单模微波蛋白酶解仪

Ying Qing Yu与Martin Gilar 美国马萨诸塞州米尔福德沃特世公司简介 本应用纪要中，我们介绍了沃特世专利RapiGest&trade SF试剂的物理化学性质及其应用领域。2002年，我们首次推出RapiGest SF，这一创新产品是帮助酶消解的有利工具，可促进溶液中蛋白的消解，它能够改善样品制备过程中蛋白的溶解度。 RapiGest SF提高酶解速率与完全程度的机理详见图1。温和的蛋白变性可打开蛋白结构并暴露酶切位点，以供酶切。在RapiGest SF溶液中，酶对变性的耐受性优于普通蛋白，并能保持活性。在加入酶之前高温加热RapiGest SF溶液可使球蛋白更为完全变性，之后需将酶与样品一起进行37 ° C的孵育。图1 蛋白底物在RapiGest SF溶液中变性􀉼 之后对蛋白酶切更为敏感超过200多家行业内杂志引用了使用RapiGest SF进行样品溶解的案例，大部分为蛋白组学的应用。最近，许多制药实验室使用RapiGest SF用于蛋白药物的确证。因为酶消化的速度的提高并在LC、MS分析前极易清除，RapiGest SF已被多个应用领域广泛接受，其中包括高级序列研究的LC/UV/MS蛋白药物的肽图分析。讨论 什么是RapiGest SF? RapiGest SF是酸性不稳定表面活性剂，在酸性条件下极易水解。1这种独特的性质，在需要的时候，可用于从溶液中清除表面活性剂。RapiGest SF的结构及其水解副产物见图2。酸性不稳定的性质可在pH2条件下，45分钟内达到完全降解。 该表面活性剂可降解为两个产物：dodeca-2-one和3-（2,3-二羟基丙基）丙磺酸钠。前者与水不能互溶，可通过离心清除。后者在水溶液中溶解度很高，而在反相LC模式下不保留。酶消解后的水溶液可直接进行HPLC、LC/MS或MALDI-TOF MS进行分析。消解后的清除 样品分析前无需额外去清除表面活性剂（如透析）。在分析前，酶消解后通常经过酸（如甲酸、三氟乙酸（TFA）或盐酸（HCl））的酸化，降解RapiGest SF。建议降解条件pH &le 2。胰蛋白酶消解的兼容性 胰蛋白酶是最常见的蛋白水解酶，可用于肽图分析和蛋白组学的应用。我们研究了在添加RapiGest SF的情况下胰蛋白酶的活性作用，并与文献中最常见的变性剂的作用做了对比。本检测基于胰蛋白酶诱导N-&alpha -苯甲酰-L-精氨酸乙基乙酯（BAEE）在50 mM重碳酸胺（pH 7.9）中的室温水解。胰蛋白酶活性的变化通过UV 253 nm下测量BAEE水解率进行计算。在选择的变性溶液中，胰蛋白酶活性与对照样品进行对比（非变性剂）。结果见于表1。 表1中的数据说明低浓度下（0.1%） RapiGest SF不抑制胰蛋白酶的活性。这与结构上类似的表面活性剂SDS不同，SDS是很强的变性剂，可会使胰蛋白酶失活。尿素、乙腈或盐酸胍也是胰蛋白酶消化的变性剂。但是乙腈是强洗脱剂会干扰消解样品进行反相LC分析。正如我们所知，尿素可使蛋白共价修饰，盐酸胍也和SDS一样可以使酶失活。 本实验说明蛋白酶的活性受到蛋白溶液中所用变性剂的影响。RapiGest SF在从低到高的浓度下均不改变酶活性，因此，最佳的蛋白消解条件是无需过量酶即可达到酶解的结果。快速蛋白消解 对蛋白酶解存在抗性的蛋白使用RapiGest SF试剂，可在数分钟内消解完全。完全消解球蛋白、马肌红蛋白只需要5分钟内即可完成。该试剂辅助的消解结果与对照见图3。由于肌红蛋白是球蛋白，众所周知，若没有表面活性剂将难以消解。在对照反应中，与胰蛋白酶孵育9小时后只有少量的蛋白可以消化。使用了RapiGest SF试剂，总体的消解的效率显著提升。在蛋白药物肽图中的序列覆盖范围更大 RapiGest SF在蛋白组学的样品前处理中广泛使用，是有效的蛋白溶解变性剂。最近越来越多的生物制药实验室在肽图分析中采用了RapiGest SF。一些发表的论文记录了使用RapiGest SF进行蛋白药物消解的优势。4,5经报导的RapiGest SF浓度范围为0.05 -1%，取决于蛋白疏水性与浓度。 我们发现浓度范围为0.05 -1%的RapiGest SF足以使各种大小的蛋白变性，高浓度RapiGest SF适合全细胞蛋白提取的实验。 单抗（mAbs）肽图分析一直以来都因为难以消解这些大疏水蛋白而难以实现。肽图分析的目的是确认蛋白序列并发现所有存在后翻译修饰（PTMs）的蛋白。图4举例说明了RapiGest SF辅助的人单抗消解的实例。样品制备与分析的参数以UPLC和四级杆Tof质谱分析的参数已列表作为指导。 图4显示实验中总序列覆盖率为98%。数据分析通过BiopharmaLynx&trade v.1.2软件得到。高序列覆盖率（98%）说明单抗完全消解。LC/MS分析中没有发现错误酶切的多肽或完整未被酶切的蛋白。剩下的2%未确认的序列为少数二个氨基酸的肽或单个氨基酸（R或K），而无法在反相柱上保留。样品制备 人单抗样品（10 &mu L, 21 mg/mL）在含有0.1% （w/v） RapiGest SF 的50 &mu L 50 mM重碳酸铵中溶解。将2 &mu L 0.1 M的二流苏糖醇（DTT）加入样品，样品在50 ° C加热30分钟，加入4 &mu L 0.1 M的碘代乙酰胺，在样品冷却至室温后样品在黑暗中静至40分钟。 样品中加入8 &mu g胰蛋白酶（胰蛋白酶浓度= 1 &mu g/&mu L），样品在37 ° C孵育过夜。消解样品与1%甲酸与10%乙腈混合（1：1，v：v）。用Milli-Q水（Millipore）稀释至5 pmol/&mu L后进行LC/MS分析。LC 条件 LC 系统 沃特世 ACQUITY UPLC系统 色谱柱 ACQUITY UPLC BEH 300 C18 肽分离专用柱, 2.1 x 100mm （P/N = 186003686） 柱温 40 ° C 样品进样 2 &mu L （10 pmol） 溶液A 0.1% 甲酸水溶液 溶液B 0.1% 甲酸乙腈溶液 流速 200 &mu L/min 梯度 0-2分钟:2%B 2 &ndash 92分钟：2 -35% B 92 -102分钟：35 - 50% B 102.1 -105 分钟：90% B 105.1-110分钟：2% B MS条件 MS系统 沃特世SYNAPT&trade MS （V型） 毛细管电压 3.2 kV 源温度 120 ° C 去溶剂温度 350 ° C 去溶剂气 700 L/hr MS 扫描速率 1 秒/次 锁定质量通道 100 fmol/&mu L Glu-Fib多肽（m/z 785.8426, z = 2），流速20 &mu L/min 与其他的蛋白酶合用 我们测试了RapiGest SF与多种蛋白酶的适配性，如Asp-N, Lys-C与Glu-C。在酶解前使用RapiGest SF变性蛋白获得了有效的消解结果。 蛋白去糖基化的用途 RapiGest SF也用于测试其它酶，如PNGase F，该酶用于酶切糖蛋白N-连接的糖基。2图6说明了去糖基化鸡蛋卵清蛋白。在RapiGest SF介质中PNGase F消解2小时后观察到了完全的去糖基化反应。 结论  RapiGest SF促进了蛋白酶解的速度与完全程度，能够得到蛋白药物序列覆盖率很高的肽图分析。  RapiGest SF是适用于蛋白组学、糖蛋白与生物制药应用的领域  几乎无需消解后样品处理，简单样品酸化，足以从溶液中去除RapiGest SF。多种情况下LC/MS分析前只需简单稀释。  RapiGest SF简化了样品制备方法，可提高分析通量；使用该方法提高实验室工作效率并提高数据质量。 参考文献 1. Yu YQ, Gilar M, Lee PJ, Bouvier ES, Gebler JC. Enzyme-friendly, mass spectrom- etry-compatible surfactant for in-solution enzymatic digestion of proteins. Anal. Chem. 2003 75: 6023-6028. 2. Yu YQ, Gilar M, Lee PJ, Bouvier ES, Gebler JC, A complete peptide mapping of membrane proteins: a novel surfactant aiding the enzymatic digestion of bacteriorhodopsin. Rapid Commun.Mass Spectrom. 2004 18: 711-715. 3. Yu YQ, Gilar M, Kaska J, Gebler JC. A rapid sample preparation method for mass spectrometry characterization of N-linked glycans. Rapid Commun. Mass Spectrom. 2005 19: 2331-2336. 4. Bailey MJ, Hooker AD, Adams CS, Zhang S, James DC. A platform for high- throughtput molecular characterization of recombinant monoclonal antibodies, J. Chrom. B. 2005 826: 177-187. 5. Huang HZ, Nichols A, Liu DJ. Direct identification and quantification of aspartyl succinimide in an IgG2 mAb by RapiGest SF assisted digestion. Anal. Chem. 2009 81 (4): 1686-1692.

金属蛋白酶（MP）是一个在其活性中心具有金属离子的大型蛋白酶家族。根据结构域的不同，金属蛋白酶可分为多种亚型，主要包括基质金属蛋白酶（MMPs）、解整合素金属蛋白酶（ADAMs）以及具有血栓反应蛋白基序的ADAMs（ADAMTS）。它们具有蛋白质水解、细胞粘附和细胞外基质重塑等多种功能。相关会议推荐点击可免费报名金属蛋白酶在多种类型的癌症中表达，并通过调节信号转导和肿瘤微环境参与涉及肿瘤发生、发展、侵袭和转移的许多病理过程。因此，更好地了解MP在癌症免疫调节中的表达模式和功能将有助于开发更有效的癌症诊断和免疫治疗方法。MP的结构和表达基质金属蛋白酶（MMP）在脊椎动物中，MMP家族由28个成员组成，至少23个在人体组织中表达，其中14个在脉管系统中表达。基质金属蛋白酶通常根据其底物和其结构域的组织结构分为胶原酶（MMP1、MMP8、MMP13）、明胶酶（MMP2、MMP9）、溶血素（MMP3、MMP10、MMP11）、基质溶素（MMP7、MMP26）、膜型MMPs（MT MMPs）或其他MMPs。MMP家族有一个共同的核心结构。典型的MMPs由大约80个氨基酸的前肽、170个氨基酸的金属蛋白酶催化结构域、可变长度的连接肽或铰链区和约200个氨基酸的血红素蛋白结构域组成。不同类型的MMP具有不同于典型MMP的特定结构特征。例如，MT MMPs缺乏前结构域，而MMP7、MMP26和MMP23缺乏Hpx结构域和连接肽。此外，MMP2和MMP9包含纤连蛋白的三个重复。MMPs中的这些不同结构域、模块和基序参与与其他分子的相互作用，从而影响或决定MMP活性、底物特异性、细胞和组织定位。MMPs已在多种人类癌症中检测到，MMPs的高表达通常与大多数癌症的生存率降低有关，包括结直肠癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌和胃癌。其中MMP2和MMP9，能够降解基底膜中的IV型胶原，是研究最广泛的金属蛋白酶，与各种癌症患者的疾病进展和生存率降低相关。解整合素金属蛋白酶（ADAM）ADAMs是锚定在细胞表面膜上的I型跨膜蛋白，迄今已发现30多种。与MMPs类似，ADAMs包括前结构域和锌结合金属蛋白酶结构域。ADAM还包括一个在细胞表面蛋白中独特的去整合素结构域。ADAM的金属蛋白酶结构域高度保守，大多数ADAM都有一个富含半胱氨酸的结构域和跨膜区域相邻的EGF样结构域，然后是一个长度和序列在不同ADAM家族成员之间变化很大的胞内区。由于这些结构域的存在，ADAM可以结合底物并影响细胞粘附和迁移的变化，以及细胞表面分子的蛋白水解释放。它们的主要底物是完整的跨膜蛋白，如生长因子、粘附分子和细胞因子的前体形式。癌细胞通常表达高水平的ADAM，ADAM17是所有ADAM蛋白中研究最广泛的。一项评估ADAM17作为卵巢癌潜在血液生物标志物的研究表明，与对照组相比，培养的卵巢癌细胞系的培养基上清液以及卵巢癌患者的血清和腹水中的ADAM17水平明显更高。具有血栓反应蛋白基序的ADAM（ADAMTS）ADAM不同，ADAMTS是一种分泌型金属蛋白酶，其特征在于辅助结构域包含血栓反应蛋白1型重复序列（TSR）和间隔区，并且缺少跨膜区、胞内域和（EGF）样结构域，人ADAMTS家族包括19种蛋白。ADAMTS蛋白酶参与前胶原和von Willebrand因子的成熟，以及与形态发生、血管生成和癌症相关的ECM蛋白水解。研究表明，不同的ADAMTS具有不同的生物学功能，并且个体ADAMTS可以在不同的癌症中或根据临床环境发挥不同的作用。与MMPs和ADAMs相比，ADAMTS在TME中的参与研究较少，因此迫切需要系统地研究其在癌症中的功能。涉及癌细胞免疫相关MP的信号通路信号转导途径由多个分子组成，它们相互识别和相互作用，并传递信号以调节许多重要的生物学过程，如肿瘤细胞增殖、转移和免疫调节。三种信号通路尤其与免疫调节中的MP密切相关。肿瘤坏死因子信号肿瘤坏死因子-α（TNF-α）是一种重要的促炎细胞因子，参与免疫系统的维持和稳态，以及炎症和宿主防御。可溶性TNF-α通过蛋白水解酶ADAM17，也称为TNF-a转换酶（TACE），从跨膜TNF-α（tmTNF-α）裂解，该酶可通过激活TNF-α来协调免疫和炎症反应。鉴于ADAM17对TNF信号通路的受体和配体的作用，ADAM17被认为以多种方式影响TNF-α信号传导。例如，可溶性TNF-α产生的减少将导致tmTNF-α的积累，其将与TNFR2结合并导致不同的生物学结果。转化生长因子–β转化生长因子-β（TGF-β）作为肿瘤行为的关键调节因子，在肿瘤侵袭和转移、免疫调节和治疗抵抗中发挥重要作用。TGF-β也是TME免疫抑制的核心，根据具体情况对免疫系统具有多效性功能。MMP9和MMP2是已知的两种金属蛋白酶，可切割未激活的TGF-β前体并产生不同的TGF-β蛋白水解切割产物，从而导致TGF-β活化。此外，与CD44结合的MMP9降解纤连蛋白导致活性TGF-β的释放。癌细胞中MMP9的水平不仅可能影响TGF-β的蛋白水解，还可能影响TGFβ和TGF信号通路下游物质的表达。对乳腺癌中MMP9与TGF信号通路之间关系的研究表明，乳腺癌细胞中MMP9的过表达不仅显著上调了SMAD2、SMAD3和SMAD4的表达，还增强了SMAD2的磷酸化。Notch信号通路Notch信号涉及肿瘤生物学的多个方面，其在免疫应答的发展和调节中的作用比较复杂，包括塑造免疫系统和TME的组成部分，例如抗原呈递细胞、T细胞亚群和癌细胞之间的复杂串扰。特别是，Notch在不同免疫细胞的发育和维持中发挥着关键作用。配体与Notch受体结合后，下游信号由包括ADAM家族成员在内的一些蛋白酶介导。首先，受体/配体相互作用暴露了蛋白水解切割位点S2，其被ADAM金属蛋白酶切割。γ-分泌酶介导的S3处的后续裂解发生在跨膜区，导致Notch胞内结构域（NICD）的释放，该结构域转移到细胞核中，并将MAML与RBPJ结合，触发靶基因如Myc、P21和HES1的转录。已知ADAM10和ADAM17参与裂解S2，而ADAM17导致配体非依赖性Notch激活，ADAM10导致配体依赖性激活。MP对肿瘤微环境的调节TME是指肿瘤细胞周围的微环境，包括血管、免疫细胞、成纤维细胞、骨髓源性抑制细胞、各种信号分子和ECM。TME在调节癌症的免疫反应中起着关键作用。MP对ECM的影响ECM是TME基质的非细胞成分，ECM的重塑在癌症的发展和体内稳态以及免疫细胞募集和组织转移中起着重要作用。癌症进展过程中ECM的广泛重塑导致其密度和组成发生变化，具体而言，蛋白酶诱导的ECM成分的分解对于肿瘤细胞跨越组织屏障至关重要。MMPs和ADAMs是参与ECM降解的主要酶，参与ECM降解的MMPs可大致分为膜锚定MMPs和可溶性MMPs。ECM降解主要通过MT1 MMP激活的可溶性MMP（如MMP2、MMP9和MMP13）实现。ECM有三个主要成分：纤维、蛋白聚糖和多糖。MMPs通过与这些基质结合以促进各种ECM蛋白的周转，在组织重塑中发挥重要作用。MMPs降解ECM的具体机制尚不清楚，需要进一步研究。MP与免疫细胞之间的关系MP在促进免疫细胞活性和调节免疫细胞迁移方面发挥重要作用。MP和免疫细胞之间的关系如下图所示。ADAM10和ADAM17在静止的CD4+Th细胞表面表达，对调节CD4+Th的发育和功能很重要。ADAM10/17在T细胞共刺激受体以及共抑制受体的脱落中发挥关键作用。例如，CD154（CD40L）是一种II型膜共刺激受体，在T细胞和APC之间的相互作用后，CD154表达在几个小时内迅速上调，随后在ADAM10和ADAM17裂解后从T细胞表面释放。此外，ADAM10和ADAM17还作用于共刺激受体CD137，以及抑制性受体LAG-3、TIM-3，sLAG-3和sTIM-3的可溶性形式都是在ADAM10和ADAM17蛋白水解裂解后形成的。B细胞是体液免疫的关键细胞成分，位于脾脏中边缘区B细胞（MZB）表达高水平的CD80/86共刺激分子，导致T细胞活化。Notch2信号传导是MZB细胞发育所必需的，在MZB的发育过程中，Notch2异二聚体与基质细胞和APC上的DLL1等配体结合，这启动了一种未知的金属蛋白酶水解受体，导致Notch胞内结构域的释放，该结构域转移到细胞核并触发下游靶基因的表达。这种未知的金属蛋白酶可能是ADAM10。NK细胞表达IgG Fc受体FcγRIII（CD16），CD16分子可被ADAM17从活化的NK细胞表面裂解，ADAM17的抑制会削弱CD16和CD62L的胞外脱落，从而显著增加细胞内TNF-α和IFN-γ的水平。此外，MMPs和ADAMS可以从肿瘤细胞表面切割活化受体NKG2D的配体。这些裂解蛋白的可溶性形式与NKG2D结合，并诱导该受体的内吞和降解，导致肿瘤逃避监控。总的来说，ADAM17裂解的多种底物与NK细胞的不同作用有关。肿瘤相关巨噬细胞（TAM）有助于癌症的发生和恶性进展，高水平的TAM与预后不良和总体生存率降低有关。在多种癌症中，发现TAM通过分泌MMPs促进肿瘤血管生成和侵袭，并调节免疫反应。MMP的调节与TAM分泌的趋化因子密切相关。与MPs相关的免疫调节细胞因子多种来源于肿瘤细胞的细胞因子，包括TGF-β、EGF、HGF和TNF-α，介导许多MP的表达。其中最重要的是MMP9，其在血清和与肿瘤相关的组织中升高，并参与ECM的降解，以促进癌症中免疫细胞的迁移。此外，这些细胞因子必须被MP切割以参与肿瘤免疫过程。例如，被ADAM17切割的TmTNF-α产生活性sTNF-α。IL-12在T细胞发育和扩增中也起着关键作用，未激活的IL-12前体需要在被MMP14切割之后在TME中转变为活性状态。金属蛋白酶和血管生成迄今为止，已经报道了几种类型的肿瘤血管生成，包括萌芽血管生成和血管生成拟态（VM）。萌芽血管生成是通过血管基底膜中各种水解酶（如MP和组织纤溶酶）的上调实现的，这导致基底膜和ECM的降解和重塑。例如，在胰腺神经内分泌肿瘤中，MMP9分泌增加会从基质中释放出隔离的VEGF，从而将血管静止转变为活跃的血管生成。在肺癌细胞中，MMP2活性的抑制减少了其与整合素AVB3的相互作用，并抑制了下游PI3K/AKT信号介导的VEGF的表达，导致血管生成减少。VM是侵袭性肿瘤形成新血管的新模型，为肿瘤生长提供血液供应。研究表明，实体瘤的初始缺氧环境与VM密不可分，缺氧与MMPs的表达和活性密切相关。低氧诱导因子-1α（HIF-1α）已被证明直接调节MMP14、MMP9和MMP2的表达。靶向MP的免疫治疗鉴于MP在癌症免疫调节中的作用，人们开始探索靶向MP的免疫治疗，临床试验中出现了多种广谱MP抑制剂。然而，由于药物的非特异性靶向和MP在免疫调节中的复杂作用，MP抑制剂迄今未能改善癌症患者的生存和预后。最近，有报道称MP抑制剂可用于联合治疗，以提高免疫治疗的疗效。SB-3CT作为一种MMP2/9抑制剂，被认为可以提高抗PD-1和抗CTLA-4治疗黑色素瘤和肺癌小鼠模型的疗效。SB-3CT治疗不仅通过减少多种致癌途径导致PD-L1表达减少，而且与抗PD-1治疗相结合，显著改善了免疫细胞浸润和T细胞的细胞毒性。此外，SB-3CT与抗CTLA-4的组合增强了PD-L1表达的下调，并增加了肿瘤中活化的肿瘤浸润CD8+T细胞的丰度。Andecaliximab（GS-5745）是一种选择性抑制MMP9的单克隆抗体，GS-5745通过与MMP9前体结合并阻止MMP9活化来抑制MMP9，而与活性MMP9的结合则抑制其活性。Fab 3369作用于MMP14，阻断细胞表面表达的内源性MMP14，并抑制三阴性乳腺癌（TNBC）中ECM的降解。此外，有多种抗体可有效抑制ADAM17，包括A12、A9和MED13622。还有一些小分子抑制剂在临床开发中，在临床试验中显示出积极的效果。小结MP在TME中的免疫调节中发挥重要作用，包括ECM重塑、信号通路转导、细胞因子脱落和释放以及促进血管生成。与MP相关的新兴技术和药物在癌症诊断和治疗中得到了越来越多的探索。因此，更好地了解MP在癌症免疫调节中的表达模式和功能将有助于开发更有效的癌症诊断和免疫治疗方法。基于MP的探索和新技术具有巨大潜力，它们可能会为未来的癌症诊断和治疗提供有效的策略。参考文献：1.Immunomodulatory role of metalloproteases in cancers: Current progress and future trends. Front Immunol.2022 13: 1064033.

胰蛋白酶（胰酶，Trypsin），CAS：9002-07-7，为蛋白酶的一种，EC3.4.4.4，是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。来源于胰腺的一种丝氨酸蛋白酶，由223个氨基酸残基组成的单链多肽，底物特异性是带正电荷的赖氨酸和精氨酸侧链。胰酶主要切割赖氨酸和精氨酸羧基端，当两者之一紧随为脯氨酸的情况除外。另外，当切割位点任一边紧邻酸性残基，胰酶水解速率也会减缓。在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶，EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，使组织或贴壁细胞分散成单个细胞，制成细胞悬液用于进一步的实验。以下是absin胰酶部分产品，全部现货供应哦~胰蛋白酶(猪源)1:250 abs47014936本品是由猪胰提取而得的一种肽链内切酶，白色至淡黄色粉末。可用于制备单细胞悬浮液，胰蛋白酶在用于细胞培养时，可用PBS溶解成浓度为0.25%，也可以加入0.02%EDTA ，过滤除菌后使用。溶于水≥10mg/ml，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。本品具有以下特点：1、对电点pI 10.5。Ca2+对酶活性有稳定作用。 2、重金属离子、有机磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶抑制剂对其活性有强烈抑制。 3、可用于制备单细胞悬浮液或贴壁细胞的消化、分离。货号名称abs47014936猪源胰蛋白酶1:250胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) abs47014938本产品含0.25%胰酶，溶于无钙镁平衡盐溶液中，经过滤除菌，可以直接用于培养细胞和组织的消化。货号名称abs47014938胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%)胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红 abs47047375本品含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA（0.53mM），溶于无钙镁平衡盐溶液中，经过滤除菌，可以直接用于培养细胞和组织的消化。本产品具有方便快速、稳定安全、细胞状态好等特点。货号名称abs47047375胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红胰蛋白酶(牛胰) 1:2500 abs9154本品是由牛胰提取而得的一种肽链内切酶，白色或类白色粉末。溶于水，不溶于乙醇、甘油、氯仿和乙醚。其广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面。是一种专一性催化水解赖氨酸、精氨酸羧基形成的肽键，可用于蛋白质化学研究。货号名称abs9154胰蛋白酶(牛胰) 1:2500更多absin胰蛋白酶相关产品 ：货号名称abs47014938胰蛋白酶-EDTA溶液abs9154胰蛋白酶（牛胰腺）abs47047375胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红abs44073474重组牛胰蛋白酶abs47014937Trypsin (0.25%), Phenol Redabs47014936猪源胰蛋白酶1:250abs47014940胰蛋白酶,蛋白测序级abs47014939胰蛋白酶,组织培养级Absin特色产品线(全部现货)：WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)...

冷冻干燥蛋白酶是在生物制药、生物化学实验和分子生物学研究等领域中常见的操作，该过程能够保留蛋白酶的活性，延长其保存时间。以下是冷冻干燥蛋白酶的一般操作流程：1. 准备工作：选择蛋白酶： 根据实验需求选择合适的蛋白酶，确保其适用于冷冻干燥的过程。准备样品： 准备含有蛋白酶的溶液。注意溶液的浓度和成分，确保其适用于冷冻干燥处理。 2. 冷冻：样品冷冻： 将蛋白酶溶液以合适的体积倒入冷冻盘或其他冷冻容器中，然后放入冷冻设备冷阱室中，确保冷冻过程中样品均匀冷却。冷冻温度： 控制冷冻温度，通常是零下温度，使蛋白酶迅速冻结。 3. 冷冻干燥：转移： 将冷冻的样品迅速从冷阱室内转移到冷冻干燥机的干燥架上。真空抽气： 启动冷冻干燥机的真空泵，建立真空环境，抽除样品中的水分。升温阶段： 开始升温（提供样品中水分升华时所需的热量），使蛋白酶在真空条件下升华，从而去除水分。等温阶段： 在升温后的一定温度下保持稳定，确保样品中的水分充分升华。 4. 收集和存储：冷冻干燥结束： 当冷冻干燥结束后，停止真空，关闭冷冻干燥机。收集样品： 从冷冻干燥机中取出样品。注意避免受潮，尽快妥善保存。存储： 将冷冻干燥后的蛋白酶样品存储在防潮、密封的容器中，最好在-20°C以下的低温环境中保存，以确保长期稳定性。 注意事项：操作过程中要防止样品过度升温，以免影响蛋白酶的活性。确保冷冻干燥机和其他设备的清洁和维护，以保证实验的准确性和重复性。操作过程中要避免样品受到空气湿度的影响，尽量在湿度低的环境中进行。这个操作流程是一般性的指导，具体操作可能因使用的冷冻干燥机型号和蛋白酶种类而略有不同。在操作过程中，请参考设备和试剂的使用说明书，确保按照正确的步骤进行操作。

2009年11月17日，清华大学何添楼406会议室，来自全国从事多肽合成、蛋白合成、药物研发的科研人员济济一堂，其中包括 CEM Liberty 微波多肽合成仪 的已有用户、以及对CEM微波多肽合成仪和微波促进多肽合成技术感兴趣的科研人员。CEM公司多肽合成产品经理Grace Vanier就&ldquo 微波技术促进多肽合成的应用以及最新研究进展&rdquo 做了精彩报告。报告结束后，大家就Liberty多肽合成仪以及多肽合成技术问题进行了愉快的交流。　　清华大学化学系生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室主任李艳梅老师，在交流会开场时评价到：&ldquo Liberty全自动微波多肽合成仪在我们实验室成功安装后，大大缩短了多肽合成的时间，同时大大提高了多肽合成的成功几率和纯度，相信Liberty在我们今后的研究中会发挥越来越重要的作用。此次技术交流会非常有意义，希望这样的活动能够经常的举办。&rdquo 　　使用过CEM公司Liberty全自动微波多肽合成仪的用户对仪器的性能纷纷给出了很高的评价。还没有使用CEM微波多肽合成仪的老师，在听完报告后，对于Liberty在多肽合成纯度、时间、活性以及高难度多肽合成方面的卓越表现感到惊奇，特别是听到澳大利亚墨尔本大学研究人员用Liberty成功单次合成111个氨基酸多肽时，感到惊讶和不可思议。　　 　　美国CEM公司的核心产品Liberty全自动微波多肽合成仪，采用了具有革命性意义的创新环形电磁场技术，实现了多肽合成速度、纯度、难度、产率的神奇变化。自投放市场以来，受到了全球从事多肽合成相关领域研究人员的一致青睐与信任。Liberty已被公认为全球第一水平的研究级多肽合成设备。多肽合成仪 蛋白水解 蛋白酶解　　 Liberty 微波多肽合成仪　　培安科技公司　　北京：010-65528800 上海：021-51086600 成都：028-85127107 广州：020-89609288　　网站：www.pynnco.com Email: sales@pynnco.com

p　　蛋白酶体是细胞中发现和降解不需要或者受损蛋白的分子机器。这些需要被降解的蛋白会被标上特殊的标签，然后蛋白酶体上一个由6个亚基组成的“机械手”依靠ATP提供的能量，将需要降解的蛋白“抓”到蛋白酶体的降解室中。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/8fab9fd2-0c33-4660-89ee-41c68e895067.jpg" title="冷冻电镜.png" alt="冷冻电镜.png"//pp style="text-indent: 2em "美国斯克里普斯研究所(The Scripps Research Institute)的研究人员使用冷冻电镜技术，解析了这一“机械手”与需要降解的蛋白相结合时的结构。这项研究揭示了这一“机械手”的6个亚基如何利用ATP水解的能量，改变自身构象，将需要降解的蛋白装入蛋白酶体的过程。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201812/uepic/6c510877-c48f-4cb9-a059-6e0d883903da.jpg" title="冷冻电镜 FEI Titan Kiros 300kV .jpg" alt="冷冻电镜 FEI Titan Kiros 300kV .jpg"//pp style="text-align: center "span style="color: rgb(127, 127, 127) "FEI Titan Kiros 300kV 冷冻电镜（示例图）/span/p

2009年11月10日，微波实验仪器全球市场领导者&mdash &mdash CEM公司，隆重宣布其在多肽合成领域的新成员&ldquo Liberty1 单通道微波多肽合成仪&rdquo 正式面世!。　　&ldquo 与Liberty相比，Liberty1提供了一款更低价格的选择。&rdquo CEM公司总裁兼CEO，Michael J. Collins博士这样评价到，&ldquo Liberty1操作非常方便，可在几个小时内完成多肽的合成，因此研究人员不需要花上几周时间来等待他们订购的多肽产品而耽误他们的研究进程。&rdquo 　　微波多肽合成系统可以帮助研究人员合成那些用常规技术不能实现的更长、更困难多肽。同时，实现了多肽合成时间、纯度、活性等方面的神奇变化。　　目前，CEM公司在多肽合成领域的产品线更加丰富，包括：Liberty十二通道全自动微波多肽合成系统、Liberty1单通道微波多肽合成系统、Discover SPS半自动微波多肽合成系统、Accent微波多肽裂解系统。多肽合成仪 蛋白水解 蛋白酶解 Liberty1 微波多肽合成仪培安科技公司 北京：010-65528800 上海：021-51086600 成都：028-85127107 广州：020-89609288 Email: sales@pynnco.com 网址 www.pynnco.com

美国CEM公司的核心产品Liberty全自动微波多肽合成系统，采用了具有革命性意义的创新环形电磁场技术，实现了多肽合成速度、纯度、难度、产率的神奇变化。自投放市场以来，受到了全球从事多肽合成相关领域研究人员的一致青睐与信任。Liberty已被公认为全球第一水平的研究级多肽合成设备。　　Liberty全自动微波多肽合成系统在中国的销量一路攀升。我们的用户已经遍布国内顶级的科研机构，如清华大学、北京大学、军事医学科学院、中国药科大学、协和医科大学医学科学研究院、中国检验检疫科学研究院、中国石油大学生物工程中心、中国科学院、中国农业科学院等等。　　此次，我们特别邀请了美国CEM公司多肽合成产品经理 Dr. Grace Vanier来中国，就微波技术在多肽合成领域的应用以及最新研究进展，期望与国内从事多肽合成相关研究的科研人员进行广泛深入的技术交流!　　技术交流会详细信息如下：　　地点:　　清华大学何添楼406#(清华大学西北门进入，左拐直行150米左右)　　时间:　　11月17日 下午14：30&mdash &mdash 17：00　　主讲人:　　Dr. Grace Vanier，CEM公司多肽合成产品经理，负责全球微波多肽合成技术指导与应用支持，在多肽合成以及微波蛋白酶解和水解方面具有丰富的理论与实践经验。　　报告内容:　　微波技术在多肽合成领域的应用以及微波多肽合成技术的研究研究进展　　主办方:　　清华大学化学系生命有机磷化学及化学生物学教育部重点实验室 美国培安科技公司　　　　Liberty研究级微波多肽合成仪　　如果您希望参加技术交流会，请将参会回执填好后Email至：bjiang@pynnco.com 或传真至：010-65519722。如有任何疑问，请与我们联系：13501204039 010-65528800 微波消解 微波萃取 微波合成　　参会回执　　姓名 单位名称 职务/部门 电话 Email 研究领域　　培安科技公司　　北京：010-65528800 上海：021-51086600 成都：028-85127107 广州：020-89609288　　Email: sales@pynnco.com

根据《食品添加剂新品种管理办法》和《食品添加剂新品种申报与受理规定》，食品工业用酶制剂新品种丝氨酸蛋白酶、扩大使用范围的食品添加剂乳酸钙和三赞胶的申请，其安全性和工艺必要性已通过专家评审委员会技术审查（具体情况见附件），现公开征求意见。请于2023年5月22日前将相关意见反馈至我中心邮箱（zqyj@cfsa.net.cn）,逾期将视为无意见。丝氨酸蛋白酶等3 种食品添加剂新品种相关材料.pdf

大家好，本周向大家分享Nature Communications上的一篇文章，题目为Native metabolomics identifies the rivulariapeptolide family of protease inhibitors，文章共两位通讯作者，分别为加州大学圣地亚哥分校的William H. Gerwick教授与德国图宾根大学的Daniel Petras博士，两课题组分别研究海洋天然产物与功能代谢组学。天然产物指各种生命体中化学结构丰富、生物活性多样的特殊代谢物，在药物发现中发挥了十分重要的作用。目前，传统的正向、反向化学遗传学，均依赖于纯化的代谢物小分子进行生物活性的研究，使得系统发现药物活性小分子面临着周期长、工作量大等一系列不足。本篇工作结合超高效液相（UHPLC）、天然质谱（native MS）、串联质谱（tandem MS），发展了一种功能代谢组学的分析技术，在推进新颖天然产物的反向化学遗传学研究上具有重要意义。首先对该技术的实验流程进行简要介绍。在获得天然产物的甲醇粗提物后，对其进行RP-UHPLC分离。考虑到色谱分离一般使用酸性条件，且使用乙腈作为流动相，与native MS并不兼容，作者在柱后引入辅助泵，通过醋酸铵水溶液将pH值调节到类似天然的条件。最终，使用第二个辅助泵向体系中注入目标蛋白，并通过质谱测量产生的蛋白质-代谢物复合物。考虑到潜在的非特异性相互作用，作者选择全离子碎裂模式（all-ion fragmentation），并设置碰撞能量阈值为20 %。此外，作者还进行了不注入蛋白的实验组，作为参照的代谢组学分析结果。在本文中，研究人员选择的模式目标蛋白为糜蛋白酶（chymotrypsin），模式代谢粗提物来自蓝藻，以筛选新颖的蛋白酶抑制剂。在建立上述方法的过程中，研究人员优化了native MS的pH与乙酸铵浓度，并使用已知糜蛋白酶抑制剂molassamide，揭示该方法检测蛋白-代谢物相互作用的检测限约为0.1-1 µ g/mL，并证实在含有40 %有机溶剂的场景下研究上述相互作用的可行性。接下来，研究人员对所获得的数据进行分析。相比于未结合糜蛋白酶，代谢物-糜蛋白酶复合物会产生一定的m/z迁移，其质量对应于与该蛋白质结合的小分子。同时，复合物相对于未结合糜蛋白酶的质谱峰强度比一定程度上揭示了在实验条件下的特定代谢物结合的亲和力。基于天然质谱中复合物出现的洗脱时间以及代谢物的分子质量，研究人员进一步从不含糜蛋白酶的代谢组学结果中寻找对应的代谢物小分子串联质谱图，并利用化学信息学手段初步分析代谢物的分子结构。随后，基于上述信息，研究人员对目标小分子进行针对性纯化，利用多种NMR技术实现精确的结构鉴定，并将获得的这类新颖结构的小分子命名为rivulariapeptolide，于体外证实上述分子对糜蛋白酶活性的抑制。综上，本篇工作结合超高效液相、天然质谱、串联质谱技术，发展了一种功能代谢组学的分析技术，并将其应用于蓝藻生物膜中糜蛋白酶抑制剂的筛选，发现了rivulariapeptolide这类新颖的nM水平蛋白酶抑制剂。原文地址：https://www.nature.com/articles/s41467-022-32016-6

上海远慕是国内elisa试剂盒优质供应商，本司代理销售不同elisa试剂盒品牌的进口/国产elisa试剂盒，专业供应科研实验所需的培养基，抗体，动物血清血浆，标准品对照品，化学试剂，酶联免疫试剂盒，白介素试剂盒，金标检测试剂盒，微生物，蛋白质，ELISA种属涵盖广，凭借多年行业经验，完善的售后服务，高质量的产品，赢得客户一致好评，欢迎来电咨询！ 客户通过仪器信息网订购远慕苹果酸钠、胃蛋白酶、猪胆盐 【苹果酸钠676-46-0】产品详情介绍如下： 产品名称：苹果酸钠676-46-0 产品规格： BR，98% 产品包装： 500毫升，25克（大包装电询） 库存状态： 现货 产品用途： 科研实验 运输方式： 快递送货上门（特殊条件下保存的产品我司会用专业的包装盒进行包装，请放心购买） 【苹果酸钠676-46-0】生物试剂的使用常识： （1）试剂切忌与手接触（有些试剂有强腐蚀性、等特性）。 （2）要用洁净的药勺，量筒或滴管取用试剂，绝对不允许用同一种工具同时连续取用多种试剂。取完一种试剂后，应将工具洗净（药勺要擦干）后，才可取用另一种试剂。 （3）试剂取用后一定要将瓶塞盖紧，不可放错瓶盖和滴管，绝不允许张冠李戴，用完后请及时将瓶放回原处，以免遗忘，带来不便。 （4）已取出的试剂不能再放回原试剂瓶内（怕产生原试剂的再次污染）。 我们给这位客户介绍了该产品并报完价格发去产品说明书，客户和我们沟通的非常顺畅，了解我们的产品后，客户对我们非常有信心，当即就下了订单，下面是和客户的沟通记录： 远慕生物，专业供应科研实验所需的培养基，抗体，动物血清血浆，标准品对照品，化学试剂，酶联免疫试剂盒，白介素试剂盒，金标检测试剂盒，微生物，蛋白质，ELISA种属涵盖广，凭借多年行业经验，完善的售后服务，高质量的产品，赢得客户一致好评，欢迎来电咨询与订购！

大体积、高精度、高均匀性，符合有机合成化学多样化要求和精确性要求。　　CEM Discover 环形聚焦单模微波微波合成系统已经成为全球最畅销的单模微波反应器，使传统的30mL单模技术扩展到300mL,使其完美定量耦合势阱效应，和11通道单模的Auto-Tunning高精度调节技术，实现了单模技术平台量和质的飞跃，不仅实现了合成反应边界条件的定量性和重复性，使其突破并扩展到更多样性的合成化学的要求。从低温到高温，从小样品到大样品，全系列各种功能的自由扩展，实现从小分子合成直至中药萃取的各种应用，帮助化学家们进行前沿性R&D研究。这是世界上其他同类单模微波合成产品都无法比拟的。300mL环形聚焦单模-大体积、高精度、高均匀性 2003年CEM推出大型环形单模合成反应器 Discover，实现了单模谐振腔从30mL到300mL的扩展，Auto-Tuning 自动改变多耦合（11通道）的专利技术，通过环形单模多通道进行聚焦辐射，行程能势阱效应，提高能量耦合均匀性，不受反应物体积尺寸和极性变化的影响，而且可提高大规模反应的转化率。确保体积变化时反应条件和结果的重复性和再现性。多通道能量耦合使控制精度提高10-40倍，自动调控密度0-900W/L。实现了单模技术量和质的突破，使单模的平台扩展到更适合多样性的合成化学，远胜于驻波型单通道单模微波。2003年7月经ACS推荐，荣获R&D100技术创新大奖。 300mL环形聚焦单模技术专利获2003年R&D100技术创新大奖传统30mL驻波单模的空间扩展性的限制 传统驻波单模技术已有30年的历史，其特点是单通道单向高密度耦合，市场上已有多家供应商。但单模能量界面直径为2.5cm，腔体体积只有30mL，只能放入10-15ml容器，大于20mL易失去微波场平衡，导致耦合位置排斥，影响单模耦合的一致性。另一个缺点是单模功率受腔体限制，因高密度小体积极易产生瞬间泄漏和过强量热耦合损坏反应物，从而造成研究失败。控制精度随功率提高迅速降低，单模精度± 3-9W。总之单模小腔体限制扩大反应、加气反应、机械搅拌、循环回流、连续流动和低温反应能力。微波消解 微波合成更多 有关CEM Discover 环形聚焦单模微波微波合成系统 详情请浏览 http://www.pynnco.com , 或咨询：电话：010-65528800，传真：010-65519722，邮件 sales@pynnco.com

由日本宫崎大学医学部的澤口朗教授率领的研究团队，充分发挥低真空电子显微镜对于光学显微镜用的切片在不做任何减轻荷电处理下就能进行观察的特点，开发了在医学、生物学研究领域有重大意义的蛋白酶和基因的定位标记新方法。关于阐述该方法的论文被刊载在了Nature旗下的一本开放获取期刊「Communications Biology」上面。　 之前被大家熟知的包埋后标记法是要首先结合金纳米颗粒进行抗体的调制，然后将包埋在树脂里面的观察对象作成超薄的切片然后进行抗体的标记。这一过程需要很长的时间和熟练的技巧。本次新开发出来的研究方法是要将光学显微镜中被广泛使用的石蜡切片或者冻结切片，通过酵素抗体法标识二氨基联苯胺（DAB）后，通过0.01%氯金酸溶液处理后在DAB标识部分形成金纳米颗粒（平均粒子径＝6 nm），然后再37℃下将其保存12小时，通过维持高湿度的环境下培育金纳米颗粒（平均粒子径＝47 nm）实现可视化的具有划时代意义的新方法，因此备受关注。 论文中证明了15年前被标记DAB的切片上有进行过金纳米颗粒的形成以及培养，使用电子显微镜对在库房保存的光学电子显微镜标本进行了再论证，还记载了CLEM（Correlative Light and Electron Microscopy）免疫电子显微镜标记和in-situ hybridization电子显微镜标记的实际案例。低真空扫描电子显微可以说填补了光学显微镜与电子显微镜之间的空白，新的方法利用了这个特性，今后会在医学・生物学研究方面广泛的应用，对于加速及促进生物组织、构成细胞的组织及机能等的研究将会发挥巨大作用。 一直以来有使用蛋白质的抗体以及标识RNA的In Situ Hybridization法等多种手法，本次发表的内容是通过培养Nanogold颗粒然后使用电子显微镜来进行可视化定位的新方法。本次论文发表的研究过程中，日立的透射电子显微镜和台式电子显微镜发挥了重大作用。　　　　　　　　　　　日立透射电子显微镜HT7800 日立台式扫描电子显微镜TM4000 II Communications Biology volume 4, Article number: 710 (2021) 查看更多图文内容，请点击下方阅读原文：https://www.nature.com/articles/s42003-021-02246-3 公司介绍：日立科学仪器（北京）有限公司是世界500强日立集团旗下日立高新技术有限公司在北京设立的全资子公司。本公司秉承日立集团的使命、价值观和愿景，始终追寻“简化客户的高科技工艺”的企业理念,通过与客户的协同创新，积极为教育、科研、工业等领域的客户需求提供专业和优质的解决方案。 我们的主要产品包括：各类电子显微镜、原子力显微镜等表面科学仪器和前处理设备，以及各类色谱、光谱、电化学等分析仪器。为了更好地服务于中国广大的日立客户，公司目前在北京、上海、广州、西安、成都、武汉、沈阳等十几个主要城市设立有分公司、办事处或联络处等分支机构，直接为客户提供快速便捷的、专业优质的各类相关技术咨询、应用支持和售后技术服务，从而协助我们的客户实现其目标，共创美好未来。

公司主营产品：ELISA 试剂盒，ELISA免费代测，中国标准品，生化试剂，科研抗体，美国ATCC细胞株，生物培养基等产品经营.人肿瘤坏死因子&alpha (TNF-&alpha )ELISA试剂盒 Human Tumor necrosis factor &alpha ,TNF-&alpha ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA试剂盒 Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅱ,TNFsR-Ⅱ ELISA试剂盒人肿瘤坏死因子可溶性受体Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA试剂盒 Human Tumor necrosis factor soluble receptor Ⅰ,TNFsR-ⅠELISA试剂盒人转化生长因子&beta 1(TGF-&beta 1)ELISA试剂盒 Human Transforming Growth factor &beta 1,TGF-&beta 1 ELISA试剂盒人转化生长因子&alpha (TGF-&alpha )ELISA试剂盒 Human transforming growth factor &alpha ,TGF-&alpha ELISA试剂盒人基质细胞衍生因子1&beta (SDF-1&beta /CXCL12)ELISA试剂盒 Human Stromal cell derived factor 1&beta ,SDF-1&beta ELISA试剂盒人干细胞因子受体(SCFR)ELISA试剂盒 Human Stem Cell Factor Receptor,SCFR ELISA试剂盒人干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒 Human Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA试剂盒人可溶性CD40配体(sCD40L)ELISA试剂盒 Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand,sCD40L ELISA试剂盒人可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒 Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand,sCD30L ELISA试剂盒人正常T细胞表达和分泌因子(RANTES/CCL5)ELISA试剂盒 Human regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA试剂盒人P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒 Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISA试剂盒人血血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)ELISA试剂盒 Human Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA试剂盒人血血小板衍生生长因子可溶性受体&alpha (PDGFsR-&alpha )ELISA试剂盒 Human Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor &alpha ,PDGFsR-&alpha ELISA试剂盒人神经营养因子4(NT-4)ELISA试剂盒 Human Neurotrophin 4,NT-4 ELISA试剂盒人神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒 人神经营养因子3(NT-3)ELISA试剂盒人的神经生长因子(NGF)ELISA试剂盒 Human Nerve growth factor,NGF ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白3&beta (MIP-3&beta /ELC/CCL19)ELISA试剂盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-3&beta ,MIP-3&beta ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白3&alpha (MIP-3&alpha /CCL20)ELISA试剂盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-3&alpha ,MIP-3&alpha ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白1&beta (MIP-1&beta /CCL4)ELISA试剂盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-1&beta ,MIP-1&beta ELISA试剂盒人巨噬细胞炎性蛋白1&alpha (MIP-1&alpha /CCL3)ELISA试剂盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-1&alpha ,MIP-1&alpha ELISA试剂盒人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒 Human Macrophage-Derived Chemokine,MDC ELISA试剂盒人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒 Human Macrophage-Derived Chemokine,MDC ELISA试剂盒人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)ELISA试剂盒 Human Macrophage Colony-Stimulating Factor,M-CSF ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白3(MCP-3/CCL7)ELISA试剂盒 Human monocyte chemotactic protein 3,MCP-3 ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白2(MCP-2/CCL8)ELISA试剂盒 Human monocyte chemotactic protein 2,MCP-2 ELISA试剂盒人单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒 Human monocyte chemotactic protein 1/monocyte chemotactic and activating factor,MCP-1/MCAF ELISA试剂盒人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒 Human L-Selectin ELISA试剂盒人白介素9(IL-9)ELISA试剂盒 Human Interleukin 9,IL-9 ELISA试剂盒人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒 Human Interleukin 8,IL-8 ELISA试剂盒人白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 Human Interleukin 6,IL-6 ELISA试剂盒人白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒 Human Interleukin 5,IL-5 ELISA试剂盒人白介素4(IL-4)ELISA试剂盒 Human Interleukin 4,IL-4 ELISA试剂盒人白介素3(IL-3)ELISA试剂盒 Human Interleukin 3,IL-3 ELISA试剂盒人白介素2可溶性受体&beta 链(IL-2sR&beta )ELISA试剂盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA试剂盒人白介素2可溶性受体&alpha 链(IL-2sR&alpha /CD25)ELISA试剂盒 Human soluble interleukin-2 receptor,IL-2sR&alpha ELISA试剂盒人白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA试剂盒人白介素1&alpha (IL-1&alpha )ELISA试剂盒 Human Interleukin 1&alpha ,IL-1&alpha ELISA试剂盒人白介素1可溶性受体Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA试剂盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA试剂盒人白介素1可溶性受体Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA试剂盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA试剂盒人白介素16(IL-16)ELISA试剂盒 Human Interleukin 16,IL-16 ELISA试剂盒人白介素13(IL-13)ELISA试剂盒 Human Interleukin 13,IL-13 ELISA试剂盒人白介素12(IL-12/P70)ELISA试剂盒 Human Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA试剂盒人白介素12(IL-12/P40)ELISA试剂盒 Human Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA试剂盒人白介素11(IL-11)ELISA试剂盒 Human Interleukin 11,IL-11 ELISA试剂盒人白介素10(IL-10)ELISA试剂盒 Human Interleukin 10,IL-10 ELISA试剂盒人胰岛素样生长因子结合蛋白4(IGFBP-4)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors binding protein 4,IGFBP-4 ELISA试剂盒人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors binding protein 3,IGFBP-3 ELISA试剂盒人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors binding protein 2,IGFBP-2 ELISA试剂盒人胰岛素样生长因子结合蛋白1(IGFBP-1)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors binding protein 1,IGFBP-1 ELISA试剂盒人胰岛素样生长因子2(IGF-2)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors 2,IGF-2 ELISA试剂盒人胰岛素样生长因子1(IGF-1)ELISA试剂盒 Human insulin-like growth factors 1,IGF-1 ELISA试剂盒人&gamma 干扰素(IFN-&gamma )ELISA试剂盒 Human Interferon &gamma ,IFN-&gamma ELISA试剂盒人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒 Human intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1 ELISA试剂盒人肝细胞生长因子(HGF)ELISA试剂盒 Human hepatocyte growth factor,HGF ELISA试剂盒人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒 Human Granulocyte-Macrophage Colony Stimulating Factor,GM-CSF ELISA试剂盒人胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA试剂盒 Human glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF ELISA试剂盒人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒 Human Granulocyte Colony Stimulating Factor,G-CSF ELISA试剂盒人中性粒细胞趋化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA试剂盒 Human neutrophil activating protein-2,NAP-2 ELISA试剂盒人趋化因子(fractalkine/CX3CL1) ELISA试剂盒 Human fractalkine/CX3CL1 ELISA试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA试剂盒 Human basic fibroblast growth factor 9,bFGF-9 ELISA试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒 Human basic fibroblast growth factor 6,bFGF-6 ELISA试剂盒人碱性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒 Human basic fibroblast growth factor 4,bFGF-4 ELISA试剂盒人酸性成纤维细胞生长因子1(aFGF-1)ELISA试剂盒 Human acidic fibroblast growth factor 1,aFGF-1 ELISA试剂盒人凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒 Human Factor-related Apoptosis ligand,FASL ELISA试剂盒人凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒 Human Factor-related Apoptosis,FAS ELISA试剂盒人E选择素(E-Selectin/CD62E)ELISA试剂盒 Human E-Selectin ELISA试剂盒人嗜酸粒细胞趋化蛋白Eotaxin 1(Eotaxin 1/CCL11)ELISA试剂盒 Human Eotaxin 1 ELISA试剂盒人鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA试剂盒 Human eosinophil chemotactic factor,ECF ELISA试剂盒人内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒 Human Endocrine gland vascular endothelial growth factor,EG-VEGF ELISA试剂盒人睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒 Human Ciliary Neurotrophic Factor,CNTF ELISA试剂盒人CD30分子(CD30)ELISA试剂盒 Human Cluster of differentiation 30,CD30 ELISA试剂盒人CXC趋化因子受体1(CXCR1)ELISA试剂盒 Human CXC-chemokine receptor 1,CXCR1 ELISA试剂盒人XC趋化因子受体1(XCR1)ELISA试剂盒 Human XC-chemokine receptor 1,XCR1 ELISA试剂盒人二级淋巴组织趋化因子(SLC/CCL21)ELISA试剂盒 Human secondary lymphoid-tissue chemokine,SLC ELISA试剂盒人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒 Human E-Cadherin,E-Cad ELISA试剂盒人脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒 Human Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA试剂盒人白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒 Human Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule,ALCAM ELISA试剂盒人活化素A(ACV-A)ELISA试剂盒 Human Activin A,ACV-A ELISA试剂盒人神经调节蛋白1(NRG-1)ELISA试剂盒 human Neuregulin 1,NRG-1 ELISA试剂盒人心钠肽(ANP)ELISA试剂盒 Human Atrial Natriuretic Peptide,ANP ELISA试剂盒人多巴胺D2受体(D2R)ELISA试剂盒 Human dopamine D2 receptor,D2R ELISA试剂盒人内吗啡肽-2(EM-2)ELISA试剂盒 Human endomorphin-2,EM-2 ELISA试剂盒人&alpha -内吗啡肽(&alpha -EP)ELISA试剂盒 Human &alpha -Endomorphin,&alpha -EP ELISA试剂盒人抑制素(INH)ELISA试剂盒 Human Inhibin,INH ELISA试剂盒人神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)ELISA试剂盒 Human neuronal apoptosis inhibitory protein,NAIP ELISA试剂盒人食欲素/阿立新B(OX-B)ELISA试剂盒 Human Orexin B,OX-B ELISA试剂盒人促睡眠肽(DSIP)ELISA试剂盒 Human delta sleep-inducing peptide,DSIP ELISA试剂盒人6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒 Human 6-hydroxydopamine,6-OHDA ELISA试剂盒人心纳素(ANF)ELISA试剂盒 Human atrial natriuretic factor,ANF ELISA试剂盒人神经髓鞘蛋白(p2)ELISA试剂盒 Human myelin protein 2,p2 ELISA试剂盒人精氨酸加压素(AVP)ELISA试剂盒 Human arginine vasopressin,AVP ELISA试剂盒人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒 Human pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA试剂盒人微管相关蛋白2(MAP-2)ELISA试剂盒 Human microtubule-associated protein 2,MAP-2 ELISA试剂盒人神经丝蛋白(NF)ELISA试剂盒 Human neurofilament protein,NF ELISA试剂盒人利钾尿肽(KP)ELISA试剂盒 Human kaliuretic peptide,KP ELISA试剂盒人神经降压素(NT)ELISA试剂盒 Human Neurotensin,NT ELISA试剂盒人神经激肽B(NKB)ELISA试剂盒 Human Neurokinins B,NKB ELISA试剂盒人强啡肽(Dyn)ELISA试剂盒 Human dynorphin,Dyn ELISA试剂盒人脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒 Human enkephalin,ENK ELISA试剂盒人&gamma 肽(P&gamma )ELISA试剂盒 Human Peptide &gamma ,P&gamma ELISA试剂盒人C型钠尿肽(CNP)ELISA试剂盒 Human C -type natriuretic peptide,CNP ELISA试剂盒人阿立新A(Orexin A)ELISA试剂盒 Human Orexin A ELISA试剂盒人神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒 Human neuropeptide Y,NP-Y ELISA试剂盒人脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA试剂盒 Human brain-gut peptides,BGP/Gehrelin ELISA试剂盒人乙酰胆碱(ACH)ELISA试剂盒 Human acetylcholine,ACH ELISA试剂盒人脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒 Human brain natriuretic peptide,BNP ELISA试剂盒人细胞角蛋白20(CK20)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 20,CK20 ELISA试剂盒人&beta 内啡肽(&beta -EP)ELISA试剂盒 human Beta-Endorphin,&beta -EP ELISA试剂盒人N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒 Human N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP ELISA试剂盒人前心钠肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒 Human Pro Atrial Natriuretic Peptide,Pro-ANP ELISA试剂盒人细胞角蛋白13(CK-13)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 13,CK-13 ELISA试剂盒人细胞角蛋白17(CK17)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 17,CK-17 ELISA试剂盒人制瘤素M受体(OSMR)ELISA试剂盒 human oncostatin M receptor,OSMR ELISA试剂盒人B细胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA试剂盒 human B-cell leukemia/lymphoma 3,Bcl3 ELISA试剂盒人癌蛋白诱导转录物3(OIT3)ELISA试剂盒 human oncoprotein induced transcript 3,OIT3 ELISA试剂盒人P27蛋白(P27)ELISA试剂盒 Human P27 protein ELISA试剂盒人P糖蛋白/渗透性糖蛋白(P-gp)ELISA试剂盒 Human permeability glycoprotein,P-gp ELISA试剂盒人大肠癌专一抗原3(CCSA-3)ELISA试剂盒 Human colon cancer-specific antigen-3,CCSA-3 ELISA试剂盒人大肠癌专一抗原2(CCSA-2)ELISA试剂盒 Human colon cancer-specific antigen-2,CCSA-2 ELISA试剂盒人大肠癌专一抗原4(CCSA-4)ELISA试剂盒 Human colon cancer-specific antigen-4,CCSA-4 ELISA试剂盒人粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA试剂盒 Human mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA试剂盒人肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒 Human Intestinal trefoil factor,ITF ELISA试剂盒人Dickkopf 1(DKK1)ELISA试剂盒 Human Dickkopf 1,DKK1 ELISA试剂盒人激肽释放酶11(KLK 11)ELISA试剂盒 Human Kallikrein 11,KLK 11 ELISA试剂盒人生长调节致癌基因&gamma /黑素瘤生长刺激因子(GRO&gamma /CXCL3/MGSA)ELISA试剂盒 Human growth-regulated oncogene&gamma /melanoma growth stimulating activity,GRO&gamma /MGSA ELISA试剂盒人生长调节致癌基因&beta /黑素瘤生长刺激因子(GRO&beta /CXCL2/MGSA)ELISA试剂盒 Human growth-regulated oncogene&beta /melanoma growth stimulating activity,GRO&beta /MGSA ELISA试剂盒人美丽线虫凋亡基因(CED-3)ELISA试剂盒 Human caenorhabditis elegans death gene,CED-3 ELISA试剂盒人胸腺白血病抗原(TLa)ELISA试剂盒 Human thymus-leukemia antigen,TLa ELISA试剂盒人肿瘤特异性移植抗原(TSTA)ELISA试剂盒 Human tumor specific transplantation antigen,TSTA ELISA试剂盒人足细胞标记蛋白/足盂蛋白(PCX)ELISA试剂盒 Human Podocalyxin,PCX ELISA试剂盒人乳腺癌易感蛋白1(BRCA-1)ELISA试剂盒 Human breast cancer susceptibility protein 1,BRCA-1 ELISA试剂盒人T细胞急性淋巴母细胞白血病相关抗原(TALLA-1/CD231)ELISA试剂盒 Human T-cell acute lymphoblastic leukemia antigen,TALLA-1 ELISA试剂盒人核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)ELISA试剂盒 Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins,Ag-NORs ELISA试剂盒人硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒 Human Thioredoxin,Trx ELISA试剂盒人窖蛋白(Cav-1)ELISA试剂盒 Human Caveolin-1,Cav-1 ELISA试剂盒人普通急性淋巴细胞白血病抗原(CALLA)ELISA试剂盒 Human common acute lymphocytic leukaemia antigen,CALLA ELISA试剂盒人黑色素细胞刺激素(MSH)ELISA试剂盒 Human melanocyte stimulating hormone,MSH ELISA试剂盒人表皮角蛋白(EK)ELISA试剂盒 Human epidermal keratin,EK ELISA试剂盒人细胞角蛋白21-1片段(CYFRA21-1)ELISA试剂盒 Human cytokeratin fragment antigen 21-1,CYFRA21-1 ELISA试剂盒人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒 Human carbohydrate-deficient transferrin,CDT ELISA试剂盒人桥粒芯糖蛋白-1(DGS-E1)ELISA试剂盒 Human desmogleins 1,DGS-E1 ELISA试剂盒人肿瘤标志物(CA724)ELISA试剂盒 Human CA724 ELISA试剂盒人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)ELISA试剂盒 Human neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL ELISA试剂盒人非小细胞肺癌抗原(LTA)ELISA试剂盒 Human nonsmall cell lung cancer/Lung tumor Antigen,LTA ELISA试剂盒人肺癌标志物DR-70(DR-70TM)ELISA试剂盒 Human tumor marker DR-70 for lung cancer,DR-70TM ELISA试剂盒人胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)ELISA试剂盒 Human fetal sulfoslycoprotein antigen,FSA ELISA试剂盒人本周蛋白(BJP) ELISA试剂盒 Human Bence-Jones protein,BJP ELISA试剂盒人癌胚铁蛋白(CEF) ELISA试剂盒 Human Carcinoembryonic Ferritin,CEF ELISA试剂盒人鳞状细胞癌相关抗原(SCCAg)ELISA试剂盒 Human squamous cell carcinoma related antigen,SCCAg ELISA试剂盒人肿瘤特异性抗原(TSA) ELISA试剂盒 Human tumor specific antigen,TSA ELISA试剂盒人黑色素瘤转移表面黏附分子(MMSAM)ELISA试剂盒 Human melanoma metastasis surface adhesion molecule,MMSAM ELISA试剂盒人乳腺癌易感蛋白2(BRCA-2)ELISA试剂盒 Human breast cancer susceptibility protein 2,BRCA-2 ELISA试剂盒人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒 Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISA试剂盒人凋亡信号调节激酶I(ASK-1)ELISA试剂盒 Human apoptosis signal regulating kinase 1,ASK-1 ELISA试剂盒人Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒 Human Bcl-2 associated X protein, Bax ELISA试剂盒人转移因子(TF)ELISA试剂盒 Human Transfer factor,TF ELISA试剂盒人结肠癌抗原(CCA)ELISA试剂盒 Human Colon Cancer Antigen,CCA ELISA试剂盒人H-ras ELISA试剂盒 Human H-ras ELISA试剂盒人c-sis ELISA试剂盒 Human c-sis ELISA试剂盒人c-jun ELISA试剂盒 Human c-jun ELISA试剂盒人c-fos ELISA试剂盒 Human c-fos ELISA试剂盒人c-myc癌基因产物(c-myc)ELISA试剂盒 Human c-myc Oncogene product,c-myc ELISA试剂盒人Smad1 ELISA试剂盒 Human Mothers against decapentaplegic homolog 1,Smad1 ELISA试剂盒人Smad7 ELISA试剂盒 Human Mothers against decapentaplegic homolog 7,Smad7 ELISA试剂盒人肿瘤相关抗原(TAA)ELISA试剂盒 Human tumor-associated antigen,TAA ELISA试剂盒人TGF-&beta 诱导早期基因1(TIEG1)ELISA试剂盒 Human TGF-beta-inducible early response gene-1,TIEG1 ELISA试剂盒人肿瘤血管生长因子(TAF)ELISA试剂盒 Human tumor angiogenesis factors,TAF ELISA试剂盒人细胞角蛋白20(CK-20)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 20,CK-20 ELISA试剂盒人细胞角蛋白19(CK-19)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 19,CK-19 ELISA试剂盒人细胞角蛋白18(CK-18)ELISA试剂盒 Human cytokeratin 18,CK-18 ELISA试剂盒人嗜铬蛋白A(CgA)ELISA试剂盒 Human Chromogranin,CgA ELISA试剂盒人视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA试剂盒 Human retinoblastoma tumor suppressor protein,pRB ELISA试剂盒人生长调节致癌基因&alpha /黑素瘤生长刺激因子(GRO&alpha /CXCL1/MGSA)ELISA试剂盒 Human growth-regulated oncogene&alpha /melanoma growth stimulating activity,GRO&alpha /MGSA ELISA试剂盒人成熟促进因子(MPF)ELISA试剂盒 Human maturation promoting factor,MPF ELISA试剂盒人去唾液酸糖蛋白受体(AGSPR)ELISA试剂盒 Human asialoglyco protein receptor,AGSPR ELISA试剂盒人可溶性转铁蛋白受体(sTfR)ELISA试剂盒 Human soluble transferrin receptor,sTfR ELISA试剂盒人金属硫蛋白(MT)ELISA试剂盒 Human Metallothionein,MT ELISA试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)ELISA试剂盒 Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 3,AFP-L3 ELISA试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体2(AFP-L2)ELISA试剂盒 Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2,AFP-L2 ELISA试剂盒人小扁豆素结合型甲胎蛋白/甲胎蛋白异质体1(AFP-L1)ELISA试剂盒 Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1,AFP-L1 ELISA试剂盒人黑色素瘤标记物(MART/Melan-A)ELISA试剂盒 Human Melanoma Marker A,MART/Melan-A ELISA试剂盒人高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)ELISA试剂盒 Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA试剂盒人肝癌抗原(PHC)ELISA试剂盒 Human primary hepatic carcinoma,PHC ELISA试剂盒人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒 Human apoptosis protease activating factor-1,Apaf-1 ELISA试剂盒人鼻咽癌(NPC)ELISA试剂盒 Human nasopharyngeal carcinoma,NPC ELISA试剂盒人膀胱癌抗原(UBC)ELISA试剂盒 Human urinary bladder cancer antigen,UBC ELISA试剂盒人广谱细胞角蛋白(P-CK)ELISA试剂盒 Human pan-cytokeratin,P-CK ELISA试剂盒人癌基因蛋白质p190/bcr-abl ELISA试剂盒 Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA试剂盒Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA试剂盒人膀胱肿瘤抗原(BTA)ELISA试剂盒 Human Bladder tumor antigen,BTA ELISA试剂盒人中期因子(MK)ELISA试剂盒 Human Midkine,MK ELISA试剂盒人BH3结构域凋亡诱导蛋白(Bid)ELISA试剂盒 Human BH3 interacting domain death agonist,Bid ELISA试剂盒人B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒 Human B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISA试剂盒人肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TGSF)ELISA试剂盒 Human Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TGSF ELISA试剂盒人色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒 Human pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA试剂盒人克拉拉细胞蛋白(CC16) ELISA试剂盒 Human Clara cell protein,CC16 ELISA试剂盒人低氧诱导因子1&alpha (HIF-1&alpha )ELISA试剂盒 Human hypoxia-inducible factor 1&alpha ,HIF-1&alpha ELISA试剂盒人黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA试剂盒 Human melanocyte antibody,MC Ab ELISA试剂盒人转铁蛋白受体(TFR/CD71)ELISA试剂盒 Human transferrin receptor,TFR ELISA试剂盒人P53(P53)ELISA试剂盒 Human p53/tumor protein, p53/TP53 ELISA试剂盒人细胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA试剂盒 Human Cyclin-D3 ELISA试剂盒人细胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA Human Cyclin-D2 ELISA试剂盒人细胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA试剂盒 Human Cyclin-D1 ELISA试剂盒人内皮抑素(ES)ELISA试剂盒 Human Endostatin,ES ELISA试剂盒人铁蛋白(FE)ELISA试剂盒 Human ferritin,FE ELISA试剂盒人微量转铁蛋白(MTF)ELISA试剂盒 Human microtransferrinuria,MTF ELISA试剂盒人基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒 Human tissue inhibitor of metal protease 1,TIMP-1 ELISA试剂盒人髓鞘碱性蛋白抗体(MBP)ELISA试剂盒 Human myelin basic protein autoantibody,MBP ELISA试剂盒人组织多肽抗原(TPA)ELISA试剂盒 Human Tissue Polypeptide Antigen,TPA ELISA试剂盒人肺癌标志物ELISA试剂盒 human lung cancer Marker ELISA试剂盒人胃癌标志物ELISA试剂盒 human gastric carcinoma Marker ELISA试剂盒人鳞状上皮细胞癌抗原2(SCCAg-2)ELISA试剂盒 Human Squamous Cell Carcinoma Antigen 2,SCCAg 2 ELISA试剂盒人胰腺癌标志物CA242ELISA试剂盒 Human Pancreatic carcinoma markers-CA242 ELISA试剂盒人胃肠癌标志物CA199ELISA试剂盒 Human Gastrointestinalcancer Marker-CA199 ELISA试剂盒人乳腺癌标志物-CA153ELISA试剂盒 Human mammary carcinoma Marker-CA153 ELISA试剂盒人卵巢癌标志物CA125ELISA试剂盒 Human ovarian cancer marker-CA125 ELISA试剂盒人甲种胎儿球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA试剂盒 Human Alpha-fetoprotein,AFP ELISA试剂盒人癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA试剂盒 Human carcinoembryonic antign,CEA ELISA试剂盒人基质金属蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)ELISA试剂盒 Human tissue inhibitors of metalloproteinase 4,TIMP-4 ELISA试剂盒人基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)ELISA试剂盒 Human tissue inhibitors of metalloproteinase 3,TIMP-3 ELISA试剂盒人基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)ELISA试剂盒 Human tissue inhibitors of metalloproteinase 2,TIMP-2 ELISA试剂盒人抑瘤素M(OSM)ELISA试剂盒 Human Oncostatin-M,OSM ELISA试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白D(SP-D)ELISA试剂盒 Human Pulmonary surfatcant-associated protein D,SP-D ELISA试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA试剂盒 Human Pulmonary surfatcant-associated protein C,SP-C ELISA试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白B(SP-B)ELISA试剂盒 Human Pulmonary surfatcant-associated protein B,SP-B ELISA试剂盒人表面活性蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒 Human Surfactant Protein A,SP-A ELISA试剂盒人肺炎支原体抗体(MP-Ab)ELISA Ki Human Mycoplasma pneumoniae antibody,MP-Ab ELISA试剂盒人肺炎衣原体抗体(Cpn-Ab)ELISA试剂盒 Human Chlamydia pneumoniae antibody,Cpn-Ab ELISA试剂盒人肺耐药蛋白(LRP)ELISA试剂盒 Human Lung resistance-related protein,LRP ELISA试剂盒人&alpha 1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA试剂盒 Human Alpha1 Antichymotrypsin,AACT ELISA试剂盒人肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒 Human Pulmonary surfatcant-associated protein A,SP-A ELISA试剂盒人幽门螺杆菌细胞毒素相关基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA试剂盒 Human Helicobacter pylori cytotoxin-associated gene A protein IgG,HP-CagA-IgG ELISA试剂盒人粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA试剂盒 Human Mucin-7,MUC7 ELISA试剂盒人转谷氨酰胺酶2C多肽(TGM2)ELISA试剂盒 human tranGSlutaminase 2C polypeptide,TGM2 ELISA试剂盒人Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)ELISA试剂盒 Human procollagen Ⅰ N-terminal peptide,PⅠNP ELISA试剂盒人Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(ⅠCTP)ELISA试剂盒 Human Cross-linked Carboxy-terminal telopeptide of type Ⅰ collagen,ⅠCTP ELISA试剂盒人Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒 Human C-telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-Ⅰ ELISA试剂盒人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA试剂盒 Human Mucin-5 subtype AC,MUC5AC ELISA试剂盒人丙氨酸转氨酶/谷丙转氨酶(ALT/GPT)ELISA试剂盒 Human Alanine Aminotransferase,ALT/GPT ELISA试剂盒人天门冬氨酸转氨酶/谷草转氨酶(GOT/GPT)ELISA试剂盒 Human Aspartate aminotransferase,GOT/GPT ELISA试剂盒人肝脂酶(HL)ELISA试剂盒 Human hepatic lipase,HL ELISA试剂盒人乙酰肝素酶(HPA)ELISA试剂盒 Human Heparanase,HPA ELISA试剂盒人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)ELISA试剂盒 Human type Ⅱ collagen helical peptide,HELIX-ⅡELISA试剂盒人纤维连接素相关抗原(FRA)ELISA试剂盒 Human fibronection related antigen,FRA ELISA试剂盒人胃泌素细胞抗体(GCA)ELISA试剂盒 Human gastrin cell antibody,GCA ELISA试剂盒人谷氨酸脱氢酶(GDH/GLDH)ELISA试剂盒 Human Glutamate dehydrogenase GDH/GLDH ELISA试剂盒人肝素辅因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA试剂盒 Human heparin cofactor Ⅱ,HCⅡELISA试剂盒人胆酸(CA)ELISA试剂盒 Human Cholic acid,CA ELISA试剂盒人幽门螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA试剂盒 Human Helicobacter pylori IgG ,Hp-IgG ELISA试剂盒人&gamma 谷氨酰转移酶(GGT) ELISA试剂盒 Human gamma glutamyl transpeptidase,GGT ELISA试剂盒人胃粘液素(GM)ELISA试剂盒 Human Gastric Mucin,GM ELISA试剂盒人透明质酸结合蛋白(HABP)ELISA试剂盒 Human Hya]uronate binding protein,HABP ELISA试剂盒人Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒 Human cross linked N-telopeptide of type Ⅰ collagen,NTX ELISA试剂盒人幽门螺旋杆菌IgM(Hp-IgM)ELISA试剂盒 Human Helicobacter pylori IgM,Hp-IgM ELISA试剂盒人细胞毒素相关蛋白A(CagA)ELISA试剂盒 Human Cytotoxin-associated protein,CagA ELISA试剂盒人胃抑素(GIP)ELISA试剂盒 Human gastric inhibitory polypeptide,GIP ELISA试剂盒人胃泌素释放多肽(GRP)ELISA试剂盒 Human gastrin-reliasing peptide,GRP ELISA试剂盒人胃泌素释放肽前体(ProGRP)ELISA试剂盒 Human pro-gastrin-releasing peptide, ProGRP ELISA试剂盒人胶原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)ELISA试剂盒 Human Collagen-like Bioprotein Ⅱ,HCBⅡ ELISA试剂盒人促胰液素/胰泌素(Secretin)ELISA试剂盒 Human Secretin ELISA试剂盒人多肽YY(Peptide-YY)ELISA试剂盒 Human Peptide YY ELISA试剂盒人促胃液素受体(GsaR)ELISA试剂盒 Human gastrin receptor,GsaR ELISA试剂盒人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)ELISA试剂盒 Human cholecystokinin octapeptide,CCK-8 ELISA试剂盒人胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA Human trypsinogen activation peptide,TAP ELISA试剂盒人&alpha 1酸性糖蛋白(&alpha 1-AGP)ELISA试剂盒 Human &alpha 1-Acid glycoprotein,&alpha 1-AGP ELISA试剂盒人内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒 Human &alpha 1-Acid glycoprotein,&alpha 1-AGP ELISA试剂盒人丙二醛(MDA)ELISA试剂盒 Human malondialchehyche,MDA ELISA试剂盒人胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒 Human Amylin ELISA试剂盒人血管活性肠肽(VIP)ELISA试剂盒 Human Motilin,MTL ELISA试剂盒人胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒 Human cholecystokinin,CCK ELISA试剂盒人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)ELISA试剂盒 Human N-terminal procollagen Ⅲ propeptide,PⅢNP ELISA试剂盒人Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒 Human Collagen Type Ⅱ,Col Ⅱ ELISA试剂盒人Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)ELISA试剂盒 Human Collagen Type Ⅰ,Col Ⅰ ELISA试剂盒人Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒 Human procollagen Ⅲ N-terminal peptide,PⅢNT ELISA试剂盒人透明质酸(HA)ELISA试剂盒 Human Hyaluronic acid,HA ELISA试剂盒人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒 Human Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISA试剂盒人Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)ELISA试剂盒 Human Collagen Type Ⅲ,Col Ⅲ ELISA试剂盒人层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒 Human Laminin,LN ELISA试剂盒人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒 Human Fibronectin,FN ELISA试剂盒人纤连蛋白(FN)ELISA试剂盒 Human Fibronectin,FN ELISA试剂盒人NOGO-A抗体(Nogo-A Ab)ELISA试剂盒 Human anti-Nogo-A antibody,NOGO-A Ab ELISA试剂盒人抗组织转谷氨酰胺酶抗体IgA(tTG-IgA)ELISA试剂盒 Human Anti-tissue tranGSlutaminase IgA,tTG-IgA ELISA试剂盒

各相关单位：按照宁夏化学分析测试协会团体标准工作程序，标准起草组已完成《土壤中蛋白酶的测定》等3项团体标准征求意见稿的编制工作。现按照我协会《团体标准制修订程序》要求，公开征求意见。请有关单位及专家提出宝贵意见，并将征求意见表（附件）于2023年10月1日前反馈给秘书处。联系人：张小飞 电 话：13995098931邮箱：1904691657@qq.com序号团标名称1土壤中蛋白酶的测定2标准加入法测定土壤有效钼3氢氧化钠熔融法测定 土壤全磷、全钾及氟化物 宁夏化学分析测试协会2023年9月2日关于团标征求意见函 -9.2.pdf团标表格7-专家意见表.doc团标-《土壤蛋白酶的测定》.pdf团标-《土壤有效钼的测定》.pdf团体-《土壤全磷全钾氟化物的测定》.pdf

2014年6月27日，CEM公司CEO Michael John Collins在北京对我公司员工进行了 CEM公司系列产品的详细培训。 CEM简介： 美国 CEM 公司成立于1971年，是开创微波化学历史的品牌，是全球最大的和历史最久的微波化学仪器制造商，CEM 在北卡建有全球最大的微波化学研发中心，已获得 11 次国际 R&D100 应用科学大奖，成果显赫，被称为微波技术创始者和领导者。CEM推动了 EPA 标准的制定，为后来微波化学的发展奠定了基础。世界上最高端的微波技术，如多模连续微波、可变通道单模微波和目前最新的聚焦单模微波，均由 CEM 首创，市场上其他大多是模仿或使用 CEM 淘汰的技术。CEM 技术领先同行近 20 年，领导主流微波化学技术并代表市场发展方向。CEM 拥有目前微波化学研发领域 90% 的专利技术（300余项），在同类产品中技术含量最高，一直是其他竞争对手难以超越的目标，CEM 市场占有率远远高于其他产品，目前在全球已拥有近八万家用户，销售总额约占世界同类市场 80%（AI Report）。CEM 一直致力于提高和制定微波化学应用标准，以及仪器电磁和高压安全标准，最先开发了几乎所有微波化学新应用如：微波消解、微波萃取、微波合成、微波多肽合成、超低温化学、微波灰化、微波水分/脂肪/蛋白质快速测试等技术，并最先推荐给全球化学家们使用。 CEM产品线包括： 1. Mars6 高压微波消解2. Star 常压微波消解3. MarsX 密闭微波萃取4. Explorer 微波快速溶剂萃取5. Etc 超净酸蒸清洗系统6. Star 常压微波萃取7. Clean-Start PPT 超净浓缩8. Mars-Hacker 微波真空组织处理9. LibertyBlue 自动多肽连续合成仪10.DiscoverBio 半自动多肽合成仪11.Discover 微波蛋白水解12.Discover 微波蛋白酶解13.Accent 微波多肽裂解14.Discover SP 环形聚焦单模微波合成15.Discover 单模微波加气反应装置16.Explorer 全自动微波合成17.Voyager 中试放大微波合成18.COOLMATE 超低温微波化学合成和萃取系统19.Phoenix 微波马弗炉20.Sam 微波干燥21.Smart Turbo 微波水分22.Sprint 生物标签真蛋白测试仪23.Fast Trac 核磁共振脂肪水分测试仪24.Smart Trac II 微波联用脂肪水分测试 如果您对 CEM公司系列产品感兴趣，如果您希望与 CEM公司CEO Michael John Collins进行直接交流（时间：6月27日-7月3日），请与我们联系！电话：010-65528800，传真：010-65519722，邮件：sales@pynnco.com

重组蛋白和单克隆抗体药物研发讲座由利穗科技（苏州）有限公司于2015年4月24日在上海张江高科技园区主办。届时将邀请100余名国内外生物医药领域的著名专家学者前来参观交流。 本次讲座特邀主讲嘉宾，Joachim K.Walter 博士是著名的生物制品行业的科学家和顾问，有26年 哺乳动物细胞培养的蛋白生产和研发经验 ，拥有17年在德国的勃林格殷格制药企业的工作经验。演讲就蛋白药物市场及研发、单克隆抗体生产为主题，共同探讨蛋白分离纯化方法。 利穗科技一直专注于药物研发和生产领域内新型仪器/设备的研发与制造。产品的定位是基于色谱分离技术的全自动分离纯化系统，公司产品分离纯化设备用于生物医药研发和生产过程中的分离纯化，是分离工艺和分离介质的运行设备，广泛应用于中草药、天然产物、多肽、单克隆抗体、重组蛋白、疫苗和血液制品等生物制药医药领域的分离纯化过程，是生物医药领域的关键技术和设备。 在此，利穗科技诚挚邀请您参加重组蛋白和单克隆抗体药物研发及生产讲座，进行产品技术交流。 主题：重组蛋白和单克隆抗体药物研发及生产讲座主办单位：利穗科技（苏州）有限公司会议时间：2015年4月24日（9：00-17：00）地点：上海张江高科技园蔡伦路781号上海张江医药谷人数：100人 会议日程安排如下：上午 9.00 — — 12 ：001.导言? 市场概述及行业趋势介绍 2. 生物技术及蛋白药物基础介绍? 蛋白质的化学特性简述? 药物蛋白介绍 3. 蛋白药物研发和生产策略介绍? 工艺开发的复杂特性? 工艺技术的概述-上游 & 下游生产? 工艺设计? 工艺开发与生产的策略? 蛋白质分离纯化方法 — — 过滤和色谱法? 工艺开发的管理 4. 生物制药工艺设备解决方案 午餐： 12.00-13:00 下午 13:00 — — 16:005.单克隆抗体生产? 亲和层析的不同操作模式? 蛋白质降解路线? 蛋白酶解? 蛋白质结构的稳定性? 缓冲液的选择? 稳定性添加剂? 制剂缓冲液 6.生物仿制药的监管? 风险管理? 质量源于设计? PAT过程分析技术? 产品生命周期验证 7.一次性技术 技术咨询：16.00 — — 17:00? 15 分钟每个人或公司 （限于 4 组）。请提前预约并提交讨论问题。 演讲人简介： Dr. Joachim K. Walter, PhD Walter Biotech Consultancy公司创始人兼首席执行官目前为利穗科技（苏州）有限公司咨询顾问 生物制药行业知名学者，咨询顾问。具有超过27年生物药研发及生产经验。曾担任勃林格.英格翰公司新药研发及生产总监，参与75个不同规模的抗体及重组蛋白药物的工艺开发和放大，最大放大规模达12500L。曾担任GE Healthcare 膜过滤事业部全球副总裁，指导多个膜过滤产品及应用的开发。曾经在超过30个国际主流期刊上发表文章，作为Speaker被邀参加国际会议超过40个。目前主要致力于为制药企业进行工艺开发、放大，工艺验证及生产管理的咨询。客户包括华兰生物，Affimed AG, Medac GmbH, Innobiologics Sdn Bhd, Graffinity GmbH,等。 报名方式：姓名： 单位： 职务：手机：请将个人单位、姓名、职务、手机信息发送到市场部邮箱：caixin@lisui.net ，或可以直接电话报名：0512-69369998备注：本讲座免费（含午餐），人数有限，会议室99个固定座位，先到先得，交通住宿自理 会议联系人：蔡新 0512-69561800-8066 /18914086625 caixin@lisui.net 吴婷婷 0512-69369998 /18362618085 wutingting@lisui.net

对大多数研究团队或制药公司而言，生物基质中单克隆抗体药物的定量分析常常面临着两个棘手的问题：首先是由于样品前处理方法不合适导致的选择性、重复性不佳；其次，若使用LC-MS/MS 进行分析时，会出现耗时或灵敏度不理想的情况。 岛津公司生命科学研究中心一直致力于开发一类通用型前处理方法，以实现对单克隆抗体药物便捷、高效地分析。蛋白酶解方法是目前常用方法之一，其将单克隆抗体分子水解为多个多肽片段，通过对特征性肽段进行检测，从而实现对抗体药物的定量分析。然而，经该方法酶解得到的多肽片段种类数量众多，组分较复杂， 因此大大减弱了检测灵敏度。为了简化该前处理方法， 岛津公司推出了一项全新的技术——纳米表面分子导向限制性酶解（nSMOL, nano-Surface and Molecular Orientation Limited Proteolysis）技术，该技术由岛津公司 Takashi Shimada 博士开 发，可用于所有单克隆抗体药物的定量分析。 nSMOL 技术可在近生理条件下，完成对抗体药物的选择性酶解，并获得与之相应的特征性肽段组分。其工作原理是利用抗体树脂对样品中单克隆抗体药物进行捕获，之后通过蛋白酶纳米颗粒对树脂上抗体成分进行限制性酶解，得到多肽片段。该酶解主要针对抗体的 Fab 区域，Fab 区域外余下部分不受酶解作用且仍保留在原树脂上（如图所示）。因此，nSMOL 技术不仅能够保证获得特异性的抗体序列片段，而且限制性酶解技术大大降低了样品的复杂性，缩短样品前处理时间，提高了检测灵敏度。 针对 LC-MS/MS 分析时出现耗时或灵敏度不理想的情况，岛津公司推出的新一代三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 和 LCMS-8060，实现了灵敏度和速度的创新性突破。其全新的离子导向技术增强了离子聚焦能力和信号响应，30000 u/sec 超快的数据采集速度和 5 msec 极性切换速度，使 LCMS-8050 和LCMS-8060 在保证高灵敏度的同时还具有出众的分析速度。因此， LCMS-8050 和 LCMS-8060 的问世为复杂的生物分析提供了高灵敏度、高稳定性，并缩短了分析时间。 nSMOL 技术与 LCMS-8050 或 LCMS-8060 的完美融合，为单克隆抗体药物的定量分析铺平了道路，开拓了视野。基于该技术，岛津公司完成了人血浆中曲妥珠单抗、贝伐珠单抗、利妥昔单抗等单克隆抗体药物的分析，研究成果已在多个国际期刊中发表。 nSMOL 技术结合岛津三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 或 LCMS-8060 能够较好地解决单克隆抗体药物在定量分析中面临的问题，我们希望该技术能为有关从业人员提供新思路、新方法，也希望该技术能在抗体药物临床前及临床研究中发挥重要作用。岛津三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 或 LCMS-8060关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。更多信息请关注岛津公司网站www.shimadzu.com.cn/an/。岛津官方微博地址http://weibo.com/chinashimadzu。岛津微信平台

继人类基因组计划（HGP）之后，以蛋白质组学为核心的组学技术正成为生命科学和生物医学研究的核心驱动力。随着质谱技术的飞速发展，蛋白质组学的研究边界不断拓展，在药物开发、临床医学、转化医学等研究中展现出巨大潜力。 然而，传统的蛋白质组学实验流程复杂，特别是在样品前处理阶段，人工操作不仅耗时耗力，还容易引入人为误差，影响样品的稳定性和实验的重现性。为了应对这一挑战，AI 与自动化技术的结合为蛋白组学研究带来了新的解决方案。为了探讨这一领域的最新进展与应用实践，Opentrons 联合仪器信息网将于 7 月 31 日 14:00-15:30 举办“AI 自动化移液技术揭开蛋白质组学研究新篇章”线上研讨会。√ 重塑研究范式，提升效率与精度√ 智能优化，解锁复杂样本分析√ 推动跨学科融合，开启创新之门 会议日程时间报告题目嘉宾报告摘要14:00蛋白质组学样品制备技术及发展趋势胡水旺南方医科大学 高级实验师蛋白质组学技术已经成为系统生物学时代最常用的研究工具之一。最常用的技术平台包括双向电泳、高效液相色谱和质谱。但是蛋白质样品制备是蛋白质组学研究的第一步，也是最关键的步骤，很容易被忽视。本报告主要围绕蛋白质组学样品制备技术及发展趋势展开话题，希望能为正在或将要开展蛋白质组学研究的同仁带来帮助。14:30人工智能移液工作站在高效蛋白组学实验中的创新实践与应用文梃棡合创生物工程(深圳)有限公司 大中华区应用科学家人工智能移液工作站在高效蛋白组学实验中的创新实践与应用15:05微量与空间蛋白组学新技术及其应用申华莉复旦大学 研究员单细胞水平 DNA 和 RNA 高通量测序结果表明，细胞的分子异质性比我们想象的更复杂和多样。本报告主要介绍我们团队近年来发展的一系列针对微量细胞和组织样本蛋白组学的新方法新技术，包括适用于微量样品的一体化快速蛋白酶解方法 SMID 技术、微量样品磷酸化蛋白组学技术 mini-Phos，用于快速酶解的 MOSF 技术、以及适用于单细胞样本蛋白组学分析的 SMID-MOSF 技术等。我们应用这些方法对阿尔茨海默症、睡眠-觉醒障碍等生物医学问题进行了深入探讨。2轮抽奖，3重大礼包：智能手环、保温杯、杜邦手提袋

随着高通量、高灵敏度、高分辨率生物质谱技术的出现，蛋白质组学技术取得飞速发展，蛋白质组学（Proteomics）是蛋白质（protein）与 基因组学（genomics）两个词的组合体，表示“一种基因组所表达的全套蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学研究，就是要把一个基因组表达的绝大多数蛋白质或一个复杂的混合体系中绝大多数蛋白质进行精确的定量和鉴定。蛋白质组本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识。蛋白质组学研究主要包括蛋白质分离、鉴定与生物信息学分析，其中样品中蛋白质的分离至关重要，会直接影响后续的分析结果。对比传统的柱层析分离方式，磁珠法提取蛋白质能轻松实现高通量和多样品平行处理。磁珠法提取蛋白质与提取核酸原理类似，都需经过“结合-洗涤-洗脱”等过程，蛋白纯化后，还需经过裂解、二硫键还原、酶解等多步预处理才能将蛋白样品裂解为可检测的肽段，这些过程同样涉及多次移液、加热、震荡等步骤。Vitae 100全自动液体处理工作站● 睿科Vitae 100全自动液体处理工作站整合移液、磁吸、震荡、加热功能于一体，可全自动完成磁珠法蛋白纯化，可替代蛋白酶解实验过程中大部分手工操作，实现高通量、高效率、高一致性的蛋白纯化。Vitae 100配置了可选4或8通道的空气注射泵移液器，机械定位准确至0.05mm，高通量提取时准确性、均一性均优于手工操作。另外Vitae 100创新性的整合了“磁吸-加热-震荡”三合一模块，节省盘面空间，减少移液步骤，利用自动化操作来减少人为实验操作带来的误差，提升实验结果的稳定性，减少污染的可能性，同时利用自动化精准的时间控制和操作，来优化实验流程，提高实验室运行效率。▲蛋白质组学自动化前处理解决方案睿科生化科技公司睿科生化科技公司是睿科集团旗下专注研发生产生命科学领域样品前处理设备的高科技企业。公司提供自动化的生物样品前处理设备，服务于生物/药物分析、分子诊断、临床检测、蛋白组学、代谢组学等领域。公司核心团队拥有10多年丰富的行业经验，掌握自主核心技术，系统化架构和集成式开发，可提供灵活的定制化服务，为客户提供个性化的产品和服务。

p　　近日，在Nature杂志上发表了关于COVID-19的MsupPro/sup靶点的抑制剂的文章。文章报道了我国科研团队基于计算机辅助设计技术鉴定出了一种新的针对COVID-19病毒结构的抑制剂N3。这是一种基于COVID-19的MsupPro/sup的抑制剂。研究团队通过高通量筛选并结合细胞实验筛选出6种具有活性的化合物，其中包括Ebselen(依布硒)这一款抗炎的“老药”。/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 576px height: 240px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/d0156cff-6fab-437d-aa2b-254b4c9e3db4.jpg" title="Nature文章标题.jpg" alt="Nature文章标题.jpg" width="576" vspace="0" height="240" border="0"//pp　　抑制剂的发现主要有三种方式：从头合成，模拟实验以及高通量筛选。通过模拟实验和高通量筛选结合的机制，使用计算机辅助技术设计出了抑制剂N3。根据COVID-19病毒与MsupPro/sup的复合物的晶体结构，一共分析了10,000多种化合物后得到6种有潜力的抑制剂。其中有双硫仑(disulfiram)、卡莫氟(carmofur)、依布硒(ebselen)、紫草素(shikonin)、Tideglusib和PX-12。在细胞水平实验中，ICsub50/sub值(半数抑制浓度)在0.67-21.4 μM之间，具有较好的研究潜能。结果证明了这种筛选策略的有效性，可以快速发现具有临床潜力药物的线索，以应对没有特定药物或疫苗的新的传染病。/pp　　MsupPro/sup是病毒主蛋白酶的英文名称，该结构的抑制剂可以作用在病毒上，成为有吸引力的药物靶点。Ebselen的衍生物依布硒啉PZ51是一种小分子硒化合物，具有毒性小而且稳定的特点。它有抗氧化、抗肿瘤以及抗微生物等药理活性，是一种非甾体抗炎药NSAID。（下图为依布硒的结构式，图片来源于网络）/pp style="text-align: center"img style="max-width: 100% max-height: 100% width: 360px height: 202px " src="https://img1.17img.cn/17img/images/202004/uepic/44af4371-5ee0-4e82-8f3c-2e0605d64b09.jpg" title="Ebselen.jpg" alt="Ebselen.jpg" width="360" vspace="0" height="202" border="0"//pp　　该实验的通讯作者为上海药物所研究员蒋华良院士、清华大学教授饶子和院士以及上海科技大学杨海涛研究员。共同参与的“抗新冠病毒攻关联盟”是由上海科技大学-清华大学、中科院上海药物所、军事科学院军事医学研究院以及中科院武汉病毒所等相关实验室研究专家组成。国家蛋白质科学中心(上海)，澳大利亚昆士兰大学也参与了此项研究。攻关“联盟”中饶子和院士研究团队自从2003年SARS暴发以来，17年间致力于冠状病毒关键药物靶点的研究及抗病毒新药的研发。曾在SARS暴发期间解析了首个SARS病毒蛋白质(MsupPro/sup)的三维空间结构，为人类战胜冠状病毒奠定了基础。/ppstrongspan style="color: rgb(255, 0, 0) "[span style="color: rgb(0, 112, 192) "Nature/span原文链接]/span/strong a href="https://www.nature.com/articles/s41586-020-2223-y?utm_source=sn&utm_medium=referral&utm_content=RMarketing&utm_campaign=BSLB_4_CA01_GL_BSLB_USG_CA01_GL_LSGR_PubH_Coronavirus_LandingPage" target="_blank"Jin, Z. et al. Structure of Mpro from COVID-19 virus and discovery of its inhibitors. iNature/i https://doi.org/10.1038/s41586-020-2223-y (2019)./a/p

新突破新guan肺炎自2019年暴发以来，给全社会带来了灾难性的影响，不仅对quan世界人民的健康造成了巨大威胁，还对全球经济产生了震荡性的影响。因此，对新guan肺炎的研究也显得愈发重要。近期，来自北京大学医学部jing准医疗多组学研究中心的黄超兰团队、中国科学院院士高福团队以及中国科学院天津工业生物技术研究所高峰团队，通过采用基于质谱的糖基化修饰鉴定技术，对新guan肺炎颗粒上S蛋白的O-糖基化修饰图谱进行了整体描绘，进而提出了“O-Follow-N”的O糖基化修饰规律，为新guan肺炎的致病机制探索提供了研究基础。而这项出色的研究，也于2021年8月2日以“O-glycosylation pattern of the SARS-CoV-2 spike protein reveals an“O-Follow-N” rule”为题发表在了Cell Research期刊上。糖基化修饰（Glycosylation）是蛋白质主要的翻译后修饰类型，其广泛参与细胞黏附、识别、信号转导等重要过程，影响蛋白质的分泌、运输和稳态调控，可发生在细胞50-70%的蛋白质上，2021年糖基化修饰鉴定被Nature Methods评为zui值得关注的技术之一。根据糖苷链类型，蛋白质糖基化修饰可以分为四类：（1）N-连接糖基化；（2）O-连接糖基化；（3）C-连接糖基化；（4）糖基磷脂酰肌醇锚定。其中O-糖基化修饰，是在高尔基体中产生。它在人体中有70余种常见糖型，无特定氨基酸结构域。目前，对O-糖基化修饰研究存在许多困难，比如：1糖基化修饰的糖链形成无固定模版；2受200多种糖基转移酶的复杂调控；3糖基化肽段剂量水平低；4规模化糖链结构解析通量低；5糖链构成微不均一性，定性与定量困难；6功能性糖基化位点及关键糖结构指认困难。受这些因素影响，对O-糖基化修饰的研究也是少之又少。现阶段，对于大规模、高通量的蛋白质翻译后修饰的研究，zuihao的途径就是利用基于高分辨质谱的蛋白质组学技术。在这篇报道中，黄教授等团队，就是通过基于质谱的蛋白质组学技术，克服一系列困难，shou次对新guan病毒上S蛋白的O-糖基化进行了综合性描绘。实验中，研究者为获得天然状态下S蛋白的N-和O-糖基化修饰完整图谱，首先从SARS-CoV-2病毒颗粒上获得S蛋白，并使用了LysC+Trypsin, Chymotrypsin, GluC, Elastase 以及 alpha-Lytic等多种蛋白酶将S蛋白酶解成肽段。而对于这种复杂糖蛋白酶解后产生的肽段，普通质谱很难进行检测。研究者则采用了具有超高分辨率的Orbitrap Eclipse 三合一质谱仪，并利用三合一仪器多种碎裂功能中的阶梯HCD（stepped collisional energy SCE），HCD（Higher-energy collisional dissociation）以及组合式的HCDpdEThcD三种碎裂方法进行质谱分析。图1. Orbitrap Eclipse 三合一质谱仪Orbitrap Eclipse三合一质谱仪是一台不仅拥有着CID, HCD, ETD HD, EThcD HD, ETciD, UVPD, PTCR等多种碎裂模式的质谱仪，而且还具有高达50万的分辨率，能够对多种形式的修饰肽段进行jing准定性与定量，为研究者提供了更坚实的硬件基础。研究中，研究者共鉴定到了39个糖基化修饰位点。其中包括此前已报道的22个N-糖基化修饰位点，以及17个O-糖基化修饰位点。值得注意的是，这17个O-糖基化修饰位点是shou次从SARS-CoV-2病毒颗粒中提取的S蛋白上鉴定到的。并且通过深入分析这些位点，研究者发现在这17个位点中，有11个位点位于糖基化的天冬酰胺（Asn, N）附近。为了更准确的对这一现象进行挖掘，研究者将NxS/T共有基序内糖基化的N每一侧的3个氨基酸定义为“N±1-3”。分析结果显示，11个O-糖基化修饰位点分布在“N±1-3”的位置上，位点信息确定的位点有10个，其中7个位点分布在“N+2”的位置上。研究者还通过开展定点突变实验进一步证实N糖基化修饰的存在是“N±1-3”的位置上出现O-糖基化修饰的先决条件。基于以上分析，研究者提出SARS-CoV-2病毒S蛋白的糖基化修饰存在O-糖基化修饰追随N-糖基化修饰发生的现象，并将这一现象命名为“O-Follow-N”规律。图2.新guan病毒S蛋白上符合“O-Follow-N”规律的O糖基化修饰（点击查看大图）小结Summary研究基于前沿的质谱分析技术，通过使用超高分辨的三合一质谱仪Orbitrap Eclipse，揭示了新guan病毒上S蛋白的O糖基化修饰谱，进而提出了O 糖基化修饰的“O-Follow-N”规律，同时这一规律也可能适用于其它蛋白。这个规律提示O-糖基化修饰具有潜在的调控新机制，特别是N-和O-糖基化修饰之间可能存在的协同作用，未来有望在极大程度上推动糖生物学领域的研究。黄超兰（北京大学医学部jing准医疗多组学研究中心主任）问根据您的经验，O-糖基化修饰鉴定的难点在哪里？答对于所有的蛋白翻译后修饰鉴定都普遍存在着几个相同的难点：（1）修饰丰度相对较低，难以直接鉴定，往往需要进行修饰富集，因此对样本量等要求较高；（2）修饰调节为动态变化过程，鉴定重复性会相对低一点。而对于O-糖基化修饰，因其特殊性，又有几个其他因素影响：（1）糖基化修饰的糖链形成无固定模版，且受多种糖基转移酶的复杂调控；（2）规模化糖链结构解析通量低，定性与定量困难；（3）功能性糖基化位点及关键糖结构指认困难。问Orbitrap Eclipse Tribrid三合一质谱联用仪在该研究中发挥了怎样的作用？答在我们的实验体系中，使用了多种蛋白酶对S蛋白进行处理，因此会产生长短不一，形式各异的肽段，而这就要求配套的质谱仪器能够具有多种碎裂模式，而 Orbitrap Eclipse质谱仪就很好地满足了我们的需求。并且Orbitrap Eclipse具有很好的分辨率以及稳定性，这对我们的实验提供了很大帮助。问新guan病毒颗粒上提取的S蛋白O-糖基化修饰图谱的揭示对新xing冠状病毒肺炎的研究有哪些帮助？答我们在实验中发现了“O-Follow-N”变化规律，这对研究糖基化的变化具有很好的提示作用。并且这个规律也显示O-糖基化修饰具有潜在的调控新机制，特别是N-和O-糖基化修饰之间可能存在的协同作用，未来有望在极大程度上推动糖生物学领域的研究。专家介绍黄超兰教授长期致力于质谱和蛋白质组学前沿新技术和方法的研究开发，应用范围包括生物学基础、医学和临床研究，是高度跨界，善于交叉学科整合，战略规划制定和人员管理的quan方位技能科学家。如需合作转载本文，请文末留言。这样的应用图书馆不来了解一下？点击进入小程序完成注册即刻抽取盲盒好礼

近日，岛津nSMOLTMantibody BA 试剂盒上市。使用该试剂盒可实现生物样品中抗体药物的含量测定。 nSMOLTMantibody BA 试剂盒可简化实验过程：仅需使用抗体固化树脂捕集全血或其它生物样品中的单克隆抗体，即可有选择性的水解单克隆抗体的Fab区。蛋白水解得到的Fab肽段碎片可通过三重四极杆液质联用仪通过MRM 方式进行准确的含量测定。(推荐使用LCMS-8050/8060等优秀的液质产品配合样品分析)。本品是岛津科学研究实验室和日本国立癌症研究中心合作的成果。本品符合美国FDA生物分析方法验证标准。 注: 本品配备的试剂仅用于研究使用。基于日本药品和医疗器械法案，本品未被认可 或批准用于制药领域中体外药物诊断。不可用于治疗、诊断或相关领域使用。在 用户购买前需要明确告知以上内容。 产品特点 nSMOLTM使用的方法是岛津科技研究实验室全新的开创性的技术。可选择性的水解单克隆抗体的Fab区。 LCMS分析方法可开发且无需考虑抗体类药物的类型，在抗体药物的分析中引入全新的分析手段。 1) 本品可减少方法开发的消耗，缩短开发时间药物代谢和药代动力学研究是药物效价的最基本方式之一。借此可刻画出药物效力和毒性指数服务于药物开发。迄今为止，血药浓度的测量主要采用配体结合方式下的酶联免疫吸附法检测。然而，这是一个间接的检测方法，所以它会受到如交叉反应和抑制剂敏感性的影响。此外，ELISA方法还需要消耗一定的分析时间和实验成本。使用质谱检测方法分析列表中特定结构的目标组分，无需生产检测用抗体即可有效解决上述问题。 2) nSMOLTM方法包可解决LCMS分析中的难点 可通过降低基质背景噪声，增强稳定性 当使用LCMS分析大分子量蛋白时，通常需要使用胰蛋白酶或其它蛋白酶分解抗体分子成为小分子碎片，产生的大量肽段会使仪器噪声提高甚至出现离子抑制现象。这就是在LCMS分析过程中主要仪器稳定性的因素。本方法包通过先进的样品处理程序有选择性酶解需要分析的抗体部分Fab 区，大大降低背景噪声及离子抑制现象，提高系统稳定和数据重现性。 简化的样品处理程序提高样品预处理速度通过 MRM 方法测定蛋白质，分析前样品需要进行蛋白质变性、还原性烷基化或长达一夜的胰蛋白酶解过程。此外，即使是胰蛋白酶解后仍需脱盐，即去除反应液中高浓度的盐。采用先进的样品处理技术可实现5小时内良好的酶解率。无需进行耗时的蛋白质变性、还原性烷基化，及脱盐以有效实现单日完成样品处理。此外，可用个相同的处理流程应对各类抗体分析。关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国 设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理 商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进 的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。

蛋白质作为生命活动的执行者,通过自身结构的动态改变,以及与其他蛋白质相互作用组装为蛋白质复合物,调控各种生物学过程。因此,如何实现蛋白质复合物的精准解析已成为当前生命科学的研究热点。化学交联结合质谱(CXMS)技术作为蛋白质复合物解析的新兴技术,利用化学交联剂将空间距离足够接近的蛋白质分子内或分子间的氨基酸残基以共价键连接起来,再利用液相色谱-质谱联用对交联肽段进行鉴定,实现蛋白质复合物的组成、界面和相互作用位点的解析。该技术具有分析通量高、灵敏度高、可提供蛋白质间相互作用的界面信息、普遍适用于不同种类和复杂程度的生物样品等优势,已成为X射线晶体衍射、低温冷冻电镜、免疫共沉淀等蛋白质复合物研究技术的重要补充。化学交联位点的鉴定覆盖度和准确度决定着该技术对于蛋白质复合物结构的解析能力。目前,为了实现蛋白质复合物的高覆盖度交联,研究人员发展了可用于共价交联赖氨酸(K)的氨基、谷氨酸(E)/天冬氨酸(N)的羧基、精氨酸(R)的胍基以及半胱氨酸(C)的巯基等多种活性基团的新型交联剂。进而,为了提高低丰度交联肽段的鉴定灵敏度,体积排阻色谱法、强阳离子交换色谱法,及亲和基团富集策略被提出用于交联肽段的高选择性富集,如可富集型化学可断裂交联剂——Leiker,与不具备富集功能的交联剂相比,通过亲和富集可以将交联位点鉴定数目提高4倍以上。胰蛋白酶镜像酶(LysargiNase)的酶切位点与胰蛋白酶互为镜像,可特异地切割赖氨酸和精氨酸的N端。由于LysargiNase的N端酶切特点,电荷主要分布在交联肽段的N端,在碰撞诱导裂解(CID)和高能诱导裂解(HCD)模式下产生以b离子为主的碎片离子,与胰蛋白酶酶切肽段以y离子为主的碎片离子互为镜像补充,为胰蛋白酶酶解肽段在质谱鉴定中b离子缺失严重的问题提供了很好的解决办法。由于具有较高的酶切特异性和酶活性,镜像酶已经成功地应用于蛋白质C末端蛋白质组鉴定、磷酸化蛋白质组研究、甲基化蛋白质组鉴定等方面,然而在CXMS中的应用仍未见报道。为进一步提高对蛋白质复合物结构及相互作用位点的解析能力,本文发展了LysargiNase与胰蛋白酶联合酶切的方法,基于镜像酶正交切割的互补特性,通过产生赖氨酸及精氨酸镜像分布的交联肽段,以增加特征碎片离子数量和肽段匹配连续性,从而提升交联肽段的谱图鉴定质量,达到提高交联位点的鉴定覆盖度和准确度的目的。通过分别对牛血清白蛋白及大肠杆菌全蛋白样品的交联位点鉴定结果的考察,评价该策略对单一蛋白样品和复杂细胞裂解液样品蛋白质复合物表征的应用潜力。蛋白质样品制备称取牛血清白蛋白粉末,以20 mmol/L 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HEPES, pH 7.5)作为缓冲体系,配制0.1 mmol/L牛血清白蛋白溶液。大肠杆菌细胞(种属K12)在37 ℃下采用Luria-Bertani(LB)培养基培养24 h,然后于4 ℃以4000 g离心2 min,收集细胞沉淀。细胞沉淀采用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗3遍后,悬浮于细胞裂解液(含20 mmol/L HEPES和1%(v/v)蛋白酶抑制剂)中,冰浴超声破碎180 s(30%能量,10 s开,10 s关)。匀浆液于4 ℃以20000 g离心40 min,收集上清,采用BCA试剂盒测定所得蛋白质含量。稀释大肠杆菌蛋白裂解液至蛋白质含量为0.5 mg/mL。化学交联样品制备以20 mmol/L HEPES(pH 7.5)为溶剂配制浓度为20 mmol/L 的BS3交联剂母液 将交联剂母液加入牛血清白蛋白的缓冲溶液及大肠杆菌蛋白裂解液中,使交联剂的终浓度为1 mmol/L,在室温条件下反应15 min 通过添加终浓度为50 mmol/L的淬灭溶液NH4HCO3进行交联反应淬灭,并在室温下孵育15 min 在冰浴条件下,将交联样品逐渐滴入8倍体积的预冷丙酮中,于-20 ℃静置过夜 在4 ℃条件下,以16000 g转速离心,去除丙酮,然后将交联蛋白用预冷丙酮清洗2次,去除上清液后,于室温挥发掉残余的丙酮 以8 mol/L尿素溶液复溶蛋白质沉淀 将牛血清白蛋白交联样品以5 mmol/LTCEP作为还原剂,于25 ℃下反应1 h进行变性和还原 将大肠杆菌样品以5 mmol/LDTT作为还原剂,于25 ℃下反应1 h进行变性和还原,避免大肠杆菌蛋白在酸性条件下发生变性 添加终浓度为10 mmol/L的碘乙酰胺(IAA),在黑暗中,于室温下反应30 min 以50 mmol/LNH4HCO3稀释样品至尿素浓度为0.8 mol/L后,将样品均分为两份,一份以蛋白样品与蛋白酶的质量比呈50:1的比例加入胰蛋白酶,于37 ℃酶解过夜,另一份加入终浓度为20 mmol/L的CaCl2,以蛋白样品与蛋白酶的质量比呈20:1的比例加入LysargiNase,并在37 ℃温度下酶解过夜。液相色谱-质谱鉴定及数据搜索上述所有样品经过除盐,使用0.1%甲酸(FA)溶液复溶,用超微量分光光度计测定肽段浓度,进行反相高效色谱分离和质谱分析。牛血清白蛋白样品采用Easy-nano LC 1000系统偶联Q-Exactive质谱仪平台进行质谱分析。流动相A: 2%(v/v)乙腈水溶液(含0.1%(v/v)FA) 流动相B: 98%(v/v)乙腈水溶液(含0.1%(v/v)FA)。梯度洗脱程序:0~10 min, 2%B~7%B 10~60 min, 7%B~23%B 60~80 min, 23%B~40%B 80~82 min, 40%B~80%B 82~95 min, 80%B。Q-Exactive质谱仪采用数据依赖性模式,Full MS扫描在Orbitrap上实现,扫描范围为m/z 300~1800,分辨率为70000(m/z=200),自动增益控制(AGC)为3×106,最大注入时间(IT)为60 ms,母离子分离窗口为m/z 2。MS/MS扫描的分辨率为17500(m/z=200),碎裂模式为HCD,归一化碰撞能量(NCE)为35%, MS2从m/z 110开始采集,MS2的AGC为5×104, IT为60 ms,仅选择电荷值为3~7且强度高于1000的母离子进行碎裂,并将动态排除时间设置为20 s。每个样品分析3遍。大肠杆菌样品采用EASY-nano LC 1200系统偶联Orbitrap Fusion Lumos三合一质谱仪平台进行质谱分析。流动相A: 0.1%(v/v)甲酸水溶液 流动相B: 80%(v/v)乙腈水溶液(含0.1%(v/v)FA)。梯度洗脱程序:0~28 min, 5%B~16%B 28~58 min, 16%B~34%B 58~77 min, 34%B~48%B 77~78 min, 48%B~95%B 78~85 min, 95%B。Orbitrap Fusion Lumos三合一质谱仪采用数据依赖性模式,Full MS扫描在Orbitrap上实现,扫描范围为m/z 350~1500,分辨率为60000(m/z=200), AGC为4×105, IT为50 ms,母离子分离窗口为m/z 1.6。MS2扫描的分辨率为15000(m/z=200),碎裂模式为HCD, NCE为30%, MS2从m/z 110开始采集,MS2的AGC为5×104, IT为60 ms。仅选择电荷值为3~7且强度高于2×104的母离子进行碎裂,并将动态排除时间设置为20 s。每个样品分析3遍。质谱数据文件(*.raw)采用pLink 2软件(2.3.9)对交联信息进行检索和鉴定。使用从UniProt于2019年4月27日下载的牛血清白蛋白序列和大肠杆菌序列,搜索参数如下:酶切方式为胰蛋白酶(酶切位置:K/R的C端)、LysargiNase(酶切位置:K/R的N端) 漏切位点个数为3 一级扫描容忍(precursor tolerance)2.00×10-5 二级扫描容忍(fragment tolerance)2.00×10-5 每条肽段的质量范围为500~1000 Da 肽段长度的范围为5~100个氨基酸 固定修饰为半胱氨酸还原烷基化(carbamidomethyl [C]) 可变修饰为甲硫氨酸氧化(oxidation [M])、蛋白质N端乙酰化(acetyl [protein N-term]) 肽段谱图匹配错误发现率(FDR)≤5%。映射胰蛋白酶与LysargiNase酶解样品的交联位点在牛血清 白蛋白晶体结构(PDB: 3V03)的映射 LysargiNase与胰蛋白酶酶解样品的交联位点对及单一交联位点的互补性LysargiNase与胰蛋白酶酶解样品共同得到的交联位点鉴定打分比较b+/++与y+/++离子碎片分别在α/β-肽段的碎片覆盖度LysargiNase与胰蛋白酶酶解的交联肽段质谱图大肠杆菌样品中LysargiNase与胰蛋白酶酶切鉴定蛋白质复合物信息互补性带点击了解原文：https://www.chrom-china.com/article/2022/1000-8713/1000-8713-40-3-224.shtml

对大多数研究团队或制药公司而言，生物基质中单克隆抗体药物的定量分析常常面临着两个棘手的问题：首先是由于样品前处理方法不合适导致的选择性、重复性不佳；其次，若使用LC-MS/MS 进行分析时，会出现耗时或灵敏度不理想的情况。 岛津公司生命科学研究中心一直致力于开发一类通用型前处理方法，以实现对单克隆抗体药物便捷、高效地分析。蛋白酶解方法是目前常用方法之一，其将单克隆抗体分子水解为多个多肽片段，通过对特征性肽段进行检测，从而实现对抗体药物的定量分析。然而，经该方法酶解得到的多肽片段种类数量众多，组分较复杂，因此大大减弱了检测灵敏度。为了简化该前处理方法， 岛津公司推出了一项全新的技术——纳米表面分子导向限制性酶解（nSMOL, nano-Surface and Molecular Orientation Limited Proteolysis）技术，该技术由岛津公司 Takashi Shimada 博士开 发，可用于所有单克隆抗体药物的定量分析。 nSMOL 技术可在近生理条件下，完成对抗体药物的选择性酶解，并获得与之相应的特征性肽段组分。其工作原理是利用抗体树脂对样品中单克隆抗体药物进行捕获，之后通过蛋白酶纳米颗粒对树脂上抗体成分进行限制性酶解，得到多肽片段。该酶解主要针对抗体的 Fab 区域，Fab 区域外余下部分不受酶解作用且仍保留在原树脂上（如图所示）。因此，nSMOL 技术不仅能够保证获得特异性的抗体序列片段，而且限制性酶解技术大大降低了样品的复杂性，缩短样品前处理时间，提高了检测灵敏度。 针对 LC-MS/MS 分析时出现耗时或灵敏度不理想的情况，岛津公司推出的新一代三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 和 LCMS-8060，实现了灵敏度和速度的创新性突破。其全新的离子导向技术增强了离子聚焦能力和信号响应，30000 u/sec 超快的数据采集速度和 5 msec 极性切换速度，使 LCMS-8050 和LCMS-8060 在保证高灵敏度的同时还具有出众的分析速度。因此， LCMS-8050 和 LCMS-8060 的问世为复杂的生物分析提供了高灵敏度、高稳定性，并缩短了分析时间。 nSMOL 技术与 LCMS-8050 或 LCMS-8060 的完美融合，为单克隆抗体药物的定量分析铺平了道路，开拓了视野。基于该技术，岛津公司完成了人血浆中曲妥珠单抗、贝伐珠单抗、利妥昔单抗等单克隆抗体药物的分析，研究成果已在多个国际期刊中发表。 nSMOL 技术结合岛津三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 或 LCMS-8060 能够较好地解决单克隆抗体药物在定量分析中面临的问题，我们希望该技术能为有关从业人员提供新思路、新方法，也希望该技术能在抗体药物临床前及临床研究中发挥重要作用。岛津三重四极杆质谱仪 LCMS-8050 或 LCMS-8060

‍‍‍‍‍‍‍‍‍‍在最新发布的标准方法 《NY/T3870-2021硒蛋白中硒代氨基酸的测定》中，采用了ETHOS UP微波蛋白质水解系统，HPLC-AFS法检测硒蛋白中硒代氨基酸。‍‍ETHOS UP微波蛋白质水解系统的使用，大大提高了蛋白质的水解效率，彻底改变了氨基酸分析中样品前处理的现状，开启了氨基酸分析的新时代！‍‍‍‍‍‍ 在氨基酸的测定中，提取水解技术一直是制约整个分析过程的关键环节。传统酸解法需要在烘箱中110℃水解22小时，还需要手动充氮气创造惰性环境，整个流程不但非常耗时、操作繁琐，而且研究发现，在长时间的盐酸水解过程中，多种不稳定的氨基酸，如硒代氨基酸、含硫氨基酸、色氨酸等，几乎完全被破坏。而ETHOS UP微波蛋白质水解系统的应用，将传统需要22个小时的蛋白质水解过程缩短到20-40分钟，避免了传统酸水解法水解时间长、硒代氨基酸在水解过程中不稳定的技术难题。全自动化抽真空通氮气，避免了繁琐的手动操作过程，让实验人员进一步领略到了自动化设备带来的便利。‍‍‍‍‍‍微波蛋白质水解系统‍‍‍‍ETHOS UP微波蛋白质水解系统技术特点☆ 高效微波加热方式，将传统需要22个小时的蛋白质水解过程缩短到20-40分钟，大幅提高工作效率；☆ 全自动化抽真空通氮气，确保氨基酸不会发生氧化降解，避免了繁琐的手动操作过程；☆ 高温高压单反应水解腔，一个水解腔可同时处理25个样品，确保完全一致的反应温度和压力，与传统的处理方式相比，保证样品处理的一致性；☆ 高精度的数字温度控制程序，直接控制反应液体温度，整个水解过程反应条件精确控制，标准化自动化的工作程序。改变了传统烘箱水解不能精确反应和控制样品液体温度的缺陷；☆ 样品可直接放在 HPLC样品瓶中水解，无需转移。

细胞中的蛋白酶体通过识别泛素标签来降解丧失功能的蛋白，以维持细胞稳态。错误的泛素标记会导致功能完整的蛋白被降解，从而诱发相关疾病，例如部分癌症和神经退行性疾病的发生归咎于这种原因。美国加州大学伯克利分校的研究团队开发出清除蛋白错误泛素化标记的新技术，相关成果在Nature Chemical Biology发表，论文的标题为：Deubiquitinase-targeting chimeras for targeted protein stabilization。　　 研究团队将这种新方法命名为去泛素化酶靶向嵌合体（Deubiquitinase-targeting chimeras，DUBTACs）技术，该嵌合体由靶标蛋白配体和去泛素化酶组成，其中靶标蛋白配体可以与被错误标记的蛋白结合，去泛素化酶能够清除标记在蛋白上的泛素标签。研究人员在因为氯离子通道蛋白被错误地泛素标记和降解而发生囊性纤维化的上皮细胞中，验证了DUBTACs技术的有效性。实验结果显示囊性纤维化细胞接受DUBTACs的处理后，表面的氯离子通道基本恢复到正常细胞水平。　　 该研究不仅开发出预防细胞内蛋白被错误清除的新技术，也为相关疾病治疗方面的研究提供了新启示。　　 论文链接： https://doi.org/10.1038/s41589-022-00971-2

Gasdermin蛋白是人类细胞中在细胞膜上打孔，释放免疫因子并诱导细胞死亡的关键因子。Gasdermin打孔的机制是由caspase介导的，在炎性小体信号传导过程中触发，对防御病原体和癌症至关重要【1】。人类中Gasdermins家族由六个成员组成，GSDMA–GSDME以及pejvakin。但是各种各样的Gasdermin蛋白在进化上的起源以及生物学作用仍然不甚清楚。为此，美国哈佛大学医学院Philip J. Kranzusch研究组与以色列魏茨曼研究所Rotem Sorek研究组合作在Science发文题为Bacterial gasdermins reveal an ancient mechanism of cell death，揭开了细胞焦亡作为细菌以及动物中共有的一种古老的、调节细胞程序性死亡的方式。通过序列分析，作者们发现与哺乳动物Gasdermin蛋白相似不同50个细菌来源的蛋白，其中作者们测定了来自慢生根瘤菌嗜热菌（Bradyrhizobium tropiciagri）和Vitiosangium sp的bGSDMs的晶体结构，结果显示bGSDMs的总体结构都是共享的，与哺乳动物Gasdermin N末端结构具有显著的同源性（图1）。晶体结构分析同时也显示在哺乳动物Gasdermin蛋白中C末端结构，会维持该蛋白处于一种自我抑制的状态；虽然bGSDMs中没有与哺乳动物中Gasdermin蛋白C末端结构相似结构，但是仍然具有自我抑制结构特征（图1）。图1 对细菌来源的Gasdermin蛋白进化保守型以及结构分析随后，作者们想知道bGSDMs在细菌系统中是否有抗噬菌体的功能，作者们发现bGSDMs对大肠杆菌噬菌体具有显著的抵抗性。因此，bGSDMs是细菌“防御工事”中的关键组分。另外，作者们发现bGSDM的激活会诱导细菌细胞膜的破坏，而且在其激活过程中需要蛋白酶的参与，因为引入蛋白酶靶向位点的突变会废除bGSDM的细胞毒性（图2）。图2 蛋白酶参与bGSDM的激活进一步的，作者们对bGSDM的切割过程进行探究。作者们发现bGSDM的切割需要蛋白酶的催化，但是并不需要棕榈酰化修饰。另外，通过质谱分析作者们鉴定到了古字状菌属的Runella中bGSDM的具体切割位点以及处于自我抑制状态的结构生物学基础。通过构建绿色荧光蛋白的融合蛋白，作者们对bGSDM激活的动态过程进行的监测。作者们发现在激活过程中会由弥散分布的形式变成与膜结构存在联系的点状结构，通过透射电镜的检测可以观测到bGSDM切割后会导致细胞膜完整性的破坏，并导致细胞内容物的快速释放。图3 工作模型总的来说，该工作的建立了细菌与哺乳动物中Gasdermin蛋白打孔从而导致的细胞程序性死亡的具体模型（图3），证明了细菌中bGSDM系统可以发挥防御作用，并且该作用依赖于蛋白酶的参与，该工作将有助于深入了解细胞焦亡的具体作用机制以及在进化上的起源。原文链接：https://www.science.org/doi/10.1126/science.abj8432

最早在20世纪40年代微波就已经用于加热食品，从50年代开始微波在化学和相关工业领域已经有了多种多样的技术应用，尤其是食品处理、微波干燥、高分子工业、分析化学、生物化学、医学治疗等领域。但直到20世纪80年代中期微波才被用于有机合成。 和所有学科一样，化学包含了无止境的反复假设和实验。合成反应的特点是多样性的应用和要求精确控制反应条件，因此你等待反应完成所花的时间越少，用于思考和创造的时间就越多。微波合成法缩短了反应时间，方便了快速跟踪和优化反应，加快了“假设-实验-结果”这一过程，从而加快了研发过程的效率和能力。研究人员使用微波技术时失败可能消耗了几分钟，而一旦成功则赢得很多时间。一、第一代微波化学技术 在20世纪80年代中期，微波有机合成只能在传统的多模家用微波炉中进行。这些家用电器的主要缺点是缺少控制系统，不可能以精确的方式控制反应温度，并缺少压力控制和缺少对反应体系的搅拌系统。此外家用微波炉的多模微波场均一性差可能会使重复性出现问题。这些仪器经过改进后仍然存在一些安全隐患，例如没有防爆装置、看不见的微波泄漏。 多模微波等同于家用微波炉技术，优点是微波功率大，腔体大50-60L，缺点是控制精度低±15-25W，能量分布模式不确定性，因能量密度不均匀25-900W/L，需要不停的转动。造成多模反应边界条件，一致性和重复性较差，因此大功率多模微波普遍只用于消解反应。 为何多模微波不用于小样品药物合成？在多模微波系统中进行小样品量有机合成的结果通常是微波功率密度低、重复性差，经常可以看到的现象是一些反应器内没有发生反应，一些反应器内因为微波场不均匀而出现烧焦的现象。因此多模反应文献其科学性常受到学术质疑，也影响了学术界对微波化学的认识。 早期的微波有机合成是在家用微波炉中进行的，而当今的潮流毫无疑问是用专用的仪器进行化学合成，尤其是进行小样量药物筛选合成，目前普遍使用单模微波平台。 目前市场上，有多模仪器冒充单模的现象，有宣称同一台仪器同时实现多模和单模两种模式（实际不可能），请注意辨别。 二、第二代微波化学技术 在20世纪90年代中期，对于微波辅助有机合成的需求日益增长，刺激了对更加复杂的微波仪器的要求。因此具有驻波单模技术的单模微波仪器应运而生。单模仪器产生单一的、高均匀性高功率密度的驻波能量场，使这些体系与小样品量能够有效耦合，通常将最大输出功率限制在300W。驻波单模技术特点是单通道单向高密度耦合(图二，驻波标准波模)。驻波单模为单向发射，受制于微波的波长和反射角限制，其谐振腔硬件体积只能做成30mL，不可改变和扩展。单模能量截面直径为2.5cm，腔体积30mL只能放入10-15mL容器，大于20mL易失去微波场平衡导致耦合位置排斥，影响单模耦合的一致性。另外，单模精度±3－9W，控制精度随功率提高迅速降低，因高密度小体积会产生瞬间过强量热耦合，易损坏反应物造成研究失败。总之，单模小腔体限制反应扩大、加气反应、机械搅拌、循环回流、连续流动和低温反应能力。图二 驻波单模仪器示意图三、第三代微波化学技术 2003年美国CEM公司(www.pynnco.com)推出Auto-Tuning 大型环形聚焦单模微波合成系统―Discover，使单模谐振腔体积从30mL扩展到300mL，Auto-Tuning自动调节11通道耦合的专利技术，环向进行聚焦辐射，形成能势阱效应，使能量耦合均匀性，不受反应物体积尺寸和极性变化的影响。Discover实现了单模技术平台量和质的飞跃，不仅实现了合成反应边界条件的定量性和重复性，确保了反应条件和结果的重复性和再现性不受体积变化，使其突破并扩展到更多样性的合成化学的要求。Discover实现了从低温到高温，从小样品到大样品，全系列各种功能的自由扩展，实现从小分子合成直至中药萃取的各种应用，帮助化学家们进行前沿性R&D研究。这是世界上其他同类单模微波合成产品都无法比拟的。 Discover的多通道能量耦合使控制精度提高10-40倍，自动调控密度0-900W/L。实现了单模技术量和质的突破，使CEM单模的平台扩展到更适合多样性的合成化学，远胜于驻波形单通道单模微波。2003年7月经ACS推荐，荣获美国R&D100技术创新大奖。 Discover的环形聚焦单模微波反应系统，符合合成化学多样化要求和精确性要求的微波辅助有机合成技术，通过实验证明其能增加产率和缩短反应时间。 灵活多样化容器： 同时支持高压密闭10mL,35mL,80mL(500psi,35bar)和循环回流125mL反应。高精度可调微波： 300-600W可选，Auto-Tuning环形定量单模耦合精度±0.27W。 300mL大单模腔体： 可直接放置各种0.1mL-125mL的自动耦合反应容器，电磁和机械搅拌。 光纤和红外两种测温方式。 PowerMax和Coolmate技术： 低温下高微波能量功能，－80℃~300℃提高产出率10-100%，稳定目标反应物。 自由扩展平台： 自动进样系统，气体辅助反应系统，放大反应规模系统，连续流动可升级kg级合成系统。 在世界著名的大学、研究机构如哈佛大学、MIT和医药公司中，包括:Pfizer,GlaxoSmithKline,Merck&Co,Bristol-Myers,Squibb,AstraZeneca,J&J,Pharmacia,Lilly,AHP,Plough等已得到广泛的应用，多样化平台，节约时间，增进产出，降低成本，带给市场安全有效的合成技术。 图三 DISCOVER系列产品四、几种微波技术的对比 几种微波技术的对比 微波类型 微波功率 体积 波导通道 调节精度 调节率％ 多模 1500-2500W 50-60L 单腔 ±15-25W ±1％ 驻波单模 300-900W 30mL 单通道 ±3-9W ±1％ 环形单模 300-600W 300mL 11通道 ±0.3-0.6W ±1％ 五、CEM公司简介 美国CEM公司成立于1971年，是全球最大的和历史最久的微波化学仪器制造商，C E M在北卡建有全球最大的微波化学研发中心，已获得11次国际R & D100应用科学大奖，成果显赫，被称为微波技术创始者和领导者。 世界上最高端的微波技术，如多模连续微波、可变通道单模微波和目前最新的聚焦单模微波，均由C E M首创，市场上其他大多是模仿或使用CEM淘汰的技术。CEM技术领先同行20年，领导主流微波化学技术而代表市场发展方向。 CEM拥有世界微波化学研发领域90%的专利技术（300余项）,在同类产品中技术含量最高，是其他竞争对手难以超越的目标，C E M市场占有率远远高于其他产品,目前在全球已拥有近六万家用户，销售总额约占世界同类市场8 0%（A IReport）。 CEM一直提高和制定微波化学的应用标准，以及仪器电磁和高压安全标准，最先开发了几乎所有微波化学新应用如：微波消解、微波萃取、微波合成、微波多肽合成、超低温化学、微波灰化、微波水分/脂肪/蛋白质快速测试等技术，并最先推荐给全球的化学家们使用。 更多大型环形聚焦单模微波合成系统―Discover详情，请联系培安公司： 电话：北京：010-65528800 上海：021-51086600 成都：028-85127107 广州：020-89609288 Email: sales@pynnco.com 网站：www.pynnco.com

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