呢？
问一下各位大佬，在看高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url] 多角度激光光散射仪的操作规程时发现，使用时要设置DNN/DC，之后又要测算DN/DC，这个值不是设置好的值么，DN/DC是什么意思呢？
我所在单位准备购进一部多角度激光光散射仪，但是本人在这方面的知识十分有限。希望各位老师推荐一些资料；有什么好的建议和经验也可以介绍一二，以帮助在下尽快入门！还望不吝赐教!
多角度激光光散射(绝对分子量测定)仪谁用过？用的如何？
凝胶色谱仪检定方法本规程适用于新制造、使用中和修理后的凝胶色谱仪的检定。请到资料中心下载:http://www.instrument.com.cn/download/shtml/012546.shtml
[font=宋体]三十多年来，凝胶渗透色谱的理论、实验技术和仪器的性能等方面有了突飞猛进的发展。尤其是随着新型柱填料的诞生、高效填充柱的出现[/font]([font=宋体]目前其理论塔板数已超过[/font]10000/[font=宋体]米[/font])[font=宋体]以及计算机的普及，凝胶渗透色谱在工业、农业、医药、卫生、国防、宇航以及日常生活的各个领域得到了广泛的应用。特别是近年来，随着各种高分子材料的问世，人们对高分子科学的不断探索，高聚物的分子量及其分布的测定显得尤为重要，成为科研和生产中不可缺少的测试项目之一。而论坛关于凝胶渗透色谱的版面也是一波三折，你是否还在为凝胶渗透色谱没有一个好的讨论平台而发愁呢？想讨论就来[url=http://bbs.instrument.com.cn/list.asp?ForumID=602][color=#ff483f][size=5]其他色谱仪综合讨论[/size][/color][/url]吧！！！[/font]
凝胶渗透色谱净化系统和凝胶渗透色谱仪有什么区别？？请指点！！
做净化食用油中苯并芘，看文献有用GPC的，《凝胶净化- 高效液相色谱法测定油脂中苯并( a)芘》，用的GPC是J2sc ientific AccuprepTM 凝胶渗透色谱仪, 色谱柱填料B i0 -Beads s- x3;这个怎么用啊？填料自己做？填料自己买？怎么回收重复使用啊？我们实验室有一天Biologic-LP的层析仪，这个可以用吗？
[color=#00FFFF][color=#DC143C]各位请帮忙，问一下单独做GPC和GPC与激光光散射联用的区别是什么，单独用激光光散射又与以上有什么区别呢[/color][/color]
凝胶渗透色谱仪，哪个厂家好？
大家在使用凝胶渗透色谱仪以时日常维护都有那些？
我们有一台凝胶色谱仪，配有水性用的色谱柱，Varian 30GV 460PLM(300*7.5mm)哪位朋友知道，我们是否可以用PEG或PPG作质量定标用的标准物？这种标准物质在哪可以买到？谢谢
各位兄台：我是GZ某高校实验室的成员，因为前一段时间搬迁，将设备都卸块了，现如今要装起来，发现后面的线路连接有几个插口找不到北了，有没有哪位可以贡献一下经验，或者有图有真相？凝胶色谱仪 安捷伦1100；高效液相色谱仪 安捷伦1100；大恩不言谢啊！！！ 小王
[size=3][b]凝胶色谱仪标准操作规程(SOP)[/b]背景知识：凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。[/size]
[size=3]我们公司计划采购一台“凝胶渗透色谱仪”，主要检测的产品为粉末涂料用聚酯树脂，分子量在2000-8000之间，可能存一些小分子物质，该产品常温下不溶于四氢呋喃，加热溶解于甲酰胺和二氯甲烷。请问高手，对网上各种各样的仪器，怎么进行筛选，才能找到适合于我们应用的“凝胶渗透色谱仪”啊？[/size]
背景知识：凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。一、基本理论（一）分子筛效益 一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时，各分子在柱内同时进行着两种不同的运动：垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大，不易进入凝胶颗粒的微孔，而只能分布颗粒之间，所以在洗脱时向下移动的速度较快。小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外，还可以进入凝胶颗粒的微孔中，即进入凝胶相内，在向下移动的过程中，从一个凝胶内扩散到颗粒间隙后再进入另一凝胶颗粒，如此不断地进入和扩散，小分子物质的下移速度落后于大分子物质，从而使样品中分子大的先流出色谱柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出，这种现象叫分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。各种分子筛的孔隙大小分布有一定范围，有最大极限和最小极限。分子直径比凝胶最大孔隙直径大的，就会全部被排阻在凝胶颗粒之外，这种情况叫全排阻。两种全排阻的分子即使大小不同，也不能有分离效果。直径比凝胶最小孔直径小的分子能进入凝胶的全部孔隙。如果两种分子都能全部进入凝胶孔隙，即使它们的大小有差别，也不会有好的分离效果。因此，一定的分子筛有它一定的使用范围。综上所述，在凝胶色谱中会有三种情况，一是分子很小，能进入分子筛全部的内孔隙；二是分子很大，完全不能进入凝胶的任何内孔隙；三是分子大小适中，能进入凝胶的内孔隙中孔径大小相应的部分。大、中、小三类分子彼此间较易分开，但每种凝胶分离范围之外的分子，在不改变凝胶种类的情况下是很难分离的。对于分子大小不同，但同属于凝胶分离范围内各种分子，在凝胶床中的分布情况是不同的：分子较大的只能进入孔径较大的那一部分凝胶孔隙内，而分子的可进入较多的凝胶颗粒内，这样分子较大的在凝胶床内移动距离较短，分子较小的移动距离较长。于是分子较大的先通过凝胶床而分子较小的后通过凝胶床，这样就利用分子筛可将分子量不同的物质分离。另外，凝胶本身具有三维网状结构，大的分子在通过这种网状结构上的孔隙时阻力较大，小分子通过时阻力较小。分子量大小不同的多种成份在通过凝胶床时，按照分子量大小“排队，凝胶表现分子筛效应。（二）色谱柱的重要参数⑴柱体积：柱体积是指凝胶装柱后，从柱的底板到凝胶沉积表面的体积。在色谱柱中充满凝胶的部分称为凝胶床，因引柱体积又称“床”体积，常用Vt 表示。⑵外水体积：色谱柱内凝胶颗粒间隙，这部分体积称外水体积，亦称间隙体积，常用Vo表示。⑶内水体积：因为凝胶为三维网状结构，颗粒内部仍有空间，液体可进入颗粒内部，这就分间隙的总和为内水体积，又称定相体积，常用Vi表示。 不包括固体支持物的体积（Vg）。⑷峰洗脱体积：是指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液有体积，常用Ve 表示。当使用样品的体积很少时，（与洗脱体积比较可以忽略不计），在洗脱图中，从加样到峰顶位置所用洗脱液体积为Ve。 当样品体积与洗脱体积比较不能忽略时，洗脱体积计算可以从样品体积的一半到峰顶位置。当样品很大时，洗脱体积计算可以从应用样品开始到洗脱峰升高的弯曲点（或半高处）。二、凝胶的种类及性质 （一）交联葡聚糖凝胶（Sephadex）⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephndex，不同规格型号的葡聚糖用英文字母G表示，G后面的阿拉伯数为凝胶得水值的10倍。例如，G-25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克，同样G-200克每克千胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的种类有G-10，G-15，G-25，G-50，G-75，G-100，G-150，和G-200。因此，“G”反映，凝胶的交联程度，膨胀程度及分部范围。⑵Sephadex LH-20，是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物， 能溶于水及亲脂溶剂，用于分离不溶于水的物质。（二）琼脂糖凝胶： 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构，网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下，它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化，也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。（三）聚丙烯酰胺凝胶： 是一种人工合成凝胶，是以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经干燥粉碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶。交联剂越多，孔隙越小。聚丙烯酰胺凝胶的商品为生物胶－P （Bio-Gel P），由美国Bio-Rod厂生产，型号很多，从P-2至P-300共10种，P 后面的数字再乘1000就相当于该凝胶的排阻限度。（四）聚苯乙烯凝胶商品为Styrogel ， 具有大网孔结构， 可用于分离分子量1600到40，000，000的生物大分子，适用于有机多聚物，分子量测定和脂溶性天然物的分级，凝胶机械强度好，洗脱剂可用甲基亚砜。三、实验技术（一）层析柱 层析柱是凝胶层析技术中的主体，一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度，样品用量大，可加大柱的直径，一般制备用凝胶柱，直径大于2厘米，但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外， 直径加大，洗脱液体体积增大，样品稀释度大。分离度取决于柱高，为分离不同组分，凝胶柱床必须有适宜的高度，分离度与柱高的平方根相关，但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞，一般不超过1米。分族分离时用短柱，一般凝胶柱长20-30厘米，柱高与直径的比较5:1─10:1，凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1，常用凝胶柱有50×25厘米，10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小，如果支掌滤板下的死体积大，被分离组分之间重新混合的可能性就大，其结果是影响洗脱峰形，出现拖尾出象，降低分辩力。在精确分离时，死体积不能超过总床体积的1/1000。（二）凝胶的选择根据所需凝胶体积，估计所需干胶的量。 一般葡聚糖凝胶吸水后的凝胶体积约为其吸水量的2倍，例如Sephadex G-20的吸水量为20，1 克Sephadex G─200吸水后形成的凝胶体积约40ml。凝胶的粒度也可影响层析分离效果。粒度细胞分离效果好，但阻力大，流速慢。一般实验室分离蛋白质采用100-200号筛目的的Sephadex G-200效果好， 脱盐用Sephadex G-25、G-50，用粗粒，短柱，流速快。（三）凝胶的制备商品凝胶是干燥的颗粒使用前需直接在欲使用的洗脱液中膨胀。为了加速膨胀，可用加热法，即在沸水浴中将湿凝胶逐渐升温至近沸，这样可大大中速膨胀，通常在1-2小时内即可完成。特别是在使用软胶时， 自然膨胀需24小时至数天，而用加热法在几小时内就可完成。这种方法不但节约时间，而且还可消毒，除去凝胶中污染的细菌和排除胶内的空气。（四）样品溶液的处理 样品溶液如有沉淀应过滤或离心除去，如含脂类可高速离心或通过Sephadex G-15短柱除去。样品的粘度不可大，含蛋白为超过4％，粘度高影响分离效果。上柱样品液的体积根据凝胶床体积的分离要求确定。分离蛋白质样品的体积为凝胶床的1-4％（一般约0.5-2ml），进行分族分离时样品液可为凝胶床的10％，在蛋白质溶液除盐时，样品可达凝胶床的20-30％。 分级分离样品体积要小，使样品层尽可能窄，洗脱出的峰形较好。（五）防止微生物的污染 交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物质，防止微生物的生长，在凝胶层析中十分重要，常用的抑菌剂有:⑴叠氨钠（NaN3）在凝胶层析中只要用0.02％叠氮钠已足够防止微生物的生长，叠氮钠易溶一水，在20℃时约为40％；它不与蛋白质或碳水化合物相互作用，因此叠氮钠不影响抗体活力；不会改变蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可干扰荧光标记蛋白质。⑵可乐酮在凝胶层析中使用浓度为0.01-0.02％。在微酸性溶液中它的杀菌效果最佳，在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引起分解而失效。⑶乙基汞代巯基水杨酸钠 在凝胶层析中作为抑菌剂使用浓度为0.05-0. 01％。在微酸性溶液中最为有效。重金属离子可使乙基代巯基的物质结合，因而包含疏基的蛋白质可在不同程度上降低它的抑菌效果。⑷苯基汞代盐 在凝胶层析中使用浓度为0.001-0.01％。在微碱性溶液中抑效果最佳，长时间放置时可与卤素、硝酸根离子作用而产生沉淀；还原剂可引起此化合物分解；含疏基的物质亦可降低或抑制它的抑菌作用。原理：选填项目主体内容：一、 实验室要求：凝胶色谱仪所使用流动相多为有毒的有机性试剂，实验室要保持良好的通风条件，试剂需专柜保存。实验室温度需保持在10℃~35℃，湿度小于80%。周围无腐蚀性气体，无尘土飞扬。二、实验台要求：实验台要求通水电良好，电源为220V±20 V，电源频率为50Hz±0.5 Hz，无剧烈震动。三、仪器摆放要求：仪器放在无阳光直射的地方，不要放在靠门、窗的地方，以减少空气、阳光对仪器带来的影响。四、仪器操作规范： 样品经充分溶解后，再用过滤器过滤后才可使用；流动相也需现配后，再过滤使用；所有选用试剂均需选用色谱纯试剂。新色谱柱初次使用流速设置为0.2ml/min，冲洗1小时后再接检测器
【序号】：1【作者】： 【题名】：凝胶渗透色谱仪【期刊】：【年、卷、期、起止页码】：【全文链接】：http://www.docin.com/p-250695218.html【序号】：2【作者】： 【题名】：多角度激光光散射仪与凝胶渗透色谱联用技术【期刊】：【年、卷、期、起止页码】：【全文链接】：https://wenku.baidu.com/view/e398c81908a1284ac9504328.html
多功能凝胶色谱仪（GPC）：在普通GPC仪中连上分子量检测器粘度（VIS）和光散色（LS），除了能测定分子量及分子量分布外，还能得到其它参数！我们公司没有，不过我们的产品产不多每半年去测一次！简介见附件：
凝胶色谱的资料又积攒了不少，接力前辈，汇总一下，方便查找。要注意帖子的回复，里面也有宝藏哦~~【原创】凝胶色谱的应用 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061228/685978/【资料】GPC分析的聚合物可以选择的良溶剂方案 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101214/2999859/【资料】最近凝胶色谱相关的文献资料http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100401/2476606/ 【资料】GPC高级课程培训－柱选择 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110519/3315288/【资料】《凝胶渗透色谱操作手册》北京大学化学院 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101228/3045365/【分享】凝胶色谱的讲义 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101106/2908677/【资料】凝胶色谱柱操作 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101105/2907744/【分享】凝胶色谱仪标准操作规程(SOP) http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20101012/2855479/【原创】多功能凝胶色谱仪（GPC）测聚合物分子量分布 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100510/2546330/【资料】凝胶色谱法的基本理论 http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100406/2483413/下面是前辈整理的资料：2010.4【资料】凝胶色谱 和 超临界流体色谱 资料汇总http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20100411/2493256/2006年【公告】凝胶色谱版的知识点汇总！ http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20061215/669019/
高分子工业材料及生物高分子分析是近年来新兴的课题。凝胶色谱是分离分析高分子组成及鉴定其性能的最好方法。高分子材料中填充各种助剂、乳化剂、分散剂等物的分离，色谱技术也独具特点。 ①控制高分子产品质量 在生产工艺中，可利用凝胶色谱测定聚合物小分子杂质。如用凝胶色谱测定环氧树脂中未聚合的双酚A，用C18柱分离小分子环氧化合物，小分子聚苯乙烯或不能成膜的聚脂等，用以鉴定聚合物的质量。 ②测定聚合物的分子量分布宽度 分子量大小和分子量分布宽度是衡量聚合物质量的一种重要指标，用凝胶色谱可以测定。 ③高温凝胶色谱测聚合物的老化、降解现象及分级。如测定聚乙烯分子量应为四万左右，通过分析可将分子量1000以下的聚乙烯蜡分开。还可用来观察高密度聚乙烯的氧化过程，观察聚苯乙烯、环氧树脂、聚磺酸脂、尼龙及聚醚聚砜等的降解情况。 ④测定高分子材料的适用性 日常食品的高分子材料包装的很多，如果测定食品中有高分子材料，则说明这种高分子材料不适于做食品和包装。
我要推广仪器
下载APP
仪器导购周刊第九期—激光粒度仪
光散射40年
Easy选型-离子色谱仪IC
Easy选型GC气相色谱仪
原子荧光光谱仪导购专刊
锂电检测技术系列专题之成分分析
瑞士万通离子色谱25周年庆典专题
气相色谱仪器导购专刊
聚焦2012年度国家重大科学仪器设备开发专项
帕纳科革命性新品Zetium X射线荧光仪