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液相色谱定析定量分析
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液相色谱定析定量分析相关的方案
使用 Agilent 1260 Infinity 液相色谱仪定量分析甜菊叶子中的甜菊糖和甜叶菊甙 A
本应用简报介绍了使用 Agilent 1260 Infinity 液相色谱仪对甜菊叶提取物中的甜菊糖和甜叶菊甙 A 进行定量分析。研究表明,Agilent ZORBAX 糖分析柱最适用于这两种目标物的分离。通过验证几个重要参数的稳定性后确定了线性动态范围。使用 Agilent 7696A 样品制备工作台进行校准溶液的制备。两种分析物在 1-1000 μ g/mL 浓度范围之内线性良好,R2 值大于 0.9999。测定两种化合物的 LOD 和 LOQ 均为 1.0 μ g/mL。加标样品具有良好的回收率。
利妥昔单抗聚集体和片段的高分离度 SEC 分离与定量分析——Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和 AdvanceBio SEC 300Å , 2.7 μm 色谱柱
单克隆抗体聚集可通过产品和环境因素等多种机制产生。体积排阻色谱(SEC) 是单克隆抗体型治疗药物聚集体和片段含量测定和定量分析的标准方法。本应用简报重点展示强制应激研究中获得的利妥昔单抗生物仿制药和创新药物的完整态、聚集体及片段的高分离度分离与定量分析。其中采用Agilent 1260 Infinity 四元生物惰性液相色谱和Agilent AdvanceBio SEC 色谱柱进行分离与定量分析,并使用分子量标准品校准色谱柱。AdvanceBio SEC 色谱柱的高灵敏度、高分离度分离适用于监测聚集体/降解物,也是亟需高分离度与高灵敏度的应用的理想选择。
采用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪与 6495B 三重四极杆液质联用系统定量分析宿主细胞蛋白质杂质
本应用介绍了用于宿主细胞蛋白质高灵敏度定量分析的工作流程,包括用于样品自动前处理的 AssayMAP Bravo 平台、用于样品分离的 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统、用于数据采集的 Agilent 6495B 三重四极杆系统、用于 MRM 方法开发的 Skyline 软件中的安捷伦自动化工具、用于数据分析的 Skyline 和 Agilent MassHunter 定量分析软件的结合。使用基于多反应监测 (MRM) 的同位素稀释方法,结果显示可准确定量低至亚 ppm(ng/mg) 浓度的 HCP。
利用 SEC 和水相流动相进行 mAb 和 ADC 聚集体的定量分析——Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱系统和 AdvanceBio SEC 300Å , 2.7 μm 色谱柱
体积排阻色谱(SEC) 是监测生物治疗蛋白质样品(包括单克隆抗体及其衍生物)中单体、二聚体、聚集体和潜在降解物的重要工具。由于聚集体被视为一项关键质量属性,因此需要对其进行定量分析。本应用简报介绍了一种利用Agilent AdvanceBio SEC 300Å , 7.8 × 300 mm, 2.7 μ m 色谱柱和Agilent 1260 Infinity 生物惰性四元液相色谱对生物治疗mAb 和抗体药物偶联物 (ADC) 中的聚集体进行定量分析的简单而灵敏的方法。该方法采用相同的水相流动相,无需添加有机改性剂即可对mAb 和疏水性更强的ADC 进行分析。优化方法还可监测经 pH/温度处理形成的聚集体和降解物。该方法操作简单且具有良好重现性,与仪器的抗腐蚀性相结合后极其适用于生物制药行业中mAb 和ADC 的常规QA/QC 分析。
使用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD) 对生物制剂中的泊洛沙姆 188 进行定量分析
本文介绍了一种利用 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性四元液相色谱系统、Agilent 1290 Infinity II ELSD 检测器和 AdvanceBio SEC 300 Å , 4.6 × 150 mm, 2.7 μ m 色谱柱对生物制剂中的泊洛沙姆 188 进行定量分析的简单灵敏的方法。该方法采用乙腈和甲酸铵作为流动相,以等度方法对生物制剂中的泊洛沙姆 188 进行分析。其运行时间短、灵敏度高,且具有良好的重现性和回收率,能够以最高的性价比满足生物制药企业对辅料测定的迫切需求。
使用高效液相色谱-蒸发光散射检测器 (HPLC-ELSD) 对生物制剂中的泊洛沙姆 188 进行定量分析
本文介绍了一种利用 Agilent 1260 Infinity II 生物惰性四元液相色谱系统、Agilent 1290 Infinity II ELSD 检测器和 AdvanceBio SEC 300 Å , 4.6 × 150 mm, 2.7 μ m 色谱柱对生物制剂中的泊洛沙姆 188 进行定量分析的简单灵敏的方法。该方法采用乙腈和甲酸铵作为流动相,以等度方法对生物制剂中的泊洛沙姆 188 进行分析。其运行时间短、灵敏度高,且具有良好的重现性和回收率,能够以最高的性价比满足生物制药企业对辅料测定的迫切需求。
采用液相色谱-串联质谱法对土壤中的氯代酸类除草剂进行定量分析
在不经过任何衍生化的情况下,对柱上pg 水平的氯代酸类除草剂进行液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)分析。所有目标分析物从柱上量极低的pg 到ng 级水平,均呈现良好的线性关系。
采用 LC/MS/MS 法同时定量分析人血清中 20 种抗癫痫药物
由于抗癫痫药物种类繁多,而且这些药物在人血清中的浓度可能差异很大,导致监测抗癫痫药物非常具有挑战性。因此,用于这些药物的高品质分析必须能够在多个数量级内同步监测多种化合物。液相色谱-质谱 (LC/MS/MS)法就特别适用于这种分析。为了定量分析人血清中 20 种抗癫痫药物,开发了一种灵敏度高、特异性好的方法。该方法通过一种简单的蛋白质沉淀/稀释方案配制样品。可在较宽的动态范围内定量分析物,精确度、重现性以及 R2 值都非常出色。
采用液相色谱-串联质谱法对土壤中的氯代酸类除草剂进行定量分析
在不经过任何衍生化的情况下,对柱上pg 水平的氯代酸类除草剂进行液相色谱串联质谱(LC/MS/MS)分析。所有目标分析物从柱上量极低的pg 到ng 级水平,均呈现良好的线性关系。
采用 Agilent 6495C 三重四极杆 LC/MS 系统定量分析宿主细胞蛋白质杂质
本应用简报介绍了 mAb 产品中亚 ppm 宿主细胞蛋白质杂质的定量分析方法。本工作流程采用 Agilent AssayMAP Bravo 平台、Agilent 1290 Infinity II 液相色谱系统和Agilent 6495C 三重四极杆 LC/MS 系统。
采用 Agilent 6495C 三重四极杆 LC/MS 系统定量分析宿主细胞蛋白质杂质
本文展示了用于 HCP 定量分析的安捷伦工作流程解决方案的性能。采用以任务为中心的自动化方案的 AssayMAP Bravo 平台为样品前处理自动化带来了前所未有的重现性、可扩展性、灵活性和简便易用性。Agilent 1290 Infinity II 液相色谱仪是新一代 UHPLC 系统,具有更出色的色谱分离度和保留时间精度。Skyline 软件和 Agilent MassHunter 软件无缝集成,结合使用自动化工具为优化 LC-dMRM 方法提供了简单的解决方案。使用 Agilent 6495C 三重四极杆 LC/MS 系统证明了亚 ppm 级浓度 HCP 的准确定量分析。Skyline 和 MassHunter 软件的结合已证明是靶向数据分析的强大工具。
中药中齐墩果酸和熊果酸的准确定量分析
质量控制是中药 (TCM) 行业中最重要的任务之一。在质量控制中,要求用 HPLC 方法测定 TCM 中主要化合物的含量。鉴于 TCM 样品的复杂性,目标化合物有可能与其他微量化合物在 HPLC 分离中发生共洗脱。二维液相色谱是一个采用正交色谱柱化学键合相和流动相的强大方法,该方法可分离复杂样品。本应用简报详述了如何开发用于翼首草 (Pterocephali Herbra) 中齐墩果酸和熊果酸定量分析的高分辨率采样二维液相色谱方法。
用 Agilent 1290 Infinity II 液相色谱 仪与 6495B 三重四极杆液质联用系统 定量分析宿主细胞蛋白质杂质
前言宿主细胞蛋白 (HCP) 杂质是生物药物中低浓度的产物相关及工艺相关蛋白质杂质,来源于生产过程中的宿主生物。由于它们可能影响产品安全性和功效,因此根据法规要求必须对药品中的 HCP 进行监测和控制1。传统上,酶联免疫吸附测定法(ELISA) 是定量分析蛋白质治疗药物中 HCP 的标准方法。然而,ELISA 的特异性和覆盖率不足以鉴定并定量分析各种 HCP。因此,LC/MS 技术成为 HCP 分析的另一选择。在 HCP 的 LC/MS 定量分析过程中,主要挑战在于低丰度 HCP 肽段与高丰度药品肽段的共洗脱。因此需要在药品基质的高背景下对低丰度肽进行灵敏而可重现的定量分析。
使用DPiMS QT及Nexera™ LCMS-9030进行血液中药物的定性/定量分析
在法医学和法医学检验过程中分析药物、有毒物质时,需要在采集检体后,短时间内鉴定组分并报告定量结果,要求构建简洁的工作流程,对相关组分无遗漏地进行定性定量。本应用报告将介绍利用四极飞行时间质谱仪LCMS-9030与探针电喷雾电离套件DPiMS QT组合(图1左)进行定性的流程,以及利用与超高效液相色谱分析仪NexeraX3组合(图1右)进行定量的流程。使用DPiMS QT和Nexera分别与LCMS-9030联用,可以完成药物从快速定性筛查到定量分析的整个过程。通过减少定量分析中所需的样品数量,该技术还可以实现高效率的测量并减少定量分析中使用的耗材。
高分辨率和低分辨率质谱与纳升级LC和微流LC平台相结合,定量分析人血清中的肽生物标志物
本应用纪要将串联四极杆质谱仪和飞行时间质谱仪与纳升级和微流(ionKey)液相色谱平台相结合,对经胰蛋白酶酶解的未分馏、未除高丰度的人血清样品中的肽进行MRM的定量分析,并全面比较了不同的LC-MS配置。不同的LC和MS平台相结合组成了八套不同的LC-MS配置。此外,我们还比较了这些平台的通量、灵敏度、线性和重现性,以证明它们在转化研究中用于分析大规模样品组的适用性。
北京豫维:43.5%吡虫氟虫腈悬浮种衣剂的高效液相色谱分析
建立一种高效液相色谱法,对43.5%吡虫· 氟虫腈悬浮种衣剂中有效成分进行分离和定量分析。方法使用HYPERSIL BDS-C18色谱柱和紫外可变波长检测器,以甲醇+水为流动相,在268nm波长下采用外标法定量。氟虫腈的标准偏差为0.045 3,变异系数为0.32%,回收率为98.3%~100.3% 吡虫啉的标准偏差为0.107 9,变异系数为0.37%,回收率为99.6%~100.2%。
近红外漫反射光谱法定量分析头孢拉定胶囊
采用近红外(NIR)漫反射光谱法对不同生产厂家的头孢拉定胶囊进行快速定量分析。方法:按头孢拉定胶囊配方组成配制含主药头孢拉定浓度范围从5.01% ~ 91.24%的30个实验室样品,并收集来源于7个厂家的49批工业样品,采集其NIR光谱。采用偏最小二乘回归法建立NIR光谱信息与样品组成间的定量分析模型,将其用于对验证样品进行预测分析,并对该方法的加样回收率进行考察。结果:定量分析模型对21验证样品的的预测均方差RMSEP为1.35%,预测值与真值的相关系数R为0.9968,加样平均回收率为99.7%,RSD为0.7%(n=6)。结论:用近红外漫反射光谱法对头孢拉定胶囊进行定量分析的方法简便快速,结果准确可靠,可推广用于工业现场的实时在线检测。
采用 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 和 Agilent MassHunter BioConfirm 软件进行单克隆抗体化学诱导脱酰胺基化和氧化的定量分析
本文展示了一套用于同时鉴定和定量分析 mAb 的化学诱导脱酰胺基化和氧化的完整工作流程,包括使用 AssayMAP Bravo 平台进行自动化样品前处理,使用 1290 Infinity II 液相色谱仪进行液相色谱分离,使用 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 进行数据采集,以及使用MassHunter BioConfirm 软件进行数据分析。MassHunter BioConfirm 10.0 软件能够:1)自动进行数据批处理2)使用统计得分和 FDR 进行肽段谱图匹配 3)将结果表通过链接导航链接到质谱图和色谱图 4)进行 PTM 定量分析。上述功能组合提升了蛋白类生物治疗药物开发和生产过程中肽谱分析和 PTM 定量分析工作流程的效率。
利用配备二极管阵列检测器的高效液相色谱分析吐温 80
吐温 80 通常用作药物中的稳定剂,或用于组织处理的抗钙化剂。吐温 80 是不均匀混合物,且缺乏良好的发色团,定量分析具有挑战性。本研究使用 Agilent InfinityLab Poroshell 120 EC-C18 色谱柱和 Max Plot 二极管阵列检测器 (DAD) 开发出一种简单快速的高效液相色谱 (HPLC) 分析方法,用于分析溶于 0.02 mol/L 磷酸盐缓冲液中的吐温 80。基于吐温 80 洗脱区域中色谱峰的峰面积总和进行定量测定。经方法学评估,其精度、准确度、线性和定量限/检测限实验均得到了可接受的结果。这种方法可用于对含吐温 80 的各种水溶液进行质量控制和稳定性监测。
岛津:超高效液相色谱串联质谱联用法测定猪肉瘦肉精沙丁胺醇
本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A 和三重四极杆质谱仪LCMS-8030联用测定猪肉中沙丁胺醇的方法。样品经提取后,用超高效液相色谱LC-30A快速分离,三重四极杆质谱仪LCMS-8030进行定量分析。沙丁胺醇在0.05~100μg/kg浓度范围内线性良好,标准曲线的相关系数为0.999以上。
应用 SampliQ WAX 固相萃取柱和高效液相色谱 (HPLC) 分析山楂糕中的人工色素
本研究建立并验证了一种利用 Agilent SampliQ WAX 固相萃取柱结合高效液相色谱,定量分析山楂糕中六种人工色素的方法。该方法的回收率高且结果重现性好,整体步骤可靠易行,可推广到其他水果软糖的色素分析。
采用液相色谱-四极杆串联飞行时间高分辨质谱分析锂电池中的碳酸酯有机溶剂组分
本文采用液相色谱与四极杆串联飞行时间高分辨质谱联用系统 (Agilent 1290 Infinity II LC/6546 Q-TOF MS),建立了一种鉴定和定量分析锂电池电解液中碳酸酯有机溶剂组分的方法。该方法将电解液样品用乙腈稀释、过滤后直接进样,在甲醇-水(含甲酸)流动相体系下通过 Agilent InfinityLab Poroshell 120 Bonus-RP 色谱柱对样品组分进行分离,然后利用高分辨质谱进行检测。成功鉴定出碳酸乙烯酯 (EC)、碳酸丙烯酯 (PC)、碳酸二甲酯 (DMC) 和碳酸甲乙酯 (EMC) 等 4 种有机溶剂组分,同时对 3 个电解液样品中的 EC 和PC 进行了定量分析。该方法前处理操作简单、分析效率高、定量结果准确,适用于测定锂电池电解液中的碳酸酯有机溶剂组分。
【仪电分析】《药典》蟾酥测定方法-高效液相色谱法
蟾酥为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizans Cantor或黑框蟾蜍Bufo melanistictus Schneider的干燥分泌物。多于夏、秋二季捕捉蟾蜍,洗净,挤取耳后腺和皮肤腺的白色浆液,加工,干燥。味辛性温,有毒,归心经。有解毒,止痛,开窍醒神的功效,用于痈疽疔疮,咽喉肿痛,中暑神昏,痧胀腹痛吐泻。仪电分析参照《药典》中蟾酥的液相测定方法,采用配备紫外检测器的LC220高效液相色谱仪对蟾酥中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基实现了科学准确的定量分析。
使用 LC/MS 检测通过亲水相互作用色谱 (HILIC) 对植物基质中的未衍生化氨基酸进行定量分析
本应用简报介绍了一种使用三重四极杆液质联用系统定量分析多种未衍生化氨基酸的方法。结果显示,即使在存在大量植物基质(黄瓜茎叶组织萃取物)的情况下,灵敏度、线性与回收率均十分出色。使用亲水相互作用色谱 (HILIC) 可分离强极性氨基酸。在 LC/MS 兼容条件下,充分利用新一代 Agilent InfinityLab Poroshell 120 HILIC-Z 固定相优异的分离度和峰形。
【仪电分析】接骨木中芦丁含量分析-高效液相色谱法
接骨木(Sambucus wlliamsii Hance)为忍冬科接骨木属植物,又名续骨木、大接骨丹、公道老、扦扦活、马尿骚等。接骨木化学成分复杂,其中芦丁是一种天然的黄酮类成分,是其主要的药用成分之一,具有抗氧化性、抗菌作用、免疫作用、治疗心脑血管疾病等保健功能。仪电分析参照《药典》接骨木中芦丁的液相分析方法,采用配备紫外检测器的LC220高效液相色谱仪,对接骨木中有效成分芦丁进行测定。
利用 LC/Q-TOF 进行亚 ng 级完整单克隆抗体定量分析
研究人员通常利用针对酶解样品的特征肽的靶向多反应监测 (MRM) 技术对生物药物进行定量分析。尽管这项技术具有极高的分析灵敏度,但是它存在两个 明显的局限性:无法检测非预期分子形态以及样品处理过程中可能引入假象。 在完整蛋白质水平上进行定量分析可克服这些限制,但却要分别面临分析灵敏度和重现性的挑战。本研究使用色谱技术的最新进展和高性能 Agilent 6545XT AdvanceBio LC/Q-TOF 建立了一种线性动态范围极宽的高灵敏度、高重现性定量 分析方法。
利用Perfinity iDP-LCMSMS系统构建牛奶中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的定性定量分析方法之外标法
本文使用岛津在线蛋白酶切高效液相色谱仪Perfinity iDP和LCMS-8060液质联用系统建立了牛奶中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白定性定量分析方法。首先结合Skyline软件实现A1β和A2β-酪蛋白特征肽段筛选以及MRM能量优化,然后利用在线蛋白酶切高效液相色谱仪Perfinity iDP优化在线酶解和液相条件,从而实现A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的全自动在线酶切和特征肽段定量分析。两种蛋白的标准曲线相关系数均大于0.99,特征肽段的准确度范围在88.1~114.0%之间。
液相色谱/四极杆-飞行时间质谱 (LC/Q-TOF) 分析环境有机物 第三部分:吡虫啉和泪杉醇
纸浆厂、排污口或者农药径流将大量的废水以复杂混合物的形式排放至水生环境中。本研究以两类排放物(杀虫剂和纸浆厂冷凝物)来说明液相色谱/四极杆-飞行时间质谱 (LC/Q-TOF) 的灵敏度、线性范围和定量分析功能。
液相色谱串联质谱法测定饮用水体中丁酸
采用固相萃取技术(solid phase extraction,SPE)对饮用水体样品中的丁酸等30种抗生素药物残留进行富集,使用液相色谱/串联质谱仪(LC-MS/MS)的多反应监测模式(muhiple reaction monitor,MRM)进行定性定量分析。该方法的平均回收率为61.89%~152.66%,相对标准偏差为1.60%~14.97%,方法最低检出浓度为1.5ng/L,表明该方法完全适用于饮用水体中抗生素残留的监测分析。
赛默飞色谱与质谱:液相色谱法分析烟草中芦丁含量
本研究对烟草中2 种多酚化合物提取方法进行了优化设计,并采用反相液相色谱方法测定烟草中芦丁含量。其分析结果与发表相关标准的方法相比,该方法灵敏度高、检出限低、峰形对称、分析时间短。该方法具有专属性良好,准确度高,重复性强,灵敏度高,可用于烟草中绿原酸和芦丁的含量分析。
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