质谱内标确定系统方法

[align=center]API质谱仪MRM定量方法的建立方法[/align] 质谱仪凭借其高灵敏度和选择性，定量小分子化合物越来越受到重视。MRM：Multi  Reaction  Monitor，指多反应监测。针对二级质谱或多级质谱的某两级之间，即母离子选一个离子，碰撞后，从形成的子离子中也只选一个离子。因为两次都只选单离子，所以噪音和干扰被排除得更多，灵敏度信噪比会更高，尤其对于复杂的、基质背景高的样品。那么我们今天来分享一下API质谱仪MRM定量方法的建立方法。 首先选择Q1 FULLSCAN：用SYRINGE PUMP 5ul/min，样品浓度约1-10pmol/u，根据待测化合物性质选择+- ESI/APCI/APPI。根据待测化合物分子量选择扫描范围：在分子量上下各100Da足够，TIME不要小于1秒。通过调节DP，使得分子离子峰明显高于噪音峰，确定分子离子。如果分子离子峰不明显，可能需要增加样品浓度，如果仍然不能确定分子离子，考虑改变离子化方式或样品前处理方法，例如POS方式可酸化溶液，NEG方式碱化溶液。对于某些化合物，POS方式[sup]+[/sup]不明显，可考虑[M+NH[sub]4[/sub]][sup]+[/sup]，尽量避免采用[sup]+[/sup]，[sup]+[/sup]。 第二步选择Q1 MI SCAN：TIME 100ms，用SYRINGEPUMP 5ul/min，根据第1步选择的母离子，EDIT RAMP优化DP，CXP及EP，存储此参数。 第三步选择PRODUCT ION SCAN，用SYRINGE PUMP5ul/min，扫描范围：上限比母离子高10-50 Da，下限50-100 Da，TIME 不小于1s。通过调节CE等参数得到高质量的MS2图，母离子相对峰高在1/4-1/2即可。Acquire命名 MCA20次，平滑后选择特征子离子。 第四步选择MRM优化，用SYRINGE PUMP5ul/min。根据特征子离子强度选择MRM离子对，母离子M/Z值由第1步确定，子离子M/Z值由第3步确定，精确到小数点后1位。可选择多个MRM离子对，同时优化，对较弱离子对可适当多分配TIME例如200 ms，强离子对可40-50 ms。同时EDIT RAMP优化COMPOUND项下参数先根据第3步的CE优化CXP，然后再优化CE，在质量扫描范围窗口点右键对各离子参数分别设定。CAD参数可手动优化，值不要太高，通常4-6。初步建立METHOD，存储为*.dam文件。 第五步不接色谱柱进行FIA定量优化。首先接通LC系统，检查工作是否正常，有无气泡，否则先排气。激活CONFIGURE中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]配置。在ACQURE栏内调出第3步初步建立的METHOD，若已经有LC条件，则可参考，若无根据拟选用的色谱柱内径确定LC流速（2mm典型流速200-300ul/min，3mm典型流速400-500ul/min，4.6 mm典型流速800-1000ul/min）以及流动相组成，设定MS初始温度和气流，加上LC PUMP和AUTOSAMPLER，并设定同步方式为LC SYNC。 第六步使用4mm以上内径色谱柱时先设定分流比，使进入MS的流量在200-400ul/min最佳。MS与LC的period都设为0.5-1min，进样体积2-5ul，浓度0.01-0.1pmol/ul，按照FIA教程操作，优化CUR，GAS1，GAS2（API3000AUX要手动优化），TEMP，IS。平衡5 min后开始进行FIA定量优化，完成最后方法的质谱条件优化。 第七步接好并平衡色谱柱，至少20min，用适当浓度标准品检验峰型等分离情况。根据色谱分离情况，可设定梯度洗脱。MRM可以不必所有峰都基线分离，但要避开基质的离子抑制干扰（出峰时间不能太早，要在溶剂峰后）。 第八步空白基质添加标准品，稀释成不同浓度，通常可2倍等比稀释，5-7级。根据LC流动相选择溶剂体系一致的稀释液，配制实际样品。编辑批处理文件，排列进样顺序，最好第一针先做空白，然后由稀到浓。平衡MS离子源和色谱柱后开始正式采样。 以上是一种化合物的定量方法，如果多种物质同时定量（包括内标），分别用纯标样重复第2-4步，记录各参数，然后合并到第5步最后的METHOD，再进行第6-8步。完成上述所有步骤后，即可制做标准曲线。如果不能自动正确积分色谱图，可手工修改。有内标和无内标的计算方法分别演示。最后结果的打印和存贮，复制。 今天的分享到此结束，感谢仪器信息网提供原创大赛让我们有机会互相分享学习！

我之前定量没有用同位素内标，保留时间也能分开。最近看到关于质谱定量内标选择的内容，认为同位素内标好，能校正基质效应，色谱行为和响应特征接近，即便没有合适的同位素内标，也要选择结构类似的，色谱行为接近的。但是如果液相分不开一起进质谱的话，会不会产生离子抑制？

[font=宋体][size=10.5pt]HJ 805-2016 [font=宋体]土壤和沉积物 多环芳烃的测定 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url][/font][font=Times New Roman]-[/font][font=宋体]质谱法。分析定量时，标准曲线的绘制时，标准上说以目标化合物和内标物浓度的比值为横坐标；以目标化合物定量离子响应值和内标化合物定量离子响应值的比值与内标化合物质量浓度的乘积为纵坐标。绘制标准曲线。这样是不是就不能像外标法一样，仪器的数据处理软边可以直接给出标曲，需要自己手动算了？谢谢各位！[/font][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt]还有就是如果按照以上说的方法绘制曲线，十几种目标物只有5种内标物，没有相对应的内标物的目标化合物应该怎么绘制标准曲线？[/size][/font][font=宋体][size=10.5pt]内标法实在是小白一个？希望大家多多解惑，非常感谢[/size][/font]

质谱：OmniStar/ThermoStar软件：Quadera 4.4问题：想用He做内标在线定量分析反应，没有连色谱，所有的产物都是气体实验室以前没有人用质谱，这台质谱老师只会定性分析MID模式，从来没有做过定量，现在完全不知道要如何设置和操作，求各位大神帮忙

各位大大有没有确定内标法定量测定下限方法，一般以性噪比确定的方法在这里好像不适用。

质谱分析中内标物的作用什么是内标物？内标物的作用？一般如何使用？

质谱：OmniStar/ThermoStar软件：Quadera 4.4问题：想用He做内标在线定量分析反应，没有连色谱，是直接反应气连到质谱的实验室以前没有人用质谱，这台质谱老师只会定性分析MID模式，从来没有做过定量，现在完全不知道要如何设置和操作，求各位大神帮忙

你好，如果我采用质谱定量，用内标法，内标的含量保持恒定，按比例增加标准样品的浓度，以标准样品和内标的比值及标准样品的浓度做标准曲线，会不会因为标样的浓度越来越大，产生离子抑制，而使标准曲线趋势降低，结果偏低？

小白前来请教，主要是预实验用，血浆样品。配制了混标的Qc样品，浓度包括定量下限，LQC，MQC，HQC，不知道之后是取哪个浓度的Qc样品，加入多少μL内标液，内标液的浓度又是怎么确定，然后进行涡旋混匀、离心、取上清液进质谱。我看到的文献是这样的：制备含40、80、800、16000 ng/ml的Qc，取10μL，加入300μL内标（10 ng/mL），取200μL上清液进样品瓶。不知道这里面的原则是怎样的呢？

各位大侠好！本人从事液相色谱-质谱分析，对于样品中内标加多少以及标品和样品中内标响应不一致一直不是很理解，请各位大侠指导。

土壤国标现在大部分是用质谱做的都是内标法，为什么不用外标，感觉内标法好麻烦！！！！

临床质谱试剂盒用内标大部分都是氘代内标或者13C内标，但是都是标记分子中几个H或者C。问题1：氘代内标和13C内标该怎么选择，哪个更好？问题2：如果用13C全标记（所有C原子都用13C标记）的可行不？问题3：如果用13C全标记的，跟几个13C标记的，哪个更好？

大家好， 我做液相质谱的时候，用ribitol作为内标，但是不知道为什么跑完液质的时候检测不到内标，内标的浓度是0.2mg/ml，样品最后用甲醇定容到300微升，想请教一下大家一般都是用什么作为液质的内标，浓度是多少，怎么处理的，不胜感激。

氦质谱检漏方法比较多,根据被检件的测量目的可以分为两种类型,一种是漏点型,另一种是漏率型 在实际检验过程中要根据检验的目的选用最合理的方法,要以被检器件的具体情况而定,灵活运用各种检漏方法。1、测定漏点型氦质谱检漏方法确定漏点型既是确定要检部件的具体漏点或漏孔的位置,在大部件或大型部件中较为常见,如卫星、导弹弹体、弹头、输气管道、气罐、油罐、锅炉等。1.1、喷氦法氦质谱检漏方法这是最常用的一种方法,一般用于检测体积相对较小的部件,将被检器件和仪器连通,在抽好真空后,在被检器件可能存在漏孔的地方(如密封接头,焊缝等) 用喷枪喷氦,如图4 所示,如果被检器件某处有漏孔,当氦喷到漏孔上时,氦气立即会被吸入到真空系统,从而扩散到质谱室中,氦质谱检漏仪的输出就会立即有响应,使用这种方法应注意:氦气是较轻的惰性气体,在喷出后会自动上升,为了准确的在漏孔位置喷氦,喷氦时应自上而下,由近至远(相对检漏仪位置) ,这是因为在喷下方时氦气有可能被上方漏孔吸入,就很难确定漏孔的位置 再者漏孔离质谱室的距离检漏仪反应时间也不同,所以喷氦应先从靠近检漏仪的一侧开始由近至远来进行。常用的几种氦质谱检漏方法-无眼界科技喷氦法检漏示意图在检测较大部件时要借助机械泵进行真空预抽,就可以提高检漏效率和时间,如图所示,喷氦法在检查那些结构比较复杂的,密封口和焊缝又比较多而且挤在一起的小容器时,由于氦喷出后会很快扩散开来,往往不容易准确地确定漏隙所在的部位,要采取从不同角度喷氦,仔细观察反应时间上的差别和将已发现的漏孔用真空封泥暂时封起来等办法,就可以把漏孔逐个检出。常用的几种氦质谱检漏方法-无眼界科技辅助机械泵检漏示意图1.2、吸氦法氦质谱检漏方法吸氦法主要用于检查某些大型密封容器。如导弹弹体、弹头、气罐、油罐等,先将容器抽真空,再给容器充入氦气(为了节省用氦量,可以用低浓度氦气) ,在氦质谱检漏仪的进气法兰处接上橡皮管,橡皮管的前端有直径很小的毛细管,使毛细管在充了氦的被检容器外壁的焊缝和密封接头等处移动,如果该容器有漏隙,经漏隙渗出的氦会被毛细管吸入,检漏仪就会响应。2、测定漏率型氦质谱检漏方法吸氦法检漏示意图图片测定漏率型主要是针对密封性要求严格的部件进行检测,如宇宙飞船、火箭液体燃料储料箱、卫星、电子元器件等。这种方法只能测试试件的漏率,无法确定漏孔的位置和漏孔的个数。

本人做过液质，建立MRM 方法是需要进行调谐确定母离子和子离子。现在做气相色谱单四极杆质谱时，建立SIM扫描方法时，如何确定离子呀，请各位大侠提供一些方法和思路。不胜感激！

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。 质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。 根据使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]的经验和审评体会，认为在使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]测定和分析中需注意以下问题： 1) 测试者需根据自己的测试需要确定适宜的离子源。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的质谱仪是大气压下的电离，电离方式属于软电离，当增加能量时，脱掉的碎片为中性分子，对于电离稳定性差的物质（如苷类，小肽等）逐步增加能量会依次逐个脱掉糖或氨基酸，得到非常多的片断信息，对于结构解析非常有好处，现有仪器最多可以做到11级质谱，该类质谱的缺点是至今还没有统一的谱库，不同的仪器碎片离子不很一致。以往常用的EI是一种强电离，一般得不到分子离子峰的信息，对于电离稳定的化合物有助于结构解析，FAB电离强度略弱，一般可以得到分子离子峰，碎片也较多，同时可以产生正负离子，EI和FAB的好处是电离方式稳定，有谱库可查，对于已知化合物鉴定更有帮助，但这两种质谱都没有多级质谱，提供的碎片信息有限。 2) 一级图谱测定和分析时，质量数范围应充分放宽，一是为了防止漏掉可能的杂质，二是防止观察不到多聚物。一般的质谱仪可以检测到50-1500。这点对于评价化合物纯度，以及选择适宜的杂质检测方法很有意义。 3) 多级图谱定性测定时，首先要保证一级质谱的峰强度，待测物是最强峰，以保证碎片峰的准确性，一般正离子检测达应达到e7（代表最强峰的强度，值越大，峰越强），负离子检测达e6；一级质谱峰足够强才能保证碎片峰的强度，否则将会导致碎片峰中杂峰过多，难于分辨哪一个碎片峰来源于样品，为结构解析带来难度。4) 提供图谱时信息尽可能详尽，一般质谱仪测定时会给出详细的相关信息，提供给对方时不要删除，如：电离方式是正离子（+ESI，+APCI，+APPI）还是负离子（-ESI，-APCI，-APPI），检测方式是一级质谱（MS）、选择离子监测（SIM）、选择反应监测（SRM）还是二级质谱全扫描（FULL MS2），峰强度等。这样不仅方便进行资料的回顾性分析，也便于审评人员进行技术评价。5) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行定量时，在提供上述信息的同时，而且定量图谱上尽可能标明峰面积和保留时间，要提供空白样品和最低定量限样品的图谱，以保证可靠性。6) 进行定量分析前，为保证检测下限尽可能低，需要对化合物的仪器参数进行优化。优化时应注意使待测物母离子峰强度保持适宜的强度（一般在e6左右即可），过强或过弱均可能会使优化的参数不准确；其次应在总离子流稳定的情况下进行参数优化，一般要求波动小于10%。参数优化后可根据经验再进行适当的调整，以保证更好的适用性。7) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行杂质分析时，最好有二极管阵列检测器（DAD），提供紫外色谱图、质谱色谱图和相应峰位杂质的多级质谱图。考虑到DAD一般多连接在质谱仪的前面，故质谱色谱图应比紫外色谱图的保留时间略长。 8) 由于质谱的稳定性没有普通检测器好，定量分析时最好有内标，内标与待测物最好性质相近，保留时间基本一致，待测物的氘代品为最佳选择。测定基质复杂的生物样品时，方法学确证要测定稀释效应和基质效应，建立的方法要消除这两种效应的干扰。

[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]因其对大部分化合物的高灵敏度得到越来越广泛的应用，适合于体内药物、体内有毒物质、药物的杂质等物质的定性和定量分析等领域。与传统的色谱分离检测器（紫外、荧光、视差、蒸发光散射、电化学等）检测的分析手段比较，质谱属于液相色谱的广适性检测器，具有明显的优势，该方法适用范围更广，灵敏度和高通量的特点，能够满足多个领域的定性和定量要求。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]用于小分子化合物定性已有多年历史，普通高效液相系统只能对已知化合物（有标准品的化合物）通过峰位来定性，对于未知化合物却无能为力。而高效液相色谱—质谱联用仪可以对化合物作多级质谱，通过多级质谱的分析来推测化合物的结构，从而对已知和未知化合物均可以较准确的定性。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]还可用于小分子化合物定量，且与用普通高效液相系统对化合物进行定量相比，其不需要定量的化合物必须与样品中的其它有类似性质的成分完全分离，而高效液相色谱—质谱联用仪对化合物间的分离度没有要求，不但对保留时间不一致的物质能区分开，即使保留时间完全一致也同样互不干扰，只要过滤出想测的物质即可；且该方法可在数分钟内对几十个化合物同时定量，简便、快捷、灵敏、可靠。 质谱仪的定量原理是在电压和气流的作用下把待测物加氢离子（正离子方式）或减氢离子（负离子方式）后带电荷，仪器检测到的是一定质核比（m/z）的物质，即选择离子监测（SIM），其他质量数的物质能被滤掉，其他原理及要求同一般色谱要求。目前多使用的一般仪器是单位质量分辨，可将分子量相差1的物质完全可以区分，专属性高，用单四级杆质谱仪就可以定量；有时为了进一步保证检测的准确性，把待测物加能量打碎，产生碎片离子（子离子），对母离子和子离子同时进行检测，采用三重四级杆质谱仪，也就是用选择反应监测（SRM）定量，母离子和子离子均完全一样的物质非常少见，因此定量的准确性更好，检测限更低。 根据使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]的经验和审评体会，认为在使用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]测定和分析中需注意以下问题： 1) 测试者需根据自己的测试需要确定适宜的离子源。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用[/color][/url]的质谱仪是大气压下的电离，电离方式属于软电离，当增加能量时，脱掉的碎片为中性分子，对于电离稳定性差的物质（如苷类，小肽等）逐步增加能量会依次逐个脱掉糖或氨基酸，得到非常多的片断信息，对于结构解析非常有好处，现有仪器最多可以做到11级质谱，该类质谱的缺点是至今还没有统一的谱库，不同的仪器碎片离子不很一致。以往常用的EI是一种强电离，一般得不到分子离子峰的信息，对于电离稳定的化合物有助于结构解析，FAB电离强度略弱，一般可以得到分子离子峰，碎片也较多，同时可以产生正负离子，EI和FAB的好处是电离方式稳定，有谱库可查，对于已知化合物鉴定更有帮助，但这两种质谱都没有多级质谱，提供的碎片信息有限。 2) 一级图谱测定和分析时，质量数范围应充分放宽，一是为了防止漏掉可能的杂质，二是防止观察不到多聚物。一般的质谱仪可以检测到50-1500。这点对于评价化合物纯度，以及选择适宜的杂质检测方法很有意义。 3) 多级图谱定性测定时，首先要保证一级质谱的峰强度，待测物是最强峰，以保证碎片峰的准确性，一般正离子检测达应达到e7（代表最强峰的强度，值越大，峰越强），负离子检测达e6；一级质谱峰足够强才能保证碎片峰的强度，否则将会导致碎片峰中杂峰过多，难于分辨哪一个碎片峰来源于样品，为结构解析带来难度。 4) 提供图谱时信息尽可能详尽，一般质谱仪测定时会给出详细的相关信息，提供给对方时不要删除，如：电离方式是正离子（+ESI，+APCI，+APPI）还是负离子（-ESI，-APCI，-APPI），检测方式是一级质谱（MS）、选择离子监测（SIM）、选择反应监测（SRM）还是二级质谱全扫描（FULL MS2），峰强度等。这样不仅方便进行资料的回顾性分析，也便于审评人员进行技术评价。 5) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行定量时，在提供上述信息的同时，而且定量图谱上尽可能标明峰面积和保留时间，要提供空白样品和最低定量限样品的图谱，以保证可靠性。 6) 进行定量分析前，为保证检测下限尽可能低，需要对化合物的仪器参数进行优化。优化时应注意使待测物母离子峰强度保持适宜的强度（一般在e6左右即可），过强或过弱均可能会使优化的参数不准确；其次应在总离子流稳定的情况下进行参数优化，一般要求波动小于10%。参数优化后可根据经验再进行适当的调整，以保证更好的适用性。 7) 用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质联用仪[/color][/url]进行杂质分析时，最好有二极管阵列检测器（DAD），提供紫外色谱图、质谱色谱图和相应峰位杂质的多级质谱图。考虑到DAD一般多连接在质谱仪的前面，故质谱色谱图应比紫外色谱图的保留时间略长。 8) 由于质谱的稳定性没有普通检测器好，定量分析时最好有内标，内标与待测物最好性质相近，保留时间基本一致，待测物的氘代品为最佳选择。测定基质复杂的生物样品时，方法学确证要测定稀释效应和基质效应，建立的方法要消除这两种效应的干扰。

有内标的方法怎么校正？

各位大虾，你们用的In和Bi等内标溶液和质谱的刻度标液是在哪里买的？知道的话，请帮忙把卖家的联系方式给我好吗？小妹先谢了。

想写一点连续流质谱的东西，可是发现最后还是不明白这个东西的精确定义是什么。它是否属于GCMS范畴？？它和双路进样的具体比较等。连续流同位素质谱仪-IsoPrime(Continuous Flow Isotope Ratio Mass Spectrometer)简介经典同位素分析方法使用离线方式，即样品前处理和质谱分析分别进行，样品前处理必须精心仔细，工作量较大，分析效率低，方法精度主要决定于前处理，体现不出质谱仪高灵敏、高精度的特点，而微量样品的分析一直比较困难。在1983年Preston 和 Owens首次证明了在氦气流的携带下，直接采集目标气体进入质谱离子源的技术是可行的，并用这种方法在极短时间里完成了氮同位素的分析，由于样品的处理和测定是在线连续进行的，“连续流”质谱分析技术因此得名并发展起来。双路进样质谱的测试精度一般能达到0.02 ‰，连续流质谱离子源由于只能获得样品单一脉冲信号，其测试精度只能达到0.1~0.5‰，这是连续流质谱的弱势，若综合考虑样品前处理，两者总精度相当，但连续流质谱技术的高效率和小样量与经典方法比较却有显著的优势，同时，多种多样的进样器配置适合环境样品复杂的特点，这对拓展同位素分析技术的应用领域提供了一种快速、高效的手段。

我们知道质谱仪是需要真空系统的，并且对某些仪器来说真空系统特别重要，无机质谱仪器就比有机质谱仪器需要更高的真空，那么为什么需要真空系统呢？ 有什么方法可以实现真空系统？

以前都是用外标法做液相检测，现在本人要用内标法建一个药物的检测方法。我想问一下论坛里的各位高手，这个内标物的浓度该如何确定呢？如果内标定高了，当主药物浓度很小，峰型小时，内标峰对主药物峰会有影响的吧？还请教一个问题，在做定量限和检测限的时候，内标要不要做呢？谢谢

各位大佬，我现在在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]上做22种物质(混标)还有4个内标(单标)的方法开发，已经确定这些物质的质谱信息(母离子和子离子，碎裂电压，碰撞电压等)，[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]也调的差不多了，那我后续该怎么操作？ 原本操作是将22种物质和4种内标的质谱信息(子离子只输入了峰较高的一个)都输入mrm模式里。但是出来的结果的是，混标里面出现了4个内标的峰， 每个内标(都是纯物质)里出现了混标里的物质，我知道这可能是因为我软件操作，所以我想问下我该怎么在软件上输入每个质谱信息，不会出现这种情况[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/03/202303261657093125_3053_5864297_3.png[/img]

我用Agilent的二级质谱测样，流动相是甲酸铵（甲酸调pH）-乙腈体系，以前内标没有大的问题，最近一条标曲做下来，一开始内标面积会慢慢变大，相同的样品再进一次，内标会慢慢变小，不知道原因所在。。。而且有的样品内标面积会突然增大，大概有正常样品面积的两倍，不知道这种情况是仪器的问题还是有其他的原因？我用的是UPLC，大概2min一针，不知道是不是杂质没冲出来对后面的样品产生了干扰？

大家好，本人是刚接触安捷伦气相色谱质谱6890A/5975c的同学，想用它来检测细胞内代谢物，选用了十四酸做内标，但细胞内代谢物各组分不知道，也无法得到标准品，请问这时候想用内标法定量细胞内的某些成分还能做么？如果能，具体怎样做才可以呢

真空系统提供和维持质谱仪器正常所需要的高真空度，通常在10-3～10-9Pa。由于日常工作中，需要经常更换配件或定期保养仪器，在拆卸安装仪器时，质谱仪容易出现空气泄漏的故障。而空气泄漏故障发生的位置比较多，排查时比较费时费力。本篇文章将对质谱仪真空系统的故障排查和日常维护进行简单介绍。　　[b]质谱仪的真空要求[/b]　　质谱仪必须在良好的真空条件下才能正常工作，一般要求离子源的真空度应达10-3～10-4Pa，质量分析器和检测器的真空度应达10-4～10-5Pa。　　质谱仪器为什么需要高真空？　　(1)离子的平均自由程必须大于离子源到收集器的飞行路程；　　(2)氧气分压过高影响电子轰击离子源中灯丝的寿命；　　(3)离子源内的高气压可能引起高达数千伏的加速电压放电；　　(4)高气压产生的高本底会干扰质谱图及分析　　(5)离子源内高气压会引起离子—分子反应，改变质谱图样；　　(6)电离盒内的高气压会干扰轰击电子束的正常调节。　　[b]真空泵的用途[/b]　　质谱仪一般采用两级真空系统，由机械泵和高真空泵组合而成。常用的机械泵是旋转式油封泵。那么真空泵的主要用途是什么呢？　　一是作为高真空泵-扩散泵或分子泵的前级泵，提供高真空泵正常工作所需要的前级真空；　　二是预抽真空，为直接进样系统、间接进样系统以及离子源或整个仪器暴露大气后预抽真空，色质联用时也用于分子分离器抽低真空，高真空泵才能达到和维持质谱仪器正常工作所需要的10-4pa以上的真空水平。　　为了保护高真空泵并使其充分发挥效率，必须在前级的机械泵达到一定真空度的条件下，才能开启和关闭高真空泵。常见的高真空泵有油扩散泵、汞扩散泵、溅射离子泵、涡轮分子泵等。　　[b]空气泄漏症状[/b]　　任何需要真空操作的仪器都存在空气泄漏的故障。出现空气泄漏时，主要症状有哪些？　　(1)超过正常真空多级连接管压力或前级压力；(2)超过正常本底；(3)空气特征峰(m/z 18、28、32和44，或m/z 14、16)；(4)灵敏度低；(5)m/z 502处相对丰度低(该值随所使用的调谐程序而有所不同)。　　[b]确认空气泄漏的存在　　如何才能发现空气泄露？[/b]　　处于m/z 18、28、32和44的峰是MSD有空气泄漏时的典型峰。这些质量的小峰是正常的，m/z 14和16的大峰是空气明显泄漏的症状。如果MSD近进行过放空，需要经过4h，m/z 28(氮气)才能降至适当低的　　水平；需要经过24h，m/z 18(水)才能降至适当低的水平。如果这些峰变大或干扰了分析，需检查调谐报告。　　调谐报告比较m/z 18(水)和m/z 28(空气)的丰度与m/z 69(全氟三丁胺)的丰度之比。如果调谐报告中的比例不可接受(m/z 18大于m/z 69的10%)，等待几个小时然后重新调谐。如果比例仍然不可接受，且没有降低，检查空气泄漏。如果空气泄漏存在，那么m/z 28与m/z 32的丰度比值约为5∶1。　　[b]查找空气泄漏的方法　　①载气管线的检查[/b]　　首先需要确定所有接头是否有明显松动。对于严重的漏气，可以采用皂液检漏的方法，在管线和阀的接口处挤上适量的肥皂检漏液，漏气的部位会出现明显的气泡；对于轻微的漏气，关闭[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]进样口的压力，关闭气瓶的总阀，开启分压阀，若有漏气，15min后分压表的压力会有明显的下降。　　[b]②GC部分的检查[/b]　　通常GC部分的空气泄漏通常会发生在内部的载气管接头、隔垫、隔垫定位螺母、O形圈、柱螺母等位置。此外，色谱柱断裂也会引起空气泄漏。若隔垫漏气，可以看到以下信号:如保留时间的延长或漂移，响应值降低，或柱前压降低等。　　用适量的丙酮涂抹上述位置(进样口、进样口柱螺母、色谱柱)，每次一个位置，先后顺序依照离MS部分由近及远的原则。在适当的时间后，观察数据系统中的峰图，若m/z 58和m/z 43处出现一个陡峭的、显著的攀升，说明在刚刚涂抹丙酮的位置存在空气泄漏。同样，也可以喷射惰性气体(如氩气)进行检漏，观察峰图中曲线在m/z 40处的攀升情况加以判断。　　[b]③MS部分的检查[/b]　　空气泄漏还可出现在MSD的更多处，如GC/MSD接口柱螺帽、GC/MSD接口O形圈、侧板O形圈(整个周围)、前端盖和后端帽的O形圈、三级真空规管的连头、校准阀。空气泄漏更容易出现在频繁开关的密封垫处，如色谱柱螺帽、侧板O形圈或放空阀的O形圈。空气泄漏在很少或从不打开的密封垫处出现较少，如前端盖和后端帽的O形圈或GC/MSD接口柱螺帽。　　在MSD中查找空气泄漏的方法与GC部分类似，在可能发生空气泄漏的位置涂抹丙酮或喷射氩气，每次一个位置。总是从近被打开过的密封装置开始，这是有可能发生空气泄漏的地方。在涂抹完一个位置后，观察数据系统中的峰图变化加以判断。　　[b]④隔离难以发现的泄漏[/b]　　如果寻找空气泄漏过程中遇到困难，可以使用下述方法确定泄漏是在GC中还是MSD中:先进行空气和水检查；将[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]气质联用仪[/color][/url]所有加热区冷却后，取下GC色谱柱，用一个隔垫盖住色谱柱端口；等待15～20min，再一次检查空气和水，比较次和第二次检查的结果。　　如果结果基本相同，则泄漏存在于MSD中或GC/MSD接口末端的色谱柱螺帽处。如果结果显著不同，泄漏可能存在于GC。　　[b]真空系统的维护　　①气源[/b]　　载气纯度不够，或剩余的载气量不够时，也会造成m/z 28谱线丰度过大。选购的氦气纯度必须达到99。999%，当气瓶的压力达不到3MPa时，应更换载气，以防止瓶底残余物(N2)对气路的污染。载气管线　周围的温度改变和振动可导致载气供给和GC之间的管路接头泄漏，因此应定期对所有的外加接头进行检漏(大约每隔4～6个月)。　　[b]②脱氧管[/b]　　根据推荐，每用完3瓶气，应更换脱氧管，以防止气体的污染。脱氧管使用时间过长，吸附的氧气会随着载气进入仪器，导致m/z 32的谱线丰度过大。市售的脱氧管通常会用氮气进行饱和，安装时，必须用氦气将脱氧管内和管线里的氮气吹扫干净，再接至仪器上。　　[b]③机械泵[/b]　　为了保证机械泵的工作状态，达到要求的真空度，机械泵必须及时维护。由于前级泵油受热，或进入空气、水、溶剂和样品时会逐渐失效(一种症状是油的颜色逐渐变深)，前级泵不能有效工作，可能增加前级压力和真空多路连接管压力。　　国外公司要求三个月更换一次油，如果油变色或者有泡沫，应该随时更换。换的泵油型号也一定要相同，不同牌号的泵油不能混合使用。　　[b]④进样口[/b]　　隔垫的使用寿命由进样频率和针头质量决定。针头的毛刺、尖锐边缘，粗糙表面，或针头钝都会降低隔垫的使用寿命。隔垫应该少每100次进样后进行更换。当仪器连续使用时，建议每天更换隔垫。O形圈材料中有使其增加柔韧性的增塑剂，在高温下增塑剂会固化，使O形圈变硬，不能起到密封作用。　　[b]⑤GC/MS接口和GC接口[/b]　　GC/MS接口和GC接口在色谱柱温箱里，温差变化大，十分容易泄漏。在安装时，必须使用石墨化的Vespel圈，螺帽紧固到一定程度后，随色谱箱温度程序升温一个周期后再紧固1/4～1/2圈为好。　　[b]⑥抽真空时间[/b]　　每次开机时，等候直到MSD加热区位于其标准设定值至少2h，然后尝试自动调谐。如果MSD近进行过放空，需要经过4h，m/z 28(氮气)才能降至适当低的水平；需要经过24h，m/z 18(水)才能降至适当低的水平。　　质谱仪开机时，需要将侧门用力的推一下，使侧门能在负压的作用下吸紧，防止细小纤维或灰尘吸附在侧门周围；放空后，放空阀要及时关紧。　　质谱仪操作过程中，做好仪器的日常记录和维护。在质谱仪发生空气泄漏的故障时，根据近期的使用状况，仔细排查可能发生问题的部位，并采取适当的措施，空气泄漏的故障通常能很快排除

请问什么是同位素稀释气相色谱质谱法？和同位素内标法一样吗？

如题，请问大家在使用hj639方法测定水中挥发性有机物（吹扫捕集/气相色谱-质谱法）如何确定检测限？使用吹扫捕集经常会有残留，方法中没有给出确定检测限的方法。

作为一个新人，要开始做实验了。仪器是waters的XEVO TQD，实验是液质联用来做三种药物的检测方法。很迷茫啊！听说液质方法先确定质谱方法，怎么确定，怎么进样。求教各位的经验啊。