高通量细胞克隆筛选系统

[font=宋体]高通量抗体库技术是一种创新的生物技术，能够高效快速地开发单克隆抗体。通过使用高通量抗体库技术，研究人员可以同时对多个抗原进行免疫反应，从而在短时间内产生大量的单克隆抗体。下面为大家介绍其特点和筛选步骤：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]高通量抗体库技术的特点包括：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]高通量：该技术可以同时对多个抗原进行免疫反应，从而在短时间内产生大量的单克隆抗体。[/font][font=宋体]快速：通过该技术，可以在短时间内得到针对特定抗原的单克隆抗体。[/font][font=宋体][font=宋体]高效：该技术采用合成生物学细胞重编程方法，建立了能够识别多样性未知抗原的合成免疫细胞组库，可以识别超过[/font][font=Calibri]10^6[/font][font=宋体]种抗原，大大提高了单克隆抗体的开发效率。[/font][/font][font=宋体]无偏见：该技术可以对任何抗原进行免疫反应，不受免疫原性限制。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]高通量抗体库技术的筛选步骤包括：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]提取抗原：从目标组织、细胞器或全蛋白组中提取蛋白。[/font][font=宋体][font=宋体]蛋白组分拆分：将蛋白组按照分子量进行拆分，每个组分包含[/font][font=Calibri]300-500[/font][font=宋体]个蛋白，从而降低蛋白组的复杂度并保证不同分子量的蛋白均获得满意的免疫效果。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]免疫小鼠：将拆分后的蛋白组分分别免疫小鼠，制备[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]万[/font][font=Calibri]-5[/font][font=宋体]万个特异性识别目标蛋白组的单抗文库。[/font][/font][font=宋体]抗体筛选：通过抗体筛选试验，选择能够与目标抗原特异性结合的抗体。[/font][font=宋体]抗体优化：对筛选得到的抗体进行优化，以提高其亲和力和特异性。[/font][font=宋体]抗体鉴定：通过生物学实验和临床试验等方法，对优化后的抗体进行鉴定，确认其功能和特性。[/font][font=宋体]应用研究：将鉴定合格的抗体应用于研究和临床实践中，以解决实际问题。[/font][font=宋体]总之，高通量抗体库技术是一种高效、快速、无偏见的技术，可以用于开发针对任何抗原的单克隆抗体。其筛选步骤包括提取抗原、蛋白组分拆分、免疫小鼠、抗体筛选、抗体优化、抗体鉴定和应用研究等步骤。该技术的应用范围广泛，可以应用于基础研究、药物研发、诊断试剂开发等领域。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]为了满足抗体药物筛选等对抗体高通量、快速表达不断增长的需求，义翘神州的重组抗体[url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][b]高通量表达纯化服务[/b][/url]结合了专业的高通量基因合成、载体构建和优化的瞬时抗体表达技术，充分利用义翘优势哺乳动物细胞表达平台，能够提供在[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞中快速生产重组抗体服务。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service[/font][/font]

简单介绍一下关于药物高通量筛选技术的知识一.概念高通量筛选(High throughput screening，HTS)技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行试验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据，以计算机对实验数据进行分析处理，同一时间对数以千万样品检测，并以相应的数据库支持整个体系运转的技术体系。二. 高通量筛选技术体系的组成1. 化合物样品库化合物样品主要有人工合成和从天然产物中分离纯化两个来源。其中,人工合成又可分为常规化学合成和组合化学合成两种方法。2.自动化的操作系统自动化操作系统利用计算机通过操作软件控制整个实验过程。操作软件采用实物图像代表实验用具，简洁明了的图示代表机器的动作。自动化操作系统的工作能力取决于系统的组分，根据需要可配置加样、冲洗、温解、离心等设备以进行相应的工作。3.高灵敏度的检测系统检测系统一般采用液闪计数器、化学发光检测计数器、宽谱带分光光度仪、荧光光度仪等。4.数据库管理系统数据库管理系统承担4个方面的功能: 样品库的管理功能;生物活性信息的管理功能; 对高通量药物筛选的服务功能; 药物设计与药物发现功能。三. 高通量筛选模型常用的筛选模型都在分子水平和细胞水平，观察的是药物与分子靶点的相互作用，能够直接认识药物的基本作用机制。1. 分子水平的药物筛选模型:受体筛选模型;酶筛选模型;离子通道筛选模型1.1受体筛选模型:指受体与放射性配体结合模型。以受体为作用靶的筛选方法,包括检测功能反应、第二信使生成和标记配体与受体相互作用等不同类型。1.2酶筛选模型:观察药物对酶活性的影响。根据酶的特点,酶的反应底物,产物都可以作为检测指标,并由此确定反应速度。典型的酶筛选包括1) 适当缓冲液中孵化;(2)控制反应速度,如:温度,缓冲液的pH值和酶的浓度等;(3)单时间点数器, 需测量产物的增加和底物的减少。1.3离子通道筛选模型: (1)贝类动物毒素的高通量筛选,其作用靶为Na+通道上的蛤蚌毒素结合位点，用放射性配体进行竞争性结合试验考察受试样品。(2)用酵母双杂交的方法高通量筛选干扰N型钙通道β3亚单位与α1β亚单位相互作用的小分子，寻找新型钙通道拮抗剂。2.细胞水平药物筛选模型观察被筛样品对细胞的作用,但不能反映药物作用的具体途径和靶标,仅反映药物对细胞生长等过程的综合作用。包括: 内皮细胞激活; 细胞凋亡; 抗肿瘤活性; 转录调控检测; 信号转导通路; 细菌蛋白分泌; 细菌生长。四.问题及展望高通量筛选技术与传统的药物筛选方法相比有以下几个优点:反应体积小；自动化；灵敏快速检测；高度特异性。但是，高通量筛选作为药物筛选的一种方法,并不是一种万能的手段，特别是在中药研究方面，其局限性也是十分明显的。首先，高通量筛选所采用的主要是分子、细胞水平的体外实验模型，因此任何模型都不可能充分反映药物的全面药理作用；其次，用于高通量筛选的模型是有限的和不断发展的，要建立反映机体全部生理机能或药物对整个机体作用的理想模型，也是不现实的。但我们应该相信，随着对高通量筛选研究的不断深入，随着对筛选模型的评价标准、新的药物作用靶点的发现以及筛选模型的新颖性和实用性的统一，高通量筛选技术必将在未来的药物研究中发挥越来越重要的作用。

概念：细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

[size=16px]克隆形成实验[/size][size=16px]及划痕实验[/size][size=16px]、[/size][size=16px]流式细胞术[/size][size=16px]操作步骤[/size]软琼脂克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力软琼脂克隆形成实验适用于悬浮生长的细胞。1. 配胶液：用蒸馏水和琼脂糖粉配制浓度为 0.3% 的琼脂糖液，高压灭菌，置于42℃ 水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态。2. 配制含 20% FBS 的 2×1640 培养基，用 0.22 ?m 的滤器过滤除菌。3. 铺下层胶：将 0.6% 的琼脂糖胶液与 2×1640 培养基等体积混合，以每孔 1.5mL 加至 6 孔板中，室温等其凝固。4. 细胞计数：将细胞用 PBS 洗一遍，离心，加入新的培养基混匀稀释，计数。H69-NC、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2 均以 1×104/孔铺入 6 孔板。5. 铺上层胶：将 0.3% 的琼脂糖胶液与 2× 培养基 1：1 混合，加入 100 μL 细胞悬液，混匀后，每孔加入 1.5 mL 混合液。6. 放入 37℃，5%CO2 培养箱培养，约 2-3 周后终止培养。7. 比较细胞克隆形成能力的差异，利用 Graphpad prism5 作图计算两种细胞克隆形成能力的差异。平板克隆形成实验检测单细胞克隆形成能力平板克隆形成实验适用于贴壁生长的细胞。1. 细胞处理：将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞，用 PBS洗一遍，用胰酶消化并计数。2. 接种细胞： 将细胞接种于 6 孔板中， SW1271-NC 、SW1271-shMSI1-1 、SW1271-shMSI1-2 接种密度为 3×103/孔，注意一定让细胞均匀分布。于 37℃，隔离CO2 静置培养 2-3 周（终止培养时间以不小于 2 周且克隆之间不发生融合为标准）。3. 出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去旧培养基， 用 PBS 清洗 2 次，用 4% 多聚甲醛固定液固定 20 min，吸除固定液，用蒸馏水清洗 2 次后加适量结晶紫染色15-20 min，用蒸馏水洗去结晶紫，自然风干，用扫描仪扫描成图片。4. 在低倍镜下计数大于 50 个细胞的克隆数。5. 计算克隆形成率。细胞划痕实验1. 用记号笔在 12 孔板底部划两条平行线做为标记。2. 将 SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞接种至 6 孔板。3. 待细胞汇合度为 90% 左右时，用 10μL 枪头垂直于两条平行标记线进行划痕。4. 吸除培养基，1xPBS 漂洗 2 次，并换用无血清培养基培养。5. 分别在划痕后培养 0h，12h，24h，48h，72h 观察细胞迁移情况并拍照。流式细胞术1. 收集 H69、H82、H526、SW1271 的对照组和实验组细胞(包括培养上清中的细胞)，收集 1 - 10 ×105 个细胞，用预冷 PBS 离心洗涤。用双蒸水稀释 5 ×Binding Buffer为 1 × 工作液，取 500 μl 1 × Binding Buffer 重悬细胞。2. 每管加入 5 μl Annexin V-APC 和 10 μl 7-AAD。3. 轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育 5 分钟。4. 上机进行分析。

[size=4]人类体细胞克隆胚胎是福还是祸？！进行人类治疗性克隆研究，造福人类呢？还是制造克隆人的时代到来？福兮？祸兮？[/size]

经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细胞丧失产生抗体的能力，所以需要再次或多次克隆化培养。克隆化次数的多少由分泌能力强弱和抗原的免疫性强弱而决定。一般说，免疫性强的抗原克隆次数可少一些，但至少要3～5次克隆才能稳定。克隆化的方法很多，包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离法等。一、有限稀释法1．材料① 微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞（即饲养细胞）每孔2万～4万。② HT培养基2．操作方法① 取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色，计数。② 用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和的悬液。③ 用吸管将细胞悬液分别种入微量培养盘，每孔0.05ml，细胞含量分别为10个/孔、2个/孔、1个/孔和0.5个/孔。④ 5％CO2饱和湿度，37℃培养。⑤ 每天用倒置显微镜观察克隆生长情况，选择只有一个集落生长的孔，弃掉两个以上和没有细胞生长的孔。⑥ 克隆大量繁殖后，布满孔底的1/3～1/2时，测培养液抗体。⑦ 抗体阳性孔细胞，移到有饲养层的组织培养瓶中，并传2～4代就可以脱离饲养细胞，建成克隆株。二、软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5％的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．将117ml完全DMEM液和3ml 10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5％琼脂糖的完全DMEM液，并加75×108 脾细胞。4．每块平皿加10ml，于室温中凝固。5．DMEM中的细胞与DMEM―琼脂1:1混合，将细胞琼脂混合物2ml铺于凝固的平板上，使其全部覆盖。6．放入CO2箱饱和湿度，37℃培养10天。7．用PBS配制0.6％琼脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保温情况下取一试管，迅速加入0.1ml 25％羊红血球，0.2ml豚鼠补体，2.7ml 0.6％琼脂糖。8．用3ml琼脂糖―羊红血球混合液覆盖克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围，可筛选抗羊红血球Ig。三、显微镜操作法在直径6cm培养皿中，加入1ml 1.0×108 细胞悬液放置5％CO2饱和湿度，37℃温箱中放置30min以上，倒置显微镜下，寻找那些与周围相距甚远的单个细胞，将毛细管口（一头有直角弯头毛细管，一头连接一尺长乳胶管，用口控制液体进入）水平置放于液面上，左右微动，直到看见管口，对准细胞，吸入毛细管，将管中细胞移到预先加有2.0×104~5.0×104 饲养细胞96孔板内，培养后，即可获得单个细胞形成的克隆。四、荧光激活分离法用一种荧光激活细胞分类器（Fluorescein Activafed Cell Sorter，FACS）。其基本原理是：将细胞经荧光抗体染色后，经喷嘴形成单个细胞的线形液滴，在莱塞光激发下，荧光素发射荧光，此信号由光电倍增管接收，再结合细胞形态大小产生光散射信号，经电脑处理，产生信号并与预定的信号对比，根据细胞荧光强度及细胞大小不同，将细胞分成不同级别，在电场中发生偏离，而分别收集于不同容器中。

[font='calibri'][size=13px]单克隆抗体的制备过程及原理是什么？[/size][/font][font='宋体'][size=13px]义翘神州是一家抗体试剂和定制抗体的领先供应商，目前已成功交付了数以万计的抗体项目，客户涵盖科研院校、生物制药公司、诊断公司和其他生物技术公司等。[/size][/font][font='宋体'][size=13px]针对定制单克隆抗体，义翘神州提供了一套全面的解决方案。我们将与您通力合作，完成从抗原设计、纯化和抗体验证的完整过程。义翘神州拥有包括杂交瘤、噬菌体抗体库和单B细胞在内的抗体发现平台， 我们可根据您感兴趣的靶点、抗体应用和时间表等，来选择最合适的技术平台。 此外，义翘神州还提供ELISA、WB、流式细胞术、IHC、基于细胞的筛选、亲和力检测等多种表征和筛选技术，确保最终鉴定到最佳的抗体，以满足研究、诊断和治疗领域等应用。[/size][/font][font='宋体'][size=13px]单克隆抗体的制备原理：[/size][/font][font='宋体'][size=13px]单克隆抗体(MAb)是针专一的抗原决定簇产生的抗体，单克隆技术又名杂交瘤技术起源于1975年，由G.K?hler和Milstein创立。主要原理是利用产生抗体的B细胞与肿瘤细胞杂交融合成杂交瘤细胞，生产抗体。[/size][/font][font='宋体'][size=13px]单克隆抗体的制备过程：[/size][/font][font='宋体'][size=13px]1、免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。[/size][/font][font='宋体'][size=13px]2、细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。[/size][/font][font='宋体'][size=13px]3、选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。[/size][/font][font='宋体'][size=13px]4、杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。[/size][/font][font='宋体'][size=13px]5、单克隆抗体的大量制备 单克隆抗体的大量制备重要采用动物体内诱生法和体外培养法。[/size][/font][font='宋体'][size=13px][url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][b]单克隆抗体定制服务[/b][/url]推荐：https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/size][/font]

[font=宋体]单克隆抗体第一次筛选是制备过程中的关键步骤，涉及抗原特异性、抗体分泌量和细胞生长特性等多方面评估。通过精细操作和科学流程，确保筛选出特性优良的杂交瘤细胞株，为后续研究与应用奠定坚实基础。下面一起来看下[b]单克隆抗体第一次筛选的方法[/b]：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]第一次筛选[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]首先，在已免疫过的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞（即效应[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞）和骨髓瘤细胞进行杂交时，可能出现的情况应该先弄清楚。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果只考虑两两融合，可能的情况有：（效应）[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和（效应）[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞的融合；（效应）[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合（即杂交瘤细胞）；骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合（即瘤瘤细胞）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]第一类细胞在体外培养的条件下，因为无法无限增殖，最终死亡，因此，筛选的关键是限制第二类细胞的增殖。科学家在设计实验时，已经考虑到这方面问题，所以他们选择的瘤细胞是有遗传缺陷的，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷（[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体]－）或者次黄嘌呤磷酸核苷转移酶（[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]－）缺陷。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]筛选的目的：获得杂交瘤细胞。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]筛选的方法：[/font] [font=宋体]用选择性培养基来完成，即[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基。[/font][/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]加入次黄嘌呤（[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]）、氨基喋呤（[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]）及胸腺嘧啶核苷（[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]）的培养基称[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]其中，氨基喋呤可阻断[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成的主要途径。主要途径阻断后，依靠应急途径即在[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）和[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体]（胸苷激酶）作用下，利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]，缺少其中一种，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成不能发生。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞，细胞内均无[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]，所以单个或融合骨髓瘤细胞在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养液中将死亡。[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞虽然有[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]TK[/font][font=宋体]，但在体外通常培养条件下，尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]因此，只有杂交瘤细胞才能在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养液中生长繁殖。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]即[/font][font=Calibri]:[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①淋巴细胞：不能生长，[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]天死亡；[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]的主要合成途径被[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]阻断。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]②骨髓瘤细胞：不能生长，[/font][font=Calibri]5[/font][font=宋体]到[/font][font=Calibri]7[/font][font=宋体]天死亡；[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]缺乏，[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成的旁路途经受阻。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]③骨髓瘤细胞和脾细胞融合形成杂交瘤细胞，可长期生长繁殖。利用淋巴细胞的[/font][font=Calibri]HGRT[/font][font=宋体]将[/font][font=Calibri]H[/font][font=宋体]合成为嘌呤碱并最终与[/font][font=Calibri]T[/font][font=宋体]一起合成[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息，从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]由于通过以上方法选择出杂交瘤细胞，虽然都是杂交瘤细胞，但可能是同一抗原的不同抗原决定簇刺激产生的。所以产生抗体是不纯的。如果不进一步提纯，这样得到的是多克隆抗体，所以，需要第二次筛选。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service][b]杂交瘤细胞培养及抗体生产服务[/b][/url]，可采用低血清或无血清培养基进行高密度体外培养，降低牛[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]污染，是国内外客户优选的杂交瘤细胞生产抗体方案。详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[b][font=宋体]前言[/font][/b][font=宋体]在当今的生物技术领域，高通量重组蛋白表达技术在基础研究和商业应用中扮演着非常重要的角色。随着后基因组时代的到来，研究人员对大规模蛋白表达和纯化的需求日益增长，大肠杆菌因其易于遗传操作、低成本、生长迅速成为生产重组蛋白的首选微生物宿主。本文将综述大肠杆菌中高通量重组蛋白表达的现状和未来展望，探讨从目的基因获取到蛋白表达和纯化的先进技术，并讨论如何克服[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review/protein-expression][u][font=宋体][color=#0000ff]重组蛋白表达[/color][/font][/u][/url][font=宋体]过程中的挑战。[/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]高通量重组蛋白表达技术[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量研究是一种能够同时检测数千个生物分子，使大规模重复成为可能的研究。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代初，第一台[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]测序仪被开发出来，人类基因组计划随之开启，高通量技术在[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]、蛋白质、脂质和代谢物检测的需求也急剧增加。自该技术提出以来，大肠杆菌中高通量重组蛋白表达和纯化已经得到了广泛的应用。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]1. [/font][b][font=宋体]目的基因的制备[/font][/b][font=宋体][font=宋体]获取目的基因是重组蛋白表达的第一步。传统的方法是从[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]文库中直接克隆基因，但这种方法存在局限性，如从库中筛选基因较为费时以及难以添加融合标签等。高通量[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术是目前获取目的基因最常用的技术，设计引物并调整好参数后，即可在[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]仪中自动完成目的基因的制备。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri] [/font][font=Calibri]2. [/font][b][font=宋体]表达载体的高通量构建[/font][/b][font=宋体][font=宋体]研究人员开发了多种构建表达载体的克隆方法，包括基于限制性内切酶的克隆、重组克隆和不依赖于连接反应的克隆等。这些方法各有优势和局限性，但在近年来都有显著改进。例如，基于限制性内切酶的克隆因其简单、高效、通用和成本效益而备受关注。一个理想的大肠杆菌表达载体应具备选择标记、复制起点、转录启动子、[/font][font=Calibri]5'[/font][font=宋体]非翻译区（[/font][font=Calibri]5'UTR[/font][font=宋体]）和翻译起始位点。此外，融合标签的添加对于目的基因的转录和蛋白表达同样至关重要。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]3. [/font][b][font=宋体]大肠杆菌表达菌株的选择和细胞培养[/font][/b][font=宋体][font=宋体]为保证蛋白质表达成功及其表达质量，应选择合适的大肠杆菌菌株，如[/font][font=Calibri]BL21[/font][font=宋体]及其衍生菌株是较常用的重组蛋白生产菌株。培养大肠杆菌比较简单的方法是分批培养，但此方法对生长的控制比较有限。近年来，高通量培养技术使研究人员能够在一系列发酵条件下处理大量样品，大大加快了生产时间。[/font][/font][b][font=Calibri] [/font][/b][font=Calibri]4. [/font][b][font=宋体]高通量蛋白表达和纯化[/font][/b][font=宋体][font=宋体]高通量平台可以快速克隆基因、挑选菌落、分离质粒[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]、转化细菌、表达和纯化蛋白质。这些平台虽然成本高昂，但为复杂的分子生物学实验操作提供了极大的便利。[/font][/font][font=Calibri] [/font][b][font=宋体]结论与展望[/font][/b][font=宋体]大肠杆菌中的[/font][url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][u][font=宋体][color=#0000ff]高通量重组蛋白表达技术[/color][/font][/u][/url][font=宋体][font=宋体]极大的推进了重组蛋白的表达进程。尽管存在挑战，但通过不断优化和创新，研究人员正在朝着更高效可靠的蛋白质生产系统改进。未来的发展方向包括进一步优化克隆方法、开发新的融合标签、改进表达载体和菌株，以及利用高通量技术实现从[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]到大规模蛋白质生产的快速转变等。[/font][/font][font=Calibri] [/font][font=宋体]参考文献：[/font][font=Calibri]Jia B, Jeon CO. High-throughput recombinant protein expression in Escherichia coli: current status and future perspectives. Open Biol. 2016 6(8):160196. doi:10.1098/rsob.160196[/font]

显微镜下西达本胺抑制SCLC H446 细胞克隆 - 2

显微镜下西达本胺抑制SCLC H526 细胞克隆3)

显微镜下西达本胺抑制SCLC H69 细胞克隆

[font=宋体][b]单克隆抗体技术的基本原理[/b][/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体（[/font][font=Calibri]monoclonal antibody, mAb[/font][font=宋体]）是由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体在生物医学研究、疾病诊断和某些疾病治疗（如传染病和癌症）中是十分重要的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当前常见的[b][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology]单克隆抗体制备技术[/url][/b]主要有杂交瘤、噬菌体抗体库和单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术。其中，杂交瘤技术是将免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选具有特异性抗体分泌功能的杂交瘤细胞，进而生产纯化获得单克隆抗体。噬菌体抗体库技术是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术是根据每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞只含有一对功能性的重链和轻链，每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞只产生一种特异性抗体的特性，可以直接从单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增抗体基因获得单克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州拥有四大单克隆抗体开发平台，为客户提供多样化的抗体制备服务套餐，覆盖从抗原设计与制备、动物免疫到获得纯化抗体的完整流程，满足您的研究需求。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]一、杂交瘤技术制备单克隆抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]杂交瘤技术是经典的单克隆抗体制备技术，具体流程为：[/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]抗原制备；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）动物免疫；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）筛选杂交瘤细胞获得分泌目标抗体的阳性单克隆杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）扩大培养阳性单克隆杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]）单克隆抗体大量制备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了杂交瘤开发技术平台，已成功开发了[/font][font=Calibri]19000[/font][font=宋体]株以上杂交瘤阳性克隆，可以根据客户的最终应用需求，制定个性化的抗原设计、动物免疫、克隆筛选及抗体鉴定方案，生产高质量的单克隆抗体，满足客户的不同需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]二、噬菌体抗体库技术制备单克隆抗体[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]噬菌体抗体库技术也是一种制备单克隆抗体的方法。通常首先是从外周血或脾、淋巴结等组织中分离[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，提取[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]并反转录为[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]，以扩增所有的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]片段。然后构建[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]等形式的抗体组合文库，使外源抗体基因表达的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体外壳蛋白[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。 最后，经过“吸附[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]洗涤[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]扩增”过程筛选并富集特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]噬菌体抗体库开发平台包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]三、单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术制备单克隆抗体[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术是独立于杂交瘤技术和噬菌体展示技术的、新一代的单克隆抗体开发技术。其技术流程是从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞，通过单细胞[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术从单个抗体分泌[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。该技术保留了轻重链可变区天然配对，具有基因多样性好、效率高和所需细胞数量少的优点。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和[/font][font=Calibri]Beacon[/font][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞两大技术平台，可提供一站式的单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体制备服务，包括从免疫原制备到单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选、鉴定、及抗体生产等步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]文章来源：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology][b]单克隆抗体技术[/b][/url]的基本原理是利用单一的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆培养出具有高度一致性的抗体组织。通过将能产生特定抗体的单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞与骨髓肿瘤细胞进行融合，生成一种既能产生所需抗体，又能无限增殖的杂交瘤细胞。这种技术所得到的抗体仅来自一种类型的细胞，这与多克隆抗体或由多种类型细胞产生的多株抗体形成了鲜明对比。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当前常见的单克隆抗体制备技术主要有杂交瘤、噬菌体抗体库和单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术。其中，杂交瘤技术是将免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选具有特异性抗体分泌功能的杂交瘤细胞，进而生产纯化获得单克隆抗体。噬菌体抗体库技术是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术是根据每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞只含有一对功能性的重链和轻链，每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞只产生一种特异性抗体的特性，可以直接从单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增抗体基因获得单克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单克隆抗体技术流程[/b][/font][font=宋体]①杂交瘤技术制备单克隆抗体[/font][font=宋体]杂交瘤技术是经典的单克隆抗体制备技术，具体流程为：[/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]抗原制备；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）动物免疫；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）筛选杂交瘤细胞获得分泌目标抗体的阳性单克隆杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）扩大培养阳性单克隆杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]）单克隆抗体大量制备。（点击了解杂交瘤技术的操作步骤）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了杂交瘤开发技术平台，已成功开发了[/font][font=Calibri]19000[/font][font=宋体]株以上杂交瘤阳性克隆，可以根据客户的最终应用需求，制定个性化的抗原设计、动物免疫、克隆筛选及抗体鉴定方案，生产高质量的单克隆抗体，满足客户的不同需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]②噬菌体抗体库技术制备单克隆抗体[/b][/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体抗体库技术[/b][/url]也是一种制备单克隆抗体的方法。通常首先是从外周血或脾、淋巴结等组织中分离[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，提取[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]并反转录为[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]，以扩增所有的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]片段。然后构建[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]等形式的抗体组合文库，使外源抗体基因表达的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体外壳蛋白[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。 最后，经过“吸附[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]洗涤[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]扩增”过程筛选并富集特异性抗体。（点击了解噬菌体抗体库技术的操作步骤）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]噬菌体抗体库开发平台包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=宋体]③单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术制备单克隆抗体[/font][/b][/font][font=宋体][font=宋体]单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术是独立于杂交瘤技术和噬菌体展示技术的、新一代的单克隆抗体开发技术。其技术流程是从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞，通过单细胞[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术从单个抗体分泌[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。该技术保留了轻重链可变区天然配对，具有基因多样性好、效率高和所需细胞数量少的优点。（点击了解单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术的操作步骤）[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和[/font][font=Calibri]Beacon[/font][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞两大技术平台，可提供一站式的单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体制备服务，包括从免疫原制备到单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选、鉴定、及抗体生产等步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]详情可以关注[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology[/font][/font][font=Calibri] [/font]

[size=18px]流式细胞术[/size][size=18px]及平板克隆[/size][size=16px]（[/size][size=16px]1[/size][size=16px]）铺板[/size][size=16px] [/size][size=16px]取[/size][size=16px]对数生长期[/size][size=16px] H446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]细胞，[/size][size=16px]计数，分别接种等量细胞至[/size][size=16px]6[/size][size=16px]孔板，[/size][size=16px]“[/size][size=16px]十字形[/size][size=16px]”[/size][size=16px]晃动，使细胞分布均匀，[/size][size=16px]继续[/size][size=16px]培养。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]2[/size][size=16px]）药物处理[/size][size=16px] [/size][size=16px]待细胞融合率约[/size][size=16px]80%[/size][size=16px]，[/size][size=16px]加入[/size][size=16px]不同浓度（[/size][size=16px]0[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC20[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC50[/size][size=16px]）[/size][size=16px]西达本胺处理[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]。每组均设置[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MSO[/size][size=16px]对照组。继续培养[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后采用[/size][size=16px]Annexin V-FITC /PI[/size][size=16px]双染法对细胞进行染色。[/size][size=16px]（[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）准备：[/size][size=16px]冰[/size][size=16px]PBS[/size][size=16px]、流式细胞术专用试管、凋亡试剂盒（[/size][size=16px]10[/size][font='arial'][size=16px]×[/size][/font][size=16px] [/size][size=16px]Annexin V[/size][size=16px]结合缓冲液用[/size][size=16px]DD[/size][size=16px]水稀释[/size][size=16px]1[/size][font='arial'][size=16px]×[/size][/font][size=16px]）[/size][size=16px]（[/size][size=16px]4[/size][size=16px]）对照组的设置：阴性对照（[/size][size=16px]未染色细胞[/size][size=16px]）、[/size][size=16px]FITC Annexin V[/size][size=16px]（[/size][size=16px]无[/size][size=16px]PI[/size][size=16px]）单[/size][size=16px]染细胞[/size][size=16px]、[/size][size=16px]PI[/size][size=16px]单[/size][size=16px]染[/size][size=16px]（[/size][size=16px]不含[/size][size=16px]FITC Annexin V[/size][size=16px]）细胞。[/size][size=16px]（[/size][size=16px]5[/size][size=16px]）染色：[/size][size=16px]a[/size][size=16px].[/size][size=16px]将细胞[/size][size=16px]用冷[/size][size=16px]PBS[/size][size=16px]洗涤[/size][size=16px]3[/size][size=16px]次，然后[/size][size=16px]重悬细胞[/size][size=16px]在[/size][size=16px]密[/size][size=16px]度为[/size][size=16px]1.5[/size][font='arial'][size=16px]×[/size][/font][size=16px]10[/size][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][size=16px]/[/size][size=16px]mL[/size][size=16px]的[/size][size=16px]1[/size][font='arial'][size=16px]×[/size][/font][size=16px]结合缓冲液中。[/size][size=16px]b[/size][size=16px].[/size][size=16px]将[/size][size=16px]100[/size][size=16px] [/size][size=16px]μ[/size][size=16px]L[/size][size=16px]的溶液[/size][size=16px](1×10[/size][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][size=16px]个细胞[/size][size=16px])[/size][size=16px]转移到[/size][size=16px]5[/size][size=16px] mL[/size][size=16px]培养管中。[/size][size=16px]c[/size][size=16px].[/size][size=16px]加入[/size][size=16px]1[/size][size=16px] [/size][size=16px]μ[/size][size=16px]L [/size][size=16px]FITC Annexin V[/size][size=16px]和[/size][size=16px]1[/size][size=16px] [/size][size=16px]μ[/size][size=16px]L[/size][size=16px] PI[/size][size=16px]。[/size][size=16px]d[/size][size=16px].[/size][size=16px]轻轻[/size][size=16px]拍打[/size][size=16px]细胞，[/size][size=16px]避光、室温[/size][size=16px] [/size][size=16px](25°C)[/size][size=16px] [/size][size=16px]孵育[/size][size=16px]15[/size][size=16px] min[/size][size=16px]。[/size][size=16px]e[/size][size=16px].[/size][size=16px]向每管中加入[/size][size=16px]400[/size][size=16px] [/size][size=16px]μ[/size][size=16px]L[/size][size=16px]的[/size][size=16px]1[/size][font='arial'][size=16px]×[/size][/font][size=16px] [/size][size=16px]Annexin V[/size][size=16px]。[/size][size=16px]1[/size][size=16px] h[/size][size=16px]内进行流式细胞仪分析。[/size][size=18px]克隆形成实验[/size][size=16px]H446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]DMS114[/size][size=16px]采用平板克隆实验，[/size][size=16px]H69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H526[/size][size=16px]采用软琼脂克隆实验。[/size][size=16px]用公式[/size][size=16px]克隆形成率[/size][size=16px]=[/size][size=16px]克隆形成数[/size][size=16px]/[/size][size=16px]接种细胞数[/size][font='arial'][size=16px]×[/size][/font][size=16px]100[/size][size=16px]%[/size][size=16px]计算克隆形成率。[/size][size=16px]（[/size][size=16px]1[/size][size=16px]）铺板[/size][size=16px] [/size][size=16px]取[/size][size=16px]对数生长期[/size][size=16px] H446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]69[/size][size=16px]、[/size][size=16px]H[/size][size=16px]526[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]细胞，[/size][size=16px]计数，分别接种等量细胞至[/size][size=16px]6[/size][size=16px]孔板，[/size][size=16px]“[/size][size=16px]十字形[/size][size=16px]”[/size][size=16px]晃动使细胞分布均匀，[/size][size=16px]继续培养[/size][size=16px]。[/size][size=16px] [/size][size=16px]（[/size][size=16px]2[/size][size=16px]）药物处理[/size][size=16px] [/size][size=16px]待细胞融合率约[/size][size=16px]80[/size][size=16px] [/size][size=16px]%[/size][size=16px]，[/size][size=16px]用[/size][size=16px]不同浓度（[/size][size=16px]0[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC20[/size][size=16px]、[/size][size=16px]IC50[/size][size=16px]）[/size][size=16px]西达本胺处理细胞[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后进行克隆形成实验。每组均设置[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MSO[/size][size=16px]对照组。[/size][size=16px]（[/size][size=16px]3[/size][size=16px]）平板克隆形成实验[/size][size=16px]此方法[/size][size=16px]适用于贴壁生长的细胞[/size][size=16px]。[/size][size=16px]a[/size][size=16px].[/size][size=16px]西达本胺处理[/size][size=16px]4[/size][size=16px]8[/size][size=16px] [/size][size=16px]h[/size][size=16px]后[/size][size=16px]的[/size][size=16px]H[/size][size=16px]446[/size][size=16px]、[/size][size=16px]D[/size][size=16px]MS114[/size][size=16px]细胞，用胰酶消化[/size][size=16px]并计数。[/size][size=16px] [/size][font='times new roman'][size=16px]b.[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]接种细胞：将细胞接种于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔板中，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]446[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]接种密度为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]D[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]MS114[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]接种密度[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]500[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔，注意一定让[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞均匀[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]分布[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] 37℃[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5% CO2 [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]静置培养[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]周（终止培养时间以不于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]周而且克隆之间不发生融合为标准）。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]c[/size][/font][font='times new roman'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]旧培养基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#4472c4] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px]用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PBS [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]清[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]洗[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]次[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]4%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]多聚甲醛[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]固定[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] 20[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，随后[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]去除固定液，加适量结晶紫染色[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]30[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] min[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]蒸馏水[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]洗去[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]结晶紫[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]晾干，用扫描仪扫描成图片。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]d[/size][/font][font='times new roman'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]在低倍镜[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]下[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]计数大于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]50[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]个细胞的克隆数。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]e.[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]计算克隆形成率。[/size][/font][size=16px]（[/size][size=16px]4[/size][size=16px]）[/size][size=16px]软琼脂[/size][size=16px]克隆形成实验[/size][font='times new roman'][size=16px]适用于悬浮生长的细胞以及繁殖较快的贴壁细胞。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]a[/size][/font][font='times new roman'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]配胶液：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]用蒸馏水[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和琼脂糖粉配制浓度为[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.6%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]和[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.3%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]琼脂糖液，高压灭菌[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]置于[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]42[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]℃[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]b[/size][/font][font='times new roman'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]配制含[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]20%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]FBS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]、[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]双抗的[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1640[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]培养基，用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.22[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]m[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的滤器过滤除菌。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]c[/size][/font][font='times new roman'][size=16px].[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]铺下层胶：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]将[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.6%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的琼脂糖胶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1640[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]培养基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等体积[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]混合，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]每孔[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] mL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]加[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]至[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔板中，室温[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]等其[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]凝固。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]d.[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞计数：将细胞用[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]PBS[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]洗一遍，离心，加入新的培养基混匀稀释，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]计数。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]69[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]8[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔铺入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔板，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]H[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]526[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]以[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]/[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔铺入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]6[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]孔板。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]e.[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]铺上层胶：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]将[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]0.3%[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]的琼脂糖胶[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]与[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]×[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]培养基[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]：[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]混合，加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]100[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] [/size][/font][font='times new roman'][size=16px]μ[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]L[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]细胞悬液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]混匀后，每孔加入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]1.5[/size][/font][font='times new roman'][size=16px] mL[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]混合液[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]f.[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]放入[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]37℃[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]，[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]5%CO[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]培养箱培养，约[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]2[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]-3[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]周后[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]终止培养[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]。[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]g.[/size][/font][font='times new roman'][size=16px]计数比较对照组与实验组的细胞数量，计算克隆形成率。[/size][/font]

美国细胞生物学会(ASChttp://i.0dxy.cn/images_new/smiles/smile_blackeye.gif第50届年会上，嘉宾与参会者共同回顾了近50年来科学家们在该领域取得的进展及突破。2010-2019表观遗传抗癌药 垃圾DNA功能确定光学显微镜分辨率达纳米级高通量筛选 墙报的数字显示 完全的siRNA药物递送技术 2020-2029 艾滋病疫苗 多动症的治愈 生物人工器官 破 解 蛋白质折叠的奥秘 首个克隆人出现细胞中纳米晶体的结构 可取代睡眠的药物 2030-2049 再生器官 以藻类作为生物燃料的汽车 治疗普通感冒的抗病毒药物 极端气候条件下，植物生命的延续，世界不再有饥饿人类血液的工厂化生产截肢后的肢体再生术 2050-2060 记忆的机制实验室人造生命的诞生导致老年个体猝死的关键因子预测人类行为的科学模型植入人脑的微型计算机

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][b]单克隆抗体[/b][/url]（[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]）源于单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆，具有高度的均一性和特异性，仅针对某一特定抗原表位。在生物医学研究、疾病诊断以及某些疾病治疗（如传染病和癌症）中单克隆抗体发挥着至关重要的作用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前，制备单克隆抗体的主流技术包括[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]、[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体抗体库技术[/b][/url]和[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]单个[/b][/url][/font][font=Calibri][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]B[/b][/url][/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/single-b-cell-technology][b]细胞技术[/b][/url]。杂交瘤技术通过融合免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞，筛选出能够特异性分泌抗体的杂交瘤细胞，进而生产并纯化得到单克隆抗体。噬菌体抗体库技术则利用基因工程技术，将抗体基因与噬菌体基因相连接，使抗体以融合蛋白的形式呈现在噬菌体表面，通过与靶蛋白的结合，筛选出具有特定亲和力的噬菌体展示抗体。而单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术则基于每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞仅含有一对功能性的重链和轻链，每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞仅产生一种特异性抗体的特性，直接从单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增抗体基因，从而获得单克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]制备单克隆抗体的基本流程：[/font][/b][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]）抗原制备[/font][/font][font=宋体][font=宋体]一般来说，抗原可以是蛋白（天然蛋白或重组蛋白）、多肽、小分子等。依据需求选择和制备合适的免疫原对于抗体开发至关重要。义翘神州在蛋白抗原、多肽抗原制备积累了丰富的经验，可提供专业的抗原制备服务。另外，义翘神州还成功制备出[/font][font=Calibri]6000[/font][font=宋体]多种重组蛋白产品，可作为抗原用于动物免疫和抗体筛选，欢迎订购。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）动物免疫[/font][/font][font=宋体][font=宋体]通常选用[/font][font=Calibri]Balb/c[/font][font=宋体]小鼠作为免疫动物，根据抗原的特性制定免疫方案，包括免疫抗原纯度、抗原量、免疫方法和途径等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]免疫方法一般有常规免疫法、脾内一次性免疫法、短程免疫法和体外免疫法等，免疫途径主要有皮下注射、腹腔注射和静脉注射。脾内一次性免疫法具有用量少、免疫程序短、不加佐剂且所得单克隆抗体的特异性较高等特点。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]常规免疫周期如下：第一次免疫（抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]弗氏完全佐剂，皮下注射）、第二次免疫（抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]弗氏不完全佐剂，皮下注射）、第三次免疫（抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]不加佐剂，皮下或静脉注射）、第四次免疫（抗原[/font][font=Calibri]+[/font][font=宋体]不加佐剂，静脉注射）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）细胞融合[/font][/font][font=宋体]细胞融合前准备：[/font][font=宋体][font=宋体]脾淋巴细胞制备：取已经免疫的[/font][font=Calibri]Balb/c[/font][font=宋体]小鼠的脾脏，制备淋巴细胞，通常每只小鼠可得[/font][font=Calibri]1x10^8-2.5x10^8[/font][font=宋体]个脾细胞；同时摘除眼球采血，并分离血清作为抗体检测时的阳性对照血清。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]骨髓瘤细胞制备：骨髓瘤细胞应该和免疫动物属于同一品系，便于细胞融合以及产生大量[/font][font=Calibri]Ab[/font][font=宋体]。融合前骨髓瘤细胞维持的方式，对成功得到杂交瘤非常重要。目的是使骨髓瘤细胞处于对数生长的时间尽可能长，融合前不能少于[/font][font=Calibri]1[/font][font=宋体]周；冻存的细胞在复苏后要生长[/font][font=Calibri]2[/font][font=宋体]周才能处于适合于融合的状态。[/font][/font][font=宋体]饲养细胞：常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹腔巨噬细胞。饲养细胞促进杂交瘤细胞增殖的机制可能是释放非种属特异性的生长刺激因子，为杂交瘤细胞提供必要的生长条件；也可能是满足新生杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]细胞融合：细胞融合方法有病毒介导的细胞融合、聚乙二醇（[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]）介导细胞融合、电融合。[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]融合相邻骨髓瘤和[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]或抗体分泌细胞的质膜，形成具有两个或更多核的单细胞。异核体保留这些核，直到核膜在有丝分裂前溶解。电融合通过施加脉冲电场连接相邻细胞的膜。电融合比[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]更加有效，结果具有重现性。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）杂交瘤筛选以及单克隆鉴定[/font][/font][font=宋体][font=宋体]骨髓瘤细胞和脾细胞融合之后，由于细胞融合是随机的，因此要利用[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基筛选杂交瘤细胞。骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤－鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]），对氨蝶呤钠敏感，在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]选择培养液中不能生长；免疫脾细胞虽然有[/font][font=Calibri]HGPRT[/font][font=宋体]，但不能在体外无限繁殖。因此只有融合的杂交瘤细胞，才能在[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]选择培养液中无限繁殖。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]得到融合的杂交瘤细胞后，需要进一步筛选特异性抗体。将融合的细胞进行充分有限稀释，使分配到培养板的每一孔中的细胞数在[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]至数个细胞之间（[/font][font=Calibri]30%[/font][font=宋体]的孔为[/font][font=Calibri]0[/font][font=宋体]才能保证每个孔中是单个细胞），培养后取上清液用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]法选出抗体高分泌性的细胞，这一过程常被称作克隆化。将这些阳性细胞再进行克隆化，应用特异性抗原包被的[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株，增殖后进行冻存、体外培养或动物腹水培养。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）单克隆抗体大量制备[/font][/font][font=宋体]利用杂交瘤细胞大规模制备单克隆抗体主要有两种方式：体外培养法和腹水制备法。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]体外培养可以采用单层细胞培养的形式，也可以采用悬浮培养的形式。单层细胞培养法是各个实验室最常用的，是将杂交瘤细胞加入培养瓶中，用完全培养基培养，细胞浓度以[/font][font=Calibri]1.0X10^6~2.0X10^6[/font][font=宋体]个[/font][font=Calibri]/mL[/font][font=宋体]为宜，然后收集培养上清液。如果想在体外高效率地大量制备单克隆抗体，就必须高密度培养杂交瘤细胞，充分利用培养基的立体空间。单位体积内细胞数量越多，产生的单克隆抗体就越多，浓度就越高，产量就越大。义翘神州提供杂交瘤体外培养抗体生产服务，成功率[/font][font=Calibri]99%[/font][font=宋体]，可采用低血清或无血清培养基进行高密度悬浮培养，生产规模从毫克级到克级不等，满足客户的不同需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]腹水制备法是通过将杂交瘤细胞接种于小鼠腹腔内，并产生腹水，可得到大量的腹水单抗。这种方式能够在相对短的时间内获得大量高浓度的抗体，而且成本低、操作相对简单以及不需要复杂的培养条件。然而，这种方法也有一些限制，比如腹水中常混有小鼠的各种杂蛋白（包括[/font][font=Calibri]Ig[/font][font=宋体]），因此在很多情况下要提纯后才能使用，而且还有污染动物病毒的危险。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体技术：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体][font=宋体]义翘神州：蛋白与抗体的专业引领者，欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]

[b]PAS CONCEPT 96 高通量薄片固相微萃取[/b][size=14px]CONCEPT 96 高通量薄片固相微萃取有多种固定相介质可选，如C18、C8、C4、Pan-C18、Si、DEAE、C18-NH2-、C18-Diol-等多达20多种，96片萃取薄片可进行任意组合使用，用于样品筛选。该系统特别适合少量液体样品，组织培养液，体液等中的组分的富集萃取。尤其对于复杂基质的全血样品，可选用生物兼容性的专属萃取薄片，萃取时，血浆蛋白、血细胞不被吸附，而只萃取富集其中的小分子物质；经过活化后，可反复多次使用。[/size]

[font=宋体][font=宋体]单克隆抗体（[/font][font=Calibri]Monoclonal antibodies[/font][font=宋体]，[/font][font=Calibri]mAb[/font][font=宋体]）是由[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞产生，并能特异性靶向抗原的免疫球蛋白。单克隆抗体不仅是生物化学、分子生物学和医学研究中必不可少的工具，其在临床治疗上的应用也以革命性的速度改进了多种疑难杂症的治疗方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1975[/font][font=宋体]年[/font][font=Calibri]Khler[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]Milstein[/font][font=宋体]提出的杂交瘤技术（[/font][font=Calibri]Hybridoma technology[/font][font=宋体]），使得大量获得单克隆抗体成为可能，为基础研究及其临床应用提供了无限潜力。其他科学和技术进步也促进了单克隆抗体的发展、丰富了单克隆抗体的制备方法。 经过近[/font][font=Calibri]50[/font][font=宋体]年的发展，单克隆抗体制备方法不再局限于免疫小鼠的淋巴细胞术，噬菌体展示技术（[/font][font=Calibri]Phage display[/font][font=宋体]）、人源抗体转基因小鼠（[/font][font=Calibri]Human antibody-producing mice[/font][font=宋体]）和单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术（[/font][font=Calibri]Single B cell antibody technology[/font][font=宋体]）也都陆续登上舞台。这些方法虽然有各自的局限性，但都已广泛应用于单克隆抗体筛选。同时，这些技术都不完全是独立存在的，如果能充分利用各技术的优点，采用灵活的方法将各技术优化组合就能更加高效、快速地进行抗体开发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一、杂交瘤技术[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术是一种将[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合生产小鼠单克隆抗体的传统方法，是目前应用最广泛的单克隆生产技术。在这种技术中，首先收集免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，并将其与[/font][font=Calibri]BALB/c[/font][font=宋体]小鼠骨髓瘤细胞融合，从而形成永生化的杂交瘤细胞。然后筛选杂交瘤细胞，鉴定出能生产特异性抗体的单克隆细胞株。十几年后，[/font][font=Calibri]1988[/font][font=宋体]年，兔单克隆抗体制备方法首次被《[/font][font=Calibri]Science[/font][font=宋体]》杂志报道 [/font][font=Calibri][1][/font][font=宋体]。该研究使用小鼠[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔异种杂交瘤方法生产兔单克隆抗体，但鼠[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔异种杂交瘤细胞分泌抗体的效率较低、不稳定，且无法长时间分泌抗体。时间进展到[/font][font=Calibri]90[/font][font=宋体]年代中期，[/font][font=Calibri]1995[/font][font=宋体]年，《[/font][font=Calibri]PNAS[/font][font=宋体]》报道了能稳定生产兔单抗的兔[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]兔杂交瘤细胞。但兔杂交瘤细胞也被证明不如常规鼠杂交瘤细胞稳定，这大大阻碍了其实验室水平的广泛使用。并且，由于融合和转化效率低下，使用兔杂交瘤细胞生产单克隆抗体在应用推广中受到了极大的限制。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]经过多年发展及应用，杂交瘤技术作为一种成熟的产生鼠单克隆抗体的方法已被广泛应用于多种抗体的生产。然而，由于缺乏合适的骨髓瘤融合伴侣，杂交瘤技术一直局限于免疫啮齿动物。[/font][font=Calibri]20[/font][font=宋体]世纪[/font][font=Calibri]80[/font][font=宋体]年代，《[/font][font=Calibri]PNAS[/font][font=宋体]》报道了一种应用人杂交瘤技术生产治疗用抗体的文章 [/font][font=Calibri][3][/font][font=宋体]。利用该方法可以在无额外修饰的情况下产生天然的人源抗体，并用于临床治疗。随着融合伴侣和电融合技术的发展，人杂交瘤细胞融合成功率逐步增加，这将在未来促进治疗性抗体的开发。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二、噬菌体展示技术[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1990[/font][font=宋体]年开始，噬菌体展示技术被视为一种新的产生单克隆抗体的方法。这种方法是从淋巴细胞中收获抗体可变区基因（[/font][font=Calibri]V gene[/font][font=宋体]）全集，克隆[/font][font=Calibri]VHs[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VLs[/font][font=宋体]的组合并与外壳蛋白融合后表达于丝状噬菌体表面，然后筛选表达特异性抗体的噬菌体。与受限于啮齿动物的杂交瘤技术相比，噬菌体展示技术已经成功用于任何已知免疫球蛋白基因的物种中筛选和分离单克隆抗体。[/font][font=Calibri]2000[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Rader[/font][font=宋体]等人首次介绍了应用噬菌体展示技术生产兔单克隆抗体的全过程。在这篇文章中，[/font][font=Calibri]Rader[/font][font=宋体]等人用噬菌体展示技术筛选和人源化的人[/font][font=Calibri]A33[/font][font=宋体]兔抗体，不仅对人[/font][font=Calibri]A33[/font][font=宋体]抗原有高特异性，且保留高亲和力。目前，噬菌体展示技术因为其高效、简便及体外控制在原核或真核系统中原则参数的能力正逐步成为生产治疗用抗体的重要技术平台。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]随着我们对抗体结构、功能和序列多样性研究的不断深入，除了原有的抗体库外，一种新的合成抗体库技术也在不断发展。例如，[/font][font=Calibri]HuCAL&Ylanthia[/font][font=宋体]文库中，为了使筛选出的人源抗体能更好的进行分子识别，将精确设计的序列插入抗原结合位点，并优化设计多种可变重链、轻链框架区域 [/font][font=Calibri][7-10][/font][font=宋体]。随着文库设计和筛选方法的不断进步，合成抗体文库将成为快速生产具有高特异性和高亲和力单克隆抗体不可或缺的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]三、人源抗体转基因小鼠[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1985[/font][font=宋体]年，[/font][font=Calibri]Alt[/font][font=宋体]等人首次提出将人抗体基因引入小鼠种系并使用转基因小鼠中产生人抗体的想法 [/font][font=Calibri][11,12][/font][font=宋体]。随着基因编辑技术的进步，使用人源抗体转基因小鼠生产人源化抗体已不再是天方夜谭。与其他技术相比，使用人源抗体转基因小鼠有许多优势，如无需人源化、具有更多的生物多样性，且由于体内成熟具有天然的亲和力。但是，人免疫球蛋白体量庞大对转基因小鼠抗体生产是一个巨大的挑战。为了克服这些困难，研究人员们通过使用不同策略已成功地获得转基因动物表达的人源抗体库，如全人源抗体小鼠和嵌合人源抗体小鼠等。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]四、单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]虽然杂交瘤技术和噬菌体展示技术已经在单克隆抗体生产中广泛应用，但它们依然存在较难克服的缺点制约着抗体生产过程。近些年，为了克服杂交瘤技术细胞融合效率低，噬菌体展示技术导致重链、轻链的天然同源配对丢失等问题，单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术正被逐步开发和应用。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]简单来说，单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术包含以下几个步骤：[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]a.[/font][font=宋体]从外周血或免疫器官中初步提取淋巴细胞；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]b.[/font][font=宋体]使用磁性活化细胞分选（[/font][font=Calibri]MACS[/font][font=宋体]）或荧光活化细胞分选（[/font][font=Calibri]FACS[/font][font=宋体]）技术鉴定和分离出特定的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]c.[/font][font=宋体]将分离出的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞进行单细胞培养；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]d.[/font][font=宋体]使用逆转录聚合酶链式反应（[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]）和抗体特异性引物鉴定单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分泌抗体的特异性；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]e.[/font][font=宋体]扩增特异抗体基因；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]f.[/font][font=宋体]将抗体基因克隆到表达载体中，并在细菌或细胞系统中表达；[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]g.[/font][font=宋体]纯化表达产生的抗体，并用[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]等方法进行评估。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术现在已广泛用于人和小鼠单克隆抗体生产，如一些治疗性中和单抗，可用于治疗多种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病和传染性疾病亡[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]总结[/font][font=Calibri]4[/font][font=宋体]种方式制备单克隆抗体的优缺点[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]：[/font][font=宋体]优势：技术成熟、研发成本低[/font][font=宋体]劣势：周期长、融合率低、需要进行人源化[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]人源抗体转基因小鼠：[/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①可用杂交瘤技术获得人源抗体[/font][font=宋体]②良好的免疫原性[/font][font=宋体]③亲和力高[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①存在免疫耐受[/font][font=宋体]②依然有鼠抗产生[/font][font=宋体]③难以免疫毒性抗原[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/phage-display-antibody][b]噬菌体展示技术[/b][/url]：[/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①基因来源灵活[/font][font=宋体]②随机库可以避免免疫耐受[/font][font=宋体]③可以灵活，特异得调整设计方案[/font][font=宋体]④可长时间保存[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①重链轻链非天然配对[/font][font=宋体]②展示效率具有偏好性[/font][font=宋体]③需要再次进行功能验证[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术：[/font][/font][font=宋体]优势：[/font][font=宋体]①无需杂交瘤融合[/font][font=宋体]②制备周期短[/font][font=宋体]③重链、轻链天然配对[/font][font=宋体]④无需合成基因[/font][font=宋体]⑤可直接获得各物种抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]劣势：[/font][font=宋体]①需要新鲜样本[/font][font=宋体]②抗原特异性细胞比例低[/font][font=宋体]③操作环境要求严格[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services][b]单克隆抗体制备服务[/b][/url]，同时拥有流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选平台、噬菌体抗体库技术平台、杂交瘤开发平台…… 可供大家选择，有需求或者了解具体详情可以查看[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=Calibri] [/font]

近年来，单细胞测序技术成为生命健康领域追逐的热点，可应用于肿瘤异质性研究、干细胞分化以及组织器官发育研究、神经系统发育研究、免疫方向研究、疾病分型和药物机制以及用药指导等方向。随着研究的深入和技术的不断发展进步，市场对单细胞产品提出了新的要求：从单组学到多组学、从基本到高通量、从哺乳动物到微生物。墨卓生物即将推出MobiNova-100高通量单细胞测序建库系统助力科学研究，MobiNova-100是墨卓团队过去数年磨一剑的结晶，是一个真正稳定、精准、可信赖的技术平台，在关键的性能指标上接近甚至部分超越了国际一流水平。一次可探索最多数十万单细胞，实现极高的细胞捕获率，精准捕获细胞信息；单次运行仅需十分钟，最大程度保证数据质量，给用户提供可信赖的解决方案。 “新星”升越 ，创新不止，创新是墨卓生物不断向前发展的内在引擎，新星NOVA—MobiNova-100高通量单细胞建库系统全球首发仪式将正式进行线上发布！ [b] [color=#ff0000]2022年4月15日14：00[/color][/b]诚邀各位莅临MobiNova的世界，一同解锁细胞的无限可能！ [img=,442,348]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/04/202204141904574225_9730_2507958_3.png!w442x348.jpg[/img][img]file:///C:/Users/wangqy/AppData/Local/Temp/%E4%BC%81%E4%B8%9A%E5%BE%AE%E4%BF%A1%E6%88%AA%E5%9B%BE_16499342329421.png[/img] [b][size=18px] [img]https://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em20.gif[/img] 直达会场：[/size][/b][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/mobinova20220415/][b][size=18px]https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/mobinova20220415/[/size][/b][/url][img=,480,1600]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/04/202204141901011128_219_2507958_3.jpg!w480x1600.jpg[/img]

[font=&] 近年来，单细胞测序技术成为生命健康领域追逐的热点，可应用于肿瘤异质性研究、干细胞分化以及组织器官发育研究、神经系统发育研究、免疫方向研究、疾病分型和药物机制以及用药指导等方向。随着研究的深入和技术的不断发展进步，市场对单细胞产品提出了新的要求：从单组学到多组学、从基本到高通量、从哺乳动物到微生物。墨卓生物即将推出MobiNova-100高通量单细胞测序建库系统助力科学研究，MobiNova-100是墨卓团队过去数年磨一剑的结晶，是一个真正稳定、精准、可信赖的技术平台，在关键的性能指标上接近甚至部分超越了国际一流水平。一次可探索最多数十万单细胞，实现极高的细胞捕获率，精准捕获细胞信息；单次运行仅需十分钟，最大程度保证数据质量，给用户提供可信赖的解决方案。[/font][font=&] “新星”升越 ，创新不止，创新是墨卓生物不断向前发展的内在引擎，新星NOVA—MobiNova-100高通量单细胞建库系统全球首发仪式将正式进行线上发布！[/font][font=&] [/font][b][color=#ff0000]2022年4月15日14：00[/color][/b][font=&]诚邀各位莅临MobiNova的世界，一同解锁细胞的无限可能！[/font][font=&] [/font][img=,442,348]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/04/202204141904574225_9730_2507958_3.png!w442x348.jpg[/img][img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403181711578855_8023_2507958_3.png[/img][b][size=18px][img]https://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em20.gif[/img] 直达会场：[/size][/b][url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/mobinova20220415/][b][size=18px]https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/mobinova20220415/[/size][/b][/url][img=,480,1600]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/04/202204141901011128_219_2507958_3.jpg!w480x1600.jpg[/img]

[font=宋体][font=宋体][b]单克隆抗体技术的基本原理[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体（[/font][font=Calibri]monoclonal antibody, mAb[/font][font=宋体]）是由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。单克隆抗体在生物医学研究、疾病诊断和某些疾病治疗（如传染病和癌症）中是十分重要的工具。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]当前常见的单克隆抗体制备技术主要有杂交瘤、噬菌体抗体库和单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术。其中，杂交瘤技术是将免疫小鼠的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞与骨髓瘤细胞融合，筛选具有特异性抗体分泌功能的杂交瘤细胞，进而生产纯化获得单克隆抗体。噬菌体抗体库技术是利用基因工程技术将抗体的基因连接到噬菌体中，并以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面，通过与靶蛋白的结合，完成噬菌体展示抗体的筛选。单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞技术是根据每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞只含有一对功能性的重链和轻链，每个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞只产生一种特异性抗体的特性，可以直接从单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增抗体基因获得单克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][b]单克隆抗体技术流程[/b][/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]一、杂交瘤技术制备单克隆抗体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]是经典的单克隆抗体制备技术，具体流程为：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]1) [/font][font=宋体]抗原制备；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]）动物免疫；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]）免疫动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]）筛选杂交瘤细胞获得分泌目标抗体的阳性单克隆杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]5[/font][font=宋体]）扩大培养阳性单克隆杂交瘤细胞；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]6[/font][font=宋体]）单克隆抗体大量制备。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州建立了杂交瘤开发技术平台，已成功开发了[/font][font=Calibri]19000[/font][font=宋体]株以上杂交瘤阳性克隆，可以根据客户的最终应用需求，制定个性化的抗原设计、动物免疫、克隆筛选及抗体鉴定方案，生产高质量的单克隆抗体，满足客户的不同需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]二、噬菌体抗体库技术制备单克隆抗体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]噬菌体抗体库技术也是一种制备单克隆抗体的方法。通常首先是从外周血或脾、淋巴结等组织中分离[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞，提取[/font][font=Calibri]mRNA[/font][font=宋体]并反转录为[/font][font=Calibri]cDNA[/font][font=宋体]，以扩增所有的[/font][font=Calibri]VH[/font][font=宋体]和[/font][font=Calibri]VL[/font][font=宋体]片段。然后构建[/font][font=Calibri]Fab[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]等形式的抗体组合文库，使外源抗体基因表达的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体外壳蛋白[/font][font=Calibri]pIII[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]pVIII[/font][font=宋体]的[/font][font=Calibri]N[/font][font=宋体]端。 最后，经过“吸附[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]洗涤[/font][font=Calibri]-[/font][font=宋体]扩增”过程筛选并富集特异性抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]噬菌体抗体库开发平台包括噬菌体展示抗体库构建、淘洗、单克隆鉴定和阳性克隆重组表达等步骤，义翘神州能为客户提供个性化的抗体定制服务，包括鼠源单克隆抗体、兔源单克隆抗体、鸡源单克隆抗体和全人源抗体等多个种属的抗体发现服务。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]三、单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术制备单克隆抗体[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体技术是独立于杂交瘤技术和噬菌体展示技术的、新一代的单克隆抗体开发技术。其技术流程是从免疫动物组织或外周血中分离抗原特异性[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞，通过单细胞[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]技术从单个抗体分泌[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞中扩增[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]重链和轻链可变区基因，然后在哺乳动物细胞内表达获得具有生物活性的单克隆抗体。该技术保留了轻重链可变区天然配对，具有基因多样性好、效率高和所需细胞数量少的优点。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州拥有流式单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞和[/font][b][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/beacon-b-cell-screening][font=Calibri]Beacon[/font][font=宋体]单[/font][font=Calibri]B[/font][/url][/b][font=宋体][b][url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/beacon-b-cell-screening]细胞[/url][/b]两大技术平台，可提供一站式的单[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞抗体制备服务，包括从免疫原制备到单个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞分选、鉴定、及抗体生产等步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]更多单克隆抗体技术详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-technology[/font][/font]

[font=宋体]本文主要介绍了单克隆抗体与多克隆抗体的定义，并介绍单抗、多抗在制备流程、特点及应用上的区别。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单抗与多抗的定义：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]抗原上可以引起机体产生抗体的分子结构叫做抗原决定簇，也称为抗原表位。一个抗原可以有许多不同的抗原决定簇，因此，机体也可以产生多种不同的抗体。由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体（单抗）。而由多个[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体（多抗）。从某种角度而言，多抗是多种单抗的混合物。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单抗和多抗制备上的区别：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]经过特定抗原处理过的[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞与骨髓瘤细胞通过细胞融合的方法得到杂交瘤细胞，经[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]培养基筛选、[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测效价后就得到阳性克隆株，最后进行细胞培养或将细胞注入到动物（一般为[/font][font=Calibri]balb/c[/font][font=宋体]小鼠）腹腔中用腹水培养，收集上清[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]腹水纯化后就能得到单克隆抗体。而制备多克隆抗体就没有单克隆抗体繁琐，只需将抗原（纯度越高越好）直接注入到动物体内进行免疫，经过[/font][font=Calibri]3~4[/font][font=宋体]次免疫，[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]测其效价合格后，收集血液离心得到上清，纯化后即能得到多克隆抗体。因此多抗制备周期比单抗的短，多抗首次制备价格也比单抗要低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]单抗多抗应用上的区别：[/b][/font][font=宋体][font=宋体]单抗和多抗都有各自鲜明的特点与优势。单克隆抗体的特异性高，一旦制备成功就可以永续的生产完全一致的单克隆抗体，因此可以对其特异性进行全面、系统地验证。但如果所识别的抗原表位被破坏，实验的结果将会受到很大的影响，这也是单抗的缺点之一。而多克隆抗体的特异性较差，即使是使用相同的抗原制备多抗，不同批次间也会存在差异，因而在特异性、一致性方面有很大的局限。所以在用多抗做免疫检测时，更容易造成背景，例如在[/font][font=Calibri]WB[/font][font=宋体]中有杂带，在[/font][font=Calibri]IHC[/font][font=宋体]中背景较深等等。虽然还存在着交叉反应[/font][font=Calibri]*[/font][font=宋体]的问题，但由于多抗识别多个抗原表位，即使是有少数几个抗原表位被破坏或者抗原构象改变，实验的结果也不会受到影响。在相同条件下，使用多抗可以提高检测的灵敏度，对于丰度偏低的蛋白也更容易检出。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]如果对抗体的特异性要求高，用量较大或需要长期使用一致的抗体，制备的抗体应用要求多（[/font][font=Calibri]WB/IP/IF/ICC[/font][font=宋体]等[/font][font=Calibri])[/font][font=宋体]，可以选择制备单克隆抗体。若对抗体的特异性要求不高，需要做沉淀和凝集反应的检测性实验或者只需做[/font][font=Calibri]ELISA[/font][font=宋体]检测，可以选择制备多克隆抗体。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州是一家抗体试剂和定制抗体的领先供应商，目前已成功交付了数以万计的抗体项目，客户涵盖科研院校、生物制药公司、诊断公司和其他生物技术公司等。目前提供单克隆抗体定制服务和多克隆抗体定制服务。想了解更多关于单抗和多抗区别详情可以查看：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体][font=宋体]多克隆抗体定制服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体制备：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=Calibri] [/font]

[font=宋体][font=宋体]在生物医药领域，抗体的质量和生产效率对于科研和临床应用至关重要。义翘神州作为一家领先的生物技术公司，其高通量重组抗体生产技术备受瞩目。通过该技术，抗体生产周期最快仅需[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天，极大地提升了抗体研发的效率和速度。下面将详细介绍义翘神州的高通量抗体表达服务内容，并解答常见问题（[/font][font=Calibri]FAQ[/font][font=宋体]）。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、高通量抗体表达服务内容介绍：[/font][/font][font=宋体]①基因合成及密码子优化（可选）[/font][font=宋体]客户可提供抗体序列或质粒作为起始材料。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]②载体构建[/font][font=宋体]克隆至表达载体[/font][font=宋体]质粒测序[/font][font=宋体]质粒制备[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]③高通量表达及纯化[/font][font=宋体][font=宋体]瞬时转染[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞[/font][/font][font=宋体]纯化抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]④[/font][font=Calibri]QC[/font][font=宋体]分析[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]SDS-PAGE[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]UV[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]SEC-HPLC ([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体]内毒素分析（可选）[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]⑤交付内容[/font][font=宋体]纯化抗体[/font][font=宋体][font=宋体]质量检验报告[/font] [font=Calibri](CoA)[/font][/font][font=宋体][font=宋体]克隆于商业表达载体质粒[/font][font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体][font=宋体]细胞培养液上清[/font] [font=Calibri]([/font][font=宋体]可选[/font][font=Calibri])[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、为什么选择义翘神州的高通量重组抗体表达服务？[/font][/font][font=宋体]义翘神州提供的高通量抗体表达服务具有以下优势：[/font][font=宋体]? 我们拥有北京和泰州双生产中心，近地化服务，更便捷，满足您生产的要求。[/font][font=宋体][font=宋体]? 速度快，从基因序列到纯化抗体最快[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天完成。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]? 高通量适用范围广，可适用于常规[/font][font=Calibri]IgG[/font][font=宋体]型抗体的表达以及单链抗体的表达，[/font][font=Calibri]1000[/font][font=宋体]抗体[/font][font=Calibri]/[/font][font=宋体]项目生产能力。[/font][/font][font=宋体]? 自动化水平高，配备自动化构建平台，更准确高效。[/font][font=宋体]? 义翘神州成熟且先进的哺乳动物细胞表达平台，适用于各种类型抗体的表达。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]3[/font][font=宋体]、高通量抗体生产一般使用什么培养体系和纯化方法？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州的高通量抗体的培养主要以摇瓶为主，利用[/font][font=Calibri]HEK293[/font][font=宋体]或[/font][font=Calibri]CHO[/font][font=宋体]细胞培养实现抗体的高通量表达。原因有以下两点：该培养体系对比孔板，体积更大，获得抗体的收率较高；摇瓶培养体系获得的产品信息对后期放大更有相关性。通常使用[/font][font=Calibri]protein A/G[/font][font=宋体]纯化方式获取纯度相对较高的抗体，同时也会根据不同复杂抗体的类型应用离子交换、分子筛等方法进行纯化。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]4[/font][font=宋体]、义翘神州的高通量抗体表达服务可以生产哪些抗体类型，具体流程是什么样的？[/font][/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州可生产全长、[/font][font=Calibri]scFv[/font][font=宋体]、[/font][font=Calibri]VHH[/font][font=宋体]、嵌合抗体多种形式，我们可以根据客户的具体要求最快[/font][font=Calibri]10[/font][font=宋体]天时间实现定制化从基因到抗体的高通量生产，满足您的生产需求。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘的重组抗体[url=https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service][b]高通量表达纯化服务[/b][/url]结合了专业的高通量基因合成、载体构建和优化的瞬时抗体表达技术，充分利用义翘优势[url=https://cn.sinobiological.com/services/platform/mammalian-cell-expression][b]哺乳动物细胞表达平台[/b][/url]，能够提供在[/font][font=Calibri]HEK293/CHO[/font][font=宋体]细胞中快速生产重组抗体服务。详情关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/high-throughput-antibody-production-service[/font][/font]

[font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology][b]杂交瘤技术[/b][/url]是一种将[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合生产单克隆抗体的传统方法。该技术通过将动物脾细胞与骨髓瘤细胞融合，产生永生化杂交瘤细胞系，然后筛选其上清液中的抗原特异性克隆，并进一步循环亚克隆以产生严格的单克隆抗体。[/font][/font][font=宋体][font=宋体][b]利用杂交瘤技术制备单克隆抗体通常操作流程为[/b]：抗原制备、抗原免疫动物、杂交瘤细胞制备、融合细胞的筛选、培养杂交瘤细胞制备抗体。（详细实验流程：杂交瘤单克隆抗体制备[/font][font=Calibri]SOP[/font][font=宋体]）在单克隆抗体制备过程中，常常会遇到细胞污染，细胞融合后不生长、亚克隆后的细胞株不分泌抗体以及细胞难以克隆等问题，本文将详细分析以上常见问题的产生原因以及解决该问题的方法。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一、微生物污染[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]①细菌、真菌污染主要是由于实验人员操作不当或者消毒不到位引起的。人身上可能携带各种孢子，如果操作不当，或者是未能及时到位的消杀，就有可能会引入污染。除此之外，还须注意平时使用的一些消毒剂，比如[/font][font=Calibri]84[/font][font=宋体]消毒液或者[/font][font=Calibri]75%[/font][font=宋体]酒精，要确认它的纯度以及质量。如果是因为这些问题导致的消毒不到位，是非常不容易发现的。[/font][/font][font=宋体][font=宋体]②支原体污染则可能由血清制品、关键试剂材料或实验人员带入。正常的[/font][font=Calibri]SP2/0[/font][font=宋体]细胞圆润透亮，当被支原体污染后，短期内细胞没有明显的变化，当污染严重后，细胞生长会变得极为缓慢，生长周期变长，细胞形态多样。可通过加入商品化的清除支原体试剂，或者通过将污染的杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔，待产生实体瘤后或产生腹水后，无菌分离重新获得杂交瘤细胞。[/font][/font][font=宋体]③原生生物污染主要是大家比较头疼的黑胶虫，污染后会陆续出现多少不等的小黑点。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]二、融合后细胞不生长[/font][font=宋体][font=宋体]①融合后细胞不生长可能是因为融合试剂有毒性，部分毒性试剂作用时间过长引起的。如[/font][font=Calibri]PEG[/font][font=宋体]在[/font][font=Calibri]10%~60%[/font][font=宋体]都可以进行融合，但浓度越高毒性越大。[/font][/font][font=宋体]②也有可能是使用血清质量比较差，推荐使用胎牛血清。[/font][font=宋体][font=宋体]③还有可能是因为添加的[/font][font=Calibri]HAT[/font][font=宋体]试剂中氨基喋呤（[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]）含量过高或[/font][font=Calibri]HT[/font][font=宋体]（次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷）含量过低。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]三、杂交瘤细胞不分泌抗体或者停止分泌抗体[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1[/font][font=宋体]、杂交瘤细胞不分泌抗体，可能的原因有以下几种：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]a.[/font][font=宋体]抗原免疫原性弱，免疫效果不好，可以通过多方案检测血清效价进行进一步评估；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]b.[/font][font=宋体]操作过程中脾细胞损伤较多，抗原特异性淋巴母细胞大量死亡；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2[/font][font=宋体]、杂交瘤细胞前期有抗体分泌，后期在克隆化过程中抗体分泌量减少或停止分泌抗体，可能的原因有以下几种：[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]a.HAT[/font][font=宋体]试剂中氨基喋呤（[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]）失效，骨髓瘤细胞增殖抑制杂交瘤细胞的生长；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]b.[/font][font=宋体]未及时克隆，不分泌抗体的杂交瘤大量生长挤占生存空间；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]c.[/font][font=宋体]骨髓瘤细胞返祖化，抵抗氨基喋呤（[/font][font=Calibri]A[/font][font=宋体]）的选择；[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]d.[/font][font=宋体]梁色体丢失（突变）[/font][font=Calibri] [/font][/font][font=宋体][font=Calibri]e.[/font][font=宋体]支原体污染。[/font][/font][font=宋体]解决方法有三种：第一，及时进行细胞建库；第二，高频次检查细胞状态和是否污染；第三，定期进行抗原筛选。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]四、杂交瘤细胞难以克隆化[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]一旦确认有分泌抗体的杂交瘤细胞，就应尽快进行克隆化。克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体，反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞若难以克隆化，可以尝试以下解决方法：[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]①使用已有杂交瘤细胞株对血清进行筛选，确定最佳批次的血清和使用浓度；[/font][font=宋体][font=宋体]②融合后第一次克隆（一亚）仍需采用含[/font][font=Calibri]HT[/font][font=宋体]的条件培养；[/font][/font][font=宋体][font=宋体]③在培养体系中加入白细胞介素[/font][font=Calibri]6[/font][font=宋体]（[/font][font=Calibri]IL6[/font][font=宋体]），一般商品化的杂交瘤因子都含有[/font][font=Calibri]IL6[/font][font=宋体]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]义翘神州提供杂交瘤测序服务和杂交瘤细胞培养及抗体生产服务，具体关于杂交瘤相关问题详情可以参看[/font][font=宋体][font=宋体]杂交瘤技术：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/hybridoma-technology[/font][/font][font=宋体][font=宋体]杂交瘤细胞培养及抗体生产服务：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-culture-antibody-production-service[/font][/font][font=宋体][font=宋体][url=https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service][b]杂交瘤测序服务[/b][/url]：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/hybridoma-sequencing-service[/font][/font]

鉴于本人还是零蛋一个,特发此贴,虽然得分不是最主要目的,但零分确实很让人难受啊!单克隆抗体的研制一、单克隆抗体的概念抗体是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。因而，常规血清抗体又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以实现。1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（monoclonal antibody），简称单抗。与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。单抗技术的问世，不仅带来了免疫学领域里的一次革命，而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用，促进了众多学科的发展。Kohler和Milstein两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。二、杂交瘤技术（一） 杂交瘤技术的诞生淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面发展的必然结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论基础，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。1975年8月7日，Kohler和Milstein在英国《自然》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续培养”（Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity）的著名论文。他们大胆地把以前不同骨髓瘤细胞之间的融合延伸为将丧失合成次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（hypoxanthine guanosine phosphoribosyl transferase，HGPRT）的骨髓瘤细胞与经绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合。融合由仙台病毒介导，杂交细胞通过在含有次黄嘌呤（hypoxanthine，H）、氨基喋呤（aminopterin，A）和胸腺嘧啶核苷（thymidine，T）的培养基（HAT）中生长进行选择。在融合后的细胞群体里，尽管未融合的正常脾细胞和相互融合的脾细胞是HGPRT+，但不能连续培养，只能在培养基中存活几天，而未融合的HGPRT-骨髓瘤细胞和相互融合的HGPRT-骨髓瘤细胞不能在HAT培养基中存活，只有骨髓瘤细胞与脾细胞形成的杂交瘤细胞因得到分别来自亲本脾细胞的HGPRT和亲本骨髓瘤细胞的连续继代特性，而在HAT培养基中存活下来。实验的结果完全像起始设计的那样，最终得到了很多分泌抗绵羊红细胞抗体的克隆化杂交瘤细胞系。用这些细胞系注射小鼠后能形成肿瘤，即所谓杂交瘤。生长杂交瘤的小鼠血清和腹水中含有大量同质的抗体，即单克隆抗体。这一技术建立后不久，在融合剂和所用的骨髓瘤细胞系等方面即得到改进。最早仙台病毒被用做融合剂，后来发现聚乙二醇（PEG）的融合效果更好，且避免了病毒的污染问题，从而得到广泛的应用。随后建立的骨髓瘤细胞系如SP2/0-Ag14，X63-Ag8.653和NSO/1都是既不合成轻链又不合成重链的变种，所以由它们产生的杂交瘤细胞系，只分泌一种针对预定的抗原的抗体分子，克服了骨髓瘤细胞MOPC-21等的不足。再后来又建立了大鼠、人和鸡等用于细胞融合的骨髓瘤细胞系，但其基本原理和方法是一样的。（二） 基本程序和方法杂交瘤技术在具体操作上，各实验室使用的程序不尽一致。本节中介绍的方法是作者所在实验室采用的、实践证明成熟的程序，该程序适合国内大多数实验室。在开展杂交瘤技术制备单抗之前，培养骨髓瘤和杂交瘤细胞必须具备下列主要仪器设备：超净工作台、CO2恒温培养箱、超低温冰箱（-70℃）、倒置显微镜、精密天平或电子天平、液氮罐、离心机（水平转子，4000r/min）、37℃水浴箱、纯水装置、滤器、真空泵等。其需要的主要器械包括：100ml、50ml、25ml细胞培养瓶，10ml、1ml刻度吸管，试管，滴管（弯头、直头），平皿，烧杯，500ml、250ml、100ml盐水瓶，青霉素小瓶，10ml、5ml、1ml注射器等，96孔、24孔细胞培养板，融合管（50ml圆底带盖玻璃或塑料离心管），眼科剪刀，眼科镊，血细胞计数板，可调微量加样器（~50ul，~200ul，~1000ul），弯头针头，200目筛网，小鼠固定装置等。此外，杂交瘤细胞的筛选与检测的仪器设备，依据检测单抗的方法不同而各异，请参阅本节有关部分。淋巴细胞杂交瘤技术的主要步骤包括：动物免疫、细胞融合、杂交瘤细胞的筛选与单抗检测、杂交瘤细胞的克隆化、冻存、单抗的鉴定等，图6-1概括了淋巴细胞杂交瘤技术研制单抗的主要过程。1、动物免疫(1) 抗原制备 制备单克隆抗体的免疫抗原，从纯度上说虽不要求很高，但高纯度的抗原使得到所需单抗的机会增加，同时可以减轻筛选的工作量。因此，免疫抗原是越纯越好，应根据所研究的抗原和实验室的条件来决定。一般来说，抗原的来源有限，或性质不稳定，提纯时易变性，或其免疫原性很强，或所需单抗是用于抗原不同组分的纯化或分析等，免疫用的抗原只需初步提纯甚至不提纯，但抗原中混杂物很多，特别是如果这些混杂物的免疫原性较强时，则必须对抗原进行纯化。检测用抗原可以是与免疫抗原纯度相同，也可是不同的纯度，这主要决定于所用筛检方法的种类及其特异性和敏感性。(2) 免疫动物的选择 根据所用的骨髓瘤细胞可选用小鼠和大鼠作为免疫动物。因为，所有的供杂交瘤技术用的小鼠骨髓瘤细胞系均来源于BALB/c小鼠，所有的大鼠骨髓瘤细胞都来源于LOU/c大鼠，所以一般的杂交瘤生产都是用这两种纯系动物作为免疫动物。但是，有时为了特殊目的而需进行种间杂交，则可免疫其他动物。种间杂交瘤一般分泌抗体的能力不稳定，因为染色体容易丢失。就小鼠而言，初次免疫时以8-12周龄为宜，雌性鼠较便于操作。(3) 免疫程序的确定 免疫是单抗制备过程中的重要环节之一，其目的在于使B淋巴细胞在特异抗原刺激下分化、增殖，以利于细胞融合形成杂交细胞，并增加获得分泌特异性抗体的杂交瘤的机会。因此在设计免疫程序时，应考虑到抗原的性质和纯度、抗原量、免疫途径、免疫次数与间隔时间、佐剂的应用及动物对该抗原的应答能力等。没有一个免疫程序能适用于各种抗原。现用的免疫程序中多数是参照制备常规多克隆抗体的方法。表6-1列举了目前常用的免疫程序。免疫途径常用体内免疫法包括皮下注射、腹腔或静脉注射，也采用足垫、皮内、滴鼻或点眼。最后一次加强免疫多采用腹腔或静脉注射，目前尤其推崇后者，因为可使抗原对脾细胞作用更迅速而充分。在最后一次加强免疫后第3天取脾融合为好，许多实验室的结果表明，初次免疫和再次免疫应答反应中，取脾细胞与骨髓瘤细胞融合，特异性杂交瘤的形成高峰分别为第4天和第22天，在初次免疫应答时获得的杂交瘤主要分泌IgM抗体，再次免疫应答时获得的杂交瘤主要分泌IgG抗体。笔者体会阳性杂交瘤出现的高峰与小鼠血清抗体的滴度并无明显的平行关系，且多在血清抗体高峰之前。因此，为达到最高的杂交瘤形成率需要有尽可能多的浆母细胞，这在最后一次加强免疫后第3天取脾进行融合较适宜。已有人报道采用脾内免疫，可提高小鼠对抗原的免疫反应性，且节省时间，一般免疫3天后即可融合。

[font=宋体][font=宋体]抗体具备与特定抗原结合的独特能力，在生物学、医学及生物医学研究中发挥着举足轻重的作用。[url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][b]单克隆抗体（[/b][/url][/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/monoclonal-antibody-production][b][font=Calibri]MAbs[/font][font=宋体]）[/font][/b][/url][/font][font=宋体]和[/font][font=宋体][font=宋体]多克隆抗体（[/font][font=Calibri]PAbs[/font][font=宋体]）已成为免疫学研究、诊断及疫苗质量控制中不可或缺的工具。本文将[/font][/font][font=宋体]简单介绍[/font][font=宋体]这两种抗体生产[/font][font=宋体]的[/font][font=宋体]关键步骤及其优化策略。[/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]一、多克隆抗体的生产与应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]多克隆抗体的制备涉及抗原制备、动物选择、佐剂配置[/font][font=宋体]和[/font][font=宋体]注射方案等多个环节。在抗原制备时，应确保其质量与数量，以保证免疫反应的特异性。动物种类的选择则需考虑所需抗体量[/font][font=宋体]和[/font][font=宋体]血液样本获取的难易程度等因素。注射方案应根据动物种类和佐剂特性制定，并在注射后密切监测动物的反应，确保免疫过程的顺利进行。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]多克隆抗体因其制备周期短、成本相对较低，广泛应用于[/font][font=宋体]基础[/font][font=宋体][font=宋体]研究。然而，由于其来源于多种[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆，特异性相对较低，因此在某些需要高度特异性的应用场景中，其应用受到一定限制。[/font][/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]二、单克隆抗体的生产与应用[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]单克隆抗体则是由单一[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞克隆产生的，具有高度特异性。[/font][/font][font=宋体]通过杂交瘤技术制备小鼠单克隆抗体的[/font][font=宋体][font=宋体]生产过程涉及[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的生成、与骨髓瘤细胞的融合、杂交瘤细胞的克隆与选择以及抗体的扩大生产等步骤。其中，[/font][font=Calibri]B[/font][font=宋体]细胞的生成和通过腹水诱导法生产抗体是基于实验动物的关键[/font][/font][font=宋体]步骤[/font][font=宋体]。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]单克隆抗体因其高度的特异性和可重复性，广泛应用[/font][font=宋体]于[/font][font=宋体]基础研究、诊断[/font][font=宋体]检测[/font][font=宋体]和医疗领域。例如，在疾病诊断中，单克隆抗体可以精确地识别并定位病原体，为疾病的早期发现和治疗提供有力支持。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]为优化免疫反应，建议在抗原制备时[/font][font=宋体]确保[/font][font=宋体]其质量与纯度，注射前进行充分的质量控制。在选择动物种类时，应综合考虑抗体需求量、血液样本获取的难易程度以及抗原与动物间的系统发育关系。此外，佐剂的选择和制备也至关重要，需确保混合物的稳定性和质量，谨慎选择注射途径和注射量。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][font=宋体]多克隆抗体与单克隆抗体各具特色，分别适用于不同的研究场景。通过优化生产过程中的各个环节，我们可以提高抗体的质量和产量，为生物医学研究和临床应用提供更加精准、有效的工具。未来，随着技术的不断进步，这两种抗体将在更多领域展现其独特的价值。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]本篇文章由义翘神州进行整理，同时提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/monoclonal-antibody-production-services]单克隆定制服务[/url]和[url=https://cn.sinobiological.com/services/polyclonal-antibody-production-services]多克隆抗体制备服务[/url]，详情可点击了解！[/b]参考文献：[/font][font='Segoe UI'][color=#212121]Leenaars M, Hendriksen CF. Critical steps in the production of polyclonal and monoclonal antibodies: evaluation and recommendations.[/color][/font][font='Segoe UI'][color=#212121] [/color][/font][i][font='Segoe UI'][color=#212121]ILAR J[/color][/font][/i][font='Segoe UI'][color=#212121]. 2005 46(3):269-279. doi:10.1093/ilar.46.3.269[/color][/font][font=Calibri] [/font]

自从1996年世界上第一只体细胞克隆羊“多利”在英国诞生以来，克隆技术似乎变得越来越普及，各国很多科学家都掌握了这种技术，更有许多科学家雄心勃勃，朝着克隆动物产品产业化的目标进发。　　在中国，已经有数家科研机构有能力克隆动物，并让不少的克隆动物存活下来。中国科学院动物所首席研究员陈大元、2007年12月刚当选为中国工程院院士的中国农业大学李宁教授等，都已经成功培养出克隆牛，中国工程院院士、上海医学遗传研究所所长曾溢滔也在克隆牛和羊的工作上稳步前进。　　药物也好，牛排也好，克隆技术最终的目标，都是制造产品送进人的身体里，所以，“克隆离餐桌有多远”这个问题，永远吸引人们的关心。美国FDA认可了部分克隆动物食品的安全性以后，中国大众也开始讨论克隆食品能不能吃的问题。　　关于克隆食品的安全性，中国农业大学李宁教授介绍说，目前国内还没有相关的标准出台，有关部门领导碰面时会提及标准问题，但距离正式的探讨还有距离。“中国与美国的情况不同，美国的产业部门会向FDA提出制定克隆动物食品标准的要求。”李宁教授说，产业部门的呼吁已有五六年之久，FDA关于安全性的标准和认可姗姗来迟。为此，产业部门极为不满。他在国外参加学术会议时，常常听到国外专家的抱怨。但在国内，动物产品生产的各个环节分属不同部门管理，很难有部门主动“应战”。　　但李宁教授认为，目前中国克隆动物产品距离产业化还有“漫长的道路”，原因并不在于缺乏安全性审查的标准，因为安全性标准完全可以参照国外既有的标准。他认为，真正的距离在于技术。“个别的科研团体能够克隆，是不可能实现产业化的。”　　陈大元教授同样不够“乐观”。他自己带领的克隆牛研究，就还没有达到理想的“效率”。2002年陈大元的团队培养出第一批克隆牛，14头成功克隆的牛最后只存活下5头牛犊，第一头克隆牛在出生不久以后夭折。2003年在新疆成功的31头克隆牛，也只有12头存活。不久前，中科院一个研究小组培育的克隆牛，全部存活，这几乎是克隆实验中的“奇迹”，陈大元介绍说，这次“例外”的原因，科研人员正在研究当中。　　尽管有“例外”发生，克隆动物存活率低的问题，仍然是目前克隆技术产业化的瓶颈，如果没有新的方法解决，对产业化的期待，也许还为时尚早。不过，陈大元认为，最近日本和美国实现了“诱导多能干细胞”技术，如果尽快把这一技术应用到克隆中，那么产业化也许可以早点到来。“只要是健康存活下来的克隆动物，作为食物就跟传统动物没有两样，是安全的，问题在于我们的技术还没有能力批量地生产克隆动物产品。”陈大元说。　　“1980年初，外国哺乳动物克隆研究走得很快，中国科学界直到1990年才追上克隆技术的步伐。”陈大元说。不过，上世纪90年代以后，中国克隆技术的进步，立即进入加速度，兔、鼠、猪、牛、羊等等动物的克隆，都被中国的科学家实现。陈大元把这个时期形容为“登峰造极”。2000年以后，随着克隆技术的成熟，世界各地的科学家开始探索克隆产业化，中国的科研工作者也加入了实现产业化的努力当中。在很多国外研究者看来，中国人的智慧和勇气，常常能制造轰动性的成果，在克隆动物产品产业化的领域，中国的表现也值得期待。