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在实际工作中,当我们拿到一个样品,我们该怎样如何定性和定量,建立一套完整的分析方法是关键,下面介绍一些常规的步骤:1、样品的来源和预处理方法GC能直接分析的样品必须是气体或液体,固体样品在分析前应当溶解在适当的溶剂中,而且还要保证样品中不含GC不能分析的组分(如无机盐),可能会损坏色谱柱的组分。这样,我们在接到一个未知样品时,就必须了解的来源,从而估计样品可能含有的组分,以及样品的沸点范围。如能确认样品可直接分析。如果样品中有不能用GC直接分析的组分,或样品浓度太低,就必须进行必要的预处理,包括采用一些预分离手段,如各种萃取技术、浓缩和稀释方法、提纯方法等。2、确定仪器配置所谓仪器配置就是用于分析样品的方法采用什么进样装置、什么载气、什么色谱柱以及什么检测器。3、确定初始操作条件当样品准备好,且仪器配置确定之后,就可开始进行尝试性分离。这时要确定初始分离条件,主要包括进样量、进样口温度、检测器温度、色谱柱温度和载气流速。进样量要根据样品浓度、色谱柱容量和检测器灵敏度来确定。样品浓度不超过mg/mL时填充柱的进样量通常为1-5uL,而对于毛细管柱,若分流比为50:1时,进样量一般不超过2uL。进样口温度主要由样品的沸点范围决定,还要考虑色谱柱的使用温度。原则上讲,进样口温度高一些有利,一般要接近样品中沸点最高的组分的沸点,但要低于易分解温度。4、分离条件优化分离条件优化目的就是要在最短的分析时间内达到符合要求的分离结果。在改变柱温和载气流速也达不到基线分离的目的时,就应更换更长的色谱柱,甚至更换不同固定相的色谱柱,因为在GC中,色谱柱是分离成败的关键。5、定性鉴定所谓定性鉴定就是确定色谱峰的归属。对于简单的样品,可通过标准物质对照来定性。就是在相同的色谱条件下,分别注射标准样品和实际样品,根据保留值即可确定色谱图上哪个峰是要分析的组分。定性时必须注意,在同一色谱柱上,不同化合物可能有相同的保留值,所以,对未知样品的定性仅仅用一个保留数据是不够的,双柱或多柱保留指数定性是GC中较为可靠的方法,因为不同的化合物在不同的色谱柱上具有相同保留值的几率要小得多。6、定量分析要确定用什么定量方法来测定待测组分的含量。常用的色谱定量方法不外乎峰面积(峰高)百分比法、归一化法、内标法、外标法和标准加入法(又叫叠加法)。峰面积(峰高)百分比法最简单,但最不准确。只有样品由同系物组成、或者只是为了粗略地定量时该法才是可选择的。相比而言,内标法的定量精度最高,因为它是用相对于标准物(叫内标物)的响应值来定量的,而内标物要分别加到标准样品和未知样品中,这样就可抵消由于操作条件(包括进样量)的波动带来的误差。至于标准加入法,是在未知样品中定量加入待测物的标准品,然后根据峰面积(或峰高)的增加量来进行定量计算。其样品制备过程与内标法类似但计算原理则完全是来自外标法。标准加入法定量精度应该介于内标法和外标法之间。7、方法的验证所谓的方法验证,就是要证明所开发方法的实用性和可靠性。实用性一般指所用仪器配置是否全部可作为商品购得,样品处理方法是否简单易操作,分析时间是否合理,分析成本是否可被同行接受等。可靠性则包括定量的线性范围、检测限、方法回收率、重复性、重现性和准确度等。本文摘自《气相色谱方法及应用》
[color=#DC143C]所在地区:陕西西安,从事行业:药物研发分析,分析的物质名称:某胺类物质(涉密,具体名字省略)[/color][color=#00008B]方法名称:胺类盐酸盐[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]分析方法(自己研发) 企业标准[/color]前些日子,接到一个新项目,要对一个胺类盐酸盐进行纯度分析,该样品为科研新研发的项目,以前从未做过类似的工作,对我来说也是开天辟地了,觉得有点难度。首先拿到反应工艺,了解该物质的化学性质如下:盐酸盐,无紫外吸收,极性大,反相不保留 加上客户更看重GC结果,经过严重的思想斗争后认为做[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]比液相容易点(盐类物质在反相上不保留),着手准备!由于是做纯度,因此面积归一化法足够了,要求不高,无需校正,再说了,新研发的样品中未知杂质太多了,也无法一一校正!1.样品预处理 盐酸盐由于难以汽化无法直接进样分析,需要前处理,必须把盐酸破坏掉,把有机物提取出来,进样分析,相关的文献报道不是很多,自己摸索吧,做成了,皆大欢喜;失败了,也不是很丢人,毕竟对我来说是个尝试,大致思路出来了,做好实验前的准备工作很重要!1.1预处理过程参数的简单选择 (1) 用什么来破坏盐酸盐呢?碱!回答的很正确!备用选项:NaOH水溶液、NaOH的甲醇溶液、甲醇钠、氨水,考虑到水可能会对柱子的固定液有伤害,排除掉含水的三种,分别用NaOH的甲醇溶液、甲醇钠对样品进行处理,两者的破坏效果对分析结果的影响无明显差异,但是后者配制起来危险性较高(不知道有没有用过甲醇钠,用金属钠加到甲醇中,金属钠属于危险品,尽量少用),因此采用NaOH的甲醇溶液作为处理的溶液;由于NaOH在甲醇中的溶解度有限,因此选用的浓度是2%(m/m)。 (2)pH值对分析结果的影响 pH值过小的话,样品可能破坏的不完全,并且样品在低pH值时的稳定性也较差(相对高pH而言),pH值过高担心柱子耐受不了,经过一番实验发现pH值在9时分析结果较让人满意。 (3)样品破坏后的稳定性实验 样品从盐酸盐破坏为胺后在空气中的稳定性较差(容易被氧化,后来经过GC-MS确认是和空气中的氧气反应了),很难保证数据的精密度,因此预处理过程中要对样品进行通N2保护,使数据的精密度得到了保证。 样品经过破坏后,用0.45um滤膜滤掉盐类及部分不溶物,进样分析。2.色谱条件的选择 手头的仪器就是14C,2010,2014C了,这些都不重要,最重要的是选择柱子,能选的柱子包括DB-1,DB-17,DB-FFAP,Rtx-5Amine(新买的,专门做胺类物质的,5000多块大洋哦,蛮心疼的),检测器只有FID,没有优化的空间了;能进行选择的只有柱子了,FFAP一般是用来做挥发性脂肪酸的,这个是胺,大方向都不对,直接排除;DB-17柱子只有两根,怕弄坏了领导怪罪,排除;DB-1超多,随便找一个将要淘汰的先试试(由于样品有碱性,怕对柱子不好,不敢先用好柱子做),Rtx-5Amine胺基柱专门做胺类物质的,可以和DB-1做个对比,看哪个效果好,对比结果如图所示,胺基柱的优势是相当的明显,DB-1排除。经过简单优化后的色谱条件:仪 器:GC-2010分析柱:Rtx-5 Amine(30m*0.32mm*1um)载 气:He检测器:FID分流进样(SPL=30)温度参数设置:INJ 280度,DET 300度,COL 100度起,10度/min升温至280度,停留20min;DB-1做的结果:[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/06/200906111455_155052_1621482_3.jpg[/img]Rtx-5Amine做的结果:[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/06/200906111456_155053_1621482_3.jpg[/img]用到的装备:[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2009/06/200906111456_155054_1621482_3.jpg[/img]3.0小结 于如期完成了,说不上圆满,因为有些地方还不完善,比如预处理过程有点繁琐,稳定性也有优化的空间等。这个项目结束后,铺天盖地的胺类物质都送过来做GC,超级郁闷!道路还很漫长................当局者迷,旁观者清,请各位专家、版友积极指出方法中的不足和错误地方,作为当事人,不容易发现错误.................
[align=center][b][size=24px]气相色谱仪分析的定性依据及定性方法[/size][/b][/align][color=#000000] [size=18px]气相色谱仪[/size][/color][size=18px]的色谱分析包括色谱定性分析和定量分析。今天为大家浅析气相色谱仪的定性分析依据和定性分析方法,仅供色谱工作者参考交流。 (一)气相色谱仪的定性分析依据:气相色谱主要功能不仅是将混合有机物中的各种成分分离开来,而且还要对结果进行定性及定量分析。所谓定性分析就是确定分离出的各组分是什么有机物质,而定量分析就是确定分离组分的量有多少。色谱在定性分析方面远不如其它的有机物结构鉴定技术,但在定量分析方面则远远优于其它的仪器方法。 有机物进入气相色谱后得到两个重要的测试数据:色谱峰保留值和面积,这样气相色谱可根据这两个数据进行定性定量分析。色谱峰保留值是定性分析的依据,而色谱峰面积则是定量分析的依据。 (二)气相色谱仪定性分析方法:气相色谱的定性分析方法主要有保留值定性法、化学[color=#000000]试剂[/color]定性法和检测器定性法。气相色谱的保留值有保留时间和保留体积两种,现在大多数情况下均用保留时间作为保留值。在相同的仪器操作条件和方法下,相同的有机物应有同样的保留时间,即在同一时间出峰。但必须注意:有同样保留时间的有机物并不一定相同。 气相色谱保留时间定性分析方法就是将有机样品组分的保留时间与已知有机物在相同的仪器和操作条件下保留时间相比较,如果两个数值相同或在实验和仪器容许的误差范围之内,就推定未知物组分可能是已知的比较有机物。但是,因为同一有机物在不同的色谱条件和仪器中保留时间有很大的差别,所以用保留时间值对色谱分离组分进行定性只能给初步的判断,绝对多数情况下还需要用其它方法作进一步的确认。一个最常用的确证方法是将可能的有机物加到有机样品中再进行一次气相色谱仪分析,如果有机样品中确含已知有机物的组分,则相应的色谱峰会增大。这样比较两次色谱图峰值的变化,就可以确定前期初步推断是否正确。[/size]