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液相色谱氨基酸组成分析

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  • 蛋白质氨基酸残基组成分析以及蛋白预测软件

    http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/09/06/A1378379551.jpg 氨基酸是蛋白质的基础组成单位,通过研究蛋白质中氨基酸的性质和组成来预测蛋白质的结构和功能,蛋白质氨基酸残基组成分析主要是通过氨基酸分析仪来完成的,本文推荐了2个基于氨基酸组成进行蛋白质预测软件。基于氨基酸组成的蛋白质预测软件根据组成蛋白质的20种氨基酸的物理和化学性质可以辨析电泳等实验中的未知蛋白质,也可以分析已知蛋白质的物化性质。ExPASy工具包包涵的程序:AACompIdent:与把氨基酸序列在SWISS-PROT库中搜索不同,AACompIdent工具利用未知蛋白的氨基酸组成去确认具有相同组成的已知蛋白。该程序分析时需提交的相关信息包括:蛋白质的氨基酸组成、等电点pI和分子量(如果知道)、正确的物种分类及特别的关键词。此外,用户还需在六种氨基酸“组合”中作出选择,这影响到分析如何进行。例如,某种“组合”会把残基Asp/Asn(D/N)和Gln/Glu(Q/E)组合成 Asx(B)和Glx(Z);或者某种残基会在分析中被完全除去。对数据库中的每一个蛋白序列,算法会对其氨基酸组成与所查询的氨基酸组成的差异打分。由电子邮件返回的结果被组织成三级列表:第一张列表中的蛋白都基于特定的物种分类而不考虑pI和分子量;第二张列表包含了不考虑物种分类、pI和分子量的全体蛋白;第三张列表中的蛋白不但基于特定物种分类,并且将 pI和分子量也考虑在内。虽然计算所得结果各不相同,但零分表明了该序列与提出的组成完全相符。AACompSim:AACompIdent的一个变种,AACompSim提供类似的分析,但与前者以实验所得的氨基酸组成为依据进行搜索不同,后者使用SWISS-PROT中的序列为依据。有报道称,氨基酸组成在物种之间是十分保守的(Cordwell等,1995),并且通过分析氨基酸的组成,研究者能从低于25%序列相似性的蛋白之间发现弱相似性(Hobohm和Sander,1995)。因此,在“传统的”数据库搜索基础上辅以组成分析,能为蛋白质之间关系提供更多见解。PROSEARCH:PROPSEARCH也提供基于氨基酸组成的蛋白质辨识功能。用144种不同的物化性质来分析蛋白质,包括分子量、巨大残基的含量、平均疏水性、平均电荷等,把查询序列的这些属性构成的“查询向量”与SWISS-PROT和PIR中预先计算好的各个已知蛋白质的属性向量进行比较。这个工具能有效的发现同一蛋白质家族的成员。可以通过Web使用这个工具,用户只需输入查询序列本身。分子量搜索(MOWSE)分子量搜索(MolecularWeightSearch,MOWSE)算法利用了通过质谱(MS)技术获得的信息。利用完整蛋白质的分子量及其被特定蛋白酶消化后产物的分子量,一种未知蛋白质能被准确无误地确认,给出由若干实验才能决定的结果。由于未知蛋白无需再全部或部分测序,这一方法显著地减少了实验时间。MOWSE的输入是一个纯文本文件,包含一张实验测定的肽段列表,分子量范围在0.7到4.0Kda之间。计算过程基于在OWL非冗余蛋白质序列库中包含的信息。打分基于在一定分子量范围内蛋白中一个片段分子量出现的次数。输出的结果是得分最佳的30个蛋白的列表,包括它们在OWL中的条目名称、相符肽段序列、和其它统计信息。模拟研究得出在使用5个或更少输入肽段分子量时,准确率为99%。该搜索服务可通过向mowse@daresburg.ac.uk发送电子邮件实现。为获得更多关于查询格式的细节信息,可以相该地址发送电子邮件,并在消息正文中写上“help”这个词。蛋白质氨基酸组成分析用盐酸在110 ℃将蛋白或多肽水解成游离的氨基酸,用氨基酸分析仪测定各氨基酸的含量。采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法,对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似,但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)通常细分为两种系统:蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统),利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸,速度较快,基线平直度好;锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸,速度较慢,基线一般不如钠盐系统好。分析效果:从目前已知的氨基酸分析方法比较来看,除灵敏度(即最低检测限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:0.5 pmol;氨基酸分析仪:10 pmol),其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面,都优于其他分析方法。蛋白质氨基酸残基组成分析的主要步骤包括:首先是蛋白被水解为氨基酸,其次是采用离子色谱等方法进行游离的氨基酸含量和组成的分析。总之利用蛋白可以分析氨基酸,利用氨基酸也可以研究蛋白质。

  • 网络讲堂:9月12日 日立氨基酸分析仪和液相色谱在氨基酸分析中的解决方案

    网络讲堂:9月12日 日立氨基酸分析仪和液相色谱在氨基酸分析中的解决方案

    http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647481_2507958_3.gif日立氨基酸分析仪和液相色谱在氨基酸分析中的解决方案时间:2014年9月12日 10:00讲师:牟晓丽 目前负责日立氨基酸分析仪和液相色谱的技术支持及市场工作讲座内容: 蛋白质是生命的物质基础,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者,没有蛋白质就没有生命。而蛋白质又是由氨基酸组成的,由此可见氨基酸对人体的重要性。人体可以通过进食粮食、水果、动物制品补充氨基酸,也可通过摄取含氨基酸的功能食品补充氨基酸。 在制药行业,以氨基酸药物为重要组成的生物制药也越来越得到大家的关注。所以,对氨基酸进行分析是非常有必要的。氨基酸的分析方法有柱前衍生法和柱后衍生法,分析仪器既有专门的氨基酸分析仪又有液相色谱仪。 在此,我们跟大家介绍使用日立氨基酸分析仪L-8900和液相色谱仪,通过柱前和柱后衍生法对氨基酸进行分析。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件:只要您是仪器网注册用户均可报名参加。2、报名并参会用户有机会获得100元手机充值卡一张哦~3、报名截止时间:2014年9月12日 9:304、报名参会:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2014/08/201408011630_508801_2507958_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/01/201701191656_647481_2507958_3.gif

  • 【求助】如何采用高效液相色谱仪分析氨基酸(买人家的氨基酸分析包)

    我们想用高效液相色谱仪分析饲料中的氨基酸(呵呵,我们也只有一台waters的e2695型液相色谱仪,没有氨基酸分析仪),请问大家都用什么方法啊,我们买了郑州牧专的氨基酸分析包,可是作出来结果老是不准,就是结果偏低。另外之前负责氨基酸分析的女孩突然辞职了,可我只见过她前处理的大致步骤,不知道里面有啥关键点要必须掌握,所以我想问问大家你们有用氨基酸分析包的没啊,请指教一下吧,谢谢了

  • 【实战宝典】如何采用液相色谱测定氨基酸?

    [b][font=宋体]问题描述:如何采用液相色谱测定氨基酸?对仪器配置有哪些要求?有哪些注意事项?[/font][font=宋体]解答:[/font][/b][font=宋体]([/font]1[font=宋体])液相色谱通常无法直接测定氨基酸,需要对氨基酸进行衍生,衍生的方式可采用柱前衍生和柱后衍生,柱前衍生有专门的试剂包,许多分析仪器厂家有相关的应用资料;柱后衍生需要相应的衍生装置和衍生试剂。[/font][font=宋体]([/font]2[font=宋体])仪器配置方面,液相色谱仪首先需要具有梯度洗脱功能;防止温度波动导致保留时间的漂移,因此需要配备柱温箱。氨基酸衍生产物具有紫外和荧光响应,可以配置紫外检测器、二极管阵列检测器或荧光检测器进行检测。如果采用在线柱后衍生方式进行测定,还需配备柱后衍生装置。[/font][font=宋体]([/font]3[font=宋体])由于氨基酸测定种类较多(通常是[/font]18[font=宋体]种游离氨基酸),另外样品基质较为复杂,采用液相色谱测定氨基酸时,通常会出现保留时间漂移、分离度下降、杂质干扰等现象。[/font][font=宋体]([/font]4[font=宋体])液相色谱法测定食品中的氨基酸含量,可以参考:[/font]SN/T 5223-2019[font=宋体]《蜂蜜中[/font]18[font=宋体]种游离氨基酸的测定[/font][font=宋体]高效液相色谱[/font][font=宋体]-[/font][font=宋体]荧光检测法》、[/font]QB/T4356-2012[font=宋体]《黄酒中游离氨基酸的测定[/font][font=宋体]高效液相色谱法》。[/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white]领取更多《实战宝典》请进:[url]http://instrument-vip.mikecrm.com/2bbmrpI[/url][/back][/color][/font][font='微软雅黑','sans-serif'][color=black][back=white] [/back][/color][/font]

  • 液相色谱测氨基酸

    用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱仪[/color][/url]安捷伦1260测氨基酸,柱前衍生法。色谱条件:激发330,发射450,流动相A:甲醇和乙腈溶液67:33,流动相B:40nmol/L的磷酸二氢钾,梯度洗脱,流速为1ml/min今天测氨基酸标准品时,出峰不正常,具体如下图,有没有懂朋友能看看是什么原因,谢谢[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/09/202209231459343338_5818_5613962_3.png[/img]

  • 【资料】反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸

    反相高效液相色谱法测定烟叶中的游离氨基酸 氨基酸是烟草中的一类重要化学物质,在烟草调制、醇化或发酵、加工直至燃烧过程中,游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应,生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花香味特征的吡喃、吡嗪、吡咯、吡啶类等杂环化合物,某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物,如苯甲醇、苯乙醇等。氨基酸含量与烟草制品的吃味有着密切的关系,氨基酸在燃烧裂解过程中一般形成具有刺激性的含氮化合物,对烟气香吃味产生不良影响,个别氨基酸还产生HCN等危害健康的烟气成分。一般说来,氨基酸含量太高,烟气辛辣、味苦、刺激性强烈;含量太低时烟气则平淡无味缺少丰满度。因此对氨基酸的分析是一项很有意义的工作,二十世纪60年代以来,国内外在这方面做了大量的工作[1-5]。 植物游离氨基酸样品的制备,国内外采用的提取剂和纯化方法各不相同。据文献报道[6-7],盐酸、不同浓度的乙醇溶液均可以用来提取植物组织中的游离氨基酸;提取液纯化则有用阳离子交换树脂、5%磺基水杨酸、活性炭或乙醚等方法。本实验对不同的提取方式和不同的纯化方法进行了对比研究,确定提取烟叶中游离氨基酸的较佳提取剂和纯化方法。提取、纯化后的样品,采用OPA、FMOC联合柱前衍生反相高效液相色谱法对烟叶中的游离氨基酸进行了测定。该方法使带氨基和亚氨基基团的氨基酸能够被同时测定,且得到较好的定性定量结果。 1 实验 1.1 仪器 Agilent公司HP1100型高效液相色谱仪(带可变波长紫外检测器和自动进样器),PE公司Lambda Bio40 紫外-可见分光光度计。 1.2 试剂 正缬氨酸(Norvaline,内标),OPA ,FMOC,均为色谱纯,Agilent公司提供;硼酸缓冲溶液,Agilent公司提供; 醋酸钠(NaAc),分析纯,中国医药(集团)上海化学试剂公司;三乙胺(TEA),四氢呋喃(THF),乙腈(CH3CN),甲醇(MeOH),均为色谱纯,Fisher公司试剂; 氨基酸标样包括:天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、丝氨酸(Ser)、组氨酸(His)、甘氨酸(Gly)、苏氨酸(Thr)、丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、酪氨酸(Tyr)、胱氨酸(Cys)、缬氨酸(Val)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、脯氨酸(Pro),均为生化试剂,中国医药(集团)上海化学试剂公司; 苯乙烯阳离子交换树脂(732型),天津树脂厂。 1.3 样品处理 将烟叶在烘箱中恒温40℃烘干至恒重,粉碎,过80目筛,筛下物为实验用烟样粉末,置于广口瓶中备用。准确称取烟样粉末1.000g于干燥的洁净试管中,用一定浓度的乙醇溶液室温超声波提取半小时,过滤,相同浓度的乙醇溶液洗涤,再提取一次,合并后的滤液用阳离子交换柱洗脱,然后用95ml 4mol/L氨水淋洗阳离子交换柱,淋洗液恒温浓缩至干,最后用3ml 0.1mol/L稀盐酸溶液溶解浓缩物,将此溶液离心分离20min,0.45μm微孔滤膜过滤,加入浓度为5nmol/μ1的内标10μ1,定容至50ml,HP1100液相色谱仪进行氨基酸分析。 样品自动柱前衍生化:Agilent公司G1313A自动进样器进样。程序为:吸取5μl硼酸缓冲液,再吸取1μ1 OPA试剂,洗针一次,吸取样品2μl,原位混合6次。吸取1μl FMOC试剂,洗针一次,原位混合3次,进样。 1.4 色谱条件 色谱柱:Hypersil AA-ODS C18 2.1×200mm 流动相A:1.36±0.025g醋酸钠,加入500ml纯水溶解,加90μl三乙胺,用1%醋酸调pH=7.20±0.05,再加入1.5ml四氢呋喃,混合均匀。 流动相B:1.36±0.025g醋酸钠,加入100ml纯水溶解,用1%醋酸调pH=7.20±0.05,将此溶液加至200ml乙腈和200ml甲醇的混合物中,并混合均匀。 流速:0.45ml/min 柱温:40℃ 紫外检测波长: 0~16min, 338nm; 16~25min,262nm 淋洗梯度:见表1 表1 流动相的淋洗梯度表 Table 1 The gradient time table of mobile phase 序列 时间(min) 流动相A(%) 流动相B(%) 流速(ml/min) 1 0.00 100.0 0.0 0.450 2 15.50 40.0 60.0 0.450 3 18.00 0.0 100.0 0.450 4 21.00 0.0 100.0 0.800 5 23.90 0.0 100.0 0.800 6 24.00 0.0 100.0 0.450 7 25.00 100.0 0.0 0.450 1.5 氮基酸的定性 用标样色谱图、文献参照和标样加入的方法,通过对照保留时间进行定性,对氨基酸的出峰顺序加以确认。 1.6 内标法定量 准确移取浓度为10 pmol/μ1、25 pmol/μ1、50 pmol/μ1、100 pmol/μ1、250 pmol/μ1、500 pmol/μ1、1000 pmol/μ1的氨基酸混合标样100μl于带内衬管的样品瓶中,再加入250pmol/μ1内标溶液100μl,充分混合,液相色谱分析,仪器自动计算各氨基酸的标准曲线。

  • 氨基酸液相色谱分析法

    正准备做饲料中的氨基酸分析,毫无经验,大家有没有利用Agilent 1200LC进行氨基酸分析的详细方法步骤啊,可否共享,非常感谢!

  • 液相色谱测海水氨基酸,不出峰,求助

    液相色谱测海水氨基酸,不出峰,求助

    通过高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生方法(Kaiser & Benner, 2005)测定海水中的氨基酸,如下图所示,峰非常低,有的低到积不出来,而且本来在26min以后该出的峰根本分不出来,不仅尝试了海水还尝试了湖水,依旧是峰很低,低到几乎没有,但同时测相同地方沉积物里的氨基酸就出峰正常,这到底是为什么。具体采用的方法为:荧光检测器检测,激发波长为330nm,发射波长为450nm。色谱柱为Echipse AAA分析柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)。分离过程中使用梯度洗脱,流动相A为甲醇和乙腈的混合溶液,体积比为67:33,流动相B为40 nmol/L磷酸二氢钾溶液,(pH=7.20)。[img=,690,91]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/08/202208161124242316_6632_5033091_3.png!w690x91.jpg[/img]

  • AQC衍生-液相色谱仪测定氨基酸的求助

    最近要测试溶液中的16种氨基酸,没有氨基酸测定仪,只有岛津的高效液相色谱仪。以前没有测过这些,故求助一下。首先,我现在头疼的是AQC衍生剂去哪里买,Waters的不考虑,太贵了。请问大家有没有推荐的别的可以用的衍生剂?

  • 液相色谱测氨基酸时氨基酸衍生以后可以存放几天?

    小弟用液相色谱测氨基酸时,用2,4-二硝基甲苯衍生以后放入棕色容量瓶中,之后放入冰箱里面保存。可是过了4天以后再走样时候发现单标里面出来几个小峰,标品峰也变小了,而且峰型就像是2个峰没分开似的,想咨询一下大侠们这是不是衍生物发生了降解呀,谢谢!

  • 高效液相色谱测氨基酸含量

    请问各位老师,我用岛津高效液相色谱测量氨基酸含量时,用的OPA柱前衍生化法,可是同样条件下一个样品,测量结果的保留时间,峰面积的重现性很差,峰面积明显不同,保留时间差0.5分钟左右,可是师姐用这台仪器测量藻毒素重现性就没有问题,我可以认为是OPA衍生不稳定导致的吗?会有这种可能吗?那大家一般是如何解决的呢?谢谢了,求救救孩子趴!

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  • 液相色谱--柱后衍生法(专用柱后衍生试剂包)测定糕点中氨基酸的含量

    [b](1)参考标准GB/T 5009.124-2003 《食品中氨基酸的测定》(2)应用背景[/b][align=left][b]我国大多数国民中有近70% 的蛋白质由粮食供给。蛋白质的营养质量主要取决于氨基酸的组成与比例,尤其是必需氨基酸的组成与比例,植物性蛋白往往相对缺少赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸,如大米和面粉蛋白质中赖氨酸含量最少。氨基酸的含量和比例是糕点营养评价的重要组成部分。[/b][/align][b](3)推荐解决方案高效液相色谱仪柱后衍生法色谱条件: 色谱柱:SMT SCX 阳离子交换柱4. 6 mm × 150 mm,5 μm; 流速:0.4mL/min; 进样体积:20μL;柱温:程序升温:初始温度34℃保持12min,以1.3℃升温至65℃保持16.1min,接着以1.3℃/min升温至70℃保持11.1min,然后以-40℃降温至34℃保持7min;检测器波长:570nm。[img]http://www.tianjinlanbo.com/uploads/allimg/151229/09535331c-3.png[/img] 柱后衍生条件:衍生剂:茚三酮;流速:0.3mL/min; 衍生温度:45℃;标准色谱图:[img]http://www.tianjinlanbo.com/uploads/allimg/151229/095353DN-4.png[/img](4)推荐配置:[/b][list][*][b]Series4000系列四元高压梯度液相色谱仪[/b][*][b]UVD紫外检测器[/b][*][b]兰博PCR柱后衍生系统[/b][*][b]AS1000自动进样器[/b][*][b]SMT C18 4. 6 mm × 150 mm,5 μm[/b][*][b]转速≥5000转/分钟的离心机[/b][/list]

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    [b]职位名称:[/b]氨基酸分析仪、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]、液相色谱仪应用工程师[b]职位描述/要求:[/b]1.进行氨基酸分析仪、液相色谱仪、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]等仪器的安装、维修、技术培训、客户问题解答等;2.协助销售经理做售前技术交流、应用培训;配合销售人员整体工作。要求:1.生物、分析化学、化工、食品等相关专业,本科及以上学历,熟悉色谱仪相关仪器。有使用氨基酸分析仪、液相色谱、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]经验者优先。2.有较强的沟通能力,工作细心、踏实、责任心强。3.有团队合作精神,能够承受压力和挑战;能够适应出差。[b]公司介绍:[/b] 赛卡姆(北京)科学仪器有限公司主要代理进口色谱仪器及耗材配件,主要产品包括德国sykam(赛卡姆)氨基酸分析仪、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱仪[/color][/url]、分析型及半制备型液相色谱仪、各种液相色谱泵、检测器等模块;德国SCAT安全盖(试剂瓶安全盖、废液瓶安全盖等);Tigerkin系列色谱耗材、色谱柱、固相萃取(SPE)柱、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱等。 我公司坚持高端路线,旨在为中国用户引进世界一流的仪器设备及服务。公司独家代理的s...[url=https://www.instrument.com.cn/job/user/job/position/70879]查看全部[/url]

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