黄曲霉毒素荧光检测器

本文使用赛里安超高灵敏度荧光检测系统快速分析M族黄曲霉毒素，该方法配置合理、线性良好、分离效果好、灵敏度高，可以满足并优于国家标准GB5009.24-2016食品中黄曲霉毒素M族的测定要求。

黄曲霉毒素是已知的致癌性最强的真菌毒素， 包括黄曲霉毒素B1,B2,G1 和G2。黄曲霉毒素B1 认为是最具遗传毒性的真菌毒素，当奶牛摄取含有该毒素的食物时，会转化成黄曲霉毒素M1，虽然没有黄曲霉毒素B1的毒性大，但是在某种动物身上可以导致肝癌。牛奶最易受黄曲霉毒素污染，在放牧/ 喂养奶牛时，最容易吸收和浓缩该毒素。欧盟已经建立了M1 的应急控制限量，牛奶中限量为0.05ppb。用带有荧光检测器的HPLC，结合柱后衍生，分析黄曲霉毒素是通用的分析方法，B1，G1 和其他毒素一样，自身不可以放出荧光，但是通过特色的Kabra 池，通过电化学原理溴化这两种毒素，可以极大地增强他们在低浓度时的响应灵敏度，使用这种方法，通过HPLC 可以分析检测全脂或者1% 脂肪的牛奶，浓度在ppb/ppt 水平的全部B1,B2,G1,G2 和M1 黄曲霉毒素。使用免疫亲和固相萃取方法学，去制备处理和净化样品，过程比较简单。

黄曲霉毒素B1 是被任为最具致癌性/ 遗传毒性的,当被乳牛吞咽下后，黄曲霉毒素B1 会被转化成黄曲霉毒素M1，虽然该毒素没有B1 毒性强，但已经有事实表明在某些动物体内可以引起肝癌.奶牛吃草/ 进食期间黄曲霉毒素易被吸收和浓缩，因此牛奶是特别容易受到黄曲霉毒素污染的。出于这种考虑，M1 被认为是在牛奶中预期发现的主要的黄曲霉毒素，欧盟建立了牛奶中M1限度为0.05 ppb，比美国食药监局的0.5 ppb 的限制还要低。为了从分析层面上达到欧盟对M1 毒素非常低的控制限度，本文建立了使用简单的免疫亲和固相萃取法（SPE）对原料样品进行制样/ 净化，采用配有荧光检测器（FL）的高效液相色谱仪(HPLC)对原料乳中ppb/ppt 浓度水平的黄曲霉毒素M1进行分离和定量分析的方法。所得到的定量限可＜ 0.02ppb，并可获得良好的回收率。小于0.02ppb 的定量限不仅可用于常规M1 毒素分析，同时也小于原料乳中0.05ppb 的控制限，满足了欧盟检测要求。虽然在本文中关注的是黄曲霉毒素M1，但在标准品和加标回收实验中都有黄曲霉毒素B1，B2，G1 和G2，这也是为了确认M1 毒素和其他毒素色谱分离的效果。

试样中的黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2,用乙腈-水溶液或甲醇-水溶液的混合溶液提取,提取液经免疫亲和柱净化和富集,净化液浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离,柱后衍生,经荧光检测器检测,外标法定量。

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。 黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。 本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的粮谷中黄曲霉毒素B族检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B族的净化，并用液相荧光检测器进行检测，黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。

黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1简写为AFB1）是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物，含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮（香豆素）。黄曲霉毒素B1是已知的化学物质中致癌性最强的一种，对包括人和若干动物具有强烈的毒性，其毒性作用主要是对肝脏的损害。黄曲霉毒素B1存在于土壤，动植物各种坚果，特别是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、调味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素。一般以热带和亚热带等南方高温、高湿地区受污染最为严重，食品中黄曲霉毒素的检出率比较高。黄曲霉毒素耐热，280℃才可裂解，故一般烹调加工温度下难以破坏。国家质检总局规定黄曲霉毒素B1是大部分食品的必检项目之一。本文参考《GB 5009.22-2016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》提供的粮谷中黄曲霉毒素B族检测的方法，使用LabTech SPE1000全自动固相萃取系统进行玉米中黄曲霉毒素B族的净化，并用液相荧光检测器进行检测，黄曲霉毒素B1和B2的回收率分别为81.1%~85.1%和88.5%~93.2%，RSD 分别为2.7%和2.2%。通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法回收率及平行性良好，适合粮谷中黄曲霉毒素B族的检测。

玉米中黄曲霉毒素含量快速定量检测方案选用CSY-YG701黄曲霉毒素荧光定量检测仪（深圳市芬析仪器制造有限公司）、电子天平、离心机、粉粹机、涡旋振荡器检测设备，该方法操作简单，结果准确，整体测试时间20分钟左右。

此应用中，我们介绍了一种监测ppb 至ppt 水平B1、B2、G1 和G2 黄曲霉毒素的技术，该技术无需柱后衍生化。该方法使用简单的固相萃取（SPE）技术进行样品净化，然后使用亚3μ m 色谱柱分离结合荧光（FL）检测器进行UHPLC 分析。

方案一、液相色谱荧光检测法方法简介：黄曲霉毒素是由黄曲霉、寄生曲霉产生的一类高毒性代谢物，它们生长在土壤中并通过直接接触转移到天然产品中。自黄曲霉毒素被认定为是一种强致癌物质起，欧盟就规定了最大限量。本方法是采用Welchrom® 免疫亲和柱净化，HPLC-FLD检测黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，此法适用于谷物、调味品、坚果、茶叶、咖啡、药材等基质。方案二：ELISA检测试剂盒法试验原理本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被黄曲霉毒素抗原，样本中黄曲霉毒素和此抗原竞争黄曲霉毒素的抗体，酶标二抗催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的黄曲霉毒素成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中黄曲霉毒素的含量。

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本文介绍了使用 Agilent 1260 Infinity 四元高效液相色谱 - 荧光检测器系统，通过柱后光化学衍生的方式建立了酸枣仁和陈皮中黄曲霉毒素污染量的测定方法。该方法线性范围好、灵敏度高，对黄曲霉毒素 B1 的定量限可达 0.33 μg/kg，远低于 2015 年版《中国药典》关于中药材、饮片及制剂中黄曲霉毒素污染量的限定值。相比于柱后碘化学衍生，光化学衍生成本低廉、操作简单，更适合于中药材及相关产品中黄曲霉毒素的快速、有效测定。

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为了确保玉米的安全和品质，黄曲霉毒素检测仪被广泛应用于检测玉米中的黄曲霉毒素含量。

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随着对中药安全性控制的进一步加强，2015 年版《中国药典》中大幅增加了必须进行黄曲霉毒素污染量测定的中药品种。在众多黄曲霉毒素测定方法中，柱后光化学衍生 - 高效液相色谱 - 荧光检测法操作最简单、成本较低廉。本文参考 2015 年版《中国药典》，采用 Agilent 1260 Infinity 四元高效液相色谱 - 荧光检测器系统，配置柱后光化学衍生装置，建立了详细的黄曲霉毒素测定方法。结果显示该方法可完全满足《中国药典》中关于黄曲霉毒素的系统适用性要求，可用于中药材中黄曲霉毒素的快速、准确测定。该方法线性范围好、灵敏度高，对黄曲霉毒素 B1 的定量限可达 0.33 μ g/kg，远低于《中国药典》关于中药材、饮片及制剂中黄曲霉毒素污染量的限定值。

黄曲霉是一种常见霉菌，广泛存在于自然界，潮湿易发霉的植物和食品中都会存在。同时，一些发酵食品因为发酵过程本身就易产生黄曲霉毒素。但在一般状态下，黄曲霉本身毒性并不大，高温即可杀灭。但在黄曲霉达到一定浓度后，其产生的代谢物就会产生毒素，该毒素会破坏人体免疫系统， 引起肝脏病变甚至致癌。黄曲霉毒素是霉菌的二级代谢产物，1993年就被世界卫生组织的癌症研究机构划定为1类致癌物。其中黄曲霉毒素B1毒性和致癌性最强，而黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的代谢物。我国乳及乳制品中规定黄曲霉毒素M1限量为0.5μg/kg， 粮食中黄曲霉毒素B1为10μg/kg。 在邻国日本，黄曲霉素因具有致癌性以及强急性毒性，规定不得在食品中检出。过去，日本国内的黄曲霉素相关法规主要针对黄曲霉素B1，但从2011年10月开始总黄曲霉素（黄曲霉素B1，B2，G1，G2的总和）成为限制目标。为应对相应法规，岛津公司的日本同事们利用岛津的先进技术开发了多种黄曲霉素的检测方法。现介绍使用岛津荧光检测器“Prominence RF-20AXS” 高灵敏度检测黄曲霉素的分析方法，供从事食品检测的用户参考使用。

利用通微自主研发的激光诱导荧光检测器(Laser Induced Fluorescence Detector, LIF)和高效微流电动液相色谱系统(eHPLC)，建立的eHPLC -LIF 微分离平台，建立了一种新的黄曲霉毒素检测方法。本方法较传统方法具有更高灵敏度、更快速、样品消耗小等优势。

污染食品的真菌毒素 (霉菌毒素) 中，虽有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇 / 雪腐镰刀菌烯醇、棒曲霉毒素等多种，但黄曲霉毒素为肝脏毒素，被称为最强的天然致癌物质。自然界中可产生黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2 等，其中 B1 的致癌性强。现已知黄曲霉毒素 B1 在生物体内经代谢可部分转化为黄曲霉毒素 M1。因此，牛食用被黄曲霉毒素 B1 污染的饲料后，其乳汁中可能含有黄曲霉毒素 M1。 在美国和中国，已将乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定方法确立为国家标准。另一方面，日本也有将其列入官方分析方法的动向，日本的霉菌毒素测定方法评估委员会正在推动相关课题的研讨。 此次，我们参考中华人民共和国国家标准《GB 5413.37-2010 乳和乳制品中黄曲霉毒素 M1 的测定方法》的第二法 HPLC-荧光检测法，进行了黄曲霉毒素M1的测定。

针对近日来国家质检总局公布了的蒙牛乳业（眉山）和福建长富纯牛奶抽查的产品被检出黄曲霉毒素M1超标的问题。蒙牛乳业对此向民众进行了致歉申明，反应了民族企业的责任心和对食品安全的重视。对于黄曲霉毒素M1的限量，在之前的相关食品卫生标准中有明确规定，其中：鲜乳及其乳制品（折算为鲜乳汁）不得超过0.5ug/kg 婴儿代乳食品不得检出黄曲霉毒素b1。（GB 2761-2005国家标准—食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003国家标准—乳及乳制品中黄曲霉毒素M1限量！黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2)，还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4－羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。其危害巨大，人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比砒霜毒。目前来讲，Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商， 2010年泰乐祺科技投巨资成立了"检测应用实验室"，重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。近期应针对奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提供了两种检测方案，可以帮助企业轻松应对奶中黄曲霉毒素M1的限量检测。高效液相色谱法：符合国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定酶联免疫检测法：方法快，适合大批样品的筛选。检测限符合国家检测限量要求。 另外，我公司为应对饲料粮食中黄曲霉毒素检测，推出PriboFast® KRC 光化学柱后衍生池免费试用活动，详情请来电咨询！

黄曲霉毒素检测仪检测乳制品中黄曲霉毒素是否超标的操作步骤

黄曲霉毒素检测专业解决方案

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黄曲霉毒素经常出现在花生，花生制品，面籽制品，谷物和干辣椒等中，然而霉菌的生长并不一定意味着毒素的出现，因为黄曲霉毒素的产生往往需要一定的生长环境，例如湿度﹑温度和通风等。黄曲霉毒素中的B类霉素要在蓝色荧光下进行检测，而G类霉素要在绿色荧光下进行检测。数字下标显示了相对的色谱流动性。除了毒素经常在蔬菜中被发现（B1,B2,G1和G2），黄曲霉毒素M（牛奶中）也经常在吃了有毒饲料的奶牛的牛奶中被发现。M的高毒性代谢物就是B的4羟化物。 这里所提供的柱后方法最重要的特征就在于可以一次性地在同一荧光发射波长下对所有四种黄曲霉毒素进行检测。在此方法中我们推荐您使用带有1.4mL反应器的Pickering PCX5200。

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采用液相色谱碘柱后衍生法检测果仁类食品中的黄曲霉毒素，样品经过免疫亲和柱净化，进样液相色谱分析，经碘溶液柱后衍生后荧光检测器检测。方法简便快速，易操作。黄曲霉毒素B1、G1线性范围0.01~0.05 μg/mL，B2、G2线性范围0.003~0.015 μg/mL，线性相关系数R均在0.999以上，LOD和LOQ范围分别在0.060~0.159 ng/mL和0.200~0.530 ng/mL，回收率在89%～102%之间。