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各大虾,目前小生想买一台能做荧光,化学发光,还有光吸收的多功能酶标仪,这种仪器总体上有两大类:一是采用滤光片的,另一类是连续波长(采用单色仪),我现在拿不定,请各大虾帮我分析一下这两类的各自的优点.谢谢!
Spectramax M2酶标仪安装的6.5软件,怎么使用比色皿测全波长吸收值?设置怎么去除空白值?求大神支教。。
在用酶联免疫法测定抗原或抗体时,不论是定量试验还是定性试验都要求使用酶标仪进行测定。一般的酶标仪在测定中均有单波长和双波长的模式,并且采用的都是垂直光路。但在日常工作中有时会不太重视单波长和双波长的选择,对使用单、双波长给测定结果带来的较大差异也不很了解,并且实际工作中也出现了使用单波长检测导致抗HCV部分弱阳性的漏检。因此,本人就酶标仪在选择单、双波长使用方面谈谈个人的体会,供同道参考。一 材料和方法1.材料 由上海科华公司提供的乙肝表面抗原测定试剂盒;eppendorf 20-20ul的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url][/color][/url]。2.仪器 上海科华公司的ST-360酶标仪和BIO-RAD 550酶标仪。3.方法 底物液配制:底物液A、B各5ml混合,加入微量酶标记物,再加入5ml终止液,呈微黄色,混匀待用;利用上海科华公司提供的乙肝表面抗原试剂盒的酶标板,用94孔中准确加入150ul配制好的上述底物液,另2孔中加入150ul已终止的空白底物液作空白。在BIO-RAD 550酶标仪上分别进行450nm单波长和450nm及655nm(无630nm)的双波长检测,在ST-360上分别进行450nm单波长和450nm及630nm的双波长检测吸光度各两次。二 结果 1.分别对所得结果进行统计,发现单、双波长测定结果有较大的差异,双波长测定结果的CV值远小于单波长测定,结果见表1。2.对ST-360两次重复测定结果进行分析,结果基本一致,见表2。表1酶标板吸光度在两台酶标仪上的测定统计结果酶标仪 BIO-RAD550 ST-360 波长 450nm 450nm+655nm 450nm 450nm+630nm 最小值 0.125 0.126 0.130 0.131 最大值 0.154 0.139 0.153 0.141 均值 0.1356 0.1329 0.1399 0.1361 标准差 0.00671 0.00267 0.00467 0.00247 CV(%) 4.94 2.01 3.34 1.82 最大值/最小值 1.232 1.103 1.177 1.076 表2 ST-360酶标仪两次吸光度测定统计结果波长 450mnm 450nm+630nm 1 2 1 2 最小值 0.130 0.129 0.131 0.131 最大值 0.153 0.152 0.141 0.141 均值 0.1399 0.1391 0.1361 0.13711 标准差 0.00467 0.00495 0.00247 0.00229 CV(%) 3.34 3.56 1.82 1.67 三 讨论 1.酶标仪与分光光度计、自动生化分析仪等的吸光度测定有所不同,一般分光光度计是水平光路,而酶标仪则是垂直光路,但测定原理相同,都是使用朗伯-比耳定律,测定的都是样本的吸光度。垂直光的特点是标本吸光度受液体浓缩或稀释的影响小,不足之处是受被测样本液面是否水平、酶标板透光性、孔底是否平整等的影响较大。2.酶标仪在用单波长测定吸光度时,除受到测定干扰(样本的浊度、干扰色等)和电路干扰(包括噪音、漂移、电压等)等因素外,受液体表面张力的影响也很大。在检测过程中,由于液体表面张力的作用,液体的表面不是一个平面,而是形成一个凹面,从侧面看似凹透镜,这样不可避免会影响光路的正常通过。由于凹液面的影响,光线在通过液体时,除正常被液体吸收一部分外,尚有部分被折射和反射(如光线通过凹透镜那样),影响吸光度的检测。而酶标仪使用的又是通过光导纤维传播的点光源,如果每次能在同一部位检测,吸光度的重复性将得到保证,但由于机械运动等造成的误差,不可能保证每孔都在相同部位被检测,因此造成了孔与孔之间有一定的差异。结果见表1,整块板单波长检测的CV在3%以上,吸光度最高值和最低值的相对误差达17%以上。3.在双波长测定中,减少了测定干扰和电路干扰,因此测定结果明显好转,结果见表1,整块板样本的CV在2%以下。ST-360在进行稳定性观察中,如表2所示,两次检测结果基本一致,这表明ST-360的稳定性较好。同时,从表1也可以看到,科华公司生产的ST-360与BIO-RAD 550的检测结果一致,两者的检测性能基本相同。4.由于液体表面张力的不同,导致单波长测定时的误差较大。并且用不同的洗涤剂会影响到最后加入底物和终止液后的液面情况,用加入表面活性剂的洗涤液清洗后,形成的液面更凹,对单波长检测的影响更大,并且与表面活性剂的浓度成正比。而且中性蒸馏水洗涤后,单、双波长检测的结果基本一致。5.在酶联免疫法测定抗原抗体中,由于所使用的底物不论是邻苯二胺(OPD)-H2O2,还是四甲基联苯胺(TMB)-H2O2,显色终止后,在630nm和655nm处的吸光度值都只有吸收峰处(492nm/450nm)吸光度值的1%以下,因此,利用双波长检测,不会影响检测灵敏度。建立在进行酶联免疫检测时,酶标仪比色应该首选双波长。这样可以提高临界值处标本的分析正确度,减少实验误差。