色谱缓冲盐自动配置仪

有3种方法可用于配制具有精确pH的缓冲盐流动相，例如需要配置1 L的20 mM醋酸铵缓冲液，pH为4.0，可按照下述3种方式配制。（1）精确地称取一定量的醋酸铵以及醋酸，定容与1000 mL纯化水中。（2）分别配置20 mM的醋酸铵溶液以及20 mM的醋酸溶液，以醋酸溶液调节醋酸铵溶液pH到4.0。（3）配制20 mM的醋酸铵溶液，使用冰醋酸调节pH到4.0，该种方法由于使用了醋酸调节pH，醋酸铵缓冲盐的浓度要略微大于20 mM。在反相HPLC中，分析方法对缓冲盐浓度的轻微变化并不是那么敏感。但是，对于离子交换色谱，亲水相互作用色谱以及Mixed-Mode色谱来说，由于分析方法对离子浓度比较敏感，该种配制方法需要尽可能避免。此外，如果缓冲盐溶液的pH需要调整到缓冲pH范围以下时，此时需要避免该种配置方式，因为此时需要添加的醋酸量已经会使得缓冲盐的浓度发生很大改变，足以影响分析方法的重现性。在配置缓冲盐流动相时，一般只对水相部分调节pH而不对有机相调节pH。此外，需要避免预先将水相与有机相混合之后再调节pH。此时pH计测出的结果并不能够反应真实情况，pH计所测定的结果也受到温度的严重影响。但有时，不可避免地需要使用该配置方法，如在使用Mixed-Mode色谱柱分析多元酸的时候，需要预先对流动相混合之后调节pH，此时需要注意在调节pH的时候，对pH计所处的环境温度进行严格控制。

液相条件中A相为磷酸盐缓冲液ph7.0，现在想改方法进质谱，换成醋酸盐缓冲盐，或者醋酸铵，请问怎么配制

在做液相色谱测定天然提取物测定时用甲醇水系统不能将其峰分开，需要加缓冲溶剂，反相高效液相通常加什么缓冲剂，怎么配制？

大家好~~我是液相色谱仪使用新手，在做棒曲霉素前处理的时候要配制乙酸盐缓冲液，但具体怎么配制我不太清楚，希望大家帮帮忙~~谢谢

[align=center][b][font=宋体][size=18pt]三招教你利用缓冲盐解决色谱难题[/size][/font][/b][/align][font=宋体][size=12pt]分析工作者在日常工作中，经常会遇到色谱压力升高的现象，随之而来的是柱效的下降、保留时间的异常和色谱峰拖尾等不良现象。此时我们应该考虑流动相中缓冲盐是否加入不当，缓冲盐的使用可调节流动相的pH值，缓解色谱峰拖尾，而添加量过多或类型不对均会对色谱产生不良影响。我们在实验过程中如果使用到极性柱和氨基柱，更应该注意流动相中缓冲盐的添加量，如果过高，缓冲盐随着流动相内水相的提高而析出，造成的问题是色谱柱堵塞，很难清洗。因此本文为大家分享一下缓冲盐的使用经验，希望可以帮助大家顺利开展分析实验。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]首先我们明确在流动相中添加缓冲盐的目的:[/size][/font][font=宋体][size=12pt]1.[/size][/font][font=宋体][size=12pt]添加缓冲盐控制流动相pH值，有稳定缓冲的作用；2.对峰型起到改善作用，可以改变出峰时间，峰型前沿和拖尾，分离度各个因素。柠檬酸也是一种缓冲试剂，有时候也起到稳定剂，具有防腐剂的效果，也可改善峰形，抑制拖尾等。一般要根据化合物的结构来确定。例如有羧基的话一般加0.05%或0.1%的三氟乙酸，有碱性基团的话一般加0.05%的三乙胺。在质谱检测器的色谱方法中，一般用挥发性缓冲盐，例如甲酸铵、乙酸铵等，而在流动相中一般把酸性试剂和对应的缓冲盐一起添加，如流动相中有甲酸，一般添加甲酸铵缓冲盐。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]我们在使用缓冲盐的时候要注意缓冲盐溶液的过期时间，一般两个月后的溶液需要重新配置，因为其挥发性。我们经过精密仪器称量和溶液配制后，在校准后的pH计上得到了不同浓度缓冲盐的pH值，希望可以帮到大家顺利解决分析难题。5mM FANH4溶液的pH=5.8；5mMFANH4+0.1%FA溶液的pH=2.9；5mMFANH4+0.01%FA溶液的pH=3.85；10mM AcNH4溶液的pH=6.65；5mM AcNH4溶液的pH=6.59。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]如果出现柱压升高，我们应该考虑是否缓冲盐使用不当，使得缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。如果出现相同化合物的保留时间发生变化，我们也应该考虑是否缓冲盐使用不当造成的影响。而柱效下降，一般是有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；ii）凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此液相色谱仪用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]因此在缓冲盐的流动相中使用前和使用后的处理都是有讲究的哦！[/size][/font][font=宋体][size=12pt]使用前的处理：在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时）流动相进行分析时，如果液相色谱仪分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害. .用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该液相色谱仪的色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动 相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]另外还需要注意：避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。实验后液相色谱仪不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路（拆下柱子，走30ml，再用5倍水冲洗）可以避免液路的堵塞。选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%-10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好.如果用纯水冲，容易造成键合的碳链流失，最好用5%-10%甲醇水溶液冲. 可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变，这样冲洗柱子比较稳妥。[/size][/font][font=宋体][size=12pt]今天的分享到此结束，感谢仪器信息网提供原创大赛平台让大家互相学习！[/size][/font]

在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：1)柱压升高; 原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高;2)相同化合物的保留时间发生变化; 原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化;3)柱效下降; 原因：i)有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降; ii)凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。流动相中缓冲盐的正确使用方法1. 使用前的处理: 在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。 原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。 理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。2. 使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动 相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳. 缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。使用缓冲液要注意几点1：避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2：缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3：实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4：使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。5：清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。6：长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。7：选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好. 如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲. 可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。色谱柱异常及解决办法柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。不同厂家的色谱柱柱压会有所差别，相同流动相和温度的条件下，不同厂家的新色谱柱有的柱压可 能相差4、5个MPa，特别是低端和高端色谱柱之间，这一区别比较明显。这是由色谱柱厂家所选用的硅胶基质及其生产条件决定的，这种差异的存在是正常的。同时需要说明的一点是，柱压与柱效有一定的关系，通常柱效高的色谱柱柱压相对而言会高一点，但柱压高的色谱柱并不一定就具有高柱效。在色谱柱的使用过程中柱压通常会出现两种升高的形式：第一种是，随着使用时间的延长色谱柱柱压慢慢上升，这是正常的;第二种是，使用过程中(流动相和温度没有改变的条件下)色谱柱压力突然升高很多。这种压力突然升高的现象，通常是由工作人员操作不当引起的，原因：1)样品太脏，使用前没有过滤，导致柱筛板堵塞. 2)样品含有的杂质在流动相中的溶解性不是很好，与流动相混合后析出，导致柱塞板堵塞。 3)使用缓冲盐，处理错误，缓冲盐在色谱柱中析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙。解决办法对于第二种，即柱压突然升高的情况，通常有以下几种解决办法：1)将色谱柱反接，用含水比例较大的流动相进行冲洗，冲洗时点。2)色谱柱进样一端的筛板取下，分别放在水中和甲醇中超声或更换新的柱筛板。如果柱效没变，但柱压仍然较高，则应考虑进样端填料受污染的问题，因此除了取下进样端筛板超声外，还需要挖掉进样端的部分填料，挖去填料之前先检查一下填料的颜色，如果填料的颜色发生了变化，则应该挖掉直到见到白色的填料为止。挖掉后色谱柱将出现一个缺口，填补缺口的填料可以从另一支相同品牌、相同型号的报废色谱柱的出口端获得，填料用有机溶剂如甲醇等调成糊状装入缺口处，压紧刮平，再装上筛板. 高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法 在我们进行液相色谱分析时，有时会遇到这样一个问题：系统的流路中存在气泡.由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降;气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏. 造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡;二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净;三是在注入样品时不注意混入了空气. 为了避免这类问题的出现，液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。柱子使用经验谈:色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性.1、样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。2、流动相的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。3、流动相流速的选择： [color=#3e3e3

在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：1. 柱压升高;原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高;2. 相同化合物的保留时间发生变化;原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化;3. 柱效下降;原因：1)有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降; 2)凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。流动相中缓冲盐的正确使用方法1. 使用前的处理: 在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。 原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。 理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。2. 使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动 相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳. 缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。使用缓冲液要注意几点1. 避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2. 缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3. 实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4. 使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。5. 清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。6. 长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。7. 选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好. 如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲. 可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。色谱柱异常及解决办法柱压与硅胶基质的形态(如无定形或球形硅胶)、颗粒大小、填料合成条件、装柱条件、所用流动相和分析时的温度有关。不同厂家的色谱柱柱压会有所差别，相同流动相和温度的条件下，不同厂家的新色谱柱有的柱压可 能相差4、5个MPa，特别是低端和高端色谱柱之间，这一区别比较明显。这是由色谱柱厂家所选用的硅胶基质及其生产条件决定的，这种差异的存在是正常的。同时需要说明的一点是，柱压与柱效有一定的关系，通常柱效高的色谱柱柱压相对而言会高一点，但柱压高的色谱柱并不一定就具有高柱效。在色谱柱的使用过程中柱压通常会出现两种升高的形式：第一种是，随着使用时间的延长色谱柱柱压慢慢上升，这是正常的;第二种是，使用过程中(流动相和温度没有改变的条件下)色谱柱压力突然升高很多。这种压力突然升高的现象，通常是由工作人员操作不当引起的，原因：1. 样品太脏，使用前没有过滤，导致柱筛板堵塞.2. 样品含有的杂质在流动相中的溶解性不是很好，与流动相混合后析出，导致柱塞板堵塞。3. 使用缓冲盐，处理错误，缓冲盐在色谱柱中析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙。解决办法对于第二种，即柱压突然升高的情况，通常有以下几种解决办法：1. 将色谱柱反接，用含水比例较大的流动相进行冲洗，冲洗时点。2. 色谱柱进样一端的筛板取下，分别放在水中和甲醇中超声或更换新的柱筛板。如果柱效没变，但柱压仍然较高，则应考虑进样端填料受污染的问题，因此除了取下进样端筛板超声外，还需要挖掉进样端的部分填料，挖去填料之前先检查一下填料的颜色，如果填料的颜色发生了变化，则应该挖掉直到见到白色的填料为止。挖掉后色谱柱将出现一个缺口，填补缺口的填料可以从另一支相同品牌、相同型号的报废色谱柱的出口端获得，填料用有机溶剂如甲醇等调成糊状装入缺口处，压紧刮平，再装上筛板. 高效液相色谱系统中气泡对检测的影响及其解决方法 在我们进行液相色谱分析时，有时会遇到这样一个问题：系统的流路中存在气泡.由于气泡的存在，会造成色谱图上出现尖锐的噪声峰，严重时会造成分析灵敏度下降;气泡变大进入流路或色谱柱时会使流动相的流速变慢或不稳定，使基线起伏. 造成上述现象的主要原因有三条：一是流动相溶液中往往因溶解有氧气或混入了空气而形成气泡;二是系统开始工作时未能将流路中的空气驱赶干净;三是在注入样品时不注意混入了空气. 为了避免这类问题的出现，液相色谱实际分析过程中必须重视对流动相进行脱气处理。柱子使用经验谈:色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性.1. 样品的前处理：a、最好使用流动相溶解样品。b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。2. 流动相的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应(特殊情况除外)。c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分离效果;同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。3、流动相流速的选择： 因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。 当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。注意： a.由于甲醇廉价，对于反相柱推荐使用甲醇体系(必须使用乙腈的场合除外)。b.对于正相柱推荐使用沸程为30-60℃的石油醚或提纯后的己烷作流动相，没有提纯的己烷不得使用。用水最好使用超纯水(电阻率大于18兆欧)，去离子水及双蒸水中含有酚类杂质，有可能影响分析结果。c.含水流动相最*在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。d.流动相要求使用0.45 μm滤膜过滤，除去微粒杂质。e.使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。冲柱子的目的只要是有机溶剂就行,不过黏度不要太大,因为有机溶剂能够防止细菌生长,冲柱子的目的就是为了防止细菌生长堵塞仪器系统和柱子. 一般甲醇和乙腈相互冲洗是没有问题的，但乙腈要比甲醇价格贵的 新柱子:首先要看你买的柱子是否可以把你要的峰和其他的峰

在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响： 　　1）柱压升高；　　原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。　　2）相同化合物的保留时间发生变化；　　原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。　　3）柱效下降；　　原因：　　i 有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；　　ii 凝结在键合相表面，使C18 碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

[color=#444444]想配制用于高效液相色谱的缓冲液，有磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，不知道配多大浓度，不知道怎么配，最好浓度小点，谢谢[/color]

在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：1）柱压升高；原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。2）相同化合物的保留时间发生变化；原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。3）柱效下降； 原因：i 有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；ii 凝结在键合相表面，使C18 碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

大虾们好，我想配制硼砂——盐酸的缓冲溶液，pH是8.0，8.5，9.0.但是在配制过程中，需要控制缓冲液的离子强度在50.所以想咨询一下有前辈之前配制过这样的缓冲吗？或者用什么缓冲盐可以代替硼砂-盐酸缓冲？？

缓冲盐使用不当对色谱柱的影响在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：1）柱压升高；原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。2）相同化合物的保留时间发生变化；原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。3）柱效下降；原因：i 有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；ii 凝结在键合相表面，使C18 碳

缓冲盐使用不当对色谱柱有什么影响？在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH值，缓冲盐的不当使用对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响：1）柱压升高； 原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高。2）相同化合物的保留时间发生变化；原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。3）柱效下降；原因：i）有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；ii）凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，流动相中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。

流动相中含有缓冲盐时，大的原则是：使用前要过渡，使用后要清洗（清洗包括两个步骤，一个步骤是用来清洗缓冲盐，另一个步骤是用来清洗强保留物质的），具体请按如下方式保养色谱柱：1.使用前的过渡：用乙腈：水＝10：90（如果是甲醇体系则用甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速过渡30min（目的是防止缓冲盐在进入柱子时析出）；2.一天分析完成后，即使用后的清洗：1）用乙腈：水＝10：90（或甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速反向冲洗45min（目的是洗去缓冲盐，防止缓冲盐在色谱柱内存留引起使用寿命下降）；2）再用乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）1ml/min流速反向冲洗45min，（目的是洗去分析过程中积累的强保留物质，防止强保留物质在色谱柱内进一步积累，影响以后的分析，也防止强保留物质的积累导致的柱压升高），然后色谱柱保存在乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）中；3. 如果做完一种化合物，紧接着要做另外一种化合物，由于流动相等条件不同，则请先按步骤2清洗色谱柱，再使用色谱柱；要是接下来做的样品的流动相里也含有缓冲盐，也请在步骤2清洗过后再按步骤1的方式来过渡。注意：1）乙腈：水＝10：90或甲醇：水＝10：90容易长菌，温度越高越容易长菌，实验表明，在28度条件下保存至第5天时发现长菌，不宜多配。 2）Welch公司的色谱柱都能反向冲洗或使用，如果您使用的色谱柱不能反向冲洗或使用，则无需反冲，正向冲洗本方法也适用，只是反冲的效果相对较好。

[color=#444444]液相色谱，因为进样样品PH的不同导致了出峰面积不同，老师说让我配置磷酸盐缓冲液，虽然在百度上找到了不同PH的磷酸盐配置方法，但是缓冲液的缓冲能力不就配置好的PH的正负1，PH为7的缓冲液对PH为5的溶液是不是就没有缓冲能力了？，那我样品是挺酸的，那怎样才能调节到中性啊？我直接配置PH为7的缓冲液行不行？跪求！！！[/color]

流动相中含有缓冲盐时，大的原则是：使用前要过渡，使用后要清洗（清洗包括两个步骤，一个步骤是用来清洗缓冲盐，另一个步骤是用来清洗强保留物质的），具体请按如下方式保养色谱柱：1、使用前的过渡：用乙腈：水＝10：90（如果是甲醇体系则用甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速过渡30min（目的是防止缓冲盐在进入柱子时析出）；2、一天分析完成后，即使用后的清洗：1）用乙腈：水＝10：90（或甲醇：水＝10：90）以1ml/min流速反向冲洗45min（目的是洗去缓冲盐，防止缓冲盐在色谱柱内存留引起使用寿命下降）；2）再用乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）1ml/min流速反向冲洗45min，（目的是洗去分析过程中积累的强保留物质，防止强保留物质在色谱柱内进一步积累，影响以后的分析，也防止强保留物质的积累导致的柱压升高），然后色谱柱保存在乙腈：水＝90：10（或甲醇：水＝90：10）中；3、如果做完一种化合物，紧接着要做另外一种化合物，由于流动相等条件不同，则请先按步骤2清洗色谱柱，再使用色谱柱；要是接下来做的样品的流动相里也含有缓冲盐，也请在步骤2清洗过后再按步骤1的方式来过渡。1）乙腈：水＝10：90或甲醇：水＝10：90容易长菌，温度越高越容易长菌，实验表明，在28度条件下保存至第5天时发现长菌，不宜多配。 2）如果您使用的色谱柱不能反向冲洗或使用，则无需反冲，正向冲洗本方法也适用，只是反冲的效果相对较好。

在液相色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调解流动相的pH值，缓冲盐的恰当选择能够改善分离效果和峰形。在日常实验中，经常用到的缓冲盐有哪些？如何正确选择和使用缓冲盐？液相色谱在使用缓冲盐时有哪些注意事项？欢迎讨论。

解答：1、避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2、缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3、实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4、使用缓冲液要及时掌握pH范围，做到胸中有数。5、清洗液路和柱子时，有温控可加热到30℃易于冲洗。6、长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml，再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。7、选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好。如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲。可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。

1、避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2、缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3、实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4、使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。5、清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。6、长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。7、选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好. 如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲。可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。

缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。但是使用缓冲液要注意几点：1、避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2、缓冲液最好要现配现用，往往缓冲液是良好的菌类培养液，隔天或放置长时间实验时会有很多怪现象发生。3、实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4、使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。5、清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。6、长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路（拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗）可以避免液路的堵塞。7、选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦

[color=#444444]对样品进行HPLC分析，除主峰（95%）外，还有两个杂质峰（2%、3%左右），流动相中有四丁基溴化铵做缓冲盐，想做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]，确定主峰和杂质的结构，以便进一步进行工艺优化。[/color][color=#444444]但是，联系测试单位说，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的流动相不能有缓冲盐，否则在质谱测试过程中缓冲盐会结晶析出，污染质谱，但我们尝试过不加缓冲盐进行液相色谱分析，三种组分完全分不开，现在不知道怎么解决，恳请大家不吝指教[/color]

才接触液相色谱很多不懂。不可以直接全用缓冲盐？一个是水相一个是有机相，为啥要2个混合在一起。是为了改善分离效果，还是为了杀菌？什么的保护柱子？

在色谱分析过程中常常需要使用缓冲盐来调节流动相的pH 值，但是缓冲盐的不当使用，对色谱柱可能造成柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等影响http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09508.gif：1)柱压升高; 原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，堵塞塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，引起柱压升高;2)相同化合物的保留时间发生变化; 原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化;3)柱效下降; 原因：i)有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降;ii)凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。流动相中缓冲盐的正确使用方法http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09505.gif1. 使用前的处理: 在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。 原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。 理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的(特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时)流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。2. 使用后的处理：用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动 相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。用与分析时含水比例相同的流动相(与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐)进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳. 缓冲液可以提供离子平衡的反离子，并使流动相保持一定的离子强度和ph值，减少拖尾。使用缓冲液要注意几点http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/default/em09503.gif1：避免使用盐酸盐，盐酸盐对钢质有腐蚀作用。2：缓冲液要现配现用3：实验后不可用有机溶剂直接过度，有机溶剂会处使盐类析出，造成液路或色谱柱堵塞，可用95：5的水甲醇冲洗。4：使用缓冲液要及时掌握ph范围，做到胸中有数。5：清洗液路和柱子时，有温控可加热到30摄氏度易于冲洗。6：长时间用缓冲溶液要注意观察接头处有无析出，若有白色盐类析出，可考虑一定周期用10%硝酸冲洗一下液路(拆下柱子，走30ml,再用5倍水冲洗)可以避免液路的堵塞。7：选择缓冲液要用可靠的试剂，避免不纯的盐类造成不必要的麻烦。***************************如果流动相中有机溶剂的比例很高是不能用来冲洗缓冲盐的，是洗不出来的。通常C18柱先用5%~10%的甲醇冲洗，是可以把缓冲盐冲洗出来的，然后用纯的有机溶剂来保护柱子。最好的方法是使用与流动相相同浓度不含盐的流动相进行清洗。但就是速度慢一些。用水是为了快速替换，一般在15分钟以内最好，且用0.8的流速较好. 如果用纯水冲，容易造成键合的碳链的流失，最好用5%~10%甲醇水溶液冲. 可以用纯水代替流动相中的缓冲液，有机相不变。这样冲洗柱子比较稳妥。（文章来源：本文由实验与分析编辑整理)

[color=#444444]谁能告诉我20mM，pH=4的三乙胺醋酸缓冲液怎么配制吗？[/color][color=#444444]我现在需要使用离子对色谱分离我的样品，有文献报道，利用 20mM，pH=4的三乙胺醋酸缓冲液，C18柱子能够很好的分离，我现在采用同样的方法分离，峰能够分开，但是峰图很难看，不好定量！谁能告诉我 “20mM，pH=4的三乙胺醋酸缓冲液”如何配置呢，网上有很多中配方，我不知道到底用那种是先配20mM三乙胺，在用醋酸调节pH吗？我是先向 800ml水中加入2.78ml三乙胺，然后用醋酸挑pH值到4后，在加水定溶到1L,不知道是不是这么配制，请配过这种缓冲液的高手指教一下！！[/color]

缓冲液是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。PH缓冲系统对维持生物的正常pH值，正常生理环境起重要作用。多数细胞仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们时蛋白质、重碳酸盐缓冲体系。每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和器官中是不同的。 在生化研究工作中，常常要用到缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到我们工作的成效。如果提取酶实验体系的pH值变化或变化过大，会使酶活性下降甚至完全失活。所以我们要学会配制缓冲溶液。 由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。生化实验室常常用的缓冲系主要有磷酸、柠檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tiris（三羟甲基氨基甲烷）等系统，在生化实验或研究工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种离子。如硼酸盐、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的反应。 硼酸盐：硼酸盐与许多化合物形成复盐、如蔗糖。 柠檬酸盐：柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。 磷酸盐：在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。而且它在pH7.5以上时缓冲能力很小。 三羟甲基氨基甲烷：它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起抑止的作用。其主要缺点时温度效应。这点往往被忽视，在室温pH是7.8的Tris一缓冲液，在4℃时是8.4，在37℃时是7.4，因此，4℃配制的缓冲液拿到37℃测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。而且它在pH7.5以下，缓冲能力很差。 缓冲液的pH值由哪些因素决定？ 设缓冲系统的弱酸的电离常数为K（平衡常数），平衡时弱酸的浓度为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式： 根据此式可得出下列几点结论： （1）缓冲液的pH值与该酸的电离平衡常数K及盐和酸的浓度有关。弱酸一定，但酸和盐的比例不同时，可以得到不同的pH值。当酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。 （2）酸和盐浓度等比例也增减时，溶液的pH值不便。 （3）酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，一般地说缓冲液有效缓冲范围为PK±1pH。 从上述可知，只要知道缓冲对的PK值，和要配制的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度）时，可按公式计算出[盐]和[酸]的量。这样算涉及到对数的换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，经计算已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了表格。讲义附录部分节录有磷酸缓冲液的配制表。只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可计算处所用缓冲剂的比例和用量。例如配制500nmpH5.8浓度为0.1M磷酸缓冲液。 经查表知pH5.8浓度为0.2MNa2HPO48.0毫升，而0.2MNa2HPO492.0毫升。依此可推论出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1MNa2HPO48.0毫升，而0.1MNa2HPO4需要92.0毫升。 所以500ml0.1M磷酸缓冲液需要Na2HPO4量为:需Na2HPO4量为 :计算好后，按计算结果称好药品，放于烧杯中，加少量蒸馏水溶解，转移入50ml容量瓶，加蒸馏水至刻度，摇匀，便得所需的缓冲液。 各种缓冲溶液的配制，均按下表按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确的浓度才能进行，如醋酸、NaOH等。

关于磷酸盐缓冲溶液的配制，都忘了~~~使用磷酸氢二钾与磷酸二氢钠，配pH7.4 ，75mM的磷酸盐缓冲溶液，具体怎么配？

配制一系列Ph值为5、6、7、8、9、10的缓冲盐如何配制呢？请高手指点，谢谢

请问PH6.0的磷酸盐缓冲盐如何配制，谢谢。

各位大虾：请教：缓冲盐对高效液相色谱的影响，对泵，柱子等，走完缓冲盐后怎么冲洗柱子和流路？

我再次谢谢大家，基本明白了，一种溶液当浓度固定时，在此还有个问题：氨—氯化铵缓冲液的配制是称取20g 氯化铵溶于500毫升除盐水中，加入150毫升浓氨水(密度0.9g /ml )以及5.0克乙二胺四乙酸酸镁二钠盐用除盐水稀释至1000mL混匀，下午去买了乙二胺四乙酸二钠盐，没除盐水用桶装纯净水代替，按上面所说配制完成后，为何用上上面所配氨—氯化胺缓冲液滴定自来水，都测不到硬度，铬黑T指示剂是好的，大家能帮忙分析溶液配制出错在什么地方？