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液相色谱中追求一个高柱效,高分离是我们做液相色谱追求的目标,但是往往存在很多问题,比如:柱效,分离,拖尾,峰展宽,峰变形,裂缝等等,有些容易解决,有些尝试很多途径都无法改善,当然可能会是方法本身的原因,但是也存在一些忽略的问题:比如本文中提到的溶剂效应,举二例说明: (1)盐酸小檗碱,方法见三黄片补充方法,左图为调整方法前液相色谱图,峰严重变形,我的做法是调大有机相比例,减小进样量,结果出来右边的图1.jpg (5.5 KB)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012181618_268050_2019107_3.jpg2010-6-23 23:353.jpg (5.31 KB)2010-6-23 23:36 (2)阿莫西林,方法见中国药典二部,左两图为失败方法,右图为调整溶剂的图:需要说明的是我们的是多元泵,也就是作为溶剂的流动相为量筒配置,试验过程中调整了上机的流动相(有机相减少),而作为溶剂的未调。我的做法是将溶剂的流动相调比例至比上机流动相低5个比例。结果见右图。 2.jpg (9.26 KB)http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/12/201012181618_268051_2019107_3.jpg2010-6-23 23:35 原因,第一例溶剂为甲醇,流动相为乙腈与离子对混合液,第二例溶剂有机相比例比流动相高,共同点为溶剂强度比流动相强。 解析:液相色谱一般进样量为10微升,柱子中局部流动相量比较小(没具体算),当样品溶液进入柱子,10微升体积会改变局部的流动相环境(强度),从而可能出现两种保留行为,反应在图谱上就是变形,如拖尾,裂缝,肩峰。 希望对做液相色谱的朋友有用。
[size=3]在使用液相色谱时,经常会碰到溶剂过滤头被污染或堵塞的现象。[/size][font=宋体][size=3] 当使用水或缓冲盐做流动相时,一定要经常更换流动相,水最好每天更换,至少两天换一次,缓冲盐最好现配现用。如果不及时更换容易变质的流动相,很容易滋生微生物,这样会影响基线的稳定,甚至发生过滤头堵塞。[/size][/font][font=宋体][size=3]测试过滤头是否堵塞,可以将过滤头从瓶盖组件处拔下,如果管线中充满溶剂,当过滤头没有堵塞,溶剂会自由滴出;如果过滤头已经堵塞,则没有溶剂或只有很少的溶剂滴出。[/size][/font][size=3][font=宋体] 玻璃材料的过滤头发生堵塞,不推荐超声清洗,因为超声很容易破坏玻璃过滤头的过滤板,只推荐用稀硝酸([/font][font=Times New Roman]35%[/font][font=宋体]左右)浸泡,浸泡大约一个小时后,再用水洗净过滤头;不锈钢材料的过滤头是可以超声清洗的。[/font][/size]
小白求助:使用液相色谱,样品的溶剂需要与做标线的标液溶液完全相同吗?如果不相同,会影响出峰和积分结果吗?比如说,我的标液是乙腈中的,流动相也是乙腈和水,我现在接到一个甲醇或二氯甲烷等其他溶剂的样品,我需要换标液,换方法,重新做线,还是可以直接进样?