色谱中保留值定性方法

[align=center][b][size=24px]气相色谱仪分析的定性依据及定性方法[/size][/b][/align][color=#000000] [size=18px]气相色谱仪[/size][/color][size=18px]的色谱分析包括色谱定性分析和定量分析。今天为大家浅析气相色谱仪的定性分析依据和定性分析方法，仅供色谱工作者参考交流。　　(一)气相色谱仪的定性分析依据：气相色谱主要功能不仅是将混合有机物中的各种成分分离开来，而且还要对结果进行定性及定量分析。所谓定性分析就是确定分离出的各组分是什么有机物质，而定量分析就是确定分离组分的量有多少。色谱在定性分析方面远不如其它的有机物结构鉴定技术，但在定量分析方面则远远优于其它的仪器方法。　　有机物进入气相色谱后得到两个重要的测试数据:色谱峰保留值和面积，这样气相色谱可根据这两个数据进行定性定量分析。色谱峰保留值是定性分析的依据，而色谱峰面积则是定量分析的依据。　　(二)气相色谱仪定性分析方法：气相色谱的定性分析方法主要有保留值定性法、化学[color=#000000]试剂[/color]定性法和检测器定性法。气相色谱的保留值有保留时间和保留体积两种，现在大多数情况下均用保留时间作为保留值。在相同的仪器操作条件和方法下，相同的有机物应有同样的保留时间，即在同一时间出峰。但必须注意：有同样保留时间的有机物并不一定相同。　　气相色谱保留时间定性分析方法就是将有机样品组分的保留时间与已知有机物在相同的仪器和操作条件下保留时间相比较，如果两个数值相同或在实验和仪器容许的误差范围之内，就推定未知物组分可能是已知的比较有机物。但是，因为同一有机物在不同的色谱条件和仪器中保留时间有很大的差别，所以用保留时间值对色谱分离组分进行定性只能给初步的判断，绝对多数情况下还需要用其它方法作进一步的确认。一个最常用的确证方法是将可能的有机物加到有机样品中再进行一次气相色谱仪分析，如果有机样品中确含已知有机物的组分，则相应的色谱峰会增大。这样比较两次色谱图峰值的变化，就可以确定前期初步推断是否正确。[/size]

液相色谱中保留时间突然发生漂移该怎么办？

除了利用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]的保留值定性外还有哪些定性方法

保留时间不重现有两种不同的情况：既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下：　　一色谱柱平衡　　如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。　　流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。　　二固定相稳定性　　固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH为4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。　　经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等　　三色谱柱污染　　保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。　　样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。些根源通常是样品基质。如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。　　避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。　　使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。　　四流动相组成　　流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。　　五疏水坍塌　 当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱（如WatersSymmetryShieldRP色谱柱）或非端基封口的色谱柱（如WatersResolve色谱柱）也可避免发生坍塌。

保留时间不重现有两种不同的情况：既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下：　　一色谱柱平衡　　如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。　　流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。　　二固定相稳定性　　固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH为4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。　　经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等　　三色谱柱污染　　保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。　　样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。些根源通常是样品基质。如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。　　避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。　　使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。　　四流动相组成　　流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。　　五疏水坍塌　 当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱（如WatersSymmetryShieldRP色谱柱）或非端基封口的色谱柱（如WatersResolve色谱柱）也可避免发生坍塌。

保留时间是色谱法的常用术语，是指被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间，当提到保留时间、死时间、调整保留时间时，你是否清楚？当涉及[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]中保留时间波动时，你是否明白，本篇文章为你做出了概括！一 区分几个概念保留时间(T)：从进样开始到某个组分的色谱顶点的时间间隔称为该组分的保留时间。即从进样到柱后某组分出现浓度极大时的时间间隔。死时间(t)：分配系数为0的组分的保留时间称为死时间。通常将空气或者甲烷视为此种组分，用来测定死时间。调整保留时间（t）：某组分由于溶解（或者吸附）于固定相，比不溶解（或者不吸附）的组分在柱中多停留的时间称为调整保留时间；调整保留时间=保留时间—死时间；（Vd）。※在实验室条件下（温度，固定相等）一定时，调整保留时间仅决定于组分的性质，因此调整保留时间是定性的基本参数。二 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]中保留时间的波动与哪些因素有关一般而言，与如下因素有关：1 操作因素；2 色谱柱的质量；3 仪器系统，尤其是输液泵的性能。三 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]保留时间不重复故障排除方法引起保留时间不重复的最可能原因只有两个:柱温不稳定；流速有变化。※检测器的故障不会造成保留时间不重复,造成保留时间不重复的其它原因有进样技术不佳，进样量过大及柱损伤等。排除保留时间不重复故障的步骤如下： （1）重复进样检查：为了进一步证实保留时间不重复故障，应首先检查进样的重复性。在重复进样时最好由一人独立操作，这样能较好地解决进样时间的重复性问题；如果重复进样后保留时间仍然不能重复，则应转入下一步。（2）温控精度及程序升温重复性检查：恒温分析时应首先检查柱室温度是否稳定在原分析操作所要求的设定值上。必要时要检查柱室温度的稳定性，如,设定值及实际柱温与原分析条件有偏差，应以原分析条件为准；如果柱室温度在运行中有突然跳动，应进行温度控制故障检查与排除。在应用程序升温的场合下，要检查程序升温过程起始、终止柱温及升温速率与原分析条件是否一致。在检查时应注意，每次重新升温时，是否有足够的时间使起始温度保持一致，特别是起始温度很接近室温时，更应如此。程序升温的升温速率可以通过先测定升温中始、终两点间所需时间值，然后用终温与始温之差除以该时间值而加以验证。程序升温中还有一种情况不易为操作者所发现：那就是在升温过程中温度的变化很不均匀，忽快忽慢，但总的升温速率却看不出变化。对此现象可采取记录程序升温曲线而加以比较。如无自动记录方式可用手工法逐段加以记录，程序升温结束时再逐段加以对照，即可。（3）载气流速检查：载气流速的改变是引起保留时间不重复的另一个重要原因。可用皂膜流量计测定柱后或检测器之后的实际流速加以证实。对于恒温分析来说，主要检测实测值与预定值之间的偏差，必要时重新调整设定值使流速达到预定值要求。对于程序升温来说，必须检查温度处于始、终两点时载气流速是否有较大的变化。如果在始、终两点间流速之差超过2mL/s（当柱内径为4mm时）即认为稳流特性不好，这时需进一步检查系统是否漏气，稳流阀、稳压阀工作压力是否合乎要求。系统漏气不论对程序升温色谱，还是恒温色谱说来都是产生保留值不重复的一个不应忽略的原因。在系统漏气中进样口隔垫的漏气是经常产生的，在高温操作下频繁进样时要注意及时更换。（4）色谱柱检查：如果在气密性及载气流速方面均无异常，就应怀疑是色谱柱本身出了问题，对色谱柱进行检查。首先注意色谱峰形有否拖尾，如拖尾则应减少进样量或稀释样品浓度，以免色谱柱过载。如减少进样量后保留值重复性提高，则说明原柱固定相有少量流失或充填欠佳；此时原色谱柱还仍能使用。如果上述方法也无效，则说明色谱柱已发生损坏，必须更换新柱子。四 怎样解决[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]保留时间的漂移？为什么会漂移？保留时间飘移可能的原因有：1 柱子没有达到平衡；解决：平衡更长的时间来解决。2 实验环境温度发生变化；保留时间和温度有很大的关系，一般温度高，出峰快。解决：这里的温度不仅指柱温，其实还包括流动相温度。柱温一般都有规定，用柱温箱就可以平衡了，但是流动相温度没有规定，很多人不知道也要保持不变。在空调房里做，保持住室温不变，一般会好很多。3 流动相比例发生变化；解决：配置时尽量混合均匀；配置时尽量保证比例没有偏离；使用时尽量保证导管接口处不挥发泄漏；长时间不用的要密封，最好废弃不用。4 长期使用后柱子损耗；解决：重新，再生柱子，或更换新的。五 你要如何锁定保留时间？ 所谓保留时间锁定，就是使特定化合物的保留时间在不同仪器、不同色谱柱（但标称固定相和相比相同）之间保持不变。为了讨论这一技术的基本原理，要从影响保留时间重现性的因素说起！化合物的性质、固定液的性质和操作条件；如果前两个因素不变（对于特定的化合物和GC仪器系统，这当然是成立的）；只有操作条件会变，即，载气流速、柱温、毛细管柱规格和检测器类型等。载气控制：对于同种载气来说，压力和流速是影响保留时间的参数；不同厂家的压力表和流量计的制造精度有所不同，故当不同仪器的压力和流量显示完全一致时，柱内流量也不尽相同；现在有了EPC，这一问题基本得到了解决；虽然同一厂家制造的EPC不可能每项都严格一致，但差异微小，通过压力的自动调节完全可以补偿这一差异。温度控制：保留时间对温度极为敏感，过去采用水银温度计测量柱温时，重现性显然有问题。现在都用热敏元件与电子线路来控制温度，精度大为提高。不同仪器间温度重现性令人满意。即使有0.5℃的温度差异，我们仍能通过调节柱前压的办法来使保留时间达到重现。色谱柱规格：一、不同厂商的色谱柱，尽管标称规格一致，但难免有内径的不均匀、固定液膜厚的变化、以及柱长的不精确，这些都会造成保留时间的波动。二、同一根色谱柱在使用过程中会发生变化，比如，重新安装或因柱污染而截去1～2cm后，若其他操作条件不变，保留时间就不能重现了。目前，同一厂商的色谱柱制造重现性已相当高，而不同厂家的色谱柱尚不能完全重现，尤其是极性柱。但我们如果采用同一厂家的色谱柱，就可基本解决这一问题。至于色谱柱长度的变化，可以通过调节柱前压来补偿。检测器类型：常规检测器：常压下工作； MS：高真空下工作；AED：高于大气压（如，10kPa）下工作。这样，当比较常规检测器和MS或AED所得结果时，即使柱前压严格一致，柱压降也不同，保留时间就不能重现。采用EPC时，就很容易通过调节压力使柱压降保持相同。通过上述分析我们可以得出结论，只要仪器的载气和温度控制精度足够高，只要色谱柱标称规格一致，就可以通过调节柱前压的方法来补偿操作参数的微小变化，从而实现保留时间的重现，这就是RTL的基础。六 小结保持保留时间的重复性是重中之重！同时，也要尽可能避免保留时间的漂移！关注保留时间的稳定性也能反映流动相、检测器等的正常情况

[B][center]色谱定性与定量分析方法简介[/center][/B] 在我们日常的检测工作中，色谱的使用频率和使用范围越来越宽，相应的定性与定量的分析方法也越来越重要。此文简单的介绍了色谱定性与定量的方法，并且结合简单的例子，适用于对于色谱接触不久的新手。此原文来自于网络，笔者根据工作的实际经验做了简要的加工。粗陋之处，敬请方家不吝指出。 首先需要说明的是，各种色谱分析方法的定性与定量分析的基本方法都是一样的，不管是薄层色谱、液相色谱、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/3p][color=#3333ff]离子色谱[/color][/url]或者其它种类的色谱。A．色谱的定性分析1.根据保留时间定性在一定的色谱系统和操作条件下，每种物质都有一定的保留时间，如果在相同色谱条件下，未知物的保留时间与标准物质相同，则可初步认为它们为同一物质。为了提高定性分析的可靠性，还可进一步改变色谱条件（分离柱、流动相、柱温等）或在样品中添加标准物质，如果被测物的保留时间仍然与标准物质一致，则可认为它们为同一物质。此法为色谱定性的基本方法，虽有缺憾，但是使用范围非常之广泛。对于目前常用的工作站而言，允许保留时间的误差默认为5%。2.利用不同的色谱方法定性同一样品可以采用多种检测方法检测，如果待测组分和标准物在不同的检测器上有相同的响应行为，则可初步判断两者是同一种物质。在液相色谱中，还可通过二极管阵列检测器比较两个峰的紫外或可见光谱图。3.保留指数定性 在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中，可以利用文献中的保留指数数据定性。保留指数随温度的变化率还可用来判断化合物的类型，因为不同类型化合物的保留指数随温度的变化率不同。4.柱前或柱后化学反应定性在色谱柱后装T型分流器，将分离后的组分导入官能团试剂反应管，利用官能团的特征反应定性。也可在进样前将被分离化合物与某些特殊反应试剂反应生成新的衍生物，于是，该化合物在色谱图上的出峰位置或峰的大小就会发生变化甚至不被检测。由此得到被测化合物的结构信息。5.与其他仪器联用定性将具有定性能力的分析仪器如质谱（MS）、红外（IR）、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Wp][color=#3333ff]原子吸收光谱[/color][/url]（AAS）、原子发射光谱（AES，ICP-AES）等仪器作为色谱仪的检测器即可获得比较准确的定性信息。 需要特别指出的是，以上的定量方法都有一定的局限性，在开发新的分析方法的时候，需要各种分析方法混用，以确保定性的准确，因为这是一切定量工作的基础。B．色谱的定量分析 色谱定量分析的理论基础是待测组分的量与它在色谱图上的峰面积（或峰高）成正比。数据处理软件（工作站）可以给出包括峰高和峰面积在内的多种色谱数据。因为峰高比峰面积更容易受分析条件波动的影响，且峰高标准曲线的线性范围也较峰面积的窄，因此，通常情况是采用峰面积进行定量分析。 具体的定量分析方法有如下几种：1. 校正因子定量　　绝对校正因子：单位峰面积所对应的被测物质的浓度（或质量），即样品组分的峰面积与相同条件下该组分标准物质的校正因子相乘，即可得到被测组分的浓度。绝对校正因子受实验条件的影响，定量分析时必须与实际样品在相同条件下测定标准物质的校正因子。　　相对校正因子:某物质i与一选择的标准物质S的绝对校正因子之比。即相对校正因子只与检测器类型有关，而与色谱条件无关。　2. 归一化法　　归一化法是将所有组分的峰面积分别乘以它们的相对校正因子后求和，即所谓"归一"，被测组分X的含量可以用下式求得：采用归一化法进行定量分析的前提条件是样品中所有成分都要能从色谱柱上洗脱下来，并能被检测器检测。归一法主要在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]中应用。3. 外标法　　直接比较法： 将未知样品中某一物质的峰面积与该物质的标准品的峰面积直接比较进行定量。通常要求标准品的浓度与被测组分浓度接近，以减小定量误差。此法相当于简化的标准曲线法，只不过利用了原点（0，0）和标准物质的一点。定量的精度不如标准曲线法。　　标准曲线法： 将被测组分的标准物质配制成不同浓度的标准溶液，经色谱分析后制作一条标准曲线，即物质浓度与其峰面积（或峰高）的关系曲线。根据样品中待测组分的色谱峰面积（或峰高），从标准曲线上查得相应的浓度。标准曲线的斜率与物质的性质和检测器的特性相关，相当于待测组分的校正因子。　4. 内标法　　内标法是将已知浓度的标准物质（内标物）加入到未知样品中去，然后比较内标物和被测组分的峰面积，从而确定被测组分的浓度。由于内标物和被测组分处在同一基体中，因此可以消除基体带来的干扰。而且当仪器参数和洗脱条件发生非人为的变化时，内标物和样品组分都会受到同样影响，这样消除了系统误差。当对样品的情况不了解、样品的基体很复杂或不需要测定样品中所有组分时，采用这种方法比较合适。　　内标物应满足的要求： 在所给定的色谱条件下具有一定的化学稳定性； 在接近所测定物质的保留时间内洗脱下来； 与两个相邻峰达到基线分离； 物质特有的校正因子应为已知的或者可测定； 与待测组分有相近的浓度和类似的保留行为； 具有较高的纯度。 为了进行大批样品的分析，有时需建立校正曲线。具体操作方法是用待测组分的纯物质配制成不同浓度的标准溶液，然后在等体积的这些标准溶液中分别加入浓度相同的内标物,混合后进行色谱分析。以待测组分的浓度为横坐标，待测组分与内标物峰面积（或峰高）的比率为纵坐标建立标准曲线（或线性方程）。在分析未知样品时，分别加入与绘制标准曲线时同样体积的样品溶液和同样浓度的内标物，用样品与内标物峰面积（或峰高）的比值，在标准曲线上查出被测组分的浓度或用线形方程计算。　5. 标准加入法　　标准加入法可以看作是内标法和外标法的结合。具体操作是取等量样品若干份，加入不同浓度的待测组分的标准溶液进行色谱分析，以加入的标准溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制工作曲线。样品中待测组分的浓度即为工作曲线在横坐标延长线上的交点到坐标原点的距离。由于待测组分以及加入的标准溶液处在相同的样品基体中，因此，这种方法可以消除基体干扰。但是，由于对每一个样品都要配制三个以上的、含样品溶液和标准溶液的混合溶液，因此，这种方法不适于大批样品的分析。 现在的色谱工作站基本上对于前几种的定量方法都能够自动计算，除了第五种“标准加入法”，现在我简单的举一个例子说明。 例：待测样品检测组分a，现将样品等分为三份，向其中分别添加三个浓度梯度的标准样品，添加之后的浓度与峰面积如下：浓度（ppm）峰面积0.1 98990.3 206150.7 40369利用Excel、miniTab或者其他工具作图如下： 那么待测组分的浓度为x=5080.4/50584=0.1004ppm。

空白总有待测成分色谱峰，现在排查出来的原因是怀疑空白溶剂含性质与所测样品极相似的成分，如何用相对保留值定性？

[center]色谱定性分析（一）利用纯物质对照定性在一定色谱条件下，一个未知物只有一个确定的保留时间。因此将已知纯物质在相同的色谱条件下的保留时间与未知物的保留时间进行比较，就可定性鉴定未知物。若二者相同，则未知物可能是已知的纯物质；不同，则未知物就不是该纯物质。纯物质对照法定性只适用于组分性质已有所了解，组成比较简单，且有纯物质的未知物。 （二）相对保留值法相对保留值是指组分i与基准物s调整保留值的比值，即： 它仅随固定液及柱温变化而改变，与其它操作条件无关。相对保留值的测定方法：在某一固定相及柱温下，分别测出组分i和基准物质s的调整保留值，再按公式可求出的值。 （三）加入已知物增加峰高法当未知样品中组分较多，所得色谱过密，用上述方法不易辨认时，或仅作未知样品指定项目分析时均可用此法。首先作出未知样品的色谱图，然后在未知样品中加入某已知物，又得一色谱图。峰高的增加的组分即可能为这种已知物。 （四）保留指数定性法保留指数（retention index） I 是柯瓦（Kovats）于1958年所提出的，所以又称柯瓦指数。它表示物质在固定液上的保留值行为，是目前使用最广泛并被国际上公认的定性指针。它具有重现性好、标准统一及温度系数小等优点。保留指数的物理意义在于：它是与被测物质具有相同调整保留时间的假想的正构烷烃的碳数乘以100。保留指数仅与固定相的性质、柱温有关，与其它实验条件无关。其准确度和重现性都很好。 （五）其它方法 除利用保留值定性外，尚可利用检测的选择性响应的特点将未知物大致分类，还可与化学反应结合起来，是一种简便、有效的定性方法。此外，还可与别的方法，如红外光谱法（IR）、质谱法（MS）、核磁共振波谱法（NMR）等结合进行定性鉴定。[/center]

[align=center]高效液相色谱组分定性分析方法简述[/align]1、保留时间对照法（1）外标对照法 即在相同的色谱条件下，分别进样品溶液与高纯度的单一组分对照品溶液，这里推荐先进样品溶液，确定系统适应性没有问题了再进对照品溶液，对比两组分的保留时间，一般保留时间相对差异在5%以内，同时绝对误差在0.1min以内的认定为同一个物质，但仍遵守“同一组分保留时间肯定一样，但保留时间一样不一定是同一组分，保留时间不一样的肯定不是同一组分”的原则。（2）标准加入法 即在相同的色谱条件下，将高纯度的对照品加入样品溶液中再上机检测，与相同浓度未加对照品的样品溶液比较，峰高或峰面积应呈等比例增加的，可认定为是同一物质。此法比较适用于组分比较复杂，邻近有干扰组分峰时。上述方法尽量使用柱效高或长柱，峰高尽量小一些，甚至可以小到定量限浓度，一些在高响应下是单个峰的，在低响应时可能是两个峰，所以一定要注意峰形，只要峰形与对照品不一致，就要怀疑不是同一个物质。再严谨一点，还可以改变流动相组成、色谱柱、柱温等，样品中的组分峰应与对照品的组分峰有相同的变化。2、利用检测器选择性进行鉴别（1）DAD检测器波长扫描法 对于配有DAD检测器的还可以对比三维扫描图谱和峰纯度计算进行辅助定性。如果没有配DAD检测器，但有具波长扫描功能的可变波长检测器的，可以使用停泵扫描功能，查看扫描图谱进行鉴别。（2）质谱检测器鉴别法 该方法适用于联用有质谱分析仪的高效液相色谱仪，通过比较碎片峰进行比较鉴别。3、破坏法 将物质进行化学破坏，可以是酸、碱降解，也可以是衍生后再进行检测，看组分峰的变化。当然，此方法不适用于组分复杂的样品。

保留时间不重现有两种不同的情况：既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下： 　　一色谱柱平衡 　　如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。 　　流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。 　　二固定相稳定性 　　固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。 　　经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。 　　三色谱柱污染 　　保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。 　　样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。 　　避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。 　　使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。 　　四流动相组成 　　流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。 　　五疏水坍塌 　　当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。使用内嵌极性基团的反相色谱柱（如WatersSymmetryShieldRP色谱柱）或非端基封口的色谱柱（如WatersResolve色谱柱）也可避免发生坍塌。

‘有奖问答’选择题：在下述气相色谱定性方法中，哪一种最可靠：( )A. 用文献值对照定性 B. 比较已知物和未知物的保留值定性C. 用两根极性完全不同的柱子进行定性 D.将已知物加入待测组分中，利用峰高增加的办法定性

高效液相色谱仪分析中保留时间不重现有保留时间漂移和保留时间波动两种情况。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，后者指保留时间无固定规律的波动。保留时间漂移的原因有色谱柱平衡、固定相流失、色谱柱污染、流动相组成变化、流动相污染和疏水坍塌等。事实上，保留时间漂移往往是由色谱柱老化引起的。一、色谱柱平衡： 高效液相色谱中保留时间发生漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10～20倍柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂），则需要相当长的时间平衡色谱柱。

标准曲线计算中保留位数应该保留几位？我们配置了一条[color=#DC143C]氨氮[/color]标准曲线，计算曲线：保留三位小数是：Y=0.004X-0.009 r=0.9998 回归方程1计算曲线：保留四位小数是：Y=0.0036X-0.0087 r=0.9998 回归方程2样品的吸光度是0.146 空白吸光度是0.017经计算： 回归方程1 计算结果是0.69经计算： 回归方程2 计算结果是0.74我到底应该用哪个回归方程计算结果？？？请大家讨论!!!

手性纯度分析色谱条件：柱子： CHIRALPAK OD-H(4.6mm*250mm*5μm)流动相： 正己烷：乙醇：三氟乙酸=90:10:0.1流速： 0.5ml/min进样量：50μl运行时间：70 min样品稀释剂：甲醇/乙醇/正己烷=15/10/75仪器是一样的，只是方法的保留时间主峰40min，异构体45min，我们在做时保留时间是60min左右，这是什么原因啊？流动相也配置过两次，第一次60min，第二次更离谱在70min后了，是流动相配制问题吗？但也不会相差这么多啊？

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]器故障排除方法（保留时间不重复）引起保留时间不重复的最可能原因只有两个，一个是柱温不稳定；另一个是流速有变化。而检测器的故障不会造成保留时间的不重复。造成保留时间不重复的其它原因有进样技术不佳，进样量过大及柱损伤等。 排除保留时间不重复故障的步骤如下：（1）重复进样检查：为了进一步证实保留时间不重复故障，应首先检查进样的重复性。在重复进样时最好由一人独立操作，这样能较好地解决进样时间的重复性问题；如果重复进样后保留时间仍然不能重复，则应转入下一步。（2）温控精度及程序升温重复性检查：恒温分析时应首先检查柱室温度是否稳定在原分析操作所要求的设定值上。必要时要检查柱室温度的稳定性，如设定值及实际柱温与原分析条件有偏差，应以原分析条件为准；如果柱室温度在运行中有突然跳动，应进行温度控制故障检查与排除。在应用程序升温的场合下，要检查程序升温过程起始、终止柱温及升温速率与原分析条件是否一致。在检查时应注意，每次重新升温时，是否有足够的时间使起始温度保持一致，特别是起始温度很接近室温时，更应如此。程序升温的升温速率可以通过先测定升温中始、终两点间所需时间值，然后用终温与始温之差除以该时间值而加以验证。程序升温中还有一种情况不易为操作者所发现。那就是在升温过程中温度的变化很不均匀，忽快忽慢。但总的升温速率却看不出变化。对此现象可采取记录程序升温曲线而加以比较。如无自动记录方式可用手工法逐段加以记录，程序升温结束时再逐段加以对照，即可。（3）载气流速检查：载气流速的改变是引起保留时间不重复的另一个重要原因。可用皂膜流量计测定柱后或检测器之后的实际流速加以证实。对于恒温分析来说，主要检测实测值与预定值之间的偏差，必要时重新调整设定值使流速达到预定值要求。对于程序升温来说，必须检查温度处于始、终两点时载气流速是否有较大的变化。如果在始、终两点间流速之差超过2mL/s（当柱内径为4mm时）即认为稳流特性不好，这时需进一步检查系统是否漏气，稳流阀、稳压阀工作压力是否合乎要求。系统漏气不论对程序升温色谱，还是恒温色谱说来都是产生保留值不重复的一个不应忽略的原因。在系统漏气中进样口隔垫的漏气是经常产生的，在高温操作下频繁进样时要注意及时更换。（4）色谱柱检查：如果在气密性及载气流速方面均无异常，就应怀疑是色谱柱本身出了问题，对色谱柱进行检查。首先注意色谱峰形有否拖尾，如拖尾则应减少进样量或稀释样品浓度，以免色谱柱过载。如减少进样量后保留值重复性提高，则说明原柱固定相有少量流失或充填欠佳；此时原色谱柱还仍能使用。如果上述方法也无效，则说明色谱柱已发生损坏，必须更换新柱子。来源：药物分析网

亲们：现在越来越多的实验要求使用HILIC色谱柱进行LC-MS（MS/MS）实验了。讨论1. 亲们使用HILIC的频率怎样呢？A）每天都用。B）每周一次。C）每月一次。D）半年一次。E）一年一次。F）曾经用过。G）不好意思，没用过。讨论2. 大家觉得C18柱常用， 还是HILIC常用呢？讨论3. 大家使用HILIC色谱柱的小经验有那些啊？。。。。。HILIC色谱柱简介：引用于：Pandan1219 的【第二届原创大赛参赛作品】浅谈亲水作用色谱（HILIC）及其与质谱联用技术]“1. HILIC的概念亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。2. HILIC的分离机制HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。。。。。”[color=#f10b00]HILIC方法开发经验大披露：1. HILIC色谱柱的种类 以waters 公司的HILIC色谱柱为例，分为HPLC和UPLC两种类型， 又分为Atlantis， Xbridge， Acquity三个品牌。 填料类型分为BEH，无封尾和Amide填料三种。 2. HILIC色谱柱的应用范围 普通反向色谱难以保留的物质。3.HILIC的对化合物的保留原理： 亲水性吸附，离子交换和氢键作用。未完待续。。应用小TIPS：1.HILIC柱如何平衡？ HILIC柱使用70%的乙腈水溶液平衡。2.HILIC柱如何保存？ HILIC柱使用 90%的乙腈水溶液保存。[/color]

保留时间不重现有两种不同的情况：即保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下：一 色谱柱平衡如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。二 固定相稳定性固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。经常清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。三 色谱柱污染保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。四 流动相组成流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。五 疏水坍塌当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。挽救的办法实现用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。由是色谱柱长期储存也会发生此现象。

液相色谱-质谱同时对242种化合物的定性筛查方法 作者倪春芳，耀 刘，叶海英，张润生，张玉荣，...本发明公开了一种可同时对242种化合物(药物或毒物)进行定性筛查的方法。采用液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)方式以两对母离子-子离子对和保留时间对目标物进行定性。242种药毒物包括阿片类、苯丙胺类、可卡因...这篇文献我搜不到 现在想向诸位求助

[color=#444444]做着三乙胺的残留检测，之前的实验中保留时间是6.87min，峰形还好，前几天由于样品污染了衬管，并且换了新的，今天再进三乙胺对照，保留时间延后至8.1min，峰拖尾。[/color][color=#444444]对比之前的图谱方法信息，流速、载气压力没变化；[/color][color=#444444]溶剂峰保留时间没变。进空白溶剂，图谱与以前的重叠对比，没异常。[/color][color=#444444]求大神解释及解决办法。[/color]

其他讲座资料看[url=http://www.instrument.com.cn/bbs/detail.asp/threadid/1679222/forumid/25/year/2009/query/search] 学习[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]跟yuen72老师入门[/url]定性，通常是指确认未知物质的组成。对于色谱，则一般指确认色谱峰的归属，因为色谱本身不具备定性能力。而对于色谱的数据处理，这里的定性则是在已经知道峰归属的条件下，如何在多次分析的保留时间有微弱变化的情况下，仍然确保正确的对色谱峰进行归属。例如，正常标定色谱，乙烷色谱峰出在5.2分钟。再次标定时，乙烷峰出在了5.1分钟。事实上，在标定和分析中，由于各种原因，组分的保留时间发生微弱的变化是很常见的。那么对于很机械的数据处理机和工作站，是如何确认保留时间变化了的色谱峰，是新组分，还是原组份呢？色谱工作站是用允许偏差来控制峰定性的。例如，设定乙烷的出峰时间为5.2分钟，对5.2分钟左右一定允许偏差内的色谱峰，都认为是乙烷。例如这个偏差设置为0.2分钟，那么在5.0至5.4分钟内的色谱峰，都认为是乙烷。我们都知道，偏差的表示方法有两种，一种绝对偏差，另一种是相对偏差。因此，色谱工作站一般都提供两种方法进行峰定性，即：绝对偏差法和相对偏差法。有时候，绝对偏差法也被称为时间带法。这个时候，工作站利用色谱出峰时间的绝对偏差来进行峰定性。前面的例子就是绝对偏差法。绝对偏差法比较灵活，可以单独为每一个色谱峰设置允许偏差，因此被广泛采用。相对偏差法也被称为时间窗法。这个时候，工作站利用色谱出峰时间的相对偏差来进行峰定性。例如，前面的例子设置为允许偏差为2%，则在5.2±2%的范围内的峰，都被认为是乙烷。即从5.1至5.3分钟内的色谱峰，都被认为是乙烷。相对偏差法一般只能设定一个允许偏差值，所有的色谱峰都利用这一个相对偏差来定性，因此灵活性较差。但由于色谱出峰时间越晚，则保留时间变化的可能就越大，而且设置起来方便快捷，因此用相对偏差法来定性也普遍。当采用相对偏差法定性的时候，保留时间小的色谱峰允许偏差很小，因此正常的进样时间误差可能会超过允许偏差，造成定性失误。为此，一些工作站为相对偏差法同时设置了一个小的绝对偏差，例如GC-2010工作站，设置为0.02分钟。在相对偏差之外，另外给了0.02分钟的绝对偏差，确保保留时间小的色谱峰正常定性。例如0.1分钟出峰的色谱峰，2%的允许偏差，自0.08-0.12分钟内的峰，都被认定为该组分。是否有了绝对偏差和相对偏差法，色谱峰就能够被正确定性呢？如果有多个色谱峰进入了允许的偏差范围内，如何确定哪一个色谱峰是特定组分？还是所有色谱峰都是这样一组特定组分？色谱峰的允许误差范围，能不能出现重叠？色谱峰落在重叠范围内的时候，如何确定是哪个特定组分？在没有特定说明，允许偏差范围也没有发生重叠的时候，所有色谱峰都被认为是一个特定组分，或者说是组分群。例如设定碳四组分保留时间为4分钟偏差1分钟，则3-5分钟内的所有色谱峰都被认为是碳四组分。落在两个组分设定偏差的重叠范围内时，通常以前面的峰来定性。例如a组分设定为3.5-4.5分钟，b组分设定为4-5分钟，那么在4-4.5分钟内的组分，会被认定为a组分。即使在3.8分钟已经认定了一个色谱峰为a组分，仍然会把后面的峰认定为a组分。对于复杂样品，组分很多，这样定性就经常会发生问题。因此很多工作站提供更多的功能给峰定性。例如，设置标识峰。在一组保留时间接近的色谱峰中，设置一个标识峰，则认定在此时间范围内面积最大的色谱峰认定为标识峰组分，其他色谱峰则按照设定保留时间与标识峰前后关系进行识别。总之，工作站对于色谱峰的定性，主要有相对和绝对法两种，并采用其他一些技术进行辅助。要正确进行这个工作，需要仔细阅读说明书，并通过实践测试才能得到最好的结果。

在做敌草快检材的时候发现空白血添加和检材一同前处理进样后，保留时间不同，且定性定量离子对及丰度比一致，有没有遇到过同样情况的大神可以请教一下怎么解决

保留时间不重现有两种不同的情况：既保留时间漂移和保留时间波动。前者是指保留时间仅沿单方向发生变化，我们称之为漂移；而后者指保留时间无固定规律的波动。将此两种情况区分开来对找到问题的原因往往很有帮助。如，保留时间的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留时间的无规律波动。事实上，保留时间漂移的多半原因是不同机理的色谱柱老化，如固定相流失（例如通过水解），色谱柱污染（由样品或流动相所致）等。保留时间漂移的几种最常见的原因如下：一、 色谱柱平衡 如果我们观察到保留时间漂移，首先应考虑色谱柱是否已用流动相完全平衡。通常平衡需要10-20个柱体积的流动相，但如果在流动相中加入少量添加剂（如离子对试剂）则需要相当长的时间来平衡色谱柱。 流动相污染也可能是原因之一。溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。应注意：水是很容易污染的流动相成分。二、 固定相稳定性 固定相的稳定性都是有限的，即使在推荐的PH范围内使用，固定相也会慢慢水解。例如，硅胶基质在pH4时水解稳定性最好。水解速度与流动相类型和配体有关。双官能团配体和三官能团配体比单官能团配体的键合相要稳定；长链键合相比短链键合相稳定；烷基键合相比氰基键合相稳定的多。 经常用高比例的水清洗色谱柱亦会加速色谱柱固定相的水解。其他硅胶基质键合相在水溶液环境中也可以发生水解，如氨基键合相等。三、 色谱柱污染 保留时间漂移的另一个常见原因是色谱柱污染。HPLC色谱柱是非常有效的吸附性过滤器，它可以过滤并吸附流动相携带的任何物质。污染源可以是：流动相本身，流动相容器，连接管、泵、进样器和仪器密封垫，以及样品等。通常通过实验可判断污染的来源。 样品中如果存在色谱柱上保留很强的组分，就可能是使保留时间漂移的潜在根源。这些根源通常是样品基质。如：配药中的赋形剂，生化样品（如血清）中的蛋白及类脂类化合物，食品样品中的淀粉，环境水样中的腐殖酸等。通常样品中的强保留组分具有较高的分子量，在此情况下，保留时间漂移的同时或其后会有反压的增加。可以通过使用固相提取（SPE）等样品前处理方法来去除样品基质的影响。避免色谱柱污染最简单的方法是防患于未然。相比之下，找到问题的所在并设计有效的清洗步骤以去除污染物要困难的多。通常使用在给定色谱条件下的强溶剂，但并非所有污染物都可以在流动相中溶解。如THF可去除反相色谱柱中的许多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色谱柱中的蛋白。 使用保护柱是个非常有效的方法。反冲色谱柱仅是不得已时采用的办法。四、 流动相组成 流动相组成的缓慢变化也是保留时间漂移的常见原因。如流动相中易挥发组分的挥发及循环使用流动相等。五、 疏水坍塌 当小孔径、端基封口良好的反相填料色谱柱使用接近100%的水为流动相时，有时会发生分离突然丧失以及被分析物质保留明显降低或完全不保留的现象，这就是疏水坍塌。此现象是由流动相不浸润固定相表面而致。挽救的办法是先用含大量有机组分的流动相浸润固定相，再用高水含量的流动相进行平衡。使用内嵌极性基团的反相色谱柱（如Waters SymmetryShield RP色谱柱）或非端基封口的色谱柱（如Waters Resolve色谱柱）也可避免发生坍塌。

以标准品保留时间对照法对混合物各色谱峰进行定性是否在任何情况下都适用？希望各位大牛们能给予解答，万分感谢

气相色谱利用保留值定性时，为什么在同一色谱柱上，不同化合物可能有相同的保留值？

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]是一种以气体为流动相的柱色谱法，根据所用固定相状态的不同可分为气-固色谱(GSC)和气-液色谱(GLC)。在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]的实际工作过程中，保留时间对组分的定性起到决定性作用，所以今天就来说说看哪些因素会影响到色谱峰保留时间。　　1、载气流速　　首先，影响色谱峰保留时间的主要因素是色谱柱的柱流量，或者叫载气流速。　　载气流速实际是个计算值，把色谱柱当作一个大气阻，那载气流速就是色谱柱柱头的压力值，除以这个大气阻的气阻值得来的。　　结合温度和大气压的影响，在压力参数、温度参数、载气类型保持稳定的情况下，会对这个“大气阻”的气阻值有影响的就是色谱柱自身的参数，比如柱子内径和柱长，所以每次编辑方法时步就是设置色谱柱参数。　　如果发现保留时间有偏差，步，就是去查看一下系统参数里色谱柱的参数对不对。　　另外，使用了一段时间的色谱柱，因为柱头被多次切割，柱子的实际长度会和系统记录的长度出现偏差，所以需要重新校准一下柱长，再重新设置色谱柱参数。　　2、温度　　除了载气流速，系统运行过程中，炉温箱温度出现偏差也会对保留时间有影响。　　因为柱温越高，出峰越快，保留时间变小。柱温变化直接会造成保留时间的重现性不好，从而影响样品组分的定性结果。　　一般柱温变化1℃，组分的保留时间变化5%；柱温变化5℃，组分的保留时间变化20%。　　由上面的这些信息我们知道了：　　保留时间出偏差，色谱柱的关系大。　　那除了色谱柱方面，那就要看气路系统的漏和堵了：　　3、漏气问题　　首先，进样口也就是柱头有漏气吗？　　柱子前端的进样口如果出现漏气，较正常情况会出现保留时间延长，但是如果这部分漏气是非常稳定的，并且没有其他因素影响的情况下,由于系统有压力流量电子控制器，漏气后保留时间的重现性还能保持较好情况。　　但是在实际工作中，因为柱流量会随着程序升温发生变化，这就会使保留时间的重复性变差。　　4、堵的问题　　其次，除了漏的问题，系统还会出现堵的情况，也会影响保留时间及其重复性。　　如果样品粘性大或者比较脏，分流不分流进样口，分流出口的捕集阱，被部分或者全部堵住。　　而压力计监控的柱头压力，应该只有色谱柱这一个气阻才对。分流出口堵了，就等于加了一路气阻把柱头压分出去了一部分，当压力计维持设定值不变时，实际的柱头压力势必变小，实际的载气流量响应变小，从而影响到了保留时间，重复性也变差了。因此进样口维护有一项重要操作步骤就是更换分流出口的管路和捕集阱。　　后，除了这些[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]系统中会影响保留时间的因素以外，样品本身的浓度也需要确认一下有没有发生变化。

确定色谱峰保留时间不稳定的原因首先需要找出变化的模式。保留时间在多次进样间随机变化 建议首先检查泵和溶剂混合装置。校验泵是否工作正常，可以用量筒和秒表来测量流速。校验流动相组成没有变化，可以在流动相中加入跟踪剂来观察基线的变化。如果流动相组成是稳定的，基线也应该很稳定。如果流动相组成有变化，你会观察到基线的相应变化。举例说明，如果你使用反相条件，UV检测器，可以在有机相溶剂中加入0.1%的丙酮，监测254 nm下的基线变化。另一种方法也可以，你需要人工配制流动相，然后通过溶剂混合装置。如果保留时间的变化消失了，问题就出在溶剂混合装置上。一天之内的进样保留时间一致，但是不同天数之间的保留时间变化 这种情况下，仪器本身不太可能有问题。保留时间变化最有可能的原因是流动相组成的变化。在反相色谱中，保留因子k和流动相中有机溶剂的体积含量成指数关系。根据经验，如果有机溶剂含量误差1%，那么保留时间的变化在5%到15%之间，典型情况在10%左右。建议仔细称量有机溶剂，最好的配制流动相方法是用质量称量代替体积称量。 此外，流动相如何脱气也可能导致保留时间的变化。最好的脱气方法是使用真空超声脱气大约一分钟左右，这会最大程度的减少溶剂蒸汽的挥发。另一个方法是用氦气流喷射，在流动相被氦气平衡后，氦气流必须被关闭，否则氦气会带走溶剂蒸汽，溶剂的组成会由于蒸发而发生变化。 如果样品组成是离子状态或者离子化的，那么控制流动相的pH值非常重要。小到0.1单位的pH变化会导致保留时间漂移10%左右。所以准确测量pH值并保证pH仪被很好地的校准。在反相色谱中，随着流动相pH值的升高，酸保留时间会减少，碱的保留时间会增加。 化学老师常说“缓冲溶液之所以被称为缓冲溶液，因为它是用来缓冲pH 值的。如果它做不到，那就不能称之为缓冲溶液”。举个例子，醋酸铵溶液只是醋酸铵溶液，醋酸缓冲液包括醋酸根离子和醋酸，如果它们的当量相同，此时的pH值就是醋酸缓冲溶液的pK值4.75。缓冲溶液在它的pK值上有最大的缓冲能力。色谱峰保留时间朝同一个方向漂移 如果所有色谱峰的保留时间都朝同一个方向漂移，很可能是温度原因所致。根据经验，每℃的变化导致保留时间变化大约1%到2%左右。在通常情况下没有什么问题，但是在许多地方空调和暖气在周末的时候会关闭，然后会出现样品在周末的保留时间会和平时不一样。使用柱温箱可以很好的避免这个问题。其它原因 在反相色谱中，如果分析离子或离子化的样品，保留时间会受到缓冲溶液的离子强度的影响，但是影响会很小，通常可以忽略不计。典型的状况是缓冲液的摩尔数改变20%，保留时间变化约1%。由于缓冲液组分通常是称量的，那么大的误差是不会发生的。 在离子对色谱中，离子对试剂的浓度会影响离子化样品的保留。与离子对试剂电荷相反的分析物保留时间会增加，相同电荷的保留时间减少，中性化合物基本不受影响。在低浓度下，例如小于5 mM/L，样品组分保留时间的变化受与离子对试剂浓度影响，与离子对试剂的浓度成正比。在高浓度离子对试剂下，例如10 mM/L左右，填料表面被离子对试剂饱和，那么试剂浓度的改变不会对样品保留时间有明显的影响。这是在方法开发时需要考虑的问题。如果你需要把方法做到不受任一个变量的影响，那就应该那么做。 在正相色谱中，保留时间对流动相中极性组分的浓度非常敏感。这个组分无论是你需要还是不需要的，通常是指水。水含量的变化会导致保留时间的变化，比较好的解决办法是使用半饱和的非极性溶剂，例如正己烷或二氯甲烷。为了达到半饱和状态，通常需要往一定体积的溶剂中加一些水，搅拌一段时间使其饱和，然后把它和等体积的“干燥”溶剂混合。通过这个过程，理论上能让你在使用含水非极性溶剂时得到比较好的重现性，避免保留时间的漂移。