液相色谱能检测蛋白分子量

借助高效液相色谱法测定乳制品中乳铁蛋白。方法：先通过额外加入的二价铁离子使乳铁蛋白的构型更利于沉淀。然后用体积分数60% 乙醇溶液沉淀蛋白除去糖分，再用醋酸盐缓冲液提取乳铁蛋白并分离掉酪蛋白，最后用高效液相色谱检测，采用LiChrosorb RP-C18 色谱柱，在质量浓度0.1g/100mL 的三氟乙酸溶液协助下，甲醇与水线性梯度洗脱。结果：乳铁蛋白的线性范围是0.4～2mg/mL(R2=0.9980)，平均回收率95.4%。结论：此方法可以用于乳制品中乳铁蛋白的测定。

请问用高效液相色谱法检测牛血清白蛋白标准品（BSA），用什么柱子比较好？

FPLC简介 FPLC全称为快速蛋白液相色谱（Fast protein liquid chromatography），其原理与高效液相色谱理论类似，是由经典的液体柱层析引入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]理论，并且对相体进行了改革，配用高压输液泵，采用高灵敏检测器、梯度洗脱装置、自动收集装置和微机等发展起来的现代液相色谱。FPLC是专门用来分离蛋白质、多肽及多核苷酸的系统，是HPLC近年来的一项重要革新，它不但保持了HPLC的快速、高分辨率等特性，而且还具有柱容量大、回收效率高及不易使生物大分子失活等特性。因此在近年来在分离蛋白质、多肽及寡核苷酸等方面得到了广泛应用随着HPLC的发展，出现了两种新型填料：薄壳型填料和双扩散灌流型填料，它们对大分子物质的分离具有独特的优越性，从而使FPLC的应用领域得以拓展。其可应用于蛋白、有机化合物的分离纯化，能定量测定蛋白的含量和和确定蛋白的分子量，因此可应用于生物学领域和化学领域的研究。 The Pharmacia fast protein liquid chromatography (FPLC) system is used for methods developmnent and the purification of large quantities of various biomolecules (i.e., protein and DNA). The system includes two pumps capable of continuous flow to the purification columns (vary by user) , a peristaltic pump may be used for column equilibration, a UV monitor to detect biomolecules on the column, a mixer to produce elution gradients, motor valves may be used to assist with sample injection, column selection or flow reversal, and a controller with an integration function for computerized operation of various programs directing flow to the pumps and controlling the motor valves. A chart recorder is the typical mode of 'run' documentation.

[color=#444444]想用高效液相色谱表征蛋白质分子交联前后分子量的变化。[/color][color=#444444] 蛋白质的分子量在2.5-10万之间，资料上建议用C4的柱子。[/color][color=#444444] 不知道流动相和PH值怎么选择。[/color][color=#444444] 第一次用HPLC，急求大神们的帮助！！！！！！！！！！！！！[/color]

分子排阻高效液相色谱法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白纯度_王婉如

[color=#444444]想用高效液相色谱表征蛋白质分子交联前后分子量的变化。[/color][color=#444444] 蛋白质的分子量在2.5-10万之间，资料上建议用C4的柱子。[/color][color=#444444] 不知道流动相和PH值怎么选择。[/color][color=#444444] 第一次用HPLC，急求大神们的帮助！！！！[/color]

我准备用高效液相色谱测酶水解蛋白的肽的分子量（小于1万道尔顿），应该用凝胶柱吧，不知哪种型号的好些呢？洗脱液用什么呢？可以用蒸馏水么？另外如果是液相的半制备，制备量大概是多少呢？

AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤很简单的，比较适合初学者。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=113913]AKATA制备型液相色谱蛋白分析仪纯化蛋白步骤[/url]

[B][size=4]RT,我公司想利用液相检测产品中分子量的分布情况,请教高手用液相色谱检测低分子量聚合物(分子量大约在500-4000),检测器能准确分离吗?分离效果如何?新手上路高手多多指教。PS:我公司原先已买过一台液相色谱，由于仪器比较陈旧且我公司产品分子量偏低,检测的结果一直不理想。这次想买台新仪器,来解决检测分子量4000以内产品检测的问题。如有仪器设备厂商能满足我公司检测需求，可发e-mail和我联系.[/size][/B]

那位老师有：液相色谱做麦谷蛋白的方法。麻烦发到我油箱：liue-mailbox@163.com

我现在是一名研二学生，课题是从乳清蛋白中分离α-乳白蛋白，目前要用高效液相色谱做出α-乳白蛋白的标准曲线，实验室用的是型号POLARIS-211的液相色谱仪，目前出峰的拖尾峰明显，停留时间也不稳定，有用过这个仪器的朋友吗，希望得到大家的帮助http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif

通过对比试验研究洗脱时间、柱温、流速、洗脱梯度等对反相高效液相色谱法的影响，确立适宜小麦胚乳醇溶蛋白（Gliadin）反相高效液相色谱法（RP-HPLC）分离的最佳实验方法为：在1.0mL/min的流速、60℃的柱温条件下对上样醇溶蛋白进行洗脱、洗脱梯度为流动相B的体积比在55min内由21%升至48%（V/V），最后通过210nm紫外光检测洗脱组分的吸收值。

各位大侠，给支个招，哪里可以既做高效液相又蛋白测序啊？我的样品现在是两个成分混在一起，分子量又都很小，我想测序，可最好是先用HPLC分开再来测，哪家公司或者研究所提供这方面的服务啊？

[font=黑体, SimHei][size=16px]点击链接查看更多：[url]https://www.woyaoce.cn/service/info-12978.html[/url]高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法(High Performance Liquid Chromatography \ HPLC)又称“高压[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]”、“高速[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]”、“高分离度[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]”、“近代柱色谱”等。高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术应用。[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]配有紫外检测器、二极管阵列检测器、示差折光检测器、蒸发光检测器[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]本平台合作项目[/size][/font][font=黑体, SimHei][size=16px]细胞药筛、动物建模、病理检测、蛋白组学、代谢组学、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、MTT检测、免疫荧光检测、蛋白纯化技术服务、动物模型构建服务、分子量分布检测、磷脂酰丝胆碱检测、虾青素检测、植物激素检测、短链脂肪酸检测等[/size][/font]

普通的液相色谱柱子C18 5微米，用来分离蛋白质会怎么样？ 现有一个分子量7万左右的蛋白，我想知道普通的HPLC C18 色谱柱（5微米，非蛋白专用柱），因为没钱买蛋白专用柱。 如果将含有此蛋白的溶液进入色谱柱。结果会是怎样的：1.蛋白会很快流出色谱柱？2.还是会留在色谱柱前面？3.一般的蛋白质在5%的甲醇中会不会变性？4.堵柱子的可能性有多大？

各位大侠，请教一个问题，用液相色谱可以检测完整的BSA（MW=66KD-68KD）么？如果BSA上在交联一些小分子呢？也就是分子量在增加3000左右，可以继续检测出来么？如果有，使用什么色谱柱呢。具体的文献可以发给我么？谢谢

液相色谱柱决定最终分离效果，所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。 首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱，正相有SI等，反相有C18等。正相主要分离极性物质，反相主要分离非极性物质，氨基柱等主要分离二者之间的。 明确了色谱柱大概功能之后，确认下自己样品信息，基本就有点眉目了，方向对了，剩下的事情就是细节了如：键合相、粒径、孔径、碳载量等 键合相：确定了正反相后基本就简单了，正相很简单，我们重点讨论下反相，C18主要分离非极性和弱极性物质，因为是键合硅胶，所以C18也分好几种有常规的如C18-A，耐纯水的OL Apple C18-AQ、耐酸碱的OL Apple C18-EX等，如果发现C18保留很弱，调整流动相也不行，这个时候可以考虑C8甚至C4等。 粒径：色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。目前来说亚2um填料或者2UM核壳填料是很理想的模型，基本具备“三高”特征尤其是高速，线速度不在影响分离度，不过附带的缺点就是高压，要升级相应的硬件，成本高昂，需要谨慎考虑。 5um填料最普遍，目前来说完全可以胜任各种日常检测，即使有特殊要求，3um色谱填料基本上也能全覆盖，不过该模型下线速度和分离度是成反比的。 孔径：目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。开孔的填料多了个类似分子筛功能，所以选择孔径一定要关注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔径都很小，可以缩短样品路径。所以国际上还有无孔硅胶柱子，也很适合蛋白分离，彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。 碳载量：快速柱碳载量很低，如A家等，省时间，省溶剂，但分析部分复杂样品如中药等有点力不从心，这个时候可以考虑英国OL Apple色谱柱，碳载量15~23%，碳载量数值就像河床的水草，越高代表越密集，保留样品能力越强，越有可能分离开难分离物质。 以上信息仅供参考，个人能力有限，欢迎大伙补充！

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]测试蛋白分子量就是凝胶渗透色谱吗？色谱柱和流动相什么要求？需要什么检测器？！

请问　用液相色谱测分子量的时候　　检测器是示差检测器　　　　　出峰时间反映分子量　　　　那出峰的峰面积比值是否反映各个组分的含量呢谢谢哦～～～～

用液相色谱测分子量的时候　　检测器是示差检测器　　　　出峰时间对应分子量　　　　出峰的峰面积不反映各个组分的含量　我知道了那如果换成紫外检测器呢　　　那出峰的峰面积大小与各个组分的含量　是否有关呢？？？

液质联用仪有国家标准，但没有液相色谱仪的检测标准，我能参考液质的前处理和液相色谱仪的条件，用液相色谱仪检测吗？

现在在做液相分析方法的优化。。。两个小分子蛋白的分子量相差不多，现在用分别用过C4和C18的柱子试过。。。流动相分别是0.1%三氟乙酸水和0.1%三氟乙酸乙腈，利用梯度洗脱。。。现在两个峰的出峰时间只相差零点几秒。。我有放缓冲洗的梯度、改变流速。。。希望大侠给点意见。。。不胜感激呢。。。。http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09509.gif

液相色谱荧光检测器测荧光增白剂113，走同样的标液，不间断地走了几天，发现荧光增白剂113的峰型开始两天是五指峰的感觉，今天居然变成一个很漂亮的单峰，保留时间没什么区别，就是峰型变了，区别就在流动相没变，请大神们帮忙分析分析。

如题，我想用C8的色谱柱跑液相色谱看一下发酵液中的蛋白质变化，但是发酵液里面较复杂，如何前处理纯化蛋白质，来达到能够上机的要求？ 如果用三氯乙酸或有机相使蛋白质变性沉淀，弃去上清，还能否将沉淀溶解？我看到这类方法多用在电泳上面，那液相色谱该用上面方法呢？期待高手指点~

日本JASCO高效液相色谱仪(HPLC)包括LC-2000PLOS PU-2028 UV-2075，由大连华洋科学仪器有限公司代理出售，听说能神奇地测出样品分子量的大小.请各位大虾指点一二.

NY/T 4439-2023 奶及奶制品中乳铁蛋白的测定 高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]法

T/BPCT 001-2023牛乳及制品中A2 β-酪蛋白含量的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]质谱法

在所有色谱技术中，液相色谱法（liquid chromatography，LC）是最早（1903年）发明的，但其初期发展比较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。到了20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。　　气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。现在，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。 高效液相色谱的类型　　广义地讲，固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相，也应归于液相色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法。　　通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。其实，有些液相色谱方法并不能简单地归于这四类。表8-1列举了一些液相色谱方法。按分离机理，有的相同或部分重叠。但这些方法或是在应用对象上有独特之处，或是在分离过程上有所不同，通常被赋予了比较固定的名称。表8-1HPLC按分离机理的分类类 型主要分离机理主要分析对象或应用领域吸附色谱吸附能，氢键异构体分离、族分离，制备分配色谱疏水分配作用各种有机化合物的分离、分析与制备凝胶色谱溶质分子大小高分子分离，分子量及其分布的测定离子交换色谱库仑力无机离子、有机离子分析离子排斥色谱Donnan膜平衡有机酸、氨基酸、醇、醛分析离子对色谱疏水分配作用离子性物质分析疏水作用色谱疏水分配作用蛋白质分离与纯化手性色谱立体效应手性异构体分离，药物纯化亲和色谱生化特异亲和力蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析液相色谱仪流程图　　现在的液相色谱仪一般都做成一个个单元组件，然后根据分析要求将各所需单元组件组合起来。最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。　　液相色谱仪的工作过程：输液泵将流动相以稳定的流速（或压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器将样品导入,流动相将样品带入色谱柱,在色谱柱中各组分因在固定相中的分配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测器，检测到的信号送至数据系统记录、处理或保存。