色谱峰面积化合物分子量

物质的出峰大小也即峰面积或峰高，最明显的是和物质的浓度大小有关系，浓度越高响应越大，峰面积越大，现在想问的是除了和浓度有关系外，还和什么因素有关系，柱子的规格？检测器？色谱条件？同样的仪器，同样的色谱条件，不同品牌相同型号的柱子，分析同样浓度的目标化合物，响应值即峰面积相差很大，是什么原因呢？

今天做一个化合物的稳定性，结果发现孵育了2个小时后峰面积没有下降反而升高了，这是为什么呢？我用的是22nm的波长。

最近跟进合成项目时，同事发现做一个中间体时使用含有乙酸缓冲盐或纯水两种流动相体系时，峰面积会差异有10倍左右。拿到的中间体还在摸索阶段，可能是成盐的，也可能是有机物，也可能混合态。请教这个是什么原因，拿到的样品具有比较好的水溶性，但是目标化合物也可能会有水溶性，中间体的对照样搞不到，比较头痛。单纯想请教峰面积差异巨大的问题，才疏学浅理论上想不明白了。

化合物和其同位素在分子量上面有差异，在某些物理性质上面可能有差异，化学性质差异极小，我遇到的两者在普通色谱柱上面无法分离，保留时间一致（或许有细微差别，但实际上看不出来差别），也许我看到的是部分情况（例如塑化剂，一些香料等）。如果哪位做过这种分析，请问化合物和其同位素在普通色谱柱上面可以分离吗？是那些化合物和其同位素可能会分开？或者即是您没有做过，您认为会怎样？或者看到什么资料中那些的图例是可以分开化合物和其同位素的？欢迎参与讨论。

GC-MS分析中 需要内标进行半定量，由于TIC图中两重要物质没有完全分离，所以只能找这两个物质的特有离子，因为考虑到所选取的离子在两物质TIC中的丰都比差异太大，故分别选取的特殊离子面积大小关系不一定真实反映TIC中两物质的总面积大小。所以想知道哪里有化合物经70eV离子化后各碎片离子丰度在TIC图中的相对百分比 ，这样我就可以把提取的离子面积再换算成TIC中的总面积了。我看大NIST里物质标准质谱图中只给出了前10个离子的相对丰度。不知道能不能利用前10个离子大致推算一下，误差会不会太大。

相同浓度的目标化合物，只是一个使用甲苯作溶剂，另一个使用异辛烷作溶剂，结果峰面积相差很大，怎么回事？（用甲苯作溶剂的目标化合物峰面积为1900000左右，而使用异辛烷作溶剂的目标化合物峰面积为2400000左右。）

用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液相色谱质谱联用仪[/color][/url]如何定性未知化合物，并得到分子量

之前没用过[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]，想请教一下大家。使用安捷伦[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]（FID检测器，顶空进样）检测沸点低（30-40）的化合物时峰面积变得越来越大是什么原因造成的，有没有什么解决方法啊？

我建了一个同时测定30个化合物的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]方法，两个月前标品峰都正常，但现在突然有7个分子量小于154的化合物不出峰了，请问可能是什么原因呢？用的是公共仪器，中间有其他人也在用。

给大家推荐一款能完美解决弱碱性化合物的色谱柱，华谱XCharge液相色谱柱。以下是他的介绍，各位可以了解一下，遇到问题也多一种选择。XCharge C18是基于对碱性化合物的独特色谱保留行为的深入理解而开发的一款独特的色谱柱。由于设计理念不同，与传统的反相色谱柱在色谱方法开发上有很大的不同，需要色谱工作者首先对其设计理念有一定了解，才能为您的方法开发带来更轻松的体验。1.一般而言，选择0.1%甲酸作为流动相添加剂(即0.1%甲酸水和0.1%甲酸乙腈等)，调节有机相浓度，可解决大部分碱性化合物的峰形问题。不过需要注意的是，由于该色谱柱采用电荷排斥屏蔽高能吸附位点，对碱性化合物的保留相比传统反相柱要弱一些，故在有机相浓度上相比传统方法要低一些，XCharge C18是耐纯水相的反相色谱柱，故有机相起点可以低至0%。2.具体方法开发时可以首先使用5%有机相-15min-35%有机相-10min-95%有机相的梯度方法对样品在XCharge C18上的保留情况快速做一判断。在此条件下，若使用乙腈为有机相，多数碱性化合物的保留时间会在5~15min之间，可以通过5%~35%的有机相比例微调得到合适的保留和分离；若保留在15~25min之间，则起始有机相浓度可以提高到30%以上，进行有机相梯度调整，得到合适的保留和分离；（注：在XCharge C18上乙腈的峰形比甲醇好很多，建议使用乙腈开发方法）3.对于2中方法不能很好实现峰形或分离的情况，大致有以下几种难点情况：1)保留时间不够及其引起的峰形前伸，分离度不足：多见于分子量小于300的低分子量碱性化合物。这些化合物本身在反相上保留较弱，又由于XCharge C18屏蔽了高能位点的吸附，并对碱性溶质有排斥作用，保留进一步削弱，是XCharge C18分离碱性化合物的主要难点。解决方案有：1.纯水相起步尝试0%有机相-10min-0%有机相-10min-10%有机相的梯度，看能不能得到合适的保留和分离；2. 若1的保留仍不够，将0.1%的甲酸添加剂换成0.1%~0.5%的三氟醋酸（TFA，添加越多，保留可能越增强，当然增强幅度有限，尽量少点），利用TFA的弱离子对试剂性质增强碱的保留和选择性，仍可使用1中所述梯度。（注：TFA在低波长下干扰小，若样品在190~220nm检测，则甲酸不合适，TFA为首选添加剂）。3. 若2仍不行，可尝试添加10~20mM的磷酸二氢钠/钾等缓冲盐（pH 2~4）, 或者高氯酸钠，特别是高氯酸钠的效果会很显著。2)保留时间够但分离度不够有时虽然样品的保留足够，但因为相似化合物的分离选择性不够而出现分离度不够的问题，同样可以从流动相梯度，添加剂种类方面去改善。具体而言，解决方案同有：1. [

如果某化合物的分子量小于GPC柱子能检测的最小分子量能出峰吗？比如柱子能检测的范围是800-100000，而化合物的分子量为300，这样，小分子进柱子是不是进去就冲洗不出来了啊？

[color=#444444]有个化合物，质谱定量，采用MRM模式，流动相水相0.1%甲酸水，有机相ACN，稀释剂ACN：H2O：甲酸=1：1：0.1, 色谱柱C１８柱，但是化合物线性不好，１５０％的峰面积和５０％的峰面积都不成倍数关系，请问这种情况改怎么办。[/color][color=#444444]像如下所示的化合物是不是磺酸酯不容易离子化，有什么办法让他容易离子化昵，加酸还是加碱？[/color][color=#444444][img]http://muchongimg.xmcimg.com/oss2/img/2018/0813/w242h550431_1534172568_185.png[/img][/color]

液质联用仪因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。 液质联用仪用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。液质联用仪还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。 质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。 质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。 根据使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]的经验和审评体会，认为在使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]测定和分析中需注意以下问题： 1) 测试者需根据自己的测试需要确定适宜的离子源。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的质谱仪是大气压下的电离，电离方式属于软电离，当增加能量时，脱掉的碎片为中性分子，对于电离稳定性差的物质（如苷类，小肽等）逐步增加能量会依次逐个脱掉糖或氨基酸，得到非常多的片断信息，对于结构解析非常有好处，现有仪器最多可以做到11级质谱，该类质谱的缺点是至今还没有统一的谱库，不同的仪器碎片离子不很一致。以往常用的EI是一种强电离，一般得不到分子离子峰的信息，对于电离稳定的化合物有助于结构解析，FAB电离强度略弱，一般可以得到分子离子峰，碎片也较多，同时可以产生正负离子，EI和FAB的好处是电离方式稳定，有谱库可查，对于已知化合物鉴定更有帮助，但这两种质谱都没有多级质谱，提供的碎片信息有限。 2) 一级图谱测定和分析时，质量数范围应充分放宽，一是为了防止漏掉可能的杂质，二是防止观察不到多聚物。一般的质谱仪可以检测到50-1500。这点对于评价化合物纯度，以及选择适宜的杂质检测方法很有意义。 3) 多级图谱定性测定时，首先要保证一级质谱的峰强度，待测物是最强峰，以保证碎片峰的准确性，一般正离子检测达应达到e7（代表最强峰的强度，值越大，峰越强），负离子检测达e6；一级质谱峰足够强才能保证碎片峰的强度，否则将会导致碎片峰中杂峰过多，难于分辨哪一个碎片峰来源于样品，为结构解析带来难度。4) 提供图谱时信息尽可能详尽，一般质谱仪测定时会给出详细的相关信息，提供给对方时不要删除，如：电离方式是正离子（+ESI，+APCI，+APPI）还是负离子（-ESI，-APCI，-APPI），检测方式是一级质谱（MS）、选择离子监测（SIM）、选择反应监测（SRM）还是二级质谱全扫描（FULL MS2），峰强度等。这样不仅方便进行资料的回顾性分析，也便于审评人员进行技术评价。5) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行定量时，在提供上述信息的同时，而且定量图谱上尽可能标明峰面积和保留时间，要提供空白样品和最低定量限样品的图谱，以保证可靠性。6) 进行定量分析前，为保证检测下限尽可能低，需要对化合物的仪器参数进行优化。优化时应注意使待测物母离子峰强度保持适宜的强度（一般在e6左右即可），过强或过弱均可能会使优化的参数不准确；其次应在总离子流稳定的情况下进行参数优化，一般要求波动小于10%。参数优化后可根据经验再进行适当的调整，以保证更好的适用性。7) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行杂质分析时，最好有二极管阵列检测器（DAD），提供紫外色谱图、质谱色谱图和相应峰位杂质的多级质谱图。考虑到DAD一般多连接在质谱仪的前面，故质谱色谱图应比紫外色谱图的保留时间略长。 8) 由于质谱的稳定性没有普通检测器好，定量分析时最好有内标，内标与待测物最好性质相近，保留时间基本一致，待测物的氘代品为最佳选择。测定基质复杂的生物样品时，方法学确证要测定稀释效应和基质效应，建立的方法要消除这两种效应的干扰。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。 质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。 根据使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]的经验和审评体会，认为在使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]测定和分析中需注意以下问题： 1) 测试者需根据自己的测试需要确定适宜的离子源。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的质谱仪是大气压下的电离，电离方式属于软电离，当增加能量时，脱掉的碎片为中性分子，对于电离稳定性差的物质（如苷类，小肽等）逐步增加能量会依次逐个脱掉糖或氨基酸，得到非常多的片断信息，对于结构解析非常有好处，现有仪器最多可以做到11级质谱，该类质谱的缺点是至今还没有统一的谱库，不同的仪器碎片离子不很一致。以往常用的EI是一种强电离，一般得不到分子离子峰的信息，对于电离稳定的化合物有助于结构解析，FAB电离强度略弱，一般可以得到分子离子峰，碎片也较多，同时可以产生正负离子，EI和FAB的好处是电离方式稳定，有谱库可查，对于已知化合物鉴定更有帮助，但这两种质谱都没有多级质谱，提供的碎片信息有限。 2) 一级图谱测定和分析时，质量数范围应充分放宽，一是为了防止漏掉可能的杂质，二是防止观察不到多聚物。一般的质谱仪可以检测到50-1500。这点对于评价化合物纯度，以及选择适宜的杂质检测方法很有意义。 3) 多级图谱定性测定时，首先要保证一级质谱的峰强度，待测物是最强峰，以保证碎片峰的准确性，一般正离子检测达应达到e7（代表最强峰的强度，值越大，峰越强），负离子检测达e6；一级质谱峰足够强才能保证碎片峰的强度，否则将会导致碎片峰中杂峰过多，难于分辨哪一个碎片峰来源于样品，为结构解析带来难度。 4) 提供图谱时信息尽可能详尽，一般质谱仪测定时会给出详细的相关信息，提供给对方时不要删除，如：电离方式是正离子（+ESI，+APCI，+APPI）还是负离子（-ESI，-APCI，-APPI），检测方式是一级质谱（MS）、选择离子监测（SIM）、选择反应监测（SRM）还是二级质谱全扫描（FULL MS2），峰强度等。这样不仅方便进行资料的回顾性分析，也便于审评人员进行技术评价。 5) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行定量时，在提供上述信息的同时，而且定量图谱上尽可能标明峰面积和保留时间，要提供空白样品和最低定量限样品的图谱，以保证可靠性。 6) 进行定量分析前，为保证检测下限尽可能低，需要对化合物的仪器参数进行优化。优化时应注意使待测物母离子峰强度保持适宜的强度（一般在e6左右即可），过强或过弱均可能会使优化的参数不准确；其次应在总离子流稳定的情况下进行参数优化，一般要求波动小于10%。参数优化后可根据经验再进行适当的调整，以保证更好的适用性。 7) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行杂质分析时，最好有二极管阵列检测器（DAD），提供紫外色谱图、质谱色谱图和相应峰位杂质的多级质谱图。考虑到DAD一般多连接在质谱仪的前面，故质谱色谱图应比紫外色谱图的保留时间略长。 8) 由于质谱的稳定性没有普通检测器好，定量分析时最好有内标，内标与待测物最好性质相近，保留时间基本一致，待测物的氘代品为最佳选择。测定基质复杂的生物样品时，方法学确证要测定稀释效应和基质效应，建立的方法要消除这两种效应的干扰。

最近测样时遇到一个奇怪的问题，想不明白所以发上来请教一下各位老师。由于实验需要，我所测定的化合物溶解在pH=10.2的碳酸盐缓冲液中，而化合物本身不会电离。色谱条件：进样量10ul，流动相A为10mM的磷酸缓冲液，pH=5，B为乙腈。0.8mL/min流速，梯度洗脱初始55%B保持1min，用4min升至90%B，保持10min，之后再回复至55%B。问题：用纯水配置的溶液，化合物出峰时间为12.3min，而改用pH=10.2缓冲液配置的溶液出峰时间后延至15.1min，峰面积也和纯水不同。请教一下各位老师造成这个现象是什么原因，从化合物电离角度显然解释不通。谢谢各位的指教！

[color=#444444]最近合成了一个新化合物，是紫杉醇和一个小分子羧酸生成的酯，分子量1042。这个新化合物没人报道过怎样用液相测含量，紫杉醇含量测定大都是乙腈：水（1:1，V/V）。我的这个新化合物可以完全溶解在乙腈或者甲醇中。我用紫外扫过这个化合物最大吸收波长，发现它跟紫杉醇最大吸收波长几乎一样。请问我应该摸索这个化合物的色谱流动相条件，是用纯乙腈开始冲吗？非常感谢！！[/color]

色谱图上面有时候同一个化合物出现双峰，一般是前面大，后面小，请问有什么可能的原因引起的呢？

飞行时间质谱怎么测分子量500以下的化合物最近做的一些化合物是新化合物，除了做核磁表征外，还需要做高分辨质谱，要送到北京做，但是速度太慢了，等了两个月还没做好，郁闷，文章就等那新化合物的高分辨。由于我们学校刚刚买了一台飞行时间质谱，按照原理是可以测任何分子量的化合物，但是现在说测分子量大于500比较准，我也高不清楚怎么才能测分子量小于500的。请大家帮帮忙

在安捷伦7890上用内标法让溶剂峰不积分，但是在谱图上显示出峰时间和化合物名称？我是这样做的，在校正表里，输入溶剂峰的名称，出峰时间，峰面积，我把化合物的量输入“0”，但是我点击校正表里的“OK”后，然后保存方法。但是最后的方法里，谱图上不显示溶剂峰的名称，出峰时间等信息，这是为什么呢？

污染物残留分析中，经常会遇见复杂基质样品，色谱图中出现与待测化合物标准品保留时间相近但又不完全一致的色谱峰，那么该如何确定其是杂质还是待测化合物色谱峰呢？如果判定为杂质峰，如何避免出现假阴性结果？

在这个视频中，各位观众可以看到怎么利用安捷伦chemstation c版工作站的智能报告功能显示内标法目标化合物与内标物的面积比值

我用sephadex G25进行分离的有机化合物分子量在1000-1500之间，如果两个化合物分子量只是相差100左右，是不是就不能用它进行分离，而且，我所分离的化合物没有紫外吸收，没有办法用制备色谱进行分离。

标准HJ 744-2015 水质 酚类化合物的测定 气相色谱-质谱法8.1 定性分析以样品中目标物的保留时间（RRT）和辅助定性离子与目标离子峰面积比（Q）与标准样品比较来定性。样品中目标物的保留时间与标准样品中该化合物保留时间的差值应在±0.03s 以内，样品中目标化合物的辅助定性离子和目标离子峰面积比与期望 Q 值（即标准样品的 Q 值）的相对偏差应在±30%以内。辅助定性离子与目标离子峰面积比（Q）怎么理解？什么是辅助定性离子？目标离子？气质中不是化合物才有峰面积么？好吧，这问题很菜鸟，谢谢大神指点！

1、分子量大小分子量大于3000的，采用凝胶色谱条件，或者离子交换色谱条件分子量小于3000的，采用正相silica条件、反相C18条件或HILIC模式2、极性大小大极性物质（盐类等只溶于水的）：选用离子交换色谱条件，或者HILIC模式条件中等极性（有机酸、有机碱、多肽、糖等溶于水或乙腈的）：选用反相C18条件小极性（脂类、醚类等溶于正己烷或二氯甲烷的）：选用正相silica条件3、pKa值大小待分析样品中主成分若成酸性，在水相流动相中会形成离子状态，导致在反相色谱上不保留，此时需将流动相pH值调低于主成分pKa-2，使得化合物在流动相中成分子状态；若成碱性，在水相流动相中也会形成离子状态，此时需将流动相pH值调高于主成分pKa+2，这就要求采用耐碱的色谱柱。