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液相色谱峰拖尾处理方法

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  • 【原创大赛】液相色谱峰形拖峰与预柱的判断及处理

    【原创大赛】液相色谱峰形拖峰与预柱的判断及处理

    液相色谱峰形拖峰与预柱的判断及处理一、案例介绍：l 测定油悬浮剂中的有效成份：双草醚；l 采用国产仪器伍丰LC-100分别搭配250×4.6mmODS柱和250×4.6mm BRISA LC2 C18柱，对应流动相比例分别为甲：乙：水=20：35：45和甲：乙：水=20：40：40，检测波长为246nm；l 发生该异常（严重的峰形拖尾）状况时，仪器可见部分均正常运行，系统反馈压力较正常的上升2.0~3.2Mpa，其它操作均符合实验操作之要求；l 按标准操作所得液相图谱峰形异常，主要是拖尾因子1.00变化至1.77；二、案例图谱标准图谱：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191700_668316_2239775_3.png双草醚-液相分析标准图谱 1拖尾因子1.00注：实验条件250×4.6mm BRISA LC2 C18柱，流动相甲：乙：水=20：40：40，检测波长为246nm，目标峰保留时间为16.232min异常图谱：（不可接受）http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016071409341955_01_2239775_3.png双草醚-液相异常分析图谱1 拖尾因子1.77 注：实验条件250×4.6mm BRISA LC2 C18柱，流动相甲：乙：水=20：40：40，检测波长为246nm，目标峰保留时间为16.232minhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016071409345934_01_2239775_3.png双草醚-液相异常分析图谱2 拖尾因子1.79 注：实验条件250×4.6mm BRISA LC2 C18柱，流动相甲：乙：水=20：35：45，检测波长为246nm，目标峰保留时间为19.240minhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016071409353819_01_2239775_3.png双草醚-液相异常分析图谱3-1 拖尾因子1.28注：实验条件250×4.6mm ODS柱，流动相甲：乙：水=20：35：45，检测波长为246nm，目标峰保留时间为16.407minhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016071409361418_01_2239775_3.png双草醚-液相异常分析图谱3-2 拖尾因子1.28(上图目标峰起始部分和结束部分放大图)三、异常问题与分析1. 异常问题简述： 在进行正确的操作后，通过观察双草醚液相分析的图谱发现在同条件下所得目标峰的保留时间无明显变化，但出现明显或不可接受的峰形拖尾现象。按经验调整流动相中有机相（降低5%）与水相（增加5%）的比例再次进样分析，所得图谱发现目标峰的保留时间有明显变化但峰形的拖尾因子仍未得到改善。即正常情况下和微调后无法对分析条件进行优化。2. 原因分析：http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/10/2016071409371743_01_2239775_3.png 鉴于液相分析条件的确定性（科学合理）、人为操作的正确性（准确无误）、色谱柱的使用寿命（才启用8个月）以系统运行压力的异常结果（正常压力为16.3~16.6Mpa上升到18.3Mpa及以上），故判断为流动相传输系统异常故障。四、异常状况处理http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607140938_600425_2984502_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/07/201607140938_600426_2984502_3.png更换新的预柱1注：更换预柱柱芯后之所以更换整个预柱主要是为止先前的柱套内仍有异物，如此可避免产生污染，从而达到更换预柱柱芯的目的；旧的预柱可超声清洗后留待备用……装上新预柱后，顺道把色谱柱反冲洗了一下……然后……然后就好……五、异常状况处理之结果 经处理后液相分析所得图谱恢复正常（0.95≤拖尾因子≤1.05），确定是预柱内有异物造成流动相传输系统故障导致系统压力升高和目标峰峰形严重拖尾。不可以打脸……

  • 液相色谱峰前拖尾

    液相色谱峰一直峰前拖尾，目前流动相比例为乙腈:水=60:40，色谱柱为安捷伦C18色谱柱，各位老师遇到过这种情况吗？[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/01/202201221432111823_1075_4080951_3.png[/img]

  • 液相色谱纯物质峰鼓包拖尾

    液相色谱纯物质峰鼓包拖尾

    [color=#444444]液相色谱纯物质峰鼓包拖尾，用质谱确定峰鼓包处不是其他物质，求解决方法~（走基线是很小很小的规则的波浪型，基本等同于直线）[/color][color=#444444]自己手画，因为原图不放大看不太明显，放大后就是左边的样子。。。。[/color][color=#444444][img=,690,428]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/08/201908130944573375_9115_1739275_3.jpg!w690x428.jpg[/img][/color]

  • 羧酸酯液相色谱峰拖尾

    [table=100%][tr][td]我做的一种羧酸酯液相色谱峰拖尾，流动相是乙腈的反相梯度洗脱，柱子是C8柱，怎么从改变流动相入手消除拖尾呢？[/td][/tr][/table]

  • 【求助】岛津-20A液相色谱峰拖尾

    我的岛津-20A液相色谱连了紫外检测器和电化学检测器，现在紫外有峰拖尾现象，电化学检测器峰拖尾更严重！对于电化学检测器，设置电位越低，风拖尾越严重！当然电位再高，也还有拖尾现象......当然，我的色谱柱是没问题的，我测过柱效了......我测得是黄酮类化合物，以前在其他仪器上测得峰都没有拖尾现象......请高手指点迷津......

  • 液相色谱峰拖尾严重

    液相色谱测全氟辛酸拖尾好严重，峰形丑，测的时候样品浓度比较高，样品浓度低了几乎没响应，并且浓度越大保留时间越前，要怎么改善峰形?求助(已经在流动相中加了三乙胺)[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108091954043841_3618_5229531_3.png[/img]

  • 液相色谱峰拖尾，排除柱子原因

    我们有一台岛津10A的液相色谱，平时使用的都很正常，最近总是出现峰型拖尾的现象，排除柱子与样品的问题，检测器的流通池也洗过了，还有检测器的能量有800，基线正常，不知道是什么原因

  • 液相色谱峰拖尾分析

    w 液相色谱峰拖尾分析从色谱柱分离机理角度 造成拖尾的原因多数是因为要分离的化合物是碱性的。 硅胶表面的硅羟基 pKa 值是2-3， 也就是当流动相的 pH 值大于这个值，硅羟基就会解离，这时这个氧带的外层电子对碱的吸 附是特别强的，很多人知道硅羟基对碱性物质吸附，解决办法：应选择封尾的柱子，但是即 使封尾，不管工艺怎么好，都不会是100%能封住。那么就争取从 pH 值角度考虑，减小流 动相 pH，或者说加三乙胺，三乙胺容易被这个解离的硅羟基吸附，其实作用相当于对色谱 柱封尾。 从流动相的角度 用甲醇做碱性物质要相对比乙腈好，因为甲醇含有-OH，多少能抑制硅羟基解离，加缓冲盐 的目的也是抑制硅羟基解离。 所以说种种方法都是抑制硅羟基解离或竞争吸附， 尽量减少解 离的硅羟基对碱性物质的吸附。 前沿峰图 非常有可能是色谱柱的硅胶溶解造成的。 前沿峰还有可能是由溶解性效应引起， 就是溶解样 品的溶液对样品的溶解性远大于流动相。 现在市场上有种色谱柱经过表面处理之后残留的硅 羟基 pKa 值能达到5.5-6我不说哪家生产的，用这种柱子做你的流动相 pH 控制在5.5以下拖 尾的效果非常好， 另外建议做碱性化合物时选择色谱柱尽量选择比表面积小， 含碳量低些的 色谱柱，效果会好。 A、 峰拖尾 、 1、筛板阻塞(a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱) 2、色谱柱塌陷(填充色谱柱) 3、干扰峰(a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱) 4、流动相 PH 选择错误 (调整 PH 值。对于碱性化合物，低 PH 值更有利于得到对称峰) 5、样品与填料表面的溶化点发生反应(a、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、换柱子) B、 峰前延 、 1、柱温低(升高柱温) 2、样品溶剂选择不恰当 (使用流动相作为样品溶剂) 3、样品过载 (降低样品含量) 4、色谱柱损坏 (见 A1、A2) C、 峰分叉 、 1、保护柱或分析柱污染图 (取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻 塞， 拆下来清洗。 如果问题仍然存在， 可能是柱子被强保留物质污染， 运用适当的再生措施。 如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。) 2、样品溶剂不溶于流动相 (改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。) D、 峰变形 、 1、样品过载 (减少样品载量) E、 早出的峰变形 、 1、样品溶剂选择不恰当 (a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂) F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰 、 1、柱外效应(a、调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) b、使用小体积的流通池) G、 K’增加时，脱尾更严重 增加时， 、 增加时 1、二级保留效应，反相模式(a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入 盐或缓冲剂(或离子化样品)d、更换一支柱子) 2、二级保留效应，正相模式(a、加入三乙胺(或碱性样品)b、加入乙酸(或酸性样品)c、加入 水(或多官能团化合物)d、试用另一种方法) 3、二级保留效应，离子对 (加入三乙胺(或碱性样品)) H、 酸性或碱性化合物的峰拖尾 、 1、缓冲不合适 (a、使用浓度50-100mM 的缓冲液 b、使用 Pka 等于流动相 PH 值的缓冲液) I、 额外的峰 、 1、样品中有其他组份 (正常) 2、前一次进样的洗脱峰 (a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速) 3、空位或鬼峰 (a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积) J、 保留时间波动 、 1、温控不当 (调好柱温) 2、流动相组分变化 (防止变化(蒸发、反应等)) 3、色谱柱没有平衡 (在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱) K、 保留时间不断变化 、 1、流速变化 (重新设定流速) 2、泵中有气泡 (从泵中除去气泡) 3、流动相选择不恰当 (a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相) L、 基线漂移 、 1、柱温波动,即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测 器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。 (控制好柱子和流动相的温度，在检测 器之前使用热交换器图) 2、 流动相不均匀,流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。 (使用 HPLC 级的溶 剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。) 3、流通池被污染或有气体 (用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1M 的 硝酸。(不要用盐酸)) 4、检测器出口阻塞,高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线 (取出阻塞物或更换管子。参 考检测器手册更换流通池窗) 5、流动相配比不当或流速变化 (更改配比或流速,定期检查流动相组成及流速) 6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时 (用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在 分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗) 7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成 (检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及 HPLC 级的溶剂) 8、 样品中有强保留的物质(高 K’值)以馒头峰样被洗脱出， 从而表现出一个逐步升高的基线。 (使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子) 9、使用循环溶剂，但检测器未调整(重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用 新的流动相) 10、检测器没有设定在最大吸收波长处。(将波长调整至最大吸收波长处)柱头有空隙。解决 办法：使用填料或玻璃珠填充柱顶部 柱上样品超载。解决办法：使用更高负载量的固定相。增加色谱柱内径、减少样品量、 单峰- 存在干扰性组分。解决办法：净化样品；预分离 存在未扫的死体积。解决办法：减少接头的数量、确保进样器密封垫紧密、确保接头正 确固定 碱性化合物- 硅醇相互作用。解决办法：换成聚合物固定相 碱性基质- 硅醇相互作用。 解决办法： 使用更强的流动相或添加竞争碱 （例如， 三甲胺） 硅胶基- 柱降解。解决办法：使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻 硅胶基- 柱降解。解决办法：使用特种色谱柱；聚合物柱或空间位阻+

  • 【第三届原创参赛】解决液相色谱峰拖尾小实例

    【第三届原创参赛】解决液相色谱峰拖尾小实例

    维权声明：本文为liuliuhui原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。概述： 灯盏细辛，习称灯盏花，为菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus(Vant.)Hand-Mazz]的干燥全草，主要分布在云南、广西等地。行温、味辛、微苦，具有散寒解表、祛风除湿、温络止痛之功效。小儿脓耳，捣汁滴入耳内；左瘫右痪，风湿疼痛，水煎点水酒服。临床上主要用于缺血性心脑血管病的治疗，对冠心病、高粘滞血症也有一定疗效。临床所使用的制剂有口服和静脉滴注两类，收载于《中华人民共和国药典》（1977年版一部）。近年来对其化学成分、药理学研究及临床应用都进行了深入研究。[font=宋体] 由于本人需检测灯盏花素中灯盏乙素的含量，因此对样品进行了初步的液相分析。[/font][/font][color=#d40a00]结构： 灯盏花素（[i]breviscapine）是从灯盏细辛中提取的黄酮类有效成分，主要含有灯盏乙素和少量的灯盏甲素。结构如下：[/font][img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010301545_256026_2164743_3.jpg[/img]由以上结构可以看出，灯盏乙素和甲素中都含有一个葡萄糖醛酸的结构基团。下面主要是灯盏乙素的液相色谱图普通液相色谱条件如下:色谱柱：YMC C18（250×4.6mm，5μm） 检测波长：335nm柱 温： 30℃ 流 速：0.8mL/min流动相：甲醇/水=45% 进 样 量：15μL[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010301554_256029_2164743_3.jpg[/img]如图可见，色谱峰存在严重拖尾现象，这就是由于灯盏乙素中含有一个羧基，硅胶对酸性化合物的吸附，在洗脱过程中使酸性物质不能同时到达检测器，造成峰展宽。在普通的液相条件下峰型很难看，因此将色谱条件改为:色谱柱：YMC C18（250×4.6mm，5μm） 检测波长：335nm柱 温：30℃ 流 速：0.8mL/min流动相：甲醇/水=45% ([color=red]AcOH:5[color=red]‰) 进 样 量：10μL[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010301655_256045_2164743_3.jpg[/img]加入乙酸后，峰型明显得到改善。（注：加入磷酸的效果也很好，但出于对柱子的维护方面考虑加入乙酸） 讨论：1． 色谱峰拖尾原因：A：硅胶对酸性化合物的吸附引起的拖尾；B：进样量太大造成超载现象容易引起拖尾；C：样品溶剂较流动相的极性大容易造成拖尾现象。2． 解决方案：A：硅胶对酸性化合物的吸附引起的拖尾 硅胶对酸性化合物的吸附，在洗脱过程中使酸性物质不能同时到达检测器，造成峰展宽。灯盏乙素，为酸性化合物，普通液相条件下严重拖尾，加入酸后，首先与硅胶表面的酸性硅醇基反应，抑制了灯盏乙素与硅醇基的反应，达到调节峰型的目的。B：进样量太大造成超载现象引起的拖尾 当进样量过大时导致拖尾可减少进样量。C：样品溶剂的极性较流动相的极性大 如果是此原因引起的拖尾现象可将样品用流动相溶解。[/font]

  • 纯干货！关于液相色谱峰的拖尾问题

    纯干货！关于液相色谱峰的拖尾问题

    同学们如果仔细查看色谱图，就会发现几乎每一个色谱峰都有一定程度的拖尾现象。[img=,690,388]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111348068132_888_2428063_3.jpg!w690x388.jpg[/img]这本不是问题，但是当拖尾严重到一定程度，就会影响我们的分析结果，所以今天就让我们来谈一谈关于液相色谱峰的拖尾问题吧！什么是拖尾峰前沿陡峭，后沿较前沿平缓的不对称峰，称为拖尾峰。下图就是一个拖尾峰，[img=,690,324]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111348271812_3608_2428063_3.jpg!w690x324.jpg[/img]我们会发现这个峰的右半边峰宽是大于左半边峰宽的，尤其在基线处更加明显。那如何评价色谱峰的拖尾呢？绝大多数情况下制药行业的从业人员会选择用美国药典（USP）中拖尾因子(Tf)来评价[img=,690,318]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111349308492_1619_2428063_3.jpg!w690x318.jpg[/img]而其余的分析行业内人员则会选择用对称因子（As）来评价，关于这两个因子的计算我们之前就有相关的视频介绍大家可以回顾一下：拖尾因子和对称因子到底什么关系？其中，拖尾因子Tf=(a+b)/2a其中a和b分别是5%峰高处的左右半峰宽对称因子As=c/d其中c和d分别是10%峰高处的左右半峰宽如果a=b，c=d那么拖尾因子和对称因子的数值都等于1，也就是该峰不拖尾。实际工作中，当拖尾因子和对称因子小于2时，这两个值是非常接近的，如下图所示。[img=,690,319]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111350579682_8480_2428063_3.jpg!w690x319.jpg[/img]拖尾峰会对工作造成什么影响？1. 影响峰高的计算先来看看第一个峰（Tf=1.0）和最后一个峰(Tf=3.5)，它们的峰面积虽然是相同的，但是由于最后一个峰拖尾很严重，所以它们的峰高相差三倍。当我们使用峰高来计算最低检出限时拖尾峰的负面影响就会比较明显。2. 影响峰面积的计算当我们对色谱峰进行积分来计算峰面积时，峰的起点和终点通常情况下通过色谱峰的斜率来确定。色谱峰越拖尾，它的尾部基线越平缓终点就越难确认。这一点在基线波动较大时体现的更加突出，那么它就会影响我们积分得到的峰面积。3. 影响对某些痕量组分的确认在药典计算有关物质的相关要求中会提到峰面积达到主峰面积0.1%的组分都要参与计算。[img=,690,312]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111351483718_1035_2428063_3.jpg!w690x312.jpg[/img]那么当一些小峰和前面的峰分离度不是很好时就会容易被隐藏在前面峰的拖尾处从而无法参与计算。综上所述，拖尾峰会对色谱分析的定性定量结果都会产生影响。产生拖尾峰的原因是什么？01拖尾峰的形成是因为在色谱分离时出现了一种以上的保留机制，并且其中一种保留机制是超负荷的。在日常分析中大多数情况下会使用反相色谱。以常用的C18柱为例，C18是被键合在载体硅胶表面的，而硅胶是由硅和氧聚合而成的，所以它的表面会出现各种形态的硅羟基[img=,690,170]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111352103052_1682_2428063_3.jpg!w690x170.jpg[/img]虽然理想的状态是流动相中的样品只和固定相C18发生作用。而实际上一半以上的硅胶表面并没有被键合上C18，所以硅胶表面会裸露出大量的硅羟基（Si-OH）。[img=,690,292]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111352281909_361_2428063_3.jpg!w690x292.jpg[/img]而单独的自由硅羟基会和流动相中的样品发生作用，形成拖尾。于是在最近的十几年中，色谱柱供应商致力于生产出高纯度的硅胶载体由于新型硅胶在无金属离子环境下制造所以表面不会残留金属离子也会减少拖尾另外，硅胶表面尽可能减少自由的硅羟基，未与固定相键合的硅羟基尽可能形成螯合或聚合状态，用来减少拖尾峰的产生。02当色谱柱经历过高温、强酸，或者一些极端使用方法导致固定相流失较多后，色谱柱中的自由硅羟基也会变得越来越多从而更加容易造成拖尾峰03拖尾峰的形成也有可能是因为柱外的死体积较多，导致样品在死体积处发生了滞留和扩散。[img=,690,539]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2018/04/201804111353128162_7615_2428063_3.jpg!w690x539.jpg[/img]04当样品中出现了碱性化合物，碱性基团更容易与色谱柱中的硅羟基发生作用形成拖尾峰。如何改善拖尾峰01对于过去的自由硅羟基较多的色谱柱，建议在流动相中加入三乙胺来抑制拖尾。实验表明三乙胺有非常好的拖尾抑制效果。另外，由于三乙胺呈碱性需要大家在使用时考虑色谱柱的ph值耐受范围，某些情况可能需要加入酸性调节剂。对于新型的表面以耦合和聚合硅胶为主的硅胶载体，我们就很少使用三乙胺来抑制拖尾，而是通过调整流动相的ph3来抑制硅胶的离子化。02当色谱柱柱效降低导致拖尾峰时建议更换色谱柱。03建议在液相色谱中正确安装并且使用与您的仪器匹配的管线接头，以减少死体积的产生。摘自微信公众号《色谱学堂》

  • 高效液相色谱方法及应用__（第二版）

    跟大家分享一本书《高效液相色谱方法及应用》第二版，感兴趣的版友可以下载附件查阅，也欢迎补充。全书的目录如下：作 者： 于世林出 版 社： 化学工业出版社 本社特价书所属丛书： 色谱技术丛书 册 数： 条 形 码： 9787502569068 ; 978-7-5025-6906-8I S B N ： 7502569065 出版时间： 2005-6-1开 本： 小16开 页 数： 333定 价： 39 元第一章 绪论第一节 高效液相色谱法的特点一、与经典液相(柱)色谱法比较二、与气相色谱法比较三、高效液相色谱法的优点四、高效液相色谱方法发展简介第二节 高效液相色谱法的分类一、按溶质在两相分离过程的物理化学原理分类二、按溶质在色谱柱洗脱的动力学过程分类第三节 高效液相色谱法的应用范围和局限性一、应用范围二、方法的局限性参考文献第二章 高效液相色谱仪简介第一节 流动相及储液罐一、储液罐二、流动相脱气第二节 高压输液泵及梯度洗脱装置一、高压输液泵二、输液系统的辅助设备三、梯度洗脱装置第三节 进样装置一、停流进样装置二、六通阀进样装置三、自动进样器第四节 色谱柱一、柱材料及规格二、柱填料三、保护柱四、柱连接方式五、柱温控制第五节 检测器一、检测器的分类和响应特性二、紫外吸收检测器三、折光指数检测器四、电导检测器五、荧光检测器六、蒸发光散射检测器第六节 色谱数据处理装置一、微处理机二、色谱工作站参考文献第三章 液固色谱法和液液色谱法第一节 分离原理一、吸附系数二、分配系数第二节 固定相一、液固色谱固定相二、液液色谱固定相第三节 流动相一、表征溶剂特性的重要参数二、液固和液液色谱的流动相第四节 二元溶剂体系中液固和液液色谱的保留规律一、溶质保留值的基本方程式二、液固色谱的保留值方程式三、液液色谱的保留值方程式参考文献第四章 键合相色谱法第一节 分离原理一、正相键合相色谱法的分离原理二、反相键合相色谱法的分离原理第二节 固定相一、键合固定相的制备及分类二、键合固定相的性质三、使用键合固定相应注意的问题第三节 流动相一、溶剂的选择性分组二、在键合相色谱中选择流动相的一般原则三、改善色谱分离选择性的方法四、多元混合溶剂的多重选择性五、溶质保留值随溶剂极性变化的一般保留规律六、用线性溶剂化自由能关系（LSER）来表征反相液相色谱中溶质的保留值方程式第四节 新型高效液相色谱的固定相和流动相一、新型高效化学键合固定相二、化学键合固定相分类方法简介三、整体色谱柱四、超热水流动相第五节 离子对色谱法一、分离原理二、固定相、流动相和对（反）离子三、影响离子对色谱分离选择性的因素参考文献第五章 梯度洗脱第一节 基本原理一、等度洗脱二、梯度洗脱第二节 影响梯度洗脱的各种因素一、梯度洗脱时间(tG)对分离的影响二、强洗脱溶剂组分B浓度变化范围的影响三、梯度陡度对保留值的影响四、柱温变化对保留值的影响五、梯度洗脱程序曲线形状的影响六、影响梯度洗脱的其他变量第三节 优化梯度洗脱的方法一、建立梯度洗脱方法的一般步骤二、梯度洗脱中的实验条件第四节 梯度洗脱的图示方法一、二元溶剂梯度洗脱二、三元溶剂梯度洗脱三、四元溶剂梯度洗脱四、用极坐标和球面坐标描述梯度洗脱参考文献第六章 体积排阻色谱法第一节 分离原理一、分布系数二、体积排阻色谱法的特点第二节 固定相一、固定相的分类二、凝胶固定相的特性参数三、凝胶色谱柱的制备及谱图特点第三节 流动相一、凝胶渗透色谱的流动相二、凝胶过滤色谱的流动相第四节 凝胶渗透色谱法测定聚合物分子量分布一、聚合物分子量、分子量分布及测定的意义二、凝胶渗透色谱图的解析及数据处理参考文献第七章 高效液相色谱法的基本理论第一节 表征液相色谱柱填充性能的重要参数一、总孔率二、柱压力降三、柱渗透率第二节 高效液相色谱的速率理论一、影响色谱峰形扩展的各种因素二、范第姆特方程式的表达及图示第三节 诺克斯方程式一、描述色谱柱性能的折合参数二、诺克斯方程式第四节 色谱柱操作参数的优化一、三个柱操作参数的表达式二、HPLC中实用柱操作参数的优化三、柱操作参数优化的图示表达方法第五节 “无限直径”效应和柱外效应一、“无限直径”效应二、柱外效应第六节 超高效液相色谱一、超高效液相色谱的理论基础二、实现超高效液相色谱的必要条件三、超高效液相色谱的应用参考文献第八章 高效液相色谱分离条件的优化第一节 高效液相色谱中色谱参数的相关性一、色谱参数的分类二、色谱参数的相关性第二节 色谱分离条件优化标准的选择一、难分离物质对的峰对分离优化标准二、整体色谱图的优化标准第三节 色谱响应函数和色谱优化函数一、Morgan和Deming提出的色谱响应函数二、Watson和Carr提出的色谱响应函数三、Glajch和Kirkland提出的色谱优化函数四、Berridge提出的色谱响应函数第四节 色谱分离条件的优化方法一、单纯形法二、窗图法三、混合液设计实验法四、重叠分离度图法五、等强度洗脱和梯度洗脱的优化图示法第五节 优化HPLC分离的计算机辅助方法一、实验设计系统二、人工智能系统第六节 高效液相色谱专家系统简介一、专家系统的组成二、专家系统的使用方法参考文献第九章 微柱液相色谱法第一节 方法简介一、微型柱的分类二、微柱液相色谱法的优点和缺点第二节 基本理论一、柱外效应二、管壁效应三、稀释效应四、分离阻抗第三节 仪器装置一、输液泵系统二、进样系统三、柱系统四、检测器系统五、连接管和接头第四节 微柱的制备一、评价微柱性能的重要参数二、影响微柱分离效率的相关参数三、微柱的制备方法第五节 微柱液相色谱的新技术一、纳米液相色谱技术二、超高压液相色谱技术参考文献第十章 二维高效液相色谱法第一节 描述分离体系效能的参数一、峰容量二、信息量第二节 二维高效液相色谱的技术功能一、切割功能二、反冲洗脱功能三、痕量组分的富集功能第三节 二维高效液相色谱的流路系统一、多通路切换阀二、二维高效液相色谱的流路系统第四节 二维高效液相色谱在蛋白质组学研究中的应用参考文献第十一章 建立高效液相色谱分析方法的一般步骤和实验技术第一节 样品的性质及柱分离模式的选择一、样品的溶解度二、样品的分子量范围三、样品的分子结构和分析特性第二节 分离操作条件的选择一、容量因子和死时间的测量二、色谱柱操作参数的选择三、样品组分保留值和容量因子的选择四、相邻组分的选择性系数和分离度的选择第三节 高效液相色谱法的实验技术一、溶剂的纯化技术二、色谱柱的装填技术三、色谱柱的平衡、保护与清洗、再生技术四、梯度洗脱技术五、色谱柱前和柱后的衍生化技术六、样品的预处理技术参考文献符号表

  • 【原创大赛】高效液相色谱法测定食品中的脱氢乙酸方法的优化

    脱氢乙酸具有较强抑制细菌、霉菌及酵母菌发酵的作用，尤其对霉菌的抑制作用最强，是一种高效的防霉、防腐剂。其还具有脂溶性强、热稳定性高的特点，在摄氏120℃的杀菌温度下仍保持杀菌能力不变。国外曾广泛使用于食品、药品中，我国自上世纪70年代中其开始用于食品防腐，曾用于果汁、酱菜、腐乳、干酪、人造奶油、乳酸菌饮料、月饼、果酱等食品。而脱氢乙酸的缺点是毒性较强，目前我国允许在腐乳、酱菜、果蔬汁、肉类制品、糕点、月饼、焙烤馅料中作为防腐剂使用，最大使用量0.5克/公斤。 脱氢乙酸的国标检测方法为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法，样品经过有机溶剂的萃取、净化、浓缩等步骤的复杂处理，并且脱氢乙酸在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]条件下，色谱峰出现拖尾现象，使定性、定量影响较大。据报道利用高效液相色谱法食品中的脱氢乙酸，采用纯水、乙醇-水、碱性水对样品进行超声萃取处理，萃取液经过滤后上机检测。作者在试验中发现，利用脱氢乙酸难溶于水而易溶于甲醇、乙醇、乙腈等有机溶剂的特性，样品均浆后酸化处理，用乙腈提取，经微孔过滤后再用高效液相色谱进行定性、定量测定，方法的灵敏度、准确度和回收率高，精密度良好，重现性好，前处理简便快捷，更能满足样品分析要求。 实验样品材料采用一般市售的果汁、酱菜、腐乳、糕点等食品。果汁样品精确称取5.00 g于50 ml的离心管中；酱菜、腐乳、糕点等食品样品事先均匀，准确称取2.0～3.0 g于50ml的离心管中，加入5mL饱和氯化钠溶液和1ml盐酸溶液（1：1），用旋涡混合器混合1分钟，准确加入10mL乙腈，用旋涡混合器混合3分钟，3000转离心15分钟，取上清液经0.45μm过滤器过滤后供液相色谱测定。　　按相应的色谱条件对样液进行分析，采用外标法，以保留时间定性，以峰面积定量，测定样液中脱氢乙酸的浓度（mg/ml）。　 得到结果以下结果：一、根据扫描的结果，脱氢乙酸的最大吸收波长在230 nm和297 nm处，230 nm处吸收较强，但基体干扰较多，在波长297NM处基体干扰较少，故选取检测波长297NM。 二、动相为乙腈+水时，脱氢乙酸峰形拖尾，使用0.02 mol / L的乙酸铵代替水作流动相，峰形得到较大的改善。乙腈的比例影响出峰的时间和响应，乙腈的比例低，保留时间长，响应也会低，乙腈比例高时，出峰时间短，响应也较高。试验表明，当0.02 mol / L的乙酸铵―乙腈比例为85：15时效果较好。 三、脱氢乙酸难溶于水，易溶于苯、氯仿、乙醚。脱氢乙酸钠则易溶于水，选用水或氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液提取，提取液须净化后方可使用。本方法选用乙腈作提取液，主要考虑到脱氢乙酸能溶液于乙腈，乙腈的水溶性有利于乙腈从酸性的样液中把脱氢乙酸完全溶解，同时乙腈可沉淀蛋白质，与脂肪不溶，离心分离得到干净的提取液。 四、在相应的色谱条件下测定，脱氢乙酸的保留时间为5.775min，峰形及组分分离效果好。 五、以70%乙腈水溶液为溶剂配制浓度0.01～0.1范围内的脱氢乙酸标准使用液。以峰面积对脱氢乙酸浓度进行回归分析得回归方程式Y=2.39X×108� 1.33×105，R=0.9997，线性良好。在对同一浓度标样连续进样5次，得到脱氢乙酸的峰面积和保留时间的RSD值分别为0.35%和0.24，方法的定性和定量准确度较高。　　本文采用乙腈提取食品中脱氢乙酸，注入高效液相色谱进行测定，以保留时间定性，采用外标法定量。本方法的线性方程有良好的相关性，R=0.9997。方法加标回收率为96.2%～99.6%，变异系数RSD值为1.09%。该方法操作简便、准确，回收率高，精密度良好，重现性好，可用于优化食品中脱氢乙酸的测定。

  • 液相色谱峰的拖尾问题

    液相色谱峰的拖尾问题

    [size=15px]前沿陡峭，后沿较前沿平缓的不对称峰，[/size][size=15px]称为[/size][size=15px]拖尾峰[/size][size=15px]。[/size][size=15px]下图就是一个拖尾峰，我们会发现这个[/size][size=15px]峰的右半边峰宽是大于左半边峰宽的[/size][size=15px]，尤其在基线处更加明显。[/size][size=15px][img=,690,325]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108091255559270_6088_3005249_3.png!w690x325.jpg[/img][/size][size=15px][size=15px]那如何评价色谱峰的拖尾呢？[/size][size=15px]绝大多数情况下制药行业的从业人员会选择用美国药典（USP）中[/size][size=15px]拖尾因子(Tf)[/size][size=15px]来评价，而其余的分析行业内人员则会选择用[/size][size=15px]对称因子（As）[/size][size=15px]来评价。[/size][size=15px][/size][size=15px]关于这两个因子的计算，我们之前就有相关的视频介绍，大家可以回顾一下：拖尾因子与对称因子的关系[/size][/size][size=15px][size=15px][img=,690,318]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108091256404910_8344_3005249_3.jpg!w690x318.jpg[/img][/size][/size][size=15px][size=15px][size=15px]其中，拖尾因子Tf=(a+b)/2a，[/size][size=15px]a和b分别是5%峰高处的左右半峰宽。[/size][size=15px]对称因子As=d/c，其中c和d分别是10%峰高处的左右半峰宽 。[/size][size=15px]如果a=b，c=d，那么拖尾因子和对称因子的数值都等于1，也就是该峰不拖尾。[/size][size=15px]实际工作中，当拖尾因子和对称因子小于2时，这两个值是非常接近的，如下图所示。[/size][/size][/size][size=15px][size=15px][size=15px][img=,690,318]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108091257394306_2896_3005249_3.png!w690x318.jpg[/img][/size][/size][/size][align=center][size=15px][size=15px][size=15px]拖尾峰会对工作造成什么影响[/size][/size][/size][/align][size=15px][size=15px][size=15px]1、影响峰高的计算先来看看第一个峰（Tf=1.0）和最后一个峰(Tf=3.5)，它们的峰面积虽然是相同的，但是由于最后一个峰拖尾很严重，所以它们的峰高相差三倍。当我们使用峰高来计算最低检出限时，拖尾峰的负面影响就会比较明显。[/size][/size][/size][size=15px][size=15px][size=15px]2、影响峰面积的计算当我们对色谱峰进行积分来计算峰面积时，峰的起点和终点通常情况下通过色谱峰的斜率来确定。色谱峰越拖尾，它的尾部基线越平缓，终点就越难确认。这一点在基线波动较大时体现的更加突出，那么它就会影响我们积分得到的峰面积。[/size][/size][/size][size=15px][size=15px][size=15px]3、影响对某些痕量组分的确认在药典计算有关物质的相关要求中会提到，峰面积达到主峰面积0.1%的组分都要参与计算。那么当一些小峰和前面的峰分离度不是很好时，就会容易被隐藏在前面峰的拖尾处从而无法参与计算。综上所述，拖尾峰会对色谱分析的定性定量结果都会产生影响。[/size][/size][/size][align=center][size=15px][size=15px][size=15px]产生拖尾峰的原因是什么[/size][/size][/size][/align][size=15px][size=15px][size=15px]拖尾峰的形成是因为在色谱分离时出现了一种以上的保留机制，并且其中一种保留机制是超负荷的。在日常分析中大多数情况下会使用反相色谱，以常用的C18柱为例，C18是被键合在载体硅胶表面的，而硅胶是由硅和氧聚合而成的，所以它的表面会出现各种形态的硅羟基。[/size][/size][/size][size=15px][size=15px][size=15px]虽然理想的状态是流动相中的样品只和固定相C18发生作用。而实际上一半以上的硅胶表面并没有被键合上C18，所以硅胶表面会裸露出大量的硅羟基（Si-OH）。而单独的自由硅羟基会和流动相中的样品发生作用，形成拖尾。[/size][/size][/size][size=15px][size=15px][size=15px]当色谱柱经历过高温、强酸，或者一些极端使用方法导致固定相流失较多后，色谱柱中的自由硅羟基也会变得越来越多，从而更加容易造成拖尾峰[/size][/size][/size][size=15px][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px]拖尾峰的形成也有可能是因为柱外的死体积较多，导致样品在死体积处发生了滞留和扩散。[/size][/font][/size][size=15px][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px]当样品中出现了碱性化合物，碱性基团更容易与色谱柱中硅羟基发生作用形成拖尾峰。[/size][/font][/size][align=center][size=15px][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px]如何改善拖尾峰[/size][/font][/size][/align][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &]对于过去的自由硅羟基较多的色谱柱，建议在流动相中加入三乙胺来抑制拖尾。实验表明三乙胺有非常好的拖尾抑制效果。另外，由于三乙胺呈碱性，需要大家在使用时考虑色谱柱的ph值耐受范围，某些情况可能需要加入酸性调节剂。对于新型的表面以耦合和聚合硅胶为主的硅胶载体，我们就很少使用三乙胺来抑制拖尾，而是通过调整流动相的ph3来抑制硅胶的离子化。[/font][/size][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px]当色谱柱柱效降低导致拖尾峰时建议更换色谱柱。[/size][/font][/font][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px]建议在液相色谱中正确安装并且使用[/size][/font]与您的仪器匹配的管线接头，[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=15px]以减少死体积的产生。[/size][/font][/font]

  • 【求助】液相色谱峰突然拖尾严重，高手快来呀

    [B][size=3][size=2]我们公司刚买的岛津lc020A的液相，我们专门打一个产品。用的流动相是 乙腈：0.1%磷酸水溶液=15：85色谱柱为 shim vp ods C-18柱仪器和色谱柱都是新买的，用了不到20次（大约买了才45天）前几次做样，出峰是正常的。昨天下午我分析产品也是正常的，用的是纯甲醇冲洗柱子，并保留的。等我今天下午在做样品是就发现出峰不正常了。本来响应有500的峰高，现在只有50，而且原来不拖尾的，现在尾巴拖的能从3分钟一直到8分钟。我把昨天做过的样品再拿出来分析，也是拖的很严重，根本不成峰了。像是土丘一样。因为跟昨天比，是同样的样品，同样的流动相，（泵的压力也和昨天差不多）同样的波长，不知道为什么会出现拖尾那么严重的，该不会是柱子塌陷了吧，但是我柱子才用20来次，一共也才打了40针。怎么会呢？请遇到或者能解决的大虾帮帮我。[/B]

  • 【谱图】求助液相色谱拖尾现象

    我用液相色谱作了一个样品，其他条件不变，流动相用甲醇和水，80比20封形好，但没有完全分开，70比30和85比15能分开，但又拖尾现象，是什么原因？请各位高手给与指点。

  • 液相色谱峰的拖尾问题

    [img=,1061,500]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-08.jpg[/img][align=center]同学们如果仔细查看色谱图，[/align][align=center]就会发现几乎每一个色谱峰[/align][align=center]都有一定程度的拖尾现象。[/align][align=center][img=chromclass QA017 (01),700,394]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-01-e1522377624922.jpg[/img][/align][align=center]这本不是问题，[/align][align=center]但是当拖尾严重到一定程度，[/align][align=center]就会影响我们的分析结果，[/align][align=center]所以今天就让我们来谈一谈[/align][align=center]关于液相色谱峰的拖尾问题吧！[/align][hr/][align=center][color=#0392ff][b]什么是拖尾峰[/b][/color][/align][align=center]前沿陡峭，[/align][align=center]后沿较前沿平缓的不对称峰，[/align][align=center]称为[color=#0392ff][b]拖尾峰[/b][/color]。[/align][align=center]下图就是一个拖尾峰，[/align][align=center]我们会发现这个峰的右半边峰宽[/align][align=center]是大于左半边峰宽的，[/align][align=center]尤其在基线处更加明显。[/align][align=center][img=chromclass-QA017-(08),700,330]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-08-e1522377730460.jpg[/img][/align][align=center]那如何评价色谱峰的拖尾呢？[/align][align=center]绝大多数情况下[/align][align=center]制药行业的从业人员[/align][align=center]会选择用美国药典（USP）中拖尾因子(Tf)来评价[/align][align=center]而其余的分析行业内人员[/align][align=center]则会选择用对称因子（As）来评价，[/align][align=center]关于这两个因子的计算[/align][align=center]我们之前就有相关的视频介绍[/align][align=center]大家可以回顾一下：[/align][align=center]拖尾因子和对称因子到底什么关系？[/align][align=center][img=chromclass-QA017-(14),700,323]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-14-e1522377836643.jpg[/img][/align][align=center]其中，拖尾因子Tf=(a+b)/2a[/align][align=center]其中a和b分别是5%峰高处的左右半峰宽[/align][align=center]对称因子As=c/d[/align][align=center]其中c和d分别是10%峰高处的左右半峰宽[/align][align=center]如果a=b，c=d[/align][align=center]那么拖尾因子和对称因子的数值都等于1，[/align][align=center]也就是该峰不拖尾。[/align][align=center]实际工作中，[/align][align=center]当拖尾因子和对称因子小于2时，[/align][align=center]这两个值是非常接近的，[/align][align=center]如下图所示。[/align][align=center][img=chromclass QA017 (02),700,324]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-02-e1522377915826.jpg[/img][/align][align=center][color=#ff6600][b]拖尾峰会对工作造成什么影响？[/b][/color][/align][align=center][color=#0392ff][b]1. 影响峰高的计算[/b][/color][/align][align=center]先来看看第一个峰（Tf=1.0）和最后一个峰(Tf=3.5)，[/align][align=center]它们的峰面积虽然是相同的，[/align][align=center]但是由于最后一个峰拖尾很严重，[/align][align=center]所以它们的峰高相差三倍。[/align][align=center]当我们使用峰高来计算最低检出限时[/align][align=center]拖尾峰的负面影响就会比较明显。[/align][align=center][color=#0392ff][b]2. 影响峰面积的计算[/b][/color][/align][align=center]当我们对色谱峰进行积分来计算峰面积时，[/align][align=center]峰的起点和终点通常情况下[/align][align=center]通过色谱峰的斜率来确定。[/align][align=center]色谱峰越拖尾，[/align][align=center]它的尾部基线越平缓[/align][align=center]终点就越难确认。[/align][align=center]这一点在基线波动较大时[/align][align=center]体现的更加突出，[/align][align=center]那么它就会影响我们积分得到的峰面积。[/align][align=center][color=#0392ff][b]3. 影响对某些痕量组分的确认[/b][/color][/align][align=center]在药典计算有关物质的相关要求中会提到[/align][align=center]峰面积达到主峰面积0.1%的组分都要参与计算。[/align][align=center][img=chromclass-QA017-(06),700,317]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-06-e1522377999926.jpg[/img][/align][align=center]那么当一些小峰和前面的峰分离度不是很好时[/align][align=center]就会容易被隐藏在前面峰的拖尾处[/align][align=center]从而无法参与计算。[/align][align=center]综上所述，[/align][align=center]拖尾峰会对色谱分析的定性定量结果都会产生影响。[/align][align=center] [/align][align=center][color=#ff6600][b]产生拖尾峰的原因是什么？[/b][/color][/align][align=center][b]01[/b][/align][align=center]拖尾峰的形成是因为在色谱分离时[/align][align=center][color=#0392ff][b]出现了一种以上的保留机制，[/b][/color][/align][align=center]并且其中一种保留机制是超负荷的。[/align][align=center]在日常分析中大多数情况下会使用反相色谱。[/align][align=center]以常用的C18柱为例，[/align][align=center]C18是被键合在载体硅胶表面的，[/align][align=center]而硅胶是由硅和氧聚合而成的，[/align][align=center]所以它的表面会出现各种形态的硅羟基[/align][align=center][img=chromclass QA017 (03),700,173]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-03-e1522378080542.jpg[/img][/align][align=center]虽然理想的状态是[/align][align=center]流动相中的样品只和固定相C18发生作用。[/align][align=center]而实际上一半以上的硅胶表面[/align][align=center]并没有被键合上C18，[/align][align=center]所以硅胶表面会裸露出大量的硅羟基（Si-OH）。[/align][align=center][img=chromclass-QA017-(05),700,297]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-05-e1522378121125.jpg[/img][/align][align=center][b]而单独的自由硅羟基会和流动相中的样品发生作用，[/b][/align][align=center][b]形成拖尾。[/b][/align][align=center]于是在最近的十几年中，[/align][align=center]色谱柱供应商致力于生产出高纯度的硅胶载体[/align][align=center]由于新型硅胶在无金属离子环境下制造[/align][align=center]所以表面不会残留金属离子也会减少拖尾[/align][align=center]另外，硅胶表面尽可能减少自由的硅羟基，[/align][align=center]未与固定相键合的硅羟基尽可能形成螯合或聚合状态，[/align][align=center]用来减少拖尾峰的产生。[/align][align=center][b]02[/b][/align][align=center]当色谱柱经历过高温、强酸，[/align][align=center]或者一些极端使用方法导致固定相流失较多后，[/align][align=center]色谱柱中的自由硅羟基也会变得越来越多[/align][align=center]从而更加容易造成拖尾峰[/align][align=center][b]03[/b][/align][align=center]拖尾峰的形成也有可能是因为[color=#0392ff][b]柱外的死体积较多[/b][/color]，[/align][align=center]导致样品在死体积处发生了滞留和扩散。[/align][align=center][b][img=chromclass-QA017-(12),700,547]http://www.chromclass.com/wp-content/uploads/2018/03/chromclass-QA017-12-e1522378540136.jpg[/img][/b][/align][align=center][b]04[/b][/align][align=center]当样品中出现了[color=#0392ff][b]碱性化合物[/b][/color]，[/align][align=center]碱性基团更容易与色谱柱中的[/align][align=center]硅羟基发生作用形成拖尾峰。[/align][align=center] [/align][align=center][color=#ff6600][b]如何改善拖尾峰[/b][/color][/align][align=center][color=#0392ff][b]01[/b][/color][/align][align=center]对于过去的自由硅羟基较多的色谱柱，[/align][align=center]建议在流动相中加入[color=#0392ff][b]三乙胺[/b][/color]来抑制拖尾。[/align][align=center]实验表明三乙胺有非常好的拖尾抑制效果。[/align][align=center]另外，由于三乙胺呈碱性[/align][align=center]需要大家在使用时考虑色谱柱的ph值耐受范围，[/align][align=center]某些情况可能需要加入酸性调节剂。[/align][align=center]对于新型的表面以耦合和聚合硅胶为主的硅胶载体，[/align][align=center]我们就很少使用三乙胺来抑制拖尾，[/align][align=center]而是通过[color=#0392ff][b]调整流动相的ph3[/b][/color]来抑制硅胶的离子化。[/align][align=center][color=#0392ff][b]02[/b][/color][/align][align=center]当色谱柱柱效降低导致拖尾峰时建议[color=#0392ff][b]更换色谱柱[/b][/color]。[/align][align=center][b][color=#0392ff]03[/color][/b][/align][align=center]建议在液相色谱中正确安装并且使用[/align][align=center][color=#0392ff][b]与您的仪器匹配的管线接头，[/b][/color][/align][align=center]以减少死体积的产生。[/align][align=center]~~~[/align][align=center]同学们，今天的拖尾峰相关问题[/align][align=center]不知大家还有没有更多的理解和建议呢？[/align][align=center]欢迎大家踊跃留言哦~[/align][align=center][/align][align=center][/align]

  • 液相色谱峰裂分可能的原因及应对方法

    [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]峰裂分的原因有很多，如：1. 色谱柱过载；应对方法：可以通过降低进样量观察峰形是否改善来确定是否是过载导致的峰裂分。2. 色谱柱柱头污染或筛板部分堵塞；应对方法：可以通过更换同款色谱柱来排查或者反接色谱柱（如果确定色谱柱可以反接）观察峰形是否改善。3. 样品稀释剂洗脱能力较强而导致的溶剂效应；应对方法： 在不影响分析物溶解的前提下，尽量用（初始）流动相溶解样品或者用弱洗脱强度溶剂稀释样品以降低溶剂效应；在不影响灵敏度的前提下降低进样体积。4. 化合物自身的原因。比如化合物中存在多种互变形式；或者存在多个离子化位点，可能导致色谱峰裂分成双重甚至多重峰。应对方法：考察不同极性溶剂、流动相pH、温度等对峰形的改善情况，也可以针对性地选择特殊的色谱柱固定相，比如键合了带电基团的色谱柱来分析化合物等。

  • 【转帖】高效液相色谱中常遇见的问题及处理方法

    1 色谱柱跑干了，处理方法：将贮液瓶装入重蒸水，首先按purge键，将柱前气柱排出，若无法排出，可将色谱柱前拆下，用注射器抽吸。待柱前气体排空后，连接色谱柱，用水高低流速交替冲洗色谱柱，直至柱压稳定为止。 2.基线不稳，有静电，处理方法：检查接地是否良好。 3.峰面积变化非常大，处理方法：检查是否进样阀堵塞。 4.基线突然提高，变粗，处理方法：检查样品池能量，若低于正常值，说明检测器污染。 5.柱压变动范围较大，处理方法：多为进气泡。高低流速交替冲洗。 6.柱效或峰形突然变差，处理方法：更换预柱。 7塔板数低 ：色谱柱选择不对，二次保留、峰形不好的影响 8色谱柱易变性：色说柱选择不对，二次保留的影响 9色谱柱寿命短：色谱柱选择不对，样品需预处理（PH7） 10保留值变化：色谱柱平衡不够，流动相比例改变 11出现新的干扰峰：初始分离不够或初始样品无代表性选择波长要从以下几个方面考虑： 1. 检测波长要大于溶剂截止波长。如果所选择的波长下溶剂有很强的吸收当然是不合适的。溶剂有强吸收后，基线抬高，减小检测的线性范围而且会加大基线噪声，对溶质的检测灵敏度下降。 2. 对各组分都要有适当的吸收。一般是不可能做到的。所以只要选择一个对大多数组分都有较大吸收的波长就可以了。 3. 外标法定量时，要选择被测组份最大吸收波长。 254nm 对常见的共轭结构和羰基官能团都有吸收。对饱和基团也有弱的吸收。而对于常见的乙腈、甲醇的透过率很高。是在不知道用什么波长时最理想的试验波长。 （一）涡流扩散（Eddy diffusion）流动相碰到较大的固体颗粒，就像流水碰到石头一样产生涡流。如果柱装填得不均匀，有的部分松散或有细沟，则流动相的速度就快；有的部位结块或装直紧密则流就慢，多条流路有快有慢，就使区带变宽。因此，固相载体的颗粒要小而均匀，装柱要松紧均一，这样涡流扩散小，柱效率高。（二）分子扩散（Molecular diffusion）分子扩散就是物质分子由浓度高的区域向浓度低的区域运动，也称纵向分子扩散。要减少分子扩散就要采用小而均匀的固相颗粒装柱。同时在操作时，如果流速太慢，被分离物质停留时间长，则扩散严重。（三）质量转移（Mass transfer）被分离物质要在流动相与固定相中平衡，这样才能形成较窄的区带。在液相色谱中，溶质分子要在两个液相之间进行分配，或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的时间。当流速快时，转移速度慢，来不及达到平衡动相就向前移，这各物质的非平衡移动，使区带变宽。四）动相流速当流速太低时，分子扩散严重，特别是在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中尤为突出。如将理论塔板高度对流速作图，理论塔板高度随流速增加而急速下降，当达到最低值时，流速再加大则质量转移起主要作用，理论塔板高度又加大。在高效液相色谱中，流速稍快影响不大，但在凝胶过滤色谱中，因为物质要渗透到凝胶内部，所以质量转移影响大，流速咖大会降低柱效率。五）固定相颗粒大小定相颗粒越小柱效率越高，对流动相流动的阻力越大，需要加大压力才能使它流动。 1、开泵后压力即升高至最高限度，经过对色谱柱前，色谱柱，色谱柱后的分段测试，确定为检测池堵塞。 2、换检测波长后，色谱峰面积比以前做的小很多，怀疑进样环或管路漏夜，经检查，排除，最后确定为，检测波长的显示值和实际值不符。 由气味、景象和声音可以发现的问题你需要运用你所有的感官去发现液相色谱的问题。你最好养成习惯，每天花上几分钟运用你的感官（除了味觉）来“感觉”你的液相色谱是否存在问题，这样可以帮助你迅速找到问题所在。例如：在你看到漏液之前，你可能首先闻到它的气味。大部分的问题是可以通过眼睛看到。 A、溶剂的气味原 因 解决方法 1、漏液 1、见前 2、溅出 2、a、检查废液瓶是否已满 b、找到溅出的部位并清洗干净 B、热气味原 因 解决方法 1、仪器过热 1、a、检查并调节通风设施 b、检查并调节温度设定 c、关掉仪器，查找维修手册 C、读数不正常原 因 解决方法 1、压力不正常 1、见前 2、柱温箱问题 2、a、检查并调节设定 b、参照用户手册 3、检测器灯失效 3、更换灯 D、灯警告原 因 解决方法 1、压力超出极限值 1、a、检查是否阻塞 b、检查并调节极限值的设定 2、其它警示灯 2、见用户手册 E、警告音原 因 解决方法 1、溶剂泄漏/溅出 1、找到并解决 2、其它警告音 2、见用户手册 F、刺耳的短音或长音原 因 解决方法 1、轴承失效 1、见用户手册 2、润滑不够 2、进行恰当的润滑 3、机械故障 3、见用户手册 进样阀可能发生的问题 A、手动进样阀，转动不灵原 因 解决方法 1、转子密封损坏 1、更换或调整转子密封 2、转子太紧 2、调整转子的松紧度 B、手动进样阀，载样困难原 因 解决方法 1、进样阀安装不当 1、重新安装 2、定量环阻塞 2、清洗或更换定量环 3、进样器污染 3、清洗或更换进样器 4、管路阻塞 4、清洗或更换管路 C、自动进样阀，不能转动原 因 解决方法 1、无压力（或电源） 1、提供恰当的压力（电源） 2、转子太紧 2、调整转子的松紧度 3、进样阀安装不当 3、重新安装 D、自动进样阀，其它问题原 因 解决方法 1、阻塞 1、清洗或更换阻塞部件 2、机械故障 2、见随机维修手册 3、控制器故障 3、维修或更换控制器 HPLC柱压过高： 1.拆去保护柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2.把色谱柱从仪器上取下来，如果压力仍然不降，则是管路堵塞，须清洗，如果压力下降了，将柱子的进出口反过来接再仪器上，用10倍量柱体积的流动相冲洗柱子，如果柱压仍不降，再检查 3.更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明溶剂获样品中含有固体颗粒，若柱压还高，可在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器 基线不稳，上下波动或漂移 1。流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟 2。单向阀堵塞，取下超声去除堵塞物 3。泵密封损坏，造成压力波动，更换泵密封 4。系统存在漏液点，确定漏液位置并维修 5。流通池内有赃物或者杂质，清洗杂物 6。柱后产生气泡，流通池出液口加负压调节器 7。检测器没有设定在最大吸收波长处 8。柱平衡慢，特别是流动相发生变化时。用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的心流动相对柱子进行冲洗 1.检测信号出现倒峰，检查检测器与主机相连接是否有松动，可以把下重新连接。 2.夏季气温高，水容易生菌，要求HPLC所用重蒸水必须每天都要更新。 3.由甲醇换到流动相平衡时，压力先稍稍下降，然后慢慢回升，可能是混合池混合效果不好，也可能是B泵轻度堵塞。 4.色谱柱长期不用，应用甲醇冲洗2h以上后，宁上两端螺丝保存。 岛津机器易出现的毛病是： 1、压力不稳：单向阀堵塞，可拆下，用甲醇水超声； 或漏液； 管路过滤器损坏； 2、基线噪音变大：未接地线，可在检测器的外壳外接一根铁丝连地； 灯能量不足，可在funk功能中查找灯的使用时间，或拆开机器外壳，观看紫外灯的强度； 检测池污染，拆下柱子，用无体积连接器连接泵和检测器，用异丙醇小流速冲洗半个小时即可； 流动相污染或进气泡。 3、泵头有盐析出：应经常用5％异丙醇清洗柱塞杆，否则易磨损。 4、进样口漏液：可能是标准针头变形或损坏，使得进样器磨损，不好的针头应及时扔掉。

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