液相色谱测甲醛含量

高效液相色谱法测定纺织品中甲醛含量的方法验证摘要：采用2,4-二硝基苯肼为衍生化试剂，生成2,4-二硝基苯腙，用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）测定纺织品萃取后有颜色干扰的样品效果良好。方法检出限小于5.0mg/kg；从0.15 mg/L起到7.50mg/L的范围（样品浓度对应为7.5mg/kg到375mg/kg的范围）内成线性且相关系数均在0.999以上；组内精密度及组间精密度分别为1.51%及3.50%，表面方法稳定性良好；采用不同浓度的加标回收率实验，回收率落在85％－110％，RSD在5％以内，方法测试结果良好。本方法可以很好的用于纺织品甲醛含量的检测，尤其是对有颜色干扰的样品萃取液有检测优势。关键词：纺织品；甲醛；高效液相检测法；颜色干扰。1.前言 目前，甲醛的检测方法按精确度划分，大致可分为两种，其一种为精密度测定法（仪器分析法），包括世界卫生组织推荐的高效液体色谱法（HPLC），气相色谱法（DNPH-GC法）及分光光度法等；其二为简易测定法，该法主要用于快速检测，其精确度要求不高。主要有电法学方法，可以显示测定数据，以及检测管方式和测定纸方式，即通过检测气体与指示剂发生法学反应而表现出的颜色变化来测定检测气体浓度。 目前纺织品甲醛的检测方法主要有GBT 2912.1-2009 纺织品甲醛的测定第1部分游离和水解的甲醛（水萃取法）（MOD 14184-1-2008）；GBT 2912.2-2009 纺织品甲醛的测定第2部分：释放的甲醛(蒸汽吸收法) （MOD 14184-2-2008）；ISO14184-1-2011textiles-determination of formaldehyde part1:free and hydrolysed formaldehyde(waterextraction method)；ISO14184-2-2011textiles-determination of formaldehyde part2:released formaldehyde(vapourabsorption method)；JIS L1041-2011-树脂整理织物试验方法；GB／T 2912.3-2009 纺织品甲醛的测定第3部分：高效液相色谱法。大部分方法都还是采用乙酰丙酮显色法，[font='Calibri','sans-s

微量甲醛、乙醛液相色谱测定法1　适用范围本标准规定了液相色谱测定水溶液或环氧乙烷样品中的甲醛和乙醛的方法。本标准适用于样品中甲醛、乙醛含量为1～50mg/kg的分析。2　方法概要　　液态样品中微量甲醛、乙醛与2、4-二硝基苯肼衍生生成甲醛-2、4-二硝基苯腙（以下称：甲醛-DNPH）和乙醛-2、4-二硝基苯腙（以下称：乙醛-DNPH），在通过固相C18小柱将甲醛、乙醛的衍生物从溶液中萃取出来。随后，使用自动进样器直接将萃取出的甲醛、乙醛衍生物注入[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]，样品在甲醇和水混合溶液携带下通过毛细管色谱柱分离，使样品里的甲醛衍生物、乙醛衍生物及未反应2、4-二硝基苯肼按照不同顺序先后进入紫外检测器检测。最后，由色谱数据工作站采用外标法得到各物质含量。3　试剂和材料3.1　甲醇：液相色谱（HPLC）纯。3.2超纯水：比电阻率大于18.2ΜΩcm的水。3.32，4-二硝基苯肼（DNPH）：分析纯。3.4超声波振荡器。3.5玻璃溶剂过滤器。3.6真空泵。3.7量筒：10mL。3.8量筒：25mL。3.9具塞碘量瓶：250mL。3.10C18固相萃取小柱（SPE）。3.11注射器：5mL。3.12注射器：10mL。3.13烧杯：50mL3.14标准溶液：与分析样品浓度相接近甲醛、乙醛水溶液，自配或外购。4　仪器4.1液相色谱仪：安捷伦科技公司1200型，配有自动进样器、真空脱气、四元梯度泵和紫外检测器，或同类产品。4.2色谱数据工作站：安捷伦科技公司Chemstation工作站，或同类产品。4.3色谱柱：见表1推荐色谱柱，或同类产品。推荐色谱柱典型操作条件见表1，典型色谱图见图1。[img=,681,608]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/09/201709032112_01_2166779_3.png[/img]5　校正仪器第一次使用或者被改变了某一或某些参数设置（如流量、流动想类型、流动相比例、色谱柱等），应对仪器进行校正。使用已知与样品接近含量的标准甲醛、乙醛溶液与DNPH络合后，在液相色谱仪上分析，测量两物质色谱峰峰面积，计算校正因子k[sub]i[/sub]：k[sub]i[/sub]=标准液中i物质浓度/i物质衍生物峰面积。6　试验步骤6.1用5mL注射器将5mL甲醇注入C18固相萃取小柱，冲洗萃取小柱进行预处理，然后再用5mL超纯水冲洗。6.2分别取10g样品(由于环氧乙烷沸点较低，环氧乙烷产品可直接使用量筒量取11.2mL)、10mL2，4-二硝基苯肼（DNPH）试剂和10mL超纯水转移到碘量瓶内，盖上瓶塞，让混合物反应15分钟。如果观察到沉淀，则应使用超纯水按1：10稀释样品，并按上述描述再次进行操作。6.3使用一个10mL量筒量取10mL的反应混合物，用针筒将其转移到一个6.1中预处理好的固相萃取小柱，注射时应将样品缓慢地推进萃取小柱。然后，使用10mL超纯水重复上述步骤，注意需将所有液体推出萃取小柱。6.4用注射器将8mL甲醇推进萃取小柱，以洗脱富集被固相萃取小柱从样品中萃取出的甲醛-DNPH、乙醛-DNPH及未反应的DNPH溶液。洗脱富集液放置于烧杯中。再向烧杯添加少量甲醇，使溶液的最终重量达到10±0.01g。6.5使用符合4.3中推荐色谱柱或同类色谱柱，采用自动进样器将适量6.4中的洗脱富集样品注入4.1规定液相色谱仪，通过色谱工作站测量各物质出峰面积，利用已测校正因子面积归一定量计算样品中各组成含量。6.6用10mL的去离子水替代样品重复步骤6.2至6.5，测定空白。7　计算7.1溶液甲醛、乙醛含量按下式计算：（外标法）X[sub]i[/sub]=A[sub]i[/sub]×k[sub]i[/sub]式中：X[sub]i[/sub]——被测组分i的含量，mg/kg；A[sub]i[/sub]——被测组分i的衍生物峰面积；k[sub]i[/sub]——被测组分i的绝对校正因子；i——甲醛或乙醛。8　精密度8.1　重复性同一操作者重复测定的两次测定结果的差值应不超过平均值的10%(m/m)。9　结果的表示仪器稳定状态下连续两次测定结果的平均值作为出厂产品的测定结果，生产装置过程控制使用单次测定数据作为结果报告，结果的表示修约至1mg/kg。10注意事项10.1　仪器进样前取样，需摇晃采样容器，以保证分析样品的均匀性。10.2　色谱流动相必须使用液相色谱（HPLC）纯试剂。10.3当分析环氧乙烷或含有环氧乙烷样品时，使用前应事先将试剂、容量瓶和量筒冷却，以防止环氧乙烷受热挥发。10.4　对含有环氧乙烷的样品的任何操作，必须在通风柜中完成，并做好个人防护。

[b]一、范围 [/b]化妆品目前已成为大多数人生活中必不可少的一部分，它的成分安全也因引起了很大的关注。本方法采用了柱后衍生-高效液相色谱法测定化妆品中游离甲醛含量。本方法适用于水剂、膏霜乳液、凝胶类化妆品中（乌洛托品除外）游离甲醛含量的测定。二、[b]方法提要[/b] 样品中的游离甲醛经高效液相色谱分离，柱后衍生，在420nm波长下检测，根据保留时间定性，峰面积来进行定量，用标准曲线法计算含量。取0.2g 样品时，按照此方法对游离甲醛的检出浓度为0.003%，最低定量浓度为0.005%。[b]三、试剂和材料[/b]所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682 规定的一级水。1.甲醛标准物质水溶液，使用前要进行标定（标定要用到的的硫代硫酸钠标准溶液需提前两周配置）。2.磷酸3.乙酸铵4.冰乙酸5.乙酰丙酮6.二氯甲烷7.磷酸溶液：在容量瓶中加入998mL水，移取2mL磷酸缓缓加入水中，混匀。8.柱后衍生溶液：称取62.5g乙酸铵放入容量瓶中，移取7.5mL冰乙酸和5mL乙酰丙酮到容量瓶中，加水至1000mL定容，摇匀。在25℃密封避光保存，该溶液有效使用期3天。9.甲醛系列标准溶液：用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液枪[/color][/url][/color][/url]精密量取甲醛标准物质水溶液适量，用磷酸溶液稀释成 1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL 的标准系列溶液。现用现配。[b]四、 仪器和设备[/b]1.高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907021550597538_7681_1641969_3.jpg!w690x517.jpg[/img]2. 柱后衍生仪。[img=,272,430]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907021556447053_3919_1641969_3.jpg!w393x620.jpg[/img]3.天平。[img=,230,333]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907021524410210_4355_1641969_3.jpg!w690x998.jpg[/img]4.离心机。5.涡旋振荡器[b]五、分析步骤1、样品前处理[/b] 称取样品0.2g（精确至0.001g）放入10mL具塞比色管中，加磷酸溶液至刻度，涡旋处理1分钟，在5000转/分的速度下离心5min，提取上清液，经过0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测溶液，并尽快测定。甲醛标准物质水溶液标定：⑴、试剂和材料所用试剂均为分析纯或以上规格，水为GB/T6682规定的一级水。1硫酸2氢氧化钠溶液：称取氢氧化钠4g置容量瓶中，用少量水溶解，再加水至100mL定容，混匀。3 硫酸溶液①：移取硫3mL硫酸，缓慢加入到有97mL水的容量瓶中，混匀。4 硫酸溶液②：移取10mL硫酸，缓慢加入到90mL水的容量瓶中，混匀。5 淀粉溶液：称取可溶性淀粉1g，加入5mL水调成溶液后，加入95mL沸水，煮沸，后加入氯化锌0.4g防腐。6 碘标准溶液：称取碘13.0g和碘化钾35g放入大烧杯中，加入100mL水，溶解后滴入3滴盐酸，用水稀释至1L，过滤后转移至棕色瓶中。7 重铬酸钾标准溶液：准确称取在120℃干燥到恒重的重铬酸钾基准物质4.9031g与大烧杯中，加水溶解后，转移至1L容量瓶中定容，摇匀。8 硫代硫酸钠标准溶液：称取硫代硫酸钠26g放入有1L新煮沸放冷的水的烧杯中溶解，加入0.4g氢氧化钠，摇匀，转移到棕色玻璃瓶内储存起来，放置两周后过滤。过滤后进行标定浓度：准确量取重铬酸钾标准溶液25.00mL放入500mL碘量瓶中，加入2.0g碘化钾和20mL硫酸溶液②后，立即密塞，摇匀，于暗处放置10min。再加入150mL水，用硫代硫酸钠溶液滴定至溶液显浅黄色时，加入2mL淀粉溶液，继续滴定至溶液颜色由蓝色变为亮绿色。同时做空白试验。并且计算硫代硫酸钠溶液的浓度：c(Na2S2O3)=c(K2Cr2O7)×25.00/（V1-V0）式中：c(Na2S2O3)——硫代硫酸钠标准溶液的浓度，mol/L； c(K2Cr2O7)——重铬酸钾标准溶液的浓度，mol/L； V1——滴定重铬酸钾消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL； V0——滴定空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积，mL。⑵、标定 准确量取甲醛标准物质水溶液适量（相当于甲醛10～20mg）于250mL碘量瓶中，加入50.00mL碘标准溶液，5mL氢氧化钠溶液，加塞，摇匀放置15min，再加入20mL硫酸溶液①，立即塞紧，混匀，于暗处放置15min，用硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液显淡黄色时，加入2mL淀粉溶液，继续滴定至溶液的蓝色刚好褪去，记录消耗硫代硫酸钠标准溶液的体积。同时做空白试验。并计算甲醛的浓度：ρ（HCHO）=（V0-V1）×c×15×1000/V式中：ρ（HCHO）——甲醛溶液的浓度分数，mg/L； V——甲醛标准储备液取样体积，mL； V0——滴定空白溶液消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积，mL； V1——滴定甲醛溶液消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积，mL； c——硫代硫酸钠溶液的摩尔浓度，mol/L； 15——甲醛（1/2HCHO）摩尔质量，g/mol。2、[b]色谱参考条件[/b]色谱柱：C18 色谱柱（250×4.6mm×5μm）；流动相：磷酸溶液；流速：1.0mL/min；柱温：20℃；检测波长：420nm；进样体积：10μL；柱后衍生溶液流速：0.5mL/min；衍生温度：100℃。3、[b]测定[/b] 在上述色谱条件下，取甲醛系列标准溶液各10μL分别进样，进行液相色谱分析，以系列标准溶液浓度为横坐标，甲醛衍生物的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，方程为Y=77.47X+34.89，相关系数为0.9999。 取处理得到的待测溶液进样10μL，进行色谱分析，根据保留时间和光谱图定性，测得甲醛衍生物的峰面积，根据标准曲线得到待测溶液中游离甲醛的质量浓度。最后计算样品中游离甲醛的含量。若样品中游离甲醛含量超过0.05%时，可采用液相色谱-三重四级杆质谱进行确证。若样品游离甲醛含量未超过0.05%，则不需要这一步。六、[b]分析结果的表述[/b]1、[b]计算[/b][img=,180,35]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907021504454754_3361_1641969_3.png!w207x41.jpg[/img]式中：ω（游离甲醛）——化妆品中游离甲醛的含量，%；m——样品取样量，g；ρ——代入标准曲线计算得到的样品中甲醛的质量浓度，μg/mL；V——定容体积，mL。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值均不超过算术平均值的 5%。2、[b]回收率和精密度[img=,306,112]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907021511430192_319_1641969_3.png!w306x112.jpg[/img][/b]回收率为97.1% ～ 104.8%，相对标准偏差均小于3%。七、[b]图谱[img=,690,158]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907021507443113_362_1641969_3.png!w690x158.jpg[/img][/b] 图-1.甲醛标准溶液色谱图 甲醛（4.542min）八、[b]样品确证1、 样品处理[/b] 称取样品0.2g（精确至0.001g）于10mL具塞比色管中，加五氟苯肼溶液（称取五氟苯肼1.0g，放入1000mL容量瓶中，用磷酸溶液溶解并定容，摇匀。）至刻度，涡旋处理1分钟，5000rpm 离心5min，取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤，取滤液作为待测溶液，立即测定。另取甲醛标准溶液（与样品中游离甲醛的量相当）于10mL 具塞比色管中，同法处理。[b]2 、液相色谱-质谱法参考条件色谱参考条件：[/b]色谱柱：C18柱（2.1mm×150mm×3.5μm）；流动相A：水；流动相B：乙腈；流动相梯度洗脱程序如下表：表 1 流动相梯度洗脱程序[table][tr][td]时间/min[/td][td]V（流动相 A）/ [/td][td]V（流动相 B）/ [/td][/tr][tr][td]1.0[/td][td]90[/td][td]10[/td][/tr][tr][td]3.0[/td][td]40[/td][td]60[/td][/tr][tr][td]6.0[/td][td]0[/td][td]100[/td][/tr][tr][td]8.0[/td][td]0[/td][td]100[/td][/tr][tr][td]8.1[/td][td]90[/td][td]10[/td][/tr][/table]流速：0.3mL/min；柱温：25℃；进样量：5μL。[b]质谱参考条件：[/b]离子源：电喷雾离子源（ESI 源）；监测模式：负离子多反应监测模式；气流温度：160℃；鞘气温度：350℃；雾化气压力：30psi；毛细管电压：1500V；碰撞气：氮气；表 2 监测离子对及相关电压参数设定表[table][tr][td]物质名称[/td][td]母离子（m/z）[/td][td]子离子（m/z）[/td][td]CE（V）[/td][/tr][tr][td]甲醛与五氟苯肼衍生物[/td][td]209[/td][td]189[/td][td]5[/td][/tr][tr][td] [/td][td] [/td][td]167[/td][td]17[/td][/tr][/table][b]3 、定性[/b]分别取甲醛标准溶液及样品溶液 5μL，在相同试验条件下，样品中各离子对的保留时间应与标准溶液中各离子对的保留时间一致；样品色谱图中所选择的监测离子对的相对丰度比与标准溶液的离子对相对丰度比的偏差不超过下表规定范围，则可以判断样品中存在甲醛。表 3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差[table][tr][td]相对离子丰度（k）[/td][td]k≥50%[/td][td]50 % k ≥20 %[/td][td]20 % k ≥10 %[/td][td]k≤ 10 %[/td][/tr][tr][td]允许的最大偏差[/td][td]±20%[/td][td]±25%[/td][td]±30%[/td][td]±50%[/td][/tr][/table]4 图谱[img=,690,235]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907021510361715_6855_1641969_3.png!w690x235.jpg[/img][align=left] 图1.甲醛与五氟苯肼衍生物[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]色谱图[/align]

使用高效液相色谱测定水中甲酸含量，前面为什么会出现？做标准曲线的时候还蛮准的，但是测样品的时候基线下凹（图中基线是人为拉直了），含量测不准确？http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/04/201504011537_540437_2966883_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/04/201504011537_540438_2966883_3.jpg