色谱甲醛乙醛测定方法

微量甲醛、乙醛液相色谱测定法1　适用范围本标准规定了液相色谱测定水溶液或环氧乙烷样品中的甲醛和乙醛的方法。本标准适用于样品中甲醛、乙醛含量为1～50mg/kg的分析。2　方法概要　　液态样品中微量甲醛、乙醛与2、4-二硝基苯肼衍生生成甲醛-2、4-二硝基苯腙（以下称：甲醛-DNPH）和乙醛-2、4-二硝基苯腙（以下称：乙醛-DNPH），在通过固相C18小柱将甲醛、乙醛的衍生物从溶液中萃取出来。随后，使用自动进样器直接将萃取出的甲醛、乙醛衍生物注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]，样品在甲醇和水混合溶液携带下通过毛细管色谱柱分离，使样品里的甲醛衍生物、乙醛衍生物及未反应2、4-二硝基苯肼按照不同顺序先后进入紫外检测器检测。最后，由色谱数据工作站采用外标法得到各物质含量。3　试剂和材料3.1　甲醇：液相色谱（HPLC）纯。3.2超纯水：比电阻率大于18.2ΜΩcm的水。3.32，4-二硝基苯肼（DNPH）：分析纯。3.4超声波振荡器。3.5玻璃溶剂过滤器。3.6真空泵。3.7量筒：10mL。3.8量筒：25mL。3.9具塞碘量瓶：250mL。3.10C18固相萃取小柱（SPE）。3.11注射器：5mL。3.12注射器：10mL。3.13烧杯：50mL3.14标准溶液：与分析样品浓度相接近甲醛、乙醛水溶液，自配或外购。4　仪器4.1液相色谱仪：安捷伦科技公司1200型，配有自动进样器、真空脱气、四元梯度泵和紫外检测器，或同类产品。4.2色谱数据工作站：安捷伦科技公司Chemstation工作站，或同类产品。4.3色谱柱：见表1推荐色谱柱，或同类产品。推荐色谱柱典型操作条件见表1，典型色谱图见图1。[img=,681,608]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709032112_01_2166779_3.png[/img]5　校正仪器第一次使用或者被改变了某一或某些参数设置（如流量、流动想类型、流动相比例、色谱柱等），应对仪器进行校正。使用已知与样品接近含量的标准甲醛、乙醛溶液与DNPH络合后，在液相色谱仪上分析，测量两物质色谱峰峰面积，计算校正因子k[sub]i[/sub]：k[sub]i[/sub]=标准液中i物质浓度/i物质衍生物峰面积。6　试验步骤6.1用5mL注射器将5mL甲醇注入C18固相萃取小柱，冲洗萃取小柱进行预处理，然后再用5mL超纯水冲洗。6.2分别取10g样品(由于环氧乙烷沸点较低，环氧乙烷产品可直接使用量筒量取11.2mL)、10mL2，4-二硝基苯肼（DNPH）试剂和10mL超纯水转移到碘量瓶内，盖上瓶塞，让混合物反应15分钟。如果观察到沉淀，则应使用超纯水按1：10稀释样品，并按上述描述再次进行操作。6.3使用一个10mL量筒量取10mL的反应混合物，用针筒将其转移到一个6.1中预处理好的固相萃取小柱，注射时应将样品缓慢地推进萃取小柱。然后，使用10mL超纯水重复上述步骤，注意需将所有液体推出萃取小柱。6.4用注射器将8mL甲醇推进萃取小柱，以洗脱富集被固相萃取小柱从样品中萃取出的甲醛-DNPH、乙醛-DNPH及未反应的DNPH溶液。洗脱富集液放置于烧杯中。再向烧杯添加少量甲醇，使溶液的最终重量达到10±0.01g。6.5使用符合4.3中推荐色谱柱或同类色谱柱，采用自动进样器将适量6.4中的洗脱富集样品注入4.1规定液相色谱仪，通过色谱工作站测量各物质出峰面积，利用已测校正因子面积归一定量计算样品中各组成含量。6.6用10mL的去离子水替代样品重复步骤6.2至6.5，测定空白。7　计算7.1溶液甲醛、乙醛含量按下式计算：（外标法）X[sub]i[/sub]=A[sub]i[/sub]×k[sub]i[/sub]式中：X[sub]i[/sub]——被测组分i的含量，mg/kg；A[sub]i[/sub]——被测组分i的衍生物峰面积；k[sub]i[/sub]——被测组分i的绝对校正因子；i——甲醛或乙醛。8　精密度8.1　重复性同一操作者重复测定的两次测定结果的差值应不超过平均值的10%(m/m)。9　结果的表示仪器稳定状态下连续两次测定结果的平均值作为出厂产品的测定结果，生产装置过程控制使用单次测定数据作为结果报告，结果的表示修约至1mg/kg。10注意事项10.1　仪器进样前取样，需摇晃采样容器，以保证分析样品的均匀性。10.2　色谱流动相必须使用液相色谱（HPLC）纯试剂。10.3当分析环氧乙烷或含有环氧乙烷样品时，使用前应事先将试剂、容量瓶和量筒冷却，以防止环氧乙烷受热挥发。10.4　对含有环氧乙烷的样品的任何操作，必须在通风柜中完成，并做好个人防护。

[b][font=微软雅黑]一、原理[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]用亚硫酸氢钠溶液采样[/font][font=微软雅黑],乙醛与亚硫酸氢钠发生亲核加成反应,在中性溶液中生成稳定的α-羟基磺酸盐,然后在稀碱溶液中共热释放出乙醛,经色谱柱分离,用氢火焰离子化检测器测定。以标准样品色谱峰的保留时间定性,峰高或峰面积定量。[/font][/font][b][font=微软雅黑]二、方法的适用范围[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]本方法适用于固定污染源有组织排放和无组织排放的乙醛测定。当采样体积为[/font][font=微软雅黑]100L,进样体积为1μl时,乙醛的检出限为4×10[/font][/font][sup][font=微软雅黑][font=微软雅黑]-2[/font][/font][/sup][font=微软雅黑]mg/m[/font][sup][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sup][font=微软雅黑],乙醛的定量测定浓度范围为0.14～30mg/m[/font][sup][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sup][font=微软雅黑]。[/font][b][font=微软雅黑]三、试剂和材料[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]除非另有说明[/font][font=微软雅黑],分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂和不含有机物的蒸馏水。[/font][/font][font=微软雅黑]①不含有机物蒸馏水的制备:加入少量高锰酸钾的碱性溶液于当通的蒸馏水或去离子水中使呈红紫色,再进行蒸馏即得(在整个蒸馏过程中水应始終保持红紫色,否则随时补加高锰酸钾)。[/font][font=微软雅黑]②丙酮( CH[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]COCH[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑])。[/font][font=微软雅黑]③三聚乙醛(CH[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CHO)[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]。[/font][font=微软雅黑]④浓盐酸(HCl):ρ=1.19g/ml。[/font][font=微软雅黑]⑤浓硫酸(H[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]2[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]SO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]4[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]):ρ=I.84g/ml。[/font][font=微软雅黑]⑥无水碳酸钠(Na[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]2[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑],基准试剂)。[/font][font=微软雅黑]⑦880[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]担体(酸洗硅烷化硅藻上白色担体)(GCS880AW DMCS),80～100目。[/font][font=微软雅黑]⑧聚乙二醇20000固定液(PEG-20M)。[/font][font=微软雅黑]⑨亚硫酸氢钠吸收液 C=10g/L:称取10.0g亚硫酸氢钠溶于蒸馏水中,并稀释至 1000ml。[/font][font=微软雅黑]⑩碳酸钠溶液C(Na[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]2[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑])=2.0mol/L:称取106g碳酸钠溶液溶于蒸馏水中,并稀释至500ml。[/font][font=微软雅黑]?饱和氯化钠水溶液。[/font][font=微软雅黑]?氢氧化钠溶液:C(NaOH)=0.1mol/L。[/font][font=微软雅黑]?羟胺乙醇溶液 C=21g/L:称取 2.1g 盐酸羟胺溶于 10ml 水中,用95%乙醇稀释到100ml。[/font][font=微软雅黑]?溴酚蓝指示剂 C=1g/L:称取0.1g溴酚蓝于100ml 20%乙醇中。[/font][font=微软雅黑]?溴甲酚绿-甲基红指示剂:三份 1g/L 溴甲酚绿乙醇溶液于ー份2g/L甲基红乙醇溶液混合。[/font][font=微软雅黑]?盐酸标准溶液C(HCl)=0.02mol/L:量取浓盐酸1.7ml,用水稀释至1000ml,混匀。[/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]标定方法[/font][font=微软雅黑]:准确称取三份基准无水碳酸钠(预先在270～300℃干燥至恒重)0.0400g,分別放入三个250ml锥形瓶中,各加水5ml,使其溶解,加入溴甲酚绿-甲基红指示剂2～3滴,以配制好的盐酸溶液滴定至溶液由绿色变为暗组色,即为终点。计算如下:[/font][/font][img=,133,43]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070914154975_7921_1623757_3.jpg!w133x43.jpg[/img][font=微软雅黑] [/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]式中[/font][font=微软雅黑]:G——所称碳酸钠的重量,g [/font][/font][font=微软雅黑] V——滴定所消耗的盐酸总体积,ml [/font][font=微软雅黑] 0.05299——1/2mmol/L盐酸标准溶液的浓度,mol/L。[/font][font=微软雅黑]?乙醛标准贮备液:在一个500ml容量瓶(A瓶)中,加入400ml亚硫酸钠吸收液,加入5.00ml新鲜解聚的乙醛,用亚硫酸氢钠吸收液稀释至标线(此乙醛标准贮备液在冰箱中可保存一个月)。与此同时,吸取5.00ml新鲜解聚的乙醛放入已加有400ml重蒸馏水的500ml容量瓶(B瓶)中,用重蒸馏水稀释至标线,用羟按法标定乙醛溶液的浓度。[/font][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]解聚方法[/font][font=微软雅黑]:[/font][/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]在装有分馏柱的蒸馏装置中加入[/font][font=微软雅黑]50ml三聚乙醛和0.5ml浓硫酸,缓慢加热,使乙醛在35℃以下蒸出,用一个冰水冷却的接收器收集解聚新鲜乙醛。[/font][/font][b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]标定方法[/font][font=微软雅黑]:[/font][/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]分别吸取[/font][font=微软雅黑]21g/L羟胺乙醇溶液 500ml 和 0.1mol/L NaOH溶液10.0ml于100ml碘量瓶中,然后加入5.00ml乙醛水溶液,塞好磨口玻璃塞,摇匀,在室温放置30min,然后加入3滴溴酚蓝指示剂后,用0.02mol/L盐酸标准溶液滴定至蓝绿色。同时进行空白试验,在5.00ml羟胺乙醇溶液和 10.0ml NaoH溶液中加入2.0ml饱和 NaCl 水溶液及3滴溴酚蓝指示剂,用0.02mol/L盐酸标准溶液滴定至蓝绿色。另取20ml蒸馏水,加入3滴0.1%溴酚蓝指示剂,再滴定至终点。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]按下式计算乙醛溶液浓度[/font][font=微软雅黑]:[/font][/font][img=,552,45]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070914226477_4749_1623757_3.jpg!w552x45.jpg[/img][font=微软雅黑] [/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]式中[/font][font=微软雅黑]:V——所取乙醛水溶液样品的体积,ml [/font][/font][font=微软雅黑] M——盐酸标准溶液的浓度,mol/L [/font][font=微软雅黑] A——空白滴定所消耗盐酸标准溶液的体积,ml [/font][font=微软雅黑] B——标定乙醇溶液所消耗盐酸标准溶液的体积,ml [/font][font=微软雅黑] C——蒸馏水滴定所消耗盐酸标准溶液的体积,ml [/font][font=微软雅黑] 44.05——1mol CH[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CHO 的克数。[/font][font=微软雅黑]?乙醛标准溶液:临用前,把乙醛标准贮备液用亚硫酸氢钠吸收液逐级稀释成1000mg/L和100mg/L的标准溶液。[/font][b][font=微软雅黑]四、仪器[/font][/b][font=微软雅黑]1)[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]:具氢火焰离子化检测器。[/font][font=微软雅黑]2)色谱柱:长2m,内径3mm的玻璃柱。[/font][font=微软雅黑]3)固定相:20%PEG 20M-GCS880 AW DMCS,80～100目。[/font][font=微软雅黑]4)采样仪器:[/font][font=微软雅黑]①有组织排放监测采样仪器:参考GB 16157-1996 中9.3配置采样仪器。[/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]采样管[/font][font=微软雅黑]:采用不锈钢、硬质玻璃或聚四氟乙烯材质,具有适当尺寸的管料作采样管,并具有可加热至120℃以上的保温夹套。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]样品吸收装置[/font][font=微软雅黑]:10ml多孔玻板吸收管。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]流量计量装置[/font][font=微软雅黑]:见GB16157—1996中9.3.6。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]抽气泵[/font][font=微软雅黑]:见GB16157—1996中9.3.7。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]连接管[/font][font=微软雅黑]:聚四氟乙烯软管或内衬聚四氟乙烯膜的硅橡胶管。[/font][/font][font=微软雅黑]②无组织排放监测采样仪器:[/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]引气管[/font][font=微软雅黑]:聚四氟乙烯软管,头部接一玻璃漏斗。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]样品吸收装置[/font][font=微软雅黑]:10ml多孔玻板吸收管。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]流量计量装置、抽气泵和连接管[/font][font=微软雅黑]:参上述相应部分配置。[/font][/font][b][font=微软雅黑]五、样品采集和保存[/font][font=微软雅黑]1、有组织排放样品采集[/font][/b][font=微软雅黑]①采样位置和采样点:按GB 16157-1996 中9.1.1和9.1.2确定采样位置和采样点。[/font][font=微软雅黑]②采样装置的连接:参考GB16157-1996中9.3图28,按采样管、样品吸收装置、流量计量装置利抽气泵的顺序连接好采样系统,连接管要尽可能知。按GB16157-1996中9.4的要求检查采样系统的气密性和可靠性。[/font][font=微软雅黑]③样品采集:将采样管头部塞适量玻璃棉后,插入排气筒采样点,用一支内装10g/L NaHSO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]溶液[/font][font=微软雅黑]5ml的多孔玻板吸收管,以0.3～0.5L/min的流量采样:采样过程中调节夹套温度,以使水汽不在管壁凝结为宜,采样时间视乙醛浓度而定。纪录采样流量、温度、压力及采样时间等。采样结束后,取下吸收管,密封其进、出口,带回实验室。[/font][/font][b][font=微软雅黑]2、无组织排放样品采集[/font][/b][font=微软雅黑]①采样位置和采样点:按GB16297-196中附C的规定确定无组织排放监控点的位置,或按其他特定的要求确定环境空气采样点。[/font][font=微软雅黑]②采样装置的连接:按引气管、样品吸收装置、流量计量装置和抽气泵的顺序连接采样系统,连接管要尽可能短。如无必要,样品吸收装置前可不接引管。按GB16157-1996中9.4的要求检查采样系统的气密性和可靠性。[/font][font=微软雅黑]③样品采集:用一支装 10g/L NaHSO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]溶液[/font][font=微软雅黑]5ml的多孔玻板吸收管,在常温下以1.0L/min的流量采样100L以上,同时记录采样温度、压力及采样时间。采样结束后,取下吸收管,密封其进、出口,带回实验室进行分析。[/font][/font][b][font=微软雅黑]3、样品保存[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]采集好的样品应尽快分析。如不能及时分析[/font][font=微软雅黑],在常温下避光保存,至多可保存6d。[/font][/font][b][font=微软雅黑]六、步骤[/font][font=微软雅黑]1、色谱条件[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]柱温[/font][font=微软雅黑]:90℃ 气化室温度:140℃ 检测器温度:140℃。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]载气[/font][font=微软雅黑]:纯氮(99.99%),流量为20ml/min。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]燃气[/font][font=微软雅黑]:纯氢(99.9%),流量为50ml/min。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]助燃气[/font][font=微软雅黑]:空气,流量为350ml/min。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]进样量[/font][font=微软雅黑]:1μl。[/font][/font][b][font=微软雅黑]2、校准曲线的绘制[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]乙醛的标准系列[/font][font=微软雅黑]:取七个10ml比色管,按表1配制成乙醛的标准系列[/font][/font][img=,453,123]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070914307977_1129_1623757_3.jpg!w453x123.jpg[/img][font=微软雅黑] [/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]向以上各比色管中加入[/font][font=微软雅黑]2.0mol/L的Na[/font][/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]2[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]溶液[/font][font=微软雅黑]0.50ml,摇匀。按所用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]的操作规程,用微量进样器分别吸取1μl标准系列溶液,在相同色谱条件下测定各标准溶液的色谱峰高,以峰高为纵坐标,乙醛含量为横坐标绘制标准曲线,并计算校准曲线的线性回归方程式。[/font][/font][b][font=微软雅黑]3、样品测定[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]将吸收管中的吸收液转移至[/font][font=微软雅黑]10ml比色管(带5ml刻度)中,用少量10g/L NaHSO[/font][/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]溶液洗涤吸收管[/font][font=微软雅黑],洗涤液并入10ml比色管中,并定容至5ml刻度,然后加入2.0mol/L的Na[/font][/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]2[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]溶液[/font][font=微软雅黑]0.50ml,摇匀。以下按绘制校准曲线相同步骤进行样品测定。[/font][/font][b][font=微软雅黑]七、计算[/font][font=微软雅黑]1、定性分析[/font][/b][font=微软雅黑]按乙醛标准溶液色谱峰的保留时间定性。[/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]若首次分析成分复杂的样品[/font][font=微软雅黑],并对定性结果存有疑虑时,应采用双柱定性。[/font][/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]若用双柱定性后[/font][font=微软雅黑],对结果仍有疑虑,可采用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]-质谱分析或其他方法作进一步定性。[/font][/font][b][font=微软雅黑]2、定量分析[/font][/b][font=微软雅黑]①校准曲线法:根据测得的乙醛峰高,直接在校准曲线上查得样品溶液中乙醛的含量C[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]样[/font][/font][/sub][font=微软雅黑],或由回归方程式计算样品溶液中乙醛的含量C[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]样[/font][/font][/sub][font=微软雅黑],再按下式计算气体样品中乙醛的浓度C。[/font][img=,367,42]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070914379918_1404_1623757_3.jpg!w367x42.jpg[/img][font=微软雅黑] [/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]式中[/font][font=微软雅黑]:C[/font][/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]样[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]——样品溶液中乙醛的含量,μg [/font][font=微软雅黑] h——样品溶液中乙醛的色谱峰高,mm [/font][font=微软雅黑] V[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]nd[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]——标准状态下的于采气体积,L [/font][font=微软雅黑] b——回归方程的斜率。[/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]在应用标准曲线法进行定量分析时[/font][font=微软雅黑],任何一次开机分析样品,都应首先绘制校准曲线,然后每分析5～10个样品(根据仪器的稳定情况而定)插入一校准曲线中浓度适当的标准样品,其测值与原先的测值比较,相对偏差应小于15%,否则应重新做校准曲线。[/font][/font][font=微软雅黑]②单点比较法:用单点比较法进行定量分析时,应具备如下条件:[/font][font=微软雅黑]a.标准溶液的响应值应与被测样品溶液的响应值接近 [/font][font=微软雅黑]b.标准溶液与样品溶液同时进行分析,进样体积相同 [/font][font=微软雅黑]c.一个样品连续进样两次,其测定值的相对偏差小5% [/font][font=微软雅黑]d.取两次测定平均值,按下式计算气体样品中乙醛的浓度C:[/font][img=,333,60]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070914438467_1013_1623757_3.jpg!w333x60.jpg[/img][font=微软雅黑] [/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]式中[/font][font=微软雅黑]:h[/font][/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]样[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]——样品溶液中乙醛的色谱峰高,mm [/font][font=微软雅黑] h[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]标[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]——标准溶液中乙醛的色谱峰高,mm [/font][font=微软雅黑] C[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]标[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]——标准溶液中乙醛的含量,μg [/font][font=微软雅黑] V[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]nd[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]——标准状态下干采气体积,L [/font][font=微软雅黑] 按GB16157-1996中10.1或10.2计算V[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]nd[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]。如用峰面积定量[/font][font=微软雅黑],峰高h改为峰面积A。[/font][/font][b][font=微软雅黑]3、乙醛有组织排放的“排放浓度”计算[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]按[/font][font=微软雅黑]GB16157-1996中11.1.2或11.1.4计算乙醛的“排放速率”。[/font][/font][b][font=微软雅黑]4、乙醛有组织排放的“排放速率(kg/h)”计算[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]按[/font][font=微软雅黑]GB16157-1996中11.4计算乙醛的“排放速率”。[/font][/font][b][font=微软雅黑]5、乙醛的“无组织排放监控浓度值”计算[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]按下式计算一个无组织排放监控点的乙醛平均浓度[/font][font=微软雅黑]:[/font][/font][img=,128,86]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070914487249_7872_1623757_3.jpg!w128x86.jpg[/img][font=微软雅黑] [/font][font=微软雅黑][font=微软雅黑]式中[/font][font=微软雅黑]:C——一个无组织排放监控点的乙醛浓度平均值 [/font][/font][font=微软雅黑] C[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]i[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]——一个样品的乙醛浓度 [/font][font=微软雅黑] n——一个无组织排放监控点采集的样品数目。[/font][font=微软雅黑] “无组织排放监控浓度值”的计算按GB16297—1996附录C中C2.3计算乙醛的“无组织排放监控浓度值”。[/font][b][font=微软雅黑]八、精密度和准确度[/font][font=微软雅黑]1、统一样品的精密度和准确度[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]用[/font][font=微软雅黑]10g/L NaHSO[/font][/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]溶液配制的含乙醛分别为[/font][font=微软雅黑]74.0mg/L.(在采样体积为100L时,相当浓度为3.70mg/m[/font][/font][sup][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sup][font=微软雅黑])和370.0mg/L(在采样体积为100L时,相当浓度为18.5mg/m[/font][sup][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sup][font=微软雅黑])的统一样品,经五个实验室分析,得到方法的精密度和准确度数据见表1。[/font][img=,417,174]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211070914536257_5413_1623757_3.jpg!w417x174.jpg[/img][font=微软雅黑] [/font][b][font=微软雅黑]2、实际样品的精密度和准确度[/font][/b][font=微软雅黑][font=微软雅黑]在同一时间、同一采样点统一采集并发放的无组织排放和有组织排放样品[/font][font=微软雅黑],经家实验室分析,相对标准偏差分别为9.5%和10% 加标收率分别为90.8%～126%(均值为103%)和189.0%～118%(均值为98.2%)。[/font][/font][b][font=微软雅黑]九、说明[/font][/b][font=微软雅黑]①在本方法选定的色谱条件下,样品中的甲醛、甲醇、乙醇、丙酮、甲酸、乙酸等有机化合物对醛的测定均无干扰。[/font][font=微软雅黑]②市售乙醛仅仅是400g/L的水溶液(分析纯),而且还有聚合物存在,故不能作为标准样品直接使用,必须标定其准确含量。[/font][font=微软雅黑]③用羟胺法标定乙醛溶液的浓度时,空滴定可作为在滴定样品时观测指示剂终点颜色的对照标准,为了对照准确,必须使在终点时两者溶液的体积相等。所以在样品滴定接近终点之前,应补充加入一定量的蒸馏水,然后将样品溶液继续滴定至终点。同时,由于蒸馏水的pH值比滴定至终点时溶液的pH值高得多,所以必须另取20ml蒸馏水,加入3滴1g/L溴酚蓝指示剂,再滴定至终点。由此可以计算因加入水而消耗的盐酸量的升数。[/font][font=微软雅黑]④乙醛是一种易燃、易挥发的危险品,在制备新鲜乙醛时,应当防止乙醛外溢,应用水浴加热,不能直接加热,而且应用水浴接收装置,将接收管的通入下水道。[/font][font=微软雅黑]⑤当室温较低时,2.0mol/L的Na[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]2[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]溶液会析出[/font][font=微软雅黑]Na[/font][/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]2[/font][/font][/sub][font=微软雅黑]CO[/font][sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]3[/font][/font][/sub][font=微软雅黑][font=微软雅黑]晶体[/font][font=微软雅黑],所以,在冬天需用温水浴加热伙其溶解后方可使用。[/font][/font][font=微软雅黑]⑥在较高气温下,连续长时间采集环境空气中乙醛时,如吸收液体积有明显减 少,需适当补加吸收液,使吸收液的体积维持在5ml左右。[/font][font=Calibri] [/font]

高效液相色谱法测定生物体内乙醛含量的方法摘要：在机体中乙醛是由乙醇在肝脏代谢中通过醇脱氢酶生成的，在肝脏其迅速通过氧化酶转变为乙酸。乙醛循环水平的生物基质的评估通常是通过顶空气相色谱法和反相高效液相色谱法进行的。本实验对乙醛测定方法进行了优化,通过RP-HPLC法测定肝癌细胞培养基，血液和血浆中的乙醛。样品除蛋白后，加入2,4 - 二硝基苯肼（DNPH）使之与乙醛衍生化。在反应中本实验对于衍生化试剂的pH值，反应时间时间和温度，衍生化试剂的量进行了考察优化，并对乙醛腙（ACH-DPN）衍生物的提取方法及其稳定性进行了研究。结果：本实验确定了在pH =4.0的情况下加入80倍过量2,4 - 二硝基苯肼（DNPH），反应在室温下进行40分钟即可，衍生化产物在室温下两天内稳定，在确定的色谱条件下DNPH 和ACH-DPN 11分钟内可以得到很好的分离，检测限可以达到80μM.前言：人体摄入酒精后，乙醛循环的水平取决于乙醛形成和消除的速率，乙醛主要是乙醇在乙醇脱氢酶的的作用下氧化生成，另有少量来自于微粒体乙醇氧化系统和过氧化氢酶对乙醇的氧化作用。乙醛再在乙醛脱氢酶的作用下生成乙酸。人体和大鼠中体内的乙醛的消除几乎都在肝脏线粒体内进行。生物体进食酒精后，组织和体液中低摩尔水平的乙醛是可以检测到的。测定体内乙醛含量非常困难，这是由于其成分复杂性、乙醛含量的波动性以及极低的限量。高效液相色谱方法需要衍生化试剂来标定和稳定乙醛，大部分的衍生化试剂都基于与乙醛的醛基反应。在本实验中样品通过脱蛋白后进行衍生再萃取，通过反相C18柱进行有效分离，优选的液相洗脱系统保证了其他物质的干扰。仪器和试剂：安捷伦液相1200配DAD检测器、Eclipse XDB-C18-USP L1分析柱（规格(mm):4.6＊150粒径:5μm），恒温水浴锅（上海）乙醛，DNPH和醋酸钠（上海嵘崴达实业有限公司）、AcH-DNP (1 mg/ml)（美国进口）乙腈（色谱纯）、三氟乙酸、盐酸、高氯酸、、Eagle培养基、胎牛血清（FBS），马血清和0.25％胰蛋白酶-EDTA（上海浩然生物技术有限公司）、人肝癌细胞（上海拜力）。乙醛ACH-DNP的衍生和提取取70 μl样品用两倍体积的高氯酸进行第一脱蛋白质。然后用乙酸钠调节pH为4，离心（1500转每分，10分钟，4℃），将上清液转移至冷管中。DNPH溶解于6N 盐酸，加入80倍摩尔过量DNPH 进行衍生化反应1小时，在22℃下振荡。衍生化反应结束后加入三倍体积的乙酸钠缓冲液（pH=9），衍生化反应的效率通过调节不同的pH值、反应温度、反应时间、DNPH的用量进行考察得出。AcH-DNP产物通过SEP-PAK C18固相萃取柱进行萃取，未反应的DNPH用水冲洗掉，然后用70％甲醇水冲洗;最后用甲醇将 ACH-DNP洗脱下来。甲醇提取物进行低温下干燥立即测定或者保存于在-20℃的环境中备用。液相系统：衍生化样品以50%乙腈溶解，进样量20μl，柱温28℃，流速1ml/分,检测波长360nm，另外215nm波长用于检测确保除蛋白效果。流动相A 0.1% TFA/water (v/v)流动相B 0.1% TFA/AcN (v/v),以40% B/60% A进行洗脱。AcH-DNP对照品溶解于40%乙腈中，外标法测定。 肝癌细胞：肝癌细胞的DMEM培养基含有10％FBS，5％CO2，在37℃的条件下进行。加入25%的乙醇于细胞培养基中，密闭条件下放置24小时，在测定乙醛含量时细胞聚集率达到50%，在温育期结束时，将培养瓶转移到 4℃下持续30分钟，以确保乙醛从气相转移到到液相中。然后将培养基转移至冷管、脱蛋白、衍生化，进行测定。大鼠血液和血浆：雄性SD大鼠来自本单位动物饲养室，经麻醉后，用涂有肝素的真空采血管心脏取血，然后迅速离心（1500转/分，10分钟，4℃），全血和血浆分别加入50μM乙醛并且加入20mM乙醇的空白和对照，样品用3M高氯酸进行脱蛋白并离心然后衍生化，萃取后通过HPLC立即测定。讨论：生物体的乙醛水平的精确测定非常重要，因为乙醇第一代谢产物在提示一些疾病（如癌症、心肌病、肌肉病变、和成瘾性疾病）有非常重要的价值。而且对于一些缺乏ALDH2 编码的酶的亚洲人，当摄入酒精后乙醛水平也会升高，可以使用药物如双硫仑抑制ALDH2来使人对酒反感、增加乙醛水平，达到戒酒的目的。所以新的戒酒药物的开发就是靶向ALDH2基因使人厌酒，于是对于组织内乙醛的定量测定就显得尤为重要。低温采样是为了避免在衍生化之前乙醛从样品中挥发而导致实验数据误差；经过试验发现衍生化反应对于环境pH值敏感，酸性条件下最快，最佳pH值为4；本液相系统采用乙腈水作为流动相不仅考虑到其得到的优良色谱行为，还由于在