快速无菌液体传输系统

各位大神，想请问 用2216e液体培养基培养的菌液 想获得无菌上清液应该用哪一种滤膜呀？]

[color=#444444]前期稀释时用[/color][color=#444444]scdlp[/color][color=#444444]液体增菌液代替生理盐水，稀释完的菌液放到冰箱可以保存几天第二天或者第三天再拿出来涂布菌落总数还准确么[/color]

法国Serac公司刚刚向市场推出一种新型的RABS隔离装置，以优化牛奶和饮料在灭菌区或灭菌区周围进行无菌灌装的条件。采用该装置可以连续灌装生产72小时，中途不必进行清除污染的作业，从而在保证安全的情况下，提高了生产率。 与传统的隔离装置相比，该装置有三项重大改进： 　　一、单向流通 　　与传统的隔离装置不同的是，RABS装置并不是完全密闭的，而是一道由操作间正高压作用的空气力学屏障，它对无菌容器起保护作用。灌装的流通方向为垂直单向流通，流通速度可以控制，使空气可以连续地循环和更新。通过两种技术的联合使用，可以清除操作间里存在的颗粒物，预防来自外部的污染。 　　在避免了完全密闭的同时，持续的空气循环延长了无菌条件的时间，可以连续生产72小时，中间不必停工进行清除污染的作业。 　　二、屏障区 　　无菌区的四周是屏障区，而屏障区也处在单向流通的控制之下。屏障区就像处在操作间和车间其它地方之间的一个辅助的保护屏障，方便了机器的清洁和维护作业。 　　三、易于进入 　　机器的心脏区域——无菌操作问，在生产时只能通过在灌装机关键部位设的手套箱进入。但所有其它的部位如产品的处理工位和生产线进出点，都可以通过外部的门进入，进入的操作人员也不必穿无菌服装。屏障区所有的进出都有登记存储，以保证操作具有良好的跟踪性能。 　　这种新型的RABS隔离装置首先是为符合制药业的要求而设计的。Serac公司在设计该隔离装置时，参考了国际生产力促进协会（ISPE）为美国食品和药品管理局（FDA）确立的定义。该定义有7项标准： 　　①硬性隔壁，以在生产和操作人员之间形成物理的隔离。 　　②单向流通，ISO　5级标准。 　　③采用手套和自动装置，以避免灌装时人员进入。 　　④设备的传输系统应能避免使产品暴露在不洁净的环境当中。 　　⑤表面高度消毒处理。 　　⑥环境达到ISO　7级要求。 　　⑦干预极少，且需要在干预后进行清除污染的处理；门要上锁，并带有开锁登记系统；带有正压；环境符合1SO　5级要求。 　　法国Serac股份有限公司成立于1969年，是一家专门生产液体和半液体灌装和封装机械以及包装生产线的公司。该公司生产的设备用于食品、工业品、化学产品和卫生用品（香水、美容和药品）市场。

吐温80作为药用辅料内控标准要求检查无菌，但是根据2010版药典附录并没有找到相关检验量和检验数量的规定，具体该去多少样品进行检查呢？请各位高数指点一下。

无菌室一般是在微生物实验室内专辟一个小房间。可以用板材和玻璃建造。面积不宜过大，约 4 — 5 平方米即可，高 2.5米左右。无菌室外要设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭。室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。无菌室标准化规程与验收规范。1.目的　　本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围　　生测实验室 3.责任者　　QC主管生测员 4.定义　　无 5.安全注意事项　　严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程　　6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 　　6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 　　6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 　　6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。 　　6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 　　6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 　　6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 　　6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 　　6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 　　6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 　　6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 　　6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 　　6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 　　6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 　　6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 　　6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 7.参照　　参照《药品卫生检验方法》 《中国药品检验标准操作规范》中 (无菌检查法)章节 中华人民共和国医药行业标准 YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》

问: 做无菌验证时阳性对照菌是怎么加入的？可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入吗？答:严格的说是要在最后一遍冲洗液中加入阳性对照菌的,这主要是考量滤膜对于阳性菌的截留性～但是滤器如果可以提供滤膜对于阳性菌的充分截留的话在最后的培养体系中加入阳性菌也是未尝不可的. 如果供试品没有抑菌作用,可以在加完培养基后用无菌的注射器把菌液注入,摇匀如果供试品有抑菌作用,正如安哥洛卡所讲,在最后一次冲洗液中加入阳性对照菌,摇匀,抽虑,加培养基. 无菌检查，加入阳性的方法可以有许多种，可以根据个人的习惯。只是注意：1、避免人为污染。2、阳性菌加入数量，符合“2005版中国药典XIJ微生物限度检查法”的规定。关键词:阳性对照菌 问: 离心沉淀法的原理、操作和注意事项是什么? 答:原理:利用沉降系数的差异将供试品和微生物进行分离; 操作:取规定量的供试液，3000转/分离心20分钟（供试液如有沉淀，先以500转/分离心5分钟，取全部上清液再离心），弃去上清液，留底部集菌液约2ml，加稀释剂至原规定量. 注意事项:真菌由于沉降系数比较小, 500r/min离心5min，黑曲霉、白色念珠菌回收率为20%,因此其检查不适宜用低速离心沉淀法. [col

无菌为一相对概念,大输液无菌检查结果为无菌时,指在一定灭菌工艺条件下,对最终灭菌品相对于抽验样本数量的微生物存活率低于10 - 6 [ 1 ] 。笔者在按照中国药典2000 年版二部对大输液进行无菌检查时,认为需要注意以下环节。1 　环境无菌试验区应为净化区,尽可能除去微生物污染,试验区应定期检测其无菌符合程度,并在使用前采取有效的方法进行无菌处理。若使用开放式薄膜过滤器,要更加严格注意操作区环境,避免外界引入微生物对实验结果造成影响。2 　培养基2. 1 　培养基灵敏度检查　利用不同菌株生长试验来评价培养基灵敏度,只有培养基灵敏度符合要求时,在一定体积范围内才能够检测出大输液中微量残存的活菌,做大输液无菌检查前一定要做培养基灵敏度检查。2. 2 　培养基的pH 值和澄清度　不同微生物生长有相对适宜的pH 值范围,培养基配制后调节到相应的pH 值范围,创造一个最有利于微生物生长的pH 值条件,同时也保证实验的平行性。配制后的培养基应最好通过4 层以上纱布进行过滤后再分装灭菌,这样处理过的培养基细腻、澄清,无杂质和异物,有利于最终结果判断。2. 3 　培养基灭菌时间与温度　中国药典2000 年版二部规定无菌检查用培养基制备时均以115 ℃灭菌30 min ,从灭菌法角度讲,既保证培养基无菌程度,同时又防止营养成分流失。过高的灭菌温度、过长的灭菌时间,会破坏培养基中的葡萄糖成分,使培养基颜色变深,同时需氧菌、厌氧菌培养基中红色厌氧环高度加大,影响无菌检查用培养基的质量。2. 4 　培养基临用前检查　大输液无菌检查中的需氧菌、厌氧菌培养基在使用之前,应做培养基检查。培养基上部红色厌氧环高度为培养基高度的1/ 10～1/ 5 时可以使用,若红色厌氧环超过1/ 5 高度时,说明培养基中厌氧环境发生变化,应在保证培养基无菌程度情况下对培养基做水浴加热处理,除去培养基中游离氧后再使用,加热仅限一次[ 2 ] 。3 　对照实验3. 1 　阳性对照实验　阳性对照实验为无菌结果判定标准参考依据之一,若阳性菌对照管中无菌生长,则对应样品无菌检查结果无效。大输液无菌检查用对照菌株为金黄色葡萄球菌[CMCC( 26003 ][ 2 ] 。加入阳性对照菌液时,只有确认此对照菌液为新近配制,并且活菌数为10～100 个/ ml - 1时,才能保证阳性对照实验结果的有效性。3. 2 　阴性对照实验　阴性对照实验一般能够反映培养基灭菌程度、使用器具无菌程度、操作区域的无菌环境和操作人员的无菌技术等情况,用于对检查结果发生疑问时溯源的依据和问题环节的排除。4 　结果判断4. 1 　浑浊程度变化　大输液无菌检查的培养期为7 d ,若有微生物生长,培养基会因生长代谢而使培养基变浑浊。对于需氧菌、厌氧菌的培养,正常加入阳性对照菌液的培养基,一般在培养第2 天有菌生长,培养基变浑浊,随着培养时间的延长,浑浊程度加大至最后出现沉积现象。有极少量微生物的大输液供试品,接种在需气菌、厌气菌培养基中,其微生物生长一般比阳性对照管缓慢,由于某些细菌经过高压灭菌后,可能以休眠状态、亚致死状态或缺陷状态存在,需要一个恢复期后才能生长繁殖。实验中发现有的微生物在培养的第5 天、第6 天才有生长现象,培养基才发生浑浊,因而对培养基变化情况要逐日观察,及时记录。同时,需氧菌、厌氧菌培养基中为保证厌氧环境加入的少量琼脂在培养过程中,会使培养基本身产生轻微浑浊现象,浑浊程度虽每日略有变化但不发生突然改变时,也不认为有微生物生长。若无法确定,可与阴性对照做平行比对,也可按照中国药典2000 年版二部附录中无菌检查法中要求进行下一步操作。真菌的结果判断相对容易,真菌培养基澄清度大,培养过程中培养基本身几乎无变化,有真菌生长时,可见培养基浑浊,或培养基中出现菌团。4. 2 　颜色变化　真菌培养基颜色均一,结果容易判断。需氧菌、厌氧菌培养基在有微生物生长时,培养基上部红色厌氧环消失,整个培养基发生浑浊并变成浅黄色或黄白色。在培养过程中也出现下面几种情况:红色厌氧环扩散至培养基高度1/ 2 左右 整个培养基颜色变为淡红色 培养基上下部分为淡红色,中部为培养基正常颜色。笔者建议,对无菌结果判断要在保证无外界环境因素及人为因素影响情况下,结合培养基浑浊程度变化和颜色变化共同进行。参考文献:[1 ] 　马绪荣,苏德模主编. 药品微生物学检验手册[M] . 第一版. 北京:科学出版社,2000. 8.[ 2 ] 　中国药典. 二部[ S] . 化学工业出版社,2000 :附录89～91.[收稿日期]2001203205

1.目的本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。2.适用范围 生测实验室3.责任者 QC主管生测员4.定义 无5.安全注意事项严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。6.规程6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。

1.目的：本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围：生测实验室 3.责任者：QC主管生测员 4.定义：无 5.安全注意事项：严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程 6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 7.参照：《药品卫生检验方法》、《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法)章节、中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》。 8.分发部门：质量管理部

液态奶无菌砖包括利乐包、康美包等以纸、铝箔、塑料薄膜等为基材复合而成的可供无菌罐装要求的产品的包装。目前，可供参考的产品标准有：(1) GB 19741-2005 《液体食品包装用塑料复合膜、袋》：适用于总厚度小于0.2mm的由塑料与塑料、塑料与纸和铝箔（或其他阻隔性材料）复合而成的包装材料或包装袋。(2) GB/T 18192-2008 《液体食品无菌包装用纸基复合材料》：适用于以原纸为基体，与塑料、铝箔或其他阻隔性材料经复合而成，以卷筒形式或以单个包装产品形式供无菌灌装液体食品用的材料。(3) QB/T 3531-1999 《液体食品复合软包装材料》：适用于以原纸、低密度聚乙烯（LDPE）、铝箔等为原料经挤压复合而成，专供瑞典利乐公司无菌灌装机包装液体食品的材料。

1.目的：本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。 2.适用范围：生测实验室 3.责任者：QC主管生测员 4.定义：无 5.安全注意事项：严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。 6.规程 6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24℃，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。 6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。 6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌20分钟。 6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。 6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。 6.11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。 6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。 6.14.如有菌液洒在桌上或地上，应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟，再做处理。工作衣帽等受到菌液污染时，应立即脱去，高压蒸汽灭菌后洗涤。 6.15.凡带有活菌的物品，必须经消毒后，才能在水龙头下冲洗，严禁污染下水道。 6.16.无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板3～5个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于30～35℃培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。 7.参照：《药品卫生检验方法》、《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法)章节、中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》。 8.分发部门：质量管理部

1、目的:本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程.2、适用范围:生测实验室3、责任者:QC主管生测员4、定义:无5、安全注意事项 严格无菌操作,防止微生物污染;操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯.6、规程 6.1 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间,无菌操作间洁净度应达到10000级,室内温度保持在20-24℃,湿度保持在45-60%.超净台洁净度应达到100级. 6.2 无菌室应保持清洁,严禁堆放杂物,以防污染. 6.3 严防一切灭菌器材和培养基污染,已污染者应停止使用. 6.4 无菌室应备有工作浓度的消毒液,如5％的甲酚溶液,70％的酒精,0.1％的新洁尔灭溶液,等等. 6.5 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁,以保证无菌室的洁净度符合要求. 6.6 需要带入无菌室使用的仪器,器械,平皿等一切物品,均应包扎严密,并应经过适宜的方法灭菌. 6.7 工作人员进入无菌室前,必须用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在缓冲间更换专用工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手),方可进入无菌室进行操作. 6.8 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上,并且同时打开超净台进行吹风.操作完毕,应及时清理无菌室,再用紫外灯辐照灭菌20分钟. 6.9 供试品在检查前,应保持外包装完整,不得开启,以防污染.检查前,用70％的酒精棉球消毒外表面. 6.10 每次操作过程中,均应做阴性对照,以检查无菌操作的可靠性. 6.11 吸取菌液时,必须用吸耳球吸取,切勿直接用口接触吸管. 6.12 接种针每次使用前后,必须通过火焰灼烧灭菌,待冷却后,方可接种培养物. 6.13 带有菌液的吸管,试管,培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒,24小时后取出冲洗. 6.14 如有菌液洒在桌上或地上,应立即用5%石碳酸溶液或3％的来苏尔倾覆在被污染处至少30分钟,再做处理.工作衣帽等受到菌液污染时,应立即脱去,高压蒸汽灭菌后洗涤. 6.15 凡带有活菌的物品,必须经消毒后,才能在水龙头下冲洗,严禁污染下水道. 6.16无菌室应每月检查菌落数.在超净工作台开启的状态下,取内径90mm的无菌培养皿若干,无菌操作分别注入融化并冷却至约45℃的营养琼脂培养基约15ml,放至凝固后,倒置于30～35℃培养箱培养48小时,证明无菌后,取平板3～5个,分别放置工作位置的左中右等处,开盖暴露30分钟后,倒置于30～35℃培养箱培养48小时,取出检查.100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落,10000级洁净室平均不得超过3个菌落.如超过限度,应对无菌室进行彻底消毒,直至重复检查合乎要求为止.7、参照《药品卫生检验方法》《中国药品检验标准操作规范》中(无菌检查法)章节 中华人民共和国医药行业标准YY/T0188.6-1995《药品检验操作规程》8、分发部门:质量管理部

如题！我想测定菌株对六价铬的还原能力如何？需要测定菌液中六价铬含量的变化，可以按照哪个标准来测定呢？用DPC方法测定中的重铬酸钾一定要用优级纯吗，分析纯可以吗？期待大家的答复，谢谢！

致病菌增菌液在划完选择性平板后可以灭菌处理掉了吗，还是要全部实验结束再处理。如果不能处理，是要放在培养箱继续培养还是可以放4℃冰箱，培养箱培养着很臭呢

稀释好的菌液是否培养两天计数后，再用来实验？10版药典说菌液制备后在两个小时内使用，大家是怎样做的呢？

请教一下各位：白色念球菌培养用什么增菌液合适？非常感谢～

麦氏浊度的菌液如何配制?

1.接种细菌时必须穿工作服、戴工作帽。 2.进行接种食品样品时，必须穿专用的工作服、帽及拖鞋，应放在无菌室缓冲间，工作前经紫外线消毒后使用。 3.接种食品样品时，应在进无菌室前用肥皂洗手，然后用75％酒精棉球将手擦干净。 4.进行接种所用的吸管，平皿及培养基等必须经消毒灭菌，打开包装未使用完的器皿，不能放置后再使用，金属用具应高压灭菌或用95%酒精点燃烧灼三次后使用。 5.从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖不得触及试管或平皿边。 6.接种样品、转种细菌必须在酒精灯前操作，接种细菌或样品时，吸管从包装中取出后及打开试管塞都要通过火焰消毒。 7.接种环和针在接种细菌前应经火焰烧灼全部金属丝，必要时还要烧到环和针与杆的连接处，接种结核菌和烈性菌的接种环应在沸水中煮沸5min，再经火焰烧灼。 8.吸管吸取菌液或样品时，应用相应的橡皮头吸取，不得直接用口吸。

[font=SimSun, STSong, &]请问铜绿假单胞菌菌液如何保存好？买什么类型的保存箱好？[/font]

有没有做过芽孢菌液中乳酸的？方法标准号是多少？谢谢！

35、如何进行容器密封性验证？ 答：容器密封性验证常采用物理和微生物学检测手段。物理检测有许多优点，如灵敏度较高、使用方便、检测迅速及低成本等。在产品有效期内，均可使用物理检测方法来确定包装完整性是否符合规定要求。进行包装完整性检测的一个重要原因是确保无菌产品始终保持无菌状态。因此，在产品包装的研发阶段，应考虑采用微生物侵入试验，或采用经验证过的并且比微生物检测更为有效的物理试验方法，来检测产品包装的完整性。但是，对效期内产品的稳定性试验来说，因进行微生物侵入试验较为困难，故建议采用物理检测方法。微生物侵入试验是对最终灭菌容器／密封系统完好性的挑战性试验。在验证试验中，取输液瓶或西林瓶(小瓶)，灌装入培养基，在正常生产线上压塞、压盖灭菌。然后，将容器密封面浸入高浓度运动性菌液中，取出、培养并检查是否有微生物侵入，确认容器密封系统的完好性。同时，需作阳性对照试验，确认培养基的促菌生长能力。36、在采用微生物浸泡法进行容器密封性验证时，为什么要事先去除铝盖，请问除去铝盖后，是不是只剩胶塞，那么在试验过程中会不会发生药液泄露而影响验证结果？答：去除铝盖是为了造成一个更为严格的条件，讲课中以冻干粉针剂为例，通常容器内有较高的真空，不会造成漏液，试验者可根据自己产品的特点判断去除铝盖是否适用。37、密封性验证中，如铝桶的验证，用培养基验证无法观察结果，是否有其他方法？答：对于无菌原料的容器，建议尝试物理的方法，如盐水渗入法。

检测沙门氏菌时用到的TTB增菌液怎么配置啊？每只样只用10ml，而且要现用现配，10ml的TTB加碘液和0.5%的煌绿水溶液怎么加啊？

无菌均质器，又称拍打式匀浆机，拍打式匀浆器。主要用于生物技术领域的组织分散、医药领域的样品准备、食品工业的酶处理以及在制药工业、化妆品工业、油漆工业和石油化工等方面。 　　该装置设有全开启式玻璃透明窗口门，易于清洗，玻璃透明窗口易于观察。采用大屏幕液晶显示，工作时间和均质速度智能可调，拍击器也可任意调整前后距离。可有效的分离实验样品表面和被包含在内的微生物均一样品，样品使用一次性无菌均质滤袋隔离操作，保证卫生和安全，不与仪器接触，无样品泄露而不需进行系统清洗，具有方便快速、结果准确、均质柔和、样品无污染、无损伤、不升温、不需灭菌处理，不需洗刷器皿的特点，重复性好的要求。本产品也适合肿瘤组织(如肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌)的匀浆，既可得到大量的单细胞。必要时，可通过延长均质时间，对组织细胞实现柔软的破碎。 　　BILON品牌无菌均质器是使从固体样品中提取细菌的过程变得非常简单，只需将样品和稀释液加入到无菌的样品袋中，然后将样品袋放入拍击式均质器中即可完成样品的处理。有效地分离被包含在固体样品内部和表面的微生物均一样品，确保无菌袋中混合全部的样品。处理后的样品溶液可以直接进行取样和分析，没有样品的变化和交叉污染的危险。应用领域：食品微生物分析;动物组织、生物样品、化妆品的均质处理;鱼、肉、蔬菜、水果、饼干;药品的微生物分析等。 　　在使用我公司的无菌均质器时，有八个需要注意的地方，正确对待这些问题，可以使均质器更好的为您服务。 　　1) 电源插头必须插紧到位，出现松动可能影响电脑控制器造成死机，如出现死机现象，请关闭后侧电源开关，关机3分钟后重新启动。 　　2) 在锤击板工作时请不要随意打开均质器门，以免样品液溢出。应按“开/停”建，设备自动停止运行。当把门关上后，再按“开/停”建，设备自动完成余下工作。切勿颠倒操作。 　　3) 仪器长期不使用应切断电源，拨去插头。防止无菌均质器内部电子元器件老化。 　　4) 均质器门底部为防止均质袋意外破裂，便于清洗溢出物，底部设计为空的，可放置接水盘，所以仪器运转时请勿用手从底部伸入，以免纹伤手指。均质器工作时最好不要打开均质器门，造成不必要的损失。 　　5) 机器在运转前，请仔细查看均质箱内有无异物，以免工作时发生故障和损伤均质袋。 　　6) 硬块，骨状，冰状物等坚硬锐利的物质不宜使用，以免破坏均质袋。 　　7) 仪器和均质袋的存放都应避免阳光的直接照射，特别是均质袋应存放在无阳光或避免紫外线照射的地方，以免老化。 　　8) 量少时，需加快速度时，均质物纤维比较坚韧时，则可用后面旋钮调节拍击板与可视窗的间距，来达到更好的均质效果。注意调整的距离，避免发生空击等损伤无菌均质器的情况发生。 　　无菌均质器正确使用步骤为： 　　1、把需处理的试品放入无菌均质袋中。 　　2、打开均质器门(可全开启)，将无菌袋开口在关闭均质器门时夹住。 　　3、设定使用程序(如拍击速度、拍击时间等)，进行拍击均质工作。 　　4、实验完毕后，打开均质器门，取出样品。 　　无菌均质器的使用如果做到以上几点，可以极大延长其使用寿命和使用效果。让我们正确使用无菌均质器从现在开始!

微生物接种和菌种保藏注意事项下列各方法可根据实验室具体条件与需要选做。 (一) 液体石蜡保藏法 1.液体石蜡灭菌 在250mL三角烧瓶中装入100mL液体石蜡，塞上棉塞，并用牛皮纸包扎，12l℃湿热灭菌30min，然后于40℃温箱中放置l4d(或置于105～110℃烘箱中lh)，以除去石蜡中的水分，备用。 2.接种培养 同斜面传代保藏法。 3.加液体石蜡 用无菌滴管吸取液体石蜡以无菌操作加到已长好的菌种斜面上，加入量以高出斜面顶端约1cm为宜。 4.保藏 棉塞外包牛皮纸，将试管直立放置于4℃冰箱中保存。利用这种保藏方法，霉菌、放线菌、有芽孢细菌可保藏2年左右，酵母菌可保藏1～2年，一般无芽孢细菌也可保藏1年左右。 5.恢复培养 用接种环从液体石蜡下挑取少量菌种，在试管壁上轻靠几下，尽量使油滴净，再接种于新鲜培养基中培养。由于菌体表面粘有液体石蜡，生长较慢且有粘性，故一般须转接2次才能获得良好菌种。 (二) 冷冻干燥保藏法 1.准备安瓿管 选用内径5mm，长10.5cm的硬质玻璃试管，用10%HCl浸泡8～10h后用自来水冲洗多次，最后用去离子水洗1～2次，烘干，将印有菌名和接种日期的标签放人安瓿管内，有字的一面朝向管壁。管口加棉塞，121℃灭菌30min。 2.制备脱脂牛奶 将脱脂奶粉配成20%乳液，然后分装，121℃灭菌30min，并作无菌试验。 3.准备菌种 选用无污染的纯菌种，培养时间，一般细菌为24～48h，酵母菌为3d，放线菌与丝状真菌7～10d。 4.制备菌液及分装 吸取3mL无菌牛奶直接加入斜面菌种管中，用接种环轻轻搅动菌落，再用手摇动试管，制成均匀的细胞或孢子悬液。用无菌长滴管将菌液分装于安瓿管底部，每管装0.2mL。 5.预冻 将安瓿管外的棉花剪去并将棉塞向里推至离管口约15mm处(图24—2A)，再通过乳胶管把安瓶管连接于总管的侧管上，总管则通过厚壁橡皮管及三通短管与真空表及干燥瓶、真空泵相连接(图24—1)，并将所有安瓶管浸入装有干冰和95%乙醇的预冷槽中，(此时槽内温度可达-40～-50℃)，只需冷冻1h左右，即可使悬液冻结成固体。 6.真空干燥 完成预冻后，升高总管使安瓿管仅底部与冰面接触，(此处温度约-10℃)，以保持安韶管内的悬液仍呈固体状态。开启真空泵后，应在5～15min内使真空度达66.7Pa以下，使被冻结的悬液开始升华，当真空度达到26.7～13.3Pa时，冻结样品逐渐被干燥成白色片状，此时使安瓿管脱离冰浴，在室温下(25~30℃)继续干燥(管内温度不超过30C)，升温可加速样品中残余水分的蒸发。总干燥时间应根据安瓿管的数量，悬浮液装量及保持剂性质来定，一般3~4h即可。 7.封口样品 干燥后继续抽真空达1.33Pa时，在安瓿管棉塞的稍下部位用酒精喷灯火焰灼烧，拉成细颈并熔封(图24-2B、C)，然后置4℃冰箱内保藏。 8.恢复培养 用75%乙醇消毒安瓿管外壁后，在火焰上烧热安瓿管上部，然后将无菌水滴在烧热处，使管壁出现裂缝，放置片刻，让空气从裂缝中缓慢进入管内后，将裂口端敲断，这样可防止再用无菌的长颈滴管吸取菌液至合适培养基中，放置在最适温度下培养。 冷冻干燥保藏法综合利用了各种有利于菌种保藏的因素(低温、干燥和缺氧等)，是目前最有效的菌种保藏方法之一。保存时间可长达10年以上。

1、防止培养基成分挥发氰化钾实验：氰化钾是剧毒药物，使用时需加小心以免中毒。因此在做氰化钾实验时，需在实验管和对照管同时滴加液体石蜡，滴加目的其一是为防止氰化钾挥发，以免造成操作者中毒；第二是防止氰化钾挥发后，致使药物浓度降低，细菌生长，出现假阳性。2、创造厌氧环境（1）氨基酸脱羧酶实验：进行氨基酸脱羧酶实验时，在实验管和氨基酸对照管中滴加菌液后需分别向各管中滴加2-3滴液体石蜡，进行液封。原因如下：某些菌在特定氨基酸存在情况下，诱导产生相应氨基酸脱羧酶，使氨基酸脱羧，产生一种碱性物质—尸胺，而该物质在厌氧条件下可稳定存在，使得培养基环境pH升高，克服培养基本身的酸性环境以及葡萄糖代谢产生的酸，从而使培养基呈紫色；而对照管中不含氨基酸，菌株利用葡萄糖产酸，培养基环境pH下降，使得培养基变黄。滴加液体石蜡主要目的是创造厌氧环境，并防止酸挥发。（2）葡萄糖利用、酚红葡萄糖利用GB4789.14-2003中蜡样芽孢杆菌葡萄糖利用和SN0176-92中蜡样芽孢杆菌酚红葡萄糖利用实验中，为了测定厌氧环境下蜡样芽孢杆菌可以利用葡萄糖产酸，因此为创造厌氧环境，须在接菌后滴加液体石蜡进行液封。（3）O/F实验SN 0173-1992 中副溶血性弧菌检测，对葡萄糖的发酵型和氧化型的代谢作用，在实验时向其中一只管滴加石蜡隔绝氧气，另一只不滴加；发酵型菌株在两只管中均发酵产酸；而氧化型只在未滴加石蜡的管中发酵产酸，而在滴加石蜡的管中不生长或轻度生长，从而区分出发酵型和氧化型。

1、洁净室（无菌室）要符合规范要求：无菌室应采光 良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。面积一般不超过10m2，不小于5m2；高度不超过2.4m。由1—2个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间和缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。操作间内不应安装下水道。 无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18—26℃，相对湿度45%—65%。缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板 内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2—2.5w/m3），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40uw/m2。不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。 2、建立使用登记制度在登记册中可设置以下项目内容：如使用日期、时间、使用人、设备运行状况、温度、湿度、洁净度状态（沉降菌数、浮游菌数、尘埃粒子数 ）、报修原因、报修结果、清洁工作（台面、地面、墙面、天花板、传递窗、门把手）、消毒液名称等。3、建立使用标准操作规范（SOP）并严格管理:SOP内容至少要有以下几点： （1）规定净化系统使运转时间要求每次实验前应开启净化系统使运转至少1h以上，同时开启净化台和紫外灯。 （2）物品进入洁净室（无菌室）基本要求：凡进入洁净室（无菌室）的物 品必须先在第一缓冲间内对外部表面用消毒剂消毒灭菌，再经物流缓冲间、传递窗1h以上，及无菌空气吹干后送入无菌室。注意带纤维、易发尘物品不得带进净化实验室。无菌室内固定物品不得任意搬出。 （3）人员进入洁净室（无菌室）要求：实验人员进入洁净室（无菌室）不得化妆、带手表、戒指等首饰；不得吃东西、嚼口香糖。应清洁手后进入第一缓冲间更衣，同时换上消毒隔离拖鞋，脱去外衣，用消毒液消毒双手后戴上无菌手套，换上无菌连衣帽（不得让头发、衣等暴露在外面），戴上无菌口罩。然后，换或是再戴上第二副无菌手套，在进入第二缓冲间时换第二双消毒隔离拖鞋。再经风淋室30s风淋后进入无菌室。 （4）温湿度观察要求：观察温度计、湿度计上显示的温湿度是否在规定的范围内，并作为实验原始数据记录在案。如发现问题应及时寻找原因，及时报修和及时报告实验室主管，并将报修原因和结果记录归档。 （5）沉降菌落计数与浮游菌测定要求：在每次实验同时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。每周1次，或在无菌检查等必要时，在每次实验同时对操作室和净化台进行浮游菌测定，将结果记录在使用登记本上，并作为实验环境原始数据记录在实验报告上。 （6）消毒要求：无菌室每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液（常用消毒剂的品种有：5—20倍稀释的碘伏水溶液、0.1%新洁尔灭溶液、1：50的84消毒液、75%乙醇溶液、3%碘酒溶液、5%石炭酸（来苏儿）消毒溶液、2%戊二醛水溶液、尼泊金乙醇消毒液（处方：对羟基苯甲酸甲酯21.5g；对羟基苯甲酸丙酯8.6g，75%乙醇10ml）等，所用的消毒剂品种与使用要进行有效性验证方可使用，并定期更换消毒剂的品种）擦拭操作台及可能污染的死角，方法是用无菌纱布浸渍消毒溶液清洁超净台的整个内表面、顶面、及无菌室、人流、物流、缓冲间的地板、传递窗、门把手。清洁消毒程序应从内向外，从高洁净区到低洁净区。逐步向外退出洁净区域。然后开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1—2h，以杀灭存留微生物。在每次操作完毕，同样用上述消毒溶液擦拭工作台面，除去室内湿气，用紫外灯杀菌30min。 （7）其他要求：如遇停电，应立即停止实验，离开无菌室。关闭所有电闸。重新进入无菌室前至少开启机房运转1h以上。4、洁净度检查的要求与方法：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数，以此来判断无菌室是否达到规定的洁净度，常有沉降菌和浮游菌测定方法。 （1）沉降菌检测方法及标准：以无菌方式将3个营养琼脂平板带入无菌操作室，在操作区台面左、中、右各放1个；打开平板盖，在空气 中暴露30min后将平板盖好，置32.5℃士2.5℃培养48h，取出检查，3个平板上生长的菌落数平均小于1个。 （2）浮游菌检测方法及标准：用专门的采样器，宜采用撞击法机制的采样器，一般采用狭缝式或离心式采样器，并配有流量计和定时器，严格按仪器说明书的要求操作并定时校检，采样器和培养皿进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，使用的培养基为营养琼脂培养基或药典认可的其他培养基。使用时，先开动真空泵抽气，时间不少于5min，调节流量、转盘、转速 。关闭真空泵，放入培养皿，盖上采样器盖子后调节缝隙高度。置采样口采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。全部采样结束后，将培养皿置32.5℃士2.5培养48h，取出检查，浮游菌落数平均不得超过5个/m3。 每批培养基应选定3只培养皿做对照培养。 无菌操作台面或超净工作台还应定期检测其悬浮粒子，应达到100级（一般用尘埃粒子计数仪）检测，并根据无菌状况必要时置换过滤器。5、定期进行洁净度再验证：定期（每季度、半年、1年）或当洁净室设施发生重大改变时，要按国家标准GB/T16292-16294-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》进行洁净度再验证，以确保洁净度符合规定，保存验证原始记录，定期归档保存，并将验证结果记录在无菌室使用登记册上，作为实验环境原始依据及趋势分析资料。并定期对洁净室的环境检测数据进行趋势分析和评估，根据评估结果，了解洁净室设施环境质量的稳定状况及变化趋势，决定是否有必要修订相应的警戒和纠偏限度。6、定期更换新的紫外灯管、更换净化系统的初效、中效、高效头：定期（至少每年1次）更换新的紫外灯管，以确保紫外灯管灭菌持续有效。并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。至少2年1次，或按洁净度验证实际情况，定期更换初效、中效、高效头。以确保净化系统的功能持续有效，并同时在使用登记本上做好更换记录，定期归档保存。7、使用过程中应尽可能减少人员的走动或活动：平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，同向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。8、洁净度不符合规定时立即停止使用：发现洁净度不符合规定时，应立即停止使用，寻找原因，彻底清洁、必须经洁净度再验证符合规定后，才再使用，并同时将情况记录在无菌室使用登记册上，定期归档保存。9、对进入的外来人员或维修人员进行指导和监督：非微生物室检验人员不得进入洁净室（无菌室），对必须进入的外来人员或维修人员要进行指导和监督。10、洁净室（无菌室）的日常管理：建立安全卫生值日制度，一旦发现通风系统、墙壁、天花板、地面、门窗及公用介质系统等设施有损坏现象，要及时报告并采取相应的修复措施，并保存记录及时归档。从洁净室（无菌室）环境中检测到的微生物应能鉴别至属或种，保留鉴别实验原始记录及菌种，作为无菌生产、无菌检查洁净室环境质量、消毒剂有效性评估及污染源调查的依据，并且也是为无菌检查阳性结果的调查提供第一手资料。

药典中非无菌产品微生物限度:微生物计数法中的培养基适用性检查1，液体培养基要怎么与对照培养基比较生长情况2，例要对胰酪大豆胨琼脂培养基进行适用性检查，是否要取表格中左列5个菌种均进行接种培养

微生物实验室,必须达到一定程度的无菌状态,避免微生物污染。假如在一个不洁的实验室或者早先打翻过样品的地方做微生物实验,引入新的微生物污染样品的几率是很大的。微生物的实验可以分为两大部分：前期准备和样品检验。事实上，保持整个实验室清洁是非常重要的，这样就不用在灭菌前担心太多了，然而，灭菌后必须保证样品或者培养基免受污染。其实，可以把灭菌想像成”一扇门”，在培养基中或者一些设备比如吸管的微生物都在灭菌过程中被杀死了，没有微生物困扰实验了。必须保证灭菌后的环境(门后的部分)的洁净，杜绝灭菌后的培养基和设备受到污染。无菌的重要性1. 无菌技术 – 高压湿热灭菌要点描述原理在压力下产生的湿热的蒸汽杀死微生物的营养体和孢子。密封灭菌锅必须密闭以阻隔外部空气， 避免空气的存在会影响压力并降低灭菌锅里面的温度。灭菌压力在灭菌锅内， 合适的灭菌温度是通过压力达到的， 压力对于灭菌没有效用但是使蒸汽温度上升。 对于标准操作来说，15lbs/inch2时的121℃并赶走所有空气可以达到灭菌的效果。灭菌时间当到达一定的温度和压力时， 需要保持一定的时间来达到效果，为了杀灭微生物，121℃必须保持至少15分钟。培养基灭菌大部分情况下， 实验室配置培养基后应灭菌，灭菌时应根据供应商指导， 使用合适的温度时间； 有些培养基不适合灭菌的。器皿灭菌当灭菌器皿时，需要考虑使用数量，比如，一天用10根吸管，在灭菌时， 一般就可以以10根为一包， 这样可以减低器皿在使用过程中遭受微生物的污染的可能性。灭菌条在灭菌过程中， 可以用灭菌条来监控效果， 灭菌条在灭菌前是有颜色的，灭菌后会变成黑色。重新灭菌假如一次灭菌无效， 可以重新进行灭菌过程， 但是，培养基是不可以进行第二次灭菌的， 应抛弃。储存灭菌完成后， 培养基和器皿应妥善储存。 一般来说， 培养基应存放于避光的洁净空间，同时应参照供应商的指示。2.无菌技术 – 过滤 (Filtration)要点描述简述物理分离方法， 使用高效过滤将微生物从液体培养基分离。由于不需要加热和冷却过程，过滤比高温湿热灭菌省时间。过滤头0.2微米的过滤头可以分离所有的细菌营养体, 把它安装在针筒末端。3.无菌过程注意点要点描述综述一旦培养基或者器皿经过灭菌过程, 这种灭菌状态应保持直到实验结束。区域最好能把培养基准备区域(门外)和实验区域(门内)之间应该设有缓冲间。工作台面工作前必须消毒, 可以用70%的酒精, 也可以用含氯的消毒剂。消毒时间不管使用何种消毒剂， 需要提供充分的消毒时间来杀灭微生物，一般5-10分钟， 可以用纸巾擦干表面。洁净台必须有2个光源：普通照明用和杀菌紫外光。紫外灯用于保持工作台面免于微生物污染， 在使用前仍然需要使用消毒剂清洁。摆放应该有好习惯把工作桌面的物品摆放好,，把移动放到最低限度， 避免带来污染。镊子如果使用薄膜过滤法， 需要准备一个小烧杯并有少量酒精， 镊子不用时就放在杯子里。培养基培养基使用前， 应该有相关日期， 比如配置日期， 或者实验室收到日期(直接使用的培养基)。假如没有所需日期, 这个培养基不能使用。实验服穿着干净的实验服， 袖子应卷起至肘部以避免碰到培养基或样品带来污染，当然。做实验前要洗手。4. 实验的无菌技术注意点采样个人酒精灯样品应无菌采得，使用无菌采样袋或者采样瓶，采样员应戴防护手套, 在采样前烧采样口，样品容器应紧闭并安全储存。万一培养基或者样品溅到实验服上应在做完一个实验后换上干净的。咳嗽或者鼻塞可能会带来微生物并影响实验，应戴好防护手套面罩 。使用本森灯或者酒精灯, 在实验前点燃。火焰在实验区域产生一个防层， 可以防止那些悬浮在空气中的微生物掉落在工作台面上或者培养基上。开瓶瓶口培养皿开瓶前， 应用清洁剂的纸巾清洁瓶盖和附近区域，除去盖子上可能留存的微生物。盖子打开后，玻璃瓶口应进行灭菌，可以在酒精灯上方旋转瓶口和螺纹， 一般2-3秒。当打开培养皿时, 不能完全移除盖子, 而应该保持在培养皿的上侧, 从而能够倒入培养基或者样品, 这样可以减少空气灰尘或者微生物的污染。倒完培养基或者样品后, 瓶口重新过火, 盖盖子, 用消毒剂清洁。滤膜镊子打开薄膜装， 绝对不能碰到薄膜!用镊子把薄膜移除包装并放到过滤头上， 过滤的漏斗不能完全移开，只需移开一点点放入滤膜即可，过滤完后，用镊子把滤膜转到培养皿中， 放置于中间。用镊子转移滤膜过火时，拿住镊子的尾部， 放到火焰上， 保持一下能够到火好， 时间太长会在尖部结碳，拿镊子的时候， 尾部向上直至烧完。实验结束打扫废弃物实验结束后，培养皿放入培养箱；剩余的培养基可以放回储存区域， 盖子必须盖紧。抛弃废弃物，比如样品袋 可回用的物品放在远离工作区域的地方以回收, 清洗, 灭菌。用含有消毒剂的纸巾清洁工作台面。在实验过程中暴露于微生物的物品应作为有害废弃物这些废弃物可能含有微生物并致病 假如含有致病菌可能会产生公共卫生的事件.最好废弃物能够进行湿热灭菌从微生物的实验室布局角度一个设计合理的实验室能提供一个合格的环境以支持实验能够安全有效地进行。 首先，需要为实验室选择一个合适的物理位置：远离其他操作区域，比如，生产或者储运；没有从其他区域进入实验室的直接入口；实验室必须是微生物实验专用；应有专门微生物检测无菌间，并通过缓冲间与准备间等进行区隔。通风和气流安保工作区域微生物实验室应该有单独的通风系统, 与其他操作区域的空气供给分开；空调系统的排气必须直接排出实验室, 空调系统应定时清洗, 并关注空气过滤器的清洁。实验室应该是限制进入的, 可以是卡片控制或者其他方式, 只有那些被允许进入实验室的人员才能进入。实验室人员应该有充足的工作区域, 从GLP标准来说, 每人应有20平方米的区域. 充足的工作区域可以避免工作中人员的碰撞, 也避免了交叉污染。易清洁照明反馈实验室的墙面, 屋顶和门都应该是平滑的, 光洁易于清洗消毒的；墙的接缝包括强和墙之间, 强和地面之间应该是弧形的；任何地方都应该不能聚集灰尘, 例如窗台或者窗帘；柜子应该是可移动的或者是不着地的以方便清扫。实验室应有充足的照明, 包括不间断电源或者备用发电机.反馈遵照GLP相关的安全规则1. GLP要点 – 工作区域要点描述总体安排实验前应做好仪器, 试剂和培养基的所有准备工作, 这样可以合理利用时间并得到稳定的实验结果。桌面安放多余的培养皿, 烧瓶或者滤纸可能会干扰实验并带来潜在的溅出, 打碎或者交叉污染。实验前消毒在配制培养基或者开始试验前, 应该清洁并消毒工作桌面。 可以采用70%的酒精溶液, 含氯水的溶液, 或者其他消毒剂。清洁后, 应等待几分钟以使有充分的时间杀灭微生物。试验后消毒实验结束后, 彻底清洁工作区域, 仍然使用70%酒精溶液或者其他消毒剂, 保持一段时间, 然后擦干。有害废弃物的处置必须有效管理微生物的有毒废弃物, 任何和微生物培养或者培养基相关的物品都应被看作有害物质 因为他们可能含有致病菌, 需要小心处理。废弃物的灭菌湿热灭菌是最简单也是最有效的处理污染物质和有害物质的方法。 用过的培养皿应放在灭菌袋中。 灭菌后, 可以当作一般废弃物处理。重复使用器皿的灭菌当需要对小件物品(比如移液管)灭菌时, 可以根据实际用量分组包装。 湿热灭菌后, 袋包装冷却并保存。避免浪费合理安排是非常重要的 实验室工作需要精准, 但是有时候我们也需要快速工作, 因为花非常多时间会延长设备, 培养基, 或者样品暴露在环境中的时间。 把需要用的物品放在手边可以用的地方可以节约时间并提高工作的有效性。2. GLP要点 – 洁净工作台简介使用监控洁净工作台提供了控制来自环境的污染并提供工作区域的洁净空气. 洁净空气吹向工作区域, 同时, 可以避免外部空气进入工作区域使用时, 紫外光线(或者紫外灯)应关闭, 但是使用后应打开. 如果紫外灯没有打开工作台没有开启, 工作台不能开始使用 必须清洁工作台, 开启电源并打开紫外灯, 保持30分钟.洁净工作台需要进行日常的确认, 一般有第三方公司进行一个有效的实验室应该是一个安全的实验室。假如疏忽安全的话，许多每天使用的培养基或者设备会产生危害。减少这些危害带来的风险不仅仅保护了工作场所，更重要的是，保护了自身免于危险。利用常识并遵照GLP相关的安全规则,我们就能把由于微生物相关的行为带来的潜在危害降低到最小。安全用品移动安全用品包含口罩, 手套和眼部防护。口罩防止培养基和样品受到污染, 可能来自于咳嗽或者鼻涕 根据当地的要求和习惯, 每个实验室会有不同的要求。戴手套是为了防止培养基或者其他刺激性物质接触皮肤 在从湿热灭菌锅内取出容器或则器皿时, 需要戴防热手套。在配置培养基和实验中佩戴防护眼镜是一个很好的习惯, 能够购买带有屈光度的防护眼镜为佳。当移动培养基或者样品时, 应小心注意以避免溅出或者泼出；突然的移动会产生安全危害或者导致实验无效；不要使用夸张的动作或者行为同时, 不要把任何东西, 比如吸管, 放到嘴里。明火湿热灭菌锅实验中需要用到酒精灯或其他明火, 但是假如使用不当会带来比较高的安全危险；确保酒精灯不用时完全关闭, 当有阀门时经常检查垫圈是否有裂痕或者泄露；操作酒精灯时, 应确保火焰不会接触衣物或者皮肤. 可燃物品, 比如记录本, 应远离火焰以避免意外点燃；同时, 要注意可燃液体的容器. 每次使用后应盖好盖子并远离酒精灯火焰；使用火焰进行灭菌工作时, 可使用镊子. 把镊子放在含有95%酒精的烧杯中, 使用时, 把镊子在火焰上灼烧1-2秒, 移开镊子并等待火焰熄灭；拿着镊子是尖端应向下, 使热的酒精不会流到手上。湿热灭菌锅使用高压下产生的蒸汽, 温度可达1210C, 杀死了微生物, 同样可以带来人类组织的灼伤, 所以必须特别小心地操作 如此高的温度以及蒸汽能带来极大的潜在伤害, 即使是残留的蒸汽也能带来很大的危险. 打开灭菌锅时需要特别小心, 站在边上避免面对热量和蒸汽, 缓慢的打开门, 同时, 戴好防热手套.把需要灭菌的培养基和器皿平均放置在托盘上, 大的物品放在边上, 确保物品不会相互碰撞. 这样可以是热量均匀扩散并平衡整个托盘洁净台样品操作在洁净台工作时必须关闭紫外灯. 紫外光线是危险的；不要把手或者手指放在紫外灯下, 以免灼伤皮肤；不要直接看紫外光线以免损伤眼睛。培养基和样品: 用火焰灼烧瓶口时, 停留4-5秒, 旋转使整个表面都能被灼烧, 不要停留太久, 不要溅出样品或者培养基；假如样品是瓶装的, 不要直接灼烧以免爆开. 可以取2个烧杯, 倒入70%酒精, 把瓶子倒置放入一个烧杯中, 使盖子和瓶颈的2.5厘米处能浸没在酒精中, 拿出瓶子用干净的布擦干 同理, 放入第二个烧杯, 拿出瓶子直立待酒精自然蒸发；开瓶时应特别小心不能污染样品, 可以用消毒纸巾开旋盖的瓶子 用浸没在95%酒精并灼烧的开瓶器打开压盖瓶；打开瓶子后, 使用相同的方法灼烧瓶口, 并确保用于消毒的酒精完全挥发；拉罐可以使用相同的程序或者用含70%酒精的棉球擦拭顶部, 假如罐子必须用开罐器, 这个开罐器操作同开瓶器；无菌包装的产品用含70%酒精的棉球擦拭。微生物防护用具1.一级防护（设备）①移液辅助器，如[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]②生物安全柜③一次性塑料接种环、电热接种环④螺口盖试管及瓶子⑤高压灭菌器⑥一次性塑料移液管2.二级防护（人员）①工作服、防护服②手套（乳胶手套等）③安全眼镜、面罩或其他防护用品检测中常见问题解答细菌和霉菌培养箱必须分开放置吗？在CNAS-CL01-A001-2018《检测和校准实验室能力认可准则在微生物检测领域的应用说明》有此规定：6.3.4 b)检测样品中的霉菌时，要有适当的措施控制孢子在空气中的扩散。但未见到明确规定细菌培养箱和霉菌培养箱不能在同一房间的规定。一般实验室都有三种培养箱，结构设计上分为两种，一种是内部循环风温度平衡的，第二种是内外热空气流动自动平衡型的，另外第三种是热辐射温度平衡型的。有网友认为，第一种和第三种应该可以放在一个实验室，保持一定距离即可。第二种培养箱应该不能放在一个实验室。据说，CNAS现场评审，会提出细菌和霉菌培养箱分开放置要求。

无菌操作技术不仅在微生物学研究和应用上起着举足轻重的作用，在许多生物技术中也被广泛应用，例如转基因技术、单克隆抗体技术等。 无菌室，微生物实验室内专辟的一个小房间，室外设一个缓冲间，缓冲间的门和无菌室的门不要朝向同一方向，以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭，无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢、便于清洗，室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。工作台的台面应该处于水平状态，无菌室和缓冲间都装有紫外线灯（距离工作台面1米），工作人员进入无菌室应穿戴灭过菌的服装、帽子。 超净台，主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃，通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台（正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去；正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种、细胞株等）。 微生物的培养 在微生物的培养过程中，要保持培养物纯净性；培养微生物的要领，是为所需要的微生物提供良好的生存环境，同时阻止或抑制其他微生物的生长。 （一）培养基1.认识培养基的基本组成成分，从生物体构成的基本元素这一角度理解培养基中为什么都需要具备这些基本成分。2.培养基的用途和种类：液体和固体两大类。3.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方；尽管培养基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和无机盐。4.培养基是否合格（无菌试验）：培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长（液体不变浑浊），说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。 （二）无菌技术 1. 无菌技术的概念无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。日常的生活环境中，每时每刻每处都存在着微生物，任何一个不经意的动作都可能将某种微生物引入到培养物中。在具备无菌环境和获得无菌材料后，还要始终保持无菌状态，才能对某种特定的已知微生物进行研究或利用它们的功能，否则外界的各种微生物很容易混入。外界不相干的微生物混入的现象，在微生物学叫做污染杂菌。防止污染是微生物学工作中十分关键的技术：彻底灭菌和防止污染是无菌技术的两个方面。此外，要有效避免操作者自身被微生物感染，还要防止所研究的微生物，特别是致病微生物或经过基因工程改造了的本来自然界不存在的微生物从我们的实验容器中逃逸到外界环境中去（生物安全）。无菌操作非常重要，无论是倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，只有熟练、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。 2. 消毒与灭菌的概念（1）培养细菌用的培养基与培养皿（需要灭菌）（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（需要灭菌）（3）实验操作者的双手（需要消毒）（4）接种环、针、涂布棒：灼烧灭菌（外焰）。 3.倒平板（1）灭菌后，培养基冷却到55 [font='宋