为一种生物染色剂,必须同时满足两个要求:具有鲜艳透明的颜色,而且能与组织细胞相结合。染色剂分子能够显示颜色的基因,称为发色团。主要的发色团有:亚硝基和偶氮基显示的颜色较强,在染色剂中有一个这样的发色团,就可染出颜色。其他的发色团则不是这样,必须有几个发色团,有醌的分子中就有四个发色团,(2个羰基2个烯基)。 大量的合成染料都是由煤焦油蒸馏得到的,它们都是苯的衍生物,所以苯环是合成染料的基础。苯本身是无色的,但其氢原子为某发色团取代后就带有了颜色。含有发色团的苯环化合物,称为色原。 苯+发色团=色原 色原还不能很好地与组织细胞相结合,即使着了色也很容易脱去。因此仅仅具有色原还不能成为染色剂,染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合的基因,这样基国在称为助色团。如—NH2 —COOH —OH —SO3H 氨基 羧基 羟基 磺酸基 氨基在溶液中形成阳离子(+),为碱性;其它羟基,羧基和磺酸基皆带阴离子(-)故为酸性。如三硝基甲苯是个色原,它虽有发色团—硝基,但因缺乏助色团,所以没有染色作用,不能称为染料。假如三硝基苯分子中的一个氢原子被羟基置换,则所生成的化合物既具有发色团而又得到了助色团—羟基,这就成了常用的酸性染料苦味酸。 这就可以看出,助色团的作用在于使色原形成盐类,可以在溶液中电离成为带电的离子,这样才能与相应的组织细胞的成份相结合。
染色就是利用染料在组织切片上给与颜色,使其与组织或细胞内的某种成分发生作用,经过透明后通过光谱吸收和折射,使其各种微细结构能显现不同颜色,这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。染色剂与组织细胞相结合而使组织细胞着色的过程与物理和化学作用两者都有关系。 一.染色的物理现象 1.溶解性: 这种染色最典型的例子就是脂肪染色,苏丹类染色剂为脂溶性染料,它可以被脂质溶解,使脂质着色,就是利用染色剂在脂质中的溶解度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。因此,当苏丹类的酒精溶液与组织细胞中的脂质接触时,染色剂就从溶液中“转移”到脂质中去,而使脂质着色。 2.吸附作用: 较大物体有从周围介质吸附小颗粒到自身的特性。有些染色则是染色剂分子通过渗透和毛细管作用而被吸收或沉淀到组织,细胞的小孔中去而着色的。例如活性炭吸附各种分子,甚至胶质和微生物等较大的颗粒一样。 二.染色的化学反应 酸性染料和碱性染料的染色作用常是对立的,而不是一致的。任何染料均可电离,离解出阳离子或阴离子。酸性染料中的酸性部分有染色作用的是阴离子;碱性染料中的碱性部分有染色作用的是阳离子,细胞内同时含有酸性和碱性物质,酸性物质与碱性染料中的阳离子相结合,如细胞核(含有核酸)黏液和软骨基质呈酸性部分被盐基性染料苏木素所染、反之碱性物质与酸性染料的阴离子相结合,如细胞浆及其内部的某些颗粒物质被酸性染料伊红所染。染料的颜色基不是在阳离子,就是在阴离子上,这些离子将因组织反应不同而发生化学结合,如显示含铁血黄素的普鲁士兰反应是最典型的例子。但是,大量染色的化学反应并不象铁反应那样明确,实际情况远为复杂。这是因为蛋白质分子是个分子量自几万至几百万的大分子,每个分子中含有很多阳离子和阴离子基因,在等电点时能形成游离的两性离子,如:[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/02/200902201138_134240_1643419_3.jpg[/img]P为蛋白质,是具有两性的胶体物质。它呈酸性或碱性与环境的PH值有关,如溶液的PH值小于该蛋白质的等电点则此溶液对该种蛋白质即为酸性,蛋白质就带正电,将被酸性染色剂所着色。反之,溶液的PH值大于蛋白质的等电点,则此溶液对该蛋白质来说即为碱性,蛋白质带负电,将被带有阳离子的染色剂所浸染。在日常工作中,长久固定于甲醛的组织切片,往往染色不良,尤其是核的着色欠佳。这是因为固定液甲醛氧化生成甲酸,组织亦随之变为酸性,所以不易被苏木素所着色,补救的办法是,先用流水冲洗组织块,然后用碱性溶液如稀氨酒精等处理使之中和,恢复正常PH值后再进行染色。大多数染色的原理至今仍未搞清楚。有些可能是物理的,有些可能是化学的,有些则可能两种机制都起作用,正因为人们对染色的原理还没有完全掌握,所以目前还不能很好地运用原理来控制它。在相当程度上要凭借工作经验。因此“染色”成为技术性很强的一项工作。在进行每一种染色方法时,必须注意不断地有意识地去积累经验,从成功与失败中去真正掌握该染色技术。
现代病理学中免疫组织化学技术、电子显微镜技术以及其它细胞及分子生物学技术应用日益广泛, 这些技术要求一定的实验条件和试剂,如市面上使用广泛的徕卡染色机及其配套的徕卡透明试剂。相对而言,组织化学技术则具有无需复杂的实验条件和试剂、操作又比较简单的优势,在临床病理学诊断中具有重要的应用价值。 组织化学染色的方法很多,这里仅介绍几种常用的组织化学染色在病理诊断中的应用。一、胶原纤维的染色凡是间叶组织细胞都可产生网织纤维,也可产生胶原纤维,纤维母细胞是产生胶原纤维的主要细胞。胶原纤维是结缔组织中的主要纤维,是结缔组织中起支持作用的重要部分,具有一定的韧性和坚固性,能抵抗一定的牵[fo
来源:生物秀染色剂的分类一、按来源可以分为 1.天然染色剂:主要是苏木素,胭脂红,地衣红,番红花。 2.合成染色剂:是从煤焦油中提取的苯衍生物。在生物染色中还使用一些无机化合物,如硝酸银,氯化金,磺,锇酸,高锰酸钾等。 二、按主要用途分为 1.胞核染色剂:苏木素,胭脂红,甲苯胺蓝,美蓝,孔雀绿等。 2.胞浆染色剂:伊红,淡绿,橘黄G,酸性品红,苦味酸等。 3.脂质染色剂:苏丹Ⅲ,苏丹Ⅳ,苏丹黑,硫酸尼罗蓝及油红等。 三、按染色剂分子中的发色团可分为九类 1.亚硝基类:发色团为亚硝基(-NO)如萘酚缘-B。 2.硝基染料:发色团是硝基(-NO2)如苦味酸。 3.偶氮类:发色团为偶氮基(-N=N-)属于这一类的染色剂的橘黄G,刚果红,俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。 4.醌亚胺类:这类染料含有两个发色团,一个是印胺基(-N=),一个是醌型苯环,如硫堇,美蓝,甲苯胺蓝O,硫酸尼罗蓝,中性红,碱性藏红花O,焦油紫等。 5.苯甲烷染料:发色团是醌型苯环,如孔雀缘,浅绿,碱性品红,酸性品红,结晶紫,甲基缘等。 6.山叮染料:发色团是醌型苯环,如派罗宁,伊红Y等。 7.蒽醌染料:此类染色剂含有色原蒽醌,如茜素和胭脂虫酸。 8.噻唑类。 9.喹啉类。 8,9类染色剂使用极少。 四、按染色剂的化学性质分类 染色剂的干粉是稳定的盐类,它们在溶液中则电离成酸性或碱性染色剂。如酸性染色剂,能够产生氢离子(H+)或其它阳离子(Na+),而其本身成为带负电荷的阴离子者。这类染色剂一般用于染细胞浆,如伊红Y,苦味酸,橘黄G等。碱性染色剂,能产生氢氧根离子(OH -)或其它负离子(如Cl-),而本身成为带正电荷的阳离子者。这类染色剂常用于染细胞核,如碱性品红等。 1.酸性染色剂:色原——助色团——Na→[色原-助色团]+Na+。常用的如伊红,酸性品红,苦味酸,橘黄G,刚果红,水溶性苯胺蓝,淡绿等酸性染料常用以染细胞浆等碱性成份。 2.碱性染色剂:色原——助色团——Cl→[色原-助色团]++Cl。常用的如苏木素,卡红,次甲基蓝,甲苯胺蓝,硫堇,美蓝等碱性染料常用以染细胞核等酸性成份。 严格地说,酸性染色剂的溶液并不一定呈酸性。同样,碱性染色剂的溶液也未必呈碱性。所谓酸性和碱性染色剂仅指它们电离后其分子的主要染色部分是阳离子还是阴离子。因此称为阳离子型染色剂或阴离子型染色剂更为适当。 常规H.E染色中苏木素染液的PH值约为7,此时胞核的化学成份电离产生H+,而其本身成为带电荷的阴离子,所以被阳离子型的碱性染料剂所着色。伊红染液为弱酸性。细胞的化学成份从溶液中获取H+而成为带正电荷的阳离子,因此与阴离子型的酸性染色剂(伊红)相结合,染作红色,这就是H.E染色分别显示核和胞浆的机制。 3.中性染色剂:这是酸性染色剂和碱性染色剂的复合物,又可称为复合染料。是由碱性染料(色碱的盐)和酸性染料(色酸的盐)配制而成。其中染色剂的分子很大,所以往往水中溶解度较低,需用酒精做溶剂。血液学中的血液涂片经常使用的瑞氏染色剂及姬姆萨染色剂就是这种混合染色剂。其中的各种不同成分可分剔使核、胞浆和颗粒着色。
一、染色方法1863年由waldeyer率先倡导用苏木素染液染细胞核,后来Mallory、Mayer等也阐述过苏木素的应用。近年来特殊染色和组织化学方法也屡有创新。Shikata(1973),Tanka等(1981年)分别介绍了用地依红和维多利亚蓝混合液显示乙型肝炎表面抗原的方法;1987年Crocker J等推出了核仁组成区嗜银蛋白染色的技术方法以及1991年进行的乳腺肿瘤核仁组成区的研究方法等。特殊染色的分类:特殊染色方法按照所染目的物进行分类,有结缔组织、肌肉组织、神经组织、脂类物质、糖类、色素、病理的内源性沉着物、病原微生物、内分泌物质、单种细胞和性染色质、骨、血液及造血组织、核酸、酶类等。特殊染色的命名:对于特染的命名至今尚无统一的规定,多数均按发明者的姓名命名,如van Geison染色等;有的则按所用染色液命名,如甲基绿一派若宁染色、苏丹Ⅲ染色等;有的按目的物命名,如网织纤维染色;还有的采用混合命名,如试剂十人名等。二、染色目的未加染色的任何组织切片在镜下只能辨认细胞和胞核的轮廓,看不清楚其他任何结构。染色的目的就是将组织切片浸入染色剂内,经过一定的时间,将组织或细胞及其他异常成分染上不同深浅的颜色,便于在光学显微镜下进行观察。三、染色原理 染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其机理尚未完全清楚。 1、有学者认为从物理学角度看,染色剂和组织细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类染色剂使脂质着色,就是利用染色剂在脂质中的溶解度大于在洒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些染色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸收或沉淀到组织、细肋的小孔中去而着色的‘这种机制的染色是很少的。2、另有学者认为染色是染色剂相组织、细胞之间的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反应是最典型的例子。但是,大量染色的化学反应并不象铁反应那样明确。大多数染色的原理至今仍未搞清楚,有些可能是物理性的,有些可能是化学性的,有些则可能2种机制都起作用。正因为人们对染色的原理还没有完全掌握,所以还不能很好地运用原理来控制它,在相当程度上需凭工作经验。四、染色的分类(一)普通染色最广泛应用于常规制片的苏木素和伊红染色,又称为常规染色。(二)特殊染色1.定义 专门用于显示某些特定目的物的染色方法称为“特殊染色”,它又可以理解为“选择性染色”。特殊染色对目的物的选择性是相对的。有些方法具有相对的特异性,加油红O等脂质染色,显阳性者可以肯定为脂质;有些则显示的是一类物质,如PAS呈阳性反应者有糖原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、霉菌等许多物质和组织结构,并不能确定是哪一种具体成分。所谓特殊染色的相对性,就是一种方法可以显示多种目的物,一种目的物可以用多种方法显示,其中有些方法可能呈阳性,而有些方法则呈阴性,这就需要我们拿捏多种方法,因为有时只有依靠多种方法才能确定所要确认的目标。2.特殊染色的意义1)可以显示在常规HE染色切片中不明显的目的物,例如当病变中霉菌数量较少时,应用Gridley染色就容易发现。2)可以区别胶原纤维和平滑肌,苏丹染色可区别脑浆内的脂肪变和水池变。3)可以显示某些HE染色中不能看到的目的物。如网织纤维、星形细胞的突起、结核杆菌、螺旋茵等,都可用相应的特殊染色法显示。因此,特殊染色是常规染色的必要补允,也是染色技术中不可缺少的组成部分。它在病理诊断中起着辅助作用。
常用染色剂及配制供组织学诊断用的优秀常规染色剂,不仅须使细胞核和细胞浆有选择性着染,也要使结缔组织着色。苏木素-伊红染色的切片适当分色,可使这些结构得以区分,胞核表现为蓝色,胞浆和结缔组织纤维呈各种色调的粉红,因此这是一种最常用的常规染色剂。 一、苏木素-伊红染色的基本原理 苏木素是最早用于生物学上的天然染色剂之一,百余年来,一直是生物学实验室最常用的组织学中细胞核的染料,它是从苏木树的树心中提炼出来的,为浅褐色结晶或淡黄褐色的粉末状物。易溶于乙醇、甘油,也可溶于热水。苏木素本身没有染色能力,它经过氧化后,能产生具有染色能力的苏木红,苏木红又称为氧化苏木素或苏木因。 苏木素变成苏木红的过程叫作“成熟”。成熟的方法一般有两种:一种是把配制好的苏木素液在开口瓶中放置两个月以上,让其在日光和空气中的氧的作用下使之氧化。故一般地盛苏木素的瓶子放在向阳处,时间愈长,染色的效果愈好。常配制一大瓶,备长期使用。另一种方法是在苏木素液中加入氧化剂,如磺酸钠,过锰酸钾,氧化汞,双氧水等。用这种方法成熟与用第一种方法者不同的是,它放置时间愈长,染色的效果愈低。这是因为苏木红被继续氧化可生成无色的化合物,故一次不宜配制过多,还应放置40C冰箱内避光保存以延长使用时间。它的优点是配制后即可使用。 成熟的苏木素对组织并无亲和力,须加入含金属离子的媒染剂,才能达到染色的目的。一般用于明矾苏木素的媒染剂为钾明矾或氨明矾。主要是利用明矾中的铝离子和苏木红结合形成的铝沉淀色素为紫蓝色,对染色质有很大的亲和力,水和酒精都不能使其褪色。用于铁苏木素的媒染剂是三价铁离子,苏木红的铁沉淀色素为黑蓝色,不溶于水,因此,故不能配制大量含媒染剂的混合液,一般用时现配,或在染色过程中,先用铁明矾媒染,然后再染苏木素,如磷钨酸苏木素染色即是。 常规苏木素染色的对比染色是用伊红,也有采用焰红,因为焰红比伊红色泽更鲜明,此外还有采用橘黄G,比布里希猩红,波尔多红等作为对比染色。 苏木素-伊红染色,在组织病理学中,是一种日常使用最为广泛的常规染色方法。一张优质的染色切片,可以清晰地观察到各种不同的组织结构以此作为病理诊断的确切依据。再根据此染色切片所见,分别进行不同的特殊染色。 二、染液的配制 在实验室内常用的苏木素染液有以下几种,不同的仅是染色时间以及比较每种染色方法彼此的优缺点,不过各有优劣。 (一)苏木素染液的配制方法如下 1.Harris氏苏木素液 甲液:苏木素 1g 无水酒精 10ml 乙液:硫酸铝钾 20g 蒸馏水 200ml 丙液:一氧化汞 0.5g 经典的配制方法是,先将甲液加热溶解后,密封待用,再将乙液加热溶解至沸,去火,待溶液仍处于小沸腾状态时再将甲液徐徐倾入其中,全部混合后,再使溶液在短时间内加热至沸腾,去火,最后,将氧化汞缓慢倾入溶液中(氧化汞一定要慢慢少量分次加入,切忌急躁。因氧化汞倒入后,溶液会迅速膨胀易沸出容器外而发生危险。)此时液体变为深紫色,待氧化汞全部放入后,再将溶液加温至沸腾片刻,立即将溶液放入流动的冷水中,并缓缓地连续摇晃至溶液完全冷却为止。隔夜后过滤,加入冰醋酸(按5%比例)混匀,再过滤后保存于冰箱内备用。 我们在实验工作中摸索了一种Harris氏苏木素的配制方法,染色效果很好,特介绍如下。 配方:(配制2000ml) 苏木素 9g 硫酸铝胺(铵明矾) 200g 氧化汞 7g(5—10g) 冰醋酸 100ml 蒸馏水 2000ml 器具: 3000毫升三角烧瓶 1个 200毫升量筒 1个 1000毫升量筒 1个 漏斗 1个(大) 滤纸 1大张 另备脱脂棉、电炉、湿抹布、大称量纸、流水槽等。 (器具要求达到化学洁净) 配法: 1.将苏木素溶于100毫升无水乙醇中,密封备用。 2.将200克铵明矾溶于2000毫升蒸馏水中,加热至沸。 3.去火。加入苏木素酒精搅拌,加热至沸。 4.去火。缓缓加入氧化汞。 5.微火煮至有金属膜产生。 6.去火。以湿抹布包住三角烧瓶的颈部。迅速放置于冷水浴中冷却,缓缓摇动烧瓶至液体完全冷却为止。 7.静置避光过夜。棉花过滤。滤液中加入冰醋酸(按5%的比例加入),混匀,滤纸过滤,备用。 注意事项: 1.配制好的苏木素液,未经使用的可长期置冰箱(冷藏)内保存。 2.盛液体的烧瓶要质优并且容积要大,防止忽速冷却对破裂和煮沸时液体溢出。 2.Hansen氏苏木素液 甲液:苏木素 1g 无水酒精 10ml 乙液:硫酸铝钾(钾明矾) 20g 蒸馏水 200ml 丙液:高锰酸钾 1g 蒸馏水 16ml 先将甲液加热溶解,然后将乙液加热溶解,将甲、乙两液混合。再将丙液溶解后缓缓滴入,待全部混合后,再次煮沸一分钟,冷却后过滤,即可使用。 3.Heidenhain氏铁苏木素液 甲液:硫酸铁铵(紫色结晶) 5g 蒸馏水 100ml 乙液:苏木素 0.5g 无水酒精 10ml 蒸馏水 90ml 此液要求硫酸铁铵只有紫色的透明结晶才能使用;苏木素是溶于洒精中然后加水。苏木素液需放置4-5周才能成熟。临用时将甲、乙两液等量混合后使用。(也可先将苏木素用无水酒精配成5%的贮备成熟,用时取10毫升加蒸馏水至100毫升使成乙液) 此苏木素液能染许多结构,但只能用于退行性染色法,需要熟练的分化,初学者宜用减半浓度的铁明矾分色,熟悉后再用原浓度分色。 此液与其它的苏木素染色技术有两个不同a.媒染剂与苏木素分开使用。b.所用的媒染剂亦用作为分色剂。 4.Ehrilich氏酸性苏木素液 主要应用一般染色和粘液,骨组织的染色 配方: 苏木素 2g 纯酒精 100ml 甘油 100ml 蒸馏水 100ml 冰醋酸 10ml 钾明矾 15g 将苏木素溶于纯酒精,再将钾明矾溶于蒸馏水中,溶解后将甘油倾人混合,然后加入苏木素酒精混合,最后加人冰醋酸,溶液全部混合后,应暴露在日光下使其自然成熟,时间约要三个月。(若加人300毫克碘酸钠,使苏木素迅速氧化则可立即使用。)此液贮存愈久染色力愈强。(可保持数年之久)染色时间5——20分钟,结果甚佳。 5.Delafreld氏苏木素液 主要应用于一般染色,弹力纤维的染色。 甲液: 苏木素 4g 纯酒精 25ml 乙液: 饱和铵明矾水溶液(约 10%)40毫升 丙液: 甘 油 100ml 甲 醇 100ml 先将苏木素溶于酒精,再将甲液混合在乙液中,置于白色瓶中并暴露在阳光下约一周,然后过滤,将丙液加人滤液中,待溶液呈暗灰色时再过滤,滤液密封保存。 6.Mayer氏明矾苏木素液 主要应用于一般染色,骨组织染色,及免疫组化染色。 配方: 苏木素 0.1g 钾明矾 5g 碘酸钠 0.02g 拘椽酸 0.1g 水合氯醛 5g 蒸馏水 100ml 先将苏木素及水煮沸溶解,加人钾明矾与碘酸钠,搅动直到全部溶解为止。再加人水合氯醛和拘椽酸,完全溶解后染液呈蓝紫色。加热煮沸五分钟,冷却后过滤即成。 此染液染切片5——15分钟,不需分化,充分水洗后,可使细胞核显蓝色并且非常细致清晰,通常用于对比染色。 7.Weigert氏铁苏木素液 甲液 苏木素 1g 无水酒精(或 95%酒精) 100ml 乙液 29%三氯化铁水溶液 4ml 蒸馏水 95ml 盐酸 1ml 临用时,取甲、乙液等量混合即可应用。混合时应将乙液加人甲液内,染液呈紫黑色。铁苏木素不能象明矾苏木素一样配制后可放置贮存备用,因铁与染色剂的色素根会化合生成不溶性沉淀,所以铁作媒染液时,必须与染液分别配制和分别保存,染片时临时混合应用。 由于这是一种铁苏木素,它将胞核染成黑色。能抵抗在对比染色液中所含分色剂的脱色作用,且不会被光线退色,因此比钾矾苏木素染色较为持久。 8.Mallory氏磷钨酸苏木素
100 kb)——是一种新类型(被命名为黑色)。尽管黑色染色质域相对基因贫乏——它们包含了大于4000个基因,Filion等人发现这些基因没有或只有非常有限的转录活性。插入黑色区域的报道转基因通常都是受阻遏的,这意味着黑色染色质的活性抑制了转录。在胚胎细胞的沉默黑色区域中的基因在一些其他的组织中也有表达,因此研究人员推测这种形式的染色质或许与发育调控有关,至少是部分相关。DamID数据的分类同时表明,常染色质包含有两个截然不同的类型。黄色和红色染色质都含有蛋白质和组蛋白改变——这是转录活性区域的特点——并产生大量的mRNA,但是红色染色质携带了几种对于这种染色质而言是独一无二的调节蛋白质,包括核小体改造Brahma。同样,尽管是类似水平的转录,组蛋白H3在赖氨酸36上的三甲基化——这之前被描述为转录延伸的一种普遍的标记——被高度富集于黄色区域中的基因,但在红色染色质中却没有。有趣的是,活性染色质的这两种形式可能反映了不同基因类型的完全不同的调控机制:黄色染色质中的基因具有占优的广泛表达,并具有基本的细胞功能,然而红色染色质区域中的基因则更加特殊。研究人员在最近出版的《细胞》杂志上报告了这一研究成果。研究人员指出,与染色质有关的蛋白质被广泛保存于物种中,因此很可能这种分类将广泛适用。新区域类型的更多研究将为染色质如何帮助控制基因表达提供一个更微妙的观点。(群芳)《科学时报》 (2010-11-03 A4 国际)
热处理奶这里的热处理娃指在60~65℃下加热约15s。新迸的生奶经过热处理后,能够延长 保存期,使生奶在被进-步加工之前能够延长冷藏储存的时间。这种处理方法能有效减 少假单胞菌等热敏性嗜热菌的数量。但假单胞菌能在生奶冷藏期间生 长,产生胞外酶(如蛋白酶和脂肪酶),这类酶不受随后的热处理的影响,能继续保留在奶 液中,产生类似UHT奶或奶酪样的腐败现象。染色剂还原试验该方法将氯化二苯基四氮唑(TTC)作为染色剂,嗜热链球菌作为分析菌株。当 将TTC染色剂加人事先接种了嗜热链球菌的无抗生素的奶中时,样品中的TTC快速还 原为红色的偶氮化合物。此还原过程是不可逆的,红色的偶氮染色剂不能被氧分子重新 氧化,这点与用亚甲基蓝作为染色剂时不同:当细菌的活性被残留抗生素或其他抑制物 质完全抑制时,则TTC染色剂不能转化为偶氮化合物,此时,奶液仍呈白色。表明部分待 测微生物受到抑制(当介于中间的红色阴影产生时)。 因此,测试的敏感度受菌株的菌龄、加人量的多少以及加人TTC之前菌体培养时间的影响。 结果的比较必须在标准状态下进行。
[b]铅柠檬酸盐,三水合物(简称:染色剂)[/b]Pb(C [sub]6[/sub] H [sub]5[/sub] O [sub]7[/sub])[sub]2[/sub] 3H [sub]2[/sub] O FW 1053.82 CAS#512-26-5 最小测定法99.%超薄切片中使用最广泛的金属着色剂。用于电子显微镜的简化铅柠檬酸盐染色剂。电子显微镜的即时铅柠檬酸盐货号:17800 (进口) 25g /1瓶有需要联系qq:3193945161邮箱:yuanyali330@163.com
各位专家,如何选择染色剂把聚苯乙(PS)和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)区分开来,并且只能染PMMA而不染PS?多谢了!
[size=3][color=#DC143C]在哪里能买到3β-HSD染色剂,谢谢[/color][/size]
有时候要采购买指示剂,买来的是生物染色剂。请问各位版友:生物染色剂与指示剂有什么区别?
我想知道美兰染色剂那里有的买.谢谢
食品安全国家标准 小鼠精原细胞或精母细胞染色体畸变试验
我们有测en71-9中检测染色剂的打算,实验室已经有WATERS的LC-DAD了,一定需要MS吗?另外用什么分析柱合适呢?请在检测染色剂的高手指点一下,在此谢过了!
◆产品特点 1、真正高效全自动:全球独家全自动多动能制片染色一体化设备,标本处理、制片、染色一次完成。 2、杜绝拖带污染:使用一次性加样针脱针系统和自动独立滴染湿式染色系统,杜绝了传统染色可能造成的交叉污染。 3、提取黏液包裹细胞:采用梯度离心分离及红细胞处理裂解和黏液消化技术三合一有效提取细胞及诊断成份,富集细胞及诊断成份,保证诊断细胞不丢失。 4、捕获病变细胞:根据人体不同类型细胞比重不同的特点,尤其是病变细胞比重大、沉降速度快,从而最大程度地捕获病变细胞和具诊断价值的成份,提高检出率。 5、薄层细胞均匀分布:基液使细胞均匀悬浮,保证随机性,任意取样涂片都具有代表性,形成均匀分布的真正薄层细胞涂片。 6、无需前处理:直接上机,标本无需前处理,三合一独家技术,细胞结构保存更完好,操作更加方便,省时高效,较国内外同类方法机型自动化程度更高。 7、高品质诊断保障:三合一独家技术有效提取细胞及诊断成份,完全清除黏液、红细胞等干扰成份,有利于病变细胞的鉴别诊断。 8、强大而简捷微机界面:人机对话式中文界面,可选择妇科及非妇科,不同数量及不同染色方法,操作更加方便,功能强大 9、绿色环保:不含一点甲醛,对于临床一线操作人员身体没有损害,无需采取特殊的防护。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106231242_301156_2324710_3.jpg
导读:今年,随着屠呦呦获得诺贝尔奖让中国中药迅速成为全球关注的焦点。然而,我国中药行业发展还面临很多挑战,中药材的安全性也存在诸多隐患。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/11/201511101644_572992_3013923_3.png 近日,在国家食品药品监督管理总局的一次专项抽验中,以生产中成药为主的亚宝药业集团股份有限公司被检测出中药原料延胡索使用了化学染色剂金胺O。 我们普通消费者对中药名肯定不是很了解,对于这化学染色剂金胺O可能也感到陌生。金胺O为黄色均匀粉状物,易溶于热水呈亮黄色,溶于乙醇呈黄色,其水溶液加入浓硫酸稀释后呈淡黄色。主要用于麻、纸、皮革、草编织品、人造丝等的染色,也用于印染棉织品。碱性金胺O可用于油、脂肪、油漆等的着色。 金胺O对皮肤黏膜有轻度刺激,可引起结膜炎、皮炎和上呼吸道刺激症状,长期过量食用,将对人体肾脏、肝脏造成损害甚至致癌。早在2008年被卫生部列为非食用物质,在中药材、中药饮片和中成药中均不得检出。 但其仍然是中药染色剂中的常客。近年来,食药总局曾多次检出药材延胡索、蒲黄等中含金胺O。除食药总局之外,各省市食药监局所检测出的金胺O也不在少数。 那么,为什么要对这些药材进行染色呢?据悉,中药饮片染色主要有三种情况:伪品通过染色掺入正品中,这种情况较为多见,掺入量达50%左右;第二种情况则是正品通过染色以次充好,这种常见于人工培植的山参染色后便于高价卖出;第三种则是劣药通过染色,继续入药。 无论是哪种原因,都对中药饮片、成药的质量以及服用者的身体健康产生严重的影响。中药材的质量安全保障并不是某一个环节的问题,从种植、采摘、贮藏、加工、制剂,每一个环节都非常重要。要确保公众用药的安全,药企必须以产品安全为“红线”,坚持“质量重于生命”的理念,建立从源头、生产到售后的全程质量监控体系,切实负起质量安全的第一责任。 面对中药染色屡禁不止的现状,对中药的检测就显得十分重要。精密仪器的不断发展给中药质量标准提供了先进的方法手段,如用气相色谱法、高效液相色谱法、色谱-光谱-计算机联用技术薄层扫描法、核磁共振波谱法、超临界流体色谱法等先进技术和设备来研究分析中药质量。 在常规分析技术方面,采用导数光谱分析多种成分,也用比色法、薄层层析-紫外分光光度法等分析方法。 目前,我国的药品管理法不涉及原生中药材,对其质量监管处于一种比较尴尬的地位,监管力度不够,单纯依靠企业自检很难解决中药市场目前的问题。 要从源头上解决问题,首先就是从药材种植上做到规模化、产业化;其次,强有力的监督执法权也是规范市场必不可少的。虽然现在食药监局可能存在人员有限、现有的专业人员不足等情况,但随着2015年版《中国药典》的即将实施,及先进科学仪器的助力,我国中药质量和安全性将整体提高,保障公众用药安全有效。
找了很多地方都没有适合的染色剂检验标准,希望有这方面资料的朋友帮忙发一个。谢谢。。
导读:药品安全作为国家食品药品监管局的重点监管项目之一受到广泛关注,而其中的中药安全随着近年来中医药的再度繁荣成为人们的关注焦点。 长期以来,中药材安全一直存在诸多隐患,生产日期造假、非法添加染色剂、农残产标、重金属超标、二氧化硫超标等等不一而足,而近期国家食品药品监管总局在全国范围内对黄柏、延胡索等中药材及中药饮片进行的专项监督抽验中,检出9批次添加了染色剂金胺O的不合格产品。 中药安全隐患多 “是药三分毒”,毒上加毒会怎样?中药里面被检出染色剂非此一例,对相关企业的处罚也未减轻,可为何中药材染色屡禁不止?这些非法添加会对人体造成什么伤害? 金胺O作为化学染色剂,曾发现被用于劣质黄柏、蒲黄、延胡索等中药材、中药饮片的非法染色。金胺O对人体具有一定毒性作用,被列为非食用物质,在中药材、中药饮片和中成药中均不得检出。 除了金胺0,苏丹红也经常被发现用于劣质血竭等药材的非法染色,苏丹红的化学成份中含有一种叫萘的化合物,具有致癌性,对人体的危害极大,国家规定在中药材、中药饮片和中成药中均不得检出。 现在逢年过节,很多人喜欢购买人参、灵芝、冬虫夏草等珍贵的中草药馈赠亲友,可这些卖相很好的中药有时候却可能含致命隐患。硫磺作为防腐剂和抗氧化剂,对中药材的加工储藏有一定的帮助作用,因此药材养护过程中经常会让二氧化硫熏蒸空气以间接作用于药材,然而随着时间推移,很多人为了商业利益,用硫磺对药材进行反复熏蒸来达到增白增色作用,熏蒸时间的延长和次数的增多会使药材中的一些有效成分发生变化,从而影响中药饮片的品质,对人体肝脏、肾脏等器官都有潜在危害。虽然2005年的《中国药典》已经表明不允许在中药材中使用硫磺熏蒸来增白、增艳、防虫,但是这根本无法遏制某些生产商欺上瞒下。 此外,中药材种植过程中滥用农药、抗生素、化肥,致使中药材的农药残留和重金属超标在行业内早已不是什么秘密,中药造假、非法炮制更已被多次曝光。 生病吃药本为痊愈,如果因吃药导致旧病未好再添新症,那真是得不偿失,还有谁人敢用药?其实究其原因,中药出现诸多安全隐患,到头来还是为一个字——利。利字当头,利用染色剂可以使劣质药材呈现好卖相,当然就有不良商家不惮于尝试了,他们会全面给大家阐释什么叫天下熙熙,皆为利来,天下攘攘,皆为利往。 保障中药安全 做好分析检测工作 要做好中药质量安全保障工作,对其分析检测尤为重要,传统的中药检测鉴别方法主要有济源鉴别、显微鉴别、经验鉴别和理化鉴别,然而由于这些方法都存在一定的局限性文无法做到绝对准确鉴别,那么还有何种方法可大展身手? 分光光度法是一个不错的选择,利用紫外可见分光光度计、红外分光光度计、原子吸收分光光度计以及荧光分光光度计对中药材进行检查、鉴别和含量测定成为中药常用的仪器分析方法之一,原子光谱法在测定中药中重金属含量上更具有其他方法无可比拟的优势。 此外,经常利用色谱分析进行中药中是否添加染色剂的检测,高效液相色谱法对中药中的农残检测也是得心应手。 至于鉴定中药材真伪,DNA条形码技术的出现为药用植物分类和鉴定提供了本质依据。只需选用一个或少数几个基因片断即可对绝大部分中药物种进行准确鉴定,可以在短时间内鉴定大量样本,重复性和稳定性高,实验过程标准、操作简单,更易实现物种鉴定自动化,可有效缓解分类鉴定人才缺乏的现状。 总之,保障中药安全,就是一个跟不法商家斗智斗勇的过程,你有金钟罩,我有铁布衫,你有张良计,我有过墙梯,监管人员要抓住违法实证施加会心一击,才能遏制中药市场的不正风气,为保障药品安全增加更多助力。
亚甲基蓝 分析纯与生物染色剂 两个种类,除了含量不同外,还有什么区别?做膨润土吸蓝量测试,可以用染色剂代替分析纯吗?意思是用分析纯亚甲基蓝需要2.2280g,可不可以多用一些染色剂,使两者含量相同?
[font=宋体][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/services/special-staining-services][b]HE[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/special-staining-services][b]染色[/b][/url],全称为苏木精[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]伊红染色法 [/font][font=Calibri](hematoxylin-eosin staining)[/font][font=宋体],是最基本的病理学染色技术,能够对正常组织和病理组织进行形态结构的观察。特殊染色是常规[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色的必要补充,能够有针对性地对组织成分进行染色,使组织病理学评价更加完善精确,在临床病理学诊断和病理组织学研究具有重要的应用价值。除常规的[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色外,义翘神州还提供[/font][font=Calibri]9[/font][font=宋体]种特殊染色服务,包括[/font][font=Calibri]masson[/font][font=宋体]三色染色、 [/font][font=Calibri]PAS[/font][font=宋体]染色、尼氏染色、[/font][font=Calibri]VG[/font][font=宋体]染色、苏丹黑染色、普鲁士蓝染色、油红[/font][font=Calibri]O[/font][font=宋体]染色和β[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]半乳糖苷酶衰老染色等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了显示与确定组织或细胞中的正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等,需要分别选用相应的显示这些成分的染色方法进行染色。包括[/font][font=Calibri]: [/font][font=宋体]胶原纤维 染色[/font][font=Calibri](Masson[/font][font=宋体]等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]磷钨酸 苏木素 [/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]、脂肪染色[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]苏丹[/font][font=Calibri]III)[/font][font=宋体]、糖原染色[/font][font=Calibri](PAS)[/font][font=宋体]、粘液染色[/font][font=Calibri](PAS)[/font][font=宋体]等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特殊染色:[/font][font=宋体]病理组织切片染色技术作为病理实验室基本方法之一,具有较高的使用价值,也是目前临床外科病理最基本、最常见的形态学检验技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]实验原理:[/font][font=宋体][font=宋体]组织切片染色就是利用染料在组织切片上给予不同颜色,使其与组织或者细胞内的某种成分发生作用,经过透明后通过光谱吸收和折射,使其各种微细结构能显现不同颜色,这样在显微镜下就可显示出组织细胞的各种成分。最常见的组织染色是[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色,另外巴菲尔生物还可开展其他特殊染色项目,如[/font][font=Calibri]masson[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]PAS[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]AB-PAS[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]EVG[/font][font=宋体]染色、[/font][font=Calibri]VG[/font][font=宋体]染色、维多利亚蓝染色、番红[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]固绿染色、甲苯胺蓝染色、油红[/font][font=Calibri]O[/font][font=宋体]染色、阿利新蓝染色、碱性磷酸酶染色、瑞氏姬姆萨染色、普鲁士蓝染色、[/font][font=Calibri]TTC[/font][font=宋体]染色及髓鞘染色等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]特殊染色的应用价值[/font][font=宋体]现代病理学中免疫组织化学技术、电子显微镜技术以及其它细胞及分子生物学技术应用日益广泛,但由于这些技术要求一定的实验条件以及所需的试剂价格较为昂贵,对于一部分病人以及某一些基层医院是比较难以接受的。而组织化学技术则具有无需复杂的实验条件以及较为昂贵的试剂操作又比较简单的优势,在临床病理学诊断中具有重要的应用价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]比如,当细胞中出现色素,是黑色素还是含铁血黄素以及当组织中出现均一化学物质是否为淀粉样变性等,用组织化学技术区别起来很简单,所以组织化学技术,虽然已有几十年到几百年的历史,仍是一个很有实用价值的技术。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]常见的特殊染色方法及应用:[/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]Mallory[/font][font=宋体]磷钨酸苏木素染色[/font][/font][font=宋体]原理:成熟的苏木素通过钨的结合成蓝色色淀,这种色淀与所选择的组织成份能牢固地结合而呈蓝色,显示棕红色的成份是由于磷钨酸而着色。[/font][font=宋体]方法应用:[/font][font=宋体][font=宋体]临床上应用该方法对横纹肌肉瘤进行诊断,横纹肌肉瘤的组织学形态变化多样,与未分化的间胚叶肿瘤很难鉴别,采用磷钨酸苏木素染色,在瘤细胞质内发现蓝色横纹,则可以证明该肿瘤是呈横纹肌分化。该染色液也可以对炎症渗出的纤维素,[/font][font=Calibri]DIC[/font][font=宋体]的毛细血管中的纤维素、以及神经病理等方面进行染色[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]PAS[/font][font=宋体]染色 [/font][/font][font=宋体]原理:高碘酸是一种氧化剂,它能破坏多糖结构的碳键。组织切片首先用高碘酸溶液氧化,使存在于组织多糖分子的乙二醇基或氨羟基的碳键打开,生成醛基化合物。暴露出来的游离醛基与无色品红溶液作用,生成新的红至紫红色复合物而得到定位。[/font][font=宋体]应用:[/font][font=宋体][font=宋体]在组织学上,主要用来检测组织中的糖类。随着医学实验技术的发展,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质,心肌病变及其他心血管疾病的诊断,糖原累积病诊断和研究[/font] [font=宋体],糖尿病的诊断和研究,用于某些肿瘤的诊断等。除用于糖原的鉴定和黏液的显示外,还可以观察肾小球基底膜、结肠杯状细胞中性黏液物质、阿米巴滋养体和霉菌的着色。为临床诊断、分类和治疗提供了重要的依据。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多关于特殊染色服务详情可以参看:[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/special-staining-services[/font][/font][font=Calibri] [/font]
小弟初学液相,要做染色剂项目,不知那些大侠有空指导指导?需要仪器条件设置及注意事项?[em09511]
我最近在开发染色剂的测试,想问下你们具体是怎么测的,按标准测试出来的效果怎么样,请高手指教!最重要是流动相的PH值要求是9左右,你们用的是什么柱子!
人神经干细胞染色体是否有异常的检测的检测方法微生物检测,还是诺禾测序方法,那种比较好呢?
指示剂 核酸电泳常用的指示剂有溴酚兰和二甲苯青及银染色.溴酚兰在碱性液体中 呈紫兰色,在0.6%、1%、1.4%和2%琼脂糖凝胶电泳中,溴酚兰的迁移率分别与1Kb、 0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的双链线性DNA片段大致相同.二甲苯青的水溶液呈兰色,它在 1%和1.4%琼脂糖中电泳时,其迁移速率分别与2Kb和1.6Kb的双链线性DNA大致相似. 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液.载样缓冲液的作用有①增加样 品密度,使其比重增加,以确保DNA均匀沉入加样孔内.②在电泳中形成肉眼可见的指 示带,可预测核酸电泳的速度和位置.③使样品呈色,使加样操作更方便.染色剂 核酸电泳后,需经染色后才能显现出带型,最常用的是溴化乙锭染色法,其 次是银染色. 溴化乙锭(ethidium bromide,EB)是一种荧光染料,EB分子可嵌入核酸双链的碱基对 之间,在紫外线激发下,发出红色荧光.根据情况可在凝胶电泳液中加入终浓度为 0.5ug/ml的EB,有时亦可在电泳后,将凝胶浸入该浓度的溶液中染色10~15min.琼脂 糖凝胶EB染色,肉眼可见核酸电泳带,其DNA量一般5ng,当溴化乙锭太多,凝胶染 色过深,核酸电泳带看不清时,可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察. 银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛 使Ag+还原成银颗粒,可把核酸电泳带染色黑褐色.主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色. 也用于琼脂糖凝胶染色.其灵敏度比EB高200倍.但银染色后,DNA不宜回收.来源:生命经纬
我们有测en71-9中检测染色剂的打算,实验室已经有WATERS的LC-DAD了,一定需要MS吗?另外用什么分析柱合适呢?请在检测染色剂的高手指点一下,在此谢过了!
http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/09/A1379405357_small.jpg1. 取出细胞爬片,迅速置入冷丙酮固定 20~30 分钟。 2. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。3. 打孔液浸泡 5 分钟。4. 蒸馏水浸泡 5 分钟,2 次。注:第 3、4 步仅用于检测细胞内抗原,检测细胞膜抗原时不用。5. 正常血清封闭:从染片缸中取出切片,擦净切片背面水分及切片正面组织周围的水分 (保持组织呈湿润状态,)滴加正常山羊或兔血清 (与第二抗体同源动物血清)处理,37 ℃,15 分钟。附:正常血清配制 ( 或按试剂盒规定的浓度配制):按 1:20比例,用PBS配制,每张切片需要量按 50 μl+5 μl (10%抛洒量) 计算。6. 滴加第一抗体:用滤纸吸去血清,不洗,直接滴加第一抗体,37 ℃ 2 小时(也可置于 4 ℃冰箱过夜) 。7. PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。8. 滴加生物素化的二抗,37℃,40 分钟。9. PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。10. 滴加三抗 (SAB 复合物) ,37 ℃,40 分钟。11. PBS:5 分钟,2 次(置于摇床) 。12. DAB 显色,镜下观察,适时终止(自来水冲终止) 。附:DAB 的配制储备液(DAB 25 mg/ml)的配制:DAB 250 mg + PBS 10 ml,待完全溶解后分装成 1 ml,100 μl,50 μl ,20 μl 等,-20 ℃,冻存。② 工作液:DAB 储备液 20 μl + PBS 1000 μl + 3% H2O2 5 μl。13. 自来水(细水)充分冲洗。14. 苏木素复染,室温,30 秒,自来水冲洗。15. 自来水冲洗返蓝,15 分钟。16. 梯度酒精脱水:80%,2 分钟 95%,2 分钟 100%,2 次,5 分钟。17. 二甲苯透明:I ,II (二甲苯)各 5 分钟18. 封片:加拿大树胶(或中性树胶)封片。
利用巴氏染色液进行的巴氏染色,是临床细胞学检查常用的传统染色方法。该染色方法的特点是对细胞具有多色性染色结果,能清晰地显示细胞的结构,特别是细胞核染色质非常清楚,从而较容易发现异常细胞。通过巴氏染色可反映出细胞在炎症刺激下和恶变后的形态学变化,对早期发现和诊断一些病变和肿瘤具有较重要意义。在妇科检查中,巴氏染色细胞学检查是宫颈癌及癌前病变的较常用筛查方法。同时巴氏染色还可观察女性激素水平和检测生殖道病原体如念珠菌、滴虫等的感染。产品性能特点: 细胞着色艳丽,对比清晰,着色稳定、操作简易、无毒环保,能快速分辨出细胞的各个结构,对微生物感染和细胞病变等能快速做出诊断。染液经改良后使细胞着色更加稳定,有效延长了标本的保存时间。改进巴氏染色过程的繁琐,染液不含任何重金属等有毒的成分,属于新型环保安全的染色试剂。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/06/201106231243_301157_2324710_3.jpg
染色方法 微生物染色方法一般分为单染色法和复染色法两种。前者用一种染料使微生物染色,但不能鉴别微生物。复染色法是用两种或两种以上染料,有协助鉴别微生物的作用。故亦称鉴别染色法。常用的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法,此外还有鉴别细胞各部分结构的(如芽胞、鞭毛、细胞核等)特殊染色法。食品微生物检验中常用的是单染色法和革兰氏染色法。1、单染色法 用一种染色剂对涂片进行染色,简便易行,适于进行微生物的形态观察。在一般情况下,细菌菌体多带负电荷,易于和带正电荷的碱性染料结合而被染色。因此,常用碱性染料进行单染色,如美兰、孔雀绿、碱性复红、结晶紫和中性红等。若使用酸性染料,多用刚果红、伊红、藻红和酸性品红等。使用酸性染料时,必须降低染液的PH值,使其呈现强酸性(低于细菌菌体等电点),让菌体带正电荷,才易于被酸性染料染色。 单染色一般要经过涂片、固定、染色、水洗和干燥五个步骤。 染色结果依染料不同而不同: 石碳酸复红染色液:着色快,时间短,菌体呈红色。 美兰染色液:着色慢,时间长,效果清晰,菌体呈兰色。 草酸铵结晶染色液:染色迅速,着色深,菌体呈紫色。2、革兰氏染色法 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,1884年由丹麦医师Gram创立。 细菌先经碱性染料结晶染色,而经碘液媒染后,用酒精脱色,在一定条件下有的细菌此色不被脱去,有的可被脱去,因此可把细菌分为两大类,前者叫做革兰氏阳性菌(G+),后者为革兰氏阴性菌(G—)。为观察方便,脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色,阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌,以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应;弧菌,螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别,染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物,它与碘和结晶紫的复合物结合很牢,不易脱色,阴性菌复合物结合程度底,吸附染料差,易脱色,这是染色反应的主要依据。 另外,阳性菌菌体等电点较阴性菌为低,在相同PH条件下进行染色,阳性菌吸附碱性染料很多,因此不易脱去,阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如,在强碱的条件下进行染色,两类菌吸附碱性染料都多,都可呈正反应;PH很低时,则可都呈负反应。此外,两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致,阳性菌透性小,故不易被脱色,阴性菌透性大,易脱色。所以脱色时间,脱色方法也应严格控制。本文来自检验地带网 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤,具体操作方法是: 1)涂片固定。 2)草酸铵结晶紫染1分钟。 3)自来水冲洗。 4)加碘液覆盖涂面染1分钟。 5)水洗,用吸水纸吸去水分。 6)加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分。 7)蕃红梁色液(稀)染10秒钟后,自来水冲洗。干燥,镜检。 染色的结果,革兰氏正反应菌体都呈紫色,负反应菌体都呈红色。
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