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半自动冷冻石蜡两用切片机

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半自动冷冻石蜡两用切片机相关的论坛

  • 关于冷冻切片机

    冷冻切片机 仪器价格： 12万元 购置日期：2001年 仪器所在地：中医肝病研究所实验室 联 系 人： 顾宏图 联系电话： 51322444 收费标准： 暂未定 开放时间： 8：00～17：00 仪器简介： 徕卡CM1850是应用于组织学和临床组织病理学的一种快速低温恒冷切片机，它是将切片机置于冷冻室以外的低温恒冷切片机。CM1850的特色之一是具有宽敞的冷冻室，快速冷冻室可同时存放多达10个样品，并和一个可持续冷却的吸热器相连，以保证样品托上的样品快速冷却。切片刀温度可冷却到-35℃，样本可以快速冷冻到-40℃。切片机有狭槽盖防护，避免残渣进入机器内部。增强绝热性能（真空面板）及温度控制系统，减低压缩机运作费用及提高耐用性，比传统绝热系统使用寿命长，可以保证冷冻箱温度，例如：在35℃室温保持-35℃。同时可以做到电脑诊断维护。高质量无焊接缝的不锈钢冷冻室表面光滑利于清洁和防止污染。切片机配备双速马达驱动粗进，控制键布置在左方靠手，符合人工学原理。具备自动及人工除霜功能。独特设计的玻璃反卷板可保证连续的切片。切片机具备方便的调节功能，可快速及精确对样本切片定位。切片机推进系统运作平稳、流畅，切片厚度为1～60μm，切片精度可达1μm，最大样品直径55mm。 应用范围 可提供各种冰冻切片服务。 目前应用于： 1. 为快速病理诊断提供冰冻切片。已成为癌症诊断的重要工具。 2. 细胞学：显示脂肪、脂类以及特种组织成份。 3. 免疫细胞化学、免疫组织化学和分子生物学技术等研究工作。 4. 神经生物学研究。 5. 常规组织胚胎学研究。 6. 皮肤病理学研究。 7. 动脉血管外科学研究。 同类仪器情况 ： 中药研究所: SPOCTRA MXA190 2002年 倪跃元 解剖实验室： LION 1998年 余安胜 张建华

  • 【原创大赛】轮转式切片机的应用体会

    [align=center]轮转式切片机的应用体会[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安平中心：粟荣霞[/align]切片是病理切片制作过程中关键的步骤。一般病理切片包括轮转式切片机是在病理切片制作过程中很关键的仪器石蜡切片和冷冻切片，而石蜡切片常用的仪器是平推拉切片机和轮转式切片机，而相比于平推式切片机，轮转式切片机切片容易成卷，切片厚度不均匀。因此，就这些问题进行讨论，总结出轮转式切片机应用的一些体会。在石蜡切片之前，首先要进行充分的准备工作：1.将包埋好的是蜡块进行冷冻。2.调节室温小于20℃。3.开启摊片机和烤片机，将温度分别调至40℃和60℃。4.准备载玻片、镊子、毛笔等。冷冻时可将蜡块置于冷台1小时以上或者置于冰箱（2~8℃），置于冰箱时，切片过程中可将其转移到碎冰中。如果温度不够低，切片效果不好时，可放置到-20℃冰箱，时间不宜过长，放置蜡块冻裂。其次，准备工作做好之后，先进行修片，待修片全部结束。进行切片，切片时应迅速，手避免接触石蜡组织包埋面，以防止蜡块温度过高，影响切片效果。此外，切片时，还会卷片，这时用小头毛笔轻轻按压住成卷的切片，进行切片，同时转动毛笔，展开所切新片，那么之后的切片就不会再卷。切完片要进行摊片，先用冷水进行摊片10 min~30 min，再用40℃温水摊片，时间不宜过长。切片的厚度，应根据不同的组织进行相应的调节。仪器的使用过程也是一个不断学习的过程，只有用心去总结，才能提高工作效率与质量。

  • 石蜡切片与冷冻切片的区别

    1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组 织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片， 而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检 测的染色效果要比冰冻切片好一些。2、从研究目的来看。石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。3、从抗原的保真性来看。冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。4、从操作步骤的繁琐程度看。染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰

  • 【原创大赛】Leica RM2245半自动轮转式切片刀使用心得

    [align=center]Leica RM2245半自动轮转式切片刀使用心得[/align][align=center]西安国联质量检测技术股份有限公司[/align][align=center]安评中心：胡楠[/align]Leica RM2245是带独立控制面板的半自动轮转式切片机，用来制作不同硬度的样品薄切片，以供医疗机构实验室作组织学、病理学石蜡切片。这台仪器，主要有仪器控制面板、独立控制面板、手轮锁定装置、平滑旋转的手轮、手轮制动杆、刀架上的护刀器、可调节方向的样品夹固定器、侧向移动锁杆、带侧向移动的E型刀架、切片刀和刀架底座。由于该仪器使用时，需要装置上锋利的刀片，因此，该经过专业的培训再进行操作。在仪器使用过程中，有很多需要注意的事项。以下是我在使用过程中总结出来的需要注意的要点。首先，在仪器使用前，打开电源开关，要注意LOCK框中的黄色LED灯光是否亮起。若亮起，则表明手轮锁定。此时，可以正常的安装刀片。安装刀片时，转动刀架上的制动杆，翻下护刀器，从刀架的一侧将刀片插入，用镊子小心将刀片推入刀架合适的位置上，锁定刀架制动杆。其次，在使用过程中，应该确认操作模式。按TRIM和SECT按钮切换操作模式。如果SECT亮起，则为切片模式；如果TRIM亮起，则为修片模式。用控制面板上的箭头来调节刀架位置。应将刀架调试在合适的位置，这样有利于顺利切片。转动手轮时，应匀速转动，这样切片薄厚均匀，较少有刀痕。如果切片过程中需暂停，切记锁定手轮，注意安全。最后在完成切片或者修片操作后，要对切片机进行维护。长时间不使用仪器时，应将刀片取出。将切片废物槽内的废弃切片丢入垃圾桶，并将一起上粘附的蜡进行清理。对于该仪器，我是初次接触，在以后的工作学习中，会有更多收获。

  • 石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别

    一、石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上，即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利，切片厚度通常为5～7um，也可根据染色需要切成不同厚度，一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带，放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕，切片厚度均一平整。切片如有上述问题，在进行免疫组织化学染色时会出现假阳性现象。为能得到平整无皱褶的组织切片。可采用两次展片，即先将组织切片漂浮在30％的乙醇溶液中进行第一次展片，然后将切片捞起，再次放人45～50℃的水浴中进行第二次展片，乙醇的浓度和水温可视组织不同和石蜡熔点的高低自行调整。此过程是利用乙醇溶液与水之间的张力差展开切片的皱褶。为防止脱片，载玻片要涂黏片剂。对HE染色的切片，可在载玻片上涂抹薄层蛋白甘油，但蛋白甘油因含蛋白易导致非特异性免疫反应，故用于免疫组织化学染色的切片常用多聚赖氨酸、3—氨丙基—乙氧基甲硅烷等处理。二、冰冻切片 冰冻切片(fiozen section)是酶组织化学和免疫组织化学染色中最常用的一种切片方法，其最突出的优点是能够较[font='Songti SC Regu

  • 组织学切片机分类及应用

    切片机分为很多种类，包括药材类切片机，器材类切片机，食品类切片机，组织切片类切片机等。按其结构又可分为摇动式切片机、轮转式切片机、滑动式切片机、推动式（雪橇式）切片机等。组织切片机是一种对人体组织及动植物组织作病理切片分析的设备。组织切片机一般分为：轮转式切片机和冷冻切片机。轮转式切片机：是借转动手摇轮进行切片动作。蜡块台镶装于可在沟槽内上下运动的金属夹座中，借微动螺旋向前推进切断平整的切片。有的转轮式切片机的机头上装有三只旋钮和一个紧固旋钮能使其向各个方向偏转并紧固，便于调整蜡块的切面。切片刀的切制角度可以调整（切片刀倾斜）。由于这种切片机上使用的是一种重而大的切片刀，故除切制硬组织时一般不发生颤动。切片厚度借旋钮可以1-30微米之间调[font='Songti S

  • 【分享】石蜡切片技术实验

    【分享】石蜡切片技术实验

    一、取材与固定1 准备工作：工具、药品、计划等2 动物的麻醉：氯仿麻醉3 解剖取材4 材料分割：保持样品的完整性与代表性，考虑切片方向，实心组织大小5*5*2mm,空心细长组织10mm长。5 固定：布温氏固定液固定24h。6 漂洗：70%乙醇换洗3次，每次20~60min。7 保存：70%乙醇0~4 ℃ 。二、脱水、渗透与包埋1 脱水：85%乙醇→95%乙醇→100%乙醇→100%乙醇，每步30min~60min2透明：1/2乙醇＋1/2二甲苯→二甲苯→二甲苯，每步30min~60min3 渗透： 1/2二甲苯＋ ½ 石蜡→石蜡→石蜡，每步20min~60min，温度62℃4 包埋：将材料放入盛有石蜡的纸盒中，摆好位置（要考虑下一步的修快与切片方向），在水中冷却5～10min.三、切片1 修块 用单面刀片在玻璃板上修快使达到以下要求：（1）一个蜡块含一个材料，蜡块呈正方形或长方形，材料位于蜡块正中央。（2）材料边缘与蜡块边缘平行，各面要平直，材料边缘与蜡块边缘的距离约3mm。2 固着 将修好块的蜡块用烧热的解剖刀固着在样品台上。3 切片 按以下顺序进行（1）将样品台固定在切片机样品臂上，使切面竖直；（2）调切片厚度5～10um；（3）将切片刀用纱布蘸少许二甲苯擦净后装到切片机上，调刀角15～20，将刀固定好；（4）调刀距 使样品与刀口尽可能靠近；（5）切片顺时针摇动切片机速度40-60r/min；（6）将切好的蜡带光面向下用毛笔放到台纸上[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/12/200912141513_189942_1769204_3.jpg[/img] 贴片(1)清洗载波片；(2)加粘片剂，要求薄、匀；(3)放切片，光面向下；(4)加水于切片下面；(5)展片将载波片放于50℃的温台上至切片完全展平；(6)烤干吸掉多余水，继续放于温台上至水完全干燥；5 贴标签 临时标签，用铅笔写明组号、姓名。

  • 【讨论】各位大虾，急求可以做冷冻切片的电镜组

    各位大虾，急求可以做冷冻切片的电镜组已经找过上海医学院和第二军医大学,前者要1000块一个样品,也不能马上做,后者不肯做我们的材料样品想问问在上海还有什么地方可以做材料的冷冻切片,最低温度可以到多少,效果如何大家有没有什么推荐的

  • 【求助】冰冻切片机--咨询

    [font=黑体]本人想向高人咨询关于冰冻切片机的相关信息：１．目前市场上公认的最好的冰冻切片机是哪个公司产的，哪一款，，价位大概是多少，以及一些相关技术相关指标２．以及与此仪器相关的高清晰病理图文报告系统的相关信息　　　　急需！！！！！！！！！！　　谢谢！[/font]

  • 【求助】石蜡切片问题

    请问各位大侠，用石蜡切片-光镜观察法可以看到什么东西啊？我想观察冷冻-解冻后的鱼体的细胞结构的变化可以吗？最好用什么方法呢？非常感谢啊！

  • 石蜡切片制作过程有哪些步骤

    石蜡切片操作步骤：1、取材2、固定3、脱水：30%--50%---70%（每步60分钟）---85%---95%--100%---100%（每步30钟）。4、透明：转入1/2二甲苯＋1/2无水酒精混合液20ml透明1h，纯二甲苯20ml透明1h，再用纯二甲苯20ml透明40min，并回收各液。5、浸蜡：（1）将材料分别放入25%、50%、75%的石蜡-二甲苯溶液中，每级30分钟。该过程在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行；（2）将材料放入溶解的纯蜡中，时间为30分钟，该过程再重复两次。在高于石蜡熔点3℃的温箱中进行。6、包埋（1）将溶解好的石蜡在加入预先折好的纸船中，石蜡溶解后应过滤后使用，以免含杂质影响切片；（2）材料放入纸船，并摆好在蜡中的位置，如果包埋的组织块较多，应进行编号；（3）将纸船放置在冷水上加速冷却过程。7、切片（1）修整：用刀片修成方形或长方形蜡块；（2）以少许热蜡液，将蜡块底部粘附于小木块上，以少许石蜡融化在蜡块边缘，加强粘附的强度；（3）木块粘附于切片机上，调整切片机，使蜡块切面与切片刀刃平行；（4）切成连续的蜡带，切片刀的锐利度、蜡块的硬度都会影响切片质量，可用热水或冷水适当改变石蜡的硬度，也可在冰箱中放置一段时间；（5）分割蜡带，分开的蜡片放在45℃温水上，使蜡片展开。8、粘片与烤片（1）可用粘片剂防止蜡片滑脱，但粘附剂通常容易被染色而使切片背景有颜色，影响观察，实验表明，载玻片洗的足够干净，一般不会滑片；（2）用载玻片捞取展开后的蜡片，调整蜡片的位置使位于载玻片中央，自然干燥。9、脱蜡与醇化（1）将切片放入纯二甲苯溶液中10分钟，使石蜡完全溶解，共2次；（2）溶去石蜡的切片依次放入75%、50%、25%二甲苯-乙醇溶液中，每级10分钟；（3）再将切片依次放入100%、95%、90%、80%、70%、60%、50%的乙醇溶液中进行醇化，每级10分钟。10、染色（1）将切片放入番红染液中30分钟，番红染色后，将切片依次放入50%、60%、70%、80%的乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；（2）洗脱后的切片放入固绿染液中染色1分钟；11、脱水、透明与封片（1）染色后的切片依次放入90%、90%、95%、100%乙醇溶液中分级洗脱，每级10分钟；（2）洗脱后的切片依次放入25%、50%、75%、100%、100%二甲苯溶液中透明，每级10分钟，出现浑浊表示脱水不彻底，需重来；（3）滴1-2滴中性树胶，将洁净的盖玻片倾斜放下，封片，镜检，选择好的贴上标签，性切片制作完成。

  • 冰冻切片机

    全新一套赛默飞HM355S切片机，只是开封里面的东西没动过，现在闲置低价出售

  • 求教超薄切片机故障

    一台Reichert-Jung Ultru E超薄切片机,购于90年,最近几年出现一个问题:冬季当室温较低时,出现"点头"故障,样品臂下降到刀口位置时,无法继续下移,来回晃动,同时伴有"咔咔"声,后来将室温升到25度以上后,切片机有时能恢复正常.不知何故?目前看来该型号切片机属于什么档次?

  • 【原创】纸样品切片

    我在做表层含纸纤维比较多的纸样品时,不管用液氮冷冻切片,还是用切片机切都有很多纸纤维溢出,请问那位高手做过类似的样品,指教一下,谢谢!

  • 切片机与TEM型号要配套么？

    问个小白的问题：买切片机的时候是必须按TEM的型号来买配套的么？？还是随便买什么型号的都可以在任何TEM上用啊？我觉得切片机和TEM关系不大吧~~~~~

  • 【原创大赛】超微结构保存更好——高压冷冻与冷冻替代样品制备技术

    【原创大赛】超微结构保存更好——高压冷冻与冷冻替代样品制备技术

    最近一直在摸索着用高压冷冻和冷冻替代样品制备技术，刚开始做的时候冰晶特别严重，如下图Hela细胞。冰晶已经把细胞超微结构破坏的不行了。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231539_611900_2423894_3.jpg经过很长时间的摸索，得到以下制样方法：1 取样1.1 培养细胞：取适量的细胞悬浮液，低速离心成细胞团，去上清，细胞团呈米糊状，用移液枪取适量细胞，填满Carrier，加入适量冷冻保护液1-Hexadecene，滤纸吸取多余水分，使冷冻保护液液面略高于Carrier（Carrier用丙酮清洗，然后在空气中晾干，用1-Hexadecene浸泡备用）。1.2 小鼠肝脏：从活体上取出的组织，先用锋利的刀片在低温下切成尽可能薄片状，从中挑选合适的部分切下来，然后装入Carrier，加入适量冷冻保护液1-Hexadecene，滤纸吸取多余水分，使冷冻保护液液面略高于Carrier。2高压冷冻高压冷冻仪在使用前，要先做一些准备工作：要先加入足够的液氮，并加入压力液甲基环己烷，然后用空载的carrier高压冷冻三次，保证高压冷冻仪在最佳工作状态。2.1 将上述装有样品的carrier快速安置到高压冷冻仪，准备高压冷冻。2.2 高压冷冻样品，迅速把样品冷冻下来，并做好记录。通过高压冷冻仪冷冻样品后产生的冷冻速度和压力变化曲线，可以选择冷冻效果较好的样品继续下面实验。2.3 转移样品，首先把现配的替代液1%锇酸（0.5g锇酸溶于50mL丙酮）分装到2mL冻存管中，迅速放入液氮冷冻备用，冷冻过程中保持冷冻管直立。与此同时，冷冻替代仪加满液氮，将自制的冻存管架放入样品腔，预冷至-100℃。用预冷的镊子，在液氮下将Carrier分别装入冻存管，冻存管盖不宜拧的过紧，然后迅速转移到冷冻替代仪样品腔室的冻存管架里。3 冷冻替代 步骤 温度 时间 1 -100℃ -90℃ 4h 2 -90℃ 72h 3 -90℃ -60℃ 8h 4 -60℃ 8h 5 -60℃ -30℃ 4h 6 -30℃ 8h 7 -30℃ -20℃ 2h 8 -20℃ 8h 9 -20℃ 4℃ 2h 10 4℃ 1h 温度达到4℃后，用4℃的丙酮浸洗样品3次，每次15分钟。此过程中，会有部分样品与Carrier分离，若还有没分离的可以用解剖针将样品从Carrier中剥离。4 渗透包埋分别用以下渗透液渗透。 步骤 渗透液 浓度 时间 1 Epon812/丙酮 1:1 1.5-2h 2 Epon812/丙酮 3:1 6-12h 3 Epon812 100% 1h 4 Epon812 100% 8h 5 Epon812 100% 1h然后将样品转移至包埋槽，60℃烘箱聚合48h。5 超薄切片把两种生物样品对应的每一个包埋块分别超薄切片，各捞两个铜网，并染色。6 电镜观察观察细胞内超微结构保存情况，对感兴趣区域拍照。终于有所改善，如下图的小鼠肝脏细胞，轮廓十分清楚，结构保存完好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611895_2423894_3.jpg局部放大后观察，能看见核孔，双层核膜，甚至是膜的磷脂双分子层结构（这是在常规化学固定制样中很难看到的），看到这些让人激动不已。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611894_2423894_3.jpg碰巧看见一个正在分裂的线粒体。线粒体脊很清楚，双层膜紧挨着，不像常规制样间隙那么大。另外，线粒体基质保存完好，所以线粒体整体较细胞基质反差大。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231516_611893_2423894_3.jpg以下是常规化学固定制样的结果，可与上面高压冷冻及冷冻替代制样技术结果对比：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609231644_611928_2423894_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/09/201609

  • 【原创】【第三届原创大赛】植物官石蜡切片及显微摄影学习经历

    【原创】【第三届原创大赛】植物官石蜡切片及显微摄影学习经历

    植物的一切生命活动，都是以细胞作为基本结构和功能单位进行的。因此，对植物的组织、器官的研究就显得非常重要。石蜡切片法是动物、植物和病理组织切片制作上最重要、最常用的一种方法。由此方法制作的切片在显微镜下观察清晰，能显示其细致结构，反映其真实性，而且可以长期保存。除某些材料确实经不住石蜡法中各种药剂的处理或加温而不能应用外，一般的材料都可以采用石蜡切片法来制成装片在显微镜下观看或长期保存。本法的优点是可以极薄的切片，并可制作大批或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块还可以长期保存。番红-固绿染色法可以区分开结构中的木质化和纤维化部分。　　显微摄影是一项重要的显微技术，在生物科学的研究中，从再现显微镜中物体影像的各种方法中比较，显微摄影是最好的方法。基建的结果除文字的描述外，显微照相能客观而生动的记录下生物体的细微结构或形态，它常与生物绘图技术配合，起到相辅相成的作用。本实验采用盆中冲洗的方法。整个冲洗过程需在暗室中进行。若为涂塑像纸则直接晾干，普通像纸要进行上光。　　1 材料　　1.1 材料　　某植株(完整植株，长有新鲜叶片)、乐凯全色黑白胶卷(ASA100)、涂塑相纸、普通像纸　　1.2 试剂　　1.2.1 浓度为35%、70%、85%、95%、100%的酒精　　1.2.2 二甲苯、二甲苯酒精等量混合液　　1.2.3 包埋剂：纯石蜡配制　　1.2.4 染色剂：浓度为2% 番红水溶液(用水配制)、0.1% 固绿(由95%酒精配制而成)　　1.2.5 固定液FAA(福尔马林 、冰醋酸、70%酒精以1:1:6比例配制)　　1.2.6 封固剂：加拿大树胶　　1.2.7 D-72显影液： 50℃温水 750ml，米吐尔 3.1g，无水亚硫酸钠 45g，无水碳酸钠67.5g，对苯二酚 12g，溴化钾 1.9g，然后加冷水至1000ml。　　1.2.8 定影液F-1和F-5。　　F-5定影液：50℃温水600ml，结晶硫代硫酸钠240g，无水亚硫酸钠15g，28% 乙酸 48ml，硼酸 7.5g硫酸铝钾 15g，然后加冷水至1000ml。　　1.2.9 停影液: 水　　1.3 工具及仪器　　双面刀片、载玻片、盖玻片、培养皿、染色缸、镊子、旋转切片机、金属温台、毛笔、OlympusBH2型显微照相系统、放大仪、印相仪、上光仪等。　　2 石蜡装片的制作　　2.1 取材　　从植株上取新鲜、健康、有代表性的叶片，用锋利的刀片切取幼茎、叶柄、叶片，并用水清洗干净。将幼茎与叶柄切成约5毫米长的小段，将叶片从主脉处切取5mm× 8mm的长方形，并保证切主脉两侧的叶片相等且主脉与短边平行，底部能立于包埋盒内。　　2.2 固定　　将已经配制好的FAA固定液倒入一个小试剂瓶中，再把已经切好的材料浸入其中，在瓶上贴好标签，待用。　　2.3 浸洗　　用50%酒精或70% 酒精浸洗一、二次就可以进行脱水。　　2.4 脱水　　包埋前的第一个重要步骤为脱水。本实验以酒精为脱水剂，采用逐渐提高酒精浓度来减少材料中水分的含量。可以以此梯度进行操作，70% 酒精、85%酒精 、95%酒精、无水酒精I、无水酒精II，在每级酒精中浸2～24小时，使脱水充分。　　2.5 透明　　酒精不能作为石蜡的溶剂，因此必须经过透明剂透明。二甲苯可以溶解石蜡，有利石蜡透入，同时还有脱去酒精的功效。但二甲苯易使组织收缩变脆，故浸留时间不宜过长。同时若脱水不干净，就会引起不良后果。为了避免组织收缩，在纯酒精或丙酮脱水以后，并不直接移入二甲笨中，其间必须经过几个梯度，逐渐置换，在每一级中停留的时间为1—2小时，二甲苯易挥发，在切片透明之后，从染色缸中取出封藏，手段要敏捷，不宜久置。在纯酒精中脱水后需要经过的几种溶液配比如下：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011151102_259410_1856701_3.jpg　　2.6 浸蜡　　石蜡能溶于透明剂二甲苯中。把已透明的材料投入熔化的石蜡中，即可取代透明剂，而使组织中的一切空隙为石蜡透入而填满，即为浸蜡。为了使石蜡更好地浸透到组织中去，浸蜡一般需要经过四个不同配比的溶液，在前三杯溶液中停留半小时左右，在温箱中或在包埋箱中进行。然后取出在经第四种溶液。保温箱的温度要适宜，太高，会使材料收缩，太低，石蜡会冻结而不能透入组织。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011151102_259411_1856701_3.jpg　　2.7 包埋　　包埋是将浸过蜡的组织块包埋于石蜡中以利于切片。将已熔化的石蜡倒入做好的包埋盒内，然后用酒精灯加热的镊子将材料从石蜡液中取出，迅速放入纸盒里的石蜡中。放置的方向要按照切片的方向而定，最好把切面向下，并且放正。若石蜡中有气泡，也可用热针刺入石蜡中，将气泡烫去。材料块放置妥当后，以左右手分持纸盒两耳，半浸于冷水中，并用口吹气使蜡表面凝结，蜡凝后，除去纸盒即成蜡块。　　包埋过程中应注意的事，包埋蜡的温度不宜过高，否则会将组织烫坏。　　2.8 切片　　首先要修块，将已凝固的蜡块取出，用刀片把它切至何时大小，修整平滑。然后将蜡块底部稍融化贴在一小木块上，再用融化的蜡粘在蜡块的四周使蜡块牢固帖在木块上。将带石蜡的木块装在旋转式切片机上，将切片刀装在夹刀部位上，调整切片刀的角度，进行切片。将切下的条状蜡带，用毛笔取下放于一张纸上，挑取较好的一小条蜡带做切片。　　2.9 粘片和展片　　以手指涂一薄层Mayer甘油蛋白于干净载玻片上，再用滴管滴一滴蒸馏水于载玻片上，然后用镊子挑取一段切片蜡带置于载玻片的水面上(注意：要以石蜡切片背面比较光滑的一面放在水上，才易展平)。然后将载玻片放在金属温台上加热，使切片蜡带自由展平。注意，载玻片上的水要多放一点，加热温度不要过高，否则石蜡会熔化，组织脱落。自然风干。　　2.10 番红-固绿染色　　2.10.1 溶蜡　　将切片放入二甲苯溶液中，5～10分钟，彻底除去切片上的石蜡。如果室温过低，需延长脱蜡的时间，脱蜡要彻底，否则染色困难。　　2.10.3 复水　　将切片经纯酒精和二甲苯的1:1的溶液，100%、95%、70%、35%酒精溶液各3分钟。逐步过渡，防止材料收缩。　　2.10.4 蒸馏水浸洗　　因为染色液番红是用蒸馏水配置的，应将切片放入蒸馏水中3分钟，以便彻底复水，然后进行染色。　　2.10.5 初染　　将切片放入2%的番红水溶液中染色10～20分钟，使红色染透，否则材料容易褪色。如果番红染色过度，应返回到酒精中进行轻微脱色，再进行以下操作。　　2.10.6 流水冲洗　　用流水冲去多余染液，以冲洗去切片上的番红余色。而且对一些不易被固绿着色的幼嫩组织材料，其切片经水冲洗后吸水膨胀，染色剂易于渗入组织进行染色。　　2.10.7 镜检　　将载玻片放在显微镜的载物台上，进行镜检，染色效果良好，则可进入下一步操作。　　2.10.8 脱水　　将切片依次经过35%，70%的酒精各30秒。因为固绿是用95%酒精配置的，因此应脱去水分再进行固绿染色。　　2.10.9 复染　　用0.1%固绿染色5～10秒，时间不宜过长，否则绿色太深，将切片变为蓝绿色或深绿色，失去的双重染色的意义。　　2.10.10 镜检　　将切片放入95%的酒精过一下后，进行镜检。所染材料的木质化部分呈红色，纤维素部分呈绿色。　　2.10.11 浸洗　　用100%的酒精溶液浸洗3分钟，以洗去切片上固绿的余色，同时也使切片过度到纯酒精中。该步时间不宜过长，由于固绿在纯酒精中易褪色。　　2.10.12 透明　　将切片放入纯酒精和二甲苯的1:1的混合溶液中浸3分钟，使切片从酒精中逐步过渡到纯的二甲苯溶液中。然后将切片放入纯的二甲苯溶液中，浸5分钟，使切片完全过渡到二甲苯溶液中。至材料完全透明后应立即进行封片(为防止二甲苯使组织收缩)。　　对于脱水不彻底的材料投入到二甲苯溶液中时会出现乳白色雾状，这表明该材料无法进行透明，应该退回到无水酒精和95%的酒精进行重新脱水。　　2.11 封片　　把切片从二甲苯溶液中取出，用纸擦去载玻片上的多余液体。滴一滴加拿大树胶于组织上，用镊子夹取一片盖玻片，与载玻片成一倾斜的角度，使盖玻片的一个边缘与加拿大树胶完全接触，然后轻轻地覆盖下，防止产生气泡。树胶的量要适中，使盖玻片与载玻片之间没有空隙。　　3 显微照相　　3.1 安装好显微照相系统　　将小型显微照相连接器连接到OlympusBH2型显微镜上。　　3.2装胶片　　打开相机后盖，装入35毫米胶片，盖好后盖。注意把胶片头部放入收片轴的片槽里时，不要使它超出片槽的另一端。　　3.3 设置自动曝光器　　根据胶片感光度(ASA)选择控制器上感光度标记，按下感光片类型标记按钮(35)。将胶片倒易律失效特性的修正数设置在中间档。　　3.4 试拍　　通过自动

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