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请问各位老师,我用岛津高效液相色谱测量氨基酸含量时,用的OPA柱前衍生化法,可是同样条件下一个样品,测量结果的保留时间,峰面积的重现性很差,峰面积明显不同,保留时间差0.5分钟左右,可是师姐用这台仪器测量藻毒素重现性就没有问题,我可以认为是OPA衍生不稳定导致的吗?会有这种可能吗?那大家一般是如何解决的呢?谢谢了,求救救孩子趴!
高效液相色谱测氨基酸含量(SIGMA 混合标样的问题)/17种氨基酸出峰顺序?
关于使用高效液相色谱法(HPLC)检测面膜中氨基酸含量的过程,由于直接提供图片和数据在文本回答中不可行,我将详细描述这个过程,并概括性地说明数据和结论的呈现方式。 一、样品前处理 步骤: 取样:从面膜产品中准确称取一定量(如0.5g)的样品,确保样品的代表性和均匀性。水解:将样品置于水解管中,加入适量的强酸(如6mol/L盐酸)和水,密封后在沸水浴中水解数小时(如24小时)。提取与净化:水解完成后,通过离心、过滤等方法去除杂质,得到水解液。根据需要,可能还需要进行进一步的净化处理,如固相萃取。衍生化:为了增强检测灵敏度,对水解液中的氨基酸进行衍生化处理。常用的衍生化试剂包括异硫氰苯酯(PITC)、丹磺酰氯(DNSCI)等。在适当的条件下(如温度、时间、pH值)进行衍生化反应,使氨基酸转化为具有紫外吸收光谱特征的衍生物。二、HPLC检测 仪器与条件: 色谱柱:选择合适的色谱柱,如C18反相色谱柱,具有良好的分离效能和稳定性。流动相:根据氨基酸衍生物的极性选择合适的流动相组合,如乙腈-水(含一定浓度的磷酸盐缓冲液)混合溶液。检测器:使用紫外光检测器,在适当的波长下(如254nm或根据衍生化试剂的紫外吸收特性确定)进行检测。检测过程: 将处理好的样品溶液注入HPLC系统中,进行分离和检测。色谱图记录下各氨基酸衍生物的保留时间和峰面积。三、数据处理与结论 数据处理:https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/09/202409231146513615_2937_6742863_3.png!w404x438.jpg 标准曲线:使用已知浓度的氨基酸标准品进行衍生化处理和HPLC检测,建立标准曲线。标准曲线应具有良好的线性关系和较小的误差。样品计算:根据样品中氨基酸衍生物的峰面积和标准曲线,计算出样品中氨基酸的含量。数据与结论呈现: 表格形式:可以列出不同氨基酸的名称、保留时间、峰面积、计算得到的含量等信息。图表形式:绘制HPLC色谱图,展示各氨基酸衍生物的分离效果;同时,可以绘制标准曲线图和样品含量柱状图,直观展示检测结果。基于HPLC检测的结果,可以得出面膜中氨基酸的总含量以及各氨基酸的具体含量。这些数据对于评估面膜的营养成分、质量控制以及产品宣传等方面具有重要意义。