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质谱鉴定磷酸化位点方法

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质谱鉴定磷酸化位点方法相关的方案

  • 精确修饰位点谱图库的建立与磷酸化蛋白质组的 DIA 解析
    PTM位点鉴定错误的概率较高，将位点错误的鉴定结果作为谱图库，会导致DIA解析结果的不可靠。实验使用Thermo ScientificTM Orbitrap Fusion三合一质谱仪，基于ptmRS/phosphoRS建立可靠的翻译后修饰DIA流程，突破了PTM DIA解析的瓶颈。使用phosphoRS/ptmRS筛选PTM定位准确的谱图，作为谱图库用于DIA，结果显示，具有精确PTM定位的谱图库中98.4%的磷酸化肽都获得了可靠的DIA解析(Q0.01)，峰面积CV值20%的肽段占86.9%，实现了准确可靠的大规模PTM DIA定量。
  • 一种用于磷酸肽鉴定和磷酸化位点定位的新型自动化、高选择性磷酸肽富集方法
    针对 HUPO 磷酸肽挑战赛，使用 AgilentAssayMAP Bravo 平台和 LC/Q-TOF 系统进行自动化磷酸肽富集以实现定性和定量分析。执行 CID 肽鉴定实验，在“磷酸肽”样品中鉴定出 437 种特有肽段，其中包括94 种磷酸肽。鉴定出 HUPO 序列表中的所有 89 种非磷酸肽。ECD 实验基于 89个非磷酸肽序列确定了 96 种磷酸肽的磷酸化位点。还将序列表中未列出的其余肽返回给 HUPO。在富集的“磷酸肽-酵母”样品中，鉴定出 287 中特有肽段，其中包括 264 种特有磷酸肽。富集的总体选择性约为 92.0%。此外，从富集的“磷酸肽-酵母”样品中仍鉴定出加入酵母中 96 种磷酸肽中的95 种。与开展本研究中的其他实验室相比，安捷伦从富集样品中回收的磷酸肽数量最多。
  • 基于二氧化钛富集策略的人类磷酸化蛋白质组大规模鉴定
    在这部分工作中，我们采用了高 pH 反相色谱结合二氧化钛富集以及二氧化钛富集结合强阳离子交换分级两条技术路线来对实现对 Hela 细胞的磷酸化蛋白质组的深度覆盖。最终我们的实验一共鉴定到了 8,696 个蛋白质上的近 40,000 个磷酸化位点。 在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中，SCX 分级的梯度还值得进一步优化，对于这种组分较少的预分级方法，阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高，如果样品较少的话，建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • 基于二氧化钛富集策略的人类 磷酸化蛋白质组大规模鉴定
    在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中，SCX 分级的梯度还值得进一步优化，对于这种组分较少的预分级方法，阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高，如果样品较少的话，建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • LTQ-Velos-Pro-Orbitrap-Elite在磷酸化蛋白质组学中的应用
    从上述结果可以得出，LTQ-Velos-Pro-Orbitrap-Elite检测结果可靠性高，系统稳定性高，质谱质量轴稳定性高，在短时间内可以鉴定到大量高可信的磷酸化修饰肽段以及磷酸化位点，可以很好的应用于磷酸化蛋白质组学研究，同时本次实验还说明对样本使用TiO2进行多次重复富集可以显著提高样本中磷酸化肽段的比例，提高磷酸化肽段与位点的鉴定数目。
  • 磷酸化协同超声波处理对玉米淀粉改性的研究
    试验研究磷酸化协同超声波处理对玉米淀粉物理性质的影响。比较三聚磷酸钠浓度、超声功率、超声时间、温度4个影响因素对淀粉的交联度、透明度、凝胶强度、糊化特性的影响。试验结果表明：磷酸化协同超声波处理可有效改玉米淀粉交联度、透明度，凝胶强度和淀粉糊化特性。磷酸化协同超声波可以有效对玉米淀粉进行改性。
  • 人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒
    人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗原、生物素化的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人尿嘧啶核苷磷酸化酶1(UPP1)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒
    人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗原、生物素化的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒
    人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒人糖原磷酸化酶M(PYGM)ELISA试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶M(PYGM)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶M(PYGM)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶M(PYGM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 内标掺入SILAC法用于小量组织的蛋白质组及磷酸化蛋白质组定量
    在这篇工作中，我们采用内标掺入 SILAC 的定量方法对大鼠胰岛进行了蛋白质组以及磷酸化蛋白质组的定量研究。通过对 SILAC 培养基的成分比例调整，我们优化了 INS-1E 细胞的标记方法。胰岛内包含多种细胞类型，如α 细胞，β 细胞，δ 细胞等，我们发现采用 INS-1E 细胞系（一种β 细胞系）已经可以较好的覆盖胰岛的全蛋白质组和磷酸化蛋白质组。若关心胰岛中的α 细胞的话，则可以标记α 细胞系来作为内标掺入胰岛。此外，我们还可以采用多种细胞系作为内标，这种称为“Super SILAC”的方法来完成对复杂组织蛋白质的全覆盖。 在磷酸化蛋白质组学流程中，我们采用了自制的基于StageTip 的TiO2萃取小柱来灵活的实现小量样品的磷酸化肽段富集。样品量始终是磷酸化以及其他一些翻译后修饰研究绕不过去的话题，一般来说只有增加样品量，并采取适当的预分级手段才能更深度的去覆盖这些翻译后修饰蛋白质组。ThermoFisher 也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。
  • 人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒
    人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围： 规格：96T/48T使用目的：本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗原、生物素化的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人糖原磷酸化酶同工酶MM(GP-MM)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度
  • 通过磷酸化技术提高纳米级抗VEGFR2结合蛋白的生物活性、理化性质和药代动力学特性
    为了克服Adnectin存在的问题，本文设计了一种新型的Adnectin C，将其融合到含有Pro/Ala/Ser（PAS）重复残基的可生物降解多肽中。用标准方法比较大肠杆菌表达的重组融合蛋白和未融合蛋白的生物活性、理化性质和药代动力学特性。使用Linseis STA PT1600热分析仪器进行DSC和TG实验。动态光散射（DLS）分析表明，磷酸化Adnectin C的粒径增加了约2倍，净电荷略有变化。此外，PAS序列的融合提高了其抗热诱导聚集形式生长的稳定性。酶联免疫吸附试验（ELISA）和表面等离子体共振实验分别证实了酶联蛋白C的高受体结合和改进的结合动力学参数。药代动力学研究显示，单次静脉注射给雌性BALB/C小鼠后，Adnectin C-PAS#1（200）的最终半衰期显著增加了4.57倍。结果表明，磷酸化可以作为开发Adnectin衍生药物的一种更好的给药策略，提高患者的依从性。
  • 磷酸盐流动相体系下头孢唑肟钠注射用药品中杂质的鉴定
    头孢唑肟钠（Ceftizoxime sodium）属第三代头孢菌素，具广谱抗菌作用。中国药典中使用磷酸盐缓冲液作为流动相。在本方案中采用二维ACQUITY UPLC系统，一维使用药典中规定的磷酸盐缓冲液，并采用亚2 μm小粒径的色谱柱进行分离，以提高分离效率、增加分离度、缩短分析时间。二维采用质谱兼容的甲酸体系，连接飞行时间质谱仪（Xevo G2-S QTof）进行检测鉴定。
    厂商： Waters
    相关产品: 二维ACQUITY UPLC系统
  • 离子色谱法对唑来膦酸药物的方法学研究
    唑来膦酸（zoledronic acid）是新型的双磷酸类药物,为一种特异性的作用于骨的二磷酸化合物。该结构与骨质中的羟膦灰石呈高亲和力,并能与钙(铁等金属离子结合,形成可溶性或不可溶性复合物)。唑来膦酸能抑制因破骨活性增加而导致的骨吸收,降低血清钙和尿液中的钙排泄量。唑来膦酸的无机类杂质与药品临床使用的安全性密切相关,如果药品中存在的杂质未能通过有效的方法加以检出(控制,将给临床安全造成直接或潜在的危害。因此,制订合理(有效的药品杂质检测方法,控制药品中的杂质是一项非常重要的工作。研究中选取磷酸(亚磷酸两种在唑来膦酸药物生产过程中容易产生的杂质为研究对象。虽然有报道可以用高效液相色谱法在线火焰分光光度法(折光率法(质谱法(电感耦合等离子体法等检测技术分析唑来膦酸药物,但这些直接的检测技术也只是应用于少数特殊双膦酸类药物的含量测定,由于双膦酸类药物大多没有可直接应用紫外检测器检测的生色团,因此往往都需要进行衍生反应才能分析检测,过程繁琐,并且无法对其有关物质&磷酸(亚磷酸'进行研究。利用离子对色谱分离配以电导检测器,既解决了双膦酸类药物的保留问题,又解决了其检测问题,为该类药物提供了有效可靠的分析手段。
  • 超高效液相色谱-三重四极杆质谱联用检测人血浆中缬更昔洛韦及其代谢物
    缬更昔洛韦口服后在肠黏膜细胞酯酶和肝酯酶的作用下迅速水解成更昔洛韦，更昔洛韦在病毒内和细胞内酶磷酸化作用下生成三磷酸更昔洛韦，后者与三磷酸脱氧鸟苷(dGTP)竞争作为病毒DNA多聚酶的底物，抑制病毒DNA的合成，从而产生抗巨细胞病毒(CMV)活性。临床适用于治疗获得性免疫缺陷综合症（AIDS）患者的巨细胞病毒（CMV）视网膜炎及预防高危实体器官移植患者的CMV感染。在进行LC-MS/MS检测时，血浆样品中缬更昔洛韦、更昔洛韦基质干扰严重；采用甲醇、乙腈、0.1%三氟乙酸-乙腈直接沉淀，无法显著降低基质干扰，且存在较强溶剂效应；碱化血浆后经乙酸乙酯/甲醇=1:1（v:v）液液萃取，更昔洛韦回收率仅为30%左右，且处理过程繁琐。使用超高灵敏度的LCMS-8060系统，血浆样品直接沉淀后，取上清液用纯水适当稀释进样，可以消除基质干扰；同时，此方法简化了血浆样品的前处理过程，在提高分析效率的同时，显著降低成本。
  • 利用 Agilent 1290 Infinity UHPLC 和 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对单克隆抗体进行高分离度快速肽谱分析
    肽谱分析是表征生物治疗性蛋白质的一种常用分析技术。首先用一种或两种蛋白酶将蛋白质酶解成小分子肽。肽混合物通常采用反相色谱法分离，然后通过紫外或质谱检测器进行检测。质谱可以提供肽的质量数据，从而大大扩充肽谱分析的信息含量。由于增加了质量分离模式，可以轻松鉴定出共流出的多肽，同时也可以大幅缩短梯度时长。此外，串联质谱可以将肽碎裂为更小的片段，并为肽的氨基酸序列以及糖基化、磷酸化、氧化和脱酰氨基化等翻译后修饰(PTM) 提供证据。本应用简报介绍了如何使用新型表面多孔肽谱分析色谱柱配合 Agilent 6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统对一种 IgG (1) 治疗性单克隆抗体 (mAb) 进行肽谱分析。结合 MS/MS 分析，肽谱分析色谱柱独特的分离能力可以最大限度提高分离度和效率，可确保实现可靠灵敏的肽鉴定，而且只需 15 分钟的运行即可实现高序列覆盖。6550 iFunnel Q-TOF LC/MS 系统可为肽鉴定提供出色的质量准确度和灵敏度，而 MS/MS 功能则有助于更可靠地确定被修饰肽的鉴定结果。此外，本文还探讨了通过 IgG (1) 肽谱分析梯度和 LC/MS/MS 参数的优化，实现稳定、快速、可靠的 mAb 肽谱分析。
  • 在线脱盐高通量液质联用分析寡核苷酸
    寡核苷酸是一类短链核苷酸的总称（包括脱氧核糖核酸及核糖核酸），如用于基因扩增和基因诊断的 PCR 引物和反义核酸，介导基因沉默的小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）等，努力研究开发基因靶向治疗药物用于治疗病毒、肿瘤和遗传疾病。天然的寡核苷酸在体内容易降解，稳定性差。通过修饰的寡核苷酸具有较好的药学特性和体内稳定性 [1-2]，但合成的寡核苷酸产物含有各种杂质，需纯化精制，产物的鉴定和产品的质量控制至关重要。液相和液质联用于寡核苷酸目标产物的高分辨分离和鉴定， 可以判断待测寡核苷酸结构的变化，比如脱嘌呤、氧化、磷酸化等。寡核苷酸样品中存在的盐分会影响其离子化过程和造成峰强度降低，因此有必要进行质谱鉴定前的除盐处理。常规离线除盐方法耗时；可以利用在线除盐方式进行寡核苷酸的分离鉴定，但样品通量需要提高，以满足高通量的要求，如平均每天 2000 个样品的需求等。
  • 使用高通量RNA干扰技术筛选DNA损伤- Molecular Devices ImageXpress Micro XLS
    MD公司开发了一款非常强力的筛选平台—ImageXpress系统。该系统拥有完整的图像获取及分析模块，可以快速生成想要的数据。本文列举了如何通过对磷酸化的组蛋白H2AX和DNA进行免疫荧光双色分析方法来检测DNA损伤。组蛋白H2AX在丝氨酸139位点的磷酸化被认为是药物或辐射造成的DNA损伤的敏感标记。文中也阐明了我们利用RNAi对双色标定DNA损伤分析是一个敏感和快速的自动化过程，而且这种方法被证明可以有效发现新的目标。
  • 磷酸酯抗燃油的闪点测试方法及标准要求
    抗燃油由磷酸酯组成，外观透明、均匀，新油略呈淡黄色或桔红色，无沉淀物，挥发性低，抗磨性好，安定性好，物理性稳定，发电厂电液控制系统所用抗燃油是一种抗燃的纯磷酸酯液体，难燃性是磷酸酯最突出特性之一，在极高温度下也能燃烧，但它不传播火焰，或着火后能很快自灭，磷酸酯具有高的热氧化稳定性。按照标准DLT571-2007电厂用磷酸酯抗燃油运行与维护导则，抗燃油磷酸酯的闪点：≥235℃。按GB/T 3536方法进行试验。运行磷酸酯抗燃油的闪点降低，说明油中混入了易挥发可燃性组分或发生了分解变质，应同时检测自燃点、黏度等项目，分析闪点降低的原因。全自动开口闪点仪SH106B严格按照GB/T3536这个标准设计制作的，全自动触摸屏操作，自动电子点火，自动判定，自动出结果，自动打印。
  • 热裂解-全二维气相色谱质谱联用法在亚洲漆鉴定中的应用
    本文建立了热裂解-全二维气相色谱质谱联用仪（Py-GC×GCMS）分析漆器的新方法，并将该方法应用于亚洲漆种类的鉴别。不同产地的漆树，其汁液内的主要化学成分不同，通过分析不同漆树漆膜中的化学成分可以鉴别漆液来源。鉴别漆的品种既能了解古代文化及工艺技术，又能为漆器保护修复提供必要信息。通过对日本漆、中国漆、越南漆、缅甸漆等漆膜样品的测试分析，对其主要成分烷烃、烯烃、烷基苯、酚和儿茶酚进行分离、分析及鉴定，探索了Py-GC×GCMS对亚洲漆的表征及产源鉴定。
  • 【仪电分析】工作场所空气有毒物质五氯酚和五氯酚钠的测定 -高效液相色谱法
    五氯酚（简称PCP）是一种酚类化合物，常用于消毒，杀灭血吸虫中间宿主钉螺，除莠，防腐及防霉。在我国，主要用其钠盐五氯酚钠杀灭钉螺，在灭螺药物中，算是一张皇牌，因而应用甚广。国外则多用于防腐。五氯酚钠进入人体后分解成五氯酚，五氯酚具有有机氯和酚的毒性，能抑制生物代谢过程中氧化磷酸化作用，可对人体的肝、肾及中枢神经系统造成损害。
  • 磷酸盐流动相体系下头孢唑肟钠注射用药品中杂质的鉴定
    在使用磷酸盐等不挥发盐做流动相时，能有效解决杂质鉴定的难题。一维和二维同时使用亚2 μm的色谱柱，提高分析效率。借助软件快速对药品中所有杂质进行鉴定及解析。
  • 电位滴定法测定腺苷含量
    腺苷是用于合成三磷酸腺苷(ATP)、腺嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的重要中间体，分子式为C10H13N5O4。它可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，还会参与扩张冠脉血管，增加血流量。其对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织均有生理作用。本次实验测定某厂家生产的腺苷含量是否达标，采用T960全自动电位滴定仪测按照其电位突跃点确定终点，测定其含量。
  • 利用全自动毛细管等电聚焦 — 质谱联用技术鉴定单克隆抗体的电荷异构体
    本应用展示了在 7100 毛细管电泳仪和 TOF/Q-TOF 质谱仪上进行的全自动在线 CIEF-MS 方法。使用电动泵送鞘流溶液纳米喷雾 CE/MS 联用技术实现该 CIEF-MS 工作流程。碱性蛋白和单克隆抗体的 CZE-MS 结果以及达雷木单抗电荷异构体分析的 CIEF-MS 结果表明，EMASS-II CE/MS 离子源在安捷伦系统上具有出色的性能。还提供了 CEIF-MS 方法的详细信息，包括毛细管性能验证和系统性能检查。在此 Agilent-CMP CIEF-MS工作流程中，对于通过毛细管等电聚焦分离得到的完整 mAb 电荷异构体，可以直接进行质谱鉴定。
  • 人胸腺嘧啶核苷磷酸化酶(TP)ELISA试剂盒操作步骤
    检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被样本抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的样本呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
  • 采用TSKgel色谱柱参考《中国药典》分析磷酸肌酸钠
    采用C18色谱柱TSKgel ODS-100V（4.6 mm I.D.× 25 cm，5 μ m）参照2015版《中国药典》中的分析方法分析磷酸肌酸钠。可满足药典中的要求：磷酸肌酸峰理论塔板数不低于2000，肌酸峰与肌酐峰的分离度大于3.0。
  • 赛默飞色谱与质谱：离子色谱-质谱联用测定洗虾粉中的焦磷酸盐
    本文采用水系滤膜和On-Guard RP 柱对洗虾粉未知样品进行净化，首先利用离子色谱分离及质谱的强大定性能力，将二者联用确定了样品中含有硫代硫酸盐和焦磷酸盐，再用离子色谱法测定了样品中的硫代硫酸盐和焦磷酸盐，其色谱峰分离效果好，方法稳定性强、灵敏度高、干扰少，满足对于这种洗虾粉粉末未知成份的检测与确证要求。将本方法用于对食品加工中非法添加物的确证及检测具有十分重要的意义。
  • Molecular Devices CatchPoint cAMP荧光检测试剂盒应用方案解析
    G蛋白偶联受体(GPCRs)是重要的跨膜蛋白，能将胞外信号传导入胞内，引起信号逐级放大的级联反应，导致胞内某些蛋白活性或表达的改变[1]。3’, 5’-单磷酸化环腺苷(cAMP)作为第二信使参与GPCR活化后的下游反应。当胞外配体作用于GPCR时，GPCR构象发生改变，激活胞内连接的G蛋白。接下来的信号传导路径与被激的G蛋白类型有关。其中当Gs蛋白被激活时，会导致腺苷酸环化酶活化引起的胞内cAMP浓度上调，进一步激活蛋白激酶A，最终促进一些目标蛋白的磷酸化，这些目标蛋白可能参与了例如多巴胺神经信号传导、葡萄糖再生反应、血管扩张、细胞有丝分裂、卵子成熟等重要生理生化过程[2-6]。
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