电脑生物组织包埋机

谁有生物包埋剂 Spurr树脂使用说明书？希望共享一份，谢谢

常用包埋剂及配方目前在电镜技术上使用的包埋剂种类颇多，但普遍使用的是环氧树脂，在免疫和细胞化学技术中还会使用到丙烯酸树脂。 环氧树脂（epoxy resin） 环氧树脂是一类具有末端环氧基的甘油多聚酯。它的分子中有两种反应基团，即环氧基团（epoxide group）和氢氧基团（hydroxyl group）。其末端基团易与含有活性氢原子的化合物如胺类（如DMP-30，DMAE，乙二胺等，又称催化剂或加速剂）反应，使单体首尾相连接形成长链聚合物。此外，在单体中的氢氧基团能与有机酸酐（如MNA，DDSA，九烷基琥珀酸酐，NSA等，又称硬化剂或固化剂）结合，使单体分子形成横桥。所以，环氧树脂以单体渗入细胞组织，而这种单体在一定的温度条件下，在硬化剂和加速剂作用下，就形成一个非常耐溶剂和耐化学腐蚀的交链稳定的三维空间聚合体。为了改善聚合体（包埋块）的切割性能，还会在环氧树脂包埋配方中加入增塑剂，以调节包埋块的韧性。 环氧树脂包埋剂对细胞微细结构有较好的保存性能，聚合后体积缩小较少，而且在真空中能经受较长时间的轰击。但它的操作不太方便，反差较弱。 环氧树脂的型号较多，常用Epon812，Spurr树脂（ERL-4206）等，现介绍最常用的两种环氧树脂 Epon812包埋剂 Epon812是一种进口树脂，它是一种长链的脂肪族环氧化合物，是目前国际上普遍采用的一种优良包埋剂，粘度为150-210cP。该包埋剂的配制方法甚多，但一般都按1961年Luft提出的配方进行。其配方如下： A液：Epon812 62ml DDSA 100ml B液：Epon812 100ml MNA 89ml上述配方若改变A液和B液的比例则可调节聚合块硬度，A液多则软，B液多则硬。通常冬天使用$A:B=2:8$；夏天使用$A:B=1:9$，可视组织的硬度和气候不同选择其比例。配制时可先分别配制A液和B液，然后将A液和B液按一定比例混合后，再加入$1\%-2\%$的加速剂，边加边搅拌，使其充分混合。为了方便操作，也有人将Epon812，DDSA，MNA三种成分按一定比例直接混合使用。Epon812的聚合温度为：37℃过夜，60℃24-36小时。 根据南方地区的气候条件，可用下列配方：Epon812 51ml DDSA 12ml MNA 37ml DMP-30 1.8-2ml聚合条件&室温过夜，60℃8-12hDDSA是十二烷基琥珀酸酐（Dodecenylsuccinic anhydride）的简称。它是一种可得到软性包埋块的长链脂肪族分子。 MNA是甲基内次甲基二甲酸酐（Methyl Nadic anhydride）的简称，又称六甲酸酐，它有两个链环，能获得较硬的包埋块。 DMP-30是2，4，6-三（二甲基氨基甲基）苯酚（2，4，6-Tris（dimethylaminomethyl）phenol）的简称。它能加速固化过程。 Spurr树脂（ERL-4206包埋剂） 这是1969年由Spurr推荐使用的包埋剂，所以也称Spurr树脂。它含有两个环氧基，是一种低粘度的环氧树脂。由于具有粘度低的特点，所以近年来一些实验室已开始使用它。其配方可按下表中各种成分的比例，即可获得不同性能的包埋块。其配方如下： Spurr树脂包埋剂配方 成分（g）标准硬度 硬 软 快速聚合配方 缓慢聚合配方 VCD 10.0 10.0 10.0 10.0 10.0 DER-736 6.0 4.0 7.0 6.0 6.0 NSA 26.0 26.0 26.0 26.0 26.0 DMAE 0.4 0.4 0.4 1.0 0.2 聚合时间70℃（h） 8 8 8 3 16 混合时间（天） 3-4 3-4 3-4 2 7 VCD是二氧化乙烯环己烯（vinylcyclohexene dioxide）的简称。它的分子小，粘度低，聚合块硬度大。 DER-736是diglycidyl ether of a polypropylene glycol的简称。它属于脂肪族，分子小，有低粘度性质，可调节包埋块的硬度。 NSA是nonenylsuccinic anhydride的简称。它是一种特殊的硬化剂，应避免暴露在潮湿的大气中，以防环氧或酐链的水解作用。 DMAE是dimethylaminoethanol的简称。它是催化剂，增加催化剂的比例，可以缩短聚合的时间。 Spurr树脂最终硬度可用DER-736的量来调节。配制时，先把前三种成分混合后，最后才加入DMAE，但从开始到混合完成，达到淡黄色状态需3-7天。此包埋剂在$70\,^{\circ}\mathrm{C}$，一般8小时即可完全聚合，用陈旧的包埋剂时，则聚合时间会减少。因Spurr树脂嗜氧，聚合时不要加盖。包埋剂最好是用新鲜配制，但为了方便，可预先配制好保存在低温和防潮的环境中。Spurr树脂与Epon812树脂相比粘度低，操作方便，但毒性比Epon812树脂大，所以操作时要更加小心，此外，Spurr树脂各成分间的分子量大小差异较大，在组织中的渗透速度不一，容易个别成分造成渗透不均，而导致局部聚合不完全，染色效果不佳。 丙烯酸树脂（acrylic resin） 丙烯酸树脂无色透明的，由丙烯酸衍生物聚合而成。丙烯酸单体粘度低，可以在低温下渗透及聚合，因而能满足免疫和细胞化学技术低温操作的要求。其聚合方式有两种，热聚合和紫外线照射聚合。但它对脂类等成分的抽提比环氧树脂严重，为此它也需要在较低的温度下使用才可能减少抽提作用。此外，聚合前后丙烯酸树脂的体积变化较环氧树脂大（体积大约收缩$10-20\%$），并且它在电子束的照射下稳定性比环氧树脂低，放热的聚合过程可引起组织细胞结构的损伤，致敏性也比环氧树脂强，使用时要小心防护。一般来说，除了免疫和细胞化学技术外，超微结构的研究并不推荐使用它。在电镜中使用较多的丙烯酸树脂有伦敦白胶（LR White）和Lowicryl系 列的树脂。 伦敦白胶（LR White） 伦敦白胶含有7种不同的丙烯酸单体和2种增塑剂，引发剂是BPO（dibenzoyl peroxide），加速剂为N，N-dimethyl paratoluidine，但具体的配方和成分没有报道。它的粘度低，渗透能力强，可用于较大的组织块或致密的组织，由于它有一定的亲水性，方便水性染料进入，染色效果佳，使用非常方便，通常买回来的是已经混合好的试剂，它的有效期仅为12个月。伦敦白胶可以微溶于水，因而可以采用部分脱水方案，但不能使用丙酮作为脱水剂。氧气会抑制聚合反应的进行，因而聚合时要在模块中注满包埋剂并盖紧盖子。为了方便运输和储存，也有未加BPO的伦敦白胶（uncatalysed LR White）出售，这种试剂需要加入催化剂（9.9g催化剂/500gLR White）充分搅拌并室温放置24小时以上才能使用。Lowicryl系列包埋剂 Lowicryl系列包埋剂是专为低温包埋设计的包埋剂。它有两种类型：一种是极性树脂，K4M和K11M；另一种是非极性树脂，HM20和HM23。极性树脂亲水，使样品保存在一个水性的环境中从而较少蛋白质变性，且染色的效果较好。而非极性树脂的切割性能比较好。两种树脂通常都在隔绝氧气的情况下低温紫外线照射聚合。Lowicryl系列包埋剂全部以试剂盒的形式出售，有详细的说明书提供参考。

包埋盒五大使用方法1.取材时将组织块放于写有该组织编号的一次性包埋盒中,上盖(不锈钢)脱水盒盖,放入脱水篮中进入脱水机或手工脱水。 2.将包埋底模存于烤箱的下层(或单独的一层)。 3.包埋时将脱好的组织连同脱水篮也放在内有包埋盒底模的同一烤箱内。打开脱水盒盖,将脱水盒盖放在一边,根据组织块大小选取包埋底模,用镊子在酒精灯上加热,夹取组织块放于底模内,上覆装组织脱水的写有该组织块编号的一次性包埋盒,倾倒石蜡少许,以不溢出为宜,少置片刻。 4.把冰箱冷冻室内的冰盒取出,将包埋好的蜡块,放于冰盒冷冻片刻约5min10min,冬季时间短,夏季时间长些,将蜡块从底模中取出,收集其余蜡块,将包埋盒两边的多余蜡除去,即可切片。 5.包埋盒底模及脱水盒盖分类整理好重新放入烤箱备用,本科把脱水盒盖装在脱水篮中,在下一次用之前用热水将蜡冲去即可再用。 通过这种方法不仅利于蜡块的保存,也节约了石蜡。

请问 包埋做什么用？。如果看断面的扫描，用包埋剂来封吗？

向大家请教几个问题，本人刚接触超薄切片，要把一种常温下是脆性固体的材料包埋做超薄切片，现在关于包埋剂的选择有些困难，因为做包埋块有几个问题：1）材料本身很脆，常温下是块状固体，直接切肯定会碎掉，必须要包埋，但是担心粉末状态下与树脂包埋剂混合会混合得不均匀；2）如果液相状态下混合，材料本身需要加热到290~300℃才会液化，这么高温的液体与包埋剂混合，不知道哪种包埋剂会承受；3）也在网上查了一些，像M-Bond 610胶，G1胶貌似都可以，但是关于这两种包埋剂的一些性能和具体适用介绍很少或是不太详细，我本人刚接触这些东西，实在是菜鸟，想请教一下这方面比较熟悉的朋友们，大家能不能给我指点一下，先谢谢了！

微胶囊包埋技术是近些年发展起来的一项新技术，广泛用于纺织、香料、化妆品、印染、食品等工业部门。其原理就是将固体、液体或气体物料包埋在以微米计的微型胶囊中，在一定的条件下控制被包埋的物料预期释放出来。通过这种包埋和释放过程，一方面可以在未释放前保护物料，还可以通过释放方式、时间、速度和量的控制使物料发挥充分功能。 由于微胶囊化技术的独特性能优势，目前已广泛运用于各行各业，食品领域，其常用于包埋食品工业中的活性成分，能有效稳定包合物物化性质，减少氧化、钝化光敏性及热敏性，降低挥发性。化工领域，微胶囊化技术可用于降低客体分子的刺激性、减缓其释放速率，如降低洗衣粉的刺激性，延长空气清新剂香味持续时间等，与我们的生活息息相关。[b][color=red]为大家带来以下详细的微胶囊包埋技术的行业应用文章。敬请关注：[/color][/b]（一）微胶囊包埋技术及其在食品中的应用（二）微胶囊包埋技术在保健品中的应用（三）微胶囊包埋技术在食品包装中的应用（四）微胶囊包埋技术在益生菌中的应用（五）微胶囊包埋技术在油脂中的应用（六）微胶囊包埋机在调味品中的应用（七）微胶囊包埋技术在产品研发及生产中的应用（八）微胶囊包埋技术在食品中的应用（九）微胶囊包埋技术在药品生产过程中的应用 ……

想把试剂包埋在一种外壳当中，使用其反应时缓慢释放出来，请问有没有什么好的包埋剂？？？

大家新年快乐!有个问题想问问。用SPURR树脂包埋植物材料的时候,发现包埋块靠下一小薄层有些脆,但上层就很好.是吸水的原因么?包埋过程中需要除湿机除湿吗?需要带口罩防水气吗?

在定量过程中，常常遇到大峰包住小峰的情况，即包埋峰，那么如何使用GC-MS来定量包埋峰呢？欢迎大家给点建议

请问用于做植物材料透射电镜的树脂包埋块所用的硅胶包埋板哪里有卖？

请教各位高手，怎么去除包埋过程中的气泡问题？我用的是618环氧树脂，固化剂是乙二胺！说明书上说加《8％的固化剂，但是固化后有很多气泡，不知为何！请各位大侠指点一二，小弟不胜感激！！

双歧菌种被淀粉包埋，将菌种按照4789.34溶解后，用显微镜查看样液中有成团的现象，就是淀粉粘连在一起导致菌种没有完全分散，怎样破解淀粉包埋的这种情况呢。之前使用α-淀粉酶将样液进行酶解1h，效果不是很显著

用环氧树脂包埋PAN基碳纤维原丝和碳纤维时，如何配比树脂比例，已经包埋条件？

大家好！请问北京哪里可以做树脂包埋切片？我有两个薄膜样品，想做一下实验。多谢！

我是新手请问包埋用什么类型的树脂？（最好是没气泡，可以打磨）谢谢

这类的包埋剂有专门销售的吗？还是需要自己配制的？

要观察纤维束的截面,用树脂包埋,然后切片,请问上海哪儿有条件可以做?

大家好，我们实验室需要对固体催化剂（主要成分是氧化铝）、分子筛进行超薄切片，请对这种金属氧化物材料选用哪种包埋剂、环氧树脂为好呢!还没有用过，请各位朋友给予指点，最好能给出厂家、牌号等信息，谢谢！！

环氧树脂包埋测试样品对电镜有污染吗？有的话具体有哪些，帮忙解答一下谢谢！

求助，想观察纤维的横截面，谁知道纤维的包埋怎么做???谢谢！！

请教含氧化铁的高分子材料用什么树脂包埋？如果高分子材料中含银，又该采用何种方法包埋？

有些郁闷阿，最近的一个样品竟然测出了Cl。基本信息是这样的 ：粘土，十六烷基三甲基干法改性 包埋制样后上机测试 PS：我想了解一下包埋制样的具体过程，是不是有什么新东西填进去阿？盼望回复，谢谢各位！

透射电镜生物样品制备步骤一．取 材组织块小于1立方毫米二．固 定2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次1%锇酸固定液固定 2-3小时用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次三．脱 水50%乙醇 15-20分70%乙醇 15-20分90%乙醇 15-20分90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分90%丙酮 15-20分以上在4度冰箱内进行100%丙酮 室温 15-20分三次四．包 埋纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜纯包埋液 37度 2-3小时五．固 化37度烘箱内 过夜45度烘箱内 12小时60度烘箱内 24小时六．超薄切片机切片 50-60 nm七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色八．透射电镜观察。拍片透射电镜生物样品制备步骤一．取 材组织块小于1立方毫米二．固 定2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次1%锇酸固定液固定 2-3小时用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次三．脱 水50%乙醇 15-20分70%乙醇 15-20分90%乙醇 15-20分90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分90%丙酮 15-20分以上在4度冰箱内进行100%丙酮 室温 15-20分三次四．包 埋纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜纯包埋液 37度 2-3小时五．固 化37度烘箱内 过夜45度烘箱内 12小时60度烘箱内 24小时六．超薄切片机切片 50-60 nm七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色八．透射电镜观察。拍片

【序号】： 1002-0306(2004)05-0099-02【作者】： 庄桂东, 朱玉强, 何熹, 马文全, 迟玉森, 【题名】：微胶囊包埋技术在速溶苹果粉的研制中的应用 【期刊】： 食品工业科技【年、卷、期】：2004年 第05期【全文链接】：无急需该资料，因为是新手没有钱，否则就悬赏了。多谢大侠们了！

各位老师，你们好。我用高能球磨法制备了TiAlNb粉末，粒度在10微以下，现在拍一下透射电镜，然后测试方说要包埋切一下才行，我想请教一下金刚石刀能不能切啊，因为他们没有做过这种粉末，他们也不知道，各位老师请解答一下，谢谢了感谢各位老师

[font=宋体][font=宋体]组织芯片[/font][font=Calibri](tissue chip)[/font][font=宋体]，也称组织微阵列[/font][font=Calibri](tissue microarrays)[/font][font=宋体]，是生物芯片技术的一个重要分支，是将许多不同个体组织标本以规则阵列方式排布于同一载体（使用载玻片最多）上，进行同一指标的原位组织学研究。该技术自[/font][font=Calibri]1998[/font][font=宋体]年问世以来，以其大规模、高通量、标准化等优点得到大范围的推广应用。其最大优势在于，芯片上的组织样本实验条件完全一致。节省时间、节省试剂更是显而易见的。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b][font=Calibri]TMA[/font][font=宋体]构建原理可以概括为以下四个步骤：[/font][/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=Calibri]1.[/font][font=宋体]选取待研究的组织。人们利用组织芯片技术对人体各组织均有研究，包括肝脏，前列腺，心脏，乳房等等，据相关数据显示，在大脑组织中的应用最多。医学上常选取一些病变器官进行研究。根据制作方法来分，微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]2.[/font][font=宋体]经检测后标记出待研究的区域。组织微阵列的检测仪主要是高性能显微镜、荧光显微镜或共聚焦荧光显微镜。适用的检测技术有苏木精—[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色，免疫组织化学[/font][font=Calibri](IHC)[/font][font=宋体]染色，原位杂交[/font][font=Calibri](ISH)[/font][font=宋体]，荧光原位杂交（[/font][font=Calibri]FISH[/font][font=宋体]），原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]，寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成（[/font][font=Calibri]PRINS[/font][font=宋体]）等。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]3.[/font][font=宋体]使用组织芯片点样仪将标记好的组织按设计排列在空白蜡块模上。首先要利用打孔机在已经标记好的靶位点上进行打孔，将组织芯转入蜡块模孔中，重复操作可转入上千个样品组织芯。[/font][/font][font=宋体][font=Calibri]4.[/font][font=宋体]使用切片机对阵列蜡块进行连续切片即获得组织芯片。根据制作方法来分，微阵列主要有石蜡包埋的组织微阵列和冰冻微阵列两种。后者可以克服上述前者的多种缺陷（含醛基的化合物）可能损伤[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]或使目标抗原结构断裂或破坏抗原——抗体结合位点，另外，石蜡包埋乙醇固定过的组织也无法避免[/font][font=Calibri]RNA[/font][font=宋体]降解。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]组织芯片的出现，与基因芯片配合使用在寻找疾病基因中有很好的互补作用。在肿瘤研究中发挥着重要作用。将基因芯片筛选出的基因作成探针，再将探针与组织芯片中众多的肿瘤组织进行荧光原位杂交，寻找肿瘤发生发展的相关因素。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体][b]组织芯片应用：[/b][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]组织芯片的应用范围十分广泛，涉及到生命科学的基础研究、临床研究、应用研究以及新药开发等多个领域。它可以应用于多种染色技术，如[/font][font=Calibri]HE[/font][font=宋体]染色、免疫组织化学染色、原位杂交、荧光原位杂交、原位[/font][font=Calibri][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]、原位[/font][font=Calibri]RT-[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url][/font][font=宋体]以及寡核苷酸启动的原位[/font][font=Calibri]DNA[/font][font=宋体]合成等。此外，组织芯片还可以与核酸、蛋白质、细胞、组织、微生物等相关技术相结合，分别在基因、转录和表达产物的生物学功能这三个水平上进行深入研究。随着组织芯片的广泛应用，现代医药学、基因组学和蛋白组学的研究将得到极大的推动和发展。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]目前义翘神州提供[url=https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service][b]石蜡组织芯片定制服务[/b][/url]，更多详情可以关注：[/font][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/services/tissue-tma-array-service[/font][/font][font=Calibri] [/font]

芬兰赫尔辛基大学和美国约翰•霍普金斯基大学梅尔癌症中心科学家研发出一项组织培养技术，能够使得在手术中移除的正常和癌变的前列腺组织保持一周活性，并能够在实验中正常发挥功能。这项研究发表在11月1日的《癌症研究》期刊上。通常，病理学家用石蜡包埋法储存机体组织，但石蜡会杀死组织导致很快冻结。许多实验室在烧瓶里培养前列腺细胞，但是这些细胞却不能像在前列腺中那样粘在一起。在Marikki Laiho领导的这项研究中，他们将来自18个病人的前列腺组织标本切成具有精确厚度的薄片，以维持整个组织的良好气体和生长因子交换。之后，Laiho等将组织放入由64种成分组成的溶液中，维持组织的生物功能。研究中通过验证前列腺组织细胞的特殊标记物的存在状态来确保组织活性。Laiho等已经利用该组织培养技术测定了DNA损伤修复蛋白的表达水平。Laiho说，该组织培养技术是理解在前列腺组织的不同部位哪些DNA修复蛋白能够被激活或不被激活的一个要素，并且有助于发展以DNA修复蛋白为靶点的癌症治疗方法。

基本要求是：①尽可能保持材料的结构和某些化学成分生活时的状态;②材料的厚度一般不宜超过1000埃。组织和细胞，必须制成薄切片以获得较好的分辨率和足够的反差;③采用各种手段，如电子染色、投影、负染色等来提高生物样品散射电子的能力，以获得反差较好的图像。　　样品制备的方法随生物材料的类型以及研究目的而各有不同。对生物组织和细胞等，一般多用超薄切片技术，将大尺寸材料制成适当大小的超薄切片，并且利用电子染色、细胞化学、免疫标记及放射自显影等方法显示各种超微结构、各种化学物质的部位及其变化。对生物大分子(蛋白质、核酸)、细菌、病毒和分离的细胞器等颗粒材料,常用投影、负染色等技术以提高反差,显示颗粒的形态和微细结构。此外还有以冷冻固定为基础的冷冻断裂──冰冻蚀刻、冷冻置换、冷冻干燥等技术。　　一、超薄切片术　　将小块生物材料，用液态树脂单体浸透和包埋，并固化成塑料块，后用超薄切片机切成厚度为500埃左右,甚至只有50埃的超薄切片。超薄切片的制备程序与光学显微镜的切片程序类似，但各步骤的要求以及所使用的试剂和操作方法有很大差别。　　1、固定　　选用适宜的物理或化学的方法迅速杀死组织和细胞,力求保持组织和细胞的正常结构,并使其中各种物质的变化尽可能减小。固定能提高细胞承受包埋、切片、染色以及电子束轰击的能力。主要固定方法有：　　①　快速冷冻，用致冷剂(如液氮、液体氟利昂、液体丙烷等)或其他方法使生物材料急剧冷冻，使组织和细胞中的水只能冻结成体积极小的冰晶甚至无定形的冰──玻璃态。这样，细胞结构不致被冰晶破坏，生物大分子可保持天然构型，酶及抗原等能保存其生物活性，可溶性化学成分(如小分子有机物和无机离子)也不致流失或移位。用冷冻的组织块，可进行切片、冷冻断裂、冷冻干燥和冷冻置换等处理。用此法固定的样品既可提供组织、细胞结构的形态学信息，又可提供相关的细胞化学信息。②化学固定，固定剂有凝聚型和非凝聚型两种，前者如光学显微术中常用的乙醇、二氯化汞等，此法常使大多数蛋白质凝聚成固体,结构发生重大变化,常导致细胞的细微结构出现畸变。非凝聚型固定剂包括戊二醛、丙烯醛和甲醛等醛类固定剂和四氧化锇，四氧化钼等，适用于电子显微。它们对蛋白质有较强的交联作用,可以稳定大部分蛋白质而不使之凝聚,避免了过分的结构畸变。它们与细胞蛋白质有较强的化学亲和力，固定处理后，固定剂成为被固定的蛋白质的一部分。如用含有重金属元素的固定剂四氧化锇(也是良好的电子染色剂)进行固定，因为锇与蛋白质结合，增强了散射电子的能力，提高了细胞结构的反差。采用一种以上固定剂的多重固定方法，如采用戊二醛和四氧化锇的双固定法，能较有效地减少细胞成分的损失。此外，固定剂溶液的浓度、pH及所用的缓冲剂类型、渗透压、固定时间和温度等对固定效果都有不同程度的影响。　　固定操作方法通常是先将材料切成 1立方毫米左右小块，浸在固定液中，保持一定温度(通常为4℃),进行一定时间的固定反应。取材操作要以尽可能快的速度进行，以减少组织自溶作用造成的结构破坏。对某些难以固定的特殊组织，如脑、脊髓等，最好使用血管灌注方法固定，即通过血管向组织内灌注固定液，使固定液在组织发生缺氧症或解剖造成损伤之前，快速而均匀地渗透到组织的所有部分。灌注固定的效果比浸没固定好得多。　　2、脱水　　化学固定后，将材料浸于乙醇、丙酮等有机溶剂中以除去组织的游离水。为避免组织收缩，所用溶剂需从低浓度逐步提高到纯有机溶剂，逐级脱水。　　3、浸透　　脱水之后，用适当的树脂单体与硬化剂的混合物即包埋剂，逐步替换组织块中的脱水剂，直至树脂均匀地浸透到细胞结构的一切空隙中。　　4、包埋　　浸透之后,将组织块放于模具中,注入树脂单体与硬化剂等混合物，通过加热等方法使树脂聚合成坚硬的固体。用作包埋剂的树脂有甲基丙烯酸酯、聚酯和环氧树脂等。最广泛使用的是某些类型的环氧树脂，如618树脂、Epon812、Araldite和 Spurr等商品树脂。它们具有良好的维持样品特性、低收缩率和较强的耐电子轰击能力等优点。　　5、切片　　制备超薄切片要使用特制超薄切片机(大多是根据精密机械推进或金属热膨胀推进原理制成)和特殊的切片刀(用断裂的玻璃板制成的玻璃刀或用天然金刚石研磨而成的金刚石刀)。先将树脂包埋块中含有生物材料的部分，用刀片在立体显微镜下修整成细小的金字塔形,再用超薄切片机切成厚度适中(500埃左右)的超薄片，切片应依次相互联接形成切片带。切片带漂浮于装在切片机上的水槽中的水面上。　　通过装置在切片机上的解剖显微镜，监控切片过程。用荧光灯照射水面上的切片，并根据由此产生的干涉光颜色来判断切片的实际厚度(见表)。　　切片通常用敷有薄的支持膜的特制金属载网，从水面上捞取。快速冷冻固定的生物材料，可用冷冻超薄切片装置制成切片。用醛类或冷冻方法固定的组织，可通过超薄切片术与生物化学技术、免疫技术等结合使用,进行超微结构水平上的蛋白质、核酸、酶及抗原等生物活性物质的定位甚至定量研究。这就是电镜细胞化学技术(见细胞化学)和电镜免疫细胞化学技术。　　6、染色　　电子显微镜主要是依赖散射电子成像，为了增强细胞结构的电子反差，需要对切片进行染色。染色是依据各种细胞结构与染色剂(重金属盐)结合的选择性，而形成不同的对电子散射能力，从而产生借以区别各种结构的反差。电子染色方法分块染色和切片染色两种：①块染色法，在脱水剂中加入染色剂，在脱水过程中对组织块进行电子染色。②切片染色法，最常用，即将载有切片的金属载网漂浮或浸没在染色液中染色。也可使用有微处理机控制的染色机进行自动化染色。一般切片染色所使用的染色剂为金属铀盐和铅盐的双重染色。为显示某种特殊结构，则可采用与该结构有特异性结合的选择性染色剂。　　7、冷冻置换法　　用有机溶剂(如丙酮、乙醚等)在低温条件下(通常，-80～-90℃)，缓慢地置换冷冻固定的小块组织中的冰(“惰性脱水”)，这样可减少常规方法脱水过程中有机溶剂对组织中化学组分的抽取。然后再按常规方法进行树脂包埋、超薄切片和染色等。用冷冻置换法，可以很好地保存快速变化过程中物质的状态和非常脆弱的超微结构以及细胞内某些化学组分。　　8、电镜放射自显影技术　　用超薄切片术与放射性同位素标记技术相结合的电镜放射自显影术(见同位素技术)可获得同位素标记的化合物在组织细胞内存在部位，以及在代谢过程中物质的合成、分解、转运及分泌的信息。　　二、负染色和投影技术 研究分散的颗粒状生物材料,为增强其反差，常采用的方法。　　1、负染色　　研究以蛋白质为主要成分的颗粒状材料的最常用方法。以某些在电子束轰击下稳定而又不与蛋白质相结合的重金属盐类作为负染色剂，使之在支持膜上将颗粒材料包围，形成具有高电子散射能力的背景，衬托出低电子散射能力的颗粒的形态细节。其所成的电子显微像的反差与常规电子染色相反，即暗的背景和亮的颗粒形态的所谓阴性反差。负染色方法简便，所获得的颗粒的电子显微图像反差强,分辨率也高于超薄切片,可广泛用于研究蛋白质分子、细菌鞭毛、蛋白质结晶，以及生物膜及分离的细胞的细微结构，特别适用于蛋白质大分子及病毒颗粒结构的三维重建研究。常用的负染色剂有醋酸铀、磷钨酸钠或磷钨酸钾、 硅钨酸、 铜酸铵及甲酸铀等。用液滴法或喷雾法将颗粒材料的悬液加在载网的支持膜上，然后滴加负染色剂溶液。或将颗粒的悬液与负染色剂按一定浓度混合滴加或喷撒到支持膜上，吸去多余液体，待干燥后，即可用电镜观察。样品颗粒在支持膜上的均匀分散是成功的关键之一。染色剂溶液的pH则是成功的另一关键。一般染色剂的pH应在中性偏酸范围(pH 5～7),但对不同种类的颗粒材料和染色剂，最适pH也不尽相同。　　2、投影　　在真空蒸发器的高真空腔中,加热某些金属至熔化后，金属以细小颗粒沿直线方向蒸发出来。当金属微粒以一定入射角喷镀在载有颗粒材料的载网支持膜表面上时,颗粒向蒸发源的一面即被镀上一层金属薄膜,而背蒸发源的一面及附近区域形成无金属沉积的“阴影”，并且由于各部位散射电子能力存在着差别，这样就能构成具有强烈反差和立体感的电子显微图像。常用于投影的蒸发材料，有金、 铬、 铂、钯以及铂-铱、铂-钯、铂-碳等金属或合金。此外，还可利用电子枪投影装置使钨、钽等高熔点金属以极微细颗粒蒸发，从而获得高分辨率投影。　　三、蛋白质展膜技术　　用电子显微镜研究核酸分子常用的方法。某些碱性球蛋白，如细胞色素c,可以在低浓度盐溶液或蒸馏水表面展成单分子层，在展开过程中，能为蛋白质的碱性氨基酸侧链基团所吸附的、带负电荷的核酸分子同时展开成完整的线状分子。然后，用带有支持膜(有机膜或碳膜)的载网捞起这些蛋白质──核酸展膜,并用染色或金属投影法提高核酸分子的反差,可在电镜下直接观察核酸分子的形态、DNA的双螺旋结构,并可通过分子长度的测量来计算核酸分子量。　　四、冷冻断裂和冰冻蚀刻技术　　研究细胞超微结构，特别是生物膜结构的一种独特的样品制备技术。利用快速冷冻方法固定的生物组织块具有刚性和脆性。在对其施加外力后，组织即在结构上结合最薄弱的部位发生“脆性断裂”，这就是“冷冻断裂”。对于生物膜，断裂沿膜内部疏水区发生，从而暴露出膜内部结构。利用投影和复型技术，制备断裂面的复型,然后将组织腐蚀掉,并用载网捞起复型膜，就可用电镜来研究组织断裂表面所显示的细胞的或生物膜内部超微结构。在高于 10-5毫米汞柱真空度和-100℃温度下，冷冻组织的断裂表面上的冰升华为水蒸汽，而使原表面高度下降，即谓之“冰冻蚀刻”。由

各位前辈好，在GLP实验室认证时需要有些仪器强检？俺就知道量筒，天平，温度计.象病理那一套设备（病理切片机＼电脑自动组织脱水机＼组织包埋机摊烤片机）血凝仪，生理仪，自主活动箱＼眼科检查器＼超声波清洗器等用不用强检？？？？急急！！！！！请前辈和专家们不吝赐教啊