紫外灯灭菌效果监测仪

1．目的：建立紫外灭菌器的标准操作规程，保证正确操作，为生产提供合格的纯化水。2. 范围：适用于紫外灭菌器的日常操作。3. 职责：工程部、纯化水处理系统操作人员，对本标准的实施负责。4. 程序4.1. 概述：在纯化水系统的终端，设计与安装的ZX-2型紫外灭菌器，系采用特制高强度无臭氧紫外线杀菌灯管。筒体用优质不锈钢制成。被处理的纯化水在流过筒体时受到波长为253.7nm紫外线足够量的照射，其有较强的灭菌效果。4.2. 操作与注意事项：4.2.1. ZX-2型紫外灭菌器为卧式，处理流量 2-3m3/小时，杀菌功率60W的装置。电源要求220V，50HZ。使用时应核对并满足之。要注意避免强烈震动和冲击。4.2.2. 灯管寿命及更换准则：紫外灯的杀菌能力随使用时间增加而减退。灯管的寿命定义是：以点燃100h的输出功率为额定输出功率，把紫外灯点到70%额定功率的点灯时间定为平均寿命，紫外灯使用超过平均寿命时，就达不到予期效果，则必须更换。本设备选用的紫外灯平均寿命为2000h。4.2.3. 可根据水质监测，菌检情况来判定紫外灯管的运行情况，并决定是否提前更换。

紫外线灭菌灯和日光灯发光原理一样，灯管内的汞原子被激起发作汞的特征谱线，低压汞蒸气首要发出作用254nm和185nm紫外线，也就是UVC紫外线，此波段的紫外线辐射强度起主要灭菌消毒作用，UVC紫外辐射照度计是专用于此波段紫外线强度的测量。 紫外线灭菌灯灯管运用透紫玻璃或石英玻璃制成，使紫外线穿过灯管透射出来。 254nm波长的紫外线很简单被物体吸收，效果于生物体的遗传物质DNA上，使DNA遭到损坏而引起细菌去世。 185nm波长紫外线和空气效果可发作有强氧化效果的臭氧，可有用地杀灭细菌，并且紫外线可会合很高的强度，在短时间内杀灭细菌和病毒。 紫外线灭菌灯的运用首要考虑一下三种要素 1：有用辐射剂量（Heff） 有用辐射剂量是时间和有用照度的乘积可是辐射剂量受辐射穿透介质才干的束缚。穿透才干取决于吸收系数大小关于固体表面将吸收全部辐射关于水视其纯净度光辐射被吸收90前能相应穿透几毫米到几微米不等。 2灭菌辐射可以引起的危害 灭菌辐射能引起结膜炎和皮肤斑所以人类不能在逾越规矩值得辐射下受照。换句话说在描绘灭菌设备时应将此考虑在内。 3光源 前进低压光源的灯电流在灯管长度持平常可以获得更高光输出但会下落紫外辐射效率紫外辐射功率/输出功率。这是由于自吸收的增加及温度的影响。在灯中运用汞气替代纯汞可以减少上述温度的影响。 紫外线灭菌灯的辐射强度需要使用到紫外线辐照计检测，按照《消毒技术规范》规矩的央求，新紫外线灯管辐射强度应大于90VW/cm2（距离1m处）为合格。正在运用中的灯管辐射强度最低应抵达70VW/cm2暂可运用，但必须延伸照射时间。 依据“紫外线照射剂量等于辐射强度乘以照射时间” 的公式可求出异常强度所需延伸照射时间，亦可看出高强度短时间或低强度长时间均能获得一样的灭菌效果。若紫外线光源的强度低于40VW/cm2，则再延伸紫外线灯照射时间也不能起到满意的灭菌效果，即应中止运用。不要认为紫外线灯管只需亮着，就还有灭菌效果。 紫外线辐射照度计需要定期的对紫外线辐射强度进行监控，紫外线灯辐射强度达不到标准的话很难有满意的消毒效果。长时间的紫外线照射同时也会对人体产生影响，所以利用紫外线辐照强度系数达到标准的紫外线灭菌灯很有必要。

微生物紫外灭菌灯的寿命是多少？多长时间就该换了？望老师不吝赐教

微生物实验室如何进行无菌间灭菌呢？最近经常看到有实验员咨询：我的无菌室空白验证长菌落了，是不是无菌室灭菌不彻底啊！我们的无菌室应该用什么方式灭菌？等等。无菌室作为我们微生物检测的空间，一旦出现这种情况大家都会感到担忧，会有疑问：在这样的环境里检测，结果能准确吗？首先我们应该了解我们的无菌室应该处于什么状态，有什么要求。一般情况下，我们的无菌室达到空间洁净度10000级就可以了，但操作区域例如超净工作台、生物安全柜里需要达到洁净度100级，也就是我们常说的“整体万级，局部百级”。万级洁净度对空间落菌的要求是：静态检测，自然沉降菌≤3CFU/皿，百级洁净度对空间落菌的要求是：静态检测，自然沉降菌≤1CFU/皿。也就是说平时我们做的空间验证，只要不超过这个标准，就是符合要求的，因此也不必太过担忧。那么，怎样能够保证我们的无菌室符合要求？当我们的无菌室出现异常应该如何处理？我们得先从无菌室的灭菌方式开始讲。一般无菌室的灭菌方式分为：紫外线照射、臭氧灭菌、化学熏蒸这几种。这几种灭菌方式各自有各自的特点，大家可以根据自己的实际情况来选择合适的灭菌方式，遇到异常难以解决时，也可以考虑增加一种灭菌方式来解决。紫外线照射：紫外线灭菌是利用适当波长的紫外线破坏微生物机体细胞中的DNA或RNA结构，造成生长性细胞死亡来达到灭菌效果，属于一种物理方式的灭菌，也是我们微生物检测无菌室最常用的灭菌方式。该方法操作简单，使用方便，也比较经济，可以杀灭各种微生物，包括细菌、病毒、真菌、立克次体以及支原体等，因此在实验室里，是最常见的灭菌方式。但紫外线灭菌也有一定的缺点，紫外线只能对直接照射到的微生物起到杀灭作用，因此只能对空间中照射到的地方起作用，一些照射不到的死角或者物品的内部是无法达到效果的，因此使用紫外线灭菌的无菌室，也会辅助以一些化学试剂，例如洁尔灭、酒精等消毒剂对死角进行清理。使用紫外线灭菌，应当定期检测紫外线的强度，若是无法达到要求的强度，就应该考虑更换紫外灯。根据2002年国家卫生部发布的《消毒技术规范》，紫外灯的要求是紫外线强度不得低于70μW/cm2（紫外灯1m处），而空间内的紫外灯的布局也是有要求的，要求平均每m3不少于 1.5W。也就是说，假如你无菌室是5m2，实验室高度是3米，那么你的空间体积就是15m3，你空间中使用的紫外灯的功率就不得低于22.5w。按照这个方式就可以算一下你的无菌室需要多少紫外灯了。当紫外线的强度达不到要求时，就需要更换紫外灯了。臭氧灭菌：臭氧是一种强氧化剂，灭菌过程属生物化学氧化反应。O3灭菌原理一般有以下三种：1.臭氧通过氧化分解细菌内部葡萄糖所需的酶，使细菌灭活死亡。2.直接与细菌、病毒作用，破坏它们的细胞器和DNA、RNA，使细菌的新陈代谢受到破坏，导致细菌死亡。3.透过细胞膜组织，侵入细胞内，作用于膜内的脂蛋白和内部的脂多糖，改变细胞的通透性，导致细胞溶解死亡。使用臭氧灭菌，杀菌彻底，无残留，杀菌广谱，可杀灭细菌繁殖体和芽孢、病毒、真菌等，并可破坏肉毒杆菌毒素。另外，O3对霉菌也有极强的杀灭作用。O3为气体，能迅速弥漫到整个灭菌空间，灭菌无死角。所以，臭氧灭菌也是目前被广泛使用的灭菌方式。用臭氧消毒空气，必须是在封闭空间，且室内无人条件下进行，消毒后至少过 30min 才能进入。另外臭氧的密度比空气大，在空气中会迅速下降到空间的底层，因此臭氧发生器也应当安装在无菌室的顶部。一般灭菌时间选择30min即可，要求空间中臭氧浓度不低于20mg/m3。化学熏蒸：化学熏蒸是一种十分传统的空间灭菌方式，一般是采用易挥发气化的化学物质的蒸汽对空间微生物进行杀灭的目的，一般常用甲醛、戊二醛、过氧化氢、过氧乙酸等。这里以常用的甲醛熏蒸为例。一般甲醛熏蒸又称甲醛高锰酸钾熏蒸，将40%的甲醛溶液加入到高锰酸钾溶液中，二者发生反应，放出大量的热使甲醛蒸发到空间中，从而对无菌室进行灭菌。一般甲醛熏蒸的灭菌效果比较理想，对霉菌等较难清除的污染菌也有较好的杀灭效果，因此在无菌室被霉菌污染时，通常都是使用甲醛进行熏蒸来彻底消灭污染源。但是甲醛熏蒸的缺点也是很明显的，因为甲醛是一种强致癌性的化学品，对人体的伤害较大，在使用过程中需要特别注意，并且残留量也要进行严格的控制。每次熏蒸后，至少需要通风24h才可以使用。目前对熏蒸后甲醛的残留量并没有明确要求，还是要通过经验来判断，目前国家对居民住房要求甲醛含量不大于0.1mg/m3，所以我们也可使用甲醛含量测定仪来对熏蒸后的空间进行检测。目前甲醛熏蒸灭菌的方法食品检测无菌室的灭菌中已经较少使用，主要也是因为操作比较繁琐，灭菌时间较长，进行一次甲醛熏蒸之后，会有几天无法使用无菌室进行检测，所以只有在其他灭菌方法无法达到理想的灭菌效果时，才会考虑进行甲醛熏蒸。而其实这种灭菌方式目前在很多药企的无菌室灭菌，还是会经常用到的，另外，有些生产区域如果长期被霉菌污染，也会考虑用甲醛熏蒸的方法来解决。了解了这几种常用的无菌室灭菌方式，在我们日常的工作中也可以根据自己实验室情况进行选择，尤其是长期使用一种灭菌方式若是灭菌效果达不到理想的效果时，可以根据实际情况更换灭菌方式，或者引进一种新的灭菌方式两者结合，以期达到预想的效果。

最近我们正在搞实验室认可工作，，改造微生物实验室的时候出了点问题，，我们领导是个老古董，喜欢紫外线灭菌，但是紫外线灭菌灯的配置不知道，麻烦各位指导一下，，每平方米相当于多少瓦的紫外灯就可以满足要求？ 我估计不应该是越多越好，多了还应该考虑光污染的问题吧？ 请各位指教

开启紫外灯时是否能将灭过菌的培养基放在无菌室内一起灭菌或者紫外灯对灭过菌的培养基会有影响吗？

水中大肠埃希氏检测中要求用366nm紫外灯检测，我查了一下有专用的紫外分析仪带254nm灯及366nm灯及标准点样灯，也有的是三用紫外分析仪带254nm灯及365nm灯，我想请教各位大侠1.检测水中大肠埃希氏菌必须用专用的检测仪吗？用365nm灯不可以吗？2.这个灯用检定吗？3.标准点样灯是做什么的？谢谢解答？

除少数培养基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培养基均需121℃高压灭菌15-30分钟。尤其是对无菌试验培养基灭菌不彻底，直接关系到试验结果。因此必须认真对高压灭菌器进行灭菌效果的验证。 1．试验材料(1) 嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus) ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-l05 CFU/片。(2) 121℃压力蒸气灭菌化学指示卡。(3) 溴甲酚紫胨水培养基116℃高压灭菌20分钟后备用。(4) 0-150℃留点温度计。2．方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层，则需放10处。留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应存1℃之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。高压蒸气灭菌必须使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气灭菌效果合格。高压灭菌器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。所以做过强检的灭菌器还必须进行灭菌效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提灭菌器，往往仪器指针达到所需的温度，但灭菌物品的实际温度却未达到要求。导致灭菌物品不彻底，影响实验结果。培养基灭菌不彻底，影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气灭菌器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。

会验证高压灭菌器灭菌效果吗？微生物实验室最少不了的实验仪器之一就是灭菌器，一般实验室常用的是高压蒸汽灭菌器。GB 4789.1-2016中要求：实验设备应定期进行检查和/或检定（加贴标志）、维护和保养，以确保工作性能和操作安全。但你的灭菌器有没有类似的检查呢？如果要做类似的验证，又需要怎么做呢？今天就给大家汇总一下高压蒸汽灭菌器灭菌效果验证的相关内容。高压蒸汽灭菌器灭菌效果验证一般有化学指示剂法、留点温度计法、自制测温管法和生物指示剂法，每种方法的原理都是相似的，主要是通过验证灭菌时灭菌器里的温度能否达到要求。我们可以根据自己实验室的具体情况选择其中一种或多种方法进行验证。一、化学指示剂法原理：化学指示剂在一定温度与作用时间下，会受热变色或变形，根据这一特点来判断是否达到需要的灭菌参数。一般实验室常用的是3M压力灭菌指示胶带，这种指示胶带是利用灭菌前后胶带颜色变化来判断灭菌效果。它是由热敏化学物质与显色剂及漆辅料制成油墨，并将油墨以条纹状印制在特制的一面胶纸带制成。指示胶带可以直接粘贴于包裹外，长度不低于5cm，并轻压胶带以增加粘性和封包效果；在121℃持续20min或130℃持续4min后，胶带上印有的斜行的白色指示线条会完全变黑，成为黑色线条；如变色不均匀或不彻底，可认为该包裹不符合灭菌条件。二、留点温度计法原理：留点温度计法是利用水银温度计不回流的特性，其原理跟传统体温计相似，可以指示灭菌器在灭菌过程中达到的最高温度。验证时把水银温度计放在盛水的大三角瓶里，灭菌时把三角瓶放在灭菌器的上部和下部，灭菌结束后看水银温度计的温度和要求温度是否一致。此法只能验证温度，不能指示灭菌时间是否达到要求，因此是灭菌器验证的最低标准。三、自制测温管法原理：利用一些化学药品受热熔化后再冷却，晶体的外形不同的特性，把化学药品密封在小玻璃管内，灭菌时放在灭菌器里，灭菌完后观察晶体的形状，就可以判断温度是否达标。常用的试剂是苯甲酸，苯甲酸的熔点为121-123℃，跟我们要求的灭菌器的灭菌温度基本吻合，因此灭菌时把固体苯甲酸密封在小玻璃管内放进灭菌器，灭菌结束就可以观察苯甲酸的状态来验证灭菌器是否达到了要求温度。这种方法的局限跟留点温度计法相同，也只能指示灭菌时的温度，对灭菌时间是否达到要求无法判断。四、生物指示剂法原理：利用非致病性的嗜热脂肪杆菌的芽孢作为指示菌，来测定热力灭菌的效果。嗜热脂肪杆菌的芽孢对热的抗性较强，其耐热能力与病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此为指示菌，验证灭菌器能否达到灭菌要求。生物指示剂分为三种：芽孢悬液、芽胞菌片、菌片和培养基混合指示管。一般放在灭菌容器的5个点：下层的前、中、后和上层、中层的中央点。灭菌后取指示剂接种到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培养2-7天，若培养基澄清、颜色没有变化即说明芽孢被杀死，灭菌器灭菌效果良好；如果培养基黄色浑浊，说明芽孢未被杀灭，灭菌器灭菌效果不合格。芽孢悬液和芽孢菌片的验证方法均是如此。目前实验室还常用商品化的生物指示管，其原理与芽孢悬液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜热脂肪芽孢杆菌芽孢和培养液玻璃小管，将指示管放在灭菌容器内的各个点上，高压灭菌后，将管中盛培养液的玻璃管挤碎，培养液从内部的小管中被放出，放入56℃培养箱中培养，同时做阳性对照。若是灭菌器灭菌效果不合格，指示管内的芽孢复活后生长会改变肉汤的颜色是肉汤变为黄色；若是灭菌器灭菌效果良好则管内芽孢被灭活不再生长，肉汤仍旧是原来的紫色。对于灭菌器的效果验证，目前并没有相关标准严格的要求验证的频次，但是实验室应当自行制定验证频次规定，并严格按照要求进行。从操作性和验证结论两个方面出发，小编推荐使用指示胶带和生物指示管，因为这两种方法操作简单，可以对灭菌效果进行全面的验证。希望以上内容对您有所帮助！

请教各位老师： 对微生物实验室的环境灭菌消毒，除了用紫外灯，是否用化学消毒啊？如果用，用什么试剂什么浓度啊？最好哪位好心人能发个操作规程给我。还有像培养箱什么的这些设备你们是怎么灭菌消毒的啊？ 灭菌效果验证你们是怎么做的啊？细菌沉降试验大家按什么指标进行评价啊？我一直找不到评价的出处。对设备的消毒灭菌效果我也不知道能按什么进行评价。 在这里先谢谢各位了！

新一代双光束紫外检测仪产品隆重上市一、双光束紫外检测仪研发的背景 　　双光束、单光束紫外检测仪都是液相色谱中的一种紫外检测仪，它是用来监视生物化学、分子生物学、制药、食品等行业在柱层析在分离分析时必不可少的设备，目前在市场中多数的产品为“核酸蛋白检测仪”该仪器基本上是七十年代生化所转让的产品，鉴于当时受技术水平、市场元器件等限制，因此虽试制成功，但还存在许多问题，如基线漂移、换档零点不准等，为此当时市场上虽有十几家生产厂家，但它们几乎是同一产品，同一面孔，同一性能，无法满足用户的需求。而进口的仪器如法玛西亚等价格昂贵。而国产的核酸蛋白检测仪却大大落后于市场，许多急待改进部分却很少有制造商厂家进行研究改造，20年来除了面目稍有改进，内部结构几乎不变。　　不足之处： 　　1、该仪器光源，因为核酸蛋白检测仪器里用的是汞灯，它的特定谱线是253.7nm，而在生化等行业里检测核酸用的波长为260nm，在检测浓度高的样品中问题不大，但在进行少量宝贵样品中而浓度又比较稀的情况下，得出的结果偏差就大了。　　2、在光电转换中核酸蛋白检测仪用的是光电倍增管，我们知道光电倍增管体积大，占地大，并且还需要高压电源支撑，高压电源稳定度直接影响到整个仪器稳定度，做的好不好非常关键，再加上光电倍增的暗流，随温度变化等不确定性，是造成仪器不容易做好根本原因之一，现在市场上进口仪器基本上都是用光敏二极管来做转换器，体积小（只有一只三极管之大），性能稳定，暗流小，如此先进的技术核酸蛋白检测仪却弃之不用。　　3、现在市场上的核酸蛋白检测仪看上去具有254nm、280nm波长可测定，实质上在用254nm测定核酸时还可以（真正核酸测定是260nm），但在用280nm去测蛋白时，却有些牵强因为此时它们的能量很弱，进口的仪器在用汞灯作光源测蛋白时，它们280nm波长取得是采用荧光将254nm通过荧光转换为280nm，然后再用280nm滤光片取得280nm波长去检测蛋白的，而在国产核酸蛋白检测仪器中，因无此类技术（荧光粉有毒不好做，也没这门手艺）所以省去此道工序，就只能用280nm滤光片取得280nm波长。结果因为汞灯的特征谱线为254nm，280nm波长是该谱线的延伸段，与254nm相比光强度几乎是它的1/10，因此虽然用280nm滤光片但因254nm能量太强，它照样能透过滤光片进入测量系统，结果测出峰为：254nm、280nm波长的共同吸收峰，因此该种仪器如作教育工具还可以，在科研领域研究中，在制药行业中是非常非常不利的。　　4、市场上核酸蛋白检测仪在线路设计上有问题，比如在无样品时灵敏度换档时在记录仪反映的基线会有很大变化，这样对操作者很麻烦，如果在监视过程中发现峰形太大或太小时，想要改变灵敏度得到合适峰时，因基线基准点变化，峰值就受影响，结果就不准确，在灵敏度＞1OD时，仪器零点与记录仪零点偏差极大，以其无法工作。　　5、现在市场上还有一种紫外检测仪器是用元素灯作为光源的，虽然该灯的谱长比较汞灯来说单色性较好，但元素灯寿命短，一般2000小时，不宜作为长时间监测，经常更换灯成本高。　　另外市场上核酸蛋白检测仪基本上都是灵敏度换档时，不仅记录仪基线变，表头读数也会跟着变，实际上灵敏度换档对一个样品的浓度不会变化的，变的是记录仪峰值大小，浓度读数是恒定的。　　鉴于看到市场上核酸蛋白检测仪存在种种问题，及它们给科研工作者、给制药业等行业带来不利后果，也为了填补国内空白，因此决定试制颇有难度的双光束紫外检测仪。通过生化所专业技术人员两年的研发新一代UV-DETECTORⅢ双光束紫外检测仪目前已推向市场，经各大院校、科研所、生物药业等单位应用证明，可达到LKB等进口仪器的同等效果。　　二、双光束紫外检测仪与其他紫外检测仪的比较 　　1、紫外光源 　　双光束紫外检测仪用的光源为无电极放电灯，该灯在国内为空白，在国际上只有瑞典LKB公司生产，该灯通过专业人员查资料查文献，不断试制最终获得成功。　　2、线路设计 　　双光束紫外检测仪的光电转换器用光敏二极管，这是跟上时代步伐要求，省去高压以及高压带来影响仪器不稳定因素。在线路上采用双光束形式，一路为样品光束，另一路为参考光束，参考光束转换为电压后，用来产生反馈，抑制光源随温度变化而引起的变化，这样整个机器稳定，不会像单光束那样因温度等影响，一路慢慢漂移不止。　　3、温度控制 　　灯室采用恒温控制。众所周知，一般光源都会随温度发生变化，采用恒温形式不仅能稳定光源，还会延长灯的寿命，而且也适合仪器在冷室中长期使用。　　采用无电极放电灯，体积小只有手指大小，起动灯源的供电部分用微波激发，整个激发光源板只有手掌大小，结构简单，功耗＜3W，该灯寿命长，理论上100,000小时，说明书上保守写2万小时，可不关机长期连续使用，完全适合生化等领域长期监视，　　双光束紫外检测仪特点： 　　1、仪器稳定时间短，开机后半小时内足以稳定。 　　2、仪器外壳设计防腐、防锈、美观、轻巧，市场上尚未见同类产品。 　　3、线路设计先进合理，除采用反馈等技术外，该仪器在改变灵敏度时，记录仪上的零点基线基本上保持不变，并且面板表上的读数不随灵敏度变化而变化，实验结果正确可靠。　　4、因为光源采用无电极放电灯，各波长214nm、230nm、260nm、280nm、214nm、340nm等强度均匀，用滤光片取出波长，单色性好，不会给操作者、研究者等带来波长间互渗混乱效果。　　与进口LKB公司仪器比较，我们采用了它们的先进技术，但又作了改进，像无电极放电灯，它们260nm、280nm要用2个滤光片，2个灯来获得，而我们只要用一个灯就可获得5个波长，这样可适应不同人需要，应用范围更广。进口仪器不设面板表，而我们采用面板表这样更直观，并随时从表头上获得监视样品信息，甚至仪器不接记录仪也可用，双光束紫外检测仪比进口仪器更稳定，尤其在高灵敏度区域内。

灭菌实验效果如何评价?【灭菌效果评价的重要性】　　灭菌是指杀灭和（或）去除所有微生物及其孢子的过程，是微生物检测过程中的重要环节。在日常的微生物检测中用正确的消毒灭菌方法杀灭微生物，做好灭菌效果的监测和评价工作至关重要。它不仅能够有效地保障实验结果的准确，还关系到生物安全。灭菌效果的评价，可以采用以下方法进行判断。

紫外杀菌消毒的紫外光强度紫外光的强度高低是紫外光杀菌效果的主要因素。紫外线灯使用过程中其辐照强度会逐渐降低，为了保证紫外线灯的消毒效果，更有效地预防院内感染的发生，定期检测紫外线灯的强度是非常必要的。检测紫外光强度需要使用紫外线辐射照度计。 紫外线消毒和灭菌常用方法 适用范围：用于室内空气、物体表面和水及其它液体的消毒。 紫外线消毒灯和紫外线消毒器 消毒使用的紫外线是C波紫外线，其波长范围是200－275nm，杀菌作用最强的波段是250－270nm， 消毒用的紫外线光源必须能够产生辐照值达到国家标准的杀菌紫外线灯。 制备紫外线消毒灯，应采用等级品的石英玻璃管，以期得到满意的紫外线辐照强度。 紫外线消毒灯可以配用对紫外线反射系数高的材料（如抛光铝板）制成的反射罩。 要求用于消毒的紫外线灯在电压为220V、环境相对湿度为60％、温度为20℃时，辐射的253.7nm紫外线强度不得低于70uW/cm2。 普通30W直管紫外线灯在距灯管1米处测定，特殊紫外线灯在使用距离处测定，使用的紫外线测强仪必须经过标定。 紫外线灯使用过程中其辐照强度逐渐降低，故应经常测定消毒紫外线的强度，一旦降到要求的强度以下时；应及时更换。 紫外线消毒灯的使用寿命，即由新灯的强度降低到70uW/cm2的时间（功率≥30w)的灯，或降低到原来新灯强度的70%（功率30W灯，≥90uW/cm；功率＞20W灯，≥60uW/cm2 ；功率150W灯，≥20uW/cm2。由于这种灯在辐射253.7nm紫外线的同时，也辐射一部分184．9nm紫外线。故可产生臭氧。 高强度紫外线消毒灯：要求辐射253.7nm紫外线的强度（在距离1米处测定）为：功率30W灯，＞180uW／cm2；11w灯，＞30 uW／cm2。 低臭氧紫外线消毒灯：也是热阴极低压汞灯，可为直管型或H型；由于采用了特殊工艺和灯管材料，故臭氧产量很低，要求臭氧产量＜1mg/h。 高臭氧紫外线消毒灯：由于采取了特殊工艺，这种灯产生较大比例的波长184.9nm的紫外线，故臭氧产量较大。

[center]实验室中生物安全柜的使用——紫外灯、明火、溢出、认证[/center]紫外灯　　生物安全柜中不需要紫外灯。如果使用紫外灯的话，应该每周进行清洁，以除去可能影响其杀菌效果的灰尘和污垢。在安全柜重新认证时，要检查紫外线的强度，以确保有适当的光发射量。房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害。　　明火　　在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用明火。使用明火会对气流产生影响，并且在处理挥发性物品和易燃物品时，也易造成危险。在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧器或电炉，而不应使用明火。　　溢出　　实验室中要张贴如何处理溢出物的实验室操作规则，每一位使用实验室的成员都要阅读并理解这些规程。一旦在生物安全柜中发生有生物学危害的物品溢出时，应在安全柜处于工作状态下立即进行清理。要使用有效的消毒剂，并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和／或高压灭菌。　　认证　　在安装时以及每隔一定时间以后，应由有资质的专业人员按照生产商的说明对每一台生物安全柜的运行性能以及完整性进行认证，以检查其是否符合国家及国际的性能标准。安全柜防护效果的评估应该包括对安全柜的完整性、HEPA过滤器的泄漏、向下气流的速度、正面气流的速度、负压／换气次数、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统进行测试。还可以选择进行漏电、光照度、紫外线强度、噪声水平以及振动性的测试。在进行这些测试时，检测人员要经过专门的培训，采用专门的技术和仪器设备。强烈建议由有资质的专业人员来进行测试。

紫外灯　　生物安全柜中不需要紫外灯。如果使用紫外灯的话，应该每周进行清洁，以除去可能影响其杀菌效果的灰尘和污垢。在安全柜重新认证时，要检查紫外线的强度，以确保有适当的光发射量。房间中有人时一定要关闭紫外灯，以保护眼睛和皮肤，避免因不慎暴露而造成伤害。　　明火　　在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的环境中，应避免使用明火。使用明火会对气流产生影响，并且在处理挥发性物品和易燃物品时，也易造成危险。在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧器或电炉，而不应使用明火。　　溢出　　实验室中要张贴如何处理溢出物的实验室操作规则，每一位使用实验室的成员都要阅读并理解这些规程。一旦在生物安全柜中发生有生物学危害的物品溢出时，应在安全柜处于工作状态下立即进行清理。要使用有效的消毒剂，并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和／或高压灭菌。　　认证　　在安装时以及每隔一定时间以后，应由有资质的专业人员按照生产商的说明对每一台生物安全柜的运行性能以及完整性进行认证，以检查其是否符合国家及国际的性能标准。安全柜防护效果的评估应该包括对安全柜的完整性、HEPA过滤器的泄漏、向下气流的速度、正面气流的速度、负压／换气次数、气流的烟雾模式以及警报和互锁系统进行测试。还可以选择进行漏电、光照度、紫外线强度、噪声水平以及振动性的测试。在进行这些测试时，检测人员要经过专门的培训，采用专门的技术和仪器设备。强烈建议由有资质的专业人员来进行测试。

高压电场脉冲灭菌技术 　高压电场脉冲灭菌是将食品置于两个电极间产生的瞬间高压电场中，由于高压电脉冲(HEEP)能破坏细菌的细胞膜，改变其通透性，从而杀死细胞。高压脉冲电场的获得有两种方法。一种是利用LC振荡电路原理，先用高压电源对一组电容器进行充电，将电容器与一个电感线圈及处理室的电极相连，电容器放电时产生的高频指数脉冲衰减波即加在两个电极上形成高压脉冲电场。由于LC电路放电极快，在几十至几百个微秒内即可以将电场能量释放完毕，利用自动控制装置，对LC振荡器电路进行连续的充电与放电，可以在几十毫秒内完成灭菌过程。另一种是利用特定的高频高压变压器来得到持续的高压脉冲电场。灭菌用的高压脉冲电场强度一般为15千伏／厘米～100千伏／厘米，脉冲频率为1kHz～100kHz，放电频率为1kHz～20kHz。高压电场脉冲灭菌一般在常温下进行，处理时间为几十毫秒，这种方法有两个特点：一是由于灭菌时间短，处理过程中的能量消耗远小于热处理法。二是由于在常温、常压下进行，处理后的食品与新鲜食品相比在物理性质、化学性质、营养成分上改变很小，风味、滋味无感觉出来的差异。而且灭菌效果明显，可达到商业无菌的要求，特别适用于热敏性食品，具有广阔的应用前景。脉冲强光灭菌技术 　　脉冲强光灭菌技术是采用强烈白光闪照的方法进行灭菌，它由一个动力单元和一个惰性气体灯单元组成。动力单元是一个能提供高电压高电流脉冲的部件，它为惰性气体灯提供能量，惰性气体灯能发出由紫外线至近红外区域的光线，其光谱与太阳光十分相近，但强度却强数千倍至数万倍，光脉冲宽度小于800μs。该技术由于只处理食品的表面，从而对食品的风味和营养成分影响很小，可用于延长以透明材料包装的食品及新鲜食品的货架期。研究表明，脉冲强光对枯草芽孢杆菌、酵母菌都有较强的致死效果，30余次闪照后，可使这些菌由105个减少到0个。脉冲强光起灭菌作用的波段可能为紫外线，但其它波段可能有协同作用。发态紫外光脉冲灭菌技术 　　这是近期开发的最具应用前景的灭菌技术之一。激发态紫外光脉冲灭菌技术不同于常规的物理灭菌手段，采用特制的光源和电源器件，在高频高压下产生单一波长253.7nm的紫外光，其强度可达到200mw／cm3以上，是常规紫外线装置发光强度的200倍～300倍，其脉冲可达到纳秒级，其能量足以打断细胞DNA结构中的C－H键、C－N键和O－H键，使DNA结构产生致死性损伤，如果和低浓度过氧化氢协同作用，不但可以增大灭菌强度，同样可以使残留的过氧化氢分解，这种新技术的应用将为无菌包装设备的微生物栅栏系统提供强有力的技术支持。 超高压灭菌技术 　　近年来，日本研制出一种新型的食品加工保藏技术，这就是超高压灭菌技术。超高压处理具有热处理及其它加工处理方法所没有的一些优点，可保持食品(如肉类等)原有的风味成分、营养价值和色泽，并杀死食品中常见的酵母菌、大肠杆菌、葡萄球菌等而达到灭菌目的。所谓高静压技术(HHP)就是将食品密封于弹性容器或置于无菌压力系统中(常以水或其他流体介质作为传递压力的媒介物)，在高静压(一般100MPa以上)下处理一段时间，以达到加工保藏的目的。在高压下，会使蛋白质和酶发生变性，微生物细胞核膜被压成许多小碎片和原生质等一起变成糊状，这种不可逆的变化即可造成微生物死亡。微生物的死亡遵循一级反应动力学。对于大多数非芽孢微生物，在室温、450MPa压力下的灭菌效果良好。芽孢菌孢子耐压，灭菌时需要更高的压力，而且往往要结合加热等其他处理才更有效。温度、介质等对食品超高压灭菌的模式和效果影响很大。间歇性重复高压处理是杀死耐压芽孢的良好方法。日本最新开发出的超高压灭菌机，操作压力达304MPa～507MPa。超高压灭菌的最大优越性在于它对食品中的风味物质、维生素C、色索等没有影响，营养成分损失很少，特别适用于果汁、果酱类、肉类等食品的灭菌，此外，采用300MPa～[font='Times New Roman'

摘要:对灭菌乳中乳果糖含量进行研究,初步探索了用紫外分光光度法对其进行测定的方法.牛奶在加热处理过程中, 部分乳糖异构为乳果糖, 经β-D- 半乳糖苷酶水解后生成半乳糖和果糖,通过酶转化为NADPH,确定其最大吸收波长为340nm,可在此波长下测出它的吸光度并计算出其质量浓度.结果表明:该方法灵敏度高,准确性好,适用于灭菌乳中乳果糖含量的测定。关键词：紫外分光光度 灭菌乳 乳果糖 国务院办公厅《关于加强液态奶生产经营管理的通知》要求，完善液态奶标准并严格按标准组织生产 ，凡在灭菌乳 、酸牛乳等产品生产加工过程中使用复原乳的，不论数量多少 ，生产企业必须在其产品包装上醒目标注“复原乳”。农业部近发布的《巴氏杀菌乳和ＵＨＴ灭菌乳中复原乳的鉴 定》标准，为巴氏杀菌乳和ＵＨＴ灭菌乳中复原灭菌乳中复原乳的乳成分的检测提供了科学依据 。 本实验采用紫外分光光度法对灭菌乳中乳果糖含量进行测定，并优化了试验方法，采用光谱扫描功能对最大吸收波长进行优化，并采用时间扫描功能监控酶的反应速率。确定在紫外光区340nm处测定乳果糖的方法，该方法灵敏度高，准确性好，对乳品中复原乳的监控起到积极作用。 1仪器和试剂1.1仪器和设备1.1.1 UV-2550型紫外可见分光光度计（岛津有限公司）1.1.2 水浴或干燥箱: 温度能维持在40℃±2℃。1.2试剂除非另有说明, 在分析中仅用分析纯试剂和GB/T 6682- 1992中一级水。碳酸氢钠(NaHCO3)；过氧化氢(H2O2) , 质量分数为30%；辛醇(C8H18O)；灭菌水；300g.L-1硫酸锌溶液；150 g.L-1亚铁氰化钾溶液；0.33mol.L-1氢氧化钠溶液；1mol.L-1氢氧化钠溶液；缓冲液A: pH= 7.5称4.8 g 磷酸氢二钠, 0.86 g 磷酸二氢钠和0.1 g 硫酸镁溶解于80mL水中, 用1mol.L-1 氢氧化钠溶液调整pH 到7.5±0.1 ( 20℃) , 稀释到100mL , 摇匀；缓冲液B: pH= 7.6称取14.00g三乙醇胺和0.25g硫酸镁溶解于80mL水中。用1 mol.L-1氢氧化钠溶液调整pH到7.6±0.1( 20℃),稀释到100mL ,摇匀；缓冲液C将40.0mL缓冲液B 用水稀释到100mL ,摇匀；β-D- 半乳糖苷酶悬浮液用3.2 mol.L-1 硫酸铵溶液将活性为30 IU.mg-1 的β-D- 半乳糖苷酶制备成浓度为5mg.mL-1的悬浮液；葡萄糖氧化酶悬浮液；用灭菌水将活性为200 IU• mg-1 的葡萄糖氧化酶制备成浓度为20 mg.mL-1悬浮溶液；过氧化氢酶悬浮液：用灭菌水将活性为65000 IU.mg-1的过氧化氢酶制备成浓度为20 mg.mL-1的悬浮液；己糖激酶/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶悬浮液(混酶)：在1mL浓度为3.2 mol. L-1硫酸铵溶液中加入2 mg 活性为140 IU.mg-1 的己糖激酶和1 mg 活性为140 IU.mg-1的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,轻摇均匀,成悬浮液；磷酸葡萄糖异构酶悬浮液用3.2 mol. L-1硫酸铵溶液将活性为350 IU.mg-1的磷酸葡萄糖异构酶制备成浓度为2 mg.mL-1 的悬浮液； ATP 溶液将50 mg 5'-ATP-Na2 和50 mg 碳酸氢钠溶于1mL水中；NADP 溶液：将10mgβ-NADP-Na2溶于1mL水中。2 试验方法2.1 试液制备量取50.0mL样品到100mL容量瓶中, 用水稀释到刻度后混匀。2.2 纯化 吸取10.0mL试液于50mL锥形瓶中, 依次加入1.75mL亚铁氰化钾溶液、1.75mL硫酸锌溶液和6.5mL缓冲液A。每加入一种溶液后, 充分振荡均匀。全部溶液加完后, 静置10 min，过滤, 弃去最初的1mL～2mL滤液，收集滤液。2.3 水解乳糖和乳果糖吸取5.00mL滤液于10mL容量瓶中, 加入50μL的β-D-半乳糖苷酶悬浮液, 混匀后加盖。在40℃水浴或干燥箱培养至少10 h。2.4 葡萄糖氧化依次加入2.0mL 缓冲液C、100μL葡萄糖氧化酶悬浮液、1 滴辛醇、0.5mL 浓度为0.33mol.L -1氢氧化钠溶液、50 μL 过氧化氢和0.1 mL 过氧化氢酶悬浮液, 每加入一种试剂均要摇匀。全部溶液加完后, 在40℃水浴或干燥箱中培养3 h。冷却后稀释至10mL , 过滤, 弃去最初的1mL～2mL滤液, 收集滤液。2.5 空白依照2.1到2.4步骤处理空白溶液, 但不加β-D-半乳糖苷酶悬浮液。2.6 测定 在石英比色皿中依次加入1.00mL缓冲液B,0.100mLATP溶液,0.100mLNADP溶液,1mL滤液和1mL水, 每加入一种试剂均要摇匀.混合均匀后，静置3min.加入20μL混酶.混合均匀后上机,并同时做试剂空白. 反应过程大约10min,每隔1min记录一次吸光度的变化,等两次吸光度不再变化,反应停止。此过程中吸光度的变化见表1表1 加入混酶后反应吸光度的变化情况时间/min吸光度/Abs时间/min吸光度/Abs10.11370.20820.16880.21530.17490.22040.182100.23050.195110.23260.202120.232等反应到达终点后,记录下吸光度。加入20μL磷酸葡萄糖异构酶悬浮液,混合均匀后上机。反应过程大约15min,每隔1min记录一次吸光度的变化,等两次吸光度不再变化,反应停止.此过程中吸光度的变化见表2.表2 加入磷酸葡萄糖异构酶后反应吸光度的变化情况时间/min吸光度/Abs时间/min吸光度/Abs10.232720.38580.75830.46890.77640.557100.78250.649110.78660.732120.7862.7结果计算2.7.1吸光值差样品吸光值差△As的计算:△As = As2-As1空白吸光值差△Ab的计算:△Ab= Ab2- Ab1样品净吸光值差△AL的计算:△AL=△A s-△A b 2.7.2乳果糖含量乳果糖的含量以样品的质量浓度c 计, 数值以毫克每升(mg/L) 表示, 按下列公式计算: 式中:△AL-样品净吸光值差；ML-乳果糖的摩尔质量( 342.3 g/mol)；ε-NADPH 在340 nm 处的摩尔吸光值( 6.3 L.mmol-1.cm-1) ；V1-比色皿液体总体积, V1=3.240mL ；V2-比色皿中滤液的体积, V2=1.00mL；d -比色皿光通路长度, d = 1.00cm；V-测试样体积( L) 。计算结果精确到小数点后一位。3 结果与讨论3.1最大吸收波长的选择在光谱模式下，测定标准系列的光谱图，仪器条件见表3。表3 仪器条件波长扫描范围/nm420~650光谱带宽/nm0.5采样间隔0.5扫描速度中速在此仪器条件下，扫描出标准系列的吸收光谱图，见图1。 图1 标准系列的吸收光谱图由以上标准系列的吸收光谱图可知，乳果糖的最大吸收波长为540nm，与国标方法的一致。 在样品测定过程中，同样做光谱扫描，结果见图2。图中实线为样品吸收光谱图，虚线为标准溶液吸收光谱图。从图中可以看出，样品和标准溶液的峰形基本吻合，最大吸收波长一致，基本不存在干扰对测定结果的影响。 图2 乳果糖样品吸收光谱图3.2精密度试验在重复性条件下获得六次独立测定结果，其标准偏差S和相对标准偏差见表4。表4 精密度试验结果 n=6样品编号测定值范围mg/L平均值mg/L标准偏差S相对标准偏差RSD1430.9~438.0434.72.4770.0062525.8~534.4529.82.9580.0063722.3~746.8735.09.2940.0134808.5~823.4816.05.3480.0073.3回收率试验本试验采用浓度为984 mg/L的乳果糖标准溶液进行加标回收。分别添加10.00、15.00、20.00、25.00mL的标准溶液进行试验，其结果见表5。表5样品测定及加标回收试验样品编号本底值mg/L加标量mg/L加标测定值mg/L回收率%1217.3598.4311.295.382264.90147.6392.386.313367.50196.8541.888.574408.00246.0634.592.074结论 试验表明：本方法准确性高，重现性好，相对标准偏差在0.006~0.013之间，加标回收率在86.31%~95.38%之间，适用于灭菌乳中乳果糖的测定。参考文献：[1] 中华人民共和国农业行业标准 NY/T939-2005.巴氏杀菌乳和UHT灭菌乳中复原乳的鉴定[S][2] 黄萌萌，王加启等，牛奶乳果糖的研究进展[J]，中国乳品工业，2007，35（6）：54~57.[3] 黄萌萌，王加启等，UHT灭菌乳贮存期间乳果糖的变化规律[J]，中国乳品工业，2007，35（12）：10~12.[4] 黄萌萌，王加启等，牛乳中乳果糖含量测定的快速酶法[J]，中国农业大学学报，2007 ,12 (5) ：57~60[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=146088]紫外分光光度法测定灭菌乳中乳果糖的含量[/url]

很多培养细胞的实验室对无菌的要求都有细微不同，关于紫外灯的照射时间大体上可以分为两派，一派开始前照射30分钟，一派是只要没有实验紫外灯就一直开着，直到下次实验开始前关闭，这两种哪种方式好呢？当然不能一概而论，当然从节能上看是第一种好，但是第一种能不能达到好的杀菌效果？那么一般来说是没有问题的，但是如果对于人数比较多的实验室，建议采用第二种方法，当然紫外不是避免污染的唯一方法，还要配合酒精擦拭和酒精灯消毒等。下面我们来看一般的消毒方法。实验进行前，超净台以紫外灯照射 30 分钟灭菌，以 75 % 酒精擦拭无菌操作台面，并开启超净工作台吹风5分钟以上分钟后，开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以 75 % 酒精擦拭无菌操作台。无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如支架、吸管等公用物品可以暂时放置，其它个人实验用品用完应立即拿出。实验用品以 75% 酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在中央无菌区域，一般勿在边缘区域操作。小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约 45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。注：由于大多数实验室酒精不是先用现配，由于酒精的挥发性较强，一般建议配置80%的酒精备用。

[align=center][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]浅谈微生物室消毒与灭菌管理[/color][/size][/font][/align][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444] 微生物室从消除或者减轻污染来源来看，大概可以有三种，第一个是对培养基、器具的灭菌，一般采用干热或者高压蒸汽灭菌，但也有特殊的采用消毒进行处理，[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]第二种是对微生物室环境和工作台面的消毒和灭菌，一般我们采用紫外灯照射、化学消毒，最后是对废弃物的灭菌，一般采用高压蒸汽灭菌。[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444] 首先是培养基、胶塞、蒸馏水等的灭菌，一般采用压力蒸汽湿热灭菌，是微检室里最常用最普遍的灭菌方法，[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]一般采用121℃，15-30分钟，具体还可参照高压蒸汽灭菌的操作规程，时间也不宜过长，需要注意的是高压蒸汽灭菌锅的保养和维护，[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]尤其是高压的容器，切不可在压力较高时打开放气阀。另外玻璃器皿如果采用高压蒸汽灭菌，完成后要烘干水分。[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]一些金属器皿不宜沾水的、不容易被高温损坏的玻璃器具和其他不能接触蒸汽的可以采用烘箱，160-170℃保持1个半小时以上。[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]如果对于比较大的，无法放入灭菌锅灭菌，但又要放入洁净区的物品，我们可以采取用消毒剂擦拭，然后在洁净区晾干，期间采用紫外线进行照射进行消毒灭菌。[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444] 其次是环境和生物安全柜、洁净工作台等的消毒灭菌。环境灭菌，微检室一般采取紫外线照射灭菌，时间为30min，[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]最好在进行无菌操作前半个小时进行，然后每次下班前完成工作后也要进行15-30min的照射，使用时要注意紫外线有害，避免人体皮肤直接暴露。[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]而且在工作后，工作台面要进行消毒，我们一般采用75%酒精进行消毒擦拭，还可以选择甲醛、高锰酸钾等。[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444] 最后是废弃物的处理，一般微检室产生的废弃物不能直接丢弃，要经过杀毒灭菌处理，一般也是采用高压蒸汽灭菌，[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]这里使用的高压蒸汽灭菌锅最好和培养基等灭菌的灭菌锅不使用同一个。[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444] 我们还要定期对灭菌效果进行判定，比如高压蒸汽灭菌锅、烘箱等，要利用生物指示剂、化学指示剂等监控灭菌效果，[/color][/size][/font][font=宋体][size=10.5pt][color=#444444]环境的微生物指标也要定期进行监控，只有进行严格的消毒灭菌，并及时有效监控，才能保证微检室的检测工作顺利进行。[/color][/size][/font]

[font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]实验室14种常用消毒、灭菌的方法汇总[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]1.热力消毒灭菌[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]高温能使微生物的蛋白质和酶变性或凝固（结构改变导致功能丧失），新陈代谢受到障碍而死亡，从而达到消毒与灭菌的目的。在消毒中，热可分为湿热与干热两大类。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]2.干热消毒灭菌[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]干热是指相对湿度在20％以下的高热。干热消毒灭菌是由空气导热，传热效果较慢。一般繁殖体在干热80－100℃中经1小时可以杀死，芽胞需160－170℃经2小时方可杀死。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]2.1燃烧法 ：是一种简单、迅速、彻底的灭菌方法，因对物品的破坏性大，故应用范围有限。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]2.2烧灼法：一些耐高温的器械（金属、搪瓷类），在急用或无条件用其他方法消毒时可采用此法。将器械放在火焰上烧灼1－2分钟。若为搪瓷容器，可倒少量95％乙醇，慢慢转动容器，使乙醇分布均匀，点火燃烧至熄灭约1－2分钟。采集作细菌培养的标本时，在留取标本前后（即启盖后，闭盖前）都应将试管（瓶）口和盖子置于火焰上烧灼，来回旋转2－3次。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]燃烧时要注意安全，须远离易燃易爆物品，如氧气、汽油、乙醚等。燃烧过程不得添加乙醇，以免引起火焰上窜而致灼伤或火灾。锐利刀剪为保护刀锋，不宜用燃烧灭菌法。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]2.3焚烧[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]某些特殊感染，如破伤风、气性坏疽、绿脓杆菌感染的敷料，以及其它已污染且无保留价值的物品，如污纸、垃圾等，应放入焚烧炉内焚烧，使之炭化。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]4.电热培养箱[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]利用培养箱的热空气消毒灭菌。培养箱通电加热后的空气在一定空间不断对流，产生均一效应的热空气直接穿透物体。一般繁殖体在干热80－100℃中经1小时可以杀死，芽胞、病毒需160－170℃经2小时方可杀死。热空气消毒灭菌法适用于玻璃器皿、瓷器以及明胶海棉、液体石腊、各种粉剂等。灭菌后待箱内温度降至50－40℃以下才能开启柜门，以防炸裂。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]5.微波消毒[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]微波是一种高频电磁波，其杀菌的作用原理，一为热效应，所及之处产生分子内部剧烈运动，使物体里外湿度迅速升高；一为综合效应，诸如化学效应、电磁共振效应和场致力效应。目前已广泛应用于食品、药品的消毒，用微波灭菌手术器械包、微生物实验室用品等亦有报告。若物品先经1％过氧乙酸或0.5％新洁尔灭湿化处理后，可起协同杀菌作用，照射2分钟，可使杀芽胞率由98.81％增加到99.98％－99.99％。 [/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]微波对人体有一定危害性，其热效应可损伤睾丸、眼睛晶状体等，长时间照射还可致神经功能紊乱。使用时可设置不透微波的金属屏障或戴特制防护眼镜等。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]6.煮沸法[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]将水煮沸至100℃，保持5－10分钟可杀灭繁殖体，保持1－3小时可杀灭芽胞。在水中加入碳酸氢钠至1％－2％浓度时，沸点可达105℃，能增强杀菌作用，还可去污防锈。在高原地区气压低、沸点低的情况下，要延长消毒时间（海拔每增高300m，需延长消毒时间2分钟）。此法适用于不怕潮湿耐高温的搪瓷、金属、玻璃、橡胶类物品。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]煮沸前物品涮洗干净，打开轴节或盖子，将其全部浸入水中。大小相同的碗、盆等均不能重叠，以确保物品各面与水接触。锐利、细小、易损物品用纱布包裹，以免撞击或散落。玻璃、搪瓷类放入冷水或温水中煮；金属、橡胶类则待水沸后放入。消毒时间均从水沸后开始计时。若中途再加入物品，则重新计时，消毒后及时取出物品，保持其无菌状态。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]7.蒸汽灭菌法[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]高压蒸汽灭菌器装置严密，输入蒸汽不外逸，温度随蒸汽压力增高而升高，当压力增至103－206kPa时，湿度可达121.3-132℃。高压蒸汽灭菌法就是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌，公众号“食品微生物检测”提醒，此法为目前可靠而有效的灭菌方法。适用于耐高温、高压，不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]潜热是指当lg100℃的水蒸汽变成lg100℃水时，释放出2255.2J的热量。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]蒸汽灭菌的关键问题是为热的传导提供良好条件，而其中最重要的是使冷空气从灭菌器中顺利排出。因为冷空气导热性差，阻碍蒸汽接触欲灭菌物品，并且还可减低蒸汽分压使之不能达到应有的温度。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]8.手提式高压蒸汽灭菌器[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]为金属圆筒，分为二层，隔层内盛水，有盖，可以旋紧，加热后产生蒸汽。锅外有压力表，当蒸汽压力升高时，温度也随之相应升高。该灭菌器体积小，可自发蒸汽，便于携带。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]操作方法如下：在灭菌器中盛水3000ml；将拟灭菌的物品随同盛装的桶放入灭菌器内；将盖子上的排气软管插于铝桶内壁的的方管中；盖好盖子，拧紧元宝螺丝，勿使漏气；锅下加热，打开排气活门，放出冷空气（一般在水沸后排气10－15分钟左右），关闭放气活门，使压力逐渐上升至103kPa，温度达121.3℃,维持20分钟后，排气至“0”时，慢慢打开盖子。如果突然开盖，冷空气大量进入，蒸汽凝成水滴，使物品潮湿，且玻璃类易发生爆裂。后再关闭放气开关，待夹层压力表达到灭菌所需压力时（约10分钟后），将蒸汽控制阀移至“消毒”位置，使蒸汽进入柜室 ，柜室内的冷空气及冷凝水可由柜室阻气器排出，待柜室的压力升到103－137kPa，温度达121.3～126.2℃时，转动压力调节阀，使压力与温度保持恒定。维持30分钟后，将蒸汽控制阀移至“排气”位置，排气毕，将蒸汽控制阀移至“干燥”位置；物品干燥后，将蒸气控制阀移至“关闭”位置，待压力指针到“0”位置和热空气排尽后，才能打开柜门，取出物品；关紧进气阀。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]9卧式高压蒸汽灭菌器[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]其结构原理同手提式高压蒸汽灭菌器，因其体积大，一次可灭菌大量物品。操作人员须经专业培训，合格后方能上岗。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]10.真空式高压蒸汽灭菌器[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]在通入蒸汽前有一预处理阶段，即柜室内抽负压至2.6kPa（空气排除约98％），所以，预真空高压蒸汽灭菌器除有下排气式所具备的灭菌系统、蒸汽输送系统、控制系统、安全系统和仪表监测指示系统外，增加抽负压系统和空气过滤系统。机器运转由电脑控制。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]11.紫外线消毒[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]在室温20℃～25℃时，220V 30W紫外灯下方垂直位置1.0m处的253.7nm紫外线辐射强度应70W/cm2，低于此值时应更换，公众号“食品微生物检测”提醒，适当数量的紫外灯，确保平均每立方米应不少于1.5W。紫外线消毒时，无菌室内应保持清洁干燥。在无人条件下，可采取紫外线消毒，作用时间应30min，室内湿度20%或40%、相对湿度大于60%时，应适当延长照射时间。用紫外线消毒物品表面时，应使照射表面受到紫外线的直接照射，且应达到足够的照射剂量。人员在关闭紫外灯至少30min后方可入内作业。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]12.臭消毒[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]封闭无菌室内，无人条件下，采用20mg/m3浓度的臭氧，作用时间应30min。消毒后室内臭氧浓度0.2mg/m3时方可入内作业。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]13.甲醛消毒[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]按照甲醛（40%）10毫升／立方米、高锰酸钾5克／立方米计算用量。不同情况下，用量有所不同，但比例为2：1。盛药容器要大、耐热、耐腐蚀：一般用陶瓷或玻璃容器，因为高锰酸钾和甲醛都具有腐蚀性，且混合后反应剧烈，释放热量。房间要密闭：这样熏蒸效果才会好。容器应尽量靠近门，以便操作人员迅速撤离；先将温水倒入容器内，后加入高锰酸钾，搅拌均匀；再加入甲醛；加入甲醛后人立即离开，密闭房间。注意顺序：是将甲醛倒入高锰酸钾溶液内。消毒时间一般为20-30分钟。消毒后要打开门窗通风换气。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]这里说的甲醛就是40%的甲醛溶液，也就是福尔马林，一般包装上写的是37%。公众号“食品微生物检测”提醒，甲醛对人体危害太大了，一般不推荐这种方法。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]可以考虑用40%乳酸熏蒸，效果很不错的。[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]14.乳酸重蒸法消毒[/color][/font][font=Tahoma, Helvetica, SimSun, sans-serif][color=#444444]室内温度22 ℃，湿度75%～90%，按0.6 g/m3乳酸量共用9.6 g进行室内熏蒸，使蒸汽弥散全室，密闭门窗1 h。[/color][/font]

（1）[b]薰蒸：[/b]这是无菌室彻底灭菌的措施。无菌室使用了较长时间，污染比较严重时，应进行薰蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。（2）[b]喷雾：[/b]在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微尘飞场，并有杀菌作用。可用5%石炭酸喷雾。（3）[b]紫外线照射：[/b]在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的杀菌效果。通常应开启紫外线灯照射30～60min。

巴氏消毒：定义：将液体加热到一定温度并持续一段时间，以沙溪可能导致疾病、变质或不需要的发酵微生物的过程。原理：在一定温度范围内，温度越低，细菌繁殖越慢；温度越高，繁殖越快，但温度太高，细菌就会死亡。巴氏消毒其实就是利用病原体不是很耐热的特点，用适当的温度和保温时间处理，将其全部杀灭。但经巴氏消毒后，仍保存小部分无害或者有益、较耐热的细菌或细菌芽胞，因此，巴氏消毒不是“无菌”处理过程。效果：选择巴氏消毒手段的制药用水系统需采用不锈钢材质新型安装，其微生物污染水平通常能有效的控制在低于50CFU/ml的水平。由于巴氏消毒能有效的控制系统的内源性微生物污染，一个前处理能力较好的水系统，细菌内毒素可控制在5EU/ml的水平。方法：常采用80℃以上的热水循环1~2h。臭氧杀菌：原理：通过氧化作用破坏微生物膜的结构而实现杀菌效果。效果：臭氧水的杀菌速度极快，100μg/L臭氧浓度在1min内能杀死60000个微生物。水中臭氧浓度超过8μg/L时，微生物即停止繁殖，水中臭氧浓度超过50μg/L时，系统能有效杀菌微生物和细菌。ISPE建议水中臭氧浓度控制在20~200μg/L。臭氧能有效去除水中的卤化物并降解生物膜，同时经紫外破除后完全无残留，是纯化水系统和高纯水系统中能连续去除细菌和病毒的最好方法。臭氧的半衰期仅为30~60min，为保证系统没有离子污染、提高臭氧溶解度，目前主要推荐采用水电解的方式产生臭氧。与巴氏消毒相比，臭氧杀菌系统除了有操作简单、水温无波动、消毒时间短和降解生物膜等优点外，管道材质选择余地也非常大。纯蒸汽杀菌：定义：指利用高温高压蒸汽新型灭菌的方法。效果：纯蒸汽杀菌可杀死一些微生物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体。方法：目前常以温度121℃、灭菌30min作为纯蒸汽杀菌参数。纯蒸汽杀菌时，一定要排尽罐体内的不凝性空气，否则会大大降低灭菌效果，同时，灭菌过程中系统所有低点的冷凝水菌需得到及时排放，在疏水器前端采用温度传感器进行在线监测，在最冷点的温度达到灭菌温度时开始计时灭菌。优点：时间短、气化潜热、系统简单。过热水杀菌：定义：指利用高温高压过热水进行灭菌的方

培养基的高压灭菌及效果验证消毒灭菌在医学实践上有着重要意义。它可切断传播途径、控制感染扩散造成的危害；也可杀灭物品或器皿上的细菌，防止医院感染；在微生物检验的领域中，消毒灭菌是保正感染的病原学检验不受外来微生物污染的前提。（一）术语消毒( disinfection)、灭菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐（antisepsis）和无菌( asepsis)是常用术语。下面就术语概念加以叙述。(1)灭菌：是用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去的方法。本法适用于制剂、原料、辅料及医疗器械等物品的灭菌。（如外科器械、注射器、基础培养基灭菌等。）(2)消毒：是破坏物体上活的病原微生物的方法，但不包括细菌芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡体温计、新洁尔灭液擦拭检查台等。用于消毒的化学物品称消毒剂( dis-infectant)。一般而言，消毒对象是指物体而不是机体。(3)防腐：直接使用防腐剂(antiseptics)破坏或抑制活的病原微牛物的方法。如外科手术前碘液擦洗皮肤、双氧水清创伤口或杀菌肥皂清冼双手等。(4)无菌：防止感染病原体进入灭菌组织或物品的操作技术称无菌操作。无菌即为不存在活的微生物。用于消毒灭菌的物理方法有热力、电离辐射、超声波、过滤等。这里介绍热力消毒灭菌法。高热破坏微生物蛋白质、核酸、细胞壁和细胞膜，从而导致微生物死亡。受高热作用后，蛋白质分子运动加快，肽链连接键断裂，蛋白变性凝固；细胞膜功能受损使胞内物质漏出，细菌内外环境平衡失调。不同种类微生物对热的耐受力不同，多数无芽胞细菌经55-60℃作用30-60分钟后死亡，100℃时迅速死亡。有芽胞细菌则对高温有强的抵抗力，如肉毒芽胞梭菌煮沸需3—5小时才死亡。热力灭菌分干热灭菌法和湿热灭菌法两大类，相同温度下后者较前告效力大，其原因是：①湿热环境中菌体蛋白易凝固；②湿热穿透力比干热大；③湿热蒸气变为液态时可释放潜热，迅速提高被灭菌物体的温度。1．干热（dry heat）灭菌法(1)焚烧。直接点燃或在焚烧炉内进行，仅适用于废弃物品或动物尸体。(2)烧灼。直接以火焰灭菌，适用于微生物学实验室接种环、针和试管口等灭菌。(3)干烤。在干烤箱内进行，加热至150-180℃ 2-4小时达到灭菌效果，适用于高温下不变质、不被破坏和不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器，不能用于塑料、棉、纸制品。2．湿热( moist heat)消毒灭菌法(1)巴氏消毒法。巴氏消毒法(pasteurization)是用较低温度杀灭液体中的病原微生物或特定微生物而保持物品中所需的不耐热成分的方法。此法由巴斯德创立，用于酒类消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有两种：一种为71.6℃加热15秒，另一种为63-66℃加热30分钟。大多采用第一种方法。(2)煮沸法。在1个大气压下，水煮沸后温度达100℃，煮沸5分钟后可杀死一般细菌繁殖体。如于水中加入2%碳酸钠，可将其沸点提高至105℃，既可促进芽胞的杀灭，又可防止金属器皿生锈。(3)流通蒸气消毒法。又称常压蒸气消毒法，常用附诺(Amold)流通蒸气灭菌器，利用1个大气压下100℃水蒸气进行消毒，10-30分钟后细菌繁殖体被杀死，但对芽孢作用不大。(4)间歇灭菌法（fractional sterilization）。采用间歇方式达到灭菌目的。将灭菌物品置于阿诺流通蒸气灭菌器内，100℃加热15-30分钟，每日1次，连续3次。每次灭菌后取出物品置37℃孵育箱过夜，致残存的芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸气灭菌器加热而被杀灭。如此反复，既可杀灭芽胞，又可使不耐高温的物质免受影响。若某些物质不耐100摄氏度，则可将温度下降至75-80℃，每次加热时间延长到30-60分钟，常用血清凝固器对吕氏血清培养基和L-J培养基的灭菌属此方法。(5)高压蒸气火菌法。利用密闭的耐高压蒸气灭菌器(autoclave)，在蒸气不外溢的条件下，使锅内压力增高，随之蒸气温度也增高。通常在103.4kPa压力下蒸气温度达到121.3℃，维持15-20分钟，可杀灭所有的繁殖体和芽胞。本法适用于耐高温、耐湿物品的灭菌，如普通培养基、生理盐水、手术敷料等。（二）下向主要介绍高压蒸气灭菌器灭菌效果的验证方法高压蒸气灭菌器使物品灭菌后达到无菌要求，这是药品实验中的基本保证。高压灭菌器灭菌效果是否合格足实验成败的最基础最关键的首要步骤。除少数培养基只需加热溶解，不需高压灭菌外，大部分培养基均需121℃高压灭菌15-30分钟。尤其是对无菌试验培养基灭菌不彻底，直接关系到对药品的无菌试验结果。因此必须认真对高压灭菌器进行灭菌效果的验证。为此我们提供了进行灭菌效果验证的一个简易可行的方法。1．试验材料(1)嗜热脂肪芽胞杆菌纸片。嗜热脂肪芽胞杆菌(Bacillus stearothermophilus)ATCC7053是本法常用的生物指示菌，含芽胞量5-lO5 CFU/片。(2) 121℃压力蒸气灭菌化学指示卡。(3)溴甲酚紫胨水培养基116℃高压灭菌20分钟后备用。(4)O—150℃留点温度计2．方法与结果将嗜热脂肪芽胞杆菌纸片（以下简称菌片）用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放入敞口试管中。以上两种试管各准备5-10份。分别放置在高压灭菌器蒸气口处、底部排气口处及底部出水口处或上下左右中间5处。如灭菌器为二层，则需放10处。留点温度计标化合格后方可用于验证试验。检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应存l℃之间，则说明灭菌器内的温度分布是均匀的。灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放入灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内56-60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热脂肪芽胞杆菌尚未完全灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽胞已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放入培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在高压蒸气灭菌时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。高压蒸气灭菌必须使蒸气顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2/3)。二种验证各重复三次，共做六次。5个点六次试验表明温度均在121℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明高压蒸气灭菌效果合格。高压灭菌器属于强检仪器，但强检只是对仪器物理参数的考核。所以做过强检的灭菌器还必须进行灭菌效果的验证。一些单位常常忽略了这个重要的问题。国内市售的手提灭菌器，往往仪器指针达到所需的温度，但灭菌物品的实际温度却未达到要求。导致灭菌物品不彻底，影响实验结果。培养基灭菌不彻底，影响培养基的使用及结果判断。因此高压蒸气灭菌器无菌效果的验证是一个必须引起重视的问题。（三）灭菌时的注意事项使用高压蒸气灭菌器时，首先应注意在开放蒸气的同时，排除灭菌器内的冷空气。必须将器内冷空气全部排除后，才可关闭排气孔。假如灭菌器内仍存留有部分空气时，刚压力表上虽已达到了某一压力值，但器内之温度仍未达到相应之度数。存留的空气越多，刚二者相差也越大。差也越大，器内温度不足，灭菌则不彻底。 转

高压灭菌锅是微生物检测的必备武器，一起来聊聊它的使用情况吧，也好给我们的工作提供信息。参与讨论内容：1.灭菌锅品牌型号及厂家2.灭菌锅的容量及自动化功能3、使用的实际体会。比如加热速度、灭菌效果、使用年限等等赶快参与吧，参与就可以获得积分奖励哟~~~

1、广谱高效　　现执行的卫生部2002年版《消毒技术规范》认定臭氧是一种广谱高效杀菌剂。可杀灭细菌繁殖体和芽胞、病毒、真菌等，并可破坏肉毒杆菌毒素。实验证明，臭氧几乎对所有病菌、病毒、霉菌、真菌及原虫、卵囊都具有明显的灭活效果。　　2、灭菌迅速　　灭菌时间来说，臭氧具有常见灭菌方法无与伦比的速度，试验表明臭氧的灭菌速度是氯的300-600倍，紫外线的3000倍。　　3、绿色环保　　在我国的GMP验证中，对臭氧有一段全面的介绍：“臭氧(03)的消毒原理是：臭氧在常温、常压下分子结构不稳定，很快自行分解成氧气(02)和单个氧原子(0);后者具有很强的活性，对细菌有极强的氧化作用，臭氧氧化分解了细菌内部氧化葡萄糖所必须的酶，从而破坏其细胞膜，将它杀死，多余的氧原子则会自行重新结合成为普通氧分子(02)，不存在任何有毒残留物，故称无污染消毒剂，它不但对各种细菌(包括肝炎病毒，大肠杆菌，绿浓杆菌及杂菌等)有极强的杀灭能力，而且对杀死霉菌也很有效。”　　臭氧消毒在中药原生药粉灭菌中的应用　　实现中药现代化，全面提升中药制剂水平，是国家“十五”科技规划中提出的任务。当前，中药制剂生产质量控制已成为实现中药现代化的瓶颈问题，而卫生指标的控制又是确保中成药尤其是以中药粉末入药制剂质量的关键问题之一。　　目前广泛应用的高温灭菌方法，因消毒依赖于热效应，容易改变或影响中药里面的活性成分和改变药性，所以对大部分热敏类、含挥发油类成分药粉不适合。同时因其“热”和“湿”的问题，不便于操作和进行生产流程的布局。作为中药生产流程中药粉的灭菌受到诸多的限制。而近几年有的企业开始使用的60Co辐射灭菌方法，可致药品中维生素破坏、变色、变味，甚至可能导致药效下降及诱发致癌物质。

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