液液分配色谱篇——包治百变的“HPLC咒”:极极如意令 此“咒”一出必峰回路转一、关于高效液相色谱的主要类型及选择 以液体作流动相的色谱称液相色谱。广义范围内，除柱色谱外，薄层色谱（液固色谱）和纸色谱（液液色谱）也属于液相色谱。该篇只讨论狭义的液相色谱，即柱色谱。柱色谱法按分离机理分类可分为液固吸附色谱、液液分配分色谱、键合相色谱、凝胶相色谱、离子色谱等。其中，离子色谱法的分析对象是离子性化合物。 本篇只论行业目前广泛使用的高效液相色谱：液液分配色谱。二、关于高效液相色谱的核心与保护 在高效液相色谱分析中，除了固定相（色谱柱填料）对样品的分离起主要作用外，合适的流动相（也称为做洗脱液）对改善分离效果也会产生重要的辅助效应。 从实用角度考虑，选用作为流动相的溶剂除具有价廉、易购的特点外，还应满足高效液相色谱分析的下述要求： 1. 选用的溶剂应当与固定相互不相溶，并能保持色谱柱的稳定性； 2. 选用有溶剂应有高纯度，以防甩含微量杂质在柱中积累，引起柱效性能的改变； 3. 选用的溶剂性能应与所使用的检测器相匹配，如使用UV检测器，就不能选用在检测波长下有UV吸收的溶剂；若使用RI检测器，就不能使用梯度洗脱； 4. 选用的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度； 5. 选用的溶剂应具有低的黏度和适当低的沸点。使用低黏度溶剂，可减少溶质的传质阻力，有利于提高柱效； 6. 应尽量避免使用具有显著毒性的溶剂，以保证工作人员的安全； 附：一般实验室流动相备品的极性强度可用溶剂强度参数 ξ 表示。 ξ 是指每单位面积吸附剂表面的溶剂的吸附能力， ξ 越大表明其极性也越大。如下： http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607302250_602716_2239775_3.png三、液液分配色谱的分离原理及与正、反相的异同 分离原理：在液液分配色谱中，一个液相作为流动相，另一个液相（即固定液：填料化合物）则分散在很细的惰性载体或硅胶上作为固定相。作为固定相的液相与流动相互不相溶，它们之间有一个界面。固定液对被分离组分按照它们各自分配系数，很快地在两相间达到分配平衡。这种分配平衡的总结果导致的各组分迁移速度产生不同，或快或慢，从而达到分离的效果。很明显，分配色谱法的基本原理与液液萃取相同的一致的，都是由化学性质的差异引起的分配定律。 正、反相的异同：依据固定相和流动相的相对极性的不同，分配色谱法可分为：正相分配色谱法——固定相的极性大于流动相的极性；反相分配色谱法——固定相的极性小于流动相的极性。 在正相分配色谱法中，固定载体涂布的是极性固定液（即填料化合物），流动相是非极性溶剂。可用来分离极性较强的水溶性样品，洗脱顺序即有：非极性组分先洗脱出来，极性组分后洗脱出来。 在反相分配色谱法中，固定相载体上涂布极性较弱或非极性的固定液（即填料化合物），而用极性较强的溶剂作流动相。可用来分离油溶性样品，其洗脱顺序与正相液液色谱相反，即极性组分先被洗脱，非极性组分后被洗脱。四、正相、反相流动相的改性方法 在正相分配色谱中，使用的流动相此时以已烷、庚烷为主体，可加入﹤20%的极性改性剂，如1-氯丁烷、异丙醚、二氯甲烷、四氢呋喃、氯仿、乙酸乙酯、乙醇、乙腈等； 在反相分配色谱中，使用的流动相以水为主体，可加入一定量的改性剂，如二甲基亚砜、乙二醇、乙腈、甲醇、丙酮、对二氧六环、乙醇、四氢呋喃、异丙醇等。 注：改性的原由主要调节流动相的极性强度和改造其洗脱能力，但切勿改性过度导致造成色谱柱损伤！！！切记！切记！切记！ 林林总总有诗曰： 选流动相溶剂：选溶先着稳，纯度定柱寿 选溶样品溶剂：溶器相匹配，多溶方灵敏 概括溶剂效果：毒低得安全，低黏得高效 柱子极性特征：相正而极强，相反而低极 正相分析特性：水溶选正相，强相而后现 反相分析特性：油溶必反相，强强多分离 正流动相要求：正相烷不二，极弱先出局 反流动相要求：反相与水多，改性防伤害
液相色谱是分配色谱还是吸附色谱啊
[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191651_624025_1690337_3.jpg[/img]配色原理顏色的種類非常多，不同的顏色會給人不同的感覺。紅，橙，黃給人感到溫暖和歡樂，因此稱為“暖色”；藍，綠，紫給人感到安靜和清新，因此稱為“冷色”。顏色可以互相混合，將不同的原來顏色混合，產生不同的新顏色，混合方法分為以下兩種﹕- 顏色色光的相加混合- 顏色色料混合- 顏色色料的相減混合顏色色光混合顏色色料的混合 (相減混合)顏色色料混合一般應用紅，黃，藍三種顏色色料互相混合。紅色即是可讓紅色波長透過，吸收綠色及其餘附近的顏色波長，令人感受到紅色。黃色，藍色也是同樣道理。當黃，藍混合時，黃色顏料吸收短的波段，藍色顏料吸收長的波段，剩下中間綠色波段透過，令人們感受到綠色；同樣，紅，黃混合時剩下560nm以上較長的波段透過而成為橙色。紅，藍色混合一起，成為紫色。以紅，黃，藍為原色，兩種原色相拼而成的顏色稱為間色，分別有橙，綠，紫；由兩種間色相拼而成的稱為複色，分別有橄欖，藍灰，棕色﹕此外，原色或間色亦可混入白色和黑色調出深淺不同的顏色。在原色或間色加入白色便可配出淺紅，粉紅，淺藍，湖藍等顏色；若加入不同份量的黑色，便可配出棕，深棕，黑綠等不同顏色。 一、配色着色_定义：配色就是在红、黄、蓝三种基本颜色基础上，配出令人喜爱、符合色卡色差要求、经济并在加工、使用中不变色的色彩。另外塑料着色还可赋予塑料多种功能，如提高塑料耐光性和耐候性；赋予塑料某些特殊功能，如导电性、抗静电性；不同彩色农地膜具有除草或避虫、育秧等作用。 即通过配色着色还可达到某种应用上的要求。 二、着色剂： 着色剂主要分颜料和染料两种。颜料是不能溶于普通溶剂的着色剂，故要获得理想的着色性能，需要用机械方法将颜料均匀分散于塑料中。按结构可分为有机颜料和无机颜料。无机颜料热稳定性、光稳定性优良，价格低，但着色力相对差，相对密度大；有机颜料着色力高、色泽鲜艳、色谱齐全、相对密度小，缺点为耐热性、耐候性和遮盖力方面不如无机颜料。染料是可用于大多数溶剂和被染色塑料的有机化合物、优点为密度小、着色力高、透明度好，但其一般分子结构小，着色时易发生迁移。 白色颜料主要有钛白粉、氧化锌、锌钡白三种。钛白粉分金红石型和锐钛型两种结构，金红石型钛白粉折射率高、遮盖力高、稳定、耐候性好。 炭黑是常用黑色颜料，价格便宜，另外还具有对塑料的紫外线保护（抗老化）作用和导电作用，不同生产工艺可以得到粒径范围极广的各种不同炭黑，性质差别也很大。炭黑按用途分有色素炭黑和橡胶补强用炭黑，色素炭黑按其着色能力又分为高色素炭黑、中色素炭黑和低色素炭黑。炭黑粒子易发生聚集，要提高炭黑的着色力，要解决炭黑的分散性。 珠光颜料又叫云母钛珠光颜料，是一种二氧化钛涂覆的云母晶片。根据色相不同，可分为银白类珠光颜料、彩虹类珠光颜料、彩色类珠光颜料三类。 购买颜料，必须了解颜料的染料索引（C.I），C.I是由英国染色家协会和美国纺织化学家和染色家协会合编出版的国际性染料、颜料品种汇编，每一种颜料按应用和化学结构类别有两个编号，避免采购时因对相同分子结构、不同叫法的颜料发生误解，也有利于使用时管理和查找原因。 三、配色着色工艺： 配色着色可采用色粉直接加入树脂法和色母粒法。 色粉与塑料树脂直接混合后，送入下一步制品成型工艺，工序短，成本低，但工作环境差，着色力差，着色均匀性和质量稳定性差。 色母粒法是着色剂和载体树脂、分散剂、其他助剂配制成一定浓度着色剂的粒料，制品成型时根据着色要求，加入一定量色母粒，使制品含有要求的着色剂量，达到着色要求。 色母粒可以按欲着色树脂分类，如ABS色母粒，PC色母粒，PP色母粒等；也可按着色树脂加工艺分类，有注塑、吹膜、挤出级三大类母粒。色母粒由于对颜料先进行预处理，有较高的着色力，用量可降低且质量稳定，运输、贮存、使用方便、环境污染大为降低。 分散剂通过对颜料的润湿、渗透来排除表面空气，将凝聚体、团聚体分散成细微、稳定和均匀的颗粒，并在加工过程中不再凝聚，常用分散剂为低分子量聚乙烯蜡，对于较难分散的有机颜料和炭黑采用EVA蜡或氧化聚乙烯蜡，合成低分子量聚乙烯蜡和聚乙烯裂解法制的低分子量聚乙烯蜡有很大差别。其他助剂有偶联剂、抗氧剂、光稳定剂、抗静电剂、填料等，视要求和品种而定加入量，称为多功能母粒，再如加入光亮剂，有利于模塑制品脱模和提高制品表面光亮度。 色母粒的性能指标有色差、白度、黄度、黄变度、热稳定性、氧指数、熔体流动速率等，当然颜料的细度、迁移性、耐化学性、毒性也与色母粒性能有关，有些指标在专门用途中十分重要，如纤维级母粒的压滤值（DF值）细度。 四、配色管理和仪器 配色管理的硬件有测色计及处理测得数据的计算机。测色计可分为分光光度计和色差计两种，代替人眼测定色彩，去除人为因素对测定结果的影响。 分光光度计用来测定各波长对完全漫反射面的反射系数，不能直接求得色度值或色差，但通过其对数据处理便可评价色度值及其他各种数值。分光光度计可分为采用衍射光栅分光和采用干涉滤光片分光两种类型。先进的带内装微处理器的分光光度计，具有0%、100% 的自动校正及倍率增加等功能，从而提高了精度。 色差计是一种简单的测试仪器，即制作一块具有与人眼感色灵敏度相等的分光特性的滤光片，用它对样板进行测光，关键是设计一种具有感光器分光灵敏度特性并能在某种光源下测定色差值的滤光片，色差计体积小、操作简便，较适宜对分光特性变化小的同一种产品作批量管理，带有小型微机的色差计，容易用标准样板进行校正和输出多个色差值。 配色管理软件有分光反向率曲线、色差公式、条件等色表示法、遮盖力表示法和雾度表示法。分光反射率曲线用于选择着色剂时的分析，不能用来判断颜色的一致度。色差值是色彩管理中最重要的指标之一，但不同的色差公式求得的色差各不相同，因此必须注明所用色度体系或色差公式。 五、电脑配色： 利用计算机进行调色配方及其管理已成功地用于塑料配色调色。 电脑配色仪具有下列功能： (1)配色 根据要求建立常用颜（染）料数据库（制备基础色板并输入）。然后在软件菜单下把来料色板输入电脑，在键盘中点出数个候选颜料，立刻计算出一系列配方，并分别按色差和价格排序列出，供配色选择； (2)配方修正 修正电脑列出配方、其他来源配方，色差不合格时利用显示器显示的不一致的反射曲线直接通过键盘增减颜料量，直至两条曲线基本重合，得出修正后配方； (3)颜色测量和色差控制 测量着色剂的着色强度、产品的白度、产品颜色牢度、颜色色差。由于电脑能定量表述颜色的性能指标，有利于双方的信息沟通和传递； (4)颜色管理 日常工作中的色样、配方、工艺条件、生产日期和用户等信息均可存入计算机，便于检索、查找和作为修改时的参考，方便、快捷，提高工作效率，且便于保密。
哪位高手能用简单的语句（或举例）形象的说一下分配色谱与吸附色谱的区别呢只是知道正相HPLC与反相HPLC分别属于分配与吸附，怎么理解？？？还有，小弟在做HPLC时，处理极性很强物质的分离时，不知道如何选择柱子，用反相柱吧，保留时间太短，用正相柱吧，流动相又不好溶解样品感谢上天又给我一次机会可以向你们请教
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我想使用液液分配色谱分离两个极性相近但溶解度相差较大物质，但是不知道这种色谱法的具体操作方式，请哪位大侠指导指导，感激不尽！！！
吸附色谱和分配色谱有什么不同?
用于电脑配色的分光光度计（带有积分球）一般是d/8度的几何条件，有没有人见过8度/d的？
求助，汽车油漆配色 实验室如何设计？需要做些什么房间 ？ 求指教
汽车油漆 配色中心 该如何规划，需要设置哪些功能间，配置些什么仪器 。求请教大家，谢谢！！
[align=center][b]浅谈配色原理[/b][/align][align=center][img]http://www.hzcaipu.com/userfiles/images/140676992753d99b07ca193.jpg[/img][/align][align=center][img]http://www.hzcaipu.com/userfiles/images/085600ylma8thzarl3atgs.jpg[/img][img]http://www.hzcaipu.com/userfiles/images/20130710141011_JFfry.jpg[/img][/align][color=#0c0c0c]颜色可简单归类为红、橙、黄、绿、蓝、紫以及黑、白诸色。颜色均可用色调、明度和饱和度3 个参数来确定。颜色可以千变万化，但最基本的是红、黄、蓝3 种，也称为三原色 橙、紫、绿是三间色 用以上颜色按不同比例调配混合而成的颜色称为复色。[/color][align=center][color=#0c0c0c][img=201511031617484436.jpg,300,]http://image.135editor.com/files/users/39/392595/201603/o5a7Iz8G_7JBd.jpg[/img][/color][/align][color=#0c0c0c]其中涂料配色必须按照色彩学的基本原理进行。三原色与其他的复色之间都存在着互相抵消的关系，即红、黄、蓝互为抵消色，红、绿为一组抵消色 黄、紫为一组抵消色 蓝、橙为一组抵消色。[/color][align=center][img=CMY.gif]http://image.135editor.com/files/users/39/392595/201603/T4LeFBPM_UFAt.gif[/img][/align]在配色过程中，光用人眼辨别颜色是行不通的，需要更加客观的色差仪进行测量。彩谱的分光测色仪不仅能测出物体表面具体的l,a,b值，辨别出色差，且精度高，是国产分光测色仪性价比最高的仪器，足以在几乎所有应用领域的质量控制中实现最佳的色彩测量。只要测起来，永远都不会晚！
通过[url=http://www.xrite.cn/categories/portable-spectrophotometers/ci6x-family][color=#000000]分光色差仪[/color][/url]进行涂料配色时可以量化颜色，即将各种颜色的大致组成以一组数据的形式显示出来，通过这些数据有利于我们对某一颜色基础配方的拟定。例如：某一丙烯酸漆样件，测量出L48.6，a-36.1，b+24.8，我们推断它呈现绿色调方向，由绿颜料和黄颜料组成。经过小试和调整得到基础配方，再经过生产调整得到生产配方。
这几天在维护帖子的过程中,常发现有好多板油的链接可能因系统不能自动超链接的,从而要打开它要将其拷到地址栏中.比较麻烦. 所以编辑时请麻烦在网址前后加一个UBB 代码 ［url］http://....［/url］ 还可以适当进行配色,但请不要搞得太复杂![img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=46435]UBB码简介[/url]
色浆：(1) 色浆的选择：选用水性色浆，色浆应该和乳胶漆具有很好的相容性，不会产生浮色，发花等现象，(2) 色浆的性质：色浆应该慢干，分散性好，不沉淀，（3）色浆的用量：用量不宜过大，用量过大会影响整体乳胶漆性能（褪色，粉化，耐水性降低），（4）色浆的种类：使用[url=http://www.xrite.cn/categories/benchtop-spectrophotometers/]分光光度仪[/url]配色时，应选用3-4种基础色浆（红、黄、蓝、黑）进行调色，色浆种类不宜过多。
乳胶漆：根据目标色（色卡）的颜色深浅的不同，适当的选择3种基础乳胶漆进行调色（基础乳胶漆遮盖力主要取决于钛白含量，高钛白含量的白色乳胶漆，中等钛白含量的乳胶漆，没有钛白含量的透明乳胶漆），因为选用基础漆应具备一定的遮盖力，所以使用[url=http://www.xrite.cn/categories/benchtop-spectrophotometers/ci7860][color=#000000]分光测色计[/color][/url]配色时，选用高钛白含量及中度钛白含量的乳胶漆为宜，另外，选用基础乳胶漆的种类越多，调色成本越低。
% F液—液分配色谱法及化学键合相色谱流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于下式：式中，Cs—溶质在固定相中浓度；Cm--溶质在流动相中的浓度； Vs—固定相的体积；Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。4 E5 \) p1.正相液—液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。2、反相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。液—液分配色谱法的缺点：%尽管流动相与固定相的极性要求完全不同，但固定液在流动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相，可克服上述缺点。现在应用很广泛（70~80%）。液-液分配层析：- K/ F Y/ % [固定相为单体固定液构成。将固定液的官能团结合在薄壳或多孔型硅胶上，经酸洗、中和、干燥活化、使表面保持一定的硅羟基。这种以化学键合相为固定相的液-液层析称为化学键合相层析。另一种利用离子对原理的液-液分配层析为离子对层析。. R2 X: v( D1 o8 v4 q-
原创与否转帖 部分高效液相色谱法及其在药物分析中的应用 法，这种色谱法的柱效能低、分离周期长。高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，简称HPLC）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方法。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点：①应用了颗粒极细（一般为10µm以下）、规则均匀的固定相，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；②采用高压输液泵输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；③广泛使用了高灵敏检测器，大大提高了灵敏度。目前，已经发展了多种不同的固定相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大。下面介绍高效液相色谱法的有关知识，新的方法和技术以及在药物分析中的应用。一、分类 高效液相色谱法按分离机理的不同可分为以下几类： （一）吸附色谱法（adsorption chromatography）以吸附剂为固定相的色谱方法称为吸附色谱法。使用最多的吸附色谱固定相是硅胶，流动相一般使用一种或多种有机溶剂的混合溶剂。在吸附色谱中，不同的组分因和固定相吸附力的不同而被分离。组分的极性越大、固定相的吸附力越强，则保留时间越长。流动相的极性越大，洗脱力越强，则组分的保留时间越短。 （二）液-液分配色谱法（liquid- liquid chromatography)液-液分配色谱的固定相和流动相是互不相溶的两种溶剂，分离时，组分溶入两相，不同的组分因分配系数（K)的不同而被分离。目前广泛使用的化学键合固定相是将固定液的官能团键合在载体上而制成的，使用化学键合固定相的色谱方法（简称键合相色谱法）可以用分配色谱的原理加以解释。键合相色谱法在HPLC中占有极其重要的地位，是应用最广的色谱法。按照固定相和流动相极性的不同，分配色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法两类。
以下是Agilent液相色谱柱的应用范围：正相吸附色谱极性:固定相 流动相固定相- 极性流动相(己烷，庚烷)- 非极性极性物质后出峰反相分配色谱极性:固定相 流动相固定相- 非极性流动相(甲，乙醇，乙腈，THF，二氯乙烷)- 极性非极性物质后出峰
色谱法的基本原理利用样品混合物中各组分理、化性质的差异，各组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物得到分离。两相中，固定不动的一相称固定相；移动的一相称流动相。分类：根据流动相分—以气体作流动相—[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]——固定相为液体 气-液色谱 固定相为固体 气-固色谱 —以液体作流动相—液相色谱——固定相为液体 液-液色谱 固定相为固体 液-固色谱 —当流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体时——超临界色谱 根据固定相的附着方式 —固定相装在圆柱管中—柱色谱 —固定相涂敷在玻璃或金属板上—薄膜色谱（平板色谱） —液体固定相涂在纸上—纸色谱（平板色谱）根据分离机理 —分配色谱—样品组分的分配系数不同 —吸附色谱— 样品组分对固定相表面吸附力不同 —体积排阻色谱—利用固定相孔径不同，把样品组分按分子大小分开 —离子交换色谱—不同离子与固定相商相反电荷间的作用力大小不同根据极性 —流动相极性＞固定相极性-反相色谱 —流动相极性＜固定相极性-正相色谱 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。所以，HPLC的应用范围已经远远超过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]。 一、吸附色谱（adsorption chromatography）又叫液固色谱法：流动相是液体，固定相是固体。分离原理：固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。固定相： 固定相通常是强极性的硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂。活性硅胶最常用。流动相： 弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。 应用： 对于极性，结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的分离。 缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。二、分配色谱原理： 固定液机械的吸附在惰性载体上，样品分子依据他们在流动相和固定相间的溶解度不同，分别进入两相分配而实现分离。固定相：将一种极性或非极性固定液吸附在惰性固相载体上。如全多孔微粒硅胶吸附剂。根据极性不同分类：正相分配色谱—固定相载体上涂布的是极性固定液； 流动相是非极性溶剂； 可分立极性较强的水溶性样品； 弱极性组分先洗脱出来。 反相分配色谱—固定相载体上涂布的是非极性或弱极性固定液； 流动相是极性溶剂； 强极性组分先洗脱出来。 液-液分配色谱固定相中的固定液体往往容易溶解到流动相中去，所以重现性很差，且不能进行梯度洗脱，已经不大为人们所采用。三、键合相色谱 考虑分配色谱法中固定液的缺点，因此将各种不同的有机关能团通过化学反应共价结合到固定相惰性载体上，固定相就不会溶解到流动相中去了。键合固定相优点：○ 对极性有机溶剂有良好的化学稳定性 ○使色谱柱的柱效高、寿命长 ○实验重现性好 ○几乎适于各种类相的有机化合物的分离，尤其是k’宽范围的样品 ○可以梯度洗脱根据极性不同分类：正相键合相色谱—固定相极性＞流动相极性 固定相：二醇基、醚基、氰基、氨基等极性基团的有机分子。 适于分离脂荣、水溶性的极性、强极性化合物 反相键合相色谱—固定相极性＜流动相极性 固定相：烷基、苯基等非极性有机分子。如最常用的ODS柱或C18柱就 是最典型的代表，其极性很小。 适于分离非机性、弱极性离子型样品， 是当今液相色谱的最主要分离模式。正相HPLC（normal phase HPLC）： 是由极性固定相和非极性（或弱极性）流动相所组成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性硅胶、氰基柱等，代表性的流动相是正己烷。吸附色谱也属正相HPLC。 反相HPLC（reversed phase HPLC）： 由非极性固定相和极性流动相所组成的液相色谱体系，与正相HPLC体系正好相反。其代表性的固定相是十八烷基键合硅胶(ODS柱，Octa Decyltrichloro Silane)，代表性的流动相是甲醇和乙腈。四、体积排阻色谱（SEC，size exclusion chromatograghy）（又称凝胶色谱和分子筛色谱） 原理： 以多孔凝胶（如葡萄糖，琼脂糖，硅胶，聚丙烯酰胺等）作固定相，依据样品分子量大小达到分离目 的。大分子不进入凝胶孔洞，沿多孔凝胶胶粒间隙流出，先被洗脱；小分子进入大部分凝胶孔洞， 在柱中被强滞留，后被洗脱。根据样品性质分类：凝胶过滤（GFC）—用于分析水溶性样品，如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核 苷酸、多糖。 凝胶渗透（GPC）—用于分析脂溶性样品，如测定高聚物的分子量。 SEC主要依据分子量大小进行分离，因此与样品、流动相间的相互作用无关。因此不采用改变流动相的组成来改善分离度。 五、离子交换色谱（ion exchange chromatography, IEC）分离原理：使用表面有离子交换基团的离子交换剂作为固定相。带负电荷的交换基团（如磺酸基和羧酸基）可以用于阳离子的分离；带正电荷的交换基团（如季胺盐）可以用于阴离子的分离。不同离子与交换基的作用力大小不同，在树脂中的保留时间长短不同，从而被相互分离。
高效液相色谱（HPLC：High Performance Liquid Chromatography ）是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。国际市场调查表明，高效液相色谱仪在分析仪器销售市场中占有最大的份额，增长速度最快。 高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。其缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。目前的发展趋势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜。7.1 基本原理 加样 流动相 固定相 流动相 A A B C B C B A 固定相 —— 柱内填料，流动相 —— 洗脱剂。HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。通常，按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类：分配色谱：—— 分配系数亲和色谱：—— 亲和力吸附色谱：—— 吸附力离子交换色谱：—— 离子交换能力凝胶色谱（体积排阻色谱）：—— 分子大小而引起的体积排阻分配色谱又可分为：
通常进行高效液相色谱分析是优先考虑的是样品不必进行预处理，就可经溶样来进行分析，因此样品在有机溶剂和水溶液中的相对溶解性是样品最重要的性质。由于样品在有机溶剂中溶解度的大小，初步判断样品是非极性化合物还是极性化合物，进而推断用非极性溶解剂戊烷、己烷、庚烷等，还是极性溶解剂二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇、乙腈等来溶解样品，并通过实验判断。若样品溶于非极性溶剂，表明样品为非极性化合物，通常可选用吸附色谱法或正相分配色谱法、正相键合色谱法进行分析。若样品溶于极性溶剂或相混溶的极性溶剂，表明样品为极性化合物，通常可选用反相分配色谱法或更为广泛应用的反相键合相色谱法进行分析。若样品溶于水相，可首先检查水溶液的pH值，若呈中性为非离子型组分，常可用反相（或正相）键合色谱法进行分析。若pH值呈弱酸性，可采用抑制样品电离的方法，在流动相中加入硫酸、磷酸调节pH=2~3，再用反相键合相色谱法进行分析。若pH值呈弱碱性，则可向流动相中加入阳离子型反离子，再用离子对色谱法进行分析。若pH呈强酸性或强碱性，则可用离子色谱法进行分析。对呈强离子型水溶性生物大分子的分析仍是高效液相色谱的特殊难题之一，近年随凝胶过滤色谱和高效亲和色谱的迅速发展，对解决像蛋白质、核酸等生物大分子的分析提供了有效的途径。来源：互联网
纸色谱鉴别黄酮苷时，常用“水性”展开剂，如：2%～5%HOAc、3%NaCl及1%HCl等时，为什么是极性大的Rf值大?纸色谱一般不是正相分配色谱吗?应该是极性大的Rf值小才是，以2%～5%醋酸为例，固定相是什么?移动相是什么?这种分离原理是什么?
高效液相色谱法按组分在固定相和流动相两者间分离机理不同可分为，液固吸附色谱。液液分配色谱，化学键合相色谱法。离子交换色谱法，凝胶色谱法。我疑问的是，我们平时用的ODS-C18柱是固液吸附色谱柱吗？？？但是好像跟化学键合相色谱也相符合。毕竟色谱柱也是以硅胶为基质键合的C18填料柱。所以我们平时用的这个C18柱是哪一种呢？
高效色谱仪分离方法的选择原则：一、根据相对分子质量选择：1、相对分子质量很低的样品采用气相色谱。2、液液分配色谱、液固吸附色谱和离子交换色谱最适合分析相对分子质量为200～2000的样品。3、相对分子质量大于2000的样品，采用凝胶色谱为最优。二、根据溶解度选择：1、溶于水并能离解的样品，采用离子交换色谱。2、溶于烃类(如苯或异辛烷等)的样品，可采用液固吸附色谱。3、溶于CCl4的样品，多采用液液分配色谱和液固吸附色谱。4、既溶于水又溶于异丙醇的样品，常用水和异丙醇的混合液作液液分配色谱的流动相，以疏水性化合物作固定相。三、根据分子结构选择：1、酸、碱化合物采用离子交换色谱。2、脂肪族和芳香族采用液液分配色谱、液固吸附色谱。3、异构体采用液固吸附色谱。4、同系物不同官能团和强氢键化合物采用液液分配色谱。
[align=center][b]谈谈化学键合相色谱[/b][/align][b]什么是键合相色谱？ 借助于化学反应的方法将有机分子以共价键连接在色谱担体上而获得的固定相称为化学键合相，以化学键合相为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱。据统计，键合相色谱在高效液相色谱的整个应用中占90%以上。 但是，时至今日，很多老师对液相色谱的理解还停留在液液分配色谱的层面上，本人在查阅资料后，得到了上面的结论。希望大家共同学习进步！[/b]
1．吸附色谱法(Absorption Chromatography)2．分配色谱法(Partition Chromatography)3．离子色谱法(Ion Chromatography)4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography) 5．键合相色谱法（bonded-phase chromatography） 6．亲和色谱法(Affinity Chromatography)
液相色谱与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]结构区别液相色谱分离系统也由两相——固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。 根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。
色谱法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。分配色谱是利用溶液中被分离物质在两相中分配系数不同，以使组分分离。其中一相为液体，涂布或使之键合在固体载体上，称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上的离子交换势不同而使组分分离。常用的有不同强度的阳、阴离子交换树脂，流动相一般为水或含有有机溶剂的缓冲液。排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或有机溶剂为流动相。色谱法的分离方法，有柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。色谱所用溶剂应与试样不起化学反应，并应用纯度较高的溶剂。色谱时的温度，除气相色谱法或另有规定外，系指在室温下操作。分离后各成分的检出，应采用各单体中规定的方法。通常用柱色谱、纸色谱或薄层色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区分，对有些无色物质，可在245-365nm的紫外灯下检视。纸色谱或薄层色谱也可喷显色剂使之显色。薄层色谱还可用加有荧光物质的薄层硅胶，采用荧光熄灭法检视。用纸色谱进行定量测定时，可将色谱斑点部分剪下或挖取，用溶剂溶出该成分，再用分光光度法或比色法测定，也可用色谱扫描仪直接在纸或薄层板上测出，也可用色谱扫描仪直接以纸或薄层板上测出。柱色谱、气相色谱和高效液相色谱可用接于色谱柱出口处的各种检测器检测。柱色谱还可分部收集流出液后用适宜方法测定。
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9´ 107Pa） 色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。 一、特点： 1．高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150～350×105Pa。 2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1～10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。 3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。 5.适应范围宽：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法与高效液相色谱法的比较：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的 75% ～ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计，在已知化合物中，能用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70～80%。 二、性质及原理：高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为下述几种主要类型： 1 ．液 — 液分配色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K，K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。 a. 正相液 — 液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。 b. 反相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。 c. 液 — 液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要求完全不同，但固定液在流动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相（见后），可克服上述缺点。现在应用很广泛（70~80%）。 2 ．液 — 固色谱法 流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S），可表示如下： Xm + nSa ====== Xa + nSm 式中：Xm--流动相中的溶质分子；Sa--固定相中的溶剂分子；Xa--固定相中的溶质分子；Sm--流动相中的溶剂分子。 当吸附竞争反应达平衡时： K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] 式中：K为吸附平衡常数。[讨论：K越大，保留值越大。] 3 ．离子交换色谱法(Ion-exchange Chromatography) IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。 以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下： X-(溶剂中) + (树脂-R4N+Cl-)=== (树脂-R4N+ X-) + Cl- (溶剂中) 当交换达平衡时： KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-] 分配系数为： DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-] [讨论：DX与保留值的关系] 凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。
按分离过程物理化学原理分类各种方法比较 方法项目吸附色谱分配色谱离子色谱体积排阻色谱亲和色谱固定相全多孔固体吸附剂固定液载带在固相基体上高效微粒离子交换剂具有不同孔径的多孔性凝胶多种不同性能的配位体键连在固定相上流动相不同极性有机溶剂不同极性有机溶剂和水不同PH值的缓冲液有机溶剂或一定PH值的缓冲液不同PH值的缓冲液，或加入改性剂分离原理吸附 解吸溶解 挥发可逆性的离子交换多孔凝胶的渗透或过滤具有锁匙结构络合物的可逆性离解平衡常数吸附系数KA分配系数KP选择性系数KS分布系数KD稳定常数KC
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