液相色谱重复性测试

[color=#444444]大家做高效液相色谱重复性怎么样？我做的重复性差的很啊，紫外检测器峰面积或者峰高与浓度没有线性关系啊，大家都是怎么做的呢？？？？[/color]

液相色谱峰分叉，所有组分都分叉，重复性特别好，什么原因？

大家好，我现在在做色谱，但是几个月了重复性都没有，一直找不到原因，请大家帮忙分析下 柱子：BDS-Hypersil C8 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm)， 仪器：岛津2010 最开始是用10mmol∕L醋酸钠与乙腈（95﹕5），pH4.5.天间有重复性，天内也有重复性，晚上用小流速流动相冲了，第二天也有 重 复性（同一个标准品）， 然后我要多测一个物质犬尿喹啉酸，这个物质在体内含量和低，必须荧光衍生，国内外基本上都用醋酸锌， 色谱条件变为：10mmol∕L醋酸钠和5mmol∕L醋酸锌，pH3.8,做了几天，每天的保留时间都不同（一次性配1000ml流动相用三天），时间变化的方向也不同。查文献要300ml超纯水冲洗才能把锌离子冲干净，但是我冲了很长时间，我连续进了5针，一个小时都做完了，这5针有重复性，但是6个小时后我又进样，这是保留时间很乱了，变了2分钟。 我怕是柱子坏了，就用超纯水冲两天柱子后，只用95%水和5%甲醇，温度30度，流速0.6ml∕min,早上到晚上都冲着，一直进样，有重复性，但是晚上小流速后第二天保留时间又不同了。做醋酸锌时上午保留时间重复，到下午了就变了2min，且一直在变，方向有时是一个方向，有时不是一个方向。我真的是不知道怎么办了，希望大家帮我想个办法，怎么一个个排除问题。非常感谢！！

请教大家，如何确认液相色谱仪紫外检测器的波长示值误差及重复性

大家好。高效液相色谱仪仪器校准中，波长示值误差和重复性检定这一项目中，所用到的紫外标准溶液，市面上可以直接买到吗？如果要自己配制，各波长的标准溶液又是如何配制的呢？？

岛津液相，C18柱，甲醇和水，两针含量相差0.5%，液相色谱样品谱图重复性不好，是怎么回事

问题:做液相确认时，重复性的RSD值的限度是多少？回复:液相JJG上有要求，计量规程，我们这是2%

液相色谱测了标样，反复测了几次，但是保留时间不稳定，跟检测器有关系吗，怎么处理

买了赛默飞世尔公司高效液相色谱仪，U3000型号仪器，刚好一年。色谱柱为新柱子，C18柱。色谱条件为：流动相-甲醇：水（25:75），检测波长245nm，柱温30度。对照品为对乙酰氨基酚，连续进样6针，保留时间基本无变化，均在4.703-4.705。但峰面积呈逐渐降低趋势，64.741、64.564、64.223、64.018、63.884、63.751.请问这是什么原因呢，我们公司这边要求出具的检验报告需要对照品的RSD值，这样的检测结果使偏差增大。

夏天天气热了会开空调，实验室开空调温度波动挺大的，估计三四度，周期性波动。液相仪器保留时间重复性做不好，加了柱温箱好一些但也没好多少。有什么办法吗？还是一定要控制室温波动在几度几度以内？

[color=#3e3e3e][b][i] 很多实验室分析人员在面对精确度、重现性、重复性这些定义的时候都会犯迷糊，到底重复性、重现性该如何区分？[/i][/b][/color][color=#3e3e3e][b][color=#3e3e3e]精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间接近的程度。[/color][/b][/color][b][b]精密度的表示方法[/b][/b][color=#33ff33][color=#3e3e3e]高效液相色谱法是对同一供试液进行至少五次以上的测定；精密度一般用相对标准偏差[/color][color=#3e3e3e] (relative standard deviation, RSD) [/color][color=#3e3e3e]表示：[/color][color=#3e3e3e]RSD= [/color][color=#3e3e3e]标准偏差[/color][color=#3e3e3e]/[/color][color=#3e3e3e]平均值[/color][color=#3e3e3e] * 100%[/color][/color][color=#33ff33][color=#3e3e3e]精密度报告的数据应包括平均值、可信限及相对标准偏差。一般在一天之内进行的精密度考察称为日内精密度(inter-day variability) ；在三天之内进行的精密度考察称为日间精密度 (intra-day variability) 。[/color][/color][color=#3e3e3e]有时为了考察随机变动因素对精密度的影响，还需设计进行中间精密度试验，变动因素包括不同日期、不同分析人员和不同设备。[/color][b]重复性：[/b][color=#3e3e3e]主要目的是为了验证所选用的方法对样品进行测定时，检测结果的精密程度(可以用3个不同浓度的溶液，每个浓度制备3份，或是用100%的浓度溶液不少于6个的结果进行评价)。[/color][b]重现性：[/b][color=#3e3e3e]主要目的是为了验证针对同一样品检测时，所选用的方法的精密程度(可用同一个样品溶液连续进样6次的结果进行评价)。[/color][color=#3e3e3e]简言之就是： 重复性：同一个人，同一台仪器，在一定时间内的样品精密程度。 重现性：不同实验室，或不同操作人员，或不同仪器上的精密程度。[/color][color=#3e3e3e][b][color=#ff4c00]疑问解答：[/color][/b] 不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。狭义来说，同一实验室，相同或不同的人，用不同的仪器做的结果也可以说是重现性。重现性差有很多原因。比如柱子性能的不同。就算是同一型号柱子也会有差别。还有和流动相配制的溶剂、水有关。还有和仪器本身的性能，比如说死体积不同，不同厂家的检测器的检测限不同等多方面原因。还有可能是操作有关，比如外标分析时用的自动进样小瓶装样过多，导致进样量有偏差。 如果重复性差的话，要想好很多的可能性，逐个排除，因素包括：1）和泵有关；2）进样量；3）系统没有平衡好；4）流动相不均匀，没过滤好；5）有气泡；6）柱效差；7）方法不合适导致的峰型不好；8）样品检测线性不好；9）仪器的性能不好。[/color][color=#3e3e3e]（转载于：高效液相色谱）[/color]

2010液相压力不稳定，重复性差，更换了柱塞密封垫、进出口单向阀、高低压阀的转子、计量泵密封圈，现在压力稳定了，重复性还是不太好，而且差的比较多，还会有哪的原因？现在光路不太好了，能量只有50多，自检波长过不去，但做滤长校正是没有问题。会是光路不好造成的重复性差吗？

很多实验室分析人员在面对精确度、重现性、重复性这些定义的时候都会犯迷糊，到底重复性、重现性该如何区分？今天为您仔细理顺一下： 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间接近的程度。精密度的表示方法 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法和高效液相色谱法是对同一供试液进行至少五次以上的测定；精密度一般用相对标准偏差 (relative standard deviation, RSD) 表示：RSD= 标准偏差/平均值 * 100% 精密度报告的数据应包括平均值、可信限及相对标准偏差。 一般在一天之内进行的精密度考察称为日内精密度(inter-day variability) ；在三天之内进行的精密度考察称为日间精密度 (intra-day variability) 。 有时为了考察随机变动因素对精密度的影响，还需设计进行中间精密度试验，变动因素包括不同日期、不同分析人员和不同设备。 重复性：主要目的是为了验证所选用的方法对样品进行测定时，检测结果的精密程度(可以用3个不同浓度的溶液，每个浓度制备3份，或是用100%的浓度溶液不少于6个的结果进行评价)。 重现性：主要目的是为了验证针对同一样品检测时，所选用的方法的精密程度(可用同一个样品溶液连续进样6次的结果进行评价)。 简言之就是： 重复性：同一个人，同一台仪器，在一定时间内的样品精密程度。 重现性：不同实验室，或不同操作人员，或不同仪器上的精密程度。　　疑问解答： 不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度，称为重现性。狭义来说，同一实验室，相同或不同的人，用不同的仪器做的结果也可以说是重现性。重现性差有很多原因。比如柱子性能的不同。就算是同一型号柱子也会有差别。还有和流动相配制的溶剂、水有关。还有和仪器本身的性能，比如说死体积不同，不同厂家的检测器的检测限不同等多方面原因。还有可能是操作有关，比如外标分析时用的自动进样小瓶装样过多，导致进样量有偏差。 如果重复性差的话，要想好很多的可能性，逐个排除，因素包括：1）和泵有关；2）进样量；3）系统没有平衡好；4）流动相不均匀，没过滤好；5）有气泡；6）柱效差；7）方法不合适导致的峰型不好；8）样品检测线性不好；9）仪器的性能不好。问 题：1、做液相色谱平行样的时候，从来没出现过两次类似的情况，出峰位置基本都在误差允许范围，主要是峰面积相差巨大，而且都是第一次进样的时候峰面积最大，第二次就会明显变小，然后后面几次进样一直也都很小，而且互相之间也有较大的差距，这到底是什么原因？会是仪器自身不稳定？进样瓶会不会对主成分存在吸附呢？有没有可能是主成分稳定性不好呢？2、用得是5ml容量瓶，应该不会吸附，测的是苯胺类化合物，半挥发性，可是再换一种流动相的时候，第一次进样峰面积并不小，再进样峰面积变小，然后再换一个流动相，第一次进样峰面积又不会变小，怎么回事?建 议： 其他条件都一样的话，应该是样品的量在溶解，或者流动相随着时间在变化，试试将样品衍生化再进样。应该是主成分挥发或是分解的原因。如果流动相放的时间太长致使组成轻微变化，或者机器工作时间长升温了，都会使RT变化的。 三次进样明显有吸收值变化的问题，但是出峰时间相差不大，这个也可能是因为样品随着时间的变化发生的三者间的转化或样品的挥发。 另外要考虑样品是不是现配现做的，还是配了一个样品连续做三次，剩下的放在冰箱里，如果是这样的话有可能是浓度变小了。可以用另外一台仪器试下，如果重现性好的话，可排除这种状况。

液相测定乙酸标准曲线的重复性不好，怎么办

[color=#444444]我最近在用高效液相色谱测盐酸土霉素准品时，同一浓度连进6针，峰面积相差很大，相对标准偏差达到16％，保留时间几乎不变，有没有遇到这类问题的朋友，请教下是什么原因啊？万分感谢~改流动相组成、波长、换柱子还是有这种问题(ps：有定量环，可以排除进样量不一样的情况；用同一台液相测别的物质，重现性较好，相对标准偏差在1％，说明仪器和人为操作应该也没问题)[/color]

用液相梯度洗脱检查有关物质，基线波动大，且重复性很差，基线不平正常吗？重复性差如何解决？

一、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]重复性差的原因1、进样垫的松紧程度对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]的重现性，尤其是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]毛细管色谱柱的重现性影响较大，填充柱也会有影响。2、样品溶剂对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]重复性也具有比较大的影响。很多时候，重复性差的原因并不在于仪器本身的性能，而是在于样品处理环节。选择的溶剂不合适，很大程度上，会影响到[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]的重现性。3、衬管不合适与样品汽化同样会影响[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱仪[/color][/url]的重复性。二、引起定量不重复的原因及解决方案引起定量不重复的原因是多方面的，一般可以归结为两大类。1、单纯性灵敏度变化型，即除了定量重复性不合格外，其它指标未发现异常属于第一类型故障的原因主要是：进样技术不佳，注射器有堵漏，样品制备不均匀，进样口污染物堆积以及气路存在漏气现象等。2、伴随性灵敏度变化型，即除灵敏度变化之外还伴随有其它异常现象出现，包括基线不稳定性、峰保留时间变化及产生峰形畸变等异常现象。属于第二类型故障的原因，主要是：载气流量变化，检测器玷污、过载，柱温变化以及检测器操作条件（如，氢气、极化电压、脉冲电压等）发生变化。考虑到各种故障产生可能性的大小以及故障鉴别的方便性，制定出下述检测方案：（1）进样技术检查进样技术不佳是造成色谱峰不重复的最可能原因。它通常表现为峰高/峰面积忽大忽小，峰高/峰面积大小变化无规则。提高进样重复性的关键，在于始终保持进样操作各个步骤的重复性。这包括取样操作，取样到进样期间的空闲时间，进针快慢及拔出注射器的早晚。通常操作人员在经过较多地进样重复性训练之后，可以达到所需的要求。（2）注射器检查操作人员进样技术提高后，色谱峰灵敏度仍然无显著改观，需认真检查注射器本身是否有堵塞或泄漏现象。必要时更换一个好的注射器重新进样试验。（3）样品均匀性检查制备的样品在样品瓶中混合不均匀或每次取样时注射器对样品产生玷污以及样品挥发等都会影响出峰灵敏度的重复性（不能漏过此项检查）。定量不重复由上述三种原因引起的可能性很大，而且都和进样操作密切相关，因此可一起进行检查。只有在上述检查后无异常发现时才转入接下的检查步骤。（4）伴随现象观察在检查灵敏度情况的同时注意是否有下述异常现象发生，包括基线是否稳定，出峰保留时间是否重复，峰形是否有畸变三种情况，如果出现其中一种，应先按所出现的故障进行排除，再重新进行定量重复性测试。没发现伴随异常现象时，应转入下面的检查步骤。（5）进样口污染及系统漏气检查关断桥电流（对TCD而言）后，取下进样口隔垫，观察进样口内是否有污染或堆积物，如果有，需进行清除和清洗。清洗完毕装上隔垫后需对气路系统进行试漏：堵住检测器出口，观察转子流量计中的转子应能下降为零，否则说明气路有泄漏。在确信进样口无严重污染及气路无漏气的情况下进行（6）的检查。（6）特种原因检查对有些检测器而言，某些原因所伴随的故障异常不太明显，易被忽略掉，因此应按照此项进行检查，以便不漏过可能发生故障的因素。a）对FID来说，极化电压较低及氢气流量不稳，有可能导致灵敏度变化而无其它明显异常。对此可首先测试极化电压大小以确定极化电压是否太低，过低的极化电压以及无极化电压都属于故障。正常时极化电压为150~300V。如极化电压正常，则应转入放大器的灵敏档观察氢焰基始电流的变动情况，在氢气流不稳定时基流应能呈现出摆动和漂移现象。b）对于任何检测器，样品中的某些组分在检测器中逐渐冷凝并累积，将会影响下一次进样后的灵敏度，情况严重时还会造成气路堵塞。通常的解决方法也是适当提高检测器的温度，以减少或消除样品室的冷凝现象。三、在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相[/color][/url]中如何进样才能有较好的重复性重复性是方法学验证的基本要求，也是系统适用性试验的常用手段。想让一个[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]具有较好的重复性应该从以下三点来说。1、仪器方面具备了良好的重复性十分有必要，作为用户也应了解如何调整仪器达到最佳状态。最基本的就是良好的进样系统：直接进样应具有准确的进样针，惰性较好的进样瓶和瓶隔垫，设计良好的洗针方式、吸样方式与快速进针等；进样口的汽化效果，吹扫效果与分流效果要好：应从衬管型号，隔垫吹扫流量，分流流量，柱头准确安装等方面综合而定；色谱柱的质量、检测器的尾吹、载气和其他气体的纯度和去烷烃去水去氧化物的程度等都会影响峰面积。2、方法确立上一个设计再好的仪器，如果在使用时方法设立不当，也不会有良好的重复性。这个方法的设计，包含的思路和原则比较多，说起来比较复杂。简单来说应具备以下特点：合适的进样方式（顶空还是直接进样）、正确的洗针溶剂、合适的分流比及隔垫吹扫、合适的色谱柱选用（不合适的固定相会导致峰拖尾影响积分导致重复性不好）、合适的检测器（C、H比例较高的用FID，卤族元素比例高的用ECD，N、P较高的用NPD等等）和合适的尾吹流量。3、设备维护包括进样隔垫和衬管的定期更换、柱头石墨密封圈是否变形、衬管O型圈的状态、气路系统的泄漏检查、捕集肼和变色硅胶的更换、柱温箱温度的校验、色谱柱及色谱系统的定期老化和清洁等。

我用岛津LC10分析两种产品用同一根色谱柱同样的流动相只是检测波长分别为298和210外标一点法定量实验中发现210nm检测的产品重复性特别差有人说这和检测波长有关不知到底是什么原因

各位前辈: 小女子这里给大家问安了!我用的液相色谱是刚买的。 这几天我一直做样品，可是结果一直不理想。一开始仪器出的峰面积很长时间才能稳定下来，大约得进样15次之多，保留时间还可以。以后样品峰面积总是上下波动，重复性很差，根本没法计算结果。不知道是检测器有问题，还是色谱柱有问题呢？基线挺稳的。 我以前用同样的方法做过别的液相色谱，峰面积的重复性很好。我已经按照仪器的操作规程在做了[em0812] ，实在不知道这是怎么了．各位前辈帮帮忙吧，在下感激不尽！

目前在做19种化妆品中香料这个标准，GB/T 24800.10-2009。遇到诸多问题想看看大家有没有类似经历或解决方案。1、用标准建议的非极性柱，HP-5MS测试，刚开始19种物质出峰只有2号物质苄醇峰形不佳，但也能接受的程度，但18号物质水杨酸苄酯的重复性差，尝试更换了衬管，确实和衬管有关系，打了一批高浓度的数据重复性OK，又新换了同型号的衬管，打低浓度，18号物质重复性又不行了。2、HP-5MS色谱柱打了一段时间（不到一个月）的方法，期间进过几针香水香膏样品，其他都是标液，发现有一半物质的峰形都发生了拖尾，分离度也下降，2号物质峰形已经不能满足方法要求。尝试老化色谱柱及进二氯甲烷清洗，均没有效果。是这些香料本身对非极性柱会有损伤吗？3、更换极性柱，HP-INNOWAX柱打方法，19种物质均能出峰且峰形ok，打了重复性，前7针重复性能满足RSD10%的要求，再进7针响应就开始变化，重复性要求不能满足，这又是什么原因呢？求助求助，急急急

做液相色谱时，在液相色谱梯度走完之后总出现几个高的杂峰，所用波长280 nm，用的是乙腈-水，0-10 min乙腈20%-50%；10-20min 50%-100%,之后用乙腈走20min,杂峰在22 min左右出现，且重复性较好，也试过其他的仪器，也会出现。在乙腈：水（20：80）平衡一段时间后，再用100%乙腈，在出现一倒峰之后会有杂峰出现，空白也有，不知是梯度改变引起的还是流动相问题，是水的问题还是乙腈，水是娃哈哈纯净水，乙腈是fisher原装，都经过0.22滤膜，超声。折腾了好长时间，也不知问题在哪，请各位高手指教

对于液相色谱柱而言，每根色谱柱在装运之前都经过了测试，并存放在测试洗脱液中进行运输。因此，在首次使用时，没有必要用水进行冲洗，只要用流动相彻底地平衡色谱柱即可。如果使用流动相添加剂（如缓冲液或离子对试剂），建议使用含原有比例但不含这些添加剂的流动相进行中间过渡。使用10至20个色谱柱体积进行冲洗将有助于过渡到流动相。对于具有较短化学链（例如C8、苯基、CN）键合相的色谱柱，应小心确保在使用色谱柱之前对其进行彻底的平衡。这样可确保重复性，并有助于防止保留时间的漂移。正相溶剂和反相溶剂是不互溶的，这一点不能忽略。对于新购柱子，首先请注意打开分析测试说明书，了解柱子的保存溶剂。如果保存溶剂与你将要使用的流动相不互溶，请先用异丙醇过渡。过渡过程中注意因异丙醇粘度较大，会导致柱压升高，适当调低流速。如果流动相中含有缓冲盐类，先用不含缓冲盐的同比例流动相过渡，避免缓冲盐的析出。

公司里有台岛津LC-2010型号的液相色谱，在做半年校验的时候，用水跟丙酮走的梯度，运行了两遍，样品的重复性差很多，在咨询过工程师后，可能是氘灯能量不足，在更换了氘灯，灯能量恢复正常，然后样品的重复性正常了，所以，小白想请教下，为什么氘灯的能量跟样品的重复性有关？或者能告诉我样品的重复性跟什么因素有关？当然如果能教我液相的各部件主要影响进样的哪些就再好不过了？