全封闭无菌过滤培养器

无菌操作技术不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，在许多生物技术中也被广泛应用，例如转基因技术、单克隆抗体技术等。 无菌室，微生物实验室内专辟的一个小房间，室外设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢、便于清洗，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。工作台的台面应该处于水平状态，无菌室和缓冲间都装有紫外线灯（距离工作台面1米），工作人员进入无菌室应穿戴灭过菌的服装、帽子。 超净台，主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃，通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台（正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去；正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种、细胞株等）。 微生物的培养 在微生物的培养过程中，要保持培养物纯净性；培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。 （一）培养基1.认识培养基的基本组成成分，从生物体构成的基本元素这一角度理解培养基中为什么都需要具备这些基本成分。2.培养基的用途和种类：液体和固体两大类。3.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方；尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。4.培养基是否合格（无菌试验）：培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长（液体不变浑浊），说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）无菌技术 1. 无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。日常的生活环境中，每时每刻每处都存在着微生物，任何一个不经意的动作都可能将某种微生物引入到培养物中。在具备无菌环境和获得无菌材料后，还要始终保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术：彻底灭菌和防止污染是无菌技术的两个方面。此外，要有效避免操作者自身被微生物感染，还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去（生物安全）。无菌操作非常重要，无论是倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 2. 消毒与灭菌的概念（1）培养细菌用的培养基与培养皿（需要灭菌）（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（需要灭菌）（3）实验操作者的双手（需要消毒）（4）接种环、针、涂布棒：灼烧灭菌（外焰）。 3.倒平板（1）灭菌后，培养基冷却到55 [font='宋

各位大神，想请问 用2216e液体培养基培养的菌液 想获得无菌上清液应该用哪一种滤膜呀？]

我们是引用水分析实验室，在实验室的建设规划图上，看到在微生物区域的无菌操作室，也就是放超净工作台的房间，设置了镜检及细菌，大肠菌的培养箱。第一次看到感觉很吃惊，一般说来，培养箱都是放在外面的，我个人认为既然是无菌室，还在里边培养细菌，进行镜检，那还能是无菌室吗？简单的紫外照射可以去除空气中因培养镜检所带入的污染源吗？不知道这种安排出于什么理论，请大家赐教。

开启紫外灯时是否能将灭过菌的培养基放在无菌室内一起灭菌或者紫外灯对灭过菌的培养基会有影响吗？

商业无菌镜检没有菌，总菌培养长菌了，这样商业无菌是不合格了吗？望老师不吝赐教

在无菌检中，如果培养厌氧菌可以只抽真空吗？

仪器分析中样品前处理处于极其重要的地位，本方法摒弃了传统的电热板加热法，采用常见的超声仪来分解样品，具有实用性与独创性，本视频介绍了全封闭超声分解法的工作原理，仪器组成，实用优点，实际演示了日常分析中

KF链球菌琼脂培养基[img]http://img.foodmate.net/bbs/static/image/smiley/default/cry.gif[/img] 称取本品71.5g加入蒸馏水或去离子水1L,搅拌加热煮沸溶解,勿高压灭菌,冷至50度左右,倾注无菌培养皿.那么请教各位大侠那这个培养基如何灭菌,是否可以直接将过滤好的滤膜放入培养基中培养.

发酵无菌检验培养基与大家共享，该培养基以酚红为指示剂，在有杂菌污染时会变色，对及时发现染菌有极大好处。[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=63333]发酵检验培养基与大家共享[/url]

全封闭式加热制冷循环器中每个配件一起组成了整个全封闭式加热制冷循环器制冷加热控温系统，其中泵的性能也是很重要的，那么泵的保养维护怎么来呢？　　对全封闭式加热制冷循环器电路、电子线路和机械转动部分做常规检查维修外，注意各种指示灯有无损坏和老化，一定要定期保养。　　做好全封闭式加热制冷循环器真空泵工作状态和每次工作时间的登记工作，记录仪器故障原因和排除方法及时问，确保真空泵工作在较佳状态。　　保持全封闭式加热制冷循环器真空泵对称平衡。如泵腔内放置的样本管不平衡，会引起循环水真空泵抖动移位。停机复位后，要检查真空泵是否正常。　　使用前应注意检查转子有无腐蚀点和细微裂纹，已腐蚀或有裂纹的转子禁止使用，超过保质期的转子，要经常检查，保障人身安全。　　全封闭式加热制冷循环器真空泵盖门栓，要经常检查，保持灵活，防止强行开或关。当出现异常时，要及时维修更换。常见故障，平时要加强注意观察，及时排除解决。　　使用完毕后要甩干全封闭式加热制冷循环器泵腔内水分，定期对电机主轴的锥面上涂少许中性润滑油脂保护。长时间不用循环水真空泵应将转子取出，擦干净放置在干燥的地方。　　无锡冠亚专注生产全封闭式加热制冷循环器、制冷加热循环器、TCU、超低温冷冻箱、冷冻机等设备品质优良，笑迎八方来客前来洽谈！

厂家供应无菌针头式过滤器，用于样中的预滤，澄清，除颗粒，除菌等。过滤直径13mm和30mm，孔径有0.10，0.22，0.45um几种，膜有混纤膜，聚偏氟乙烯膜，聚醚砜等可选。另有真空式过滤器，膜同针头式过滤器。一次性细胞培养板、培养瓶、培养，酶标板，助理[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]等产品，欢迎咨询。0451-89351268

在土壤灭菌实验中，锥形瓶口用这个“无菌培养容器封口膜”封口，有人知道这个东西用英文怎么说吗？

我想询问一下,我厂是生物制品厂,我是无菌实验操作员,那里有关于无菌操作及培养基的介绍?

微生物实验室,必须达到一定程度的无菌状态,避免微生物污染。假如在一个不洁的实验室或者早先打翻过样品的地方做微生物实验,引入新的微生物污染样品的几率是很大的。微生物的实验可以分为两大部分：前期准备和样品检验。事实上，保持整个实验室清洁是非常重要的，这样就不用在灭菌前担心太多了，然而，灭菌后必须保证样品或者培养基免受污染。其实，可以把灭菌想像成”一扇门”，在培养基中或者一些设备比如吸管的微生物都在灭菌过程中被杀死了，没有微生物困扰实验了。必须保证灭菌后的环境(门后的部分)的洁净，杜绝灭菌后的培养基和设备受到污染。无菌的重要性1. 无菌技术 – 高压湿热灭菌要点描述原理在压力下产生的湿热的蒸汽杀死微生物的营养体和孢子。密封灭菌锅必须密闭以阻隔外部空气， 避免空气的存在会影响压力并降低灭菌锅里面的温度。灭菌压力在灭菌锅内， 合适的灭菌温度是通过压力达到的， 压力对于灭菌没有效用但是使蒸汽温度上升。 对于标准操作来说，15lbs/inch2时的121℃并赶走所有空气可以达到灭菌的效果。灭菌时间当到达一定的温度和压力时， 需要保持一定的时间来达到效果，为了杀灭微生物，121℃必须保持至少15分钟。培养基灭菌大部分情况下， 实验室配置培养基后应灭菌，灭菌时应根据供应商指导， 使用合适的温度时间； 有些培养基不适合灭菌的。器皿灭菌当灭菌器皿时，需要考虑使用数量，比如，一天用10根吸管，在灭菌时， 一般就可以以10根为一包， 这样可以减低器皿在使用过程中遭受微生物的污染的可能性。灭菌条在灭菌过程中， 可以用灭菌条来监控效果， 灭菌条在灭菌前是有颜色的，灭菌后会变成黑色。重新灭菌假如一次灭菌无效， 可以重新进行灭菌过程， 但是，培养基是不可以进行第二次灭菌的， 应抛弃。储存灭菌完成后， 培养基和器皿应妥善储存。 一般来说， 培养基应存放于避光的洁净空间，同时应参照供应商的指示。2.无菌技术 – 过滤 (Filtration)要点描述简述物理分离方法， 使用高效过滤将微生物从液体培养基分离。由于不需要加热和冷却过程，过滤比高温湿热灭菌省时间。过滤头0.2微米的过滤头可以分离所有的细菌营养体, 把它安装在针筒末端。3.无菌过程注意点要点描述综述一旦培养基或者器皿经过灭菌过程, 这种灭菌状态应保持直到实验结束。区域最好能把培养基准备区域(门外)和实验区域(门内)之间应该设有缓冲间。工作台面工作前必须消毒, 可以用70%的酒精, 也可以用含氯的消毒剂。消毒时间不管使用何种消毒剂， 需要提供充分的消毒时间来杀灭微生物，一般5-10分钟， 可以用纸巾擦干表面。洁净台必须有2个光源：普通照明用和杀菌紫外光。紫外灯用于保持工作台面免于微生物污染， 在使用前仍然需要使用消毒剂清洁。摆放应该有好习惯把工作桌面的物品摆放好,，把移动放到最低限度， 避免带来污染。镊子如果使用薄膜过滤法， 需要准备一个小烧杯并有少量酒精， 镊子不用时就放在杯子里。培养基培养基使用前， 应该有相关日期， 比如配置日期， 或者实验室收到日期(直接使用的培养基)。假如没有所需日期, 这个培养基不能使用。实验服穿着干净的实验服， 袖子应卷起至肘部以避免碰到培养基或样品带来污染，当然。做实验前要洗手。4. 实验的无菌技术注意点采样个人酒精灯样品应无菌采得，使用无菌采样袋或者采样瓶，采样员应戴防护手套, 在采样前烧采样口，样品容器应紧闭并安全储存。万一培养基或者样品溅到实验服上应在做完一个实验后换上干净的。咳嗽或者鼻塞可能会带来微生物并影响实验，应戴好防护手套面罩 。使用本森灯或者酒精灯, 在实验前点燃。火焰在实验区域产生一个防层， 可以防止那些悬浮在空气中的微生物掉落在工作台面上或者培养基上。开瓶瓶口培养皿开瓶前， 应用清洁剂的纸巾清洁瓶盖和附近区域，除去盖子上可能留存的微生物。盖子打开后，玻璃瓶口应进行灭菌，可以在酒精灯上方旋转瓶口和螺纹， 一般2-3秒。当打开培养皿时, 不能完全移除盖子, 而应该保持在培养皿的上侧, 从而能够倒入培养基或者样品, 这样可以减少空气灰尘或者微生物的污染。倒完培养基或者样品后, 瓶口重新过火, 盖盖子, 用消毒剂清洁。滤膜镊子打开薄膜装， 绝对不能碰到薄膜!用镊子把薄膜移除包装并放到过滤头上， 过滤的漏斗不能完全移开，只需移开一点点放入滤膜即可，过滤完后，用镊子把滤膜转到培养皿中， 放置于中间。用镊子转移滤膜过火时，拿住镊子的尾部， 放到火焰上， 保持一下能够到火好， 时间太长会在尖部结碳，拿镊子的时候， 尾部向上直至烧完。实验结束打扫废弃物实验结束后，培养皿放入培养箱；剩余的培养基可以放回储存区域， 盖子必须盖紧。抛弃废弃物，比如样品袋 可回用的物品放在远离工作区域的地方以回收, 清洗, 灭菌。用含有消毒剂的纸巾清洁工作台面。在实验过程中暴露于微生物的物品应作为有害废弃物这些废弃物可能含有微生物并致病 假如含有致病菌可能会产生公共卫生的事件.最好废弃物能够进行湿热灭菌从微生物的实验室布局角度一个设计合理的实验室能提供一个合格的环境以支持实验能够安全有效地进行。 首先，需要为实验室选择一个合适的物理位置：远离其他操作区域，比如，生产或者储运；没有从其他区域进入实验室的直接入口；实验室必须是微生物实验专用；应有专门微生物检测无菌间，并通过缓冲间与准备间等进行区隔。通风和气流安保工作区域微生物实验室应该有单独的通风系统, 与其他操作区域的空气供给分开；空调系统的排气必须直接排出实验室, 空调系统应定时清洗, 并关注空气过滤器的清洁。实验室应该是限制进入的, 可以是卡片控制或者其他方式, 只有那些被允许进入实验室的人员才能进入。实验室人员应该有充足的工作区域, 从GLP标准来说, 每人应有20平方米的区域. 充足的工作区域可以避免工作中人员的碰撞, 也避免了交叉污染。易清洁照明反馈实验室的墙面, 屋顶和门都应该是平滑的, 光洁易于清洗消毒的；墙的接缝包括强和墙之间, 强和地面之间应该是弧形的；任何地方都应该不能聚集灰尘, 例如窗台或者窗帘；柜子应该是可移动的或者是不着地的以方便清扫。实验室应有充足的照明, 包括不间断电源或者备用发电机.反馈遵照GLP相关的安全规则1. GLP要点 – 工作区域要点描述总体安排实验前应做好仪器, 试剂和培养基的所有准备工作, 这样可以合理利用时间并得到稳定的实验结果。桌面安放多余的培养皿, 烧瓶或者滤纸可能会干扰实验并带来潜在的溅出, 打碎或者交叉污染。实验前消毒在配制培养基或者开始试验前, 应该清洁并消毒工作桌面。 可以采用70%的酒精溶液, 含氯水的溶液, 或者其他消毒剂。清洁后, 应等待几分钟以使有充分的时间杀灭微生物。试验后消毒实验结束后, 彻底清洁工作区域, 仍然使用70%酒精溶液或者其他消毒剂, 保持一段时间, 然后擦干。有害废弃物的处置必须有效管理微生物的有毒废弃物, 任何和微生物培养或者培养基相关的物品都应被看作有害物质 因为他们可能含有致病菌, 需要小心处理。废弃物的灭菌湿热灭菌是最简单也是最有效的处理污染物质和有害物质的方法。 用过的培养皿应放在灭菌袋中。 灭菌后, 可以当作一般废弃物处理。重复使用器皿的灭菌当需要对小件物品(比如移液管)灭菌时, 可以根据实际用量分组包装。 湿热灭菌后, 袋包装冷却并保存。避免浪费合理安排是非常重要的 实验室工作需要精准, 但是有时候我们也需要快速工作, 因为花非常多时间会延长设备, 培养基, 或者样品暴露在环境中的时间。 把需要用的物品放在手边可以用的地方可以节约时间并提高工作的有效性。2. GLP要点 – 洁净工作台简介使用监控洁净工作台提供了控制来自环境的污染并提供工作区域的洁净空气. 洁净空气吹向工作区域, 同时, 可以避免外部空气进入工作区域使用时, 紫外光线(或者紫外灯)应关闭, 但是使用后应打开. 如果紫外灯没有打开工作台没有开启, 工作台不能开始使用 必须清洁工作台, 开启电源并打开紫外灯, 保持30分钟.洁净工作台需要进行日常的确认, 一般有第三方公司进行一个有效的实验室应该是一个安全的实验室。假如疏忽安全的话，许多每天使用的培养基或者设备会产生危害。减少这些危害带来的风险不仅仅保护了工作场所，更重要的是，保护了自身免于危险。利用常识并遵照GLP相关的安全规则,我们就能把由于微生物相关的行为带来的潜在危害降低到最小。安全用品移动安全用品包含口罩, 手套和眼部防护。口罩防止培养基和样品受到污染, 可能来自于咳嗽或者鼻涕 根据当地的要求和习惯, 每个实验室会有不同的要求。戴手套是为了防止培养基或者其他刺激性物质接触皮肤 在从湿热灭菌锅内取出容器或则器皿时, 需要戴防热手套。在配置培养基和实验中佩戴防护眼镜是一个很好的习惯, 能够购买带有屈光度的防护眼镜为佳。当移动培养基或者样品时, 应小心注意以避免溅出或者泼出；突然的移动会产生安全危害或者导致实验无效；不要使用夸张的动作或者行为同时, 不要把任何东西, 比如吸管, 放到嘴里。明火湿热灭菌锅实验中需要用到酒精灯或其他明火, 但是假如使用不当会带来比较高的安全危险；确保酒精灯不用时完全关闭, 当有阀门时经常检查垫圈是否有裂痕或者泄露；操作酒精灯时, 应确保火焰不会接触衣物或者皮肤. 可燃物品, 比如记录本, 应远离火焰以避免意外点燃；同时, 要注意可燃液体的容器. 每次使用后应盖好盖子并远离酒精灯火焰；使用火焰进行灭菌工作时, 可使用镊子. 把镊子放在含有95%酒精的烧杯中, 使用时, 把镊子在火焰上灼烧1-2秒, 移开镊子并等待火焰熄灭；拿着镊子是尖端应向下, 使热的酒精不会流到手上。湿热灭菌锅使用高压下产生的蒸汽, 温度可达1210C, 杀死了微生物, 同样可以带来人类组织的灼伤, 所以必须特别小心地操作 如此高的温度以及蒸汽能带来极大的潜在伤害, 即使是残留的蒸汽也能带来很大的危险. 打开灭菌锅时需要特别小心, 站在边上避免面对热量和蒸汽, 缓慢的打开门, 同时, 戴好防热手套.把需要灭菌的培养基和器皿平均放置在托盘上, 大的物品放在边上, 确保物品不会相互碰撞. 这样可以是热量均匀扩散并平衡整个托盘洁净台样品操作在洁净台工作时必须关闭紫外灯. 紫外光线是危险的；不要把手或者手指放在紫外灯下, 以免灼伤皮肤；不要直接看紫外光线以免损伤眼睛。培养基和样品: 用火焰灼烧瓶口时, 停留4-5秒, 旋转使整个表面都能被灼烧, 不要停留太久, 不要溅出样品或者培养基；假如样品是瓶装的, 不要直接灼烧以免爆开. 可以取2个烧杯, 倒入70%酒精, 把瓶子倒置放入一个烧杯中, 使盖子和瓶颈的2.5厘米处能浸没在酒精中, 拿出瓶子用干净的布擦干 同理, 放入第二个烧杯, 拿出瓶子直立待酒精自然蒸发；开瓶时应特别小心不能污染样品, 可以用消毒纸巾开旋盖的瓶子 用浸没在95%酒精并灼烧的开瓶器打开压盖瓶；打开瓶子后, 使用相同的方法灼烧瓶口, 并确保用于消毒的酒精完全挥发；拉罐可以使用相同的程序或者用含70%酒精的棉球擦拭顶部, 假如罐子必须用开罐器, 这个开罐器操作同开瓶器；无菌包装的产品用含70%酒精的棉球擦拭。微生物防护用具1.一级防护（设备）①移液辅助器，如[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]②生物安全柜③一次性塑料接种环、电热接种环④螺口盖试管及瓶子⑤高压灭菌器⑥一次性塑料移液管2.二级防护（人员）①工作服、防护服②手套（乳胶手套等）③安全眼镜、面罩或其他防护用品检测中常见问题解答细菌和霉菌培养箱必须分开放置吗？在CNAS-CL01-A001-2018《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》有此规定：6.3.4 b)检测样品中的霉菌时，要有适当的措施控制孢子在空气中的扩散。但未见到明确规定细菌培养箱和霉菌培养箱不能在同一房间的规定。一般实验室都有三种培养箱，结构设计上分为两种，一种是内部循环风温度平衡的，第二种是内外热空气流动自动平衡型的，另外第三种是热辐射温度平衡型的。有网友认为，第一种和第三种应该可以放在一个实验室，保持一定距离即可。第二种培养箱应该不能放在一个实验室。据说，CNAS现场评审，会提出细菌和霉菌培养箱分开放置要求。

单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体，称为菌落（colony）。当固体培养基表面众多菌落连成一片时，便成为菌苔（lawn）。不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征，可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据。大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。所谓平板，即培养平板（culture plate）的简称，它是指固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛固体培养基的平皿。这方法包括将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面。固体培养基用琼脂或其它凝胶物质固化的培养基，每个孤立的活微生物体生长、繁殖形成菌落，形成的菌落便于移植。最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基平板。这种由Kock建立的采用平板分离微生物纯培养的技术简便易行，100多年来一直是各种菌种分离的最常用手段。　　　1. 稀释倒平板法（pour plate method）　　先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1,000、1:10,000......），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。　　　2. 涂布平板法（spread plate method）　　由于将含菌材料先加到还较烫的培养基中再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平板法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。其做法是先将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。　　3. 平板划线法（streak plate method）　　用接种环以无菌操作沾取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。　　　4. 稀释摇管法（dilution shake culture method）　　用固体培养基分离严格厌氧菌有它特殊的地方。如果该微生物暴露于空气中不立即死亡，可以采用通常的方法制备平板，然后置放在封闭的容器中培养，容器中的氧气可采用化学、物理或生物的方法清除。对于那些对氧气更为敏感的厌氧性微生物，纯培养的分离则可采用稀释摇管培养法进行，它是稀释倒平板法的一种变通形式* 。先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。培养后，菌落形成在琼脂柱的中间。进行单菌落的挑取和移植，需先用一只灭菌针将液体石蜡--石蜡盖取出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片进行观察和菌落的移植。

近期做一个中药复方的无菌过滤，结果将过滤膜送检了一下，发现有500多个细菌，还有霉菌。这个可能是与存放容器和时间有关。那么如果做无菌过滤，这个膜应该如何处理呢？是否可以高温高压灭菌，还是用紫外，还是 用臭氧，还是用水煮?补充一下，我用那个膜是水系的纤维膜。

在自然条件下，微生物常常在各种生态系统中群居杂聚。为了研究某种微生物的特性，或者大量培养和利用某一种微生物，必须事先从有关的生态环境中分离出所需的菌株，获得纯培养。获得纯培养的方法，称为微生物的纯种分离法，这一过程称为微生物的分离和纯化。欲从含有多种微生物的样品中直接辨认出，并且取得某种所需微生物的个体，进行纯培养，那是困难的。由于微生物可以形成菌落，而每个单一菌落常常很可能是由一种个体繁殖而成。不同微生物的菌落是可以识别和加以鉴定的。因些将样品中不同微生物个体在特定的培养基上培养出不同的单一菌落，再从选定的某一所需菌落中取样，移植到新的培养基中去，就可以达到分离纯种的目的。这也就是常用纯种分离法的原理。在微生物的分离和纯培养过程中，必须使用无菌操作技术。所谓无菌操作，就是在分离、接种、移植等各个操作环节中，必须保证在操作过程中杜绝外界环境中的杂菌进入培养的容器或系统内，从而污染培养物。具体操作方法见本实验有关部分和教师作示范。获得微生物纯培养的常用方法有稀释平板分离法和平板划线分离法等。有条件的单位也可用显微操纵器单细胞分离法。针对不同的分离材料和条件，可以采用不同的分离方法。一、目的要求1. 初步掌握微生物的分离、培养和菌种保藏的基本方法。2. 练习微生物接种、移植和培养的基本技术，掌握无菌操作技术。二、实验材料样品：新鲜土壤。培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、淀粉琼脂培养基、马铃薯蔗糖培养基（10mL装）。无菌水：带有玻璃珠装有45mL无菌水三角瓶、装有9 mL无菌水的试管。其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、台天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴、标签纸、胶水、水泡锅。试剂：5000U/mL链霉素液0.5％重铅酸钾液。

1、洁净室（无菌室）要符合规范要求：无菌室应采光 良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。由1—2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。 无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18—26℃，相对湿度45%—65%。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板 内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2—2.5w/m3），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40uw/m2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。 2、建立使用登记制度在登记册中可设置以下项目内容：如使用日期、时间、使用人、设备运行状况、温度、湿度、洁净度状态（沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数 ）、报修原因、报修结果、清洁工作（台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手）、消毒液名称等。3、建立使用标准操作规范（SOP）并严格管理:SOP内容至少要有以下几点： （1）规定净化系统使运转时间要求每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，同时开启净化台和紫外灯。 （2）物品进入洁净室（无菌室）基本要求：凡进入洁净室（无菌室）的物 品必须先在第一缓冲间内对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗1h以上，及无菌空气吹干后送入无菌室。注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室。无菌室内固定物品不得任意搬出。 （3）人员进入洁净室（无菌室）要求：实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽（不得让头发、衣等暴露在外面），戴上无菌口罩。然后，换或是再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室30s风淋后进入无菌室。 （4）温湿度观察要求：观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据记录在案。如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档。 （5）沉降菌落计数与浮游菌测定要求：在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。 （6）消毒要求：无菌室每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液（常用消毒剂的品种有：5—20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%新洁尔灭溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（处方：对羟基苯甲酸甲酯21.5g；对羟基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种）擦拭操作台及可能污染的死角，方法是用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面、及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区。逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1—2h，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min。 （7）其他要求：如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室。关闭所有电闸。重新进入无菌室前至少开启机房运转1h以上。4、洁净度检查的要求与方法：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法。 （1）沉降菌检测方法及标准：以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开平板盖，在空气 中暴露30min后将平板盖好，置32.5℃士2.5℃培养48h，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均小于1个。 （2）浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击法机制的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基。使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5min，调节流量、转盘、转速 。关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置32.5℃士2.5培养48h，取出检查，浮游菌落数平均不得超过5个/m3。 每批培养基应选定3只培养皿做对照培养。 无菌操作台面或超净工作台还应定期检测其悬浮粒子，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测，并根据无菌状况必要时置换过滤器。5、定期进行洁净度再验证：定期（每季度、半年、1年）或当洁净室设施发生重大改变时，要按国家标准GB/T16292-16294-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度再验证，以确保洁净度符合规定，保存验证原始记录，定期归档保存，并将验证结果记录在无菌室使用登记册上，作为实验环境原始依据及趋势分析资料。并定期对洁净室的环境检测数据进行趋势分析和评估，根据评估结果，了解洁净室设施环境质量的稳定状况及变化趋势，决定是否有必要修订相应的警戒和纠偏限度。6、定期更换新的紫外灯管、更换净化系统的初效、中效、高效头：定期（至少每年1次）更换新的紫外灯管，以确保紫外灯管灭菌持续有效。并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。至少2年1次，或按洁净度验证实际情况，定期更换初效、中效、高效头。以确保净化系统的功能持续有效，并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。7、使用过程中应尽可能减少人员的走动或活动：平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，同向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。8、洁净度不符合规定时立即停止使用：发现洁净度不符合规定时，应立即停止使用，寻找原因，彻底清洁、必须经洁净度再验证符合规定后，才再使用，并同时将情况记录在无菌室使用登记册上，定期归档保存。9、对进入的外来人员或维修人员进行指导和监督：非微生物室检验人员不得进入洁净室（无菌室），对必须进入的外来人员或维修人员要进行指导和监督。10、洁净室（无菌室）的日常管理：建立安全卫生值日制度，一旦发现通风系统、墙壁、天花板、地面、门窗及公用介质系统等设施有损坏现象，要及时报告并采取相应的修复措施，并保存记录及时归档。从洁净室（无菌室）环境中检测到的微生物应能鉴别至属或种，保留鉴别实验原始记录及菌种，作为无菌生产、无菌检查洁净室环境质量、消毒剂有效性评估及污染源调查的依据，并且也是为无菌检查阳性结果的调查提供第一手资料。

[size=4][font=黑体]我们都知道：菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。但在水质与食品检验中当细菌培养在平板无菌落生长时，为什么菌落总数报告方式不同？水质：若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以（未检出）报告之。食品：若所有稀释度均无菌落生长，则以小于l(1)乘以最低稀释倍数(l×10或lO)报告之。请各位朋友发表自己的看法或见解![/font][/size]

常用设备 准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、 PH 计（测量培养用液 PH 值）、磁力搅拌器（配置溶液室搅拌溶液）。培养室的设备：液氮罐、储品柜（存放杂物）、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱（ -80℃ ）、空调、二氧化碳缸瓶、边台（书写实验记录）。必须放在无菌间的设备：离心机（收集细胞）、超净工作台、倒置显微镜、 CO2 孵箱（孵育培养物）、水浴锅、三氧消毒杀菌机、 4℃ 冰箱（放置 serum 和培养用液）。无菌操作基本技术 无菌室的灭菌：1.定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用 3‰ 来苏尔或者新洁尔灭或者 0.5 ％过氧乙酸擦拭。2.CO2 孵箱（培养箱）灭菌：先用 3‰ 新洁尔灭擦拭，然后用 75 ％酒精擦拭或者 0.5 ％过氧乙酸，再用紫外灯照射。3.实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各 20-30 分钟 。4.实验后灭菌：用 75 ％酒精（ 3‰ 新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。 5.定期检测下列项目：钢瓶之CO 压力；CO2培养箱之CO２浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)；无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300 小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。6.水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。实验人员的无菌准备：1.肥皂洗手。 2.穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3.用75 ％酒精棉球擦净双手。 无菌操作的演示：1.凡是带入超净工作台内的酒精、 PBS 、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用 75 ％酒精擦拭瓶子的外表面 2.靠近酒精灯火焰操作。 3.器皿使用前必须过火灭菌 4.继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。5.各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。 6.吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 器械的清洗和消毒 玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消： 1.自来水刷洗，除去灰尘。 2.烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入 5 ％稀盐酸中 12 小时以除去脏物、铅、砷等物。 3.刷洗、烘干： 12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。 4.泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾120g ：浓硫酸 200ml ：蒸馏水 1000ml ）浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿用自来水冲洗 15 次，最后蒸馏水冲洗 3-5 次和用双蒸水过 3 次。 5.烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。6.高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向 15 磅 时，维持 20-30 分钟。 7.高压消毒后烘干

1 范围本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。YY/T0188.6—1995药品检验操作规程 第6部分：药品生物测定法3 定义本标准采用下列定义3.1 洁净室（区） clean room(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。3.2 洁净工作台 cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。3.3 洁净度 cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。3.4 菌落 colony forming unist细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。3.5 沉降菌 settling microbe用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。3.6 悬浮粒子 ailborne Paritical可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001μm～1 000μm之间的固体、液体或两者的混合物质，包括生物性粒和非生物性粒子。3.7 单向流unidirectional air flow（曾称为层流laminar flow）沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。3.8 非单向流nonunidirectional air flow（曾称为乱流turbulent flow）具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。3.9 静态测试 at—rest test洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。3.10 动态测试 operational test洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。

1.培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。2 ．培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。3.培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。4.培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。5.培养塞pH 的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2.而肠浸液pH 却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。6．培养基的过滤澄清液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应拆叠成折扇成漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55-60℃ 的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/ 2 ，每1000ml 培养基加入1-2个鸡蛋的蛋白．强力振摇3-5 分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。7.培养基的分装培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/ 3 。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂抖面培养基时，分装量应以能形成2 / 3 底层和1/ 3 斜面的量为恰当。分装容器应予先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml 培养基于一小玻瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。8.培养基的灭菌一般培养基可采用121℃ 高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃ 左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。9. 培养基的质量测试每批培养基制备好以后．应仔细检查一遍：如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。将全部培养基放入36±1℃ 恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。用有关的标准菌株接种1-2 管或瓶培养基，培养24- 48 小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。10.培养基的保存培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制各记录副页或明显标签。

1、同无菌室的灭菌、消毒措施。2、小规模的培养可不启用恒温培养室，而在恒温培养箱中进行。

4.1培养基的准备选用硫乙醇酸盐流体培养基：硫乙醇酸盐流体培养基200g注射用水6600ml加注射用水搅拌混合均匀并慢慢加热溶解，然后煮沸1分钟，在121℃高压灭菌30分钟。4.2试验条件 4.2.1在进行培养基无菌灌装试验前，应对车间无菌作业的环境进行全面监测，包括空气悬浮粒子监测、表面微生物监测、空气浮游菌监测、层流罩下的沉降菌监测，以及人员的个人卫生（如工作服、手的微生物污染状况）监测。只有各项监测结果达标时，方可进行培养基灌封。4.2.2严格按照生产厂商的配制要求，在配料间用注射用水配制培养基。除菌过滤前，用一无菌瓶取50ml培养基溶液，用作除菌过滤前培养基溶液的微生物污染水平检测，除菌过滤作业完全模拟实际生产。4.2.3由受过培训的无菌生产操作人员模拟实际的灌装作业进行培养基灌封，其灌装容器及胶塞与产品生产时完全一致，每批灌装数量3300瓶以上，每瓶灌装量与实际产品相同。4.2.4西林瓶、胶塞、安瓿瓶和灌装用管道用具等按生产工艺要求进行灭菌。4.2.5人员按工艺要求穿灭菌的洁净工作服操作。

1．厌氧缸法。接种好标本的平板或液体培养基试管，可放入厌氧缸内培养，厌氧缸是普通的干燥缸，用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境，从而将厌氧菌培养出来。2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。3．厌氧手套箱（Anaerobie glovebox）是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。4.厌氧盒：原理同厌氧袋，有成品销售。5.生物耗氧法：在一密闭的容器内放以生物（多是植物），消耗氧气，同时产生二氧化碳，供细菌生长用。6.焦性末食子酸法：在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸，均匀撒上焦性末食子酸，然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液，迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面，用融化的白蜡封边，造成一个封闭空间。焦性末食子酸与碱反应后耗氧。该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养，简单。如有梭状芽孢杆菌。7.疱肉培养基：本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。疱肉和肉汤装入大试管，液面封凡士林，造成无氧环境。

1 范围本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件、测试方法。本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域（包括洁净工作台）的沉降菌的测定和环境的验证。2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。YY/T0188.6—1995药品检验操作规程 第6部分：药品生物测定法3 定义本标准采用下列定义3.1 洁净室（区） clean room(area)对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。3.2 洁净工作台 cleaning work station一种工作台或者与之类似的一个封闭围挡工作区其特点是自身能够供给经过过滤的空气或气体，如垂直层流置、水平层流罩、垂直层流洁净工作、水平层流洁净工作台、自净器等。3.3 洁净度 cleanliness洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某一粒径的悬浮粒子的允许统计数。3.4 菌落 colony forming unist细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。通常用个数表示。3.5 沉降菌 settling microbe用本标准提及的方法收集到的活微生物粒子，通过专用的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。3.6 悬浮粒子 ailborne Paritical可悬浮在空气中的尺寸一般在0.001μm～1 000μm之间的固体、液体或两者的混合物质，包括生物性粒和非生物性粒子。3.7 单向流unidirectional air flow（曾称为层流laminar flow）沿着平行流线，以单一通路以一定流速向单一方向流动的气流。3.8 非单向流nonunidirectional air flow（曾称为乱流turbulent flow）具有多个通路循环特性或气流方向不平行的，不满足单向流定义的气流。3.9 静态测试 at—rest test洁净室（区）净化空气调节系统已处于正常运行状态，工艺设备已安装，洁净室（区）内没有生产人员的情况下进行的测试。3.10 动态测试 operational test洁净室（区）已处于正常生产状态下进行的测试。

高低温老化试验箱发动绕组的电阻较大,工作绕组的电阻较小。在全封闭式压缩机的外壳接线盒内有3个接线柱,这3个接线柱用R、5、C象征,别离代表工作端、发动端和共用端。其间R、S两端子间是两个绕组的串联接点,电阻值是发动绕组和工作绕组的电阻之和。　　高低温老化试验箱压缩机两端子间是发动绕组,CR两端子间是工作绕组。单相电动机多见的毛病有绕组短路、断路和碰壳通地。　　维修电动机时,用万用表丈量绕组的电阻值,将万用表调至0XI挡,并调整零位,别离用两支表笔丈量3个接线端户中恣意两个之间的电阻值。大多数电动机的绕组之间的电阻值存在如下联系：Rsr=Rcs+Rcr　　高低温老化试验箱全封闭式压缩机的毛病体现有机械方面的,也有电气方面的,通常情况下假 如制冷压缩机不工作,大多为电气方面发作毛病。制冷压缩机能工作而制冷量缺乏往往是机械性毛病或制冷系统有走漏、阻塞。　　高低温老化试验箱全封闭式压缩机的电动机有单相的和三相的,通常常用试验箱和温度器选用单相电源,而常用试验箱、温度器则选用三相电源。单相电动机的构造主要是转子和定子,其定子上有两个绕组：发动绕组和工作绕组。

一、实验目的1、了解并掌握培养基的配制、分装方法；2、掌握各种实验室灭菌方法及技术。二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 1.3 调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 1.4 溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 1.5 过滤分装 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 1.6 包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 1.7 灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。1.8 倒平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板。2、灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。 2.1 湿热灭菌 煮沸消毒法 ：注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好，然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15～30min，对于芽孢则需煮沸约1～2h。 高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 2.2 操作方法和注意事项 加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。 装料、加盖：灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。 排气：打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。 升压、保压和降压：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 灭菌后的培养基空白培养：灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。 2.2 干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 2.2.1 灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。 2.2.2 干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。 [/siz

一特点： 　　光照培养箱具有超温和传感器异常保护功能，保障仪器和样品安全;选配全光谱的植物生长灯，有利于植物的生长，提高抗病性。具有掉电记忆、掉电时间自动补偿功能;恒温控制系统，反应快，控温精度高。 　　二、用途： 　　光照培养箱微电脑全自动控制，触摸开关，操作简便;可编程多段控制方式，白天、黑夜均可单独设置温度、湿度、光照度和时间等。风道式通风，工作室风速柔和，温度均匀;中空反射钢化渡膜玻璃，绝热性能好，美观大方。全封闭不透光灯罩，选装工作室电源，消毒装置等。 　　三、使用说明： 　　1、接通电源，合上电源开关，整机通电，开关内的电源指示灯亮。 　　2、控温设定请参考智能型数字温度控制器说明书。 　　3、如需照明打开照明开关。 　　4、此种培养箱有断点保护功能及一分半钟左右延时功能，压缩机停机后再次启动要达一分半钟左右。 　　四、维护和培养： 　　1、培养箱外壳应可靠接地。 　　2、培养箱要放置在阴凉、干燥、通风良好、远离热源和日晒的地方。放置平稳，以防震动发生噪音。 　　3、为保障冷凝器有效地散热，冷凝器与墙壁之间距离应大于100mm。箱体侧面应有50mm间隙，箱体顶部至少应有300mm空间。 　　4、培养箱在搬运、维修、保养时，应避免碰撞，摇晃震动;最大倾斜度小于45度。 　　5、仪器突然不工作，请检查熔丝管(箱后)是否烧坏，检查供电情况。 　　6、培养箱制冷工作时，不宜使箱内温度与环境温度之差大于25度。