动态穿孔测定仪

穿孔萃取仪用于人造板甲醛含量测定,要求质量好一些的,现有的玻璃太容易碎.

穿孔萃取法是测定人造板材中游离甲醛含量的传统方法，在欧洲提出并为我国采用，其原理是用甲苯通过液—固萃取将试件中甲醛萃取出来，然后通过穿孔器进行甲醛与水的液—液萃取，使甲苯中的甲醛又溶于水，然后在水溶液中进行测定。穿孔萃取法操作简单，测定时间较短，适用于试件的快速测定。穿孔萃取法实际上时测定人造板中所含的全部可能释放出来的甲醛。本文对穿孔萃取法测定人造板中游离甲醛含量影响因素进行探讨，以供参考。　　1 实验　　1.1 材料与仪器　　材料：高密度纤维板，刨花板（江苏玉兰木业有限公司提供）。　　试剂：甲苯，碘化钾，重铬酸钾，硫代硫酸钠，乙酰丙酮，甲醛（35%-40%），乙酸铵（以上均为分析纯）。碘化汞，无水碳酸钠，H2SO4，HCI，NaOH，I2，可溶性淀粉。　　仪器：穿孔萃取仪（上海玻璃仪器厂），0.01g电子天平，0.0001g电子天平，UV1240紫外分光光度计等。　　1.2 测试原理　　GB/T 17657—1999《人造板及饰面人造板理化性能试验方法》。　　1.3 计算　　甲醛释放量按下式计算，精确至0.1mg。　　E=（As-Ab）×f×(100+H)×V /M0　　其中：E—每100g绝干试件释放的甲醛毫克数，mg/hg；　　As—萃取液吸光度；　　Ab—蒸馏水吸光度；　　f—标准曲线的斜率；　　V—容量瓶体积，2000mL；　　H—试件的含水率，%；　　M0—用于萃取试件的质量，g

1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用，并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单，在直流电场作用的瞬间，细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ，这种通道能维持几毫秒到几秒，然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多，在基因治疗方面的优势也日趋显著，是一种很好的活体基因导入方法。活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。2、活体电穿孔的法的特点 活体电穿孔法基因导入和表达效率较高，它的特点主要在以下几个方面:首先，靶器官的选择面广，理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。 在用于基因治疗方面，要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中，则在某种意义上说已失去了基因导入的价值，这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时，研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21 启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达，以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入，获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。其次，对导入的外源基因片段的大小没有限制，从几KB 或十几KB 的表达载体， 到100～200KB 的YAC、BAC基因组 ，都有成功导入并获得表达的报道。此外活体电穿孔法操作简单快速，电穿孔的时间只有几秒钟，而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。但电穿孔法也存在一些的缺点:首先，外源基因表达持续的时间很短，虽然外源基因导入后最快可在215 小时有表达，但大多1～2 月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存在巨大差异。由于应用不同的表达载体，Muramatsu 在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达，而Heller 21 天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏，则表达持续时间会较短，表达时间在1 个月以内，但以骨骼肌为靶组织，表达可持续15个月。3、 活体电穿孔法与其他活体基因导入方法的比较 到目前为止，非病毒载体的活体基因导入方法有直接注射法、脂质体法、基因枪法、电穿孔法等。每一种方法都有其各自的特殊性，因此很难将这几种方法进行简单的比较。直接注射法：可将外源基因直接注射到靶位点或血管中，但此种方法不适合以肌肉作为靶器官，它的外源基因表达效率极低，仅为电穿孔法的百分之一。脂质体法：活体基因转移法中脂质体法更适宜较大面积组织的基因导入，但无法避免DNA浓度变低，在出血的情况下会使本来不高的DNA浓度更加降低，往往造成基因导入效率低。基因枪法：适合于DNA较易接触到的质地较坚韧的组织如皮肤，而视网膜、胚胎和禽类的胚盘等组织会由于机械刺激和出血造成器质性损伤或发育停滞，因而不能用基因枪法完成。DNA包裹的金属颗粒从基因枪发出到达组织表面大多只几百微米的距离，较深层的组织不易操作， 表达效率也较低。Muramatsu报道在材料一致的情况下，电穿孔法的基因导入和表达效率明显高于其它方法，而且电穿孔法适合多种组织的操作 。4 、活体电穿孔法施加条件的研究 波型的选择在电穿孔过程中方波较指数衰减波更能获得较高的基因表达。同时方波只要要求控制电压和时间，十分直观，而指数衰减波需要控制的电压、电容、电阻等参数，这样的条件摸索过程中，方波较指数衰减波更易得到高表达。