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药典方法示例:[b]黄曲霉毒素测定法[/b]混合对照品溶液的制备:精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0μg/ml、0.3μg/ml、1.0μg/ml、0.3μg/m1)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得。分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl,注入液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线。[b]硫酸依替米星[/b]第二法 照高效液相色谱法(通则 0512)测定测定法:取依替米星对照品适量,精密称定,分别加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含依替米星1.0mg、0.5mg和0.25mg的溶液作为对照品溶液(1)、(2)、(3)。精密量取上述三种溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以对照品溶液浓度的对数值对相应的峰面积的对数值计算线性回归方程,相关系数(r)应不小于0.99;[b]蜂蜜[/b]标准曲线的制备:分别精密称取果糖对照品1.0g,葡萄糖对照品0.8g,置同一具塞锥形瓶中,精密加入40%乙腈20ml,溶解,摇匀,作为果糖、葡萄糖对照品储备液。另精密称取蔗糖对照品0.2g,麦芽糖对照品0.2g,置同一具塞锥形瓶中,精密加入40%乙腈10ml,溶解,摇匀,作为蔗糖、麦芽糖对照品储备液。分别精密量取果糖、葡萄糖对照品储备液和蔗糖、麦芽糖对照品储备液,加40%乙腈配成不同浓度的果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖混合对照品溶液。精密吸取混合对照品溶液各15μl,注入液相色谱仪,分别测定。以对照品浓度为横坐标,以峰面积值为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。[b]制作方法总结如下:[/b]1.称一份对照品制备作为对照品储备液;2.稀释成系列梯度浓度,取相同的进样量上机检测或配制一份对照品溶液取不同的进样量。 有一个系统风险在里面,就是对照品如果称量不准确,整个标准曲线就不准确。一般外标法都要求配制两份标准溶液,标准曲线法也应该配制两份标准溶液,一份用于制作标准曲线,另一份标准溶液用于标准曲线的校验,以减少系统风险。最准确的方法应该是每一个标准浓度点都应从称量开始,但也是成本最高的方法。
请问:用液相做标准曲线,一种方法是进样体积相同,系列浓度和对应的峰面积得到;另一种是配制一个浓度的标准品溶液,用一系列进样体积(1、2、3、4、5、6),和对应的峰面积得到标准曲线。二者有区别吗?是不是在分析工作中都可以用?谢谢!
最近采用液相色谱-电化学检测器测定血浆和尿中的儿茶酚胺,不知各位有否这方面的经验,能否相互交流一下样品预处理条件和色谱条件,谢谢!我有以下两个问题,希望大家能分享经验,谢谢大家。1、 标准曲线的建立方面,目前报道的文献大多采用溶液直接进样的方式,对于这种方法我有一点疑问:临床实际样品在处理过程中会有一个提取回收率的问题,当待测物与内标的提取回收率相同的时候,采用溶液直接进样的方式制备标准曲线或许可行,但事实上两者的提取回收率很有可能不一样(因为空白血浆不易获得,这一点无从考证),那么采用这种方法制备标准曲线的话,得到的结果肯定是不可靠的。但是我查了很多文献,包括国外的,大都采用这种方法,希望各位专家能给予指点。此外,也有一篇文献采用牛血清白蛋白配制模拟血浆来当作空白血浆,在将标准品加入其中,按照实际血浆样品处理过程同法处理来制备标准曲线。另外有文献将实际血浆用氧化铝吸附处理后的血浆当作空白血浆来制备标准曲线,但是操作很繁琐。个人觉得可以用牛血清白蛋白配制模拟血浆比较可行,但是毕竟改基质与实际的血浆不一样,这种操作是否切实可行,希望各位专家给予指点。2、 稳定性方面:大部分文献表明儿茶酚胺在室温很不稳定(但也有文献说很稳定),目前配制储备液的方法主要有以下几种:1)直接用水配制2)加盐酸3)加高氯酸,关于稳定性方面,不知各位有何经验分享。