氨基酸分离纯化系统

常见的组成多肽的氨基酸有20种，根据其极性和酸碱性可以分为以下几组：非极性（疏水）、极性（不带电荷）、酸性以及碱性（参见图1）。在一条多肽序列中，如果组成该多肽的氨基酸大多为极性氨基酸（图1中粉红色标出部分），如半胱氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等，那么该多肽可能具有较强的极性，易溶于水。在对该类强极性多肽样品的反相色谱制备纯化过程中，若采用普通的C18分离柱，将会发生疏水坍塌现象（具体请参见三泰科技之前发布的应用案例——《疏水坍塌与AQ反相色谱柱的应用》）。而改良后的C18AQ柱可以很好的适用于强极性或强亲水性样品的分离纯化，在本案例中，利用某强极性多肽作为样品，在C18AQ柱上进行了分离纯化，获得了可用于下一步研究的目标产物。

本实验采用电子舌测定鲜味，以及超纳滤、RP-HPLC从风干武昌鱼中分离纯化出纯度均一的鲜味肽，MALDI-TOF-MS、 氨基酸自动分析仪、 FTIR测定鲜味肽的分子质量、 氨基酸组成和二级结构， 探讨鲜味肽结构与风味的关系， 以为风干武昌鱼的标准化生产提供科学指导。

在多种研究项目和常规QC及工艺监控中都需要准确、精密和耐用的氨基酸分析方法来获得重要信息。在生化结构分析中，水解后蛋白质的氨基酸组成被用于确认序列并测定消光系数。与蛋白质结合的氨基酸测量相比，游离氨基酸是代谢状态和遗传起源的重要指示物。在多样化应用，诸如优化生物制药生产的细胞培养条件和工业化规模发酵中的工艺监控中，都需要这样的分析。这些应用的需求导致了氨基酸分析仪的发明以及几十年来技术的持续改进。我们开发了一种完整的全套解决方案。该技术是基于一种设计周密的衍生方案，并结合高分离度的色谱分离。在高比例的含水条件下，用6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯(AQC)衍生氨基酸，采用超高效液相色谱(UPLC® )分离衍生物。UPLC的强化分离度保证了色谱方法能进行准确而精密的测量以及稳定重现。在过去5年中，该技术已经被广泛地应用。这种解决方案现在已经被扩展到最先进的仪器设置和检测方案。本文将讨论该系统的线性、准确度和精密度试验。我们将在分析蛋白质结构和监控细胞培养营养状态中展示这种应用方案的用途。这种应用方案的不断强化保证了最方便和有效地进行可靠的氨基酸分析。

大豆分离蛋白是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的种类之一，一般用低温脱溶大豆粕为原料生产，是一种全价蛋白类食品添加剂。大豆分离蛋白中蛋白质含量一般在90%以上，氨基酸种类约有20 种，并含有人体必需氨基酸，不含胆固醇，广泛的应用于食品加工行业。　　为评价大豆分离蛋白的质量，本文介绍大豆分离蛋白中蛋白水解氨基酸的检测方法。

Elite－AAA氨基酸分析系统采用色谱工作站精确控制高精度二元梯度高效液相色谱系统，提供精确的流路和流动相组分控制，采用专用ODS固定相使十八种氨基酸得到了很好的分离，采用紫外检测器完成氨基酸的检测。特点: DNFB柱前衍生与梯度程序结合能够很好地分离十八种氨基酸，达到理想的分辨率； 极好的定性和定量稳定性； 极高的方法灵敏度； 仪器成本低：柱前衍生与HPLC系统常规紫外检测器检测，不需附加设备，降低了成本； 一机多用：氨基酸该分析系统能够作为常规HPLC系统使用； 运行成本低：缓冲溶液和有机溶剂作流动相，不需要特殊试剂，使得分析成本非常低； 有力的技术支持：公司的色谱仪器专家和分析化学家为用户提供技术保证。

选用ChromCore C18反相色谱柱，在甲醇/乙腈的弱碱性条件下对待测物质进行洗脱，各组分拥有良好的分离度和峰型，适合16种氨基酸的分离。

本公司的柱后法是一种自动分析系统，通过使用阳离子交换柱的梯度洗脱法分离各组分，然后在检测时利用邻苯二甲醛（OPA），采用荧光衍生化法。OPA具有优异的灵敏度、线性，可以良好的灵敏度检测脯氨酸等亚氨基酸。由于本方法是在分离后进行反应，因此不易受到样品中所含夹杂物的影响，可以高灵敏度检测氨基酸，且选择性较高。分离方法包括水解氨基酸分析用的Na型和游离氨基酸分析用的Li型等2种分析模式。使用最适合各自分离模式的时间程序，同时分析氨基酸，而使用专用的流动相试剂盒、及反应液试剂盒，可省去制备步骤，高准确度地进行氨基酸分析。

肽-类肽杂交体或“肽聚体”是寡聚合成的聚合物，其中一个或多个氨基酸被类肽亚单体取代。其关键结构特征是氨基酸的侧链从α -碳重排到肽键的相邻氮原子（参见图1）。通常，这类物质表现出与亲本肽相似的理化特性。肽-类肽杂交体的纯化可以通过具有出色回收率和分辨率的反相色谱法获得。通常，优化肽和类似化合物混合物的分离，最好是考虑调整参数，比如上样量和固定相的粒径。本应用将讲述，使用Teledyne ISCO的RediSep® C18反相色谱柱作为固定相，从肽副产物中分离出肽聚体。

常规酸水解中，胱氨酸和蛋氨酸部分氧化，不能测准。氧化水解法是将饲料蛋白中的含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等）用过甲酸氧化，然后再进行酸解，生成璜基丙氨酸和蛋氨酸砜，再经离子交换色谱法分离。这样可以准确得到含硫氨基酸的结果。我们提供快速程序分析含硫氨基酸，可以使客户快速得到这两个组分的结果。

L-8900全自动氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的全自动化专用分析仪器，广泛用于医药、食品、饲料、农业、育种、医学研究和地质考察等领域。 L-8900全自动氨基酸分析仪是根据柱后衍生原理设计而成，分为水解蛋白分析系统和生理体液分析系统，符合国际标准和国际仲裁标准。L-8900全自动氨基酸分析仪是集日立公司四十年氨基酸分析仪生产技术和专业知识的巅峰之作。为适应氨基酸分析的需要，L-8900采用专为氨基酸分析研制的微量输液泵、检测器、反应柱、分离柱等部件，这些都极大地提高了氨基酸分析的灵敏度、检出限和重复性。

常规酸水解中，胱氨酸和蛋氨酸部分氧化，不能测准。氧化水解法是将饲料蛋白中的含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等）用过甲酸氧化，然后再进行酸解，生成璜基丙氨酸和蛋氨酸砜，再经离子交换色谱法分离。这样可以准确得到含硫氨基酸的结果。我们通过氧化水解法对鱼料进行前处理，可以更好的对其中的氨基酸组成含量进行分析。

常规酸水解中，胱氨酸和蛋氨酸部分氧化，不能测准。氧化水解法是将饲料蛋白中的含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸等）用过甲酸氧化，然后再进行酸解，生成璜基丙氨酸和蛋氨酸砜，再经离子交换色谱法分离。这样可以准确得到含硫氨基酸的结果。我们通过氧化水解法对鱼料进行前处理，可以更好的对其中的氨基酸组成含量进行分析。

L-8900全自动氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的全自动化专用分析仪器，广泛用于医药、食品、饲料、农业、育种、医学研究和地质考察等领域。 L-8900全自动氨基酸分析仪是根据柱后衍生原理设计而成，分为水解蛋白分析系统和生理体液分析系统，符合国际标准和国际仲裁标准。L-8900全自动氨基酸分析仪是集日立公司四十年氨基酸分析仪生产技术和专业知识的巅峰之作。为适应氨基酸分析的需要，L-8900采用专为氨基酸分析研制的微量输液泵、检测器、反应柱、分离柱等部件，这些都极大地提高了氨基酸分析的灵敏度、检出限和重复性。

本实验为用加压梯度毛细管电色谱来分离18种氨基酸衍生物。用反相C18毛细管柱（粒径3μm，130mm×75μmI.D.），醋酸盐缓冲液（50mmol/L NaAc, pH 6.4），离子对试剂（1% N,N-二甲基甲酰胺）分离一标准溶液中的衍生化氨基酸（2μg/ml），UV-Vis检测器的波长为360nm，毛细管柱的压力保持在大约70Pa, 并在柱的出口端加3kV的正电压。研究电压对于氨基酸的洗脱次序和分离度的影响，发现当电压超过3kV时候C18对氨基酸产生吸附作用。对盐浓度，进样量，和柱长度对于氨基酸分离的影响都进行了测定。氨基酸样品在CEC中分离，每个氨基酸迁移时间的RSD小于2.5%

L-8900全自动氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的全自动化专用分析仪器，广泛用于医药、食品、饲料、农业、育种、医学研究和地质考察等领域。 L-8900全自动氨基酸分析仪是根据柱后衍生原理设计而成，分为水解蛋白分析系统和生理体液分析系统，符合国际标准和国际仲裁标准。L-8900全自动氨基酸分析仪是集日立公司四十年氨基酸分析仪生产技术和专业知识的巅峰之作。为适应氨基酸分析的需要，L-8900采用专为氨基酸分析研制的微量输液泵、检测器、反应柱、分离柱等部件，这些都极大地提高了氨基酸分析的灵敏度、检出限和重复性。

正相色谱和反相色谱是Flash制备色谱常用的两种分离模式，被广泛应用于各类有机合成产物的分离纯化中。在正相色谱中，采用极性固定相（如带有二醇基、氨基或氰基的固定相及硅胶、三氧化二铝等）并结合使用非极性流动相（如正己烷等），根据分子的极性大小将其分开。由于正相色谱以吸附效应作为分离的基础，因此也被称为吸附色谱。而在反相色谱中，采用非极性固定相（如带有C18基团的硅胶等）配合极性流动相对样品进行分离。这两种分离模式基于不同的分离机理，因此在将两种分离模式联用时可称之为正交色谱分离模式，从而获得对复杂样品更高的分辨力和更好的分离效果。本文中以某合成药物中间体为样品，利用SepaFlash系列正相硅胶柱及反相C18柱联合使用，实现了对样品的高效分离纯化，获得了满足纯度要求的目标产物，为此类复杂样品的快速制备纯化提供了新的思路。

在本应用案例中，样品为极性很强的谷氨酰胺类衍生物，不易溶于正己烷、乙酸乙酯等常用正相流动相，而其在普通C18反相柱上几乎没有保留。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用亲水性的SepaFlash® C18AQ柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine，成功对样品进行了纯化制备，获得了满足制备需求的目标产物，为极性很强的谷氨酰胺类样品的分离纯化提供了一种可行的方案。

Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测鱼料中氨基酸，本文主要介绍Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测鱼料中氨基酸。

L-8900全自动氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的全自动化专用分析仪器，广泛用于医药、食品、饲料、农业、育种、医学研究和地质考察等领域。L-8900全自动氨基酸分析仪是根据柱后衍生原理设计而成，分为水解蛋白分析系统和生理体液分析系统，符合国际标准和国际仲裁标准。L-8900全自动氨基酸分析仪是日立公司推出的新型产品，是集日立公司四十年氨基酸分析仪生产技术和专业知识的巅峰之作。为适应氨基酸分析的需要，L-8900采用专为氨基酸分析研制的微量输液泵、检测器、反应柱、分离柱等部件，这些都极大地提高了氨基酸分析的灵敏度、检出限和重复性。

实验证明，这种手性分离方法可从ACQUITY UPC2系统成功放大至Prep SFC 150 Mgm系统。通过重迭进样完成了对铱(III)络合物对映体的纯化，得到对映体纯的馏分， 并且样品回收率良好。对铱(III)络合物对映体进行SFC纯化，有利于更好地控制受其影响的光物理 性质和相关应用。

每个蛋白质或多肽都具有特定的氨基酸序列，即氨基酸组成。因此氨基酸组成分析可作为蛋白质或多肽的鉴定方法。氨基酸分析用于从药物发现到生产的整个过程，以确保批次之间的相似性和一致性。它也经常被用于确定裂解蛋白质所用的蛋白酶的种类。氨基酸分析也是精确测定蛋白质含量的常用工具。氨基酸分析涉及四个基本步骤，首先是将蛋白质酸解为独立的氨基酸。接着对氨基酸进行标记以使它们适合紫外或荧光检测。然后对衍生化的氨基酸进行色谱分离。最后根据标记物的强度测定每个氨基酸的相对含量。一个理想的氨基酸定量分析应当具备快速、灵敏的衍生化手段和分析技术。安捷伦1260 Infinity 或者1290 Infinity 液相色谱系统和安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18 柱可以满足这些要求，采用邻苯二甲醛(OPA) 衍生化伯氨基酸，9- 芴甲酸(FMOC) 衍生化仲氨基酸；完成自动的在线衍生化后，进行可靠的液相色谱分析。该系统可以快速、准确、灵敏和高重现地完成氨基酸分析。

在本文中，三泰科技的研发人员利用快速液相制备色谱系统SepaBean machine配合SepaFlash C18反相分离柱对红豆杉植物提取物进行了分离纯化，获得了满足制备需求的目标产品，可用于后续的进一步科学研究中，为此类天然产物的快速制备纯化提供了经济高效的解决方案。

以花鲳为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明花鲳肌肉中氨基酸总量的质量百分比为14443.578mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.59%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.73%。

CEM专利的环形电磁场结构设计，使氨基酸构成的卷曲肽链充分展开，进行彻底的去保护、耦合和裂解，反应变得极其快速，完全，高纯。Liberty BLUE比传统方法提高了近20倍；标准的10肽 ACP 序列合成纯度竟达到 98%，使得许多合成反应甚至可免去纯化步骤；可以完成传统方法不可能实现的困难合成。实现更多更长的氨基酸耦合，防止长链多肽聚合，消除双重耦合和外消旋现象，同时降低树脂的要求。BLUE 开辟了多肽合成的新纪元，使生物化学和蛋白质研究具备了空前的多肽合成的能力，是以前传统合成方法根本无法想象的。市场上没有任何一台多肽合成仪能与 BLUE相媲美。

本文使用岛津氨基酸分析仪建立了19种氨基酸茚三酮柱后衍生分析方法，并应用于饲料中氨基酸的测定。本方法使用外标法定量，在10-200 nmol/mL的浓度范围内，19种氨基酸的线性相关系数均大于0.9996，检出限在0.23~2.56 nmol/mL之间，定量限在0.76~8.54 nmol/mL之间。精密度实验中，保留时间的RSD在0.01%~0.38%之间，峰面积的RSD在0.20%~2.52%之间。分离度满足GB/T 18246-2019《饲料中氨基酸的测定》的要求，可为相关从业人员提供参考。

Biochrom30+ 氨基酸分析仪氧化水解法检测小鸡配合饲料中氨基酸。样品前处理所用试剂必须使用重蒸馏水或与之等质的水（电导率＜10μ s）。

Biochrom30+氨基酸分析仪氧化水解法检测豆粕A中氨基酸。样品前处理：所用试剂 必须使用重蒸馏水或与之等质的水（电导率＜10μ s）

在本应用案例中，样品分子结构中含有噻嗪类母体结构，普通正相硅胶柱或反相C18 柱均不适合对其进行分离纯化，三泰科技的应用工程师利用SepaFlash HILIC ARG柱配合快速液相制备色谱系统SepaBean® machine成功对其进行了分离，获得了满足纯度要求的目标产物，为此类样品的分离纯化提供了便捷高效的解决方案。

中压制备液相色谱法具有高的选择性和分离效率，对于EPA和DHA以及其他杂质有很好的分离作用，高重现性，批次稳定性适合于制备EPA 、DHA等不饱脂肪酸产品。 采用我们的鱼油纯化专用填料的中压玻璃柱，配套苏州汇通色谱自主的制备液相系统，能一步得到纯度90%以上的EPA和DHA，收率均在达70%以上。

在本应用案例中，样品为合成反应获得的苯并冠醚衍生物，该样品体系复杂，包含多种不同极性的组分，利用常规二元溶剂梯度进行纯化时很难获得良好的分离度。针对样品的具体性质，三泰科技的应用工程师利用四元溶剂系统SepaBean machine T配合SepaFlash 正相硅胶柱，通过不同极性溶剂的在线切换，成功对样品进行了制备纯化，获得了满足制备需求的目标产物，为此类组分极性差异很大的复杂样品体系的分离纯化提供了一种可行的方案。