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标黄曲霉毒素用光化学柱

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标黄曲霉毒素用光化学柱相关的论坛

  • 柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器

    柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器黄曲霉毒素(AFT)B1和G1显示天然荧光性,因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。传统的电化学衍生费时费力,应用的化学药品不仅会腐蚀色谱仪而且对操作人员有毒副作用,黄曲霉毒素光化学衍生器(Pribolab® MDU)是一款新型的柱后衍生器,尤其适用于当前较为流行的UPLC。该方法结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂,HPLC的使用寿命将会增加,且不需要额外的清理工作,更加省时省力省心。黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测,有效提高检测效率,准确性,检测灵敏度以及重复性,此方法已被AOAC认可。

  • PriboFast®KRC 光化学柱后衍生器HPLC 黄曲霉毒素实时在线衍生

    PriboFast®KRC 光化学柱后衍生反应器广泛应用于液相色谱检测分析, 使用时置于色谱柱和检测器之间,进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和响应的选择性。技术特点:1. 在线对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生,重现性好;不需要任何化学衍生试剂,减少了液相系统的清洗工作,延长了其使用寿命。2.黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限在0.5ppb以下。可以同时进样,对黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2,M1, M2同时进行检测。3.安装、操作简单(5分钟即可投入使用),使用寿命长。4.符合AOAC 2005.08, AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05,中国台湾标准(食字第0981800370 号公告)和欧盟药典 2.8.18标准分析方法5.型号: PriboFast® KRC, 厂家:新加坡 Pribolab Pte. Ltd.【较传统的电化学衍生相比具有如下优点】 无需使用化学物质(省钱的同时,也避免操作人员接触有毒化学物质); 增加 HPLC 仪器的寿命(没有腐蚀性酸流经毛细管); 无需冲洗步骤; 结果与电化学方法(溴衍生)一致。光化学柱后衍生光化学反应装置除应用于黄曲霉毒素检测外, 还可以应用于大量的巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、黄曲霉毒素、维生素及磺胺类药物等分析。HPLC 法检测磺胺类药物时, 还能够增强磺胺类药物的荧光强度:磺胺嘧啶(Sulfadiazine),磺胺吡啶(Sulfapyridine),磺胺甲基嘧啶(Sulfamerazine),磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine),磺胺对甲氧嘧(Sulfamethoxydiazine),磺胺喹噁啉(Sulfaquinoxaline),灵敏度达到10ppb 左右

  • 黄曲霉毒素检测问题

    安捷伦1260,荧光检测器,光化学衍生,检测黄曲霉毒素B1,响应值太低,进样量2ppb 20微升?

  • 【原创大赛】中药材中黄曲霉毒素检测方案

    【原创大赛】中药材中黄曲霉毒素检测方案

    中药材中黄曲霉毒素检测方案 黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于药材、谷物、坚果、花生、瓜子、棉籽以及动物饲料等相关的产品中。其毒性远远高于氰化物、砷化物和有机农药毒性,其中以B1毒性最大。人摄入含有该类毒素物品时,摄入量在身体内是要累积的,不管量大量小对身体都有较大伤害。 近年来,各级食品药品等监管部门不断加大生产流通监管力度,努力保持食药多环节总体质量。现在对乳制品、玉米等食品及食品原料都有相关检测标准,2015版药典也重点明确该项目的检测。 下面我们就一起分享一下高效液相色谱法柱后光化学衍生荧光检测器检测中药材中黄曲霉毒素方法等重要内容。实验原理 样品经甲醇-水溶解,搅拌、离心及免疫亲和柱层析净化提取,进入高效液相色谱系统,亲水性C18色谱柱分离,经光化学衍生器柱后衍生,紫外检测器检测,外标法计算,即得。仪器与试剂 仪器:高效液相色谱仪(荧光检测器+等度泵+亲水性C18色谱柱+光化学衍生器等),气控操作架(含气泵),固相萃取装置,黄曲霉毒素免疫亲和柱,高速搅拌仪(搅拌速度大于11000转/分钟),离心机(离心速度4000转/分钟),氮吹仪,超声波清洗器,溶剂过滤器,电子天平等。 试剂:黄曲霉毒素对照品(均为SIGMA标准品),甲醇(色谱纯),氯化钠(分析纯),超纯水等。样品制备 混合对照品溶液制备:精密量取黄曲霉毒素混合标准液(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2,标示浓度分别为1.0μg/ml、 0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/ml)0.5ml,置于10ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制备为标准品储备液。精密量取储备液1ml,置于25ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,备用。 供试品溶液制备:取适量被测某药材(或药品)充分粉碎,过二号筛(药典筛),精密称取过筛粉朱15g,加入氯化钠3g,置于具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌仪搅拌2分钟,离心机离心5分钟,精密量取上清液15ml,置50ml容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,微膜(0.45μm)滤过,精密量取续滤液20.0ml,通过固相萃取装置萃取(免疫亲合柱),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用5ml甲醇洗脱,收集洗脱液,氮吹仪吹至近干,用甲醇定容1ml,摇匀,微膜(0.45μm)滤过,待测。色谱

  • 黄曲霉毒素B1测定用的衍生装置

    大家工作中作黄曲霉毒素B1时,测定用的衍生装置是哪种的:柱后衍生泵?光化学衍生装置?还是电化学衍生装置?它们的哪种衍生方式性价比更高?

  • 光化学柱后衍生装置相较于电化学柱后衍生的优势,新型光化学柱后衍生MDU也已经出现,关于它的竞争会越来越激烈。

    光化学柱后衍生器可以在254nm下用光化学的方法对黄曲霉毒素B1和G1进行衍生,与...具体的又有什么区别谁能钙素我希杰,2015新增药典也加了这个光化学柱后衍生,...我们也是了解了这个好处之后,用了普瑞邦这个仪器,效果确实和这个一样,光化学柱后衍生器具有以下特点:1、无需使用化学物质(省钱的同时,也避免操作人员接触有毒化学物质);2、增加 HPLC 仪器的寿命(没有腐蚀性酸流经毛细管);3、无需冲洗步骤;4、结果与电化学方法(澳衍生)一致。5、黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限均小于0.5 PPB。6、符合湾O湾C 2005.08,湾O湾C2008.02,湾O湾C 湾a 11-05,中国台湾标准(食宇0981800370号公告)和欧盟药典2.8.18 标准分析方法。符合中国国家标准和进出口检验标准听说普瑞邦出了新型的光化学后衍生器MDU,不知道跟这个有什么区别,有什么特殊的功能吗?谁知道吗?

  • 光化学柱后衍生器

    柱后衍生的福音——黄曲霉毒素光化学衍生器黄曲霉毒素(AFT)B1和G1显示天然荧光性,因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。传统的电化学衍生费时费力,应用的化学药品不仅会腐蚀色谱仪而且对操作人员有毒副作用,黄曲霉毒素光化学衍生器(Pribolab® MDU)是一款新型的柱后衍生器,尤其适用于当前较为流行的UPLC。该方法结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂,HPLC的使用寿命将会增加,且不需要额外的清理工作,更加省时省力省心。黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测,有效提高检测效率,准确性,检测灵敏度以及重复性,此方法已被AOAC认可。

  • 【第三届原创参赛】【日立L-2000】黄曲霉毒素的测定-反相液相色谱柱后光衍生荧光测定法(10月)

    【第三届原创参赛】【日立L-2000】黄曲霉毒素的测定-反相液相色谱柱后光衍生荧光测定法(10月)

    维权声明:本文为xiaoyuer原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任本文提供黄曲霉毒素柱后光衍生荧光测定法,该方法相对柱后试剂衍生操作更简单,同时提高黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。1仪器与试剂HITACHI L-2000高效液相色谱仪、配L-2485荧光检测器,柱后光化学衍生装置,各种试剂均为色谱纯或分析纯,实验用水为超纯水,免疫亲和柱Alfa Test(VICAM),黄曲霉毒素对照品均为SIGMA标准品。样品为市售狗粮。2色谱条件色谱柱:Hitachi LaChrom C18 (5μm)4.6mmI.D.x250mmL.流动相:CH3OH:H2O =45:55流速:0.8mL/min柱温:30℃波长:Ex:365nm Em:435nm进样体积:20µL3样品前处理方法同反相液相色谱荧光直接测定法,样品过免疫亲和柱后,过滤膜测定。4 结果与讨论4.1标样、样品的测定在选定的条件下四种常测黄曲霉毒素得到很好的分离,通过光柱后衍生后,黄曲霉毒素B1、G1灵敏度比直接测定大幅提高。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/11/201011181538_260460_2961690_3.jpg4.2灵敏度比较 相同浓度的黄曲霉毒素混合标样,仪器接柱后光化学衍生装置,图2中A为衍生装置未打开得到的色谱图,B为装置开启得到的色谱图,比较A[s

  • 安捷伦1260 黄曲霉毒素B1信号分裂

    安捷伦1260 黄曲霉毒素B1信号分裂

    液相做黄曲霉毒素B1,荧光检测器,光化学衍生器,序列进样,前后图谱都很正常,重新进样后是正常的,但不清楚信号分裂的原因,还有人晓得?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2013/05/201305081057_438905_2583865_3.jpg

  • 黄曲霉毒素的分析

    食品中黄曲霉毒素的测定,主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法,TLC法灵敏度和重现性较差;ELISA法重现性差,易受样品基质干扰假阳性率高,仅能作为筛选方法。近年来,由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点,现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素,一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响,正相色谱中,B1和B2的荧光强度仅稍低一点,不需衍生化;而在常用的反相色谱中,B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需进行衍生化,提高其荧光强度,灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类, 柱前衍生一般使用三氟乙酸,柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来,很多标准方法利用免疫亲合柱净化,HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析,方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么,它是怎样工作的,为什么要用它? 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点,不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶(黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体),基于抗原抗体反应进行工作,专一性很强,再加上另一种原理(反相或正相液相色谱)的分离,即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净,直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定,也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱(不是免疫柱)要便宜一些,能做的霉菌毒素品种也多,但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴,这对分析有什么作用?是可以提高灵敏度吗?如果是,溴是如何与黄曲霉素反应的?络合?氧化?还是别的什么? 由欧以上的论述,应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究,可能和柱后衍生类似(氧化?),考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍,是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施?这个阿胖讲得差不多了,方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿,当然最好不要自己称固体标样,那东东有静电,很容易飞出来,买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕,对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证,每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少,有的HPLC筛选方法,提取后不净化就直接进样了,也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关,如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干,肯定是要用HPLC法;如果就骗骗中国的官僚和老百姓,那就像啊胖说的,酶免法又省钱有省事,嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法,净化方法很差,UV灯下看上去是一条亮带,满足国标20PPB的限量都很勉强,这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品,加入氯化钠5 g和125 mL甲醇:水(7+3),均质2min,过滤。取15 mL滤液加30 mL水,再次过滤后,取10 mL过免疫亲和柱,2×10 mL水洗柱,最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素,用水定容至2 mL,供HPLC测定。HPLC条件:色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:甲醇-乙腈-水(1+1+3);流速:1.0 mL/min; 柱后衍生试剂:100 mg碘溶于2 mL甲醇,加水至200 mL。流速0.3 mL/min;衍生化温度:70 ℃;衍生化时间:55 s;激发波长:360 nm;发射波长: 420 nm;进样量:50 μL。3. 方法技术指标:免疫亲和柱净化,HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平:5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平:2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃,需要单独的柱温箱,还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生(1)过溴化吡啶溴(PBPB)衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3);流速:1.00 mL/min;衍生化溶液:25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水,室温下避光可保存5天;衍生化溶液流速:0.30 mL/min;衍生化反应管:55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度:室温。(2)电化学反应池衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3),每升加350 μL HNO3 (5 mol/L),同时溶解120 mg KBr;衍生化反应池:Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.,衍生化操作电流:100 μA。

  • 新技术—光化学柱后衍生器

    黄曲霉毒素(AFT)B1和G1显示天然荧光性,因此B1和G1在检测之前必须进行衍生。以前用我们实验室用的电化学衍生。费时费力,应用的化学药还腐蚀色谱仪而且对我们这些操作人员有毒副作用,现在我们实验室用的黄曲霉毒素光化学衍生器(Pribolab® MDU)是一款新型的柱后衍生器,换适用于当前较为流行的UPLC。我们这个方法得出的结果与电化学方法一致但其不使用任何腐蚀性试剂,HPLC的使用寿命将会增加,且不需要额外的清理工作,更加省时省力省心。 黄曲霉毒素光化学衍生器实现了对黄曲霉毒素在线衍生和检测,有效提高检测效率,准确性,检测灵敏度以及重复性,此方法已被AOAC认可。1.衍生时间缩短(大致5分钟即可完成)2.无需使用化学物质3.增加HPLC仪器的寿命4.无需冲洗步骤。5.结果与电化学方法(溴衍生)一致6.适用于超高效液相色谱仪(UPLC)

  • 安捷伦FLD做黄曲霉毒素出峰异常的排查

    安捷伦FLD做黄曲霉毒素出峰异常的排查

    [align=center]安捷伦FLD检测器做黄曲霉毒素出峰异常[/align][align=left][/align]单位上接了一个检测任务,测定餐厨固形物,其实也就是剩饭菜潲水中的黄曲霉毒素B和G,参照标准为GB 5009.22-2016 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定。使用的柱后衍生法之光化学衍生。这天称好了样品,想让它超声提取着,然后从冰箱里拿出3月份开封稀释的标品,用流动相稀释成梯度标品。正好上次做了桔青霉素,接了FLD,都不用去重新连接管路就可以开干,进样,然后我就去折腾潲水了。过了半小时来看,不对啊。怎么只出了两个峰?如图1[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310102107543233_7272_2963297_3.jpg[/img]图1标品是4个啊?确认标品标签,确实是4个成分,而且3月份做时出峰正常。观察两个峰后面都有一个小峰,莫非是这个小峰就是我的目标物,只是分解了?可这也不对,黄曲霉毒素很稳定的,水煮都不会分解。既然都这样了,那就用原液重新稀释试试。重新稀释标后,进样,还是只有两个峰,如图2,而且后面的小峰和大峰比例没差异,说明之前稀释的标和原液未见明显差异。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310102107546036_854_2963297_3.jpg[/img]图2此时陷入了沉思,这少两个峰肯定不正常,而且观察两个峰的位置,是G2和B2。两个2的高而1的低,虽然我是第3次做黄曲霉毒素,但是这也能感觉出来结果是反了。不死心,就先清理下管路吧,打开检测器盖子,就感觉不对。说好的诸侯衍生,可我怎么直接从VWD出来后就进了FLD呢?衍生器都没接啊,衍生器电源没开而且没接入系统。马上将衍生器接入系统,如图3[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310102107551798_469_2963297_3.jpg[/img]图3再次进样后,熟悉的四个峰总算回来了,如图4。标曲也很好,都有0.9995以上,潲水也处理好了,上机,完工[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310102107553149_8434_2963297_3.jpg[/img]图4对比一下异常和正常的峰,如图5。两个保留时间有差异是因为发现异常的峰有些拖尾,换了根柱子。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310102107554165_6276_2963297_3.jpg[/img]图5最后可以参考[url=https://bbs.instrument.com.cn/detail_2021_27_7903470.htm]【第十四届原创】 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]DAD不出峰,常见和不常见的原因都在这里[/url] https://bbs.instrument.com.cn/topic/7903470,此文的优化版已在安捷伦公众号刊发

  • 食品中黄曲霉毒素的测定方法

    食品中黄曲霉毒素的测定,主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法,TLC法灵敏度和重现性较差;ELISA法重现性差,易受样品基质干扰假阳性率高,仅能作为筛选方法。近年来,由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点,现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素,一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响,正相色谱中,B1和B2的荧光强度仅稍低一点,不需衍生化;而在常用的反相色谱中,B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需进行衍生化,提高其荧光强度,灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类, 柱前衍生一般使用三氟乙酸,柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来,很多标准方法利用免疫亲合柱净化,HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析,方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么,它是怎样工作的,为什么要用它? 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点,不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶(黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体),基于抗原抗体反应进行工作,专一性很强,再加上另一种原理(反相或正相液相色谱)的分离,即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净,直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定,也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱(不是免疫柱)要便宜一些,能做的霉菌毒素品种也多,但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴,这对分析有什么作用?是可以提高灵敏度吗?如果是,溴是如何与黄曲霉素反应的?络合?氧化?还是别的什么? 由欧以上的论述,应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究,可能和柱后衍生类似(氧化?),考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍,是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施?这个阿胖讲得差不多了,方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿,当然最好不要自己称固体标样,那东东有静电,很容易飞出来,买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕,对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证,每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少,有的HPLC筛选方法,提取后不净化就直接进样了,也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关,如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干,肯定是要用HPLC法;如果就骗骗中国的官僚和老百姓,那就像啊胖说的,酶免法又省钱有省事,嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法,净化方法很差,UV灯下看上去是一条亮带,满足国标20PPB的限量都很勉强,这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品,加入氯化钠5 g和125 mL甲醇:水(7+3),均质2min,过滤。取15 mL滤液加30 mL水,再次过滤后,取10 mL过免疫亲和柱,2×10 mL水洗柱,最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素,用水定容至2 mL,供HPLC测定。HPLC条件:色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:甲醇-乙腈-水(1+1+3);流速:1.0 mL/min; 柱后衍生试剂:100 mg碘溶于2 mL甲醇,加水至200 mL。流速0.3 mL/min;衍生化温度:70 ℃;衍生化时间:55 s;激发波长:360 nm;发射波长: 420 nm;进样量:50 μL。3. 方法技术指标:免疫亲和柱净化,HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平:5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平:2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃,需要单独的柱温箱,还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生(1)过溴化吡啶溴(PBPB)衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3);流速:1.00 mL/min;衍生化溶液:25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水,室温下避光可保存5天;衍生化溶液流速:0.30 mL/min;衍生化反应管:55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度:室温。(2)电化学反应池衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3),每升加350 μL HNO3 (5 mol/L),同时溶解120 mg KBr;衍生化反应池:Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.,衍生化操作电流:100 μA。

  • 大家对柱后光化学衍生器的参数需求是什么样的?

    光化学衍生器可有效放大黄曲霉毒素B1、G1的信号,具有不用试剂,使用方便无害,不需额外装置,灵敏度高,重现性好等诸多优点,是HPLC方法检测样品中黄曲霉毒素B1&G1的好搭档。目前市场上也有不少厂家在做此产品,诸位使用者对光化学衍生器的参数具体要求是怎样的呢?有没有招标参数数据支持?http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09511.gif

  • 请区别两个问题:黄曲霉和黄曲霉毒素

    最近看报纸上报到这方面的问题比较多,感觉将黄曲霉和黄曲霉毒素混为一谈,还说巴氏杀菌不能杀死黄曲霉毒素,哎我个人理解,黄曲霉是一种霉菌,是微生物,黄曲霉毒素是由其产生的一种真菌毒素,是一种化学物质,怎能用杀菌去杀死化学物质呢?

  • 【求助】黄曲霉毒素的前处理柱

    请教各位,我要用HPLC分析黄曲霉毒素,从前用的前处理柱是维康(vicam,今年被Waters收购了)的.现在我要购买一批新的前处理柱,但是不知道这个处理黄曲霉毒素的是什么型号的.如果有人知道这个,麻烦告诉一下啊.多谢了

  • 转贴:[Mass原创]食品中黄曲霉毒素的测定方法

    转自色谱网,作者:Mass 食品中黄曲霉毒素的测定,主要有TLC、ELISA、HPLC 等方法,TLC法灵敏度和重现性较差;ELISA法重现性差,易受样品基质干扰假阳性率高,仅能作为筛选方法。近年来,由于HPLC法具有灵敏度和准确度高、方法重现性好等优点,现已成为黄曲霉毒素分析的主要手段。HPLC法测定黄曲霉毒素,一般使用灵敏度和选择性较好的荧光检测器。但由于黄曲霉毒素的荧光强度会受溶剂影响,正相色谱中,B1和B2的荧光强度仅稍低一点,不需衍生化;而在常用的反相色谱中,B1和G1两种异构体荧光强度很弱,需进行衍生化,提高其荧光强度,灵敏度才能满足一般食品法规的限量。衍生化的方法一般有柱前和柱后两类, 柱前衍生一般使用三氟乙酸,柱后衍生有碘液、过溴化吡啶溴以及电化学和光化学等方法。近年来,很多标准方法利用免疫亲合柱净化,HPLC柱后衍生对花生和玉米等农产品和食品中黄曲霉的含量进行了分析,方法检出限能够达到1 μg/kg以下。Q1。免疫亲和柱的填料是什么,它是怎样工作的,为什么要用它? 免疫亲合柱对于欧们学化学的好像陌生了一点,不过你把它当成一种层析柱就行了。它的所谓填料就是固定了抗体的凝胶(黄曲霉毒素的柱子一般是单克隆抗体),基于抗原抗体反应进行工作,专一性很强,再加上另一种原理(反相或正相液相色谱)的分离,即使你把它当作确证方法也能说的过去。其实免疫亲和柱净化后的样品已经非常干净,直接加溴水也可在荧光分光光度计上进行测定,也是AOAC 991。31正式方法。现在还有一种普通霉菌毒素净化柱(不是免疫柱)要便宜一些,能做的霉菌毒素品种也多,但是专一性就差些。Q2。Kobra cell可以在线产生溴,这对分析有什么作用?是可以提高灵敏度吗?如果是,溴是如何与黄曲霉素反应的?络合?氧化?还是别的什么? 由欧以上的论述,应该说是提高反相HPLC分析中黄曲霉毒素B1、G1的灵敏度。反应原理欧还真的没研究,可能和柱后衍生类似(氧化?),考虑到进入精益求精的要求还是不乱猜了吧。Q3。看到书上说黄曲霉素的毒性是KCN的10倍,是砒霜的68倍。晕啊。。。操作时有没有特别的个人防护措施?这个阿胖讲得差不多了,方法也就是用次氯酸钠溶液泡器皿,当然最好不要自己称固体标样,那东东有静电,很容易飞出来,买溶液就行了。要补充的1、就是没阿胖讲的那么可怕,对欧盟出口花生及制品的检测实验室都使用免疫亲和柱净化-HPLC—RF法确证,每年可能要做上万个样品。2、HPLC法的干扰比酶免方法不知道要小多少,有的HPLC筛选方法,提取后不净化就直接进样了,也很少有干扰。采用哪种方法主要是和要求有关,如果让洋人拿着鞭子在后面抽着干,肯定是要用HPLC法;如果就骗骗中国的官僚和老百姓,那就像啊胖说的,酶免法又省钱有省事,嘿嘿。。。。3、GB/T 5009的TLC法,净化方法很差,UV灯下看上去是一条亮带,满足国标20PPB的限量都很勉强,这一点你可看看旧贴http://www.sepu.net/dvbbs/dispbbs.asp?BoardID=5&replyID=47615&id=18220&skin=0欧论述的也差不多了。1、AOAC方法简述25g均匀样品,加入氯化钠5 g和125 mL甲醇:水(7+3),均质2min,过滤。取15 mL滤液加30 mL水,再次过滤后,取10 mL过免疫亲和柱,2×10 mL水洗柱,最后用1 mL甲醇洗脱黄曲霉毒素,用水定容至2 mL,供HPLC测定。HPLC条件:色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:甲醇-乙腈-水(1+1+3);流速:1.0 mL/min; 柱后衍生试剂:100 mg碘溶于2 mL甲醇,加水至200 mL。流速0.3 mL/min;衍生化温度:70 ℃;衍生化时间:55 s;激发波长:360 nm;发射波长: 420 nm;进样量:50 μL。3. 方法技术指标:免疫亲和柱净化,HPLC柱后衍生化的方法回收率(1) 2000年AOAC协同试验结果B1: 82- 109 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)B2: 77- 123 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)G1: 58- 93 %(添加水平:1.0- 5.0 ng/g)G2: 62- 105 %(添加水平:0.2- 0.8 ng/g)(2) 1991年AOAC协同试验结果B1: 77- 90 %(添加水平:5.8- 17.5 ng/g)B2: 55- 70 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)G1: 76- 98 %(添加水平:2.5- 7.5 ng/g)G2: 36- 55 %(添加水平:0.83- 2.5 ng/g)碘衍生化方法的反应温度要70 ℃,需要单独的柱温箱,还要一个打衍生剂的泵。故可以采用以下两种方法来代替碘溶液作柱后衍生(1)过溴化吡啶溴(PBPB)衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3);流速:1.00 mL/min;衍生化溶液:25 mg PBPB (CAS: 39516-58-3)溶于500 mL水,室温下避光可保存5天;衍生化溶液流速:0.30 mL/min;衍生化反应管:55 cm × 0.5 mm id. 衍生化反应温度:室温。(2)电化学反应池衍生色谱柱:4.6×250 mm, 5 μm,C18;流动相:水-乙腈-甲醇(6+2+3),每升加350 μL HNO3 (5 mol/L),同时溶解120 mg KBr;衍生化反应池:Kobra cell Rhone Diagnostics Technologies Ltd.,衍生化操作电流:100 μA。

  • 黄曲霉毒素的危害

    什么是黄曲霉毒素  黄曲霉毒素(Aflatoxins)是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物,特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少,目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种,主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素),前者为基本毒性结构,后者与致癌性有关。B1的毒性(其毒性比氰化钾毒性高)及致癌性极强且耐热(B1的分解温度为268℃左右,一般烹调加工破坏很少),在天然污染的食品中以B1最为多见。 黄曲霉毒素分布  黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中;在水中的溶解范围为10毫克/升~20毫克/升, 可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中,不溶于己烷、石油醚和乙醚;易被碱或强氧化剂破坏;进入人体后主要经消化道吸收,大部分分布 在肝脏、肾脏,少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中,其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。

  • [五月份原创]花生中黄曲霉毒素的检测

    [五月份原创]花生中黄曲霉毒素的检测

    花生中黄曲霉毒素的检测黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物,它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起,欧盟就规定了最大限量。本文采用高效液相色谱法测定花生中的黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2,采用了柱后衍生法测定,灵敏度高,结果理想。检测依据:GB/T18979-2003 ;液相色谱仪:LC-10AVP色谱条件:色谱柱:色谱柱:Welchrom-C18 ( 250 mm ×4.6 mm 5μ ); Serial Number:W13212257;流动相:水:甲醇=55:45;流速:1mL/min。荧光检测器:激发光波长:360nm 发射光波长:450nm 增益:17;柱温:30℃;衍生方式:柱后光化学衍生(254nm)进样量:10uL混合对照品溶液的配置: 精密量取黄曲霉毒素混合标准品溶液0.5ml于10ml容量瓶中,用甲醇定容,为储备液,精密量取该储备液适量,分别制成不同浓度的混标溶液;供试品溶液的配置:称取粉碎花生试样约15g ,加人氯化钠3g ,置于均质瓶中,用70%甲醇溶液定容至125ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11 000转/分钟),离心5 分钟( 离心速度2500 转/ 分钟) , 精密量取上清液15ml,用水定容至50mL,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,量取此滤液10.0ml,通过免疫亲合柱(Welchrom®Aflatoxin G1 G2 B1 B2 货号:01140-00031 ),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml容量瓶中,甲醇定容,过滤后进液相色谱分析。定容体积为:125mL; 稀释用样品滤液体积:15mL;定容至50mL;过免疫亲合柱滤液体积:10mL,甲醇洗脱液体积;2mL。工作曲线系列B1、B2、G1、G2混标使用液浓度:0、2、4、8。5、10、21ng/mL。2ng/mL混标分离色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647236_2166779_3.png20ng/mL混标液分离色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040622_498285_2166779_3.pngG2、G1、B1、B2工作曲线线性:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040626_498286_2166779_3.pnghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040626_498287_2166779_3.png花生样品的检测色谱图:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040630_498290_2166779_3.png平行试验:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/05/201405040630_498291_2166779_3.png表1 加标回收率测定结果

  • 真菌毒素与黄曲霉毒素是那些?

    黄曲霉毒素是天然存在的霉菌产生的一种毒素,已经被证明对人体容易产生癌症,是一类致癌物质。美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒素含量不能超过20ppb,人类消费的牛奶中的含量不能超过0.5ppb。而其它动物饲料中的含量不能超过300ppb。黄曲霉毒素是一类真菌(如黄曲霉和寄生曲霉)的有毒的代谢产物,它们具有很强的致癌性,主要存在于谷物、坚果、棉籽以及一些与人类血液,动物饲料相关的产品中。黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物,也是一种强致癌物质。牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素 M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC),薄层层析法(TLC),酶联免疫法(ELISA)等。而使用黄曲霉毒素M1 免疫亲和柱则能够快速而准确的提纯纯化并浓缩样品中黄曲霉毒素M1组分,使得后面的分析更加轻松简单。PriboFast黄曲霉毒素总量亲和层析柱可选择性吸附样品液中的黄曲霉毒素(B1,B2,G1,G2),从而对黄曲霉毒素总量(B1,B2,G1,G2)样品起到非常针对性的纯化作用,过柱净化后的样品液可直接用于液相进行黄曲霉毒素总量(B1,B2,G1,G2)含量的检测。亲和层析柱与HPLC配合使用可达到快速测定的目的,以改善信噪比,可提高检测方法的准确度。PriboFast黄曲霉毒素总量亲和柱用于定性、定量检测谷物、副食品、酒类等食品和饲料等样本中的黄曲霉毒素总量(B1,B2,G1,G2)时的样品前处理。柱容量:≥200ng 回收率:80-90%可用于快递纯化检测牛奶,奶粉等样本中的黄曲霉毒素M1。

  • 黄曲霉毒素有何危害

    什么是黄曲霉毒素 黄曲霉毒素(Aflatoxins)是生长在食物及饲料中的黄曲霉和寄生曲霉代谢的一组化学结构类似的产物,特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少,目前已分离鉴定出的黄曲霉毒素有17种,主要是黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2以及由B1和B2在体内经过羟化而衍生成的代谢产物M1、M2等。黄曲霉毒素的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素),前者为基本毒性结构,后者与致癌性有关。B1的毒性(其毒性比氰化钾毒性高)及致癌性极强且耐热(B1的分解温度为268℃左右,一般烹调加工破坏很少),在天然污染的食品中以B1最为多见。 黄曲霉毒素分布 黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米等食物中;在水中的溶解范围为10毫克/升~20毫克/升, 可大量溶解于氯仿、甲醇、二甲基亚砜等中等极性的有机溶剂中,不溶于己烷、石油醚和乙醚;易被碱或强氧化剂破坏;进入人体后主要经消化道吸收,大部分分布 在肝脏、肾脏,少部分分布在血液、肌肉、脂肪组织中,其在体内的代谢过程主要为羟基化作用、去甲基作用和环氧化作用。 为什么奶粉中会含有黄曲霉毒素 人类接触黄曲霉毒素的主要来源是污染的食物,有两种通过膳食可以摄入:途径一是由受黄曲霉毒素(主要为B1)污染的植物性食物摄入,途径二是经饲料而进入奶或乳制品(包括乳酪、奶粉等)的黄曲霉毒素(主要为M1)。中国农业大学食品学院营养与食品安全系主任,副教授何计国(微博)介绍,黄曲霉毒素具有很强的毒性和致癌性。黄曲霉毒素是微生物产生的,不像三聚氰胺属于恶意添加。黄曲霉毒素是脂溶性的,如果牛饲料中存在黄曲霉毒素,牛肉中含量不会很高。但内脏特别是肝脏中含量会高。黄曲霉毒素非常耐热,加热到280°都不会被破坏,所以奶粉中只要含有,就不会被去除。紫外线只能少量破坏。 黄曲霉毒素有何危害 黄曲霉毒素是一种毒性极强的物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中,以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强。生产企业如果使用劣质的原料,如发霉的花生、菜籽、玉米等生产食用油,则有可能造成黄曲霉素超标,对消费者的身体健康造成威胁。  食用受黄曲霉毒素污染的食品,会出现急性中毒。临床表现以黄疸为主,并有呕吐、厌食和发烧等症状。重症者在2~3周后出现腹水、下肢水肿,甚至死亡,死亡前出现胃肠道出血。黄曲霉毒素危害性大,存在范围广,为了预防黄曲霉毒素中毒事件的发生,维护人类健康,世界上已有70多个国家和地区对食品中黄曲霉毒素的含量作了限量要求。下面是一些国家和地区对食品中的黄曲霉毒素的检验检疫要求:  我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准(GB2761-81)规定,玉米、花生仁、花生油中不得超过20微克/公斤,玉米及花生仁制品(按原料折算)中不得超过20微克/公斤,大米、其他食用油中不得超过10微克/公斤,其他粮食、豆类、发酵食品中不得超过5微克/公斤,婴儿代乳食品中不得检出,其他食品可参照以上标准执行;牛乳及其制品中黄曲霉毒素M1限量卫生标准(GB9676-88)规定,不得超过0.5微克/公斤。 测定黄曲霉毒素方法有哪些 目前,测定食品中的黄曲霉毒素的方法有薄层层析法、液相色谱法、放射免疫分析法、酶联免疫法、免疫层析法、微柱筛选法、金标试纸法等。我国现行使用的国家标准GB/T 5009.22-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1的测定方法,GB/T 5009.23-1996规定了食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定方法,GB/T 5009.24-1996规定了食品中黄曲霉毒素M1与B1的测定方法。此外,卫生部于1990年11月发布了《防止黄曲霉毒素污染食品卫生管理办法》。 食品的防霉去毒措施 吉林大学军需科技学院食品质量安全专业教授徐克成介绍,颗粒状的被污染粮食可通过晾晒、清洗消除部分黄曲霉,但如果是粉末状的食物或饲料,则很难通过以上方法清除。 (1) 防霉:控制粮食含水量在12~13%以下即可防霉。保持米粒及花生外壳的完整,使用化学熏蒸剂,对防止霉菌侵染也有一定作用。 (2) 去毒方法: 挑除霉粒:适用花生。因黄曲霉素主要存在于发霉,变色,破损及皱缩的花生中,挑除后,可使黄曲霉毒素含量显著降低。碾轧加工及加水搓洗:适应于大米,因毒素主要存在于米糠及大米表层。脱胚去毒:适用于玉米。脱胚法有两种:一是浮选,将玉米碾3MM左右的碎粒。加入清水,搅拌,轻搓,胚部碎片轻而上浮,捞出浮层;二是碾轧法,将玉米碾轧,去掉外皮及胚部.4)加碱破坏毒素:适用于食用油.5)其他:如紫外线照射,盐炒法等有一定去毒效果。 (3) 加强食品卫生监测。

  • 黄曲霉毒素之相关

    黄曲霉毒素(AFT)是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉 (aspergillus flavus) 寄生曲霉 (a.parasiticus) 产生的次生代谢产物,在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。黄曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外两种代谢产物M1 ,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和 M2 在分子结构上十分接近.。毒性:远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄人,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。黄曲霉毒素进入机体后,在肝脏中的量较其他组织器官为高,说明肝脏可能受黄曲霉毒素的影响最大。肾脏、脾脏和肾上腺也可检出,肌肉中一般不能检出。黄曲霉毒素如不连续摄入,一般不在体内积蓄。一次摄入后约1周即经呼吸、尿、粪等将大部分排出。

  • 光化学柱后衍生装置到底有啥子作用?

    由于黄曲霉毒素B1和G1只显示天然荧光性,因此需要将其进行衍生,提高其荧光强度后才能准确测定含量,光化学柱后衍生器可以取代传统的电化学衍生法,在线对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生,不需要任何化学试剂,无需清洗仪器,减少对色谱仪的腐蚀,同时更好的保护操作人员,用于液相色谱荧光法检测黄曲霉毒素,有效提高检测的灵敏度。符合AOAC 2005.08,AOAC2008.02,AOAC Aa 11-05,中国台湾标准(食字0981800370号公告)和欧盟药典2.8.18标准分析方法。用液相色谱荧光检测法进行测定时先将黄曲霉毒素从相应的基质中提取,经免疫亲和柱(净化后进行紫外光照射,黄曲霉毒素B1和G1被羟基化,从而产生稳定可测量的荧光性。其它的黄曲霉毒素(B2,G2,M1,M2)的化学及测量相关特性在此步中不变,然后进行检测即可。本衍生器还可应用于巴比妥酸盐、氨基酸、多肽、烟酸/烟酰胺、维生素及磺胺类药物的分析。

  • 【原创大赛】高效液相色谱法检测花生中的黄曲霉毒素

    [align=center][b]高效液相色谱法检测花生中的黄曲霉毒素[/b][/align][align=center][b] [/b][/align]一、[b]黄曲霉毒素[/b]1、[b]黄曲霉毒素及来源[/b]黄曲霉毒素:是一组真菌(霉菌)毒素。黄曲霉毒素是一类化学结构类似的化合物,均为二氢呋喃香豆素的衍生物。主要有黄曲霉寄生曲霉产生的次生代谢物。来源:存在于土壤、动物、植物、各种坚果里。特别是花生、大豆、荞麦、酱豆很容易被污染。2、[b]理化性质及毒性 [/b]它是目前自然界中已经发现的理化性质最稳定的一类真菌毒素,具有很强的毒性、致癌性、致突变性和致畸毒性。其中以黄曲霉毒素B1的毒性最大,相当氰化钾的10倍, 砒霜的68倍,且其致癌性是二甲基亚硝胺的70倍。在水中很难溶解,可以溶解在油、甲醇、丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。一般在中性溶液中比较稳定,在强酸性溶液中稍有分解,可以在PH9-10的强碱溶液中分解迅速,其纯品为无色结晶,耐高温。二、[b]检测方法选择 [/b]我国很早之前就已经对黄曲霉毒素展开研究,制定了一系列相应检测标准。目前国标方法已有12种之多,其中包括薄层分析法,液相色谱法,酶联免疫法,毛细管电泳法,荧光光度法,金标试纸法和生物传感器法。液相色谱法中高效液相色谱法是目前国内外比较权威的定量检测黄曲霉的分析方法,也是我国黄曲霉毒素检测的国家标准方法。所以在检测时选用了高效液相色谱-柱后光化学衍生法。三、[b]高效液相色谱仪[/b]1、[b]原理 [/b][color=#333333]样品溶液经进样器进入流动相,[/color][color=#333333]随着流动相进入色谱柱[/color][color=#333333],由于样本溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的“吸附-解吸”的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样本浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式输出检测结果。[/color]2、[b]组成[/b][color=#333333]高压输液系统、[/color][color=#333333]进样系统[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]分离[/color][color=#333333]系统(色谱柱)[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]检测系统[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]数据处理和记录系统[/color][color=#333333]。[/color]3、[b]特点[/b][color=#333333]高效液相色谱[/color][color=#333333]与经典液相色谱相比有以下优点:[/color][color=#333333]分析[/color][color=#333333]速度快[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]分辨率高[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]检测[/color][color=#333333]灵敏度高[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]色谱柱可反复使用[/color][color=#333333]、[/color][color=#333333]样品量少,容易回收[/color][color=#333333]。[/color]四、[b]实验过程[/b]1、[b]样品前处理 [/b]样液准备:将均质杯放在天平上,在其内分别称取25g花生四份。再称取5gNaCl加入均质杯中。最后用200mL量筒量取125mL甲醇-水溶液(700+300)加入均质杯内。在其中两份两份花生中分别加入50μL(1μg/mL)标准品溶液作为回收。将盛有样品的均质杯依次放在均质器上进行打磨混匀。将定性滤纸两张叠放在玻璃漏斗上,下端接入锥形瓶内,先在滤纸上倒入少量样品过滤润洗锥形瓶,润洗后正式开始过滤。过滤完成后取滤液15mL分别倒入100mL量筒中再加入30mL超纯水震荡混匀。 样液的净化:在过滤的同时激活免疫亲和柱,将免疫亲和柱安装好加入10mL超纯水进行激活,速度控制在大约1s滴1滴。激活完成后将混合好的样液经过两张玻璃滤纸过滤15mL到已经激活的免疫亲和柱中,混合样液完全从亲和柱中过滤后,再在免疫亲和柱中加入10mL超纯水。 样液洗脱:在亲和柱中加入1mL甲醇,用洗耳球吹洗,速度控制在1滴/秒,甲醇全部通过亲和柱后再加入1mL超纯水,吹洗速度与甲醇的保持一致。 样液装瓶:把洗脱下来的液体放在涡旋混合器上,震荡混匀后取1000μL装入进样瓶,在进样瓶上注明名称以及日期。配制1ng/mL的标准品1000μL放入进样瓶混匀,再配制一个空白(1000μL甲醇-水溶液)。 备注:实验所用药品氯化钠([u]NaCl[/u])为优级纯、甲醇(CH[sub]3[/sub]OH)为色谱纯,水为超纯水。混合标准品为国标GB5009. 22 — 2016中规定标样。2、[b]实验参数[/b] 以C18柱为分离色谱柱,甲醇-水(45:55,体积:体积)溶液为流动相梯度洗脱,流速1mL/min,在室温下,激发波长360nm,发射波长435nm条件下,进样量20μL,经过光化学衍生后用荧光检测器检测。3、[b]进样检测[/b]①先换流动相(A:甲醇-45% B:水-55%)②再打开电脑和仪器③打开联机软件④进样针变绿后再打开泵和温控箱,将流动相容量修改为相应的体积,再将流速改为3mL/min,打开空气阀排净气泡,再把空气阀关闭流速改为1mL/min,冲柱一段时间。⑤将进样瓶放入指定位置(依次为空白、标准品、样品、回收)⑥建立序列,修改子目录(将日期设为子目录),修改完毕点击样品位置修改名称、坐标,查看进样次数,确定进样量(20μL)。⑦打开FLD,同时打开荧光检测器,和光化学衍生器,待准备就绪后点击开始。⑧检测完毕后,打开结果查看峰,有杂峰影响时点击删除杂峰,然后点击校正,删除校正。4、[b]实验数据 [/b]黄曲霉毒素G[sub]2[/sub]在8.1分钟左右出现峰,黄曲霉毒素G[sub]1[/sub]在9.6分钟左右出现峰,黄曲霉毒素B[sub]2[/sub]在11.7分钟左右出现峰,黄曲霉毒素B[sub]1[/sub]在14.3分钟左右出现峰,若在其他时间段出现峰则不属于黄曲霉毒素的峰。四种黄曲霉毒素峰宽在0.3~0.4min,而峰高和峰面积中则是B[sub]2[/sub]较大,G[sub]1[/sub]较小,B[sub]1[/sub]和G[sub]2[/sub]属于居中。回收率=样品峰高/标准品的峰高70%≤回收率≤120%视为未检出黄曲霉毒素。①标准品[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.142[/align][/td][td][align=center]0.3682[/align][/td][td][align=center]2.20190[/align][/td][td][align=center]9.18729e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.686[/align][/td][td][align=center]0.3735[/align][/td][td][align=center]1.18640[/align][/td][td][align=center]4.57970e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.710[/align][/td][td][align=center]0.4021[/align][/td][td][align=center]5.54293[/align][/td][td][align=center]2.15125e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.376[/align][/td][td][align=center]0.4373[/align][/td][td][align=center]2.67834[/align][/td][td][align=center]9.30720e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]②花生回收1[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.169[/align][/td][td][align=center]0.3323[/align][/td][td][align=center]2.01464[/align][/td][td][align=center]9.31226e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.720[/align][/td][td][align=center]0.3330[/align][/td][td][align=center]1.02491[/align][/td][td][align=center]4.53172e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.756[/align][/td][td][align=center]0.3750[/align][/td][td][align=center]4.88574[/align][/td][td][align=center]2.03627e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.442[/align][/td][td][align=center]0.4124[/align][/td][td][align=center]2.18995[/align][/td][td][align=center]7.94352e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]③花生回收2[table][tr][td][align=center]峰[/align][/td][td][align=center]保留时间/min[/align][/td][td][align=center]峰宽/min[/align][/td][td][align=center]峰面积/LU[/align][/td][td][align=center]峰高/LU[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]1[/align][/td][td][align=center]8.178[/align][/td][td][align=center]0.3238[/align][/td][td][align=center]1.76791[/align][/td][td][align=center]8.68845e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]2[/align][/td][td][align=center]9.727[/align][/td][td][align=center]0.3353[/align][/td][td][align=center]1.05383[/align][/td][td][align=center]4.89711e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]3[/align][/td][td][align=center]11.764[/align][/td][td][align=center]0.3602[/align][/td][td][align=center]5.12116[/align][/td][td][align=center]2.18196e[sup]-1[/sup][/align][/td][/tr][tr][td][align=center]4[/align][/td][td][align=center]14.452[/align][/td][td][align=center]0.4125[/align][/td][td][align=center]2.44144[/align][/td][td][align=center]8.91182e[sup]-2[/sup][/align][/td][/tr][/table]④结果计算[table][tr][td]样品 [sub] [/sub][sub] [/sub] 峰名称[/td][td][align=center]B1[/align][/td][td][align=center]B2[/align][/td][td][align=center]G1[/align][/td][td][align=center]G2[/align][/td][td][align=center]是否检出[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]花生回收1[/align][/td][td][align=center]85.34%[/align][/td][td][align=center]94.65%[/align][/td][td][align=center]98.95%[/align][/td][td][align=center]101.3%[/align][/td][td][align=center]否[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]花生回收2[/align][/td][td][align=center]95.75%[/align][/td][td][align=center]101.43%[/align][/td][td][align=center]106.93%[/align][/td][td][align=center]94.57%[/align][/td][td][align=center]否[/align][/td][/tr][/table][b]5、结果与讨论[/b] 在此实验中使用高效液相色谱检测黄曲霉毒素一般分为:提取、净化、衍生和测定,但因文中采用了无衍生器法,所以此实验无衍生那一步骤。提取采用了甲醇水溶液和氯化钠固体,净化采用了免疫亲和柱(IAC),测定时流动相为甲醇水45:55,用荧光检测器检测在激发波长为365nm,发射波长为450nm下检测20μL样品。结果表明:在此方法中黄曲霉毒素回收率在70%~120%之间,选用样品中均无黄曲霉毒素。 黄曲霉毒素存在范围极广难以防范,国家对黄曲霉检测制定了相应的标准。但我们在日常生活中不可能将所有所需所用都进行检测,但我们可以通过一些方法在日常生活中进行辨别:如不建议摄入发霉食物,也可以通过在低温、干燥、避免阳光直射的地方存放食物;关注食品的保质期等方式减少食物被黄曲霉毒素污染的风险。

  • 黄曲霉毒素不可不知的秘密

    黄曲霉毒素不可不知的秘密

    在外聚餐时,餐桌上常会有赠送的餐前小吃——花生米,不过,如果你在金灿灿的花生米中无意夹到一颗变黑的,这时可千万不要往嘴里送,因为它们有可能已经被黄曲霉毒素污染而可能会对人体产生一定的危害。那什么是黄曲霉毒素呢?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507071036_553899_2984502_3.jpg1黄曲霉毒素  黄曲霉毒素是一种由黄曲霉和寄生曲霉等真菌经过聚酮途径产生的次生代谢产物,是一组结构类似的化合物总称。迄今为止,已发现的黄曲霉毒素至少包含有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1、H1、GM、B2a、G2a及毒醇等20种左右结构相似化合物。  通常黄曲霉毒素存在于土壤、动植物、各种坚果特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶及奶制品、食用油等制品中也可能会发现黄曲霉毒素。2黄曲霉毒素在食物中的限量标准  根据我国国家标准GB2761-2011《食品中真菌毒素限量》的规定,我国食品中黄曲霉毒素B1允许量标准为:玉米及其制品、花生及其制品中不得超过20μg/kg;稻谷、糙米、大米和其他植物油脂中不得超过10μg/kg;小麦、大麦、其他谷物、发酵豆制品和其他熟制坚果及籽类中不得超过5μg/kg;部分调味品(如酱油、醋、酿造酱)中不得超过5μg/kg;婴幼儿配方食品中不得超过0.5μg/kg。乳及乳制品和特殊膳食用食品中黄曲霉毒素M1限量不得超过0.5μg/kg。3黄曲霉毒素的检测方法(1)薄层色谱法(TLC法)  TLC法是测定黄曲霉毒素的经典方法,是我国测定食品及饲料中黄曲霉毒素B1的标准方法之一(GB/T5009.23-2006)。适用于各种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。(2) 免疫分析法  免疫化学分析法是以抗原抗体的免疫化学反应为基础进行抗原抗体含量测定的方法。用于黄曲霉毒素测定的免疫分析法主要有免疫亲和层析净化—荧光光度法、免疫亲和层析净化—高效液相色谱法、酶联免疫吸附法等。 免疫亲和层析净化—荧光光度法和免疫亲和层析净化—高效液相色谱法  免疫亲和层析技术的方法特异性好、灵敏度高,是目前我国现行国家标准推荐的方法之一(GB/T18979-2003),适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。 酶联免疫吸附法(ELISA)  ELISA法是应用抗原抗体特异性反应和酶的高效催化作用来测定黄曲霉毒素含量的免疫分析方法,其相对应的标准是GB/T5009.22-2003(第二法),适用于粮食、花生及其制品、薯类、豆类、发酵食品及酒类等各种食品中黄曲霉毒素B1的测定。4黄曲霉毒素的预防与控制措施(1) 挑选霉粒法  因黄曲霉毒素主要集中在霉坏、破损、皱皮、变色和虫蛀等的粮粒中,这些带毒颗粒比健康颗粒轻,外表也较易辨认,可用机械或人工掏除。(2) 植物油加碱去毒法  油料种子受黄曲霉毒素污染后,榨出的油中含毒素,可用碱炼法去毒。因为不溶于水的黄曲霉毒素在碱性条件下可形成香豆素钠盐而溶于水,故加减后用水洗可将毒素去除。(3) 加水搓洗法  在淘洗大米时,用手搓洗,随水倾去悬浮物,如此反复5~6次,煮熟后可去除大部分毒素。(4) 吸附去毒法  植物油受黄曲霉毒素污染,可利用活性白土和活性炭吸附,效果较好。(5)高温高压去毒法  黄曲霉毒素较耐高温,在280℃高温下才能分解,因此一般烹调温度下难以消除。但高温高压下去毒效果较好。(6) 碾磨去毒法  在粮食中,黄曲霉毒素大部分集中于脂肪较多的胚体和糠皮等部位。稻谷经精碾后95%的毒素可去除。玉米磨粉也有类似的效果。

  • 解读 | 专家解读黄曲霉毒素

    一、背景信息  近日,媒体曝光了广西梧州和广东肇庆两地市场所出售的部分散装花生油存在黄曲霉毒素超标情况。黄曲霉毒素是什么?毒性怎样?本期将为您解读。  二、专家解读  (一)黄曲霉毒素的污染在世界范围内广泛存在。  黄曲霉毒素(Aflatoxin,AF)最早被发现于1960年,是黄曲霉(Aspergillus flavus)和寄生曲霉(Aspergillusparasiticus)的次级代谢产物,目前已分离鉴定出12种以上,常见的有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、B2a、G2a、BM2a和GM2a等。黄曲霉毒素的热稳定性非常好,常规烹调和加热法不易分解。  世界范围内黄曲霉毒素的污染相当广泛,包括谷物、坚果和籽类以及牛乳等,尤以玉米、花生被污染的程度最严重。其主要原因是食物在田间未收获前被黄曲霉等产毒菌浸染,在适宜的气温和湿度等条件下繁殖并产毒,或未经充分干燥,在储藏期间产生大量毒素。食用油也存在容易受黄曲霉毒素污染的问题,但通过原料筛选、碱炼、吸附等控制手段可以使成品油中黄曲霉毒素降到非常低的水平。  (二)摄入量决定黄曲霉毒素是否引起急性中毒。  世界范围内曾报道数起人类的黄曲霉毒素急性中毒,如非洲的霉木薯饼中毒,印度的霉玉米中毒等。2004-2005年肯尼亚暴发了迄今史上最大规模的黄曲霉毒素急性中毒事件,中毒千余人,死亡125人,中毒玉米中检出黄曲霉毒素B1的含量高达4400ppb(μg/kg),是罕见的黄曲霉毒素中毒事件。黄曲霉毒素中毒的症状一般为一过性发烧、呕吐、厌食、黄疸、腹水、下肢浮肿等肝中毒症状,严重者出现暴发性肝功能衰竭、死亡。  根据我国及世界其他国家的标准规定,黄曲霉毒素的含量如果在安全限量范围之内,并不会对消费者的健康构成风险。  (三)全球已高度重视对食品中黄曲霉毒素的控制。  黄曲霉毒素B1是影响人和动物健康的主要真菌毒素之一,也是全球食品安全控制中最主要的真菌毒素。2003年联合国粮农组织(FAO)发布的全世界食品和饲料真菌毒素法规报告中显示,除国际食品法典委员会(CAC)的规定以外,全球100多个国家和地区制定了各类食品中黄曲霉毒素限量标准。食品中黄曲霉毒素B1的限量范围为1-20ppb,黄曲霉毒素总量(AFB1、B2、G1、G2)的限量范围为0-35ppb。  2011年我国发布的《食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量》(GB2761-2011)中规定花生及其制品中黄曲霉毒素B1的限量为20ppb。  (四)“土榨油”看似原生态实存安全隐患。  近年来,“纯天然”和“原生态”成为部分消费者的追求,除了购买“土榨油”外,也有使用家用榨油机自制油的方式。对于这两种榨油方式,专家认为存在较大安全隐患。除了原料品质是否过关的问题,“土榨油”或自榨油还存在下列问题:未经过精炼加工,杂质多,易氧化变质;榨油设备不易彻底清洗干净,残留的油渍及谷物残渣在氧化后会产生霉变,食品安全隐患很大;此外,资源利用率低,会造成很大浪费。  三、专家建议  (一)科研人员应加大“从田间管理到加工过程”对黄曲霉毒素污染及控制手段的研究力度,为保证食品安全提供更加有效的科技支撑。  (二)以玉米、花生等为主要原料的食品生产、加工企业,特别是“土榨油”生产作坊,应严格执行食品安全国家标准和相关技术规范,积极采取有效措施,重视原料安全,严格把关每一个生产环节,确保产品的质量和安全。  (三)媒体应注重全面、科学、客观报道,采用相应领域权威专家的专业观点,以正确解读国家相关标准法规,引导消费者理性认识和理解黄曲霉毒素的危害,避免公众过度恐慌。  (四)消费者应注意培养良好的消费习惯,注意产品的标签、标识,做到在保质期内妥善储藏。特别应注意通过正规可靠渠道购买食用油,不要片面迷信“纯天然”和“原生态”制品。来源:国家食药监局

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