细胞外囊泡外泌体分离柱

[align=center][img=,600,216]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/0115a8aa-1863-4da0-bf05-5b02661ffb4e.jpg[/img][/align]近年来，细胞外囊泡 (Extracellular vesicles，EV)的研究热度正在持续增长，与EV相关的文献数量呈指数级增长，已成为生命科学和生物医学研究领域内的一大热点话题。前不久，国际细胞外囊泡学会（ISEV）发布了最新版的细胞外囊泡研究指南[color=#00b050][b]《Minimal information for studies of extracellular vesicles(MISEV2023): From basic to advanced approaches》[/b][/color]，在MISEV2014和MISEV2018版本基础上整合了来自ISEV专家工作组和1000多名研究人员的反馈意见，加强了研究设计和实验细节，并为新的应用领域提出了建议和指导。[color=#000000][b]MISEV2023重点对EV命名、样品收集和预处理、EV分离与浓缩、EV表征、EV研究技术方法、EV释放与摄取、EV功能研究、EV体内实验进行了介绍。[/b][/color]（文末附全文链接）[align=center][color=#c0504d][b][size=20px]关于ISEV和MISEV简介[/size][/b][/color][/align]MISEV指南由国际外囊泡协会(ISEV)编制，ISEV是研究和使用细胞外囊泡的科学家和临床医生的主要专业协会，通过其年会、专题研讨会和其他会议、同行评审期刊、在线学习平台以及与其他学会的合作，吸引了世界各地的不同研究人员群体。因此，ISEV具有独特的优势，可以指导制定和传播关于最佳实践指南和科学考虑的专家共识。MISEV 2014是ISEV发表的第一篇EV研究指南，旨在为EV研究提供可靠的支撑，MISEV 2018对EV研究发展过程中的方法和手段进行了深入的且批判性的评估，其中大部分内容至今仍然有效。而MISEV 2023与之前的版本一样，为EV研究人员提供了简明扼要的建议和指导，对 MISEV2018 中提出的要点进行了完善，并增加了对新发展领域的建议和指导。其目的是帮助EV研究和应用领域的从业人员针对每个EV来源、类型、研究问题或应用展开最佳实践。[align=center][b][size=20px][color=#c0504d]关于EV命名[/color][/size][/b][/align]MISEV 2023保留了MISEV 2018的EV定义，但删除了2018年使用的“自然释放”的用词（新定义：EV是指从细胞中释放出来的颗粒，由脂质双层分隔，并且不能自行复制，即不包含功能性细胞核），以避免排除了通过细胞培养生产的EV。一般来说，ISEV建议使用通用术语“EV”和该术语的扩展，而不是使用具有误导性的术语，如与难以确定的生物发生途径相关的“exosomes（外泌体）”和“ectosomes（核外颗粒体）”。这两个术语是与假定的生物发生途径有关，需要谨慎使用且需要有强有力的证据。术语“exosomes（外泌体）”是指通过多泡体（MVB）释放的来自细胞内部的EV，而术语ectosomes（核外颗粒体，又称微囊泡Microvesicle、微粒Microparticle）是指细胞膜出芽形成的EV。由于目前大多数EV分离技术不能富集由不同机制产生的EV，且没有外泌体、核外颗粒体或其他EV亚型的通用分子标记。因此，ISEV不鼓励使用基于生物发生的术语，除非对此类EV群体进行了专门的分离和表征。相关术语及定义：[align=center][img=,600,639]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/dce5a128-4ecf-4c0c-ae0c-31e02862f1d1.jpg[/img][/align][align=center][b][size=20px][color=#c0504d]EV的收集和预处理[/color][/size][/b][/align]样本采集、预处理、储存等因素可能会对EV数量和质量造成影响，MISEV2023对需要注意的一些因素给出了建议。对于不同样本都适用的因素，给出了普适建议，另外也针对细胞培养物（cell culture‐conditioned medium，CCM）、细菌、血液、尿液、脑脊液、唾液、滑液、乳汁、实体组织共计9类EV来源样本的采集及处理给出了具体建议。[b]1.血液[/b]血液是EV研究中最常见的生物体液样本，但血液样本面临供体变化、分析前处理、血液中血细胞、血小板、脂蛋白及其他蛋白成分的影响。基于此，MISEV2023对血液样本的收集与处理给出了以下建议：? 相较于其他样本，供体对血液及血液EV的影响较大，因此当收集血液样本时，需详细的记录和报告。? 静脉采血应使用管径较大的采血针，以最大限度减少血小板活化和溶血。为减少细菌和皮肤细胞污染、避免组织因子介导的血小板活化，弃去少量抽到的血液是一种有效的做法（例如，人类抽血时丢弃前面的2-3 mL）。? 选用与下游分析兼容的采血管和抗凝剂。? 采血后，应避免过度摇晃和低温，并尽快处理为血浆或血清，以减少血小板激活和EV释放。? 制备血浆或血清时，应选择能够有效去除血小板但不影响EV的方法。若使用离心法，吸取上清时应从上向下吸上清液，并在沉淀上方保留一定量的血浆或血清，以免干扰沉淀导致血小板释放。? 血液EV的主要污染物/共分离物包括血小板、脂蛋白、溶血产物以及大量可溶性/聚集蛋白，检测时需说明任一污染物。[b]2.尿液[/b]尿液是继血液之后第二大用于EV研究的生物体液样本，可以通过非侵入性的方式连续获得大量样本。尿液EV (uEV)研究的挑战源于uEV的来源细胞不同，以及受到液体摄入量、采样时间、饮食、运动、年龄、性别、药物以及健康状况的影响。基于此，MISEV2023对尿液样本的收集与处理给出了以下建议：? 应使用无细胞尿液/无细胞的尿液生物库。? 在适当情况下，报告uEV污染物/共分离成分（THP、白蛋白、其他过滤到尿液中的蛋白）的去除方法和去除效果。? 为实现标准化，收集uEV和非EV尿液（如肌酐、PSA等）数据，用于估计绝对或相对排泄率。[b]3.细胞培养物[/b]MISEV2018针对CCM中提出的建议仍然有效，包括但不限于描述培养基的组成和制备，记录生产细胞的特征、细胞培养条件、物理或化学刺激物处理（如果有）、CCM收获的频率和时间间隔及方法、EV分离之前CCM的储存处理。如果细胞来源不是已建立的细胞系，则应报告采集和预培养条件，如酶消化。? 如使用血清或其他添加剂，需说明来源和用量。如果使用的添加剂已经去除了EV，需说明去除方法并评估去除程度（包括稀释，通过离心的方法去除EV时稀释可能是必要的）。? 应将非条件（空白）培养基作为对照进行处理和定性，以评估培养基本身对EV检测的影响。[b]4.细菌[/b]细菌EV和细菌来源的多样性，很难就样品类型、预处理、分离、收集和表征给出普适性建议。MISEV2023建议在处理细菌样本时需要注意以下事项：? 除其他培养参数外，细菌培养物收获时需说明细菌生长阶段。? 尽量缩短EV分离/浓缩前的储存时间，尤其是在样本未经过滤的情况下。? 当细菌EV样本来自体内或环境，应考虑宿主EV和环境中非目标EV的影响。? LPS（脂多糖）和LTA（脂磷壁酸）可分别作为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的EV通用标志物，但在许多特定细菌物种中，该特定标志物仍然不可用。? 细菌EV的非囊泡共分离物可能包括毛、鞭毛、噬菌体和蛋白质、脂蛋白和核蛋白复合物。MISEV2023的建议旨在提高EV研究的严谨性、可重复性和透明度，帮助细胞外囊泡研究和应用领域的从业者根据EV来源、EV类型、研究内容、应用方向选择或制定最佳实践方案。[color=#191b1f]需要说明的是，[/color]MISEV2023的内容建立在MISEV2014和MISEV2018的基础之上，前两份指南中的指导建议很大程度上仍然有效，读者在参阅MISEV2023时应结合之前的文件。[color=#191b1f]下表列出了可供参考的文章：[/color][align=center][img=1.png,600,330]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/1b5a57a4-f9c7-4abe-ac48-423a3c72de9f.jpg[/img][/align]参考：1.[i]权威发布！细胞外囊泡研究国际指南MISEV2023[/i] 2.[i]干货分享|外泌体研究红宝书—MISEV 2023解读（一）[/i] 3.[i]MISEV2023解读：全面认识细胞外囊泡[/i]附全文：[img]https://img1.17img.cn/17img/images/202101/pic/80056faa-b411-482e-9e52-14210fe10051.gif[/img][url=https://img1.17img.cn/17img/files/202403/attachment/07210f6f-ba10-4594-a029-01fcb39d3d64.pdf]J of Extracellular Vesicle - 2024 - Welsh - Minimal information for studies of extracellular vesicles MISEV2023 From.pdf[/url][来源：仪器信息网] 未经授权不得转载[align=right][/align]

何为细胞外泌体？　　外泌体最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中，是细胞主动分泌的大小较为均一，直径为40~100纳米，密度1.10~1.18 g/ml的囊泡样小体。细胞外泌体携带多种蛋白质、mRNA、miRNA，参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程并且有可能成为药物的天然载体，应用于临床治疗。　　然而，测量技术手段的局限限制了外泌体在这些领域的研究进展。所以，在这篇文章中，作者总结了外泌体的纯化方法（离心法、过滤离心法、密度梯度离心法、免疫磁珠法以及色谱法），比较了现存各种外泌体测量技术（电子显微镜、动态光散射技术及纳米微粒追踪分析术）在外泌体尺寸和表征研究中的应用。原文点击——综述：细胞外泌体颗粒表征测量技术新进展

[align=center][size=16px]外泌体综述[/size][/align] 外泌体是直径30-150纳米之间的细胞外囊泡，在疾病发生和进展中起着重要作用。因此，外泌体在早期诊断、靶向治疗等方面均具有很大的潜力。 外泌体生物发生及作用 外泌体的生物发生 1967年，Wolf在人血浆中首次发现一种来源于血小板膜泡的物质，并将其称之为“血小板尘埃”。之后，所有的生物体液以及体外培养的细胞上清中都被检测到含有囊泡。外泌体的生物发生涉及多种机制，这些机制有助于蛋白质和RNA等在细胞间的传递，从而生成具有源细胞特定成分的外泌体。多囊泡体(MVBs)的极限膜向内萌芽形成腔内囊泡(ILVs),等到晚期内体成熟后，MVBs可以与质膜融合，在细胞外空间中释放封闭的ILVs，被释放出去的ILVs称为外泌体。外泌体主要通过两种不同的机制释放，即跨反式高尔基网络释放和诱导释放。Rab家族蛋白，如Rab27a和Rab27b，是外泌体分泌的关键调节剂。除了Rab27a和27b外，其他Rab家族成员Rab35和Rab11也已被证明通过与GTPase激活蛋白TBC1结构域家族成员10A-C(TBC1D10A-C)相互作用来调节外泌体的分泌。研究还表明，癌症抑制蛋白p53能通过调节各种基因的转录（如TSAP6和CHMP4C）来刺激和增加外泌体分泌的速率。 外泌体的作用 外泌体是由细胞释放的纳米级囊泡，存在于不同的生物体液中，如血液、唾液和尿液。这些囊泡携带丰富的“货物”，包括蛋白质、信使RNA(mRNA)和microRNA(miRNA)。1983年，Pan在大鼠网织红细胞中首次观察到内吞囊泡的分泌。1987年，科学家Johnstone将这类囊泡定义为“外泌体”。最初，科学家认为外泌体是由细胞产生的代谢废物。然而，随着对外泌体的研究更加深入，人们逐渐抛弃这一误解。越来越多的研究表明，外泌体参与细胞间通信，是细胞微环境和旁分泌信号的重要组成部分。1998年，L.Zitvogel等人发表了一项关于树突细胞（DCcell）能产生有抗原提呈能力的外泌体的研究，阐明了外泌体含有功能性的MHC-I类II类分子和共刺激因子。2007年，H.Valadi等人的研究证实，细胞之间可以利用外泌体RNA交换遗传物质。这说明了细胞之间可以通过外泌体互相影响，甚至可以将一个细胞的基因强加到另外一个细胞上。2013年，美国科学家JamesE.Rothman、RandyW.Schekman及德国科学家ThomasC.Südhof共同获得当年诺贝尔生理医学奖，以表彰他们发现并阐明了细胞囊泡运输系统及其调控机制。来自癌细胞的外泌体已被证实可以调节癌症细胞生长、增殖、迁移过程，还能影响癌症的化疗耐药。因此，外泌体是理想的可作为非侵入性诊断和预后的生物标志物。 外泌体的分离分析方法 基于对外泌体研究的需要，科学界对外泌体的高效分离、定量和分析方法也在不断尝试和深入。由于样品基质和外泌体理化性质的复杂性，从体液中准确分离外泌体仍存在重大挑战。在过去的几十年里，研究主要使用差分和密度梯度离心、超滤和免疫分离等方法。目前，已有商业外泌体分离试剂盒投入使用。商业试剂盒通过用聚乙二醇或类似成分沉淀囊泡来减少耗时，但是存在非囊泡与外泌体一起共沉淀的弊端，外泌体的常规检测方法仍需向快速、高效、可重复和低成本的方向改进。近年来，基于研究和临床需要，越来越多的分析方法已经被用来分析外泌体。例如，酶联免疫吸附测定（ELISA）、纳米颗粒跟踪分析技术（NTA）、流式细胞术和荧光活化细胞分选（FACS）已成功开发用于外泌体定量。 蛋白质谱分析在外泌体中的应用 外泌体蛋白质组学是对外泌体中的蛋白质进行全面分析，以了解其生物学功能和疾病相关性。外泌体蛋白质组学分析涉及到外泌体的分离纯化、鉴定、数据分析等过程。蛋白质谱是外泌体蛋白质组学研究的手段之一，通过质谱可以获得蛋白质的名称、组成、表达量等信息，进而找到与疾病相关的蛋白质，探索可以用于疾病早期诊断和预后评估的生物标志物。质谱分析具有灵敏度高、通用性强、准确性高等优点，在研究中发挥了重要作用。

[align=center][font='times new roman'][size=16px]超速离心法[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]富集[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞分泌的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]引言[/size][/font][/align]本章利用超速离心法富集细胞分泌的外泌体。采用透射电子显微镜，Western Blot实验，纳米颗粒示踪分析等表征了外泌体的形态结构及分布特征。最后，用增殖实验和划痕实验测试了富集得到的外泌体的生物完整性[font='宋体']。[/font][align=left][font='times new roman'][size=16px]细胞分泌的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体表征[/size][/font][/align][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img]利用透射电子显微镜对超速离心法得到的外泌体进行了表征。如图（a）所示，洗脱后的外泌体具有典型的杯状结构。纳米颗粒示踪分析技术显示富集的外泌体粒径分布较窄，平均粒径为115.3 nm（图 b）。Western blot方法验证了富集方法的有效性。如图（c）所示，经超速离心法富集后，典型的低丰度外泌体标记物HSC70、TSG101、CD63和CD9可得到有效检测。以上结果证明，基于超速离心法对外泌体的富集可行性。[align=center][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px] （a）重悬液中外[/size][/font][font='黑体'][size=14px]泌[/size][/font][font='黑体'][size=14px]体的透射电子显微镜表征，（b）[/size][/font][font='黑体'][size=14px]纳米颗粒示踪分析技术[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征外[/size][/font][font='黑体'][size=14px]泌[/size][/font][font='黑体'][size=14px]体的尺寸分布，（c）[/size][/font][font='黑体'][size=14px]Western blot方法[/size][/font][font='黑体'][size=14px]表征[/size][/font][font='黑体'][size=14px]外[/size][/font][font='黑体'][size=14px]泌[/size][/font][font='黑体'][size=14px]体标记物HSC70、TSG101、CD63和CD9[/size][/font][font='黑体'][size=14px]蛋白条带[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]完整性验证[/size][/font][/align][img]" style="max-width: 100% max-height: 100% [/img]首先用细胞增殖用于评估超速离心法分离的外泌体的生物完整性。不同浓度（10[font='times new roman'][sup][size=16px]6[/size][/sup][/font]、10[font='times new roman'][sup][size=16px]8[/size][/sup][/font]、10[font='times new roman'][sup][size=16px]10[/size][/sup][/font]颗粒/孔）的H1299细胞外泌体分别与H1299细胞共培养24、48和72小时。如图（a）所示，H1299细胞来源的外泌体以剂量依赖性方式显著促进细胞增殖。此外，伤口愈合实验显示，H1299细胞来源的外泌体加速了伤口愈合速度，并以剂量和时间依赖的方式提高了伤口愈合质量（图 b）。上述结果表明，通过超速离心法富集的外泌体具有完整性，可以促进细胞增殖、分化和迁移。[align=center][font='黑体'][size=14px]图[/size][/font][font='黑体'][size=14px]（a）H[/size][/font][font='黑体'][size=14px]1299[/size][/font][font='黑体'][size=14px]细胞来源的外[/size][/font][font='黑体'][size=14px]泌[/size][/font][font='黑体'][size=14px]体对细胞增殖的影响结果，（b）[/size][/font][font='黑体'][size=14px]H1299细胞来源的外[/size][/font][font='黑体'][size=14px]泌[/size][/font][font='黑体'][size=14px]体对细胞[/size][/font][font='黑体'][size=14px]划后伤口愈合[/size][/font][font='黑体'][size=14px]的影响结果[/size][/font][/align][align=left][font='times new roman'][size=16px]小结[/size][/font][/align]本章利用超速离心法富集了细胞来源的外泌体，并对富集得到的外泌体进行了一系列表征表征。通过透射电子显微镜和纳米颗粒示踪分析技术分析表明得到的外泌体具有典型的杯状结构和小的粒径分布，证明了富集方法的可行性。Western Blot结果表明，富集后得到的外泌体溶液经裂解后，特征蛋白HSC70、CD63、TSG101和CD81，其含量比富集前显著提高。利用细胞增殖实验和划痕实验证明超速离心法富集得到的外泌体具有良好的生物学活性，可应用于下游的实验研究。

[align=center][font='宋体'][size=18px][color=#000000]超速离心法收集[/color][/size][/font][font='宋体'][size=18px][color=#000000]肿瘤细胞[/color][/size][/font][font='宋体'][size=18px][color=#000000]外泌体[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]将之前冻存于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-80[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]℃冰箱中的人肺腺癌细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H1299[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，人胃癌细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MGC-803[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和人乳腺癌细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MDA-MB-231[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]放入复苏盒，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]℃水浴锅融化，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]00 rpm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]离心[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。在超净操作台中，丢弃上清液，迅速加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]4[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]新鲜培养基，将细胞悬液混匀[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]后[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]转移到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]25 cm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的培养瓶中。倒置显微镜观察后放入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]5% CO[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=10px][color=#000000]2 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]恒温培养箱中培养。[/color][/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]细胞培养与传代[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]将[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H1299[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]重悬于含有[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]v/v[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]FBS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]RPMI-1640[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养基中，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]恒温[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养箱中培养。当达到[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]90[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]汇合时，去除旧培养基，加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]PBS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]缓冲液清洗两遍以去除部分死细胞和细胞碎片。弃上清后，加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.25%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]胰蛋白酶[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]-EDTA[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]溶液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，在[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]37[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]℃条件下消化细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。通过倒置显微镜观察到细胞之间相互分离后，迅速加入[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]mL[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]新鲜培养基，轻轻吹打使培养皿上的细胞脱落[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1500 rpm[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]离心[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] min[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]。去除上清液[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]，[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]抽取适量细胞悬液加入新的培养皿中，补充适量培养基进去吹打混匀。放入培养箱中继续传代培养。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MGC-803[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]和[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]MDA-MB-231[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在含[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]10[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]%[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]（[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]v/v[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]）[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]FBS[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]DMEM[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]培养基中生长。其他操作与[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]H1299[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]细胞[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]相同。[/color][/size][/font][align=left][font='calibri'][size=21px]细胞冻存[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]配置冻存液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]FBS:DMSO=9:1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，吹打混匀。取培养至覆盖培养皿表面[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的细胞，同传代步骤处理，离心后去除上清液，加入适量的冻存液后吹打均匀，转移至冻存管中密封，填写冻存信息，将冻存管放于冻存盒后转移至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]80[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]℃冰箱中备用。[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]培养基收集[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]细胞在无外泌体的培养基中生长至覆盖培养皿表面[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]9[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]时，收集细胞培养上清。将上述培养基进行[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]300 g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10 min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的离心，以去除死细胞；收集的上清液继续进行[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2000 g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10 min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的离心，用来去除细胞碎片；最后将上清液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10000 g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]离心[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30 min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，并用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.22 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]m[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]过滤器去除较大的细胞外囊泡，收集得到的溶液即为包含外泌体的培养基样品。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]收集外泌体[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]首先，将培养基放入离心管进行严格配平，对称的两只离心管要精确到小数点后[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]位保持一致。将转子放入离心机时，要保证转子完全平衡。抽真空，慢慢将速度上升到[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100000 g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]进行[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]70 min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的离心。离心后弃上清加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PBS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]缓冲液，进行第二次[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100000 g[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]70 min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的离心。弃去上清液，将产物重悬于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L PBS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]缓冲液中，放入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-80[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]℃冰箱中保存。[/size][/font][align=left][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]外泌体的透射电镜表征[/color][/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]首先取[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外泌体溶液与等量的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]多聚甲醛混匀滴加到铜网上，过夜风干将其固定在铜栅格上。采用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L 2%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]磷钨酸溶液负染[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3-5 min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，用滤纸吸取多余的染料，可在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100 kV[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的透射电镜下观察外泌体的形貌。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]首先采用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TEM[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]观察了所捕获外泌体的形貌。如图所示，可从[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TEM[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]图片中清楚的看到膜泡结构，所捕获外泌体具有典型的圆杯状膜结构，与之前报告的外泌体形貌一致。[/size][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012213366216_1219_5111497_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']1 [/font][font='times new roman']透射电镜表征外泌体的形貌。标准尺：[/font][font='times new roman']500 nm[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]进一步通过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]NTA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]确定了捕获外泌体的大小和分布。如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所示，所捕获外泌体平均大小为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]110.1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]±[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] 1.0 nm[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。此外，从图中可看出所捕获外泌体呈单峰分布，表明捕获的外泌体具有高纯度。[/size][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012213368577_5681_5111497_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']2[/font][font='times new roman'] NTA[/font][font='times new roman']表征外泌体的尺寸[/font][/align][align=center][/align][font='times new roman'][size=16px]将细胞培养液、富集后的外泌体洗脱液、富集后的上清液和洗涤缓冲液（第一次洗涤和第二次洗涤）用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]SDS-PAGE[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]进行分离。如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所示，通过对比其他泳道，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tim4@ILI-01[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]免疫亲和材料分离的外泌体样品中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]70 kDa[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]处的大量污染蛋白含量明显降低。[/size][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108012213370540_8358_5111497_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman'] SDS-PAGE[/font][font='times new roman']分析从[/font][font='times new roman']4 mL[/font][font='times new roman']培养基中分离出的外泌体蛋白质（考马斯亮蓝染色）[/font][/align][font='times new roman'][size=16px]对分离得到的外泌体进行表征。通过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TEM[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]NTA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分析表明分离得到的外泌体的形貌和大小与文献报道一致。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Western blotting[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]实验结果表明，经富集后的细胞培养基中的外泌体标志性蛋白质[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]P[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]70[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]63[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TSG101[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD81[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的含量比富集前显著提高。[/size][/font]

[font='times new roman'][size=18px][color=#000000]显微镜下[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]顺铂处理[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]后细胞外[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]体的分泌[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]为了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]进一步验证[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tim4@ILI-01[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]免疫亲和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]材料的捕获性能，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]采用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不同浓度的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]顺铂处理[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H1299[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞来验证[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tim4@ILI-01[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]免疫亲和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]材料是否可以检测细胞培养上清液中外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体分泌的变化。如图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3-18 A[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所示，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]随着顺铂浓度[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的增加，细胞活力[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]持续下降[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞分泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]浓度随着药物浓度的增加呈现先小幅增加后持续下降的趋势。外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体浓度的下降[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]主要[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]是由大多数细胞活性降低[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]所致[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][back=#ffff00]活细胞数量及其形态变化进一步证实了[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][back=#ffff00]顺铂仅[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][back=#ffff00]在特定浓度下调控癌细胞外[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][back=#ffff00]泌[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][back=#ffff00]体的分泌[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][back=#ffff00]，[/back][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]顺铂诱导[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞毒性存在浓度依赖性机制[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3-18 B[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。为了进一步验证外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体是否能提高细胞的化疗耐药能力，我们用不同浓度的顺铂[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μM[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μM[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μM[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]处理细胞，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]其分泌的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体孵育[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]下一代[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞后，细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在相同刺激条件下[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]存活率较对照组明显提高，以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μM[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]浓度效果最好[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3-18 C[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]实验[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]表明，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H1299[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞暴露于特定浓度[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的顺铂后[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的分泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]量增加，并且这些[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]降低其他[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H1299[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对顺铂的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]敏感性，增加了它们[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对顺铂的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]耐药性。以上研究表明，来自肺腺癌的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体在肺癌化疗耐药中起着重要作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]这个结果与之前的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]报道[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]一致。[/size][/font][table][tr][td][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/06/202306302213052787_7255_5389809_3.jpeg[/img][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman']3-18 [/font][font='times new roman']顺铂对[/font][font='times new roman']H1299[/font][font='times new roman']细胞外[/font][font='times new roman']泌[/font][font='times new roman']体分泌的影响：（[/font][font='times new roman']A[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']H1299[/font][font='times new roman']细胞的剂量反应；（[/font][font='times new roman']B[/font][font='times new roman']）不同浓度[/font][font='times new roman']顺铂[/font][font='times new roman']处理[/font][font='times new roman']H1299[/font][font='times new roman']细胞[/font][font='times new roman']3[/font][font='times new roman']天后的形态；（[/font][font='times new roman']C[/font][font='times new roman']）外[/font][font='times new roman']泌[/font][font='times new roman']体作用后的[/font][font='times new roman']H1299[/font][font='times new roman']细胞[/font][font='times new roman']对顺铂的[/font][font='times new roman']剂量反应。[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']比例尺：[/font][font='times new roman']200 [/font][font='times new roman']μ[/font][font='times new roman']m[/font][/align]

[align=center][font='times new roman'][size=21px]肿瘤细胞分泌的外[/size][/font][font='times new roman'][size=21px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=21px]体在机体内的作用[/size][/font][/align][font='times new roman'][size=16px]摘要[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤细胞通过产生，释放和利用外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体来促进肿瘤发生发展。肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体在肿瘤中的作用机制以成为目前的研究热点。外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体作为信息载体，可将遗传信息从肿瘤细胞传递到位于近处或远处的正常或其他异常细胞。所有体液中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]均[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]发现了肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体，与靶细胞接触后，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]会改变受体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的表型和功能属性，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]起到促进[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]血管生成，血栓形成，免疫抑制，肿瘤转移和耐药的作用。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在抑制宿主抗肿瘤反应和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介导[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]耐药中发挥重要作用。肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可能会干扰癌症患者的免疫治疗。它们在癌症进展以及癌症治疗中的生物学作用表明肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体是致癌转化的关键组成部分。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]关键词[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体；肿瘤转移；耐药；免疫抑制；血栓形成[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]多细胞生物[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中相邻细胞之间的通讯通常包括细胞内物质的交换和共享，这些[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]过程[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]是通过细胞间连接、突触或通过吞噬作用形成的，都需要细胞接触并且在短距离内进行。相反，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体代表[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]了信息传递的独特形式，既可以在短距离传递，也可以在长距离下进行信息交流。肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以将信号从肿瘤细胞转移到远端组织和器官。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]存在于机体循环中，并可以随时进入身体的各个部位。它们带有能够与内皮细胞接触并促进外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体进入血管和组织的表面成分[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1,2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。但是肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体仅占患者血浆中总外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]一[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]小部分，且该部分的含量可根据肿瘤进展而改变。[/size][/font]1. [font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体在肿瘤转移中的作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的转移过程[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]开始[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]于肿瘤细胞经历[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]了[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]上皮间质转化（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Epithelial-to-mesenchymal transition[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）。肿瘤细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]获得[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]迁移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]能力，并[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]进入血液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]淋巴系统[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，逐渐[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]到其他组织[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]这些[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤细胞产生具有独特分子特征的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]主要包含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相关的蛋白质与迁移和侵袭所需的分子，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]前列腺癌释放的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中的α[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]v[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]β[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]整联蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][3][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，白血病[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]或[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]乳腺癌衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Wnt[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通路[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]成分[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][4,5][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，以及胃肠道间质瘤（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]GIST[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）产生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]KIT [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][6][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。这些外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中缺氧诱导因子[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HIF[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的含量增加，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]促炎因子[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的含量也增加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][7][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。准备迁移的肿瘤细胞产生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可与机体的血管、基质成分和免疫细胞相互作用，完成转移前的准备[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][8][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。黑色素瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体显示在前哨淋巴结中积累，刺激血管生成，重塑细胞外基质并诱导黑色素瘤细胞富集到淋巴结中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][9][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Peinado[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]研究团队证明了，从高度转移的鼠类黑[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]色素瘤细胞衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体能够将骨髓重编程为转移前的生理状态。现在已有研究支持肿瘤细胞分泌的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体与高度侵袭性的黑色素瘤细胞的发展有关，与空白对照组相比，实验组小鼠先前外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体进行过注射处理，其体内黑色素瘤细胞的增殖和转移速率明显提高[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][10][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。在许多有关鼠类和人体肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的近期研究中，已证明这些外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体还携带微小[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分子，将其转移至正常细胞并诱导其遗传和蛋白质谱发生变化，从而有利于转移形成[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][11,12][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体已被证明带有[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD39[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD73[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，它们是催化腺苷产生的外核苷酸酶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][13][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。腺苷在机体内可[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导免疫抑制，发挥促进血管生成并驱动细胞基质重塑的重要作用，所有这些功能都促进肿瘤细胞迁移及其进入淋巴结。肿瘤外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体支持[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]转移的能力可以通过腺苷参与不同类别的分子途径[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][14][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font]2. [font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体在肿瘤耐药性中的作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤对放射和化学药物的抵抗作用是肿瘤患者临床治疗中面对的严重问题，至今尚未得到解决。值得注意的是有研究指出肿瘤分泌的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体在肿瘤的耐药性中起重要作用；肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体通过多种机制促进耐药性的发展，例如肿瘤细胞可以将化学治疗性药物（例如顺铂）浓缩并通过外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体从细胞质中去除[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][15][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]；此外肿瘤细胞还可以简单地将化疗药物包装到外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中以保护自己免受细胞毒性作用。耐药性肿瘤细胞可以通过外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体将抗性传递给敏感细胞，从而产生新的耐药性肿瘤细胞株。例如，已显示某些[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]RNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]miR-100[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]miR-222[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]miR-30a[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]miR-17[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）在外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中从抗阿霉素和多[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]西他赛[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的乳腺癌耐药细胞系转移至敏感细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]系[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]赋予抗药性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][16][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。有研究报道，在乳腺癌中，由[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HER2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞系或[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HER2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的肿瘤患者[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]产生的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]携带[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HER2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]清除特异性抗肿瘤药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]物曲妥珠单[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]抗[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][17,18][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。多[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]西他赛[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]耐药性已在前列腺癌中进行了研究，发现其抗药性是通过多药耐药蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MDR-1 / P-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]gp[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]而赋予的，多药耐药蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]是一种[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]P-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]糖蛋白转运蛋白，通常在耐药肿瘤中过表达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][19][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]顺铂耐药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的卵巢癌产生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中富含其他转运蛋白，例如[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MDR-2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ATP-7A[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]ATP-7B [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][15][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。最近的研究表明，耐药性部分归因于外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]miRNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]从耐药性癌细胞向敏感性癌细胞的细胞间转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][16][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。黑色素瘤动物模型的体内研究表明，质子泵抑制剂（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PPI[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）和低[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]pH[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]剂的联合使用可有效降低外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]对顺铂的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]耐药性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][20][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。尽管现有的研究表明外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体与肿瘤的耐药[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]性转移有关，但更详细的分子和遗传学分析对于确认上述研究并确定该过程中的潜在机制是十分重要的。[/size][/font]3. [font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体对宿主免疫功能的影响[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]不仅仅在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤微环境[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]起[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]免疫抑制或免疫刺激作用，与循环[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]系统[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以及各种淋巴器官中的免疫细胞也[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]相互[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]例如，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]白血病胚泡衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体在血浆中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]聚集[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]并直接与免疫细胞作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][21][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。在肿瘤存在的情况下，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体与周围免疫细胞的相互作用会导致免疫抑制[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][22][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]实验性小鼠模型的体内研究表明，注射肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体后，外周免疫细胞的功能发生改变，这些改变[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导致[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤生长和更短的生长周期[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][23][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。将离体分离的人[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞或[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]NK[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞与肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体共同孵育，导致[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]其[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导的抗肿瘤功能部分或完全丧失，其机制与上述中外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的机制相同。癌症患者血液和淋巴器官中常见免疫抑制因子，并且似乎与血浆中外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的水平相关。循环肿瘤源性外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的分子和遗传特征部分反映了在肿瘤细胞中发现的分子和遗传特征，这些特征正在作为鉴定癌症进展的非侵入性生物标志物的潜在方法被广泛研究[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][24][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤源性外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的免疫抑制机制之一是癌症患者循环中活化的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]效应细胞的凋亡。癌症患者循环中几乎所有的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]淋巴细胞都表达表面[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD95[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，同时有许多表达[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PD-1 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px][25][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。因此，它们分别受到携带[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]FasL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]膜形式[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体或携带[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PD-L1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的凋亡影响。这些凋亡诱导分子在外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体中的表达水平与癌症患者循环中对细胞凋亡敏感的活化[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞的频率相关。此外，循环中的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞的“自发凋亡”与疾病分期和预后之间存在显着相关性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][26][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TEX[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导的导致活化[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞凋亡的信号与靶细胞中的早期膜变化（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]即膜联蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]V[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]结合）、半[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]胱天冬酶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]裂解、线粒体细胞色素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]C[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]释放、线粒体膜电位（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MMP[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）的损失以及最后的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]DNA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]片段[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]化有关[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][27][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] PI3K / AKT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]途径成为活化的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞中肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的主要靶标。有研究发现调节[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PI3K-AKT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]信号的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PTEN[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]是外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的组成成分，并[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导受体细胞中的磷酸酶活性。将活化的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞与肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体共同孵育会导致严重的时间依赖性[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]AKT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]去磷酸化，并同时下调抗凋亡蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Bcl-2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Bcl-xL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MCl-1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的表达水平，同时，肿瘤细胞分泌的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体会上调促凋亡蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Bax[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][28][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。这些研究表明，肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体通过参与外在和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]内在的凋亡途径来诱导活化的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]CD8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]+[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞凋亡[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][22][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。体外数据与癌症患者循环[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]T[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞中促凋亡或抗凋亡家族成员表达的类似变化的报道一致[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][7][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可能会激活宿主的免疫系统。由于发现了肿瘤相关抗原（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TAA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MHC[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分子、伴侣蛋白（例如热休克蛋白[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HSP-70[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]HSP-90[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）等，因此，研究人员对肿瘤衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的免疫刺激作用进行了详细的研究。实际上，肿瘤细胞释放并被免疫系统内化的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体是开发抗肿瘤疫苗中[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TAA[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的良好来源[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][29,30][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。有研究报道在鼠类肿瘤模型中进行的疫苗接种研究证实，使用肿瘤衍生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体进行有效的疫苗接种可诱导小鼠产生强大的抗肿瘤免疫力和肿瘤排斥反应[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][31][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。基于这些报告，在人类临床试验中，肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体分别被认为是疫苗佐剂和治疗性疫苗的设计的免疫激活剂和免疫原性抗原的贡献者。[/size][/font]4. [font='times new roman'][size=16px]外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体在血栓形成过程中的作用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]晚期恶性肿瘤患者可能会产生足以危及生命的血栓。有研究指出，携带转移因子（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tf[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）的肿瘤来源外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以诱导癌症相关的血栓形成[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][32][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tf[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]也被称为凝血因子，其在患者体内的过表达与肿瘤的进展和转移密切相关[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][33][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。当癌细胞发生[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]EMT[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]过程时，它们开始释放含有高水平[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tf[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体。这些富含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tf[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以被内皮细胞内化，并诱导其快速转化为促凝血表型。癌症患者血浆中存在大量促凝囊泡是一种不良预后因素[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][32][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。但是，目前尚不清楚外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体转移[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]Tf[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]及其促血栓作用如何促进癌症进展和转移形成。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]总结[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在过去的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]年里，外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体作为细胞间传递信息的载体而被熟知。虽然信息传递可能是外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的主要生物学作用，但这种囊泡通讯机制似乎超越了几乎所有的细胞功能，并调节所有正常和异常细胞的分子和遗传特征。肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体引起了人们的兴趣，因为人们认为它们不仅能将肿瘤的信息传递给附近或远处的正常细胞，而且还能改变这些靶细胞的表型和功能，从而促进肿瘤的进展。在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]TME[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]中，这些外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体直接或间接有助于肿瘤的发生发展。在癌症中，循环外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体的负荷和功能与健康供体不同。肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体是血浆内容物的重要组成部分，它们的分子和基因图谱在疾病或治疗过程中发生变化，并且部分反映了母体肿瘤细胞的特征。此外，通过自分泌或旁分泌信号，肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体调节肿瘤生长，驱动新生血管形成、细胞分化、迁移和生存，并协调转移性肿瘤扩散。肿[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体似乎[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在整个癌变过程中发挥作用，并被肿瘤细胞设定为促进癌变的过程。它们还能抑制抗肿瘤免疫反应。此外，它们还可以将癌基因和致癌蛋白或其转录本从肿瘤细胞中转移到正常细胞。有趣的是，正常造血或组织细胞产生的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体可以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]介[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]导抗肿瘤反应并维持体内平衡。区分好的和坏的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌体成为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]未来沉默肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体疗法的主要挑战。肿瘤来源的外[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]泌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]体作为治疗靶点或癌症生物标志物进入这个领域之前，还需要进行更多的基础和临床工作。[/size][/font][align=center][font='times new roman'][size=21px][color=#000000]参考文献[/color][/size][/font][/align][1] [font='times new roman']Skog J, W[/font][font='times new roman']ü[/font][font='times new roman']rdinger[/font][font='times new roman'] T, Van Rijn S, et al. Glioblastoma [/font][font='times new roman']microvesicles[/font][font='times new roman'] transport RNA and proteins that promote [/font][font='times new roman']tumour[/font][font='times new roman'] growth and provide diagnostic biomarkers[/font][font='times new roman'][J].[/font][font='times new roman'] Nature Cell Biology, 2008, 10(12):1470-1476.[/font][2] [font='times new roman']Al-[/font][font='times new roman']Nedawi[/font][font='times new roman'] K, Meehan B, [/font][font='times new roman']Kerbel[/font][font='times new roman'] R S, et al. Endothelial expression of autocrine VEGF upon the uptake of tumor-derived [/font][font='times new roman']microvesicles[/font][font='times new roman'] containing oncogenic EGFR[J].[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']Proceedings of the National Academy of Sciences,[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']2009, 106(10):3794-3799.[/font][3] [font='times new roman']Bretz[/font][font='times new roman'] N P, [/font][font='times new roman']Ridinger[/font][font='times new roman'] J, Rupp A K, et al. Body fluid exosomes promote secretion of inflammatory cytokines in monocytic cells via Toll-like receptor signaling[J]. The Journal of biological chemistry, 2013, 288(51):36691.[/font][4] [font='times new roman']Chalmin[/font][font='times new roman'] F, [/font][font='times new roman']Ladoire[/font][font='times new roman'] S, Grégoire M, et al. Membrane-associated Hsp72 from tumor-derived exosomes mediates STAT3-dependent immunosuppressive function of mouse and human myeloid-derived suppressor cells[J]. Journal of Clinical Investigation, 2010, 120(2):457-471.[/font][5] [font='times new roman']Gross J C, Chaudhary V, [/font][font='times new roman']Bartscherer[/font][font='times new roman'] K, et al. Active [/font][font='times new roman']Wnt[/font][font='times new roman'] proteins are secreted on exosomes[J]. Nature Cell Biology, 2012, 14(10):1036-[/font][font='times new roman']10[/font][font='times new roman']45.[/font][6] [font='times new roman']Yang C, Kim S H, Bianco N R, et al. Tumor-Derived Exosomes Confer Antigen-Specific Immunosuppression in a Murine Delayed-Type Hypersensitivity Model[J]. [/font][font='times new roman']PLoS[/font][font='times new roman'] ONE, 2011, 6(8):1-11.[/font][7] [font='times new roman']Hoffmann T K, [/font][font='times new roman']Dworacki[/font][font='times new roman'] G, [/font][font='times new roman']Tsukihiro[/font][font='times new roman'] T, et al.[/font][font='times new roman'] Spontaneous Apoptosis of Circulating T Lymphocytes in Patients with Head and Neck Cancer and Its Clinical Importance[J]. Clinical Cancer Research, 2002, 8(8):2553-2562.[/font][8] [font='times new roman']Zhang H G, Grizzle W E. Exosomes: a novel pathway of local and distant intercellular communication that facilitates the growth and metastasis of neoplastic lesions[J]. The American Journal of Pathology, 2014, [/font][font='times new roman']184( 1[/font][font='times new roman']):28-41.[/font][9] [font='times new roman']Hood J L, San R S, Wickline S A. Exosomes Released by Melanoma Cells Prepare Sentinel Lymph Nodes for Tumor Metastasis[J]. Cancer Research, 2011, 71(11):3792-3801.[/font][10] [font='times new roman']Peinado[/font][font='times new roman'] H, [/font][font='times new roman']Aleckovic[/font][font='times new roman'] M, [/font][font='times new roman']Lavotshkin[/font][font='times new roman'] S, et al. Melanoma exosomes educate bone marrow progenitor cells toward a pro-metastatic phenotype through MET[J]. Nature Medicine, 2012, 18(6):883.[/font][11] [font='times new roman']Yu S, Liu C, [/font][font='times new roman']Su[/font][font='times new roman'] K, et al. Tumor Exosomes Inhibit Differentiation of Bone Marrow Dendritic Cells[J]. Journal of Immunology, 2007, 178(11):6867-6875.[/font][12] [font='times new roman']Altevogt[/font][font='times new roman'] P, [/font][font='times new roman']Bretz[/font][font='times new roman'] N P, [/font][font='times new roman']Ridinger[/font][font='times new roman'] J, et al. Novel insights into exosome-induced, tumor-associated inflammation and immunomodulation[J]. Seminars in Cancer Biology, 2014, 28:51-57.[/font][13] [font='times new roman']Schuler P[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']J, [/font][font='times new roman']Saze[/font][font='times new roman'] Z, Hong C[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']S, et al. [/font][font='times new roman']Human CD4+CD39+ regulatory T cells produce adenosine upon co-expression of surface CD73 or contact with CD73+ exosomes or CD73+ cells[J]. Clinical & Experimental Immunology, 2014, [/font][font='times new roman']177[/font][font='times new roman'](2)[/font][font='times new roman']:531[/font][font='times new roman']-5[/font][font='times new roman']43.[/font][14] [font='times new roman']Muller-[/font][font='times new roman']Haegele[/font][font='times new roman'] S, Muller L, Whiteside T L. Immunoregulatory activity of adenosine and its role in human cancer progression[J]. Expert Review of Clinical Immunology, 2014, 10(7):897.[/font][15] [font='times new roman']Safaei[/font][font='times new roman'] R, Larson B[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']J, Cheng T[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']C, et al. Abnormal lysosomal trafficking and enhanced [/font][font='times new roman']exosomal[/font][font='times new roman'] export of cisplatin in drug-resistant human ovarian carcinoma cells[J].[/font][font='times new roman'] Molecular Cancer Therapeutics, 2005, 4(10):1595-1604.[/font][16] [font='times new roman']Mrizak[/font][font='times new roman'] D, Martin N, [/font][font='times new roman']Barjon[/font][font='times new roman'] C,[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']et al. Effect of nasopharyngeal carcinoma-derived exosomes on human regulatory T cells[J]. [/font][font='times new roman']Journal of the National Cancer Institute,[/font][font='times new roman'] 2015[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']107(12):363.[/font][17] [font='times new roman']Ciravolo[/font][font='times new roman'] V, Huber V, [/font][font='times new roman']Ghedini[/font][font='times new roman'] G[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']C, et al.[/font][font='times new roman'] Potential role of HER2-overexpressing exosomes in countering trastuzumab-based therapy[J]. Journal of Cellular Physiology, 2012, 227(2):658-667.[/font][18] [font='times new roman']Amorim M, Fernandes G, Oliveira P, et al. The overexpression of a single oncogene (ERBB2/HER2) alters the proteomic landscape of extracellular [/font][font='times new roman']vesicles[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman'][[/font][font='times new roman']J]. 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[/font][font='times new roman']Plos[/font][font='times new roman'] One, 2014, [/font][font='times new roman']9(2[/font][font='times new roman']):e[/font][font='times new roman']88193[/font][font='times new roman'].[/font][21] [font='times new roman']Szczepanski[/font][font='times new roman'] M[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']J, [/font][font='times new roman']Szajnik[/font][font='times new roman'] M, Welsh A,[/font][font='times new roman'] et al[/font][font='times new roman']. Blast-derived [/font][font='times new roman']microvesicles[/font][font='times new roman'] in sera from patients [/font][font='times new roman']with acute myeloid leukemia suppress natural killer cell function via [/font][font='times new roman']membraneassociated[/font][font='times new roman'] transforming growth factor-beta1[J]. [/font][font='times new roman']Haematologica[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']2011[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']96[/font][font='times new roman'](9)[/font][font='times new roman']:1302[/font][font='times new roman']-130[/font][font='times new roman']9.[/font][22] [font='times new roman']Whiteside T[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']L. Immune modulation of T-cell and NK (natural killer) cell activities by TEXs ([/font][font='times new roman']tumour[/font][font='times new roman']-derived [/font][font='times new roman']exosomes)[[/font][font='times new roman']J]. Biochemical Society Transactions, 2013, 41(1):245-251.[/font][23] [font='times new roman']Curtale[/font][font='times new roman'] G, [/font][font='times new roman']Citarella[/font][font='times new roman'] F, [/font][font='times new roman']Carissimi[/font][font='times new roman'] C, et al. An emerging player in the adaptive immune response: microRNA-146a is a modulator of IL-2 expression and [/font][font='times new roman']activationinduced[/font][font='times new roman'] cell death in T lymphocytes[J]. Blood[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']2010[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman'] 115[/font][font='times new roman'](2)[/font][font='times new roman']:265[/font][font='times new roman']-2[/font][font='times new roman']73.[/font][24] [font='times new roman']Dinarello[/font][font='times new roman'] C A. Interleukin-1 and interleukin-1 [/font][font='times new roman']antagonism[/font][font='times new roman'].[/font][font='times new roman'][[/font][font='times new roman']J].[/font][font='times new roman'] Blood, 1991, 77(8):1627.[/font][25] [font='times new roman']Schuler P[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']J, Schilling B, [/font][font='times new roman']Harasymczuk[/font][font='times new roman'] M, et al. Phenotypic and functional characteristics of CD4+ CD39+ FOXP3+ and CD4+ CD39+ FOXP3neg T-cell subsets in cancer patients[J]. [/font][font='times new roman']European Journal of Immunology,[/font][font='times new roman'] 2012[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman'] 42[/font][font='times new roman'](7)[/font][font='times new roman']:187[/font][font='times new roman']6-18[/font][font='times new roman']85.[/font][26] [font='times new roman']Kim J[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']W, [/font][font='times new roman']Wieckowski[/font][font='times new roman'] E, Taylor D[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']D[/font][font='times new roman'], [/font][font='times new roman']et al[/font][font='times new roman']. [/font][font='times new roman']Fas[/font][font='times new roman'] ligand-positive membranous vesicles isolated from sera of patients with oral cancer induce apoptosis of activated T lymphocytes[J]. [/font][font='times new roman']Clinical Cancer Research,[/font][font='times new roman'] 2005[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman'] 11[/font][font='times new roman'](3)[/font][font='times new roman']:1010[/font][font='times new roman']-10[/font][font='times new roman']20[/font][font='times new roman'].[/font][27] [font='times new roman']Czystowska[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']M, Han J, [/font][font='times new roman']Szczepanski[/font][font='times new roman'] M J, et al. IRX-2, a novel immunotherapeutic, protects human T cells from tumor-induced cell death[J]. Cell Death & Differentiation, 2009, 16(5):708-718.[/font][28] [font='times new roman']Czystowska[/font][font='times new roman'] M, [/font][font='times new roman']Szczepanski[/font][font='times new roman'] M J, [/font][font='times new roman']Szajnik[/font][font='times new roman'] M, et al. Mechanisms of T-cell protection from death by IRX-2: a new immunotherapeutic[J]. 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Expert review of molecular diagnostics[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman'] 2015[/font][font='times new roman'],[/font][font='times new roman'] 15[/font][font='times new roman'](1)[/font][font='times new roman']:49–59.[/font][32] [font='times new roman']Chowdhury F, Williams A, Johnson P. Validation and comparison of two multiplex technologies, Luminex and Mesoscale Discovery, for human cytokine profiling[J]. Journal of Immunological Methods, 2009, 340(1):55-64.[/font][33] [font='times new roman']Dai R, Ahmed S A. MicroRNA, a new paradigm for understanding immunoregulation, inflammation, and autoimmune diseases[J]. Translational Research, 2011, 157(4):163-179.[/font]

实验思路，带有荧光模块的酶标仪可以高通量定量测定显荧光的物质，合成的新材料接枝荧光标签后，可以特异性结合外泌体等生物囊泡，从而计算外泌体的数量，用于后续的研究。

[font='times new roman'][size=18px][color=#000000]生物显微镜表征细胞划痕结果证明[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=18px][color=#000000]外泌体的生物完整性[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]判断外泌体的分离方法是否为理想方法的先决条件之一是观察该方法捕获的外泌体是否保留完整的生物学活性。进一步采用细胞划痕[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]实验[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]评价[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]了捕获外泌体的生物活性。在[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H1299[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞中添加不同数量的外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]培养[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]24[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]h[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]36[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]h[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]后，随着外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]添加量[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的增加，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H1299[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]划痕[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]闭合[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]速率[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]逐渐增加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]2[/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]4[/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]颗粒无统计学意义[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] A[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。同时，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]划痕[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]大小随着外泌体[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]添加量[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的增加而明显减小[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]（[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]B[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]）[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。图[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3-15 C[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]是加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]10[/size][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]10[/size][/sup][/font][font='times new roman'][size=16px]颗粒[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外泌体的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H1299[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞的代表性图片，与对照组相比，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]划痕[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]大小明显减小。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以上结果说明[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]通过[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]外泌体可以诱导[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的迁移。[/size][/font][table][tr][td][align=center][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/06/202306302211171874_7512_5389809_3.jpeg[/img][/align][/td][/tr][/table][align=center][font='times new roman']图[/font][font='times new roman'] [/font][font='times new roman']不同浓度外泌体对[/font][font='times new roman']H1299[/font][font='times new roman']细胞划痕愈合的影响：（[/font][font='times new roman']A[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']24[/font][font='times new roman']、[/font][font='times new roman']36 h[/font][font='times new roman']后划痕愈合率；（[/font][font='times new roman']B[/font][font='times new roman']）[/font][font='times new roman']24[/font][font='times new roman']、[/font][font='times new roman']36 h[/font][font='times new roman']后伤口大小；（[/font][font='times new roman']C[/font][font='times new roman']）添加了[/font][font='times new roman']1[/font][font='times new roman']×[/font][font='times new roman']1010[/font][font='times new roman']个外泌体颗粒的典型伤口愈合实验图片。比例尺：[/font][font='times new roman']200 [/font][font='times new roman']μ[/font][font='times new roman']m[/font][/align]

[size=16px]细胞外小泡通过[/size][size=16px]PTEN[/size][size=16px]基因[/size][size=16px]途径[/size][size=16px]靶向治疗[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]PTEN[/size][size=16px]是一种抑癌基因，负向调控肿瘤的发生。有研究表明，肝癌细胞外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]miR-155[/size][size=16px]抑制邻旁或远端受体[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞中[/size][size=16px]PTEN[/size][size=16px]表达，活化[/size][size=16px]PI3K/AKt[/size][size=16px]信号通路以促进[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞的增殖[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]23][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Zhang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]24][/size][/sup][/font][size=16px]研究发现，[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]患者血清中脂肪细胞来源外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]circDB[/size][size=16px]表达水平上调，通过与[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞中[/size][size=16px]miR-34a[/size][size=16px]结合，上调[/size][size=16px]去泛素相关[/size][size=16px]分子[/size][size=16px]USP7[/size][size=16px]的表达，通过减少细胞增殖过程中的[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]损伤来促进肿瘤发生。[/size][size=16px]Mao[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]25][/size][/sup][/font][size=16px]在研究中提到了癌症相关成纤维细胞[/size][size=16px]（[/size][size=16px]C[/size][size=16px]ancer associated fibroblasts[/size][size=16px]，[/size][size=16px]CAFs[/size][size=16px]）[/size][size=16px]调节[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞增殖。转移性肝癌细胞来源[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]中的[/size][size=16px]NID1[/size][size=16px]通过激活肺脏中的[/size][size=16px]CAFs[/size][size=16px]，促进其旁分泌肿瘤坏死因子受体[/size][size=16px]1[/size][size=16px]（[/size][size=16px]TNFR1[/size][size=16px]）[/size][size=16px]，进而诱导[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞克隆的形成，表现出更加活跃的增殖能力。新血管生成不仅能为肿瘤提供大量的氧气和营养，促进肿瘤的生长，还作为转移细胞进入体循环的入口点，[/size][size=16px]介[/size][size=16px]导肿瘤侵袭转移能力的增强。[/size][size=16px]Lin [/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]21][/size][/sup][/font][size=16px]研究发现[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]患者微血管密度与血浆[/size][size=16px]miR-210[/size][size=16px]表达水平具有明显相关性。研究发现，当肝癌细胞来源的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]miR-210[/size][size=16px]与单层内皮细胞共孵育后，[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞来源外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]miR-210[/size][size=16px]通过下调[/size][size=16px]SMAD4[/size][size=16px]和[/size][size=16px]STAT6[/size][size=16px]蛋白表达来促进毛细血管生成。肿瘤干细胞样[/size][size=16px]CD90+[/size][size=16px]肝癌细胞通过外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体高水平表达[/size][size=16px]lncRNA H19[/size][size=16px]，显著增加促血管生成因子[/size][size=16px]VEGF[/size][size=16px]和相应受体[/size][size=16px]VEGF-R1[/size][size=16px]的释放，也能上调促血管生成作用[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]26][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Shao[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]27][/size][/sup][/font][size=16px]研究发现，[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞来源[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]的[/size][size=16px]miR-584-5p[/size][size=16px]通过结合磷酸烯醇式丙酮酸激酶[/size][size=16px]1[/size][size=16px]（[/size][size=16px]PCK1[/size][size=16px]）[/size][size=16px]抑制其活性，诱导核因子[/size][size=16px]E2[/size][size=16px]相关因子[/size][size=16px]2[/size][size=16px]（[/size][size=16px]Nrf2[/size][size=16px]）[/size][size=16px]活化，上调血管内皮生长因子[/size][size=16px]A[/size][size=16px]（[/size][size=16px]VEGFA[/size][size=16px]）[/size][size=16px]表达，促进内皮细胞增殖，增强血管生成能力。[/size][size=16px]Wang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]28][/size][/sup][/font][size=16px]认为，[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞来源的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体中[/size][size=16px]miR-1290[/size][size=16px]富集，当其被血管内皮细胞内化后，能够抑制胞内[/size][size=16px]SMEK1[/size][size=16px]的表达，削弱其对[/size][size=16px]VEGFR2[/size][size=16px]磷酸化的抑制作用，从而诱导[/size][size=16px]VEGFR2[/size][size=16px]的活化和血管生成。除了非编码[/size][size=16px]RNA[/size][size=16px]介[/size][size=16px]导血管生成外，蛋白质分子也可参与其中。血管紧张素转运蛋白[/size][size=16px]（[/size][size=16px]V[/size][size=16px]asorin[/size][size=16px]，[/size][size=16px]VASN[/size][size=16px]）[/size][size=16px]是一种[/size][size=16px]Ⅰ[/size][size=16px]型跨膜蛋白，在肿瘤发生和血管生成中发挥重要作用。[/size][size=16px]Huang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]29][/size][/sup][/font][size=16px]研究发现，[/size][size=16px]HepG2[/size][size=16px]细胞外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体高表达[/size][size=16px]VASN[/size][size=16px]，被受体[/size][size=16px]HUVEC[/size][size=16px]内化摄取后，内皮细胞的增殖能力增强，大量的内皮细胞聚集有利于血管生成。[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]早期患者可进行肝切除术治疗，外[/size][size=16px]泌体一些[/size][size=16px]信号分子的表达与术后复发时间、总生存期长短、转移潜能等密切相关，可作为评估预后的指标。[/size][size=16px]Wang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]30][/size][/sup][/font][size=16px]跟踪随访[/size][size=16px]183[/size][size=16px]例行肝细胞癌切除术后的丙型肝炎病毒相关肝细胞性肝癌患[/size][size=16px]者[/size][size=16px]10[/size][size=16px]年发现，这些患者血清外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体中的分化拮抗非蛋白质编码[/size][size=16px]RNA[/size][size=16px]（[/size][size=16px]D[/size][size=16px]ifferentiation antagonizing non-protein coding RNA[/size][size=16px]，[/size][size=16px]DANCR[/size][size=16px]）[/size][size=16px]的表达水平与[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]复发呈正相关，并且成为[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]复发和病死[/size][size=16px]率相关[/size][size=16px]的最具预测性的因素。另外一项研究发现，[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]患者外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]miR-103[/size][size=16px]表达与[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]的转移潜能和复发风险呈正相关，外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体中[/size][size=16px]miR-103[/size][size=16px]水平[/size][size=16px]高表达[/size][size=16px]提示预后较差[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]28][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Jung[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]31][/size][/sup][/font][size=16px]检测并分析[/size][size=16px]14[/size][size=16px]例[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]患者[/size][size=16px]（[/size][size=16px]其中[/size][size=16px]8[/size][size=16px]例患者[/size][size=16px]1[/size][size=16px]年内没有发生肿瘤转移，[/size][size=16px]6[/size][size=16px]例患者发生肿瘤转移[/size][size=16px]）[/size][size=16px]血清外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体的[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]表达谱后发现，有[/size][size=16px]61[/size][size=16px]种[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]在转移性[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]患者血清外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体中表达显著上调，提示[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]的不良预后。外[/size][size=16px]泌体因[/size][size=16px]其具有低免疫原性、低毒性、可进行人工修饰，并且能够自由穿过生物屏障的特点，是非常理想的药物输送载体。外[/size][size=16px]泌体既[/size][size=16px]可以包裹[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]化疗药物，通过外层脂质膜保护作用使其不容易被降解，延长其在机体内作用时间，也可以包裹提高[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞对化疗药物敏感度的[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]等，利于化疗药物在机体内发挥抑瘤作用。[/size][size=16px]Zhang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]32][/size][/sup][/font][size=16px]将阿霉素或索拉菲尼装载至红细胞来源的[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]中，该载药[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]可明显抑制小鼠原位肝癌细胞的生长，并且其对肝癌的抑制作用强于传统化疗药物给药方式及剂量所诱导的肝癌抑制作用。[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]表达下调可激活[/size][size=16px]IGF-1R[/size][size=16px]进而活化[/size][size=16px]RAS/RAF/ERK[/size][size=16px]信号转导途径，[/size][size=16px]介[/size][size=16px]导[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞对索拉菲尼耐药性的形成，过表达[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]时可使得[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞对索拉菲尼敏感而诱导细胞凋亡[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]33][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Lou [/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]34][/size][/sup][/font][size=16px]在研究中用编码[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]的质粒转染脂肪间充质干细胞[/size][size=16px]（[/size][size=16px]AMSC[/size][size=16px]）[/size][size=16px]后，产生的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体可通过分泌[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]增加[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞对索拉菲尼的敏感度。此外，外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体还能够通过包裹抑制肿瘤细胞生长和侵袭的[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]，使其转移到[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞后逆转其恶性表型。人肝成纤维细胞[/size][size=16px]miR-335-5p[/size][size=16px]表达上调可抑制邻旁[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞增殖，进而抑制肿瘤生成，[/size][size=16px]CAFs[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体分泌的[/size][size=16px]miR-320a[/size][size=16px]可作为一种抗肿瘤[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]，与其下游靶点[/size][size=16px]PBX3[/size][size=16px]结合，抑制肝癌细胞的增殖、迁移[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]35-36][/size][/sup][/font][size=16px]。因此，选择合适的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体装载这些[/size][size=16px] miRNA[/size][size=16px]，为[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]的靶[/size][size=16px]向治疗[/size][size=16px]提供了新的途径。[/size]

【序号】：8【作者】： 周欣【题名】：间充质干细胞外泌体—温敏凝胶用于表皮创伤修复的研究【期刊】：南昌大学【年、卷、期、起止页码】：【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms/detail/detail.aspx?dbcode=CMFD&dbname=CMFD202201&filename=1021685067.nh&uniplatform=NZKPT&v=xdb-PSLqADdu9AbBT6kqP_7wGRDRB1-NFf2a83RsnBbW2R89opra0UpFEkchccCF

【序号】：2【作者】：杨润泽1,2吴家媛2周学东【题名】：生物支架搭载干细胞来源外泌体在牙髓再生中应用的研究进展【期刊】：中国实用口腔科杂志. 【年、卷、期、起止页码】：2023,16(02)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7ioT0BO4yQ4m_mOgeS2ml3ULjNaSvsBXvs38zDoHufz7xBF6byH1XkIvbC2MIOH829&uniplatform=NZKPT

大家好，新手科研小白，想求助大家SEC分离外泌体需要采购的仪器有哪些，暂定是用血清外泌体

【序号】：4【作者】：欧阳仁俊1,2杨晓红【题名】：不同复合支架负载间充质干细胞外泌体应用于骨组织再生的研究进展【期刊】：海南医学. 【年、卷、期、起止页码】：2022,33(23)【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C44YLTlOAiTRKibYlV5Vjs7ioT0BO4yQ4m_mOgeS2ml3UJ7x_If8mCNeSCsx4zzzyjMYXq0moYf50MYnNZ2ykKHk&uniplatform=NZKPT

骨髓间充质干细胞总结 2003年8月，为给大家提供一个网上交流干细胞研究经验的平台，我们干细胞版设立了骨髓间充质干细胞培养讨论区，经过近三个月的讨论学习，我们既学习丰富了自己的知识体系，也对间充质干细胞尤其是分离培养方面有了更为详实的认识，为了大家阅读的方便，我们决定把本版中的相关内容，同时参考部分书目和文献，做一总结。一、骨髓间充质干细胞的分离 目前常用的分离MSC的方法有全骨髓法和密度梯度离心法，全骨髓法即根据干细胞贴壁特性，定期换液除去不贴壁细胞，从而达到纯化MSC的目的。密度梯度离心法即根据骨髓中细胞成分比重的不同，提取单核细胞进行贴壁培养。随着对MSC表面抗原认识的深入，有人利用免疫方法如流式细胞仪法、免疫磁珠法等对其进行分离纯化，但经过流式或磁珠分选后的细胞出现了增殖缓慢等一些问题，加之耗费较大和技术的难度，在某种程度上限制了这些方法的广泛应用。1. 直接培养法（全骨髓培养法） 1987年，Friedenstein等发现在塑料培养皿中培养的贴壁的骨髓单个核细胞在一定条件下可分化为成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞和成肌细胞，而且这些细胞扩增20－30代后仍能保持其多向分化潜能，这类细胞即为骨髓间充质干细胞（BMSC），其工作对今后MSC的研究具有重要意义，不仅证实了骨髓MSC的存在，而且创建了一种体外分离和培养MSC的简便可行的方法，得到了广泛的应用。culture-spirit采用直接贴壁法，24-36小时首次换液，换液时用PBS洗两次，7-10天传第一代，以后2-3天传代。培养基采用Hyclone的DMEM/F-12（1：1），血清是天津TBD的FBS（顶级），得到了较好的培养结果。布兰卡根据自己培养大鼠MSC的经验，详细介绍了实验步骤：（1）接种后60-80分钟,换液去除悬浮细胞（2）原代培养24 h,48 h各换液一次（3）观察细胞情况，在原代培养7天左右时，如观察到成片的典型形态的细胞，在瓶底用Marker笔标记，0.25%胰酶消化，镜下观察控制，约5-10分钟（室温太低时应放置到孵箱中），加入全培养基终止消化，瓶体朝上，吸管轻轻吹打4-8分钟，尤其是标记部位。不要用力吹打，以免把贴壁较牢的成纤维细胞，上皮样细胞吹打下来。（4）传代到新瓶中，加入少量培养基，孵箱静置20-30分钟后，MSC大多牢固贴壁。瓶底朝上，轻轻吹打，丢弃悬浮以及贴壁不牢的细胞（大多是上皮样细胞），加入全培养基开始传代培养，如观察仍有较多杂细胞，可重复上述步骤。（5）经上述处理后，原代的那瓶细胞仍有一些MSC生长，可继续按原代培养，如观察到MSC的克隆，仍可按上述步骤纯化处理。（6）原代或传代的细胞如观察的少量成片的杂细胞，可直接镜下瓶底标记后，超净台里用长吸管尖端机械刮除，吸出去掉。菊花与刀用的是全骨髓培养法，直接用含10%的FBS培养基冲洗大鼠的股骨和胫骨，为了避免冲起许多气泡应缓慢冲，冲的次数不应太多。冲洗后不用离心直接接种在培养瓶里，48 h~72 h后首次换液，一般7~10天可传代。天之饺子介绍的小鼠MSC的分离方法：取6 w小鼠的股骨和胫骨，直接用含培养基冲出骨髓，一定要尽量把干垢端的骨髓冲干净。冲洗后不离心直接接种在培养瓶里，24－48 h后去悬浮，再接下来的每3－4天换液一次，直到需要传代。2. 密度梯度离心法 裴雪涛等用比重为1.073 g/ml的percoll分离（400 g×20 min）人骨髓MSCs，取界面处细胞层，离心后洗涤以2×105/cm2的密度接种，72 h后更换培养液，弃掉未贴壁细胞，以后每3 d换液一次。细胞长到80％汇合时1：1传代。菊花与刀利用PERCOLL密度1.073分离大鼠MSC 时，用2400 rpm×20 mins后可见中间有一层约1～2 mm厚的白色层，仔细用吸管吸取这一层再用PBS离心2遍即可加培养基和胎牛血清培养即rMSCs。周进明等利用密度为1.082的percoll分离小鼠MSCs，500g×30min离心后，取中间的单个核细胞层，PBS洗两次，接种于IMDM培养基，1 d后换液，去掉非贴壁细胞，以后每3-4天换液。jetter用过FICOLL,FERCOLL,上海二分厂的淋巴细胞分离液分离MSC细胞效果都不错，当然所获细胞群的纯度不一，Percoll最纯，而上海二分厂的淋巴细胞分离液所获细胞群的传代能力优秀（35 PASSAGE）。本版的部分园友认为MSC贴壁培养得到的细胞不均一，但是多能分化能力和增殖力好，percoll分离得到的细胞较为均一，多能分化性和增殖力不如贴壁培养的，尤其是增殖力相差很远，有人添加bFGF或/和表皮生长因子发现可以增强增殖能力。二、骨髓间充质干细胞的培养 天之饺子认为，间质干细胞的培养一定要用塑料培养瓶，不能用玻璃的。因为象间质干这类的基质细胞不易贴玻璃，而且现在买的进口好品牌的培养瓶都涂有一层促细胞贴壁的物质，多数园友培养时都添加10－15％胎牛血清。分离培养结果的差异可能是由于各个研究小组标本来源、采用的分离方法不同从而所获得的细胞不同，或者用来检测的细胞代数不同，或者培养过程中用的胎牛血清不同，导致MSCs获得或失去这些表面标记物的表达。三、骨髓间充质干细胞的特性 体外培养的MSC体积小，成梭形，核浆比大。不表达分化相关的细胞标志，如I、II、III型胶原、碱性磷酸酶或Osteopontin；也不表达SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124、CD166和多种表面蛋白，这群细胞特性稳定，扩增一代和两代后的细胞同质性分别达到95％和98％。MSC联系传代培养和冷冻保存后仍能具有多向分化潜能，而且保持正常的核型核端粒酶活性，但不易自发分化，在体外特定的诱导条件下，MSC可以分化为骨、软骨、脂肪、肌腱、肌肉、神经等多种细胞。四、其他相关内容 Jiang将从成人以及成年大鼠和小鼠骨髓分离的间充质干细胞（CD45－TER119－）命名为多潜能成年祖细胞，他们证明，MAPC高表达端粒酶，而且随着细胞的扩增，端粒的长度不变，单个MAPC来源的细胞群不仅能在体外向3个胚层的细胞分化，而且能在体内能够向各种组织细胞分化，相比较而言，形态与MSC相似的体外培养的皮肤成纤维细胞则不具有类似的分化潜能。参考文献 生理学报2003.55（2）：153－159 人骨髓间充质干细胞在成年大鼠脑内的迁移及分化中华放射医学与防护杂志.2002,22(3).-167-169 培养小鼠骨髓间充质干细胞及其移植后在体内的定位分布Exp Biol Med Vol. 226:507 520, 2001 Mesenchymal Stem CellsNATURE |VOL 418 | 4 JULY 2002 Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow干细胞生物学 裴雪涛 主编

[b][b][font=&][size=18px]会议咨询：[font=inherit]顾成刚13621995193（微信同号）[/font][/size][/font][/b][font=&][size=18px][color=#404040]2022深圳细胞产业大会[/color][/size][size=18px][color=#404040]第九届（深圳）细胞与肿瘤精准医疗高峰论坛[/color][/size][size=18px][color=#404040]2022年8月深圳 11月 武汉[/color][/size][/font][font=&][size=18px]深圳会议时间：2022年8月21-22日[size=16px][/size][/size][/font][font=&][size=18px][size=16px]深圳会议地点：深圳湾万丽酒店（深圳市南山区科技南路18号）[/size][/size][/font][font=&][size=18px][size=16px][/size][/size][size=18px][color=#404040][/color][/size][size=18px][color=#404040]同期举办：[/color][/size][size=18px][color=#404040]细胞与基因治疗前沿技术应用峰会 外泌体技术转化与疾病研讨会[/color][/size][size=18px][color=#404040]单细胞多组学研究与临床应用峰会 3D细胞培养与类器官临床应用峰会[/color][/size][/font][color=#404040]细胞外囊泡前沿与转化峰会[/color][color=#404040][img]https://img-user-qn.hudongba.com/upload/_oss/userarticleimg/202207/28/31658988346866_article3_1579.png?image/auto-orient,1/quality,q_80[/img][/color][color=#404040]招展联系人：顾先生13621995193（微信Wechat）[/color][size=14px][color=#404040]大会概况：[/color][color=#404040]2022细胞产业大会 2022第九届（深圳）细胞与肿瘤精准医疗高峰论坛将于8月在深圳举办，本次峰会紧密围绕政策规范、监管、工艺与产业化进展、细胞与基因治疗、外泌体临床研究与疾病治疗、外泌体临床检验与肿瘤免疫治疗、细胞外囊泡领域的机制研究、体外诊断及疾病治疗、单细胞多组学、单细胞测序、3D细胞培养与类器官、溶瘤病毒药物的开发与产业转化、干细胞临床前研究与临床应用转化、干细胞存储与治疗、肿瘤免疫治疗、通用型CAR-T细胞治疗、基因治疗及溶瘤病毒、实体瘤治疗及药物开发、临床研究与治疗进展等话题，特邀来自国家药品审评监管机构、科研院所、医疗机构、创新药企、生物治疗、生物技术和服务企业、产业链上下游企业、产业园区、投资机构、行业协会等多位权威专家与产业先锋进行分享交流及产品展示。组委会竭诚搭建优质对话合作平台，诚邀您八月深圳相聚，共襄盛会！[/color][color=#404040]近年来，现代生命科学与生物技术取得了一系列重要进展和重大突破，尤其是以干细胞、免疫细胞为核心的细胞治疗技术更是迅猛发展，在多种难治性疾病的临床研究上获得了许多成绩，在未来展现出了巨大的应用前景细胞治疗受到前所未有的重视，国家和地方层面也密集出台相关政策，支持干细胞、免疫细胞研究的发展。[/color][color=#404040]2009年单细胞测序技术强势问世，发展至今，单细胞测序技术已经在肿瘤、临床诊断、免疫学、微生物学、神经科学等领域占有重要的应用地位，是目前研究和应用的点。研究范围也不再只是基因组、转录组学，而扩展到了表观基因组、空间转录组学、代谢组、免疫组、蛋白组谱系。这些“多组学”技术允许研究人员更仔细地观察细胞之间的异质性，更清楚地识别特定细胞及其功能。[/color][color=#404040]细胞与基因治疗改变了人类治疗遗传疾病和疑难杂症的方式，并正在撬动整个制药生态圈。在各种适应症需求的推动下，细胞与基因治疗快速发展，多种细胞免疫疗法、干细胞疗法、基于腺相关病毒及慢病毒载体的基因疗法相继问世，为复发难治性肿瘤及严重的基因遗传缺陷类疾病提供了重要的治疗选择。随着CAR-T免疫细胞疗法在国际以及国内获批上市，细胞和基因疗法进入了全新的赛道，整个行业进入了技术突破和产业化的快速演进。[/color][color=#404040]2022细胞产业大会 2022第九届（深圳）细胞与肿瘤精准医疗高峰论坛将于8月在深圳举办，本次峰会紧密围绕政策规范、监管、工艺与产业化进展、干细胞临床前研究与临床应用转化、干细胞存储与治疗、肿瘤免疫治疗、细胞与基因治疗、通用型CAR-T细胞治疗、单细胞多组学、单细胞测序、细胞外囊泡分离及检测、3D细胞培养与类器官、基因治疗及溶瘤病毒、实体瘤治疗及药物开发、临床研究与治疗进展等话题，特邀来自国家药品审评监管机构、科研院所、医疗机构、创新药企、生物治疗、生物技术和服务企业、产业链上下游企业、产业园区、投资机构、行业协会等多位权威专家与产业先锋进行分享交流及产品展示。组委会竭诚搭建优质对话合作平台，诚邀您八月深圳相聚，共襄盛会！[/color][color=#404040]专题会议[/color][color=#404040]1、干细胞临床研究与转化应用峰会[/color][color=#404040]干细胞临床前研究与转化应用[/color][color=#404040]干细胞临床前研究与临床应用转化[/color][color=#404040]干细胞治疗技术与临床研究[/color][color=#404040]干细胞与免疫细胞临床研究的制剂质量评价[/color][color=#404040]干细胞治疗质量控制管理的现状与未来[/color][color=#404040]干细胞与类器官研究[/color][color=#404040]干细胞外泌体的应用[/color][color=#404040]干细胞与再生医学[/color][color=#404040]间充质干细胞外囊泡治疗难治性疾病[/color][color=#404040]新型干细胞治疗新冠肺炎[/color][color=#404040]2、肿瘤免疫治疗产业转化领袖峰会[/color][color=#404040]细胞免疫治疗研发突破与商业化进程[/color][color=#404040]通用型CAR-T细胞免疫治疗[/color][color=#404040]细胞免疫治疗质量控制&产业化[/color][color=#404040]细胞治疗药物研发与商业化生产[/color][color=#404040]细胞治疗产品开发与工艺优化[/color][color=#404040]TIL细胞在实体瘤治疗中的技术挑战与发展趋势[/color][color=#404040]iPSC来源的CAR先天性免疫细胞及其在肿瘤免疫细胞治疗中的应用[/color][color=#404040]细胞外囊泡的多组学研究[/color][color=#404040]细胞外囊泡RNA组分解析及其应用[/color][color=#404040]外泌体技术的开发与临床转化[/color][color=#404040]3、单细胞多组学研究与临床应用峰会[/color][color=#404040]单细胞多组学研究与临床应用[/color][color=#404040]单细胞转录组技术致力于大脑发育及神经干细胞调控的研究[/color][color=#404040]单细胞多组学科学创新前沿及最新技术[/color][color=#404040]单细胞空间组学的开发与应用进展[/color][color=#404040]单细胞技术助力精准医学研究[/color][color=#404040]单细胞组学研究技术在肿瘤免疫与个性化治疗中的应用[/color][color=#404040]单细胞技术在肿瘤微环境及肿瘤细胞异质性探究中的应用[/color][color=#404040]单细胞测序结合多组学技术的应用[/color][color=#404040]4、细胞与基因治疗前沿技术应用峰会[/color][color=#404040]细胞及基因治疗的临床研究与产业转化[/color][color=#404040]细胞与基因治疗的国内外最新研究进展[/color][color=#404040]细胞与基因治疗CDMO[/color][color=#404040]基因治疗及溶瘤病毒产品的开发[/color][color=#404040]AAV基因治疗药物大规模生产工艺研究及成本控制[/color][color=#404040]基因治疗GMP病毒载体规模化生产[/color][color=#404040]基因工程化外泌体用于肿瘤靶向治疗的研究[/color][color=#404040]溶瘤病毒及RNA疗法[/color][color=#404040]5、3D细胞培养与类器官临床应用峰会[/color][color=#404040]3D细胞培养与类器官前沿进展[/color][color=#404040]3D类器官培养技术发展及其应用[/color][color=#404040]类器官基础研究与技术开发[/color][color=#404040]类器官临床医学研究与应用[/color][color=#404040]类器官药物筛选与生物制造[/color][color=#404040]类器官技术的科研应用和临床转化[/color][color=#404040]类器官在肿瘤精准医学研究中的应用[/color][color=#404040]类器官在伴随诊断和新药研发中的应用和进展[/color][color=#404040]微流控器官芯片在精准医疗及药物研发中的应用[/color][color=#404040]* 最终议程以现场为准，发言企业可自行命题[/color][color=#404040]更多嘉宾邀约中，欢迎各单位推荐自荐！[/color][color=#404040]* 最终以现场为准[/color][color=#404040]谁将参与[/color][color=#404040]全国各大医院的院长、医院管理者、肿瘤内科、肿瘤外科、生物治疗科、血液科、病理科、辅助生殖科、检验科等各科室主任医师、副主任医师、主治医生及从相关领域研究的专家、科研人员、医药企业等；[/color][color=#404040]科研院所、生物医药企业、技术服务代理商及投资机构、临床医生等；[/color][color=#404040]知名高校的教授、研究员、副研究员及生命科学专业、药学专业、医学专业、免疫学专业等；[/color][color=#404040]细胞及肿瘤抗体免疫治疗上游供应商、诊断试剂及设备服务商、技术与设备仪器提供商、IT大数据解决方案提供商等；[/color][color=#404040]基因治疗、基因编辑、基因测序、基因检测公司、生物技术公司研发人员等技术人员、研发总监等；[/color][color=#404040]精准医疗方面的机构、企业、细胞存储与治疗上、中、下游产业链的企业以及CRO、CMO等；[/color][color=#404040]CEO及药厂研发负责人：抗体免疫治疗药物研发、免疫细胞治疗及制品开发、溶瘤病毒、治疗性疫苗、小分子免疫治疗药物、细胞治疗与再生医学领域的专家、临床研究人员、从业医师、研究生以及细胞治疗与再生医学领域的医疗用品科研人员与厂商等；[/color][color=#404040]政府机构与代表、产业园区、招商局、投资孵化机构、咨询与培训机构、银行、律师、知识产权、证券公司等。[/color][/size][size=14px][color=#404040][img=2021.9嘉宾集竖版.jpg,1047,1177]https://img-user-qn.hudongba.com/upload/_oss/uePasteUpload/202206/2315/1655968748942_2757.jpg?image/auto-orient,1/quality,q_80[/img][/color][/size][size=14px][color=#404040]2021细胞产业大会 2021第六届（上海）细胞与肿瘤精准医疗高峰论坛伴随着为期两天的会议和三天的展览于4月25日在上海展览中心（上海市静安区延安中路1000号）落下帷幕！本次大会集聚60+行业大咖到场分享精彩演讲，现场参观参会人数高达1800多人，共有100多家优质展商和60多家行业媒体列席，呈现出一场学术与产业紧密交融的盛宴。细胞产业大会成熟的“会议+展览”的模式得到了参会嘉宾、参展企业及参会代表的一致好评！[/color][/size][size=14px][color=#404040][img=2021.4嘉宾集竖版.jpg,1047,1266]https://img-user-qn.hudongba.com/upload/_oss/uePasteUpload/202206/2315/1655968747557_2756.jpg?image/auto-orient,1/quality,q_80[/img][/color][/size][size=14px][color=#404040]2021细胞产业大会 2021第七届（深圳）细胞与肿瘤精准医疗高峰论坛/2021基因与精准诊疗（深圳）高峰论坛/2021肿瘤精准诊疗（深圳）论坛伴随着为期两天的会议和展览于10月27日在深圳会展中心落下帷幕！疫情特殊时期，本次大会采用了“线上（约12万人观看）+线下（600多人参加）”相结合的方式同步进行的，专家们以专业的视角分享行业动态，以战略的眼光探讨产业发展，共商细胞治疗、基因治疗及肿瘤精准诊疗的未来发展之路！[/color][color=#404040]活动预告[/color][color=#404040]2022细胞产业大会[/color][color=#404040]2022第九届（深圳）细胞与肿瘤精准医疗高峰论坛[/color][color=#404040]时间：2022年8月[/color][color=#404040]地点：深圳[/color][color=#404040]2022细胞产业大会[/color][color=#404040]2022第十届（武汉）细胞与肿瘤精准医疗高峰论坛[/color][color=#404040]时间：2022年11月[/color][color=#404040]地点：武汉[/color][color=#404040]展位及论坛赞助[/color][color=#404040]赞助商及演讲收费标准：[/color][color=#404040]套餐一：2个开放式展位+40分钟演讲+大会电子版会刊封三+资料入袋 RMB 100,000[/color][color=#404040]套餐二：1个开放式展位+30分钟演讲+大会电子版会刊彩页1P RMB 50,000[/color][color=#404040]套餐三：1个开放式展位+20分钟演讲+大会电子版会刊彩页1P RMB 40,000[/color][color=#404040]套餐四：20分钟演讲 RMB 20,000[/color][color=#404040]套餐六：1个开放式展位 RMB 22,800[/color][color=#404040]套餐七：光地展位每平方米 RMB 2,000[/color][color=#404040]听众参会代表收费标准：[/color][color=#404040]2022年8月1日前注册RMB 1,000/人，8月1日后注册RMB 1,200/人（深圳） [/color][color=#404040]2022年11月1日前注册RMB 1,000/人；11月1日后注册RMB 1,200/人（武汉） [/color][color=#404040]团体注册：3人以上可享受9折优惠（深圳、武汉两地均享此政策）[/color][color=#404040]费用包含：会议资料、大会入场资格、授权老师的PPT、午餐、茶歇等。[/color][color=#404040]上海顺展展览服务有限公司[/color][color=#404040]联系人：顾先生13621995193（微信Wechat）[/color][color=#404040]邮箱：[/color][/size][size=14px][color=#404040][email]2498299886@qq.com[/email][/color][/size][size=14px][color=#404040]地址：上海市松江区沪松公路1221号星晨大厦801室[/color][/size][size=14px][color=#404040][img]https://img-user-qn.hudongba.com/upload/_oss/userarticleimg/202207/28/11658988287538_article1_1574.png?image/auto-orient,1/quality,q_80[/img][/color][/size][/b]

[align=center][size=18px]外[/size][size=18px]泌[/size][size=18px]体[/size][size=18px]在[/size][size=18px]肝癌的预后及靶[/size][size=18px]向治疗[/size][size=18px]中的[/size][size=18px]作用[/size][/align][size=16px]肝细胞癌（[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]）是世界上第三大常见恶性肿瘤，占原发性肝癌的[/size][size=16px]85%-90%[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][1-3][/size][/sup][/font][size=16px]。肝细胞癌新发病例估计约为[/size][size=16px]841[/size][size=16px]，[/size][size=16px]000[/size][size=16px]例[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][4][/size][/sup][/font][size=16px]。乙型肝炎病毒（[/size][size=16px]HBV[/size][size=16px]）感染被认为是中国发生肝细胞癌的主要危险因素[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][5][/size][/sup][/font][size=16px]。尽管影像技术、化疗、介入放射学、外科技术和肝移植近年取得了新的突破，晚期肝癌患者预后依然很差，至今没有有效的治疗[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][6-8][/size][/sup][/font][size=16px]。目前，肝细胞癌的[/size][size=16px]5[/size][size=16px]年生存率不超过[/size][size=16px]20%[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][9[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]，[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]10][/size][/sup][/font][size=16px]，[/size][size=16px]然而，[/size][size=16px]早期诊断可显著降低肝癌患者的死亡率[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][11][/size][/sup][/font][size=16px]。因此，提高肝细胞癌的总生存率依赖于对肝细胞癌的生物学行为机制的深入研究和新治疗靶点的开发。[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体是小的纳米级[/size][size=16px]细胞外[/size][size=16px]囊泡，[/size][size=16px]是细胞间通讯的重要介质[/size][size=16px]，通过多种生物分子（如蛋白质、[/size][size=16px]RNA[/size][size=16px]和[/size][size=16px]DNA[/size][size=16px]）调节细胞之间的微环境和免疫系统[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][4[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px], [/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]12[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]-[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]13][/size][/sup][/font][size=16px]以及细胞的遗传和表观遗传机制[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][14][/size][/sup][/font][size=16px]。研究表明，外[/size][size=16px]泌体不仅[/size][size=16px]将下游信号传递给靶细胞，还将遗传物质转移到下游细胞，为细胞间通讯提供了新的机制[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][4][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]已有的研究结果表明[/size][size=16px]，[/size][size=16px]Vesiclepedia[/size][size=16px]、[/size][size=16px]EVpedia[/size][size=16px]、[/size][size=16px]Exocarta[/size][size=16px]等数据库提供的不同类型的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体成分存在于生理或病理条件相似的不同细胞中[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][15-17][/size][/sup][/font][size=16px]。此外，外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体还参与血管生成、肿瘤细胞转移和正常细胞向肿瘤细胞的转化[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][18][/size][/sup][/font][size=16px]。许多类型的细胞，如间充质细胞、免疫细胞和肿瘤细胞可以诱导外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体的释放[/size][size=16px]，[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体在这些细胞中[/size][size=16px]上调[/size][size=16px]，[/size][size=16px]间接[/size][size=16px]表明外[/size][size=16px]泌体参与[/size][size=16px]肿瘤的发生、发展、转移、免疫逃逸和耐药性。此外，肿瘤来源的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体中含有大量的肿瘤相关[/size][size=16px]的生物[/size][size=16px]标志物[/size][size=16px]（[/size][size=16px]如[/size][size=16px]miRNAs[/size][size=16px]）[/size][size=16px]，可用于检测早期[/size][size=16px]HCC[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][20][/size][/sup][/font][size=16px]。因此[/size][size=16px]，[/size][size=16px]外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体对肝癌的预后及靶[/size][size=16px]向治疗[/size][size=16px]可能发挥了重要作用[/size][size=16px]由于外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体携带的生物分子与来源细胞具有一致性，近年来，肿瘤源性外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体（[/size][size=16px]Tumor-derived exosomes[/size][size=16px]，[/size][size=16px]TDE[/size][size=16px]）作为肿瘤分子标志物在肿瘤诊治中的应用得到了越来越多的关注。研究发现，与健康对照组比较，[/size][size=16px]HCC [/size][size=16px]患者血清中有[/size][size=16px]19[/size][size=16px]种[/size][size=16px]miRNAs[/size][size=16px]显著增加。其中，[/size][size=16px]miR-210[/size][size=16px]分泌由[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]细胞来源的外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]介[/size][size=16px]导，因此，[/size][size=16px]miR-210[/size][size=16px]也可作为[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]诊断的生物学标志物之一[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]21[/size][/sup][/font][font='times new roman'][sup][size=16px]][/size][/sup][/font][size=16px]。[/size][size=16px]Pu[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][22][/size][/sup][/font][size=16px]研究发现，[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]患者血清中外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体[/size][size=16px]has-miR-21-5p[/size][size=16px]和[/size][size=16px]has-miR-144-3p[/size][size=16px]表达水平显著高于慢性乙型肝炎[/size][size=16px]（[/size][size=16px]CHB[/size][size=16px]）[/size][size=16px]患者，[/size][size=16px]ROC[/size][size=16px]曲线显示，两者在[/size][size=16px]HCC[/size][size=16px]诊断上的表现优于甲胎蛋白，敏感度和特异性更高，作为肿瘤分子标志物具有良好的临床应用前景。肿瘤微环境是由肿瘤细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞、抗原递呈细胞以及细胞外基质、生长因子、炎性细胞因子等组成。不同细胞外[/size][size=16px]泌[/size][size=16px]体通过携带不同信号分子发挥细胞通讯作用，参与肝癌的发生、转移、血管生成以及免疫抑制型微环境构建。当癌基因表达过度活化或抑癌基因表达过度受抑时，细胞表现为增殖能力的过度增强和凋亡能力的过度削弱，进而导致肿瘤的发生。[/size]

[align=center][font='黑体'][size=21px]外泌体对肿瘤疾病靶向治疗的研究进展[/size][/font][/align][size=18px]1[/size][size=18px]外泌体在乳腺癌靶向治疗[/size][size=18px]中[/size][size=18px]的研究进展[/size][size=16px]乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，居我国女性恶性肿瘤发病率的首位。中国女性乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势，而且趋于年轻化。外泌体在乳腺癌治疗上也发挥着日益重要的作用，包括调控外泌体的表达、将外泌体作为药物运输载体、将外泌体进行工程化修饰用于靶向治疗等。[/size][size=16px]Limoni[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][12][/size][/sup][/font][size=16px]通过特异性改造，将[/size][size=16px]siRNA[/size][size=16px]装载于[/size][size=16px]HEK293[/size][size=16px]细胞来源的外泌体中，改造后的外泌体显示出显著的[/size][size=16px]HER-2[/size][size=16px]靶向性，并成功敲[/size][size=16px]除[/size][size=16px]低乳腺癌细胞[/size][size=16px]TPD52[/size][size=16px]基因的表达。[/size][size=16px]Liang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][13][/size][/sup][/font][size=16px]将抗肿瘤药物[/size][size=16px]5-[/size][size=16px]氟尿嘧啶和[/size][size=16px]miRNA-21[/size][size=16px]寡核苷酸拮抗片段一同包裹在外泌体中，成功实现了[/size][size=16px]HER-2[/size][size=16px]阳性肿瘤细胞的靶向治疗。外泌体表面定向性修饰是增强外泌体靶向性的一种有效方式。[/size][size=16px]Yu[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][14][/size][/sup][/font][size=16px]通过修饰改造，将化疗药物[/size][size=16px]Erastin[/size][size=16px]成功装载于叶酸标记的外泌体中，实现了乳腺癌的靶向治疗。[/size][size=16px]Li[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][15][/size][/sup][/font][size=16px]通过对巨噬细胞来源的外泌体做[/size][size=16px]c-Met[/size][size=16px]修饰，成功实现了外泌体携带多西他滨对乳腺癌的靶向治疗。[/size][size=18px]2[/size][size=18px]外泌体在肝癌靶向治疗[/size][size=18px]中[/size][size=18px]的研究进展[/size][size=16px]肝癌是病死率较高的恶性肿瘤，中国是全球肝癌发病率最高的国家。[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]是目前研究较多的与肝癌相关的外泌体[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]，它在正常肝组织中丰度最高，约占肝组织[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]的[/size][size=16px]50%[/size][size=16px]。[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]在肝癌组织中表达量明显降低，且在肝癌患者血清外泌体中的表达量也显著下降。[/size][size=16px]L[/size][size=16px]o[/size][size=16px]u[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][16][/size][/sup][/font][size=16px]研究证实，将[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]转染到脂肪组织来源的间充质干细胞中，待其产生大量富含[/size][size=16px]miR-122[/size][size=16px]的外泌体后，将外泌体运载到肝癌细胞中，能提高肝癌细胞对化疗的敏感性。鉴于[/size][size=16px]GPC3[/size][size=16px]在肝癌细胞外泌体分泌的特异性，也表明了[/size][size=16px]GPC3[/size][size=16px]有望成为肝癌的治疗靶点。[/size][size=16px]Zhang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][17][/size][/sup][/font][size=16px]将阿霉素或索拉菲尼装载至红细胞来源的外泌体中，该载药外泌体可明显抑制小鼠原位肝癌细胞的生长，并且其对肝癌的抑制作用强于传统化疗药物给药方式及剂量所诱导的肝癌抑制作用。[/size][size=18px]3[/size][size=18px]外泌体在胃癌靶向治疗中的研究进展[/size][size=16px]胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，可发生于胃的任何部位，我国是胃癌发病大国，好发于[/size][size=16px]50[/size][size=16px]岁[/size][size=16px]以上[/size][size=16px]的中老年人，其早期发现困难，极易误诊，患者预后差，生存期短。因此对于胃癌的早期诊断以及靶向性治疗研究成为亟待解决的[/size][size=16px]热点问题。在研究[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]靶点或制定[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]靶向治疗策略时，发现外泌体可研发成新型[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]的纳米载体，能够调控某些[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]的表达，最终抑制肿瘤的进展。[/size][size=16px]Z[/size][size=16px]hang[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][18][/size][/sup][/font][size=16px]研究发现外泌体可以包裹肝细胞生长因子小干扰[/size][size=16px]RNA[/size][size=16px]（[/size][size=16px]HGF siRNA[/size][size=16px]），并将其转运到胃癌细胞中，负向调控[/size][size=16px]HGF[/size][size=16px]表达，从而抑制胃癌细胞的增殖和迁移，[/size][size=16px]HGF siRNA[/size][size=16px]在胃癌的靶向治疗中具有潜在的应用前景。外泌体在胃癌中[/size][size=16px]也[/size][size=16px]可作为治疗靶点。服用[/size][size=16px]PPI[/size][size=16px]抑制剂已被证明是可以减少胃酸产生和促进抗癌作用的药物。[/size][size=16px]Guan[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][19][/size][/sup][/font][size=16px]人最近证明了[/size][size=16px]PPI[/size][size=16px]抑制剂可能抑制外泌体释放作为胃癌治疗的一种潜在的治疗工具。[/size][size=18px]4[/size][size=18px]外泌体在卵巢癌靶向治疗中的研究进展[/size][size=16px]卵巢癌是影响全世界众多女性的最致命的妇科恶性肿瘤，其早期症状隐匿，临床诊断时往往已为中晚期。靶向杀灭恶性肿瘤细胞是一个高效的方式，外泌体和外泌体模拟物在靶向药物的治疗剂递送中的新兴作用已得到广泛认可[/size][size=16px]。[/size][size=16px]卵泡刺激素受体[/size][size=16px]β[/size][size=16px]（[/size][size=16px]FSHβ[/size][size=16px]）链特定的氨基酸片段能够特异性的识别[/size][size=16px]FSHβ[/size][size=16px]阳性的卵巢癌细胞，锚定[/size][size=16px]FSHβ[/size][size=16px]的外泌体通过其表面的特异表达分子诱导外周血[/size][size=16px]T[/size][size=16px]淋巴细胞的增值效应从而激发其抗肿瘤效应，负载外泌体[/size][size=16px]/FSHβ[/size][size=16px]的树突状细胞能显著激活[/size][size=16px]T[/size][size=16px]细胞的卵巢癌细胞杀伤力，展示了外泌体装载靶向肽的潜力[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][20][/size][/sup][/font][size=16px]。外泌体[/size][size=16px]miR-21-5p[/size][size=16px]在肿瘤患者中高表达，研究表明其可促进腹膜间皮细胞间皮[/size][size=16px]-[/size][size=16px]间质转化，促进肿瘤细胞腹腔转移，外泌体[/size][size=16px]miR-21-5p[/size][size=16px]可能成为腹腔转移的新型治疗靶点[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][21][/size][/sup][/font][size=16px]。此外[/size][size=16px]miR-1246[/size][size=16px]在卵巢癌外泌体中高表达，[/size][size=16px]Kanlikilicer[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][22][/size][/sup][/font][size=16px]发现其表达水平是来源细胞的几百倍，抑制[/size][size=16px]miR-1246[/size][size=16px]的表达，可显著降低肿瘤负荷。[/size][size=18px]5[/size][size=18px]外泌体在肺癌靶向治疗中的研究进展[/size][size=16px]近年来外泌体在肺癌治疗方面的研究越来越多，认为外泌体在肺癌的治疗领域中有望为新的治疗靶点。可通过减少外泌体含量、调控特异性[/size][size=16px]miRNA[/size][size=16px]的表达，增强肿瘤细胞对药物敏感性、提高抗肿瘤免疫等途径促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖、侵袭及转移。[/size][size=16px]L[/size][size=16px]i[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][23][/size][/sup][/font][size=16px]证实耐紫杉醇肺腺癌细胞（[/size][size=16px]A549/PTX[/size][size=16px]）、顺铂耐药肺癌细胞（[/size][size=16px]A549/PTX[/size][size=16px]）中[/size][size=16px]miR[/size][size=16px]-181a[/size][size=16px]过度表达，促进肺腺癌细胞（[/size][size=16px]A549[/size][size=16px]）细胞上皮间充质转化（[/size][size=16px]EMT[/size][size=16px]），而抑制[/size][size=16px]miR[/size][size=16px]-181a[/size][size=16px]表达，可逆转[/size][size=16px]A549/PTX[/size][size=16px]和[/size][size=16px]A549/PTX[/size][size=16px]细胞[/size][size=16px]EMT[/size][size=16px]表型，并增强肺腺癌细胞对紫杉醇和铂类化疗敏感性。上调外泌体[/size][size=16px] mi[/size][size=16px]R[/size][size=16px]-630[/size][size=16px]在[/size][size=16px]NSCLC[/size][size=16px]细胞中的表达，通过靶向[/size][size=16px]LM03[/size][size=16px]蛋白，可抑制肿瘤[/size][size=16px]细胞的生长增殖及转移。[/size][size=16px]Kim[/size][size=16px]等[/size][font='times new roman'][sup][size=16px][24][/size][/sup][/font][size=16px]将紫杉醇载入外泌体中制成外泌体紫杉醇制剂，发现气道给予的外泌体能够将药物足量有效的运送至肺癌细胞，并且对耐药肺肿瘤有显著治疗效果。[/size]

我们专题主要是研究胶原纤维，费伦有提过胶原纤维存在红外光传输的特征波段，不过在国内外研究极少提到有关细胞与细胞外基质的光传输，大都是提到有关化学反应的过程，现在是想找在胶原纤维的UV与IR光谱里那一个波峰，透过纤连蛋白(fibronectin)传输光讯号到细胞上的受体，之前是有找到有关细胞不含胞器(只剩肌动蛋白丝actin、整键蛋白integrin)也能移动，所以我们就假设细胞的移动可能是胶原纤维所操控，讲得有点多了，因为就只差这一点专题就完成了，可以请专家提出一些意见吗？谢谢[IMG]http://www.cella.cn/book/10/images/image006.jpg[/IMG]

很多培养细胞的实验室对无菌的要求都有细微不同，关于紫外灯的照射时间大体上可以分为两派，一派开始前照射30分钟，一派是只要没有实验紫外灯就一直开着，直到下次实验开始前关闭，这两种哪种方式好呢？当然不能一概而论，当然从节能上看是第一种好，但是第一种能不能达到好的杀菌效果？那么一般来说是没有问题的，但是如果对于人数比较多的实验室，建议采用第二种方法，当然紫外不是避免污染的唯一方法，还要配合酒精擦拭和酒精灯消毒等。下面我们来看一般的消毒方法。实验进行前，超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌，以 75 % 酒精擦拭无菌操作台面，并开启超净工作台吹风5分钟以上分钟后，开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以 75 % 酒精擦拭无菌操作台。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以 75% 酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约 45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。注：由于大多数实验室酒精不是先用现配，由于酒精的挥发性较强，一般建议配置80%的酒精备用。

据美国物理学家组织网报道，北卡罗莱纳大学科学家的一项最新发现显示，细胞感染人类疱疹病毒（EBV）后，会产生小泡或被称为外体的液囊，从而改变细胞中所含的蛋白质和RNA（核糖核酸）。这种变质的外体一旦进入健康细胞，就能转变细胞的良性生长方式，使之变成不可控的致癌生长。这一发现刊登于美国《国家科学院院刊》网络版。EBV可能是世界上最成功的病毒，它无法被免疫系统彻底清除，几乎每个人终生都被它感染。它们不断进入唾液，在这里进行有效地传播。感染这种病毒很少致病，然而在几种主要的癌症中都发现了它的踪迹，包括淋巴瘤和鼻咽癌，它的蛋白质劫持了细胞生长调控机制，引发不可控的细胞生长，从而导致癌变。研究认为一种名为潜伏膜蛋白质1的蛋白质是EBV的致癌基因。通过外体，它们被传递给未受感染的细胞。研究人员还指出，EBV也彻底改变了外体的内含物，在细胞之间传递能激活癌症的蛋白质，这是值得注意的地方。这些发现表明，通过这种方式，病毒感染细胞能广泛影响并潜在控制全身其他细胞，引发它们的不可测生长。免疫系统不断地监视着外来病毒蛋白质，然而经外体携带的这些蛋白质可以不向免疫系统“报告”感染，并刺激癌细胞生长，由此容许了一种不可测的生长。该研究还显示，细胞能产生血管，这一被称为血管新生的过程很容易接受变质外体并引发潜在生长。北卡罗莱纳大学莱恩伯格综合癌症研究中心微生物与免疫学教授南希·瑞玻-特拉玻说：“外体就像特洛伊木马，EBV通过木马甚至能控制那些还没有感染的细胞。但重要的是，外体的产生可能为我们提供了一种新的治疗标靶，封锁它们就能控制癌症蔓延。”论文第一作者、瑞玻-特拉玻实验室博士后戴维·麦克表示，下一步研究是测定哪些蛋白质被选中进入外体，病毒如何控制了这些蛋白质，以及怎样才能遏制这一过程。

德国和以色列研究人员能够利用实验室器皿里的少量细胞培育出老鼠精子。他们认为，利用从睾丸里提出来的“生殖细胞”培育精子的这项技术，最终将能在人类身上产生作用　　新浪科技讯 北京时间1月5日消息，科学家已经在体外培育精子方面取得新突破，这一重大发现将能帮助不育男性生育属于自己的孩子，而不是利用捐献精子。　　德国和以色列研究人员能够利用实验室器皿里的少量细胞培育出老鼠精子。他们认为，利用从睾丸里提出来的“生殖细胞”培育精子的这项技术，最终将能在人类身上产生作用。该科研组现在正在“尽快”在人类身上重现这一结果。德国明斯特大学的斯特凡-斯库拉德教授领导的这个科研组，是世界上首个能利用生殖细胞培育精子的研究组。生殖细胞是睾丸里负责产生精子的细胞。　　科学家在生殖细胞被称作果胶体的一种特殊化合物环绕的环境下培育精子，这种环境与睾丸里的环境非常类似。以色列班固利恩大学的穆罕默德-胡雷赫尔教授也在培养精子，他说：“我认为，我们将能通过从睾丸里提取包含生殖细胞的组织，在实验室环境下刺激精子产生，最终培育出男性精子。”有关这项精子试验的发现，已经出现在《自然》杂志上。获得这一发现的科学家现在已经开始试验在体外培育人类精子。　　英国国家医疗服务体系(NHS)负责人、男性不育顾问斯蒂芬-戈登大加称赞这一突破。他说：“这是一项出人意料的新发现，它将彻底变革不育治疗，令每一位男性都能有自己的亲骨肉。不育男性都想有自己的孩子，但是目前他们的愿望还无法变成现实。但是通过老鼠试验获得的重大发现，使这种情况有可能变成现实。”英国顶级不育专家、爱丁堡大学的理查德-沙普教授希望参与这项试验，他说：“这是向成功培育出人类精子迈出的重要一步。”　　过去50多年间，男性不育问题变得越来越严重，男性的精子数大量减少。导致这种情况的部分原因是污染和塑料包装里含有雌激素等环境因素。泌尿科医生戈登说：“即使借助最新的显微外科技术，仍有数千名男性无法生育亲骨肉，只能依靠精子捐献。”胡雷赫尔表示，他的科研组目前正在“尽快”在人类身上再现老鼠试验取得的成功，以便帮助不育男性。“我们已经采用了相同试验，就如我们在实验室里利用老鼠做试验一样，我们采用人类细胞，不过目前还未取得成功。我们相信，只要它在老鼠等哺乳动物身上有作用，它就对人类也有效。我们正在利用大量不同化合物进行研究，以便获得生殖细胞，培育精子。我们认为它有可能变成现实，而且或许很快就会梦想成真。”　　这项研究成果发表在本月的《亚洲男性学》杂志上。胡雷赫尔说：“我们能产生可以繁育后代的精子，我们可以利用它们繁育小老鼠。这些精子显然很健康，而且也不存在遗传受损问题。我们花了多年时间才达到这个阶段，因此产生人类精子的技术不会在一夜间出现，但是老鼠试验取得成功后，我们已经开始人类研究。”为了加快制造人类精子的方法取得成功的步伐，胡雷赫尔的科研组打算开始与爱丁堡大学的理查德-沙普进行合作。　　沙普说：“这项研究显示，在体外培养人类精子并非不可能。生殖细胞需要合适环境。这是让它们以为它们仍在睾丸里的关键。”他认为，一种新颖方法或许能让它变成现实。他建议把活老鼠作为制造人类精子的“寄主”。他说：“你要做的就是提取一些含生殖细胞的人类睾丸组织，然后把它们放置在老鼠的皮肤下，利用老鼠‘卵化’这些细胞。然后取出培育出来的精子，用来治疗不育。但是我们首先需要证明萃取出来的精子不包含老鼠细胞，如果我们希望利用该技术，我想我们就可以做到这些。”　　戈登也在私营新生命诊所治疗不育，他说：“有几十亿人投入到女性不孕的研究中来，但是人们对男性不育的研究兴趣较小。有很多不育男性希望这项研究取得成功，因为这样他们以后就不用依靠捐献精子要小孩了。” 用在实验室里培育出来的人类精子治疗不育之前，需要获得相关部门的许可。但是沙普等研究人员认为，这个障碍将会被攻克。他说：“我们需要证明的主要问题，是精子不存在遗传损伤，并与睾丸产生的精子一样。用来进行女性不孕治疗的卵子和晶胚，也接受了类似检测。”

【序号】：1【作者】：杨涛【题名】：不同层软骨细胞与骨髓间充质干细胞在体内外三维共培养时细胞外基质特点的实验研究【期刊】：大连医科大学【年、卷、期、起止页码】：2017【全文链接】：https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=3uoqIhG8C447WN1SO36whLpCgh0R0Z-ifBI1L3ks338rpyhinzvy7Kt4RMGSMaxxH2WkQVeTlx_sUqdJWIk0PB_cP8FsBxdg&uniplatform=NZKPT