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荧光原位杂交玻片扫描仪

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荧光原位杂交玻片扫描仪相关的论坛

  • 【转帖】原位杂交组织化学的方法和常用试剂配制!

    原位杂交组织化学的方法和常用试剂配制  一、杂交前准备  (一)DEPC水是经DEPC处理过的灭菌蒸馏水。  DEPC即二乙基焦碳酸酯(diethylprocarbonate),可灭活各种蛋白质,是RNA酶的强抑制剂。原位杂交在杂交及其以前的各步处理中,所有液体试剂都应经DEPC处理。方法是:取市售DEPc 1ml,加入1L待处理水(蒸馏水等)中,经猛烈振摇后,于室温静止数小时,然后高压灭菌,以除去降解DEPC(DEPC分解为CO2和乙醇)。有些试剂可直接加入DEPC,终浓度一般为0.1%~0.4%,原则上在杂交及其以前的步骤中,所有液体试剂均需用DEPC处理,或用DEPC水配制,包括乙醇的稀释。此外,接触标本以及标本有关的空中的洗涤也需DEPC水洗涤。  注意:DEPC是一种潜在的致癌物质,在操作中应尽量在通风的条件下进行,并避免接触皮肤。②含有Tris缓冲液的溶液中,不能加入DEPC。  (二)载玻片的处理  组织原位杂交,常在载玻片上进行,故载玻片的洗涤至关重要,必须保持清洁,并且不能有任何核酸的污染。处理方法如下:  (1)先经洗衣粉浸泡过夜,次日自来水冲洗后,泡酸数小时以上,取出后再用流水冲洗,双蒸水冲洗2~3次,置160℃以上烤箱中烧烤4h以上,或经15磅高压灭菌20min。经以上处理可清除载片上的核酸酶。(2)HCl处理法试剂: 1M HCL, DEPC 水, 95%乙醇步骤: a. 玻片在室温下于1M HCL中浸泡30分钟 b. DEPC水中洗片 c. 95%乙醇中洗片 d. 空气中干燥 e. 重复一遍 a—d. f. 铝箔包好备用.  (三)硅化  【方法1】(1)将一扎新的盖玻片散开,在通风条件下于0.1mol/L的HCI中煮20min,等其冷却后,倒掉盐酸。  (2)用去离子水沉漂洗玻片,竖放在架子上自然干燥。  (3)硅化盖玻片:通风条件下,将单块的盖玻片在二甲二氯硅浣(dimethyldichorsilane,DMDC)液中浸几下,竖入在架子上干燥。  (4)收集干燥的盖玻片于一可耐热的petri氏盘(或培养皿)中,用去离子水漂洗数次,彻底清洗。  (5)用铝箔将装有盖玻片的培养皿包好,于180℃烘烤4h过夜。取出待冷至室温后,即可进行后续处理。附:2%DMDCDMDC 2ml 三氯乙烷 98ml  配制:按比例两者充分混匀,静止待气泡消失即可使用。  用途:硅化玻片(载片、盖片均可)。  【方法2】将经过洗净的玻璃盖片分散开放在一金属网中,并将该网放入一接有真空泵的干燥器中。同时,在干燥器中放一盛有约1m二甲二氯硅浣(dimethyldiorosilane,DMDC)的小烧杯。盖好干燥器(确保密闭),抽真空约5min,然后让空气冲入。取出盛有盖片的金属网架,用锡箔纸包埋,于250℃以上烘烤4h以上,最好过夜。冷却后备用。   本法可用于玻璃及塑料器皿的硅化。塑料器皿只能于60℃烧干。【方法3】APES(氨丙基三乙氧基硅浣)法 试剂: 2%的APES/丙酮(V/V), 丙酮, DEPC水 步骤: 1. 玻片先于室温中在APES液中浸泡10秒2. 丙酮中洗涤3.DEPC水中漂洗4.空气中干燥5.4度保存(最好用铝箔包好,避免污染)

  • 【原创】荧光原位杂交(双色FISH)图片

    【原创】荧光原位杂交(双色FISH)图片

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012141626_266970_2215024_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012141627_266972_2215024_3.jpg最近拍了一些原位杂交的图片,虽然原位杂交信号很弱,但拍摄系统的捕捉能力还是非常不错的。。。。

  • 荧光芯片扫描仪

    荧光芯片扫描仪   由于杂交时产生序列重叠,会有成百上千的杂交点出现在图谱上,形成极为复杂的杂交图谱。序列重叠虽然可为每个碱基的正确读出提供足够的信息,可提高序列分析的可靠性,但同时信息处理量也大大增加了。一般说来,这些图谱的多态性处理与存储都由专门设计的软件来完成,而不是通过对比进行人工读谱。用计算机处理即可给出目的基因的结构或表达信息。扫描一张10cm2的芯片大概需要2-6分种的时间。目前专用于荧光扫描的扫描仪根据原理不同大致分为两类:一是激光共聚焦显微镜的原理, 是基于PMT(photomultiplier tube,光电倍增管)的检测系统(另文介绍);另一种是CCD(charge-coupled devices,电荷偶合装置)摄像原理检测光子。CCD一次可成像很大面积的区域,而以PMT为基础的荧光扫描仪则是以单束固定波长的激光来扫描,因此或者需要激光头,或者需要目的芯片的机械运动来使激光扫到整个面积,这样就需要耗费较多的时间来扫描;但是CCD有其缺点:目前性能最优越的CCD数字相机的成像面积只有16×12mm(像素为10μm),因此要达到整个芯片的面积20×60mm的话,需要数个数码相机同时工作,或者也可以以降低分辨率为代价来获得扫描精度不是很高的图像。由于灵敏度和分辩率较低,比较适合临床诊断用。   生产商业化扫描仪的公司包括:Genomic Solutions公司、Packard公司、GSI公司、Molecular Dynamics、Genetic Microsystems公司、Axon ?Instruments公司等。其中GSI Lumonics 公司ScanArray 系列一直是生物芯片扫描检测系统中的领头产品。2000GSI并入著名的Parkard公司后ScanArray的软、硬件都得到进一步加强。   ScanArray利用其专利的激光共聚焦光学系统,通过计算机控制,对生物芯片的荧光杂交信号进行全自动的扫描采集,并通过分析软件对数据结果进行定量分析。  最高灵敏度高:0.1荧光分子/μm  扫描精度可从5μm-50μm分级调整  全范围扫描时间仅需5分钟,快速方便  多达十种检测滤光片,涵盖所有生物芯片荧光染料的检测,适用于多种荧光标记探针   不同波长依次扫描避免交叉光污染  扫描后的图像还需要进一步的处理,这要求一定的软件支持。现有的分析软件包括:Biodiscovery的ImaGene系列,Axon Instruments的GenePix系列,GSI的QuantArray等  3. 基因芯片上各克隆荧光信号的分析原理   用激光激发芯片上的样品发射荧光,严格配对的杂交分子,其热力学稳定性较高,荧光强;不完全杂交的双键分子热力学稳定性低,荧光信号弱(不到前者的1/35~1/5),不杂交的无荧光。不同位点信号被激光共焦显微镜,或落射荧光显微镜等检测到,由计算机软件处理分析,得用激光激发芯片上的样品发射荧光,严格配对的杂交分子,其热力学稳定性较高,荧光强;不完全杂交的双键分子热力学稳定性低,荧光信号弱(不到前者的1/35~1/5)(2),不杂交的无荧光。不同位点信号被激光共焦显微镜,或落射荧光显微镜等检测到,由计算机软件处理分析,得到到有关基因图谱。美国GSI ?Lumonics 公司开发出专专业基因芯片检测系统(ScanArray 系列),采用激光共聚焦扫描原理进行荧光信号采集,由计算机处理荧光信号,并对每个点的荧光强度数字化后进行分析。利用QuantArray软件包对扫描的荧光信号进行分析,比  较每个克隆在不同组织间表达水平的差别。软件具体分析步骤如下:   首先,同时导入同一区域两个channel扫描的图像文件;将两个channel扫描的图像用不同的颜色显示并重叠;选择拟分析的区域,输入矩阵的行数及列数以及矩阵的个数等参数;在计算机给出的该区域信号图片上标定网格,使得网格中所包含的横线和竖线的交点个数同每个区域点样的克隆数相同,调整网格,使每个交点均位于点样克隆信号的中心;信号的中心确定后,计算机将自动以交点为中心,按照设定的半径圈定各克隆,并将其内部区域作为待分析的信号,同时在圈定的各克隆周围再按照预设的值圈定一定范围的区域,将该区域内的信号作为背景噪音;计算机分析每个克隆扣除背景噪音后的信号强度,并按照不同的要求对数据进行分析;利用GenePie方式对两个channel信号的进行定量比较分析,此时计算机根据各克隆两个channel扫描的信号,以饼图的形式给出两个channel信号强度的相对比例,同时可以逐个克隆读取计算机分析出的两个channel信号的值及所占的比例,进而确定各克隆在两种组织间的表达差异。  4. Microarray数据分析   Microarray数据分析简单来说就是对Microarray高密度杂交点阵图象处理并从中提取杂交点的荧光强度信号进行定量分析,通过有效数据的筛选和相关基因表达谱的聚类,最终整合杂交点的生物学信息,发现基因的表达谱与功能可能存在的联系。   Microarray数据分析主要包括图象分析(Biodiscovery Imagene 4.0\Quantarray分析软件)、标准化处理(normalization)、Ratio值分析、基因聚类分析(Gene Clustering)。   1. 图象分析:激光扫描仪Scaner得到的Cy3/Cy5图象文件通过划格(Griding),确定杂交点范围,过滤背景噪音,提取得到基因表达的荧光信号强度值,最后以列表形式输出。   2. 标准化处理(Normalization):由于样本差异、荧光标记效率和检出率的不平衡,需对cy3和cy5的原始提取信号进行均衡和修正才能进一步分析实验数据,Normalization正是基于此种目的。Normalization的方法有多种:一组内参照基因(如一组看家基因)校正Microarray所有的基因、阳性基因、阴性基因、单个基因。   3. Ratio分析(Ratio Analysis):cy3/cy5的比值,又称R/G值。一般0.5-2.0范围内的基因不存在显著表达差异,该范围之外则认为基因的表达出现显著改变。由于实验条件的不同,此域值范围会根据可信区间有所调整。处理后得到的信息再根据不同要求以各种形式输出,如柱形图、饼形图、点图、原始图象拼图等。将每个Spot的所有相关信息如位标、基因名称、克隆号、PCR结果、信号强度、Ratio值等自动关联并根据需要筛选数据。每个Spot的原始图象另存文件,可根据需要任意排序,得到原始图象的拼图,对于结果分析十分有利。   4. 聚类分析(Clustering Analysis):实际是一种数据统计分析。通过建立各种不同的数学模型,可以得到各种统计分析结果,确定不同基因在表达上的相关性,从而找到未知基因的功能信息或已知基因的未知功能。Gene Clustering就是根据统计分析原理,对具有相同统计行为的多个基因进行归类的分析方法,归为一个簇的基因在功能上可能相似或关联。目前以直观图形显示GeneCluster结果的程序已有人开发出来,可将抽象的数据结果转化成直观的树形图,便于研究人员理解和分析。  尽管基因芯片技术受到了广泛关注,但在基因表达谱分析中起着关键作用的生物信息学却没能引起大家的足够重视,认为简单人工处理一下原始数据就可以得到有价值的生物学信息,大量有价值的信息就这样被浪费和湮没了。可以肯定地说,没有生物信息学的有效参与,基因芯片技术就不能发挥最大效能。加大基因芯片技术中生物信息学的研究开发力度已成为当务之急。国内外已经进行了有益的尝试,初步开发出供芯片平台管理实验数据的软件包,就目前实际情况来看,生物信息学在基因芯片研究开发中介入的程度已经越来越深,主要涉及基因表达信息分析管理系统及其分析工具和分析方法,简单概括为以下几个方面:

  • 自动分子杂交仪详细说明

    [url=http://www.f-lab.cn/hybridization/traymix-s4.html][b]自动分子杂交仪[/b]traymix-s4[/url]是一种进口[b]分子杂交站[/b]和[b]分子杂交微混合器[/b],采用主动混合中的混沌平流技术 Chaotic Advection technolog实现先进的[b]分子混合杂交仪[/b]。[b]自动分子杂交仪[/b]能够在整个杂交区域(21×60毫米)实现分子的均匀分散,从而得到最好的杂交效果。我们的专利技术-主动混合混沌平流专利技术能够使用 更少样本数量(5皮摩尔),并显著减少杂交时间 大大提高杂交效率,并且可以显著降低背景噪声,提高荧光信号强度,达到最佳杂交效果。我们主动混合混沌平 流专利消除了人为现象,如通常与其他系统一起观察到的死角或气泡,这样可以让使用者一开始就注意到问题,很快在杂交和清洗实验中取得成功,避免浪费时间。[img=自动分子杂交仪]http://www.f-lab.cn/Upload/traymix_s4_5_.jpg[/img][b]自动分子杂交仪[/b]是全自动化分子杂交站,可避免任何错误,能够确保用户获得可重复的结果。自动杂交站具有直观的和方便操作的软件WinTrayMix™ ,非常方便 用户使用,即使是非专业人员经过阅读手册后也可操作。生物学家可以使用一个简单明了的图形用户界面,输入各种的参数和杂交后的步骤:预杂交,杂交和多次清 洗。自动杂交清洗工作站为用户提供了两种操作模式,专家模式和常规模式。其中专家模式允许用户定制自己的方案,具有制定复杂实验进行多级杂交的可能性。这种模式 可用于实验室研究。常规模式可由医院和诊断实验室使用,在他们的诊断检测中的使用可靠的治疗方案。自动化杂交站TrayMix™ S4也可以用于变性操作。[b]自动分子杂交仪[/b]具有显著技术进步 :[list][*]减少微流体混合循环:250μL,以前系统中是513μL。这种减小允许使用更少的试剂和浓度增加的样品,与主动混合技术相结合,提高了杂交精确性(降低背景噪声和更高的斑点强度)。[*]温度调节改进(+/-0.1°C)[*]变性步骤具有可能性[*]与几个温度阶段杂交可在一个简单的方法(专家模式)进行设置。[/list]使用[b][b]自动分子杂交仪[/b][/b]用户可以提高应用的分析结果,如基因表达分析,基因分型,SNP基因分型,染色体异常和遗传性疾病的检测分析 结果,比较基因组杂交(CGH),荧光原位杂交(FISH)蛋白质芯片实验(如DNA /蛋白质相互作用,蛋白质/蛋白质相互作用)。[b][b]自动分子杂交仪[/b]特色[/b]自动化和主动混合 可获得一致和可重复结果减少每次分析的时间和成本[b]自动分子杂交仪[/b]参数外形尺寸:52.6x46.5x21cm重量:19kg处理能力:可单独处理或同时处理4个玻片杂交面积:21x60mm杂交容量: 杂交室60uL 微流体循环:250uL微流体系统: manifold +chamber+caplillaries, 兼容所有常用试剂并具有抗化学腐蚀功能采样量:5uL ~60uL温度范围:25~75°C (+/-0,1°C)编程控制软件:Windows XP, vista, windows7自动分子杂交仪:[url]http://www.f-lab.cn/hybridization/traymix-s4.html[/url]

  • 微阵列芯片扫描仪优势特点

    [b]孚光精仪:[url]http://www.f-lab.cn/[/url]微阵列芯片扫描仪:[url]http://www.f-lab.cn/microarray-manufacturing/innoscan.html[/url]微阵列芯片扫描仪[/b],[b]innoscan[/b]专业为[b]扫描基因芯片[/b],[b]扫描蛋白质芯片[/b]等[b]微阵列芯片扫描[/b]而设计,是功能强大的高分辨率[b]荧光扫描仪[/b],适合所有[b]微阵列芯片扫描,[/b]如DNA芯片,蛋白质芯片和细胞和组织。[b]微阵列芯片扫描仪[/b]是完全开放的系统,兼容任何标准的显微镜载玻片25x75mm(玻璃基板,塑料,透明和不透明),适用于各类型的应用研究,如基因表达,基因分型,aCGH,芯片分析片内,微RNA检测的SNP,蛋白质组学和微阵列的方式。[img=微阵列芯片扫描仪]http://www.f-lab.cn/Upload/innoscan-scanner.jpg[/img][b]微阵列芯片扫描仪[/b]可以扫描生物芯片,有3 1.mu.m/像素的分辨率,同时保持高图像质量。能够同时扫描两个检测通道3.5分钟(10.mu.m/像素,最大扫描区域),InnoScan900是市场上最快的扫描器,扫描速率可调节,达10到35行每秒。

  • 原位杂交操作规程

    (一)、仪器设备 医用微波炉; 水浴锅。 (二)、试剂 0.2mol/L HCl:HCl 8.2ml,H20 定容0.5L。0.1mol/L三乙醇胺(pH8.0):三乙醇胺 5.33ml,H20 定容0.4L。.5ml/L醋酸-2.5ml/L醋酸酐:三乙醇胺 13.2ml,NaCl 5g,浓HCl 4ml,H20 定容0.98L,醋酸酐 (用前加)2.5ml。20×SSC(pH7.0):NaCl 175.3g,枸橼酸钠 88.2g,H20 定容1L。100×Denhardt's:Ficoll 1g,PVP 1g,BSA 1g,H20 定容50ml。杂交液:Formamide 5ml,20×SSC 2.5ml,Dextran sulfate 1g,100×Denhardt's 0.5ml,10%SDS 0.5ml,10g/L sperm DNA 0.1ml,H20 1.4L。BufferⅠ(pH7.5):0.1mol/L ris·Cl,0.15mol/L NaCl。BufferⅢ(pH9.5):0.1mol/L Tris·Cl,0.1mol/L NaCl,0.05mol/L MgCl2。BufferⅣ(pH8.0):10mmol/L Tris·Cl,1mmol/L EDTA。

  • 【分享】MAR-FISH 技术及其在环境微生物群落与功能研究中的应用

    荧光原位杂交和微观放射自显影集成技术MAR-FISH(microautoradiography fluorescence in situ hybridization),即荧光原位杂交和微观放射自显影集成技术。MAR-FISH 技术中涉及FISH 和MAR 两项技术。FISH 的基本原理为:将寡核苷酸探针用荧光染料标记, 再使之与固定在载玻片上的微生物样品杂交, 将未杂交的荧光探针洗去后, 用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)或普通荧光显微镜进行观察。微观放射自显影(MAR) 的基本原理为:通过将微生物样品与放射性示踪剂或者放射性标记的底物培养后,具有吸收这种底物的活性微生物就会将放射性化合物吸收到体内。经过适当的样品处理后, 放射性标记的样品被放置在载玻片或盖玻片上, 并与放射性敏感的感光乳剂接触。在一定时间的培养过程中,来自放射性样品的发射信号与悬浮在感光乳剂中的溴化银晶体接触。根据标准照相步骤冲洗感光乳剂时, 就会在放射性结构上面显现出黑色银粒, 并可通过显微镜清晰观察到。而MAR 和FISH 的结合, 可以成功的将微生物的功能与特定的种属联系起来。同时获得复杂环境中特定微生物的种属和功能特性, 从而更好地了解特定微生物在环境中的作用, 更清楚地认识微生物群落结构及其与微环境的相互关系。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=138212]MAR-FISH 技术及其在环境微生物群落与功能研究中的应用[/url]

  • 微阵列清洗干燥工作站特色

    [url=http://www.f-lab.cn/microarray-manufacturing/waly.html][b]微阵列清洗干燥工作站[/b][/url]专业为[b]微阵列清洗干燥[/b]和[b]荧光原位杂交FISH玻片清洗干燥[/b]而设计的[b]微阵列干燥清洗[/b]仪器,是分子杂交领域的理想自动[b]玻片清洗干燥仪[/b]器。[b]微阵列清洗干燥工作站[/b]可以处理市面上任何商用或定制的微阵列和玻片或芯片,用于任何类型的微阵列实验,如基因表达,微阵列比较基因组杂交 CGH array,ChIP-on-chip, miRNA。[b]微阵列清洗干燥工作站特色[/b]自动清洗干燥站大大提高了杂交的微阵列的的质量,具有更高信号强度,更低的背景噪音和更为均匀干净的玻片,直接可用于扫描使用。从而避免这些步骤常出现的负面影响。[img=微阵列清洗干燥工作站]http://www.f-lab.cn/Upload/microarray-wash-dry.png[/img]微阵列清洗干燥工作站:[url]http://www.f-lab.cn/microarray-manufacturing/waly.html[/url]

  • 【求助】关于FTS3000型红外光谱扫描仪对样品厚度的要求~~~~

    用平板硫化机将TPS样品条压成薄片进行红外扫描,但是红外扫描无法透过薄片,我想请问各位高手TX一下,红外扫描仪对样品厚度的要求是什么?所用仪器为BIO-RAD FTS3000型红外光谱扫描仪。 另外麻烦把这个仪器的使用说明、对样品的要求及相关参数告知一下,多谢!!!

  • 【资料】激光共聚焦扫描显微镜一些介绍

    激光共聚焦扫描显微镜简介一、 激光共聚焦显微镜的基本组成激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope LSCM)是20世纪80年代发展起来的一项具有划时代意义的高科技新产品,是当今世界最先进的细胞生物学分析仪器。激光共聚焦显微镜利用激光作为光源,在传统光学显微镜基础上采用共轭聚焦的原理和装置,以及通过针孔的选择和PMT的收集,并带有一套对其所观察到的对象进行数字图像分析处理的系统软件。与传统光学显微镜相比,它具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点。所以它问世以来在生物学的研究领域中得到了广泛应用。激光共聚焦显微镜主要有四部分组成:1、显微镜光学系统。2、扫描装置。3、激光光源。4、检测系统。整套仪器由计算机控制,各部件之间的操作切换都可在计算机操作平台界面中方便灵活地进行。1.1 显微镜光学系统  显微镜是LSCM的主要组件,它关系到系统的成象质量。显微镜光路以无限远光学系统可方便地在其中插人光学选件而不影响成象质量和测量精度。物镜应选取大数值孔径平场复消色 差物镜,有利于荧光的采集和成象的清晰。物镜组的转换,滤色片组的选取,载物台的移动调节,焦平面的记忆锁定都应由计算机自动控制。1.2 扫描装置  LSCM使用的扫描装置在生物领域一般为镜扫描。由于转镜只需偏转很小角度就能涉及很大的扫描范围,图象采集速度大大提高,512×512画面每秒可达4帧以上,有利于那些寿命短的离子作荧光测定。扫描系统的工作程序由计算机自动控制。1.3 激光光源  LSCM使用的激光光源有单激光和多激光系统。多激光器系统在可见光范围使用多谱线氩离子激光器,发射波长为457nm、488nm和514nm的蓝绿光,氦氖绿激光器提供发射波长为543nm的绿光,氦氖红激光器发射波长为633nm的红光,新的405nm半导体激光器的出现可以提供近紫外谱线,但是小巧便宜而且维护简单。1.4 检测系统  LSCM为多通道荧光采集系统,一般有三个荧光通道和一个透射光通道,能升级到四个荧光通道,可对物体进行多谱线激光激发,样品发射荧光的探测器为感光灵敏度高的光电倍增管PMT,配有高速12位A/D转换器,可以做光子计数。PMT前设置针孔,由计算机软件调节针孔大小,光路中设有能自动切换的滤色片组,满足不同测量的需要,也有通过光栅或棱镜分光后进行光谱扫描功能的设置。二、激光共聚焦显微镜的特点以及在生物领域的应用传统光学显微镜相比,激光共聚焦显微镜具有更高的分辨率,实现多重荧光的同时观察并可形成清晰的三维图象等优点,在对生物样品的观察中,激光共聚焦显微镜有如下优越性:1、对活细胞和组织或细胞切片进行连续扫描,可获得精细的细胞骨架、染色体、细胞器和细胞膜系统的三维图像。2、 可以得到比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象、同时具有高灵敏度、杰出样品保护。3、***图象的获得,如7 维图象(XYZaλIt): xyt 、xzt 和xt 扫描,时间序列扫描旋转扫描、区域扫描、光谱扫描、同时方便进行图像处理。 4、细胞内离子荧光标记,单标记或多标记,检测细胞内如PH和钠、钙、镁等离子浓度的比率测定及动态变化。5、荧光标记探头标记的活细胞或切片标本的活细胞生物物质,膜标记、免疫物质、免疫反应、受体或配体,核酸等观察;可以在同一张样品上进行同时多重物质标记,同时观察; 6、对细胞检测无损伤、精确、准确、可靠和优良重复性;数据图像可及时输出或长期储存。 由于共聚焦显微镜的以上优点,激光共聚焦显微镜在以下研究领域中应用较为广泛:1、细胞生物学:如:细胞结构、细胞骨架、细胞膜结构、流动性、受体、细胞器结构和分布变化、细胞凋亡机制;各种细胞器、结构性蛋白、DNA、RNA、酶和受体分子等细胞特异性结构的含量、组分及分布进行定量分析;DNA、RNA含量、利用特定的抗体对紫外线引起的DNA损伤进行观察和定量;分析正常细胞和癌细胞细胞骨架与核改变之间的关系;细胞黏附行为等 2、生物化学:如:酶、核酸、受体分析、荧光原位杂交、杂色体基因定位等,利用共聚焦技术可以取代传统的核酸印迹染交等技术,进行基因的表达检测,使基因的转录、翻译等检测变的更加简单、准确。3、药理学:如:药物对细胞的作用及其动力学;药物进入细胞的动态过程、定位分布及定量 4、生理学、发育生物学:如:膜受体、离子通道、离子含量、分布、动态;动物发育以及胚胎的形成,骨髓干细胞的分化行为;细胞膜电位的测量.荧光漂白恢复(FRAP)、荧光漂白丢失(FLIP)的测量等。 5、遗传学和组胚学:如:细胞生长、分化、成熟变化、细胞的三维结构、染色体分析、基因表达、基因诊断; 6、神经生物学:如:神经细胞结构、神经递质的成分、运输和传递; 7、微生物学和寄生虫学:如:细菌、寄生虫形态结构; 8、病理学及病理学临床应用:如:活检标本的快速诊断、肿瘤诊断、自身免疫性疾病的诊断; 9、免疫学、环境医学和营养学。如:免疫荧光标记(单标、双标或三标)的定位,细胞膜受体或抗原的分布,微丝、微管的分布、两种或三种蛋白的共存与共定位、蛋白与细胞器的共定位;对活细胞中的蛋白质进行准确定位及动态观察可实时原位跟踪特定蛋白在细胞生长、分裂、分化过程中的时空表达,荧光能量共转移(FRET)。

  • 多阵列杂交工作站特色及工作参数

    [url=http://www.f-lab.cn/hybridization/hybmix-s4.html][b]多阵列杂交工作站[/b][/url]是[b]微阵列玻片杂交[/b]和[b]多阵列玻片杂交[/b]的理想高效[b]杂交仪[/b],具有高效的杂交振荡系统和精确的杂交温度控制系统,是微阵列玻片和多个子阵列(多阵列玻片)杂交成功的有力[b]杂交工作站[/b]。集成了轨道振荡器,提供从300至900rmp的可调转速控制,有效提高杂交和结合反应成功率。[b]多阵列杂交工作站[/b]采用国际一流的用户友好界面,操作方便 用户可以设置温度,杂交持续时间和振荡速度。温度,时间和振荡速度显示于仪器前方的宽屏显示屏上,用户可以在任何时间调整参数。[img=多阵列杂交工作站]http://www.f-lab.cn/Upload/hybmix_.jpg[/img][b]多阵列杂交工作站特色[/b]Peltier温度控制技术精确控制温度精确温度调节集成了轨道振荡系统前部具有显示和控制面板用户友好的操作界面[b]多阵列杂交工作站参数[/b]温度范围:室温到105摄氏度加热/制冷系统:温控Peltier技术,温度分辨率 0.1 °C振荡系统:轨道振荡器速度300-1500RPM可调用户界面:高级荧光显示屏VFD, 8个编程控制操作键尺寸(LxDxH): 29.5 x 26.5 x 17.0 cm电力要求: 220 V, 50/60 Hz, 125 W重量:8.5kg更多分子杂交仪请浏览官网:[url]http://www.f-lab.cn/hybridization.html[/url]

  • 植物根系扫描仪介绍

    [img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/05/202405241140032166_2994_5604214_3.jpg!w690x690.jpg[/img]  植物根系扫描仪,这一尖端科技设备,无疑是现代农业与生态研究领域的璀璨明珠。它不仅承载着科学家们对根系奥秘的无限探索,更是农业生产与生态保护工作中不可或缺的重要工具。  植物根系扫描仪,顾名思义,是一种专门用于观察和分析植物根系的设备。它拥有高精度的图像采集技术,能够非破坏性地获取植物根系的详细形态信息。无论是根系的长度、直径,还是分支数量和生长方向,这款扫描仪都能一一精准捕捉,为研究者提供全面而细致的数据支持。  在农业科学研究领域,植物根系扫描仪的应用广泛而深远。它能够帮助科学家们深入了解不同作物种类的根系形态和生长规律,为优化种植技术、提高作物产量提供科学依据。同时,这款扫描仪还能揭示根系与土壤之间的复杂交互关系,为土壤改良和生态修复工作提供重要指导。  此外,在生态保护和修复领域,植物根系扫描仪同样发挥着不可替代的作用。它能够监测土壤退化、水土流失等环境问题对根系生长的影响,为制定有效的生态保护措施提供技术支持。通过这款扫描仪,我们可以更加直观地了解根系在生态系统中的作用和价值,从而更好地保护和利用这一宝贵的自然资源。  总之,植物根系扫描仪以其独特的优势和功能,为现代农业与生态研究领域注入了新的活力。它的出现不仅提升了我们对根系的认识和理解,更为推动农业可持续发展和生态保护工作提供了有力支持。

  • 对电泳胶上的斑点做定量,用凝胶成像分析系统好,还是用薄层扫描仪好?

    我在做一个课题,将糖类用琼脂糖凝胶电泳分离后,染色,再定量。现在的问题是到底用凝胶成像系统准确些,还是用薄层扫描仪效果好些?看国外的文献,用的是一种叫做“光密度计”的设备,国内难以找到。我的老板曾去相关实验室访问,他说对方用的是薄层扫描仪。我在想是否凝胶成像系统会更好些。不知各位高人有无好的建议给我?

  • 【分享】图解----如何用大脑薄片绘制大脑基因图

    【分享】图解----如何用大脑薄片绘制大脑基因图

    (来源:搜狐科学)美国艾伦脑科学研究所的科学家耗资5500万美元,使用1个冷冻的人类大脑和192个大脑切片,正在从细胞基因水平上全面绘制一个系统详尽的人类大脑图谱,而不是传统的大脑解剖结构图,届时将有超过2万个基因都会在此大脑图上得到精确的展示。该项目预计将在2012年完成,到时科学家就能揭示出我们的神经网络是如何工作的,并希望该图谱能够帮助人们更好的理解精神疾病的遗传因素。1、在艾伦脑科学研究所,一个新鲜的人类大脑还有待处理,从此大脑可以看出不到15个非常明显的分区。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904021537_141966_1607864_3.jpg[/img]2、科学家在解剖脑干和小脑。此大脑样本是在捐赠者死后几小时里保存下来的。死亡后的大脑很快衰竭,科学家得很快切片,冷冻好每一个样本。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904021538_141967_1607864_3.jpg[/img]3、科学家展示大脑组织的衰竭,如此图上的脑干,并用干冰冷冻这些样本。在温暖环境下,大脑组织中的核酸分解,细胞膜快速溶解。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904021539_141968_1607864_3.jpg[/img]4、此大脑在冷冻之前得切成1厘米厚的薄片,之后用蓝色羟甲基化纤维素固化膜包埋好,再用干冰冷冻。 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904021540_141969_1607864_3.jpg[/img]5.大脑切片一旦被冷冻,专家就将它切成只有几微米厚的透明切片。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904021541_141970_1607864_3.jpg[/img]6.冷冻的大脑厚片保存在冷冻温度下,直到它们被进一步切片,最后切成的薄片一直到能探测到RNA为止,以寻找特定的基因表达。此方法叫“原位杂交”,显示每一个细胞中的DNA片段是否处于兴奋之中。 [img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/04/200904021542_141971_1607864_3.jpg[/img]

  • 【原创大赛】我与荧光显微镜

    【原创大赛】我与荧光显微镜

    显微镜,大家上中学实验的时候可能都用过,但是荧光显微镜我可是读了研究生才有接触。一开始,我只知道实验室有这个东西,但是这与我的实验无关,所以也从来不关注。后来,要做定位的实验,开始使用荧光显微镜。 最初,我是利用酵母系统对我关注的蛋白进行定位,把绿色荧光蛋白转入酵母,诱导表达后,在荧光显微镜下观察,每一个酵母都是绿绿的椭圆球,倒真是好看。把我关注的蛋白融合绿色荧光蛋白在酵母中表达,则是每个酵母中有几个圆点,很好玩呢,后来鉴定这些圆点原来是线粒体。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212132152_412427_1306303_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212132152_412428_1306303_3.jpg 再后来,要把关注的蛋白在植物中定位,这种普通的荧光显微镜就不好用了,因为植物的叶片太厚,在普通的荧光显微镜中只能模糊观察,难以得到清晰漂亮的图片。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212132153_412430_1306303_3.jpg 这个时候,我知道了激光共聚焦荧光显微镜(confocal)。激光共聚焦荧光显微镜可以对所要观察的目标进行逐层扫描,因为是单层,所以得到的照片非常清楚漂亮。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/12/201212132153_412431_1306303_3.jpg 再后来,我知道了用激光共聚焦荧光显微镜还可以对观察的目标进行三维重建。科研人员对关注的目标进行三维重建的,这样可以得到立体的效果,再制作成动画,已经成为很多最新发表的科研论文的重要实验结果,生动活泼,一改以前科研论文的枯燥。我的同事就有对染色体原位杂交结果进行三维重建的,这样可以得到立体的染色体的效果,让大家看到实际上染色体的真正形态和原位杂交效果,更加生动活泼。

  • 深入了解组织芯片:制作与应用指南

    [font=宋体][font=宋体]组织芯片[/font][font=Calibri](tissue chip)[/font][font=宋体],也称组织微阵列[/font][font=Calibri](tissue microarrays)[/font][font=宋体],是生物芯片技术的一个重要分支,是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载体(使用载玻片最多)上,进行同一指标的原位组织学研究。该技术自[/font][font=Calibri]1998[/font][font=宋体]年问世以来,以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。其最大优势在于,芯片上的组织样本实验条件完全一致。节省时间、节省试剂更是显而易见的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]TMA[/font][font=宋体]构建原理可以概括为以下四个步骤:[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选取待研究的组织。人们利用组织芯片技术对人体各组织均有研究,包括肝脏,前列腺,心脏,乳房等等,据相关数据显示,在大脑组织中的应用最多。医学上常选取一些病变器官进行研究。根据制作方法来分,微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]经检测后标记出待研究的区域。组织微阵列的检测仪主要是高性能显微镜、荧光显微镜或共聚焦荧光显微镜。适用的检测技术有苏木精—[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色,免疫组织化学[/font][font=Calibri](IHC)[/font][font=宋体]染色,原位杂交[/font][font=Calibri](ISH)[/font][font=宋体],荧光原位杂交([/font][font=Calibri]FISH[/font][font=宋体]),原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体],寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成([/font][font=Calibri]PRINS[/font][font=宋体])等。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]使用组织芯片点样仪将标记好的组织按设计排列在空白蜡块模上。首先要利用打孔机在已经标记好的靶位点上进行打孔,将组织芯转入蜡块模孔中,重复操作可转入上千个样品组织芯。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]使用切片机对阵列蜡块进行连续切片即获得组织芯片。根据制作方法来分,微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。后者可以克服上述前者的多种缺陷(含醛基的化合物)可能损伤[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]或使目标抗原结构断裂或破坏抗原——抗体结合位点,另外,石蜡包埋乙醇固定过的组织也无法避免[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]降解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]组织芯片的出现,与基因芯片配合使用在寻找疾病基因中有很好的互补作用。在肿瘤研究中发挥着重要作用。将基因芯片筛选出的基因作成探针,再将探针与组织芯片中众多的肿瘤组织进行荧光原位杂交,寻找肿瘤发生发展的相关因素。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]组织芯片应用:[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]组织芯片的应用范围十分广泛,涉及到生命科学的基础研究、临床研究、应用研究以及新药开发等多个领域。它可以应用于多种染色技术,如[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色、免疫组织化学染色、原位杂交、荧光原位杂交、原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]、原位[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]以及寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成等。此外,组织芯片还可以与核酸、蛋白质、细胞、组织、微生物等相关技术相结合,分别在基因、转录和表达产物的生物学功能这三个水平上进行深入研究。随着组织芯片的广泛应用,现代医药学、基因组学和蛋白组学的研究将得到极大的推动和发展。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service][b]石蜡组织芯片定制服务[/b][/url],更多详情可以关注:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service[/font][/font][font=Calibri] [/font]

  • 【讨论】双波长薄层色谱扫描仪还有发展的理由吗?

    薄层色谱技术(TLC)作为一种简单、快速、低成本的分析方法,一直是中药研究、天然产物提取和化学合成等领域研究人员以及食品安全、农药残留分析人员最喜爱的工具。 如果加上可定量分析的薄层色谱扫描仪,就能实现更加精细的研究,提高开发的效率。但是传统的薄层色谱扫描仪由于投资巨大(约10万元人民币),严重阻碍了薄层色谱技术的应用。 随着成像技术的发展,新型的薄层色谱分析仪器快速发展。它保留了薄层色谱分析中最重要的254nm淬灭荧光和365nm特征荧光成像,再加上通常可见光的成像,可满足所有薄层色谱的定量分析。由于去除了传统薄层色谱扫描仪中意义不大的双波长扫描,因此仪器成本降低7成以上。 目前,国际上发表的学术文章采用成像技术的已经超过传统的薄层色谱扫描,而且有替代的趋势。

  • 【分享】岛津CS-9301型薄层扫描仪维护保养规程

    岛津CS-9301型薄层扫描仪维护保养规程1.仪器的维护。1.1仪器室的温度控制在18~30℃;湿度为30%~60%。1.2仪器使用完毕,要用保护罩遮盖以防尘。1.3样品室要保持清洁干净,使用完毕,要以纱布擦干净。1.4样品台避免与酸、碱及有机溶剂接触,使用完毕可用乙醇擦干净。1.5低压汞灯的维护:凡需使用低压汞灯,均需记录使用时间。1.6仪器运作过程中,切勿打开主机盖。1.7仪器主机盖不能用力上拉或下压。1.8仪器性能要定期检定,保证仪器的准确性。2.仪器的保养。2.1仪器波长准确度的检查:用低压汞灯在200~700nm波长范围内以荧光方式对空白的硅胶薄层板扫描零吸收图谱。图谱中峰位波长与相应已知波长(253.6,313.0,334.2,365.0,404.7,435.8,546.1,578.0nm)的差值,应不大于±8nm。2.2薄层斑点扫描积分值重视性的考核:于硅胶G薄层板上点样2ml波度约为0.5mg/ml。甲基黄的甲醇溶液,以苯为展开剂,展开50cm后晾干,扫描10次,波长为λs=400nm,λR=600nm,以甲基黄斑点的吸收度积分值计算相对标准偏差。

  • 双波长扫描仪的设置问题

    请教高手:我现在使用一台cd60的双波长扫描仪,遇到的问题:在扫描过程极其不稳定,有时在样品点会出峰,但有时基本没有峰,想问是哪里出了问题?请不吝赐教

  • 薄层扫描仪性能指标及基本报价

    我单位需购买薄层扫描仪,想了解日本岛津公司 CS-9301(pc)s、瑞士卡玛 TCL SCANNER 3、德国DESAGA(迪赛克)CD 60薄层扫描仪的性能指标及基本报价。

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