液相色谱流动相脱气方法

对于液相色谱中流动相脱气你有啥认识？脱气方法都有哪些？常用的脱气方法是什么？

1. 吹氦脱气法 使用在液体中比空气溶解度低的氦气，在0.1Mpa压力下，以约60ml/min流速通入流动相10-15min以驱除溶解的气体。此法使用于所有的溶剂，脱气效果较好，但在国内因氦气价格较贵，本法使用较少；2. 加热回流法 此法的脱气效果较好；3. 抽真空脱气法 此时可使用微型真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除区溶解的气体。显然使用水泵连接抽滤瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成过滤机械杂质和脱气的双重任务。由于抽真空会引起混合溶剂组成的变化，故此法适用于单一溶剂体系脱气。对多元溶剂体系应预先脱气后再进行混合，以保证混合后的比例不变。4. 超声波脱气法 它是目前实验室使用最广泛的脱气方法，将配制好的流动相连同容器一起放入超声波水漕中脱气10-20min即可。该方法操作简便，基本能满足日常分析的要求。5. 在线真空脱气法 把真空脱气装置串联到储液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。此法的脱气效果明显优于上述几种方法，并适用于多元溶剂体系。

液相色谱仪具有在线脱气功能，流动相还需要超声吗？

HPLC所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了（一般500ml溶液需超声20~30min方可），此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 离线（系统外）脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。 在线（系统内）脱气法无此缺点。最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用一种低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。此外还有在线脱气机。 一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。但氦气昂贵，难于普及。

脱气的必要性　　流动相脱气是高效液相色谱仪系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。高效液相色谱仪泵在输送液体时要产生很大的力量，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，我们发现瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会出现不规律的毛刺。　　脱气方法　　1. 吹氦脱气法。　　利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa 压力下，以约60 mL/min 流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L 氦气通过1L 流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但氦气价格较高，很少使用。　　2. 加热回流法。　　此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。　　3. 抽真空脱气法。　　此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa ，即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。　　4. 超声波脱气法。　　将欲脱气的流动相置于超声波清洗机中，用超声波震荡5～30min。此法的脱气效果最差。　　5. 在线脱气法。　　高效液相色谱仪可配在线脱气机。在线脱气使用简单，低故障，有效。为了保证高效液相色谱结果的准确性，脱气是一个当要的环节。尤其是四元低压液相系统，一定要配置在线脱气。

液相色谱流动相小议一、液相色谱流动相的性质要求 一理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 ③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 ④粘度要低（应正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外185~205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统。 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 反相色谱中，如果要在相同的时间内分离同一组样品，甲醇/水作为冲洗剂时其冲洗强度配比与乙腈/水或四氢呋喃/水的冲洗强度配比有如下关系： C乙腈＝0.32C 2甲醇＋0.57C甲醇 C四氢呋喃＝0.66C甲醇 C为不同有机溶剂与水混合的体积百分含量。100%甲醇的冲洗强度相当于89%的乙腈/水或66%的四氢呋喃/水的冲洗强度。 四、液相色谱流动相的滤过 所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。 五、液相色谱流动相的脱气 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。（噪声增大，基线不稳，突然跳动）。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移或形成鬼峰（假峰）。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。常用的脱气方法有：加热煮沸、抽真空、超声、吹氦等。对混合溶剂，若采用抽气或煮沸法，则需要考虑低沸点溶剂挥发造成的组成变化。超声脱气比较好，10~20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了（一般500ml溶液需超声20~30min方可），此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 离线（系统外）脱气法不能维持溶剂的脱气状态，在你停止脱气后，气体立即开始回到溶剂中。在1~4小时内，溶剂又将被环境气体所饱和。 在线（系统内）脱气法无此缺点。最常用的在线脱气法为鼓泡，即在色谱操作前和进行时，将惰性气体喷入溶剂中。严格来说，此方法不能将溶剂脱气，它只是用低溶解度的惰性气体（通常是氦）将空气替换出来。此外还有在线脱气机。 一般说来有机溶剂中的气体易脱除，而水溶液中的气体较顽固。在溶液中吹氦是相当有效的脱气方法，这种连续脱气法在电化学检测时经常使用。但氦气昂贵，难于普及。 六、液相色谱流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用，不要贮存。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在3天内使用，用前应重新滤过。容器应定期清洗，特别是盛水、缓冲液和混合溶液的瓶子，以除去底部的杂质沉淀和可能生长的微生物。因甲醇有防腐作用，所以盛甲醇的瓶子无此现象。

刚看了一篇关于流动相脱气方法的介绍：你们说的那个在线脱气是指液相色谱仪的脱气机么？如果是的话，我们公司的流动相先真空泵真空脱气，后超声脱气，最后还要在线脱气是不是太奢侈了？

实验室中没有超声波，还有没有简单的脱气方法，流动相准备用乙腈或甲醇，谢谢

用的是岛津LC-20AD液相色谱仪，对流动相进行在线脱气，但脱气管道中总会有气泡去除不了，这样就使泵压不稳，请问各位大侠要怎么处理，有什么好的建议？谢谢！

１.氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高．２.加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染．３.抽真空脱气法：易抽走有机相．４.超声脱气法：一种较为常见的脱气法．流动相放在超声波容器中，用超声波震荡１０～１５分钟，次法效果并不是太好，但操作简单．

我用的是二台日本岛津的高效液相色谱，最近是流动相总是产生气泡，我以是流动相过滤器有问题，对此进行了超声处理，可是还是有气泡产生，我在想是不是脱气机有问题，那位朋友能帮助我如何处理脱气机，在这里先多谢你们。

[color=#DC143C][color=#00FFFF][color=#DC143C][size=4]一、流动相为什么要脱气[/size][/color][/color][/color][color=#00008B][size=4]流动相溶液往往因溶解有氧气或混入了空气影响液相色谱的操作性能，在泵中产生气泡使流速不稳，气泡大时会在泵头形成空穴。气泡进入检测器后会在色谱图上出现尖锐的噪音峰，降低响应甚至导致信号消失。流动相中的氧对光电检测器影响最大，使紫外检测器基线增高，低波长检测时信号被抵消。在荧光检测中,溶解氧还会使荧光淬灭。溶解气体还可能引起某些样品的氧化或使溶液pH值发生变化。[/size][/color] [color=#DC143C][size=4]二、流动相脱气的方法[/size][/color] [color=#00008B][size=4]液相色谱流动相脱气使用较多的方法大概有四种：氦气脱气、真空脱气、超声波脱气、加热脱气。1.氦气脱气：氦气脱气是很有效的脱气方法。氦气缓缓的通过流动相赶去溶入的空气，如果使用得当，在10min内可除去80%～90%的溶入气体。由于氦气在流动相中的溶解度极低，所以用氦气脱气保护的流动相可以认为是一个无气体溶解体系。我们单位waters液相色谱就是使用氦气脱气，效果很好。其缺点是氦气价格比较昂贵，会增加检验成本。2.真空脱气：也是比较常用的脱气方法。贮液器被抽成部分真空，溶入的气体蒸发形成气泡溢出，其效果仅次于氦气脱气。我们单位Agileng1200液相色谱使用的是在线脱气机。其缺点是需要配备抽气泵或脱气机，增加仪器投资。3.超声波脱气： 将配制好的流动相连容器放入超声水槽中脱气10-20min。这种方法比较简便，又基本上能满足日常分析操作的要求，所以，目前仍广泛采用。这种方法只能除去30%的溶解气体，有时还会引起气体溶解度的增加。对氧敏感的检测器不宜用此法。4.加热回流脱气：该方法虽然效果很好，但是适用范围较窄。对于有机溶剂或混合流动相不适合用此法，因为挥发性组分会损失掉，改变流动相的组成。 [/size][/color][color=#DC143C][size=4]三、注意事项[/size][/color][color=#00008B][size=4]现在液相色谱大多都是多元系统，可以同时输送几种不同的流动相。但需要注意的是， 有些流动相不同组分混合时会有气体产生，对于这种流动相应改系统内混合为系统外预混合。测定三聚氰胺使用乙腈和辛烷磺酸钠作为流动相，我们一个检验员当时就是分别脱气后将流动相放在两个瓶子里，结果基线波动很大，一直不能平稳；后来采用预先混合脱气的方式问题就解决了。[/size][/color]

液相色谱已具备在线脱气功能为啥流动相还要超声，超声时间一般多少合适（用什么作为评判标准）

[size=4][font=楷体_GB2312]我们使用液相色谱时，必然要对流动相进行脱气，方法有超声、真空或者在线脱气等。大家可以谈谈自己经常使用什么方法脱气，脱气的效果如何，有什么好的经验都可以介绍一下！[/font][/size]

液相色谱流动相超声脱气时，需要在后面连接真空泵吗

液相色谱输液泵在运行中压力一直有波动 液相色谱输液泵在运行中压力一直有波动，流动相过滤脱气过的，也换色谱柱试过，单向阀也清洗过，但并没什么改善，各位大侠 说说这是哪些因素造成的呢？如何处理？

1、流动相溶剂的选择流动相溶剂的正确选择对于高效液相色谱分析(HPLC)的成功与否非常重要。目前还没有一个较为理想的选择模式， 主要依赖于经验的积累。流动相溶剂选择的一般要求是： (1)溶剂应当是高纯度，溶剂与固定相不互溶，并能保持色谱柱的稳定性；(2)溶剂的性能与使用的检测器应当匹配；(3)溶剂对样品应有足够的溶解能力；(4)溶剂应具有低的粘度和适当低的沸点；(5)尽量避免使用具有显著毒性的溶剂。在选择流动相溶剂时，可以从影响分离度R 的因素即柱效、分离因子a和容量因子 来考虑。选择溶剂时首先应排除一些物理性质(如沸点、粘度、紫外吸收等)不适于在液相色谱中使用的溶剂，然后选择能使分析样品中组分的容量因子 值保持在1～1O之间、洗脱强度适当的溶剂。对含多组分的样品、 值可扩展在0．5～20之间。在选出适用 值的溶剂当中，还要进一步选择能将样品中的不同组分分离开、且能使每个相邻组分的分离因子a大于1．05的溶剂。所选择的适用Ic，和a的溶剂还必须与能提供高理论塔板数的色谱柱相组合。因此，作为一个色谱工作者，熟悉表征溶剂物理和化学特性的重要参数，如溶剂强度参数￡‘、溶解度参数占、极性参数P、粘度．rl等，对液相色谱法流动相溶剂的选择会起到十分重要的作用。能够作为液相色谱流动相使用的溶剂有100多种，但实用的溶剂只有少数几种。在实验室中有了甲醇、乙腈、水、四氢呋喃、正己烷、二氯甲烷，就能够解决9O％ 以上的色谱分离问题。 2、溶剂的处理与更换液相色谱溶剂应尽量使用HPLC级溶剂。HPLC级试剂是用特殊方法生产的含有最少的微粒和最低的紫外吸收物质。水也应达到HPLC级。液相色谱实验室应配有纯水发生器。非色谱纯溶剂可通过蒸馏方法进行提纯，除掉大部分有紫外吸收的杂质。另外，用氧化铝或硅胶柱可除去极性强的化合物。完全由HPLC级溶剂组成的流动相不必过滤，其他溶剂由于含有不溶性微小颗粒，会逐渐堆积在色谱柱中堵塞流动相的通道，使柱压力升高，柱效率下降， 因此使用前一定要用0．2～0．5μm 的过滤器过滤。当使用固体化学试剂(如缓冲盐)配制流动相时过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵的单向阀、阻塞、损坏进样器和柱头过滤片。现有过滤器有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择。过滤水溶性流动相时(如甲醇／水)，先用1～2 mL甲醇润湿过滤膜，有助于快速抽滤。流动相在使用前必须进行脱气处理(连同贮液器一起脱气效果更好)， 以除去其中溶解的气体， 防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。若在死体积检测池中，存在气泡会增加基线噪声，严重时会造成分析灵敏度下降。流动相中的氧气对光电检测器影响最大，使紫外检测器基线增高，低波长检测时信号被抵消掉。在荧光检测中Oz会使样品的荧光淬灭， 降低灵敏度，还会导致某些组分被氧化或使柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。常用的脱气方法有① 氦脱气；② 加热回流；③ 真空脱气；④ 超声波脱气。从脱气速度和效果看，加热回流法最好，但操作不方便，存在着火的危险。对于混合流动相不提倡用此法，因为挥发性组分会损失掉，改变流动相的组成。超声脱气法只能除去3O 的溶解气体效果最差。近年来新出现的在线真空脱气法(on—line degasser)，把真空脱气装置串接到贮液系统中，并结合膜过滤器，实现了流动相在进人输液泵前的连续脱气。其脱气效果明显优于上述4种方法，并适用于多元溶剂体系。在HPLC中需要经常更换新溶剂。更换溶剂时，必须将原有的溶剂冲洗干净。如果新旧溶剂是互溶的，则必须保证新溶剂使色谱柱重新达到平衡。否则将产生基线漂移。若新旧溶剂不互溶，则要选择与原溶剂和新溶剂(正相和反相)都相溶的过渡溶剂冲洗，然后再用新溶剂冲洗。如异丙醇是1种很理想的过渡溶剂。特别要注意防止新旧溶剂发生反应或生成沉淀物，否则将给管路、泵及检测器带来污染和堵塞，给清洗工作带来麻烦。如果缓冲液反相流动相被正相流动相所污染，产生缓冲盐沉淀，可用5倍柱体积的非缓冲液反相流动相冲洗系统，再用1O倍柱体积的强溶剂(如乙腈)通过系统，最后用5O倍柱体积的异丙醇冲洗系统，以除去所有滞留的流动相和溶剂残留，换上反相流动相冲洗，使系统重新平衡。如果正相流动相被水溶性溶剂所污染，先用5O倍柱体积的异丙醇冲洗，而后用正相流动相冲洗。在分析样品前，最少需用1O倍体积的最终流动相冲洗系统。3、溶剂与检测器的匹配前面已提到溶剂的性能应当与使用的检测器匹配，在使用紫外可见光检测器时，需选用无紫外吸收特性的溶剂作流动相。样品测定波长应当在溶剂紫外吸收波长上限以上，噪声降至1O ～ 10一AU，才能保证检测的灵敏度，才能用于梯度洗脱。流动相溶剂在整个梯度范围内互溶性要好，尽量减少溶剂折光指数对溶剂组成梯度的影响。溶剂折光指数的改变会导致紫外吸收度的变化，使紫外检测器产生噪音和漂移。因此， 当使用两种或两种以上溶剂做梯度时，其折光指数应该尽量接近，尽量减少溶剂紫外吸收度改变的影响。在使用示差折光检测器时，应使流动相的折光指数与被测样品的折光指数有尽可能大的差别，因为二者的折射率差别越大，检测器的响应信号越大，检测灵敏度越高。示差折光检测器一般不用于梯度洗脱，这是因为随溶剂组成的改变，流动相的折光指数也在改变，无法使基线稳定。使用荧光检测器时，不能使用可熄灭、抑制或吸收荧光的溶剂作流动相。溶剂的极性和溶液的温度对荧光强度有明显的影响。增大溶剂的极性，导致荧光增强。通常荧光物质溶液的荧光效率和荧光强随着温度的升高而降低。此外， 当样品浓度较高时，易引起荧光猝灭效应和内滤效应，溶液浓度越大，该效应越显著，溶液中的其它成分，特别是顺磁性物质的存在，将使猝灭效应加剧。因此，在进行荧光检测时，试样要配成低于10 g／mL浓度的溶液，要使用不含荧光物质的溶剂。电化学检测器所用的流动相必须具有导电性。安培检测器采用的流动相中必须有常用浓度范围为0．01 mol／L~0．1 mol／L电解质(如含盐的缓冲液)存在。流动相要有足够高的介电常数，使电解质充分解离。流动相在电极表面呈电化学惰性，工作电压下背景电流小。4、色谱柱的保护色谱柱价格昂贵，保持色谱柱的柱效，容量和渗透特性、延长其使用寿命非常重要，防止柱性能下降可采用以下几方面的措施：① 溶剂的化学腐蚀性不能太强；② 避免微粒在柱头沉降；③ 泵上要装压力限制器，防止压力过高冲击过大，根据经验，设定泵上限压力在15~20 Mpa，带微机的系统还需设定下限压力，一般在0．5～ 1．0 Mpa；④ 流动相pHi7时用大粒度同种填料作预柱(饱和柱)， 以保护分折柱免受流动相酸、碱的侵蚀；⑤ 柱头加烧结不锈钢滤片和保护柱，保护柱体积占被保护柱体积的1：1O～ 1：2O即可。对于硅胶键合相填料，要求pH 在2．5～ 7．5之间，极端pH 的流动相会引起基体硅胶溶解，使键合相流失。柱子在酸性或碱性条件下使用后，应及时用水、甲醇清洗，除去残留的酸或碱。水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了5O 有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中， 同时加0。01 oA叠氮钠以防止微生物的生长。键合相色谱柱使用一段时间， 由于大量极性或非极性样品的连续注入。会引起固定相对样品的吸附、缔合等不良效应，使色谱柱钝化，分离性能变差，引起峰形加宽或拖尾等现象。此时应及时对色谱柱进行再生处理。其冲洗程序为：正相键合相柱：2O倍柱体积的9=50 oA 甲醇：氯仿一2O倍柱体积的醋酸乙酯一2O倍柱体积的流动相。反相键合相柱：1O倍柱体积的甲醇一1O倍柱体积的二氯甲烷一1O倍柱体积的正己烷一1O倍柱体积的二氯甲烷一1O倍柱体积的甲醇一2O倍柱体积的流动相。此外，也可以使用丙酮， 二甲基甲酰胺或约0．01 mol／L无机酸水溶液进行再生处理。5 溶剂与样品处理样品的成分复杂，可能存在对色谱柱有害的物质或影响色谱分离效果的因素，需要对其进行前期处理和HPLC分离。如溶解、浓缩、过滤、萃取、衍生化和液相色谱(低压柱层折)。溶解样品应判明样品的极性选择合适的溶剂。溶解样品的溶剂应与使用的流动相一致，溶解样品的溶剂强度大于所使用的流动相的强度时，会损害色谱图的质量，此时应考虑样品的进样体积。为了减少色谱峰加宽效应，样品到达柱之前最后稀释液的强度应小于流动相强度的一半(如流动相是50 的乙腈：水，样品稀释液应小于25 乙腈：水)。样品进样前必须过滤，如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小，表明样品中有微粒或发生沉淀。样品过滤的过程中可能会引起：样品被污染，因过滤吸附降低样品组分的含量，样品溶剂挥发引起误差。萃取是样品预处理的关键一步，要求萃取用的溶剂毒性低、挥发性好，杂质少、对待测样品有良好的溶解度且又与水不相混溶。常用的有乙醚、醋酸乙酯、二氯甲烷、氯仿、苯或者两种以上的混合溶剂。水溶性混合样品可直接进样，而样品是从有机溶剂中萃取出来的，则需要进行稀释。用弱溶剂可使样品在柱头浓缩，不会因柱前连接管路使色谱峰变差。对于没有紫外吸收或无荧光的样品组分，则需要进行衍生化处理，这样既可以提高灵敏度，又可改善分离度。为了保持较高的反应产率和重现性结果，一般要求加过量的衍生试剂，此时溶剂的影响不容忽视，如溶剂会影响产率，尤其是极性溶剂和溶质之间有相互作用，溶剂对紫外吸收谱的强度、峰形和最大吸收波长等有一定影响。衍生化不利于样品纯化。列举几个版面相关帖子，供学习探讨：1、[url=http://bbs.instrum

[align=center][size=21px][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]流动相使用方法及相关注意事项[/size][/align][size=16px] 有机相，比如甲醇、乙腈等[/size][size=16px]必须使用[/size][size=16px]色谱纯级别[/size][size=16px]或相当于该级别的[/size][size=16px]。水相，比如纯净水、超纯水、去离子水、二次蒸馏水等配流动相前或使用前必须要经过[/size][size=16px]0.45[/size][size=16px]μ[/size][size=16px]m[/size][size=16px]或[/size][size=16px]0.22[/size][size=16px]μ[/size][size=16px]m[/size][size=16px]微孔滤膜[/size][size=16px]过滤。[/size][size=16px]有机相要用有机相滤膜过滤，无机相或水相要用水相滤膜过滤，如果[/size][size=16px]配置好的[/size][size=16px]流动相中既有有机相又有水相，那就用有机相滤膜过滤。[/size][size=16px] 过滤后的流动相[/size][size=16px]使用前[/size][size=16px]必须[/size][size=16px]要进行[/size][size=16px]充分[/size][size=16px]的脱气，[/size][size=16px]除去[/size][size=16px]流动相[/size][size=16px]溶解的气体[/size][size=16px]，比[/size][size=16px]如[/size][size=16px]O[/size][font='times new roman'][sub][size=16px]2[/size][/sub][/font][size=16px]等。[/size][size=16px]如[/size][size=16px]不[/size][size=16px]脱气[/size][size=16px]或脱气不充分，流动相中溶解的气体很容易[/size][size=16px]易[/size][size=16px]产生气泡，[/size][size=16px]影响[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵流速，流速可能会变小而且可能不稳定，这样可能会造成色谱[/size][size=16px]基线噪声[/size][size=16px]变大，有时会形成比较有规律的波浪形波动[/size][size=16px]，[/size][size=16px]长时间看波动大小和波动频次可能也会有变化，有时也会伴有基线漂移，[/size][size=16px]造成灵敏度下降[/size][size=16px]，检出限指标变差[/size][size=16px]，甚至[/size][size=16px]影响检测结果的准确性或根本[/size][size=16px]无法[/size][size=16px]完成检测[/size][size=16px]。[/size][size=16px] 目前各厂家或实验室采用的脱气方法[/size][size=16px]主要[/size][size=16px]大概有这么[/size][size=16px]七[/size][size=16px]种，[/size][size=16px]以下一一[/size][size=16px]介绍。[/size][size=16px] 氦气脱气法：[/size][size=16px]向密封的流动相储液瓶中连续吹氦气，首先要用氦气置换掉储液瓶中空气，再[/size][size=16px]利用[/size][size=16px]氦气[/size][size=16px]在[/size][size=16px]液体中的溶解度[/size][size=16px]要[/size][size=16px]比空气低[/size][size=16px]的特点[/size][size=16px]，连续吹氦[/size][size=16px]气就可以把流动相中溶解的大部分气体脱出来，从而降低气体在流动相中溶解的量。这种脱气方法脱气效果[/size][size=16px]较好，但[/size][size=16px]储液[/size][size=16px]瓶[/size][size=16px]结构[/size][size=16px]较复杂，使用[/size][size=16px]成本[/size][size=16px]也较[/size][size=16px]高[/size][size=16px]。也有人用比较便宜的氮气代替氦气（氮气脱气效果没有氦气好，但可以脱掉大部分气，大多时候也是可以用的），降低成本[/size][size=16px]。[/size][size=16px] 加压脱气法：向密封的流动相储液瓶通入氮气或氦气，给储液瓶中流动相加压，这样会降低气体在流动相在溶解度，脱气效果较好，但这种方法也会存在储液[/size][size=16px]瓶结构[/size][size=16px]较复杂，使用成本也较高的问题。[/size][size=16px] 沸水[/size][size=16px]脱气[/size][size=16px]法或加热[/size][size=16px]回流[/size][size=16px]脱气[/size][size=16px]法：[/size][size=16px]这两种方法都得加热，利用液体温度越高液体中气体溶解度就越低的原理脱气，脱完气流动相再慢慢恢复常温，恢复过程中要注意防止流动相温度降低气体又溶解到流动相中。这种方法脱气效果也很好，但这种方法操作起来较麻烦，且有局限性。利用这种方法脱气主要是针对水的脱气，含有有机相或易挥发、有毒成分的流动相是不能这种方法的。用这种挥发出来的成分可能会污染环境，会改变流动相各成分的比例，[/size][size=16px]影响影响效果。[/size][size=16px] 抽真空脱气法：[/size][size=16px]这种方法是用抽真空的方式脱掉流动相的气体，这种方法也[/size][size=16px]是有弊端的，一是[/size][size=16px]易抽走[/size][size=16px]流动相中易挥发成分，比如[/size][size=16px]有机相[/size][size=16px]，二是储液被抽真空，储液瓶中就是负压，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵吸液可能就会受到影响，影响[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]泵流速。[/size][size=16px] 超声[/size][size=16px]波[/size][size=16px]脱气法：[/size][size=16px]这种方法使用超声波清洗器超声振动流动相，从而脱掉其内的气体。这是现在实验室用的最多的脱气方法[/size][size=16px]。[/size][size=16px]这种方法脱气效果不是太好[/size][size=16px]，但[/size][size=16px]这种方法[/size][size=16px]操作[/size][size=16px]起来[/size][size=16px]简单[/size][size=16px]，很受欢迎[/size][size=16px]。[/size][size=16px] 在线脱气机脱气法：这种方法目前主要有[/size][size=16px]三[/size][size=16px]种方式，一是[/size][size=16px]膜脱气，通过真空泵从一种特殊材料的膜或管中把气体抽出去。一种是靠振动的方法脱气。一种[/size][size=16px]是靠抽真空[/size][size=16px]或是给流动相加压脱气。这种脱气方法能连续脱气，脱气效果较好，但脱气机价格一般都较高，高端仪器都有配置，普通仪器大多都没有配置。[/size] [size=16px]以上几种方法是我用过或接触到过的几种方法，分享给大家，如遇到新方法再做补充。[/size]

液相色谱仪对流动相的要求： 1.首先必须是HPLC级的，这一条相信大家都做到了。 2.脱气。由于流动相里含有微量空气，经泵的压力作用，会在流通池里产生气泡，这对分析产生一定的影响，如噪音增大，甚至于掩盖信号峰。因此，流动相在使用前必须经超声脱气30分钟以上。 3.过滤。由于流动相里有很微小的垃圾，如不经过过滤，偶尔会卡在单向阀门中，从而产生压力波动。这一点很多用户不太注意，等到产生压力波动又不知道是什么原因产生的。 如果以上几点都注意到了，相信你的分析工作就会比较顺当了。

[align=center][b]液相色谱流动相使用时的10个坏习惯，你中招了吗？[/b][/align]我们在以前的文章中给大家讲过在流动相使用过程中应该做的事情，除了有所为，还要有所不为，那有哪些习惯是需要避免的呢？[b]1、加入有机相之后再测量流动相的pH值[/b]通常情况下测量流动相的pH值，是测量水相中的pH值参数。有机相加入之后pH值参数的测量就和之前有误差。PS：但如果能保证每次测量都是加入相同量的有机相之后得到的pH值，虽然这不能保证精确度，但是这能保证前后一致的测量结果，所以这样也没有问题。[b]2、不使用缓冲盐[/b]缓冲盐的加入是用来控制和修正流动相中pH值的改变的。样品基质、空气中的CO2、水中的杂质都会造成流动相pH值的改变，而pH值的改变会影响样品的保留、峰形、峰面积参数。[b]3、没有在正确的缓冲区间使用缓冲盐[/b]每个缓冲盐都有一定的缓冲范围，在此范围内它提供了最佳的pH稳定性。在这个范围外，缓冲盐在抵抗pH值变化方面是无效的。所以要么在正确的范围内使用缓冲盐，要么选择一个缓冲范围覆盖所需pH值的缓冲盐。[b]4、向有机相中加入缓冲盐[/b]如果将水相的缓冲溶液加入到有机相中，会大大增加缓冲盐析出的风险。缓冲盐的析出在初期可能并不明显，但会对仪器的各个部件都会产生一定影响。[b]5、梯度洗脱时直接用泵去混合流动相并且流动相比例从0%开始[/b]现在的液相色谱能够非常高效的进行在线脱气和流动相混合。但是将梯度洗脱比例从0%开始，会有比较大的出现气泡和沉淀的风险。[b]6、没有使用正确的pH值修饰酸或碱作为缓冲液[/b]缓冲溶液的修饰酸或碱，只使用生成缓冲盐的酸或碱。例如，磷酸钠缓冲液只能用磷酸或氢氧化钠调节。[b]7、没有在方法中说明缓冲液的全部信息[/b]例如只在方法中写“称5克磷酸钠溶入1000毫升水”。缓冲盐的类型决定其pH缓冲范围，而缓冲盐中所需物质的浓度决定了缓冲强度。例如：5g的无水磷酸钠和5g的一水磷酸钠具有不同的缓冲强度，会影响保留率。[b]8、使用仪器时不调查之前使用的流动相情况，直接用纯有机溶剂冲系统[/b]如果之前的方法在B通道使用缓冲溶液，而这次没有经过调查就直接在B通道使用了纯的有机溶剂，那么就会造成该通道缓冲盐析出、出现堵塞等风险。[b]9、将溶剂瓶中的流动相用干为止[/b]溶剂瓶中的流动相如果用干，会导致仪器中出现气泡等问题。[b]10、仅使用超声来给流动相脱气[/b]超声脱气有一定的脱气作用，但完全脱气的效果并不理想。所以在此建议使用真空脱气机进行在线脱气。本文来源于公众号《色谱学堂》，内容进行了删减

1. 吹氦脱气法。利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60 mL/min流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但我们国内氦气价格较高，很少有实验室采用此方法。2. 加热回流法。此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。3. 抽真空脱气法。此法可使用真空泵，降压至0.05-0.07MPa即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。4. 超声波脱气法。将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中，用超声波震荡10～20min。此法的脱气效果最差。5. 在线脱气法。现在商品的HPLC仪器，均可配在线脱气机。在线脱气使用简单，低故障，有效。建议购买仪器时一定要购买，有的公司是作为选购件，所以与仪器公司谈配置时应与公司确认。

药物分析液相色谱流动相应用小常识 一、 液相色谱流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。④粘度要低（应正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统，但价格较贵。 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 四、液相色谱流动相的滤过 所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。 五、液相色谱流动相的脱气 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。超声脱气比较好，10-20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 六、液相色谱流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在短期内使用完毕。

药物分析液相色谱流动相应用小常识 《药物分析杂志》摘编 一、 液相色谱流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 ③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 ④粘度要低（应正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统，但价格较贵。 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 四、液相色谱流动相的滤过 所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。 五、液相色谱流动相的脱气 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。超声脱气比较好，10-20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 六、液相色谱流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在短期内使用完毕。

流动相为什么要脱气？常用的脱气方法有拿几种？流动相中溶解气体存在以下几个方面的害处 1、气泡进入检测器，引起光吸收或电信号的变化，基线突然跳动，干扰检测； 2、溶解在溶剂中的气体进入色谱柱时，可能与流动相或固定相发生化学反应； 3、溶解气体还会引起某些样品的氧化降解，对分离和分析结果带来误差。因此，使用前必须进行脱气处理。 常用的脱气法有以下几种：（1） 加热脱气法； （2） 抽吸脱气法 （3） 吹氦脱气法； （4） 超声波振荡脱气法。

《药物分析杂志》摘编 一、液相色谱流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 ③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 ④粘度要低（应正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统，但价格较贵。 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 四、液相色谱流动相的滤过 所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。 五、液相色谱流动相的脱气 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。超声脱气比较好，10-20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 六、液相色谱流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在短期内使用完毕。

《药物分析杂志》摘编 一、 液相色谱流动相的性质要求 一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。 选好填料（固定相）后，强溶剂使溶质在填料表面的吸附减少，相应的容量因子k降低；而较弱的溶剂使溶质在填料表面吸附增加，相应的容量因子k升高。因此，k值是流动相组成的函数。塔板数N一般与流动相的粘度成反比。所以选择流动相时应考虑以下几个方面： ①流动相应不改变填料的任何性质。低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。碱性流动相不能用于硅胶柱系统。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。 ②纯度。色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。 ③必须与检测器匹配。使用UV检测器时，所用流动相在检测波长下应没有吸收，或吸收很小。当使用示差折光检测器时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。 ④粘度要低（应正相色谱的流动相通常采用烷烃加适量极性调整剂。 反相色谱的流动相通常以水作基础溶剂，再加入一定量的能与水互溶的极性调整剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等。极性调整剂的性质及其所占比例对溶质的保留值和分离选择性有显著影响。一般情况下，甲醇-水系统已能满足多数样品的分离要求，且流动相粘度小、价格低，是反相色谱最常用的流动相。但Snyder则推荐采用乙腈-水系统做初始实验，因为与甲醇相比，乙腈的溶剂强度较高且粘度较小，并可满足在紫外205nm处检测的要求，因此，综合来看，乙腈-水系统要优于甲醇-水系统，但价格较贵。 在分离含极性差别较大的多组分样品时，为了使各组分均有合适的k值并分离良好，也需采用梯度洗脱技术。 四、液相色谱流动相的滤过 所有溶剂使用前都必须经0.45μm（或0.22μm）滤过，以除去杂质微粒，色谱纯试剂也不例外（除非在标签上标明"已滤过"）。 用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相（脂溶性）滤膜和水相（水溶性）滤膜。有机相滤膜一般用于过滤有机溶剂，过滤水溶液时流速低或滤不动。水相滤膜只能用于过滤水溶液，严禁用于有机溶剂，否则滤膜会被溶解！溶有滤膜的溶剂不得用于HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机相滤膜。现在已有混合型滤膜出售。 五、液相色谱流动相的脱气 所用流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的分离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。此外，溶解在流动相中的氧还可能与样品、流动相甚至固定相（如烷基胺）反应。溶解气体还会引起溶剂pH的变化，对分离或分析结果带来误差。 溶解氧能与某些溶剂（如甲醇、四氢呋喃）形成有紫外吸收的络合物，此络合物会提高背景吸收（特别是在260nm以下），并导致检测灵敏度的轻微降低，但更重要的是，会在梯度淋洗时造成基线漂移。在荧光检测中，溶解氧在一定条件下还会引起淬灭现象，特别是对芳香烃、脂肪醛、酮等。在某些情况下，荧光响应可降低达95%。在电化学检测中（特别是还原电化学法），氧的影响更大。 除去流动相中的溶解氧将大大提高UV检测器的性能，也将改善在一些荧光检测应用中的灵敏度。超声脱气比较好，10-20分钟的超声处理对许多有机溶剂或有机溶剂/水混合液的脱气是足够了，此法不影响溶剂组成。超声时应注意避免溶剂瓶与超声槽底部或壁接触，以免玻璃瓶破裂，容器内液面不要高出水面太多。 六、液相色谱流动相的贮存 流动相一般贮存于玻璃、聚四氟乙烯或不锈钢容器内，不能贮存在塑料容器中。因许多有机溶剂如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑剂，导致溶剂受污染。这种被污染的溶剂如用于HPLC系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。 磷酸盐、乙酸盐缓冲液很易长霉，应尽量新鲜配制使用。如确需贮存，可在冰箱内冷藏，并在短期内使用完毕。

[b][font=宋体]问题描述：[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]流动相使用前为什么要脱气？脱气有什么作用？如何脱气？脱气不足可能造成哪些异常现象？[/font][/b][font=宋体][size=24px][color=#ff0000][b]解答在一楼[/b][/color][/size][/font]

各位老师: 本人没用过高效色谱仪,所以看不懂下面这段话.想问大家具体是怎么操作的.多数关于高效液相色谱方法的文献中的流动相都会有以下类似的描述: 流动相方法 ：A＝水，B＝乙腈；梯度冲洗：25％A+75％B，保持1min，25％A+75％B变至100％B在5min内，100％B保持2min，100％B变至25％A+75％B在1min内并保持。 这里不同浓度的流动相是不是要事先配好的呢?还是说仪器可以自动设定洗脱浓度,直接拿100%的溶剂和100%的水就可以了?谢谢大家的解答!

液相色谱梯度洗脱流动相怎么算