伏马毒素多功能固相净化柱

霉菌毒素是由霉菌或真菌产生的有毒有害物质。在土壤中，在植物上，包括谷物、饲草和青贮饲料均可发现霉菌毒素。霉菌毒素对粮食、饲料的污染已是一个全球性热点问题。目前已知的霉菌毒素高达几百种，而食品、饲料、饮料、药材行业中危害较大的主要是以黄曲霉毒素（Aflatoxin），赭曲霉毒素A（Ochratoxin A），单端孢菌毒素（Trichothecenes），玉米赤霉烯酮（Zearalenone），烟曲霉毒素（Fumonisin）和串珠镰刀菌素（Moniliformin）发生较多，由于霉菌毒素种类繁多、结构复杂多样，这就造成实际生产中，真菌毒素的定量检测成为困扰我们的重要难题之一，对于这些毒素的检测样品的净化处理显得尤为重要。目前霉菌毒素的检测方法包括薄层色谱法、酶联免疫法、免疫亲和柱净化高效液相色谱法。但薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长；而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高，但特异性差，假阳性高；免疫亲和柱高效液相色谱法成本太高, 对于高黄曲霉毒素含量的样品偏差较大。迫切需要一种样品处理简便易行、快速准确、灵敏度高、检测限低，检测成本低廉的检测方法和技术。尤其液相色谱分离技术具有分析速度快、样品用量少、灵敏度高、分离和测定一次完成，得到越来越多行业和单位的应用，然而整个过程样品前处理的好坏将直接导致测量结果的准确与否，对样品净化的方法要求更高。Pribolab推出的新一代霉菌毒素净化柱产品，在创新发展了霉菌毒素检测的样品处理技术基础上，可以保证整个检测一开始就具有较高的重现性和可靠性。现代前处理技术在要求净化效果的同时，越来越追求方法的快速及易操作性，PriboFastR系列多功能净化柱采取的方法就是多重机制吸附杂质并快速萃取净化的方法，，它将极性、非极性及离子交换等多类官能基团作为复合吸附填料作为填充剂填充到柱体中，这些填料可以选择性的吸附样品中的如脂类、蛋白类和色素等主要杂质吸附，同时将待测目标物（如中黄曲霉毒素 玉米赤霉烯酮等各种霉菌毒素）留在样液中，从而达到净化和富集的目的。使用PriboFastR 系列多功能净化柱，能够及时快速地对从食品、饲料、饮料、药材中提取的待检液进行净化，过柱净化后的样品可以用于检测黄曲霉毒素、 玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇等多种霉菌毒素。与一般的固相萃取柱（SPE）和亲和柱相比，多功能净化柱无需活化、上样、洗脱等步骤，能够将食品或饲料提取液中的杂质与真菌毒素进行一步分离，使用快捷、方便，减少萃取步骤，有效保证分析的更加准确可靠，降低检测成本，有效提高检测效率。广告嫌疑的内容部分已经过编辑（弗雷德）

pribalob多功能净化柱，采用复合填料吸附杂质一步净化！仅需要30s即可同时净化多种毒素！

请问多功能净化柱除了在真菌毒素检测中应用，还有哪些应用？谢谢！

黄曲霉毒素免疫亲和柱和净化柱有什么差别啊，看到了北京泰乐祺科技有限公司提供MycoSep226 多功能净化柱，还有MycoSep228 多功能净化柱，还有MycoSep227多功能净化柱，还有MycoSep112多功能净化柱，请问他们有什么区别啊，是填料不同还是有什么具体说法？还是根据什么分的，那个效果更好啊

[b]摘要：[/b]黄曲霉毒素主要是由黄曲霉菌和寄生曲霉产生的次生代谢产物，它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染的花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，是霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素，是我国食品安全风险监测的主要监测对象。本文采用多功能净化柱-液相色谱法对玉米粉质控物样品中的黄曲霉毒素进行检测，实验结果表明：该方法回收率稳定、灵敏度高，RSD均小于5%。[b]关键字：[/b]黄曲霉毒素 多功能净化柱-液相色谱 检测方法 随着世界经济发展、生活水平提高，人们对于食品对生命安全和身体健康的影响越来越关注。在众多的食品污染因素中，生物毒素是最重要的污染物之一，而黄曲霉毒素因其对人及动物肝脏的剧烈损害名列毒性之首，一直受到人们和食品安全监督机构的广泛关注。 黄曲霉毒素是由黄曲霉菌和寄生曲菌产生的一种结构类似的二呋喃香豆素衍生物，主要有B1、B2、G1和G2四种形态。其除具有致癌性、致突变性和致畸性外，还会引起肝细胞变性和坏死，是至今发现的毒性最大的真菌毒素。 黄曲霉毒素的检测方法最初以薄层层析法为主，但是薄层层析法存在操作步骤多、样品前处理繁琐、提取和净化效果不够理想、提取液中杂质较多、灵敏度低、重现性差、不能准确定量等缺点。后发展荧光分光光度法，其存在检测费用较高、需配备专门设备、不能对单一毒素进行检测的缺点，此外张雪辉等比较了用荧光光度法和溴衍生-高效液相色谱法检测中药中黄曲霉毒素的结果，发现存在假阳性。免疫分析法是利用抗原抗体特异性反应等来测定黄曲霉毒素含量的方法，该方法的缺点是：重复性差，试剂寿命短，存在假阳性。目前黄曲霉的检测一般采用高效液相色谱法，兼具定性、定量的特点。 本文采用一种多功能净化柱-液相色谱法对玉米粉质控物样品中的黄曲霉毒素进行检测，先将样品提取液过自制多功能净化柱进行过滤，将过滤液进入液相色谱仪进行分析检测。该方法与其他黄曲霉毒素检测方法相比，具有耗时短、灵敏度高、操作简单、价格低廉、易于保存等优点。1.样品的提取与净化1.1 实验试剂与仪器 多功能净化柱，青岛贞正分析仪器有限公司；阴性玉米粉质控物；光化学柱后衍生设备；离心机；超声波清洗机；高效液相色谱仪，Waters2695；甲醇、乙腈，色谱纯；超纯水；黄曲霉毒素标准品（B1、B2、G1、G2）。1.2 样品的提取 称取5g阴性玉米粉质控物样品进行研磨，加入25mL 84/16乙腈/水，将样品进行超声，时间为60min，中间每隔10min摇晃一次，然后将样品离心处理，6000r/min离心10min，取上清提取液。1.3 样品的净化 将上述上清提取液至于试管中，过自制多功能净化柱进行过滤，注意过柱速度要小于2mL/min，提取过滤后液体于样品瓶中，做好标记。2. 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2工作曲线的测定 分别配置梯度浓度的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2溶液，用液相色谱仪进行检测，得到黄曲霉毒素B1工作曲线，如图1所示。液相色谱条件：流动相：A相，水；B相，乙腈+甲醇（50%+50%）；等梯度洗脱条件：A，68%；B，32%；色谱柱：C18柱（柱长150mm或250mm，柱内径4.6mm，填料粒径5μm）；流速：1.0mL/min；柱温：40℃；进样量：50μL；光化学柱后衍生器：激发波长：360nm；发射波长：440nm。[align=center][img=,536,755]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/07/201707311253_01_3254848_3.png[/img][/align][align=center]图1 黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2工作曲线[/align]3.基质空白值测定结果 依据《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》 GB 5009.22-2016 方法，对阴性玉米粉质控物样品进行提取、净化、检测。[align=center]表2 空白值测定结果 [/align][align=center][table=558][tr][td=1,1,177] 空白测定次数（n）[/td][td=1,1,185] 峰面积[/td][td=1,1,195] 浓度（mg/L）[/td][/tr][tr][td=1,1,177] 1[/td][td=1,1,185] 0[/td][td=1,1,195] 0[/td][/tr][tr][td=1,1,177] 2[/td][td=1,1,185] 0[/td][td=1,1,195] 0[/td][/tr][tr][td=1,1,177] 3[/td][td=1,1,185] 0[/td][td=1,1,195] 0[/td][/tr][tr][td=1,1,177] 平均值 [/td][td=2,1,380] 0[/td][/tr][/table][/align]4.方法评价结果 依据《食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》 GB 5009.22-2016，对试剂空白加标，加标水平为2ppb，对阴性玉米粉加标，加标水平分别为0.5ppb、2ppb、5ppb。[align=center][b]表3 试样测定结果[/b] [/align][align=center][table=651][tr][td=1,2,94] [align=center] [/align][/td][td=1,2,22] [align=center] [/align][/td][td=2,1,138] [align=center]B1[/align][/td][td=2,1,132] [align=center]B2[/align][/td][td=2,1,132] [align=center]G1[/align][/td][td=2,1,132] [align=center]G2[/align][/td][/tr][tr][td=1,1,80] [align=center]回收率[/align][/td][td=1,1,58] [align=center]RSD[/align][/td][td=1,1,74] [align=center]回收率[/align][/td][td=1,1,58] [align=center]RSD[/align][/td][td=1,1,74] [align=center]回收率[/align][/td][td=1,1,58] [align=center]RSD[/align][/td][td=1,1,74] [align=center]回收率[/align][/td][td=1,1,58] [align=center]RSD[/align][/td][/tr][tr][td=1,6,94] [align=center]试剂加标（2ppb）[/align][/td][td=1,1,22] [align=center]1[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]93.13[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.36[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]95.60[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]2.46[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]92.73[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.91[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]98.07[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]2.38[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]2[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]100.28[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]100.16[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]100.44[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]98.44[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]3[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]98.76[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]97.86[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]99.46[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]99.12[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]4[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]98.02[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]99.93[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]93.09[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]92.81[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]5[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]97.82[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]98.74[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]99.09[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]96.61[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]6[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]92.24[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]94.17[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]92.71[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]95.82[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,6,94] [align=center]基质加标（0.5ppb）[/align][/td][td=1,1,22] [align=center]1[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]64.40[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.97[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]70.46[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.87[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]78.92[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]4.31[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]73.43[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]4.89[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]2[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]60.80[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]67.21[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]77.63[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]79.60[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]3[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]57.53[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]65.32[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]75.80[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]75.14[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]4[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]62.46[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]72.38[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]82.59[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]80.17[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]5[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]59.36[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]71.56[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]75.16[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]76.85[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]6[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]60.03[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]69.67[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]83.25[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]83.96[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,6,94] [align=center]基质加标（2ppb）[/align][/td][td=1,1,22] [align=center]1[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]75.59[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.25[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]81.29[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.54[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]82.07[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]4.62[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]82.05[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]4.31[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]2[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]73.30[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]79.14[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]75.16[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]79.44[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]3[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]71.36[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]80.80[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]80.06[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]81.56[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]4[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]75.81[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]83.16[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]81.36[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]81.28[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]5[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]70.91[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]81.44[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]81.53[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]76.06[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]6[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]70.48[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]74.98[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]73.60[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]73.70[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,6,94] [align=center]基质加标（5ppb）[/align][/td][td=1,1,22] [align=center]1[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]85.29[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.27[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]89.74[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]2.90[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]100.80[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]4.80[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]92.30[/color][/align][/td][td=1,6,58] [align=center][color=black]3.02[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]2[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]90.27[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]95.90[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]109.18[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]92.65[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]3[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]87.58[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]93.70[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]108.12[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]93.29[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]4[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]90.80[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]95.68[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]97.19[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]85.75[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]5[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]93.57[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]94.54[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]107.71[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]90.93[/color][/align][/td][/tr][tr][td=1,1,22] [align=center]6[/align][/td][td=1,1,80] [align=center][color=black]91.40[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]90.16[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]100.78[/color][/align][/td][td=1,1,74] [align=center][color=black]90.19[/color][/align][/td][/tr][/table][/align]5.结论 该多功能净化柱适用于玉米粉物质的检测，通过对检测方法精确度、准确度的评价，回收率57%-110%之间，RSD＜5%，满足玉米粉基质中黄曲霉毒素的检测。参考文献[align=left]1.田随安，张焱，翟志雷.食品中的黄曲霉毒素（B1、B2、G1、G2）HPLC法测定探讨.医药论坛杂志，2008，29：28-29.2.谢光洪，于光，肖成蕊，等.黄曲霉毒素B1免疫检测方法的新进展.中国畜牧兽医，2007，4（7）：145-146.3.夏义平.食品中黄曲霉毒素检测技术研究进展.第二届环渤海色谱学术报告会论文汇编，2012：941-946.4.张雪辉，陈建民.高效液相色谱法与荧光光度法检测中药材中黄曲霉毒素的比较.药学学报，2004，39（12）：997-1000.5.张英，蔡志斌，郑志伟.超高液相色谱法同时测定油炸食品中4种黄曲霉毒素.实用预防医学，2011，32（3）：379-383.[/align]

原理：采用多重复材料吸附杂质，干扰物被残留在柱里的填充物中，而待测毒素通过净化柱被洗脱下来步骤：取样粉碎——萃取——净化——分析优点：使用方法方便快捷 时间短30秒 同时净化多种毒素 稳定性高30个月以上 回收率高

原理：采用多重复材料吸附杂质，干扰物被残留在柱里的填充物中，而待测毒素通过净化柱被洗脱下来 步骤：取样粉碎——萃取——净化——分析 优点：使用方法方便快捷 时间短30秒 同时净化多种毒素 稳定性高30个月以上 回收率高

GB/T5009.23-2006中第三法HPLC法推荐用多功能净化柱为Mycosep 226 或 228 MFC柱，询问了一下价格，很贵。标准也解释：如果其他等效产品具有相同的效果，则可以使用这些等效的产品。请问：有无“等效的”多功能净化柱？品牌型号是什么？有无“等效的”国产净化柱？

高效液相色谱方法检测食品中黄曲霉毒素研究进展由于黄曲霉具有极强的毒性和致癌性，大多数国家和地区都规定了食品中的限量要求，这就要求对黄曲霉毒素进行有效的监督，一方面可以保护公众的食品安全和健康，另一方面可以减少食品对外贸易带来的经济损失。高效液相色谱法是一种检测痕量物质常用的方法，检测黄曲霉毒素的一般步骤是用适合的溶剂提取目标物，净化浓缩，C18柱分离后检测器检测，根据检测器的不同，可分为荧光检测法和质谱检测法两类。1提取和净化样品提取溶剂的选择取决于黄曲霉毒素自身的物化性质，一般用到的提取溶剂有甲醇、乙腈的水溶液，尽管早期的方法中经常用到氯仿，但考虑到氯仿对环境的影响，现已基本上被替代；一些新的提取技术，如超临界流体萃取、加压流体萃取（加速流体萃取）被用于黄曲霉毒素的提取，但是超临界流体的提取物常有大量的杂质，而加压流体萃取设备价格昂贵，限制了其广泛使用。样品的提取溶液中常含有共提取物，给黄曲霉毒素的检测带来干扰和基质效应。为了排除基质对分离和检测的干扰，常用的净化手段有液液萃取、固相萃取柱、免疫亲和柱和多功能净化柱。对于含油量大的样品，常需要在提取溶液中加入正己烷用液液萃取法去油；传统固相萃取柱在黄曲霉毒素净化方面的应用较早，填料主要有C18、硅胶、弗洛里硅土、氧化铝等，但由于选择性差，且往往既耗时又浪费溶剂，因此不及免疫亲和柱和多功能净化柱应用广，而微型固相萃取柱的应用便于建立简单快速、成本低廉的前处理方法。Mahoney等采用硅胶柱（30 mg/3 mL）建立了简单可靠的方法来分析检测来自不同植物源的油中黄曲霉毒素，结果表明硅胶柱可以选择性保留植物油中的黄曲霉毒素；Sobolev使用自制氧化铝柱（200 mg/1.5 mL）用于来净化检测主要农产品（玉米粉、棉籽、花生、杏仁、英国胡桃、巴西坚果、阿月浑果）中的黄曲霉毒素，该方法简单快速，成本低廉。由于弗罗里硅土对黄曲霉的吸附能力强，因此用弗罗里硅土柱净化洗脱需要用到大量的丙酮-水溶液；Sobolev对于弗罗里硅土柱（130 mg/1.5 mL）净化的的洗脱条件进行了研究，结果显示丙酮/水/甲酸(96:3.7:0.3, v/v)为洗脱溶剂时的洗脱能力最强，2 mL的洗脱体积即可得到大于98%的回收率；该净化方法用于花生、巴西坚果、玉米、棉籽等样品基质，其中花生基质中B1定量限达到0.05 μg/kg；使用商品化的弗罗里硅土柱可以保证样品检测的重复性，同时可进行实验室间结果比对。免疫亲和柱具有高效和特异性吸附的优点，可同时实现样品的净化和富集，达到比普通固相萃取柱更好的净化效果和更高的信燥比，而且有机试剂使用量少，因此免疫亲和柱越来越多用于黄曲霉毒素等真菌毒素的样品净化。AOAC对免疫亲和柱净化的黄曲霉毒素检测方法进行了协同研究；我国将免疫亲和柱用于黄曲霉毒素检测的国标方法（GB/T 18979-2003）。多种真菌毒素免疫亲和柱的商品化使同时净化分析多种真菌毒素成为可能，如人参和姜中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的同时净化，谷物中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素的同时净化富集；最新推出的商品化免疫亲和柱可实现黄曲霉毒素、赭曲霉毒素[font=T

如果您想体验更方便快捷的毒素检测基质净化方法，如果你想提高毒素的回收率和重现性，如果您为免疫亲和柱的稳定性烦恼，如果您想同时处理多个毒素样品，那么不用犹豫，现在你参加Sigma-Aldrich公司的Supel TOX毒素检测专用净化柱免费试用！Supel TOX产品是Sigma-Aldrich公司旗下分析品牌Supelco专门针对毒素检测的基质净化而开发的快速、便捷的样品前处理产品。该系列小柱可有效去除毒素分析中的杂质，保质期更长更稳定，并且不需要在低温条件下进行运输和储存。填写免费试用申请表 链接如下：http://surveymonkey.com/s/M92XR97

请问多功能净化柱可以做兽残么，哪个品牌的可以，求大佬解惑

[align=center][b]多功能净化平台在脱氢乙酸检测前处理中的应用[/b][/align][align=center]武向勇，张佳佳，赵昀，封同月[/align][align=center]（山西省食品质量安全监督检验研究院，山西太原 030012）[/align][b]摘要：[/b]建立了一种脱氢乙酸样品前处理的自动化净化方法，优化了自动化净化条件。制备后的样品液相色谱检测结果：脱氢乙酸的回收率为75% ~115%，精密度相对偏差小于6.0%。分析检测结果表明与国家标准方法比较，该前处理方法安全、环保、高效、可靠，提高了脱氢乙酸前处理的效率；分析检测结果的稳定性、准确度、精密度均有一定程度的提高。[b]关键词：[/b]多功能净化平台；脱氢乙酸；液相色谱 我国食品中脱氢乙酸的液相色谱检验方法是依据国家标准GB5009.121-2016第二法[sup][/sup]进行检测。样品前处理过程中，对C18固相萃取柱的净化方法为人工手动完成固相萃取柱的活化、上样、淋洗、洗脱等步骤。人工方法处理过程费时费力，稳定性欠缺，净化效果往往不是很好也不稳定，所用的有机溶剂易挥发，污染环境[sup][/sup]，对操作人员的身体健康造成伤害。但目前自动化和高通量的样品前处理方法鲜见报道，笔者研究了多功能平台在脱氢乙酸的前处理中的净化条件，并与国家标准方法进行了比较，以期运用于自动化批量检测提供参考依据。[b]1 材料与方法1.1 仪器与试剂1.1.1 仪器设备[/b] 多功能进化平台：Freedom EVO 100-8 SPE型； 高效液相色谱仪：Agilent1260型； 数控超声波清洗器：KQ5200DE型； 高速离心机；TDL-5-A型； pH计：PHS-3C型； C18固相萃取柱：500mg，6mL。[b]1.1.2 试剂[/b] 脱氢乙酸标准品，纯度≥99.5%； 甲醇（色谱纯） 乙酸铵（分析纯） 氢氧化钠（分析纯） 甲酸（分析纯） 硫酸锌（分析纯） 脱氢乙酸标准储备液（1.0mg/mL）。[b]1.1 方法1.2.1 多功能净化平台对脱氢乙酸的前处理方法[/b] 准确称取2 g-5 g试样，置于50 mL容量瓶中，加入约10 mL水，用20g/L氢氧化钠溶液调pH值至7.5，加水稀释至刻度，摇匀，置于离心管中，4000 r/min离心10 min。取20 mL上清液用10 %甲酸溶液调pH值至5，定容到25 mL。分2次移取5mL待净化液，以17 μL/s的流速过已活化的固相萃取柱后，用2000 μL空气吹扫；分2次移取5 mL水，以17 μL/s的淋洗速度淋洗固相萃取柱后，用2000 μL空气吹扫；用2 mL 70 %甲醇溶液洗脱，以17 μL/s的洗脱速度进行洗脱后，用1000μL空气排干小柱，收集洗脱液2 mL，涡旋混合，过0.45μm有机滤膜，供高效液相色谱测定。[b]1.2.2 液相色谱测定[/b] 色谱柱：C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相：甲醇+乙酸铵溶液（体积比：10+90）；流速: 1.0 mL/ min；波长：293 nm；进样量：10 μL。 根据保留时间定性，外标峰面积法定量。[b]1.2.3 试验设计[/b] 多功能净化平台可精确控制加液流速和空气吹扫体积，可以减少手动加液和吹扫带来的溶液交叉污染、净化淋洗洗脱不完全和时间的浪费，可以让净化、淋洗和洗脱三个步骤效率 达到最佳。由于多功能净化平台实际流速范围位4.17 μL/s ~ 4167 μL/s，选取8、17、35 μL/s三个加液流速进行选择。经过试验，选取1000μL、2000μL、3300μL三个空气吹扫体积进行选择。 本研究进行单因素试验，确定多功能净化平台的最佳净化条件。同时，进行此方法稳定性、精密度试验和与GB 5009.121-2016（第一法）前处理方法进行对比。[b]2 多功能净化平台条件的优化选择2.1 多功能净化平台加液流速的选择[/b] 称取四种类型试样各7份，每份5.0 g。每种试样中一份为本底样，三份为一组加入一种含量的脱氢乙酸标准溶液。每组试样在净化过程中只改变净化、淋洗、洗脱三步骤中的一个加液速度，其余过程按照多功能净化平台对脱氢乙酸的前处理方法处理。采用高效液相色谱仪测得脱氢乙酸含量并计算回收率。结果见表1。表1 不同加液流速下的脱氢乙酸回收率[table][tr][td=1,3][align=center]食品[/align][align=center]名称[/align][/td][td=1,3][align=center]加标量[/align][align=center](mg/kg)[/align][/td][td=3,1][align=center]待净化样液流速[/align][align=center]（μL/s）[/align][/td][td=3,1][align=center]淋洗液流速[/align][align=center]（μL/s）[/align][/td][td=3,1][align=center]洗脱液流速[/align][align=center]（μL/s）[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]8[/align][/td][td][align=center]17[/align][/td][td][align=center]35[/align][/td][td][align=center]8[/align][/td][td][align=center]17[/align][/td][td][align=center]35[/align][/td][td][align=center]8[/align][/td][td][align=center]17[/align][/td][td][align=center]35[/align][/td][/tr][tr][td=3,1][align=center]回收率（%）[/align][/td][td=3,1][align=center]回收率（%）[/align][/td][td=3,1][align=center]回收率（%）[/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center]橙汁[/align][/td][td][align=center]20[/align][/td][td][align=center]92.1[/align][/td][td][align=center]93.2[/align][/td][td][align=center]75.2[/align][/td][td][align=center]93.2[/align][/td][td][align=center]91.2[/align][/td][td][align=center]80.6[/align][/td][td][align=center]91.2[/align][/td][td][align=center]90.4[/align][/td][td][align=center]83.1[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]100[/align][/td][td][align=center]95.2[/align][/td][td][align=center]94.9[/align][/td][td][align=center]74.8[/align][/td][td][align=center]94.9[/align][/td][td][align=center]95.3[/align][/td][td][align=center]79.3[/align][/td][td][align=center]95.3[/align][/td][td][align=center]98.3[/align][/td][td][align=center]85.2[/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center]糕点[/align][/td][td][align=center]40[/align][/td][td][align=center]93.2[/align][/td][td][align=center]95.8[/align][/td][td][align=center]78.1[/align][/td][td][align=center]95.8[/align][/td][td][align=center]94.9[/align][/td][td][align=center]82.1[/align][/td][td][align=center]94.9[/align][/td][td][align=center]94.3[/align][/td][td][align=center]83.7[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]400[/align][/td][td][align=center]90.7[/align][/td][td][align=center]96.2[/align][/td][td][align=center]79.2[/align][/td][td][align=center]96.2[/align][/td][td][align=center]95.2[/align][/td][td][align=center]80.6[/align][/td][td][align=center]95.2[/align][/td][td][align=center]93.4[/align][/td][td][align=center]82.1[/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center]桃罐头[/align][/td][td][align=center]100[/align][/td][td][align=center]96.7[/align][/td][td][align=center]95.6[/align][/td][td][align=center]73.8[/align][/td][td][align=center]95.6[/align][/td][td][align=center]97.1[/align][/td][td][align=center]75.4[/align][/td][td][align=center]97.1[/align][/td][td][align=center]95.3[/align][/td][td][align=center]80.7[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]200[/align][/td][td][align=center]92.4[/align][/td][td][align=center]93.2[/align][/td][td][align=center]70.6[/align][/td][td][align=center]93.2[/align][/td][td][align=center]96.4[/align][/td][td][align=center]79.3[/align][/td][td][align=center]96.4[/align][/td][td][align=center]96.5[/align][/td][td][align=center]85.3[/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center]酱腌菜[/align][/td][td][align=center]80[/align][/td][td][align=center]93.2[/align][/td][td][align=center]90.1[/align][/td][td][align=center]75.9[/align][/td][td][align=center]90.1[/align][/td][td][align=center]91.0[/align][/td][td][align=center]77.1[/align][/td][td][align=center]91.0[/align][/td][td][align=center]92.1[/align][/td][td][align=center]79.3[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]200[/align][/td][td][align=center]91.7[/align][/td][td][align=center]90.7[/align][/td][td][align=center]76.8[/align][/td][td][align=center]90.7[/align][/td][td][align=center]89.9[/align][/td][td][align=center]72.6[/align][/td][td][align=center]89.9[/align][/td][td][align=center]94.2[/align][/td][td][align=center]84.5[/align][/td][/tr][/table] 由表1对比可得，加液流速太小，净化时间过长；加液流速太大，导致脱氢乙酸难以完全吸附在固相萃取柱上也不能完全洗脱下来。从实际检测和数据准确性考虑选择多功能净化平台加液流速控制均为17μL/s（相当于1mL/min）。[b]2.2 多功能净化平台吹扫空气体积的选择[/b] 称取四种类型试样各7份，每份5.0 g。每种试样中一份为本底样，三份为一组加入一种含量的脱氢乙酸标准溶液。每组试样在净化过程中只改变上样、淋洗、洗脱三步骤中的一个空气吹扫体积，其余过程按照多功能净化平台对脱氢乙酸的前处理方法处理。采用高效液相色谱仪测得脱氢乙酸含量并计算回收率。结果见表2。表2 不同空气吹扫体积下脱氢乙酸回收率[table][tr][td=1,4][align=center]食品[/align][align=center]名称[/align][/td][td=1,4][align=center] [/align][align=center]脱氢乙酸[/align][align=center]加标量[/align][align=center](mg/kg)[/align][/td][td=9,1][align=center]空气吹扫体积（μL）[/align][/td][/tr][tr][td=3,1][align=center]上样后[/align][/td][td=3,1][align=center]淋洗后[/align][/td][td=3,1][align=center]洗脱后[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1000[/align][/td][td][align=center]2000[/align][/td][td][align=center]3300[/align][/td][td][align=center]1000[/align][/td][td][align=center]2000[/align][/td][td][align=center]3300[/align][/td][td][align=center]1000[/align][/td][td][align=center]2000[/align][/td][td][align=center]3300[/align][/td][/tr][tr][td=9,1][align=center]回收率 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由表2对比可得，上样和淋洗后空气吹扫体积太小和太大都导致脱氢乙酸不能完全吸附在固相萃取柱上或者净化不完全；洗脱后空气吹扫体积太大对脱氢乙酸的回收率没有太大影响。综合考虑，确定上样和淋洗后空气吹扫体积均为2000μL，淋洗后空气吹扫体积为1000μL。[b]2.3 方法与国标的符合性[/b] 多功能净化平台的最佳净化条件：加液速度为17μL/s，上样和淋洗后空气吹扫体积均为2000μL，淋洗后空气吹扫体积为1000μL。在此条件下，脱氢乙酸回收率在91%~99%之间，符合GB/T 27404-2008[sup][/sup]的要求。[b]3 多功能净化平台稳定性、精密度试验及与国家标准方法的比较试验3.1 多功能净化平台稳定性试验[/b] 多功能净化平台设备具有8个独立移液通道，所以选取4种不同基质的空白样品，向样品中加入相同含量脱氢乙酸标准溶液，提取后采用多功能净化平台进行前处理，测定脱氢乙酸含量并计算回收率，进行稳定性试验。结果见表3。表 3 同一时刻同一加标量的不同基质空白样品中脱氢乙酸回收率稳定性实验（n=6）[table][tr][td][align=center]脱氢乙酸加标量[/align][align=center]40mg/kg[/align][/td][td=2,1][align=center]苹果汁[/align][/td][td=2,1][align=center]橙汁[/align][/td][td=2,1][align=center]糕点[/align][/td][td=2,1][align=center]葡萄汁[/align][/td][/tr][tr][td=1,2][align=center]回收率（%）[/align][/td][td]38.2[/td][td][align=center]37.6[/align][/td][td]38.7[/td][td][align=center]38.1[/align][/td][td]36.1[/td][td]35.8[/td][td]36.9[/td][td]35.2[/td][/tr][tr][td]95.5[/td][td][align=center]94.0[/align][/td][td]96.8[/td][td][align=center]95.2[/align][/td][td]92.6[/td][td]89.5[/td][td]92.2[/td][td]88.0[/td][/tr][/table] 由表3可得，不同基质空白样品加标溶液中脱氢乙酸回收率均在80%以上，变化幅度很小，稳定性良好。[b]3.2 多功能净化平台准确度试验[/b] 选取不同类型的样品，加入不同含量的脱氢乙酸标准溶液，提取后采用多功能净化平台进行前处理，测定脱氢乙酸含量并计算回收率，进行准确度试验。结果见表4。表4 不同加标量的不同样品中脱氢乙酸回收率准确度实验（n=6）[table][tr][td][align=center]样品[/align][align=center]名称[/align][/td][td][align=center]脱氢乙酸含量[/align][align=center](mg/kg)[/align][/td][td][align=center]脱氢乙酸加标量[/align][align=center](mg/kg)[/align][/td][td][align=center]加标后测得脱氢乙酸含量[/align][align=center](mg/kg)[/align][/td][td][align=center]回收率（%）[/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center]橙汁[/align][/td][td=1,3][align=center]0[/align][/td][td][align=center]20[/align][/td][td][align=center]18.2[/align][/td][td][align=center]91.1[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]40[/align][/td][td][align=center]37.5[/align][/td][td][align=center]93.8[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]100[/align][/td][td][align=center]98.4[/align][/td][td][align=center]98.4[/align][/td][/tr][tr][td=1,3][align=center]糕点[/align][/td][td=1,3][align=center]0[/align][/td][td][align=center]40[/align][/td][td][align=center]36.9[/align][/td][td][align=center]89.9[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]200[/align][/td][td][align=center]198[/align][/td][td][align=center]99.1[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]400[/align][/td][td][align=center]402[/align][/td][td][align=center]100.5[/align][/td][/tr][/table] 由表4可以看出，不同加标量的不同样品中脱氢乙酸回收率在89.9~100.5%之间，符合GB 5009.121-2016《食品安全国家标准 食品中脱氢乙酸的测定》在添加浓度2 mg/kg~10 mg/kg浓度范围内，回收率在80 %~110 %之间的要求。[b]3.3 与国家标准方法的精密度比较试验[/b] 为验证本方法的可行性、可靠性和准确性，选取了具有代表性的空白样品分别采用多功能净化平台的方法和国家标准方法进行了脱氢乙酸回收率与精密度比较试验，结果见表5。表5 采用多功能净化平台方法和国家标准方法的脱氢乙酸回收率及精密度比较实验（n=6）[table][tr][td=1,2][align=center]样品[/align][align=center]名称[/align][/td][td=1,2][align=center]加标量[/align][align=center](g/kg)[/align][/td][td=4,1][align=center]手动方法[/align][/td][td=4,1][align=center]多功能净化平台方法[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]结果（n=6）[/align][/td][td][align=center]平均[/align][align=center]结果[/align][/td][td][align=center]回收率（%）[/align][/td][td][align=center]RSD（%）[/align][/td][td][align=center]结果（n=6）[/align][/td][td][align=center]平均[/align][align=center]结果[/align][/td][td][align=center]回收率[/align][align=center]（%）[/align][/td][td][align=center]RSD[/align][align=center]（%）[/align][/td][/tr][tr][td=1,12]面包[/td][td=1,6][align=center]0.3[/align][/td][td][align=center]0.27[/align][/td][td=1,6][align=center]0.24[/align][/td][td=1,6][align=center]80.0[/align][/td][td=1,6][align=center]8.5[/align][/td][td][align=center]0.26[/align][/td][td=1,6][align=center]0.27[/align][/td][td=1,6][align=center]90.0[/align][/td][td=1,6][align=center]5.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.25[/align][/td][td][align=center]0.25[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.24[/align][/td][td][align=center]0.29[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.21[/align][/td][td][align=center]0.28[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.26[/align][/td][td][align=center]0.27[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.24[/align][/td][td][align=center]0.26[/align][/td][/tr][tr][td=1,6][align=center]0.5[/align][/td][td][align=center]0.46[/align][/td][td=1,6][align=center]0.45[/align][/td][td=1,6][align=center]90.0[/align][/td][td=1,6][align=center]5.62[/align][/td][td][align=center]0.46[/align][/td][td=1,6][align=center]0.48[/align][/td][td=1,6][align=center]96.0[/align][/td][td=1,6][align=center]2.82[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.48[/align][/td][td][align=center]0.48[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.41[/align][/td][td][align=center]0.49[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.43[/align][/td][td][align=center]0.5[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.46[/align][/td][td][align=center]0.48[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]0.46[/align][/td][td][align=center]0.49[/align][/td][/tr][/table] 表5可以说明：两种方法均符合国家标准要求，但采用多功能进化平台的前处理方法得到的脱氢乙酸回收率均高于手动固相萃取净化方法，相对标准偏差均低于手动固相萃取净化方法。可见，本方法具有较高的精密度和可靠性，减少了偶然误差。[b]4 结论[/b] 多功能净化平台的最佳净化条件为：加液速度为17μL/s，上样和淋洗后空气吹扫体积为2000μL，洗脱后空气吹扫体积为1000μL。此条件下，样品中脱氢乙酸含量回收率为75%~115%，RSD小于6.0％。 与国家标准方法相比，采用多功能净化平台进行脱氢乙酸前处理，在符合国家标准GB 5009.121-2016（第一法）和GB/T 27404-2008要求的前提下，减少了试剂的交叉污染和净化洗脱效率的不完全不稳定，确保了脱氢乙酸含量回收率的稳定性、提高检测结果的准确度和精密度，缩短了约1/2的净化时间，提高了检验人员的工作效率并保障了检验人员的人身安全。[b]参考文献[/b]（略）

高效液相色谱方法检测食品中黄曲霉毒素研究进展由于黄曲霉具有极强的毒性和致癌性，大多数国家和地区都规定了食品中的限量要求，这就要求对黄曲霉毒素进行有效的监督，一方面可以保护公众的食品安全和健康，另一方面可以减少食品对外贸易带来的经济损失。高效液相色谱法是一种检测痕量物质常用的方法，检测黄曲霉毒素的一般步骤是用适合的溶剂提取目标物，净化浓缩，C18柱分离后检测器检测，根据检测器的不同，可分为荧光检测法和质谱检测法两类。1提取和净化样品提取溶剂的选择取决于黄曲霉毒素自身的物化性质，一般用到的提取溶剂有甲醇、乙腈的水溶液，尽管早期的方法中经常用到氯仿，但考虑到氯仿对环境的影响，现已基本上被替代；一些新的提取技术，如超临界流体萃取、加压流体萃取（加速流体萃取）被用于黄曲霉毒素的提取，但是超临界流体的提取物常有大量的杂质，而加压流体萃取设备价格昂贵，限制了其广泛使用。样品的提取溶液中常含有共提取物，给黄曲霉毒素的检测带来干扰和基质效应。为了排除基质对分离和检测的干扰，常用的净化手段有液液萃取、固相萃取柱、免疫亲和柱和多功能净化柱。对于含油量大的样品，常需要在提取溶液中加入正己烷用液液萃取法去油；传统固相萃取柱在黄曲霉毒素净化方面的应用较早，填料主要有C18、硅胶、弗洛里硅土、氧化铝等，但由于选择性差，且往往既耗时又浪费溶剂，因此不及免疫亲和柱和多功能净化柱应用广，而微型固相萃取柱的应用便于建立简单快速、成本低廉的前处理方法。Mahoney等采用硅胶柱（30 mg/3 mL）建立了简单可靠的方法来分析检测来自不同植物源的油中黄曲霉毒素，结果表明硅胶柱可以选择性保留植物油中的黄曲霉毒素；Sobolev使用自制氧化铝柱（200 mg/1.5 mL）用于来净化检测主要农产品（玉米粉、棉籽、花生、杏仁、英国胡桃、巴西坚果、阿月浑果）中的黄曲霉毒素，该方法简单快速，成本低廉。由于弗罗里硅土对黄曲霉的吸附能力强，因此用弗罗里硅土柱净化洗脱需要用到大量的丙酮-水溶液；Sobolev对于弗罗里硅土柱（130 mg/1.5 mL）净化的的洗脱条件进行了研究，结果显示丙酮/水/甲酸(96:3.7:0.3, v/v)为洗脱溶剂时的洗脱能力最强，2 mL的洗脱体积即可得到大于98%的回收率；该净化方法用于花生、巴西坚果、玉米、棉籽等样品基质，其中花生基质中B1定量限达到0.05 µg/kg；使用商品化的弗罗里硅土柱可以保证样品检测的重复性，同时可进行实验室间结果比对。免疫亲和柱具有高效和特异性吸附的优点，可同时实现样品的净化和富集，达到比普通固相萃取柱更好的净化效果和更高的信燥比，而且有机试剂使用量少，因此免疫亲和柱越来越多用于黄曲霉毒素等真菌毒素的样品净化。AOAC对免疫亲和柱净化的黄曲霉毒素检测方法进行了协同研究；我国将免疫亲和柱用于黄曲霉毒素检测的国标方法（GB/T 18979-2003）。多种真菌毒素免疫亲和柱的商品化使同时净化分析多种真菌毒素成为可能，如人参和姜中黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的同时净化，谷物中黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮三种真菌毒素的同时净化富集；最新推出的商品化免疫亲和柱可实现黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A、伏

[size=16px][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &][font=宋体]固相萃取柱（[/font]solid phase extraction[font=宋体]，[/font]SPE[font=宋体]）净化法[/font] SPE[font=宋体]净化法是目前最为常用的真菌毒素前处理方法之一。[/font][/font][font=宋体]通过建立[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]SPE[/font][font=宋体]联合超高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url][/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]-[/font][font=宋体]串联质谱（[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]ultra-high performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry[/font][font=宋体]，[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]UHPLC- MS/MS[/font][font=宋体]）技术，检测槟榔及其加工产品中的真菌毒素，发现槟榔中常见的真菌毒素为[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]AFB[sub]1[/sub][/font][font=宋体]、[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]AFB[sub]2[/sub][/font][font=宋体]、[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]AFG[sub]1[/sub][/font][font=宋体]、[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]AFG[sub]2[/sub][/font][font=宋体]和[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]AFM[sub]1[/sub][/font][font=宋体]。占丽琴等[/font][font=宋体]基于[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]Poly-Sery[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]HLB SPE[/font][font=宋体]柱，建立[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]UHP[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/font][font=宋体]法，检测莲子中[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]10[/font][font=宋体]种真菌毒素，为莲子的安全使用提供有效依据。[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]Wang[/font][font=宋体]等[/font][font=宋体]比较了基于固液萃取[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]-SPE[/font][font=宋体]法和[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]QuEChERS 2[/font][font=宋体]种前处理方法，建立了超快速[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]串联质谱法（[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]ultra-fast liquid chromatography tandem mass spectrometry[/font][font=宋体]，[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]UF[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS[/font][font=宋体]）检测黄芪根中[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]21[/font][font=宋体]种真菌毒素，发现新鲜黄芪中含青霉酸，发霉黄芪中含[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]OTA[/font][font=宋体]和[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]OTB[/font][font=宋体]。[/font][font=system-ui, -apple-system, BlinkMacSystemFont, &]SPE[/font][font=宋体]净化法快速高效、成本低，也应用于使君子、薏苡仁[/font][font=宋体]等中药材中真菌毒素的富集。[/font][/size]

本人这些年一直在从事霉菌毒素检测相关的工作. 当然论坛里有很多潜水大侠呀,不过看起来很忙:)用过的方法有, 薄层层析,酶联免疫试剂盒,荧光光度法, 高效液相法;前处理用过的方法有,液液萃取,固相萃取,多功能净化柱,免疫亲和柱,分子免疫印迹, mini小柱..处理的样品有, 各种原粮, 各种复合饲料,发酵物, 果汁,果浆,果粉,谷朊粉,各类奶粉,液体奶,植物油,各种食品加工品, 中药, 香料, ....做过的项目有: 黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1,M2, 玉米赤霉烯酮,呕吐毒素,赭曲霉毒素,伏马毒素B1,B2, 展青霉素,桔霉素,T2,HT2,DAS, Neosolaniol,3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3 Acetyl DON) ,5-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (15 Acetyl DON),雪腐镰刀菌烯醇( Nivalenol),镰刀菌烯酮-X, 国家对食品,饲料, 药材中霉菌毒素越来越重视,出口这一块也是抓的越来越紧.所以,本人愿意就相关问题预以协助,说的不合适的地方,请高手手下留刀!让这个行业的门槛变的更低,技术能力更高....

本人小白，求助大家关于利用固相萃取配合液相检测真菌毒素的问题固相萃取柱可以同时净化多种真菌毒素成分么？是否可以反复利用，具体如何购买？固相萃取柱和免疫净化柱是一个东西么？

我用GB/T5009.23-2006《食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定》试着做了几次，但结果很不理想。有峰的时候同一标准峰高峰面积差别太大，而且有时候很不规则，但更多是根本没峰，做不出来。问了很多人都说柱前衍生很难做，有条件用柱后衍生的好。但是既然连国标都有柱前衍生的方法，就应该有他存在的道理。我做不出来，请各位大大指点下柱前衍生到底怎么做能提高成功率。 柱前衍生化步骤如下（一段）：从多功能净化柱的收集池内转移2ml净化液到棕色具塞小瓶中，在真空吹干机下60摄氏度吹干（或在60摄氏度水浴下氮气吹干，注意不要使液体鼓吹、飞溅）。加入200ul正己烷和100ul三氟乙酸，密闭混匀30s后，在40摄氏度烘干箱中衍生15min。室温真空吹干机吹干（或室温水浴下氮气吹干），以200ul水---乙腈（85+15）溶解，混匀30s，1000r/min离心15min，取上清液至液相色谱仪的样品瓶中，供测定用。还有我想问下做柱后衍生的，柱后衍生化系统，什么型号的，推荐下，可能要买个。。。。。

目前国内市场上流通的检测产品多为检测单一毒素的亲和柱和固相萃取柱，这些产品进行净化处理时存在操作繁琐、污染大、定量差、耗时长的特点，尤其是目前流行使用的免疫亲和柱净化成本高，操作繁琐，造成企业和国家质检机构的检测成本居高不下。针对这一问题，Pribolab公司的技术研发人员已经研究出了同时高效准确的处理多种毒素的多毒素免疫亲和柱，可同时检测黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、呕吐毒素、伏马毒素和T2毒素等11种毒素(aflatoxins, ochratoxin, zearalenon, deoxynivalenol, fumonisins and T2-Toxin)，一次过柱，得到多种毒素。这样可以更加省时省力省心。

在当今社会，食品安全越来越受到人们的关注和重视，尤其是在发生三聚氰胺和地沟油等一系列事件之后，人们更加重视食品安全问题。黄曲霉毒素这类真菌在世界不同地区都发现大量存在于食品中，它主要是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌产生的一类有毒次生代谢物。目前，已知的黄曲霉毒素及其衍生物有20余种 , 即B1，B2，B2a，G1，G2，G2a，M1，M2等，黄曲霉毒素B1是其中毒性最大的一种，实验结果显示，其毒性是人们熟知的剧毒药氰化钾的10倍，是砒霜的68倍。黄曲霉毒素B1可诱发癌症和皮下肉瘤，并且可使动物的肝、肾、大脑和神经系统等产生病变。自20世纪60年代以来，有关黄曲霉毒素的危害被大量报道，以致黄曲霉毒素已成为最受人们关注的一种真菌毒素。因此，寻求准确、快速、简便、价廉的检测方法，对黄曲霉毒素进行高效的定性定量分析，是黄曲霉毒素研究的一个重要方面。以下对黄曲霉毒素的检测方法研究进展进行评述。【薄层色谱法】1.薄层层析（TLC）法TLC 法是测定黄曲霉毒素的经典方法，在薄层板展开后，在365 nm紫外灯下，黄曲霉毒素B1，B2，G1和G2分别显示紫色、蓝紫色、绿色和绿色荧光。TLC 法的特异性较差，灵敏度相对较差，且测定黄曲霉毒素专一性不够，经常引起测量误差。但由于此法设备简单，易于普及，所以国内外仍在使用。2.高效薄层（HPTLC）法HPTLC 法测定黄曲霉毒素采用目前国际上流行的样品处理方法——固相萃取法（SPE）中针对真菌和病毒的多功能净化（MFC）柱。采用MFC柱净化后，仅用单相展开即可达到分离测定的目的，不仅节省了工作时间，提高了工作效率，而且进一步减少了有毒有害溶剂的用量。Stroka等将免疫亲合柱净化应用于 TLC法测定，进行单相展开并用荧光密度计定量，此方法能检测含量明显低于当前欧盟标准的黄曲霉毒素。Kamimura 等用HPTLC方法测定玉米、花生、荞麦等样品，并与通过公职分析化学家协会（AOAC）认证的分析花生及花生制品中黄曲霉素的官方方法CB（Contamination Branch）法和 BF（Best Foods）法进行比较，4种主要黄曲霉毒素的检测限均不高于0.2μg／kg，回收率与CB法一样均高于BF法。3.高压薄层色谱（OPTLC）法高压薄层色谱于1979年由Tyihak提出，它结合了经典薄层色谱法、高效薄层色谱法与高效液相色谱法的优点，是一种能够提高薄层分离效率的平面液相色谱技术。随着实验技术的不断成熟，OPTLC 法在饲料和食物中黄曲霉毒素的检测方面的应用越来越多。Eszter Papp等发展了一系列适合检测玉米和小麦中黄曲霉毒素的OPTLC方法。【高效液相色谱（HPLC）法】由于具有稳定、准确、灵敏等优点，HPLC法已成为当前进行黄曲霉毒素定量研究的首选方法。分析黄曲霉毒素的液相色谱方法包括正相液相色谱方法（NPLC）和反相液相色谱方法（RPLC）。反相高效液相色谱(RP-HPLC)系统易操作，流动相具有低毒性，可同时分离、分析样品中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2且不受样品沸点、热稳定性、和分子量限制，所以目前使用荧光检测器的反相HPLC法已经成为检测黄曲霉毒素的主要测定方法。Chiavaro等根据不同环式糊精增强黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1荧光释放的不同效果，发展了将环式糊精加入到流动相中的高效液相色谱法，黄曲霉毒素 B1，B2，G1，G2 的检测限均在0.3μg／kg以下，M1的检测限在0.0005μg／kg以下，几种黄曲霉毒素都呈线性反应关系。这种方法也被用于测定自然污染及人工添加样品。【免疫学方法】黄曲霉毒素的免疫学检测方法是将生物大分子的免疫学特性与化学特性结合起来的检测方法。该方法具有快速、灵敏、对样品纯度要求不高的特点，特别适合于大批量样本的检测。用于检测黄曲霉毒素的免疫学方法有酶联免疫吸附测定法、放射免疫测定法、亲和层析法、荧光偏振免疫测定法及免疫层析法。1.酶联免疫吸附测定(ELISA)法ELISA法是在免疫学和细胞工程学基础上发展出来的一种微量检测技术，分为直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法，其优点是对黄曲霉毒素B1的检测定性定量准确而且检测速度快（比薄层法提高了近 200倍），特异性强，荧光物质、色素、结构类似物对结果无干扰，回收率高，提取方法简单，成本较低，特别适合于对黄曲霉毒素Bl污染监测控制中大量样品的筛查。缺点是ELISA法中酶的活性易受反应条件影响，测定结果重复性较差，测定结果易出现假阳性问题；此外ELISA试剂寿命短，需要低温保存，葡萄酒类、含盐量高的酱油、含脂量高的花生油在提取时要进行调节pH 值、脱盐、脱脂等特殊处理。2.亲和层析法亲和层析法利用免疫化学反应原理，采用大剂量的单克隆抗体，选择性吸附提取液中的抗原物质黄曲霉毒素。由于抗原-抗体反应具有高灵敏、高选择、高特异性等特点，从而大大提高了试样的净化效果及检测灵敏度，同时可显著减少有毒有害试剂的使用，有利于操作人员的身体健康和环境保护。3.放射免疫(RIA)法RIA法与ELISA法基本相似，不同的是它们所使用的标记物不同，ELISA 法的标记物为酶，RIA法所用的标记物一般为放射性元素氚(3H)。该方法是将毒素 -3H标记物与样品加抗体进行竞争性结合，除去未结合的部分，测定其放射性，放射性强则说明样品中毒素含量低，反之毒素含量高。实验证明 ELISA比RIA灵敏度更高且更简便，并且RIA需要特殊设备，有放射性元素污染问题，人员需要安全防护，现在已经很少使用。4.荧光偏振免疫测定法荧光偏振免疫测定法的主要原理是荧光标记的毒素在样品缓冲液中与未荧光标记的毒素对特异性抗体的竞争性结合。分子质量越大，分子旋转速度越慢，荧光偏振值越大。Nasir等报道了用基于荧光偏振的装置检测不同谷物中的黄曲霉毒素。5.免疫层析（IC）法IC法是20世纪80年代初发展起来的一种快速免疫分析技术，其操作简单，快速，人员不用培训，且不需特殊的仪器设备，非常适用于现场测试和进行大量样品的初筛。免疫学与仪器结合方法近年来，随着黄曲霉毒素在食品中的检出标准越来越严格，很多人采取了免疫学与仪器结合的方法来检测黄曲霉毒素，发展了黄曲霉毒素的检测方法。1.免疫亲和柱净化荧光光度法张艺兵等提出了一种以免疫亲和柱净化结合荧光光度法检测黄曲霉毒素的新方法，此法利用抗原抗体——对应的特异吸附特性，以黄曲霉毒素单克隆抗体为填充柱，特异性、选择性地吸附黄曲霉毒素，再以甲醇为流动相将结合的黄曲霉毒素洗脱下来然后通过溴溶液衍生，所得衍生物可发射荧光，再通过荧光光度计分析即可以测定毒素含量。此方法克服了TLC法和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒、有异味的有机溶剂对操作人员造成身体伤害和污染环境的缺点，所需仪器设备轻便易携带，自动化程度高，操作简单，灵敏度可达1μg／kg，回收率在85％以上。一个样品只需10～15 min便能直接读出测试结果，比传统方法快几个小时甚至几天时间。缺点是此法只能测定黄曲霉毒素的总量且对试剂要求比较高，检测中药材黄曲霉毒素的含量时结果会出现一些假阳性。2.免疫亲和柱高效液相色谱法免疫亲和柱（IAC）是将特异性的黄曲霉毒素单克隆抗体与载体蛋白偶联并填柱而成。由于抗原抗体有一一对应的特异性吸附关系，所以IAC能特效性地、高选择性地吸附黄曲霉毒素，而让其它杂质通过柱子，使样品得以纯化，吸附的黄曲霉毒素可以被极性有机溶剂洗脱，再用HPLC法进行定量检测，其优点是具有高度特异性，可除去绝大多数干扰物质，检测限达1ng／g，还具有快速、溶剂使用少、可以自动化和再生利用的特点。缺点是柱成本高，商品化 IAC 仅适合几种毒素，有时需要加预柱净化。3.多功能净化柱高效液相色谱法Wilson和Romer开发了独特的真菌毒素多功能净化(MFC)柱，MFC柱提供一种快速的一步萃取纯化方法，工作原理和操作过程与其它净化柱相反，它含有亲脂性(非极性)和电荷活性成分(极性)，当样品提取液通过柱时，MFC柱保留样品液中的干扰物质如脂肪、蛋白质类化合物和碳水化合物等，而待测组分黄曲霉毒素不被吸附而直接通过，从而一步完成净化过程，除去90％的杂质，减少了传统净化方式淋洗杂质和洗脱待测样品的步骤，从而达到净化目的，这一点是IAC 和普通SPE净化柱所不具备的，并且与IAC相比净化效果同样理想，回收率高，灵敏度高，检测限低。【超光谱（HS）法】一直以来，黄曲霉毒素的检测都用化学方法，并且有些化学方法的检测结果非常准确，但是化学方法都要耗费大量的检测时间，检测费用较高且损坏检测样品，所以研究一种快速、准确、无损样品的检测方法对粮食产业是至关重要的，超光谱法检测黄曲霉毒就是这样一种方法。它的原理是首先通过光源激发待测样品，再通过设备捕捉成像，然后对成像进行特征抽取和特征排列，最后实现区别受黄曲霉毒素污染和未受黄曲霉毒素污染的样品。Haibo Yao等利用超光谱法分析了长波紫外线激发下的玉米粒的光谱BGYF 响应，首先用中心激发波长为365nm的紫外线光照射检测样品，被检测到黄绿色荧光的玉米粒，手动挑选出来，结果显示，在500～515 nm波长范围具有较强的黄绿色荧光发射光谱峰，选取500～515 nm有较强黄绿色荧光的玉米粒作为阳性组，用高效液相色谱法测定，与正常组对比，呈黄绿色荧光成像的黄曲霉毒素浓度的平均水平浓度是5.114μg／g。这个实验证明了玉米只有在感染黄曲霉毒素多的时候才会发出黄绿色荧光

伏马毒素的危害伏马毒素（Fumonisin，FB）是由镰刀菌属在一定的温度和湿度下产生的水溶性代谢产物，对食品污染的情况在世界范围内普遍存在，主要污染玉米及玉米制品。动物试验和流行病学资料已表明，伏马菌素主要损害肝肾功能，能引起马脑白质软化症和猪肺水肿等，并与我国和南非部分地区高发的食道癌有关，现已引起世界范围的广泛注意。伏马毒素的检测国内外已建立了多种方法。伏马毒素的分析方法通常包括提取、纯化、分离和检测几个步骤。目前，大多数方法均采用免疫亲和柱（Pribolab）纯化样品，应用HPLC或GC结合不同的检测器进行。伏马毒素伏马毒素（B1, B2,和B3)是由镰孢菌(霉)属念珠菌产生的真菌毒素。在世界范围内都发现了伏马毒素污染玉米的现象。研究表明伏马毒素可以诱发老鼠患肝癌，猪的肺水肿和马的脑脊髓白质病。在一些地区中玉米中伏马毒素含量很高，在这些地区（比如中国和非洲）人的食道癌具有高发性。适用PriboFast伏马毒素试剂盒原理是竞争酶联免疫反应，用于检测玉米中的伏马毒素。原理这个 Pribolab伏马素素检测试剂盒的原理是固相直接竞争酶联免疫反应。聚苯乙烯微孔板中包被伏马毒素的特异性抗体，这种抗体和伏马毒素的各个亚型都有很好的交叉反应。利用90%的甲醇从样品中提取伏马毒素，把提取的样品和HRP（辣根过氧化物酶）标记的伏马毒素混匀并加入对应的孔检测。酶标记毒素与标准品或样品中的伏马毒素竞争与包被在微孔底部的抗体结合。孵育一段时间后，倒出孔里的液体，清洗除去没有反应的物质后加入显色底物（TMB），在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中伏马毒素的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的伏马毒素浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD450nm读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。提取步骤中需要的材料研磨器；烧杯：125ml；天平：量程为20g量筒：100ml甲醇：每个样品36ml 蒸馏水：每个样品4ml滤纸 ：用针孔过滤器代替；漏斗测定步骤：100μL或200μL 单道或多道移液器；计时器； 洗瓶；吸水纸；450nm 滤光片的酶标仪警告和注意事项1、使用前将所有的试剂拿到室温（19℃-27℃）。2、试剂贮存在2℃到8℃，不要使用过期的产品。不要冰冻试剂盒。3、没有用完的试剂不要回收到原试剂瓶中。操作过程中按照要求精确量取试剂体积。4、整个操作过程要严格按照要求的时间和温度。5、不要用口移取试剂或样品。6、终止液里含有酸，不要与皮肤和眼睛接触。如果有接触，一定要用清水清洗。7、所有的材料、试剂和仪器可能被样品或标准品中的伏马毒素污染，在操作过程中一定要戴手套。8、使用完毕，处理好所有的材料、试剂和仪器。样品提取步骤注意：样品必须按照有关规定收集1、配制90%的甲醇溶液（每个样品需要：4ml蒸馏水+36ml甲醇）2、研磨代表性样品（使50%的样品可以通过一个20目的滤网）。3、称量20g研磨过滤后的样品加入40ml 90%的甲醇溶液，样品稀释比为1:2(w/v)。

伏马毒素主要是由串珠镰刀菌菌f.moniliforme和f.proliferatum在一定温度和湿度条件下繁殖所产生的次级代谢产物。到目前为止，发现的伏马菌素有FA1、FA2、FB1、FB2、FB3、FB4、FC1、FC2、FC3、FC4和FP1共11种。粮食在加工、贮存、运输过程中易受上述两种真菌污染，特别是当温度适宜时，更利于其生长繁殖，从而产生出一类结构性质相似的毒素，其中FB1是其主要组分占60％以上，其毒性也最强。因此，伏马毒素可以通过粮食加工、饲料生产等过程对畜牧业乃至人类健康产生较严重的危害。FB1对食品污染的情况在世界范围内普遍存在，主要污染玉米及玉米制品，其污染的饲料主要为以玉米为原料的饲料。1996年我国对玉米、小麦等粮食作物中FB1污染进行调查。发现不同地区均有不同程度污染。我国食道癌高发区林县的玉米伏马菌素污染率为48%。因此，人们怀疑该地区食道癌高发与食用污染此毒素玉米相关。该毒素已被世界卫生组织列为近年来首先进行研究的几种霉菌毒素之一。早在1988年南非科学家就对食道癌发病率高和低的地区进行过调查，食道癌发病率与主食玉米受伏马毒素污染呈正相关，进一步的动物试验也得到了相同的结果。1994年中国学者和日本学者对食道癌高发区的河南省林县进行了一次调查，发现该地区主食玉米中伏马毒素水平高达30~50mg／kg，发霉玉米中伏马毒素最高值达118.4mg／kg。目前伏马毒素引发食道癌的机理还不清楚，需进一步确证和研究。Pribolab®（普瑞邦）应用免疫亲和柱净化，利用高效液相色谱仪和荧光检测器检测可提供伏马毒素测定的HPLC检测方案，得出的结果准确可靠，检出限好，是一种很好的检测伏马毒素的方法。

目前检测黄曲霉毒素的方法通常为免疫亲和层析净化高效液相色谱法和酶联免疫吸附法（ELISA）这两种方法。酶联免疫吸附法（ELISA）操作简单，快速，但灵敏度低且会出现假阳性，需使用免疫亲和柱法进行精确定性、定量，而免疫亲和柱又存在使用繁琐、价格昂贵、储存条件苛刻、保存期短等缺点。 针对上述问题，迪马科技最新开发出新型、快速、低成本的ProElutTM AFT固相萃取方法。该方法可实现与免疫亲和柱法相当的高精度回收率结果，但使用成本却大大降低。ProElutTM AFT固相萃取法单个样品的检测成本为免疫亲和柱法的1/4，酶联免疫法的1/2，同时ProElutTM AFT固相萃取法简单易操作、不需要专用的大型设备、对操作人员要求不高，特别适用于各种食品生产企业及检测机构，将大大降低黄曲霉毒素的检测成本。

真菌毒素无处不在 真菌毒素的检测方法1 生物鉴定法生物鉴定法利用真菌毒素能够影响微生物、家禽、水生生物等的细胞代谢过程来鉴定真菌毒素的存在，根据对生物体产生的病变、异常或死亡等判定真菌毒素的危害，该方法对样品的纯度要求较低，该方法主要用于定性分析，专一性较差，灵敏度较低，一般只是作为其他分析方法的佐证。2 化学分析方法化学分析方法检测真菌毒素主要包括以下步骤：提取、脱脂、净化、分离和鉴定。早期常用的化学分析方法有薄层层析法（Thin Layer Chromatography, TLC）和柱层层析法（ColumnChromatography,CC）。在20世纪80年代，我国将TLC作为食品及饲料中黄曲霉毒素的标准测定方法（GB/T8381-1987），将样品经提取、净化和浓缩处理后，在薄层层析板上分离后，利用黄曲霉毒素在紫外照射下可发荧光的特性进行检测。张华报道的薄层层析法检测检测霉菌毒素的灵敏度为5μg/kg，方法的结果准确，重现性好，回收率为 85%-100%。用薄层层析方法己分离出黄曲霉毒素、杂色曲霉素、青霉酸和构巢曲霉素等。柱层层析在真菌毒素样品前处理过程中得到了广泛的应用，柱层层折常用的吸附剂有氧化铝、活性炭、硅胶、镁等，将吸附剂填充到管中形成固定相，将样品提取液上柱，用流动相洗脱，利用样品中不同物质在固定相和流动相中分配系数的不同，实现样品中不同物质的分离，进而进行检测。利用亲和力不同的溶剂和不同固定相的组合可以形成不同分离能力的层析柱。基于吸附剂进行前处理的柱层析分离技术对靶标物的选择性不强，近年来，基于免疫亲和层析技术的样品前处理在真菌毒素提取中应用逐渐广泛。免疫亲和柱是将真菌毒素特异性抗体通过一定方式偶联固定在载体基质上，装柱形成微柱，用于样品前处理。其工作原理是样品溶液中的真菌毒素在流经亲和柱时，载体基质上的抗体特异性的捕获样品溶液中的真菌毒素，使真菌毒素得到净化和富集，待上样完成后用高浓度的甲醇、乙腈等溶液洗脱，将真菌毒素释放出来，得到的洗脱液用于检测。3 仪器分析法仪器分析方法是对样品进行一定的提取、净化处理后，借助检测仪器设备对待测靶标物进定性、定量分析的技术。在真菌毒素的检测分析中，常用的方法有高效液相色谱法（HighPerformance Liquid Chromatography, HPLC）、超高效液相色谱法（Ultra HPLC，UHPLC）、高效液相色谱法与质谱联用方法（HPLC-tandem mass Spectrometry， HPLC-MS/MS）、气相色谱与质谱联用法、高效液相毛细管电泳方法等。HPLC 方法是 20 世纪 60 年代末在气相色谱基础上发展起来的一种以液体为流动相的新型谱技术，在真菌毒素的检测中常采用反向色谱法。近年来，在 HPLC 方法的基础上发展起来的UHPLC 和 HPLC-MS/MS 方法比 HPLC 方法具有更高的检测灵敏度和检测通量。基于HPLC 的方法广泛的被国内外实验室和检测机构作为真菌毒素确证性检测方法。我国食品安全国家标准 GB541337-2010 中规定免疫亲和层析净化液相色谱-串联质谱法和免疫亲和层析净化高效液相色谱法分别作为乳和乳制品中 AFM1测定方法。HPLC 方法具有灵敏度高、测定结果准确可靠、特异性好的特点，基于免疫亲和柱前处理的HPLC方法与化学分析方法和生物鉴定法相比，检测时间缩短，对复杂样品的处理能力更强。但是仪器分析方法也有其缺陷，需要使用大量的有机溶剂，依赖大型精密仪器，检测成本高，需要专业的操作人员，不能满足现场快速筛查的需求。4 免疫分析方法免疫分析方法起始于20世纪50 年代，继 60 年代竞争分析原理提出后取得了巨大的进步，成为生物分析的重要手段之一。免疫分析方法从本质上说属于一种特殊形式的试剂分析法，将抗体作为核心分析试剂，基于抗体与抗原的特异性结合反应，对待测靶标物，包括小分子化合物、大分子的酶、蛋白质等，进行定性和定量分析。抗体和抗原反应的典型特点是抗体能特异性识别抗原，并发生结合反应，这种反应是可逆的，抗体与抗原的专一性比一般分析试剂间专一性强。免疫分析技术已广泛的应用于临床分析检测、食品安全检测、环境污染检测领域。免疫分析技术最早出现的是放射免疫分析，由 Berson和 Yallow首次使用，该方法的灵敏度高、特异性好，但是其最大的缺点是分析过程引入放射性核素，对操作人员和环境造成危害和污染。4.1 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA）是在免疫酶技术基础上发展起来的免疫分析方法，于 1972 年由 Engvall 首次用碱性磷酸酯酶标记免疫球蛋白用于 IgG 的测定。现已广泛的应用于分析检测领域，检测对象包括疾病诊断中的大分子检测，食品安全检测中的小分子污染物检测。ELISA 方法的原理是将抗原或抗体与酶标记后形成酶标抗原或酶标抗体，既保持抗原、抗体的免疫活性，又具有酶活性，将待测物与酶标记抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面的抗体或抗原反应，洗涤去除未反应结合的物质，最后根据固相载体上酶的量与待测靶标物的对应比例关系进行定量分析。该方法根据反应模式的不同可分为夹心 ELISA 方法和竞争ELISA 方法，夹心 ELISA 方法主要用于检测大分子化合物，竞争 ELISA 方法主要用于检测小分子化合物。真菌毒素属于小分子物质，由于只有一个抗体结合位点，因此在真菌毒素的ELISA检测中常采用竞争分析模式。Wang等人建立了基于多克隆抗体检测AFM1的ELISA快速分析方法，对AFM1和 AFB1的检测灵敏度（IC50值）为分别为 0.014 和 0.02 ng/mL。Zhang等人研制了针对 OTA 的单克隆抗体，并用该抗体建立了间接竞争ELISA 方法测定谷物中的 OTA，方法的检出限为 0.15 ng/mL，灵敏度为 1.7ng/mL，检测范围为 0.55-6.75 ng/mL。Burmistrova 等人建立的基于单克隆抗体的 ELISA 方法在 ZEA 的检测中，检出限为 0.1 ng/mL，灵敏度为。4.2 免疫亲和方法免疫亲和方法主要用于样品的前处理过程中，主要利用抗体对待测物的专一识别特性，对待测物进行净化和浓缩，能够有效的去除样品基质干扰，提高检测灵敏度和准确性。基于免疫亲和柱的色谱分离方法被我国国家标准和国际标准定为真菌毒素检测的标准方法。免疫亲和柱常与其他检测方法联用，Li 等建立了基于免疫亲和柱的 ELISA 方法检测农产品复杂基质中的 OTA，结果表明在 OTA 添加样品检测中，经过免疫亲和柱处理后的 ELISA 检测回收率明显较未经亲和柱处理的方法回收率高。免疫亲和柱不仅可以用于样品前处理，还可直接在亲和柱上进一步反应进行定性或定量分析。Yu 等人基于免疫竞争反应原理建立了在免疫亲和柱上进行可视化检测 AFM1的方法，在样品上样完成后，再从亲和柱底端加入辣根过氧化酶（HRP）标记的 AFM1，洗脱后加入酶底物，进行显色，显色深浅与样品中 AFM1浓度成反比，根据显色深浅判别 AFM1的含量，该方法对 AFM1的灵敏度为 40 ng/L。Yuan等人基于免疫竞争原理，在凝胶上固定抗体后，制成免疫亲和柱，使其竞争性结合氯霉素和 HRP 标记的氯霉素，加入底物后显色，最终实现了对氯霉素的快速检测，方法的检出限为 1 ng/mL。4.3 [color=#0751

大家在用免疫亲和柱-高效液相色谱法测定黄曲霉毒素和呕吐毒素等真菌毒素时，有没有一些技术要点可以一起分析下，比如前处理过程、净化过程等。新人刚接触这块，希望大家能多指导，十分感谢！