[摘要] 质谱对于现代蛋白质化学研究是一项重要的技术。也可用于蛋白组分析,在同一时间监控上千种蛋白的表达情况。首先蛋白质混合物可以用双向凝胶电泳分开,再用质谱及随后的蛋白质数据库检索对单个蛋白进行鉴定和分析。最近几年,质谱领域取得了令人鼓舞的进展,使得全自动、高通量的蛋白检测成为可能。质谱也可以用来分析蛋白的转录后调节以及研究蛋白质复合体。本文将介绍目前蛋白组研究中质谱方法的应用并对其优缺点进行讨论。关键词: 质谱;二维电泳(2-DE);蛋白组分析MALDI-TOF1 前 言蛋白组学是研究生物特定组织或细胞内表达的所有蛋白质成分,蛋白质组的一门学科。蛋白组分析一般是用双向凝胶电泳(2-DE),质谱(MS)以及数据检索来完成。2-DE要回顾到20世纪70年代初[1],但是用质谱技术对蛋白质进行鉴定和分析是在近十年内才成为可能。其中最重要的一个原因是新的软离子技术即基质辅助激光解析电离(MALDI)[2]和电喷雾电离(ESI)[3,4]技术的发展和应用,以及样本制备技术和质谱仪的发展等。从数据库中获得成指数上升的序列信息也促进了质谱技术的发展。跟转录组学中的全自动DNA微阵列技术相比,蛋白组分析需要更多的手工操作,尤其在2-DE上会出现很多问题[5,6]。尽管存在很多困难,蛋白组学的重要性还是公认的。DNA微阵列技术是建立在对mRNA稳定水平的检测上,然而蛋白组学研究的对象是细胞中最活跃的因子——蛋白质。最近有研究证明,mRNA的表达和蛋白的水平并非具有相关性[7,8]。蛋白质有转录后修饰过程,并会以不同的形式出现。而这些修饰过程是相应的DNA测序技术所不能预测的。质谱技术在蛋白质修饰分析过程中具有重要的作用。2 质谱对蛋白质的检测质谱仪是由离子源,质量分析,离子检测器,以及数据检索等单元组成。首先,被分析的分子在离子源中被离子化,然后在质量分析器里根据不同的质荷比分开,再对分开的离子进行检测。随着MALDI和EIS的出现,质谱技术已经广泛用来分析蛋白质。质量分析器有很多种,最常用的方法是将飞行时间检测器(TOF)与MALDI或三级四级串联质谱仪联用,或者将四级杆-TOF,离子阱等连接到ESI上。蛋白组分析中,可以用两种不同的方法检测电泳分离后的单个蛋白质。最简单的方法叫做肽指纹谱测定(PMF)[9~13]。这个方法是用特殊的酶对2-DE分离后的蛋白质点进行降解,产生的肽从凝胶中分离出来后再用质谱分析和检测肽的分子量。数据库检测能够产生所有蛋白质理论上的PMF,把它们和质谱分析所获得的肽片进行比较就可以得出结果。第二种方法是在质谱仪中把凝胶分离后的肽分解成片段,产生局部的氨基酸序列(序列标签)。那么就可以用分子量或者序列信息进行数据库检索[14,15]。PMF一般用MALDI-TOF来实现,序列标签可以用串联质谱技术MS-MS进行检测[16~18]。用质谱检测蛋白的灵敏性可以精确到飞摩的水平,甚至已有报道其精确度可以达到阿摩水平[19]。3 用MALDI-TOF进行肽指纹谱分析凝胶分离后的蛋白质鉴定以及肽指纹谱分析是目前质谱实验室常规使用的方法。在进行MALDI分析之前需要最优化的凝胶上消化[20~22]和脱盐过程。胰岛素是最常用的凝胶消化酶,因为它在赖氨酸和精氨酸位点能够特异性切割蛋白质,产生分子量在600~2500Da之间的小分子肽,并能够从凝胶上有效的分离出来。MALDI-TOF是质谱技术中相对简单并很容易使用的一种方式,对样本中的盐和其他污染物有很高的耐受性,这点优于ESI。提取的肽片混合物中较小的片段可以直接沉积在靶板上做PMF分析,剩下的样本可以储存起来作为以后的ESI-MS分析。如果经凝胶分离后所有的肽全用来做MALDI分析,那么样本经脱盐以后将会取得更好的结果。脱盐的过程可以用商品化的试剂盒ZipTip(Millipore),或者在凝胶电泳仪的末端放置一个小的逆向塑料柱来实现[23,24]。PMF中非常重要的一个因素就是质谱测量分子量的准确度[25]。现代的MALDI-TOF仪都具有延迟取样反射器装置,用它们检测的肽段分子量可以精确到10~30ppm。这样的精确度使得4~5个肽段足以清楚的鉴定蛋白质的分子量。MALDI产生的大多数都是单电荷离子,所以它的图谱很容易解释。4 肽质指纹谱分析的自动化为了实现高通量蛋白检测,样本准备,质谱检测,资料分析和数据检索必须实现自动化操作。目前有些实验室用机器人对蛋白质进行自动化取点,凝胶上消化,样本脱盐以及对MALDI平板进行定点测定等。而且,现代化的MALDI-TOF仪完全能够让MALDI检测自动化。资料分析和数据检索过程同样可以自动化。在进行蛋白组分析时,如果在凝胶上不用单个分离就可以对所有蛋白质进行鉴定将是非常具有诱惑力的。为此,研究人员做了很多努力,由Hochestrasser及其同事建立了一套称作分子探测术的方法(molecular scanner)[26,27]。它是将整个2-DE胶上蛋白质样本同时酶解,并将酶解片段一起原位转移至另一张膜上,再直接用MALDI- TOF 质谱对膜上样本进行整体扫描,为实现蛋白质组学研究的自动化、规模化以及临床应用提供了一个崭新的思路和方法。这种思路的优点是显而易见的,不过按照目前的方法,要普及此种技术主要的难点是,质谱扫描一张图谱所需的时间过长,如用0.4mm的精度扫描一张4cm×4cm的膜需55个小时,这就意味着一张16cm×16cm的常用膜的扫描,至少需要36天不间断的工作和大约40G的磁盘空间存储如此庞大的原始数据。5 用ESI-MS/MS的方法创建序列标签只有当被消化的蛋白存在于已有的蛋白或基因组数据库中,并且能从MALDI分析器中得到四五个肽片的数据才能成功进行。如果在EST数据库中只有目的蛋白的部分序列,那么就需要知道肽片的序列信息。创建序列标签的优势在于,用肽的分子量和序列作为数据库检索对象比只用分子量作为检索对象具有更高的特异性。有了序列标签信息后,也可以用EST数据库进行检索[28]。通常来自于一个肽上的序列标签就足以鉴定蛋白质。同MALDI相比,纳升-ESI-MS/MS费时费力,而且在做ESI分析之前必须对样本进行脱盐处理。这些问题可以通过ESI-MS与HPLC联用得到解决。做ESI分析对样本浓度很敏感,用现代化的纳升-HPLC方法可以提供很高的局部肽片凝聚物,分离后的样本可以直接用于质谱分析,而不需要再分解。当分析混合物的时候,在质谱之前做LC分离尤其重要,因为它使得数据依赖的实验(DDE)成为可能,在DDE中,所有的离子都进入检测器进行测量,如果从HPLC到质谱之间出现一个峰的话,软件将自动从质谱转换到MS/MS模式并对产生的离子进行扫描。跟纳升-ESI相比,用这个方法可以从一份标本产生更多的MS/MS数据。Yates等已经详细叙述了如何进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS全自动蛋白检测的策略[29]。
[img=,690,350]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/11/201911271720191732_5668_3311681_3.jpg!w690x350.jpg[/img]1.蛋白组学下机数据,请问q.value有些是0,代表什么意思。2.该组数据得出的是Abundance Ratio: (Medium, F2) / (Heavy, F2)这样的一个蛋白在中标和轻标样本里面表达丰度的比值,这种情况下还需要做P值校正吗?还是直接卡表达量的变化倍数就可以说明它是表达上升还是下降了
褚福亮,王福生, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室 北京市 100039项目负责人 王福生, 100039 ,北京市丰台路26号, 中国人民解放军第302医院全军艾滋病与病毒性肝炎重点实验室. fswang@public.bta.net.cn电话:010-66933332 传真:010-63831870收稿日期 2002-08-15 接受日期 2002-09-03摘要新近广泛应用蛋白质芯片(ProteinChipâ Array)系统成功鉴定出了一些重要疾病(如肿瘤和危害性较大的传染病)新的、特异性的生物标记(biomarkers),后者不仅在生物医学的基础方面具有重要的科学价值,而且在临床疾病的诊断、治疗和预防发挥重要的指导作用,显示了良好的发展前景.本文就表面增强的激光解析电离-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)相关的原理、特点、在临床和基础研究中的应用新进展和未来的发展趋势做一综述.此外,我们就蛋白质谱分析技术在病毒性肝炎、肝硬化和肝癌等一系列肝病方面的应用策略和前景进行了分析.褚福亮,王福生. 蛋白质谱分析方法特点及其在蛋白组学研究领域中的应用.世界华人消化杂志 2002 10(12):1431-14350 引言人类基因组计划已经进入后基因组时代-即功能基因组时代[1],作为基因功能的直接体现者-蛋白质,及其之间的相互作用越来越引起基础和临床科学家们的关注[2-6] .因为要彻底了解生命的本质,只把基因测出来还是不够的,还必须要了解其在生物生长、发育、衰老和整个生命过程中的功能、不同蛋白质之间的相互作用以及他们与疾病发生、发展和转化的规律[7-14] .正因为如此,有关上述问题的蛋白质组学研究成了今天生命科学最重要的焦点之一[15] .为了阐明蛋白质在上述生命现象中的作用和相关机制,人们设计了许多新的方法技术,如:二维电泳、质谱分析、微距阵列、酵母双杂交和噬菌体展示等,这些方法在一些特定的情况下,虽然显示出了他们各自不同的优点,但是同样也存在着较大的局限性,难以开展大规模、超微量、高通量、全自动筛选蛋白质等方面的分析,因而设计更全面、同时研究多种蛋白质相互作用的技术,在功能基因组和蛋白组学的研究中建立一个更有效的技术平台,成为本领域中优先关注的问题[16] .近来,美国Ciphergen(赛弗吉)公司研制的ProteinChipâ Array的仪器,并建立了一种新的蛋白质飞行质谱-表面增强的激光解析离子化-飞行时间-质谱(surface-enhanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra, SELDI-TOF-MS),已取得可喜的进展,筛选出了许多与疾病相关的新型生物标志,不仅为临床疾病的诊断和治疗等提供了新的选择,而且在基础科学、新药研制和疾病预防等方面具有广泛的应用前景[16-18] .本文就SELDI-TOF-MS相关的原理、特点、在临床和基础研究中的应用新进展和未来的发展趋势做一综述.1 ProteinChipâ Array系统和SELDI-TOF-MS的特点1.1 蛋白质芯片系统的组成和原理 蛋白质芯片系统由三部分组成:蛋白质芯片、芯片阅读器和芯片软件.供研究用芯片上有6-10芯池,不同的芯片表面上的化学物质不同,芯片表面分为两大类:一类为化学类表面,包括经典的色谱分析表面,如:结合普通蛋白质的正相表面,用于反相捕获的疏水表面,阴阳离子交换表面和捕获金属结合蛋白的静态金属亲合捕获表面;另一类称为生物类,特定的蛋白质共价结合于预先活化的表面阵列,可以用来研究传统的抗体一抗原反应,DNA和蛋白质作用,受体、配体作用和其他的一些分子之间的相互作用[19] . 根据检测目的不同,可以选用不同的芯片,或者自己设计芯片.将样本和对照点到芯池上以后,经过一段时间的结合反应,用缓冲液或水洗去一些不结合的非特异分子,再加上能量吸收分子(energy absorbing molelule,EAM)溶液,使样本固定在芯片表面.当溶液干燥后,一个含有分析物和大量能量吸收分子“晶体”就形成了.能量吸收分子对于电离来说非常重要.经过以上步骤,就可经把芯片放到芯片阅读器中进行质谱分析. 在阅读器的固定激光束下,芯片上、下移动,使样本上每一个特定点都被“读”到.激光束的每一次闪光释放的能量都聚集在该区一个非常小的点上(focused laser beam,聚焦激光束).这样,每个区都含有丰富的,可寻址(addressable)的位置.蛋白质芯片处理软件精确控制激光寻读过程.当样本受到激发,就开始电离和解除吸附.不同质量的带电离子在电场中飞行的时间长短不同,计算检测到的不同时间,就可以得出质量电荷比,把他输入电脑,形成图像[19].Ball et al [20]采用一种称为人工神经网络(artifical neural network,ANN)的算法处理出现的成千上万的峰,鉴定出三个分子量为13 454、13 457和14 278的生物标记分子,使疾病预测率达到97.1 %.1.2 ProteinChipâ Array芯片和SELDI-TOF-MS的特点 新型蛋白芯片与以往的蛋白芯片不同之处:SELDI-TOF-MS,他是在MALDI(matrix-assisted laser desorption/inionation)[21,22]基础上,改进后实行表面增强的飞行质谱.SELDI-TOF-MS优于MALDI-TOF表现为他不会破坏蛋白质,或使样本与可溶的基质共结晶来产生质谱信号.对SELDI-TOF来说,可以直接将血清、尿液、组织抽取物等不需处理直接点样检测[40] 由于一部分非特异结合的分析物被洗去,因而出现的质峰非常一致,有利于后期分析[23,24] . 与二维电泳相比:二维电泳分析蛋白质的分子量在30 KDa以上时电泳图谱较清楚,对在组织抽提物中占很大比例的低丰度的蛋白质不能被检出;其次,二维电泳胶上的蛋白质斑点很大一部分包含一种以上的蛋白质;而且,二维电泳耗时长,工作量大,对象染色转移等技术要求高,不能完全实现自动化.而SELDI-TOF在200 Da-500 KDa区间都可以给出很好的质谱,对一个样本的分析在几十分钟内就可以完成[19],处理的信息量远远大于二维电泳;对于低丰度物质,即使浓度仅attomole(10-18)的分子,只要与表面探针结合,就可以检测到,这也是二维电泳所不具备的[24,25] . 对于微距阵蛋白芯片来说,需要一种不破坏折叠的蛋白质构象的固定技术,再与另外的蛋白质反应,经检测莹光来观察蛋白质之间的作用[26] .而基于SELDI-TOF-MS的ProteinChip分析蛋白质不需溶解、不需染色、廉价、针对性强. 因而蛋白质芯片仪具有以下优势:(1)可直接使用粗样本,如:血清、尿液、细胞抽提物等[27] .(2)使大规模、超微量、高通量、全自动筛选蛋白质成为可能;(3)他不仅可发现一种蛋白质或生物标记分子,而且还可以发现不同的多种方式的组合蛋白质谱,可能与某种疾病有关[28] (4)推动基因组学发展,验证基因组学方面的变化,基于蛋白质特点发现新的基因.可以推测疾病状态下,基因启动何以与正常状态下不同,受到那些因素的影响,从而跟踪基因的变化[2,14,15] . 其存在的问题:对于不同的样本,根据检测的目标采取或者设计几种芯片,理论上可以把所有的相同性质蛋白质捕获,但是实际上仍有少量的分子没与表面探针结合.使用SELDI-TOF-MS,仅能给出蛋白质的分子量,不能给出C端、N端的序列,也没法知道蛋白质的构型,因此需要将蛋白质充分纯化后,用蛋白酶消化芯片上的蛋白质,分析肽段,再用生物信息学方法鉴定蛋白质序列[18,24] .另外,在国内,该芯片费用较高,分析质谱需要大量后续工作支持.
hey,大家好,不知道这里有没有蛋白组实验室的,想交流一下关于质谱性能测试样品的选择。我指的不是校正液哦。一般我们实验室就是平常自己BSA酶切后上质谱来看多肽峰的丰度,保留时间,当然搜库后还可以看看序列覆盖度等。有时评估一些前处理的技术有时也会用到BSA酶切后的多肽。我想问一下国内有没有卖已经酶切好的BSA?或者有没有比较便宜的TPCK-trypsin可以买? 老是用promega的质谱级胰酶切BSA感觉有点贵。谢谢了!
6 质谱仪的最新进展用质谱检测蛋白,首先考虑到用PMF与 MALDI-TOF联用,如果无法检测,下一步就用ESI-MS/MS创建序列标签。在PMF分析中,MALDI的平板中只需一小部分样本就足以检测,剩下的样本就可以用来创建序列标签。并且,在MALDI-TOF仪器上,用一种叫做“源后延迟”的方法可以对只有部分序列的肽段进行检测。然而,用这个方法产生的质谱图比较难说明,精确性也很差。最近,用MALDI联合四级杆-时间质谱分析器[30,31]以及原始的MALDI-TOF/TOF[32]方法产生了。因此同一份标本可以首先考虑用PMF检测蛋白[33],如果有必要的话,再用MS/MS创建序列标签。MALDI联合四级杆-TOF检测高通量蛋白是有希望的[31]。7 蛋白质组研究中的转录后修饰分析蛋白组分析很重要的一点就是能对蛋白表达水平以及转录后修饰,如磷酸化和糖基化进行研究。蛋白质的磷酸化是很有趣的,因为在信号转导途径中它扮演了重要的角色。最早检测蛋白质表达水平的方法是进行2-DE之前用35S-Met对样本进行代谢性标记,再在2-DE上进行放射自显影[34-36]。在凝胶中,不同蛋白的磷酸化和糖基化位点通常在凝胶中显示一连串蛋白质点,但是还需要做更详细的分析来确定修饰类型。蛋白质磷酸化的改变既可以用32P标记细胞,也可以用特异性磷酸化抗体做western blotting进行研究。如果用32P标记的方法,仍然需要做2-DE。经过凝胶比较后,把感兴趣的点从胶上切下来,然后用质谱鉴定[36]。Soskic使用的是印迹法,两个2-DE同时进行,一个用于做特异的磷酸化抗体实验,另一个做常规染色。蛋白质磷酸化和糖基化更为详细的特性可以用质谱来检测,但是需要更多的起始材料而不仅仅是二维凝胶上的一个点。另外这些分析不能产生直接的序列信息,技术上也比用质谱检测蛋白要难的多。在蛋白上查找磷酸化位点有很多种方法。为了检测消化后的混和肽中哪一个是磷酸化的,可以用MALDI-MS在磷酸化前后对混合肽做PMF分析:经过磷酸酯酶处理后,磷酸化的肽将会失去一个磷酸基团,分子量将比处理前小80Da.糖基化研究中,多聚糖从蛋白中释放出来,对多聚糖结构的检测就是从这些游离的多聚糖中得到的。一般把MALDI仪和外源性糖苷酶[37-40]联合使用进行检测。如果需要更为详细的信息,可以用ESI-MS联合使用前体离子扫描仪[41-44]。到目前为止,能够用电泳分离后的蛋白进行糖蛋白结构检测的报道很少。其中有一项研究是N端糖蛋白酶切以后用一维SDS-PAGE分离,然后用MALDI-MS以及外源性的糖苷酶进行结构分析[45]。8 用质谱研究蛋白-蛋白之间的作用经典的蛋白组学着重于研究蛋白质在何时何处表达。因为大部分的细胞功能都是由蛋白质复合体而不是由单个蛋白来执行的,所以鉴定蛋白质的成分和相互作用是非常重要的。这个过程可以用生物化学方法纯化蛋白质后用质谱来鉴定不同的成分,如人类剪接体的成分,酵母的核孔复合体[46]以及核蛋白体等都可以用此策略检测出来。一般的蛋白复合体是用亲和层析的方法纯化和分离,如免疫沉淀反应[47,48]。 DNA结合蛋白可以用同它们有特异性亲和力的核酸来分离,然后用质谱来鉴定[49]。Rigaut等人在串联层析的基础上,建立了一种通用的蛋白质复合体纯化方法[50]。在这个方法中,一种TAP标签和靶蛋白融合在一起,然后把蛋白转移到宿主细胞或者组织中,融合蛋白在宿主细胞和组织中能持续表达。TAP标签包括一种A蛋白和一种钙调蛋白,在标签之间有一个TEV蛋白酶切位点。用串联亲和层析法能将融合蛋白及与它相互作用的蛋白成分从细胞提取物中有效的分离,纯化出来。Rappsiber等人分别用亲和层析,交叉耦合以及质谱等方法[51]对酵母的核孔复合物Nup85p的亲和性进行研究。经过层析以后,用一维SDS-PAGE方法就可以分离蛋白复合体中的各个成分,因此二维电泳的不足之处就可以避免。同样也有可能直接用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]方法分析大分子量蛋白质复合体[52]。蛋白组分析的优越之处主要是用于蛋白和蛋白之间的相互作用以及蛋白的转录后修饰的研究,同时也可以用于基因表达水平的研究。质谱对于蛋白组分析来说是一项非常重要的技术,近年来仪器以及数据库软件的发展使得质谱成为能力更强大的工具。参考文献[1] O’Farrell PH. 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[size=16px][color=#ff0000][b][url=https://www.instrument.com.cn/job/position-93211.html]立即投递该职位[/url][/b][/color][/size][b]职位名称:[/b]应用工程师-蛋白组学[b]职位描述/要求:[/b]岗位职责:1、对蛋白质组相关的样本制备、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]分析以及组学数据分析非常有经验。精通从样本制备到数据分析流程者优先。2、有自己动手操作纳升[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]﹣高分辨质谱仪器的经验,对标记定量蛋白组、非标记定量蛋白组的原理非常清楚并能熟练应用。3、了解蛋白质组数据分析软件(比如MaxQuant,Proteome Discover, Skyline, Spectronaut等),及R或Python。4、有专利、论文写作经验;有较强的自学能力。能独立工作,也能团队协作,有团队合作意识。岗位要求:1、生物化学,生物学,分析化学,生物信息或相关学科毕业,硕士以上学历;2、要求有基于质谱的蛋白质组领域的经验和科研经历;3、能够适应短期出差;4、了解样品前处理的各个环节,有实验室有机样品前处理工作经验;5、良好的沟通协调能力,责任心强,性格开朗。职位福利:五险一金、带薪年假、补充医疗保险、定期体检、周末双休、节日福利、创业公司职位亮点:高新技术企业+华南理工大学产学研合作基地[b]公司介绍:[/b] 广州智达实验室科技有限公司成立于2018年,由一个从事在线自动化软硬件研究开发十五年以上的团队组建而成,主营业务是色谱质谱在线前处理和多功能进样系统。智达技术中心拥有[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GCMS[/color][/url],[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/bp][color=#3333ff]GCMS[/color][/url]MS,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LCMS[/color][/url]MS,多套自动化平台等先进分析设备;拥有专利软著等50多项知识产权,认证通过了ISO9000质量管理体系、瞪羚企业、国家级高新技术企业和广东省专精特新企业等荣誉;并获得深圳高新投集团战略融资。公司总...[url=https://www.instrument.com.cn/job/position-93211.html]查看全部[/url][align=center][img=,178,176]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108160948175602_3528_5026484_3.png!w178x176.jpg[/img][/align][align=center]扫描二维码,关注[b][color=#ff0000]“仪职派”[/color][/b]公众号[/align][align=center][b]即可获取高薪职位[/b][/align]
基于高通量的质谱技术方法,目前,各种疾病相关的差异蛋白质组数据高速增长。但是要从这些数据中发现生物学规律,挖掘得到疾病相关的生物标记物,以及发现潜在的疾病药物靶标,还有很艰难的数据分析任务需要完成。需要借助生物信息学的工具,去综合现有数据库数据及文献数据的知识,对这些蛋白质进行综合分析。发表于蛋白质组学杂志上的一篇综述From proteome lists to biological impact-tools and strategies for the analysis of large MS data sets. (Rainer et.al,. Proteomics 2010,10.1270-1283)很好地概括了面对海量的蛋白质组数据这个艰巨的任务时,生物学家和生物信息学家共同发展的数据分析策略和方法,从而数据中挖掘出隐藏的生物学知识。文章介绍了数据预处理过程(如ID转换)、功能富集分析、网络分析及蛋白质性质分析(如PTM, domain,motif)等工具;另外,还介绍了随着实验数据增长起来的文献数据的文本挖掘方法。
[align=center]免脱盐柱除盐的蛋白组学前处理方法[/align][align=center]季学猛,史爱莹,张 燕,王 硕[/align][align=center](南开大学 医学院, 天津 300071)[/align]摘 要:现有的蛋白组样品前处理中脱盐柱除盐的方法存在步骤繁多、易损失微量样品等缺点。这里,一种超滤管辅助酶解及加热潮解除盐的蛋白组学前处理方法被提出。具体而言,是利用超滤管辅助,通过离心在酶解前将缓冲液置换成碳酸氢铵溶液,酶解后多肽溶液中的碳酸氢铵被加热除去,最终得到脱盐的纯净多肽。该方法操作简便,无需洗脱步骤,可以方便地与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]直接衔接,而且可以减少前处理引起的氨基酸残基去酰胺和氧化修饰,有利于蛋白组学及其蛋白修饰分析。关键词:蛋白组学;样品前处理;脱盐柱 加热 碳酸氢铵中图分类号:O657.63 文献标识码:[align=center]An Improved Proteomic Pretreatment Method without Desalination Column [/align][align=center]JI Xuemeng,SHI Aiying,ZHANG Yan,WANG Shuo[/align][align=center](School of Medicine, Nankai University, Tianjin 300071, China)[/align]Abstract: The existing method for desalting protein samples in pre-processing is associated with several drawbacks, including a high number of procedural steps and the potential loss of minute sample quantities. In this context, a novel protein sample pre-processing method is proposed, which utilizes ultrafiltration tubes to assist in enzymatic digestion and employs heat-induced desalting. Specifically, the ultrafiltration tubes are employed to facilitate the replacement of the buffer solution with an ammonium bicarbonate solution via centrifugation before enzymatic digestion. Subsequently, following enzymatic digestion, the ammonium bicarbonate within the peptide solution is removed through a heating process, ultimately yielding desalted and pure peptides. This method offers simplicity in operation, eliminates the need for elution steps, enables seamless integration with [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url], and serves to mitigate the formation of amino acid residue deamidation and oxidation modifications that may be induced during pre-processing, thereby benefiting both proteomics and protein modification analyses.Key words: Proteomic analysis Sample pre-treatment Desalting column Heating Ammonium bicarbonate通过高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]串联质谱对生物系统中全蛋白进行定性定量,已经成为一种主流的分析工具。通过高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]串联质谱对生物系统中全蛋白进行定性定量,已经成为一种主流的分析工具。大规模的蛋白组研究依赖于蛋白被切割成肽段,然后进行后续的定性定量分析。目前,蛋白组学样品前处理方法通常使用胰蛋白酶将蛋白质样品切割成多肽。胰蛋白酶的最适作用pH为7.5-8.5[sup][back=yellow][1][/back][/sup],碳酸氢铵是质谱预处理中最常用到的一种盐,50mM碳酸氢铵水溶液可以提供酶解过程需要的弱碱性环境。然而,碳酸氢铵在酶解过程中大量存在,容易影响后续质谱分析。目前常用反相C18树脂去除盐和缓冲液[sup][back=yellow][2-4][/back][/sup]。多肽在高水相流动相中与反相柱结合,盐和缓冲液被洗去,然后用高有机相流动相洗脱多肽。然而,多肽对C18吸附性有差异,包括磷酸化多肽在内的亲水肽可能不能与C18树脂很好地结合,疏水性强的多肽与C18树脂可能结合牢固,不易被洗脱[sup][back=yellow][5-7][/back][/sup],这些问题可能导致样品的损失;而且,用来洗脱多肽的有机溶剂还需进一步通过真空离心干燥去除,极性较小的有机溶剂还可能溶解塑料制品中聚合物,造成多肽样品的聚合物污染,导致质谱峰偏移[sup][back=yellow][8,9][/back][/sup]。这些问题可能导致蛋白质检出种类减少、重复性差、甚至无检出信号等问题。基于这种临床和科研上的需求, 需要对蛋白组学样品前处理方法进行改进。1? 实验原理蛋白质组学是后基因组时代的产物。基因需要依赖于转录和翻译后后的产物蛋白质行使功能。基因组是固定不变的,而蛋白质组会响应环境的变化。因此,同一生物在生物体不同部位、生命的不同时期以及不同的环境中,具有不同的蛋白质表达。人类基因组测序计划的完成并没有给人提供解开生命的密钥,科学家把兴趣转到蛋白质,希望通过蛋白质组的研究来进一步解开生命的本质。目前鸟枪法是蛋白质组学分析应用最广的分析策略[sup][back=yellow][10-12][/back][/sup]。该方法先将蛋白酶解成肽段,然后通过色谱分离肽段混合物,再用质谱的电喷雾电离(ESI)技术将肽段碎裂,根据碎裂谱图的离子峰信息进行数据库搜索来鉴定肽段,最后将鉴定的肽段进行组装、重新归并为蛋白质[sup][back=yellow][13][/back][/sup]。电喷雾电离具体包括以下几个过程:样品首先通过一个毛细管喷针被喷出来,进入质谱仪,在喷针的外面用鞘气加热样品,辅助样品的雾化。加热雾化过程中溶液中的流动相或者溶剂挥发,剩下的气态离子在毛细管喷针尖端被电离。这些离子在质谱仪入口处被真空抽到质谱仪里,电场驱动进入质谱仪进行分子量的检测[sup][back=yellow][14][/back][/sup]。一般来说,电喷雾质谱法对盐类的容忍度较低。一方面是因为小分子盐类在电喷雾系统中存在较强的竞争性电离效应,从而导致强烈的离子抑制效应,使待测物的灵敏度明显降低[sup][back=yellow][15][/back][/sup]。其次,盐类的存在会产生一系列的离子加成峰,这使得谱图的解析变得复杂[sup][back=yellow][16-18][/back][/sup]。此外,过多的盐分会腐蚀和污染质谱系统的硬件,严重时导致硬件损坏,需要及时清洗[sup][back=yellow][19][/back][/sup]。因此,蛋白组学样品前处理过程中,脱盐步骤是非常必要的。2? 存在问题为减少机器的损坏,并且提高检测灵敏度,上机前一般都会要求对蛋白组学样品脱盐处理。目前脱盐常用的方法是反相C18树脂脱盐柱法。脱盐柱法分为结合、清洗、洗脱三步。首先,利用疏水相互作用,多肽在高水相流动相中与反相柱结合。然后,使用水反复清洗盐和缓冲液。最后,用有机溶剂破坏多肽与C18的结合,洗脱多肽。然而,该方法存在一系列的弊端,比如多肽对C18吸附性有差异,包括磷酸化多肽在内的亲水性比较强的多肽可能不能与C18树脂很好地结合,会造成结合阶段的样品损失,而疏水性强的多肽与C18树脂结合牢固,洗脱阶段却难以洗脱下来,所以亲水性强的多肽和疏水性强的多肽都会在脱盐柱脱盐过程中损失,进而导致样品的选择性偏好,会损坏质谱结果的客观性。而且,最终多肽样品上机前需要在0.1%甲酸溶液中溶解,因此,有机溶剂洗脱后的多肽不能很好的与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]衔接,还需真空离心干燥去除有机溶剂。使用有机溶剂洗脱样品可能会造成样品的PEG聚合物污染,导致质谱峰偏移。这些问题导致脱盐柱脱盐后的蛋白组学样品重复性差、检出蛋白质种类低问题,因此亟需一种脱盐柱脱盐的替代方法。3? 改进措施将酶解前超滤管中的缓冲液通过反复离心置换成碳酸氢铵水溶液。酶解后利用碳酸氢铵加热潮解的特性除去多肽溶液中的碳酸氢铵成分,最终得到纯净的多肽。多肽样品溶解在0.1%甲酸溶液中后可以直接上机检测。4? 改进后效果首先取100μg蛋白样品,用6 M 盐酸胍稀释至400μL。加入10μL 500mM 三-(2-羧乙基)膦、 8 μL 1M 碘乙酰胺,混匀。室温避光振荡反应 40 min。将样品转移至10KD超滤管,室温10000g离心30分钟。加入400 μL 50mM碳酸氢铵溶液置换5次。用200 μL 50 mM 碳酸氢铵溶液垂悬,加入2μg胰蛋白酶,于37 ℃酶解过夜。10000g离心10分钟,收集滤液。真空离心干燥滤液,干燥后观察管底,如有白色盐粉末,加入少量超纯水溶解白色盐,转入75℃金属浴烘干,碳酸氢铵在烘干过程中分解挥发。上机前加入50μL 0.1% 甲酸溶液,装入超洁净样品瓶,上机检测。4.1 潮解脱盐效果评估利用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](HPLC)分析表明,在五次洗涤步骤后 ,三-(2-羧乙基)膦和碘乙酰胺的浓度至少降低了100000倍,并且降至检测阈值以下,表明五次连续洗涤足以将杂质降低到不干扰的水平([color=#c45911]图1A[/color])。酶解后,离心[color=black]收集到滤液200μL。试纸法测滤液pH,呈弱碱性(pH 7.5-8.0)。[/color]多肽样品经过真空离心干燥后,观察管底,可见白色盐粉末,如[color=#c45911]图1B[/color]所示。加入2μL 超纯水溶解白色盐,转入75℃金属浴烘干,碳酸氢铵在烘干过程中分解挥发,白色粉末消失,如[color=#c45911]图1C[/color]所示。用200[color=black]μL超纯水复溶多肽,测pH为7.0。[/color]这些结果说明碳酸氢铵被去除。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271411135143_5595_5680383_3.jpg[/img][color=#c45911]图1 [/color][color=#c45911]脱盐的效果与验证。A:高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](HPLC)分析图;B:多肽干燥后可观察到管壁上残留白色盐分;C:加热碳酸氢铵潮解后管壁上白色盐分消失; D:潮解前后的氨离子浓度对比图。数据来自三次独立重复实验(n = 3)。[/color]为了直接确认碳酸氢铵的去除,采用分光光度尼斯勒试剂法对氨浓度进行定量。分光光度尼斯勒试剂法包括以下步骤:将样品用去离子水稀释,向样品中加入一定量的分光光度尼斯勒试剂,封闭瓶子并摇动,让混合物静置5-10分钟,使用分光光度计在紫外-可见光谱范围内的波长630nm处测量吸光度,通过相同方法处理一系列氨标准溶液,测量吸光度值并绘制标准曲线,最后,通过使用样品的吸光度值查找标准曲线上相应的氨离子浓度来计算样品浓度。实验结果显示氨离子浓度从50 mM降低到不到10 nM,证实了通过热力潮解去除碳酸氢铵的有效性([color=#c45911]图1D[/color])4.2 新方法对不同分子量的蛋白质进行的蛋白质回收性能的研究蛋白质的分子量分布范围很大,从几千到几十万道尔顿不等。为了研究在酶解之前,超滤管辅助酶解及加热潮解除盐的蛋白组学前处理方法(以下称为新方法)在蛋白质回收方面是否存在偏好,在酶解前比较了溶液法(in-solution)、过滤辅助样品制备法(Filter-Aided Sample Preparation, FASP) 和本研究提出的新方法中的蛋白质回收率。蛋白质定量采用了与还原剂相容的BCA蛋白质测定试剂盒,吸光度在分光光度计(Agilent Technologies,美国)上以562纳米的波长读取。在本研究中测试的蛋白质包括细胞色素C(约12.4 kDa)、绿色荧光蛋白(GFP)(约27 kDa)、抗凝血酶III(约58 kDa)、转铁蛋白(约80 kDa)、免疫球蛋白G(IgG)(约150 kDa)和纤维连接蛋白(具有广泛的分子量范围,通常超过200 kDa)。实验进行了三次重复,并使用小提琴图来呈现结果。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271411144597_3153_5680383_3.jpg[/img][color=#c45911]图2使用溶液法、过滤辅助样品制备法和新方法对不同分子量的蛋白质进行的蛋白质回收率评估图。[/color]结果清晰地表明,在不同分子量的蛋白质中,无论是在溶液法、过滤辅助样品制备法还是新方法中,所有三种方法在蛋白质回收率方面均达到了80%以上(图2)。总的来说,在所测试的分子量范围内,过滤辅助样品制备法和新方法之间的蛋白质回收率没有显著差异。然而,值得注意的是,对于低分子量蛋白质,溶液方法展现了略高的回收率,这可能归因于使用了10 kDa分子量截止滤器。 具体来说,对于低分子量蛋白质细胞色素C,过滤辅助样品制备法和新方法的平均回收率分别为85%和83%,而溶液方法的回收率为96%。然而,随着蛋白质分子量的增加,过滤辅助样品制备法和新方法的回收率显著提高。例如,对于分子量约为27 kDa的绿色荧光蛋白(GFP),过滤辅助样品制备法和新方法的回收率约为93%,而溶液方法对GFP蛋白的回收率为97%。此外,对于分子量超过50 kDa的较大蛋白质,如抗凝血酶III,使用过滤辅助样品制备法和新方法的回收率与溶液方法没有显著差异,均达到约98%。可见,本发明方法在蛋白质酶解之前对不同分子量的蛋白质回收率能达到83%至98%范围,达到了较好的蛋白截流作用。4.3新方法中潮解脱盐对不同大小和亲水性的肽段回收性能的研究为了探究不同方法酶解后对不同分子量的肽段进行潮解除盐的潜在偏好,对潮解法脱盐和C18脱盐的多肽回收率进行比较分析。在脱盐过程之前和之后,使用高效[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url](HPLC)测量了肽段的浓度。使用了一个反相柱,并监测了220 nm处的吸光度。受测试的肽段包括亮氨酸脑啡肽(分子量:555.68 Da,由五个氨基酸组成)、血管加压素(分子量:1084.23 Da,由九个氨基酸组成)、生长抑素(分子量:约1637.89 Da,由十四个氨基酸组成)和胰高血糖素(分子量:约3483.87 Da,由二十九个氨基酸残基组成),三次重复实验的结果呈现在小提琴图中(图3A)。结果显示,通过C18柱脱盐得到的回收率在75%到90%之间,与肽段的分子量之间没有明显的相关性。这可能是由于在C18柱脱盐过程中样品损失的因素,比如柱子的结合性能和洗脱效率。相比之下,潮解脱盐在所有测试的肽段中实现了超过96%的回收率,而不受它们的分子量影响。这一结果表明,潮解脱盐在回收不同分子量的肽段方面非常有效。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271411149252_2052_5680383_3.jpg[/img][color=#c45911]图3肽段回收性能比较。A:使用两种脱盐方法(潮解去盐和脱盐柱脱盐)评估不同分子量的肽段回收率;B:使用潮解去盐和脱盐柱脱盐对高亲水性和疏水性肽段进行比较回收分析;实验均进行了三次独立的重复。[/color]接下来,使用C18脱盐柱脱盐和潮解脱盐对高亲水性和疏水性肽段的回收率进行了比较分析。选择了抗菌肽(Cat. No. LL37-05MG)和细胞穿膜肽(CAS号:697226-52-1)分别代表疏水性和亲水性肽段。结果显示,脱盐柱脱盐对抗菌肽和细胞穿膜肽的回收率相对较低,平均回收率分别为45%和39%。相比之下,新方法潮解除盐后对这两种肽段都实现了超过95%的回收率,而不受它们的亲水性影响(图3B)。这些发现表明,脱盐柱脱盐中的回收率受到肽段亲水性的影响。这可能归因于脱盐柱脱盐依赖于疏水相互作用将肽段结合到C18柱树脂上,然后使用亲水溶剂进行洗脱,这可能导致不同亲水性的肽段被选择性保留。另一方面,潮解脱盐提供了原位操作的优势,从而在脱盐过程中避免了肽段的损失。我们的研究结果表明,潮解脱盐不会导致肽段的损失,并实现了比C18柱脱盐更高的多肽回收率。4.4 新方法在实际蛋白质组学分析中的应用比较小鼠肠组织用PBS磷酸盐缓冲液润洗两次,以去除任何残留物质,然后与蛋白酶抑制剂混合。将组织使用组织研磨仪进行破壁,然后在冰浴中使用超声波(200W)裂解,直到悬浮液变清澈。通过孔径为0.22μm的微孔滤器纯化得到裂解物。使用BCA分析试剂盒测定蛋白质浓度。随后,采用三种方法进行了酶解:溶液法、过滤辅助样品制备法和新方法[color=black](蛋白组学原始数据保存于PXD044209)[/color]。酶解后,使用高性能[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]将蛋白质分离,并使用QE质谱仪进行分析。具体来说,酶解后的肽样品采用Q Exactive Plus质谱仪联用EASY nano[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相色谱[/color][/url]系统进行分析,该系统配备了EASY纳米电喷雾接口。色谱装置包括Pepmap纳米捕获柱(C18,5 μm,100 ?,100 μm × 2 cm)和EASY-Spray柱(Pepmap RSLC,C18,2 μm,100 ?,50 μm × 15 cm)。在色谱梯度中使用溶剂A(0.1%甲酸)和溶剂B(80% CH3CN/0.1%甲酸),梯度如下:0–8% B持续3分钟,8–28% B持续42分钟,28–38% B持续5分钟,38–100% B持续10分钟。质谱数据经Maxquant软件处理,Maxquant分析考虑至少具有两个肽段的蛋白质,并根据特定的参数和说明搜索UniProt数据库。修饰方面,半胱氨酸的烷基化修饰被设置为固定修饰,而氧化(M)被考虑为可变修饰。设置蛋白质为胰蛋白酶的特异性剪切,最多允许两个漏切位点。片段质量容差设置为0.02 Da。为确保可靠的鉴定,要求蛋白质和肽段的最大假阳性发现率(FDR)均为1.0%。蛋白质的鉴定基于至少有一个唯一的肽段鉴定,而蛋白质的定量是通过计算每个蛋白质的唯一肽段的中位数来执行的。每种方法产生了不同的蛋白质鉴定结果,如[color=#c45911]图4A[/color]所示。总体而言,新方法鉴定的蛋白质数量最多(2975±52),其次是过滤辅助样品制备法(2964±102),最后是溶液法(2803±57)。每种方法的已鉴定肽段数量如[color=#c45911]图4B[/color]所示。使用溶液法,鉴定了10931±16个独特的肽段。过滤辅助样品制备法和新方法分别鉴定了10981±48和10959±23个独特的肽段。平均而言,在溶液法中每个蛋白质匹配到3.90个独有肽段,在过滤辅助样品制备法中匹配到3.70个独有肽段,在新方法方法中匹配到3.68个独有肽段。这表明新方法表现出最高的蛋白质鉴定效率。[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271411151149_9928_5680383_3.png[/img][color=#c45911]图 4 不同蛋白组学前处理方法在实际蛋白质组学分析中的应用。A:使用三种方法(溶液法、过滤辅助样品制备法和新方法)比较蛋白质鉴定结果;图B为每种消化方法鉴定的独特肽段,结果代表了三次生物学实验;图C为使用组内相关系数(ICC)评估无标签定量分析的可重复性;每种方法都有三次生物学重复。[/color]随后,使用ICC评估无标签定量分析的可重复性([color=#c45911]图4C[/color])。发现新方法显示出最佳的可重复性,平均ICC值为0.622,有1375个蛋白质的ICC值大于0.4。过滤辅助样品制备法表现出稍弱的可重复性,平均ICC值为0.533,有1180个蛋白质的ICC值大于0.4。相比之下,溶液法的可重复性最差,平均ICC值仅为0.477,有1017个蛋白质的ICC值大于0.4。4.5 新方法有助于减少氨基酸残基的不利修饰[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/10/202310271411148874_7284_5680383_3.png[/img][color=#c45911]图 5 样品制备方法对氨基酸残基修饰的影响。A:比较三种样品制备方法(溶液法、过滤辅助样品制备法和新方法)引入的单氧化修饰;B:三种方法对氨基酸残基脱酰胺化修饰的影响,该实验作为生物学重复进行了三次。[/color]氧化修饰和去酰胺修饰通常在天然蛋白质和多肽样本中被观察到,研究这些修饰对于理解蛋白质的固有应激至关重要。然而,样品预处理引起的人为修饰可能会对修饰蛋白组学分析带来挑战。为了评估在样品处理过程中引入的这些不利修饰对样品的影响,我们比较了三种方法:溶液法、过滤辅助样品制备法和新方法,关于它们对氧化和去酰胺修饰的影响。我们鉴定和定量了不同数量的单氧化和去酰胺修饰,但未检测到双氧化和三氧化修饰。在这三种方法中,新方法和溶液法显示出相对较低水平的单氧化修饰([color=#c45911]图5A[/color])。此外,新方法还减少了非必要的去酰胺修饰([color=#c45911]图5B[/color]),鉴定了具有去酰胺修饰的蛋白质最少(473±8),其次是溶液法(485±23),最后是过滤辅助样品制备法(544±23)。考虑到有机溶剂中的羟基可以与酰胺键形成氢键,因此在溶液法和过滤辅助样品制备法中观察到较高水平的去酰胺修饰可能归因于在去盐过程中使用有机溶剂,而新方法更加高效的样品处理可能有助于减少人为的氧化修饰。总之,新方法有效减少了氨基酸残基的去酰胺和氧化修饰。5? 结语南开大学医学院实验室改进的蛋白组学样品前处理方法,利用超滤管将酶解缓冲液置换成碳酸氢铵水溶液,酶解后利用碳酸氢铵加热潮解的特性除去多肽溶液中的碳酸氢铵成分,最终得到纯净的多肽,可以方便地与[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]直接衔接,进行质谱分析。与传统的方法相比,无样品损失,提高了蛋白质检测数目,同时操作简单快捷。值得注意的是,与传统的过滤辅助样品制备法相比,新方法在最小化氧化和去酰胺修饰方面表现出卓越的性能。这一创新的方法代表了蛋白质组学分析的重大进展,为质谱分析提供可靠和高效的结果。虽然新方法和过滤辅助样品制备法在使用基于滤膜的蛋白质截断方法方面有相似之处,但它们之间的关键区别变得显而易见。过滤辅助样品制备法在酶解前需要进行更彻底的洗涤,通常需要使用碳酸氢铵水溶液进行5次洗涤,而过滤辅助样品制备法通常只需要进行2次洗涤[sup][color=black][back=yellow][20][/back][/color][/sup]。此外,新方法可以通过轻度加热实现原位样品脱盐和纯化方法的完美集成。相比之下,过滤辅助样品制备法通常需要额外的脱盐柱纯化步骤。与新方法和过滤辅助样品制备法不同,悬浮陷阱法(S-Trap)采用三维多孔材料来捕获蛋白质 [sup][color=black][back=yellow][21][/back][/color][/sup]。由于其较大(亚微米级)的孔径,悬浮陷阱法滤膜的每个离心循环只需1分钟,实现了比本文中新方法和过滤辅助样品制备法更高的洗涤效率[sup][color=black][back=yellow][22][/back][/color][/sup]。然而,值得注意的是,与悬浮陷阱法相比,超滤管目前的成本较低,悬浮陷阱法在酶解后需要多次使用有机溶剂(如甲酸和乙腈)进行洗涤。悬浮陷阱法还涉及额外的脱盐柱纯化步骤,增加了实验的复杂性。总之,本文描述了一种独特的蛋白组学前处理方式,显著提高了高效样品制备的能力。6? 数据可用性声明本研究所有数据均包含在论文中。所有的蛋白质组学质谱数据已被存储在ProteomeXchange,并可通过访问编号PXD044209:[url=https://proteomecentral.proteomexchange.org/cgi/GetDataset?ID=PXD044209][color=#0563c1]https://proteomecentral.proteomexchange.org/cgi/GetDataset?ID=PXD044209[/color][/url] [sup][color=black][back=yellow][23, 24][/back][/color][/sup]来获取。参考文献(References):[1]? 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1994年,Marc Wilkins在Siena双向凝胶电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)会议上最早提出了蛋白质组(proteome)概念,并于1995年7月的Electrophoresis杂志上发表。随着高通量、高灵敏度、高分辨率生物质谱技术的出现,蛋白质组学技术取得飞速发展,人们不再满足于对一个细胞或组织的蛋白质进行定性研究,而是着眼于蛋白质量的研究,于是蛋白质组学概念就被提出,并得到了广泛的应用。蛋白质组学(Proteomics)是蛋白质(protein)与 基因组学(genomics)两个词的组合体,表示“一种基因组所表达的全套蛋白质”,即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。蛋白质组学研究,就是要把一个基因组表达的绝大多数蛋白质或一个复杂的混合体系中绝大多数蛋白质进行精确的定量和鉴定。蛋白质组本质上指的是在大规模水平上研究蛋白质的特征,包括蛋白质的表达水平,翻译后的修饰,蛋白与蛋白相互作用等,由此获得蛋白质水平上的关于疾病发生,细胞代谢等过程的整体而全面的认识。蛋白质组学是一门以全面的蛋白质性质研究为基础,在蛋白质水平对疾病机理、细胞模式、功能联系等方面进行探索的科学。目前最新的iTRAQ蛋白定量分析技术在此基础上被提出,并被得到广泛应用。仅仅知道蛋白质的身份并不足以对蛋白质给出最终定论,因为蛋白质的浓度对于实现其在细胞中的功能来说极其重要,一种特殊蛋白质在浓度上的变化,就能预示细胞的突变过程。因此,科学家能够对蛋白质的相对和绝对浓度进行测量,是很重要的事情。过去,科学家通常先进行二维(2D)凝较电泳,切断条带,再用质谱方法测量条带中的蛋白质。可是,这种方法不是很理想:既不是非常敏感,也不是非常精确。新泽西医学及牙科大学的蛋白组学研究中心主任Hong Li说:“当我们开始蛋白组学研究时,就采用2D凝胶技术,但得出的信息量却让大伙很失望,因为许多蛋白质已经改变了自身的代谢过程,如热休克蛋白或者是管家蛋白。”蛋白组学中的方法一直在不断提高。基于高度敏感性和精确性的串联质谱方法,不需要凝胶,就可以获得相对和绝对定量的蛋白质结果。iTRAQ和iCAT是这些新进展中的两大主力,但是,新技术也有不尽如人意的地方,需要不断改进。iTRAQ技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation,ABI)2004年开发的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)技术,是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法,这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。上海舜百生物公司目前所采用的就是这种iTRAQ技术。该技术的主要特点在于:1. 分离能力强、分析范围广;2. 定性分析结果可靠,可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息;3. MS具备高灵敏度、检测限低;4. 分析时间快,分离效果好;5. 自动化程度高;6. iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白,还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白。iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白。上海舜百生物使用的液相色谱仪的型号是日本岛津公司2D-nano-HPLC,质谱仪型号是美国ABI公司的MALDI-TOF-TOF 4700,标记试剂盒是美国ABI公司的ITRAQ标记试剂盒。舜田生物所采用的iTRAQ试剂是一种小分子同重元素化学物质,包括三部分:一端是报告部分(reporter group ),另一端是肽反应部分(peptide reactive group),中间部分是平衡部分(balance group)。 其中,reporter group:质量为114Da、115 Da、116 Da、117 Da,因此iTRAQ试剂共四种。 peptide reactive group:将reporter group与肽N端及赖氨酸侧链连接,几乎可以标记样本中所有蛋白质。 balance group:质量为31 Da、30 Da、29 Da、28 Da,使得四种iTRAQ试剂分子量均为145 Da,保证iTRAQ标记的同一肽段m/z相同。舜百生物公司iTRAQ的操作程序如下:将蛋白质裂解为肽段,然后用iTRAQ试剂进行差异标记。再将标记的样本相混合,这样就可以对其进行比较。与样本结合后,通常用MudPIT多维蛋白质鉴定技术进行下一步的操作,用2D液相色谱串联质谱进行分析。在质谱分析鉴定特殊肽离子片断结构的基础上,采用美国应用生物系统公司的软件包MASCOT和Protein Pilot对每一个肽段进行鉴定。其具体操作如下图所示: http://img.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2013/11/A1383890263png_small.jpgiTRAQ技术对检测标本也有一定要求。舜百生物要求检测蛋白量最低不少于50 ug,浓度最低不少于5 ug/uL,否则同位素无法标记。而对蛋白提取试剂也要求使用普通的组织、细胞裂解液即可,切忌不要使用二维电泳试剂提取。iTRAQ技术区别与以往二维电泳技术具有更明显的优势,两者比较如下:1. 二维电泳所检测的发生表达变化的蛋白都位于细胞浆内,而iTRAQ可检测到蛋白有胞浆蛋白外,还有线粒体蛋白、膜蛋白和核蛋白。2. 二维电泳观察到的蛋白变化在2倍以上,而用iTRAQ计算出的蛋白变化在1.3-1.6倍之间。3. iTRAQ技术在鉴定大分子和小分子蛋白方面也有优势。4. 二维电泳是通过切断条带,再用质谱方法测量条带中的蛋白质,但该方法既不是非常敏感,也不是非常精确,获取的信息量很少。 而itraq技术是基于高度敏感性和精确性的串联质谱方法,不需要凝胶,就可以获得相对和绝对定量的蛋白质结果。5. iTRAQ可以对任何类型的蛋白质进行鉴定,包括高分子量蛋白质、酸性蛋白质和碱性蛋白质,而二维电泳对这些蛋白质都束手无策。由此,舜百生物得出结论:iTRAQ技术比二维电泳技术能发现更多数量和种类的蛋白,但在比较胞浆蛋白及蛋白量的变化方面,二维电泳技术有一定长处,对iTRAQ的实验结果有互补作用。
2003年人类基因组精细图绘制完成,是人类科学史上一个里程碑式的事件。后基因组时代的研究重点自然落在了蛋白质头上。为啥?因为中心法则告诉我们,基因的产物——蛋白质,是生命活动的最终执行者。与基因组类比,研究生物体内全套蛋白质的科学,就是蛋白质组学。基因组计划完成的同年,人类蛋白质组计划启动,令人激动的是,2014年人类蛋白质组的草图也完成了。而蛋白质组学能够飞速发展的最大功臣非质谱莫属。质谱的应用范围非常广泛,但这里只讨论蛋白质组学中的质谱。简单地说,质谱法(mass spectrometry)就是对肽段离子的重量(质荷比,m/z)进行测量的分析方法。样品经质谱仪(mass spectrometer)检测得到质谱图(mass spectrum),通过对质谱图的分析就可以对样品中的蛋白进行鉴定、定量。亲,图1的这种典型的蛋白质组学流程都很熟悉吧。蛋白首先都要被特异性的酶(通常为Trypsin)切割为肽段,再进行后续分析,这在蛋白质组学中被称为“自下而上”的研究策略(Bottom-up proteomics)。我们平时见到的质谱分析基本都是这种类型。提到蛋白质组,即会联想到一系列高大上的名词,iTRAQ、SWATH、SILAC、Shotgun、Label-free等等。很多概念容易弄混淆,下面我们就来理理清楚。图1. 典型的蛋白质组学流程大体上,质谱研究蛋白主要是鉴定和定量。通过二级质谱图(MS2或者MS/MS)进行数据库搜索匹配鉴定蛋白。通过各种标记或非标记的手段对不同样品中的蛋白进行比较就是定量。蛋白定量比较是质谱最重要的用途,图2是对定量方法的一个简单总结。非标定量(Label-free)不需要标记,不同样品分别处理、分别进质谱检测;优点是处理简单、无需标记、价格便宜、可以比较很多组样品,缺点是对操作步骤、LC、质谱稳定性要求严格。SILAC是在细胞培养基中加入稳定同位素标记的氨基酸,在代谢水平标记蛋白,一级质谱图进行定量,可以做到三组样品混合后进行比较,定量准确,但是不能标记组织样本,养细胞成本也较贵。双甲基化标记是通过化学反应的办法在肽段水平进行标记,一级质谱定量,也可以三组对比,标记试剂都比较便宜,而且可以标记任何来源的样品。iTRAQ和TMT是商品化的试剂盒,肽段水平标记,二级质谱定量;分别可以做到最多8组和10组样品间蛋白质组的比较。图2. 质谱定量方法以上这几个是一家的,还有几个名词是属于另外一家,比如Shotgun (DDA)、SWATH/DIA、SRM (MRM)、MRMHR/PRM。质谱进行数据采集的方式大致分为三种:鸟枪法(Shotgun)、选择反应监控(SRM)和全景式的SWATH/DIA。下面对照图3再来简单介绍一下。图3. 质谱扫描方式DDA、IDA、Shotgun和鸟枪法说的是相同的东西,意思是质谱在每个循环的中从一级里挑选丰度高的TopN个肽段去打碎做二级扫描,得到的结果通过与已知数据库中的理论蛋白进行匹配。DDA简单有效,分析流程比较成熟,也是目前质谱分析的主流方式。DDA也有其固有的缺陷,即具有一定的随机性,偏向于检测丰度较高的肽段,而抑制了低丰度肽段的检测。靶向策略被称为质谱领域的Western blot。质谱只去采集目标肽段大小的离子信息,因而提高了灵敏度和特异性。这种方法用来研究感兴趣的特定蛋白,定量准确,但是通量很有限。SWATH/DIA这种全景式的数据采集方式在最近几年突然火了起来,被认为在不远的未来可能会取代DDA的主流位置。该方法采取的策略是将扫描范围内的所有肽段按照质荷比分为若干个窗口,再对每个窗口里所有的肽段一起打碎,采二级,数据分析时通过抽提蛋白的子离子信息进行定量。SWATH/DIA解决了DDA中随机性选择肽段的缺陷,所以重复性更好,定量的准确性基本达到了SRM的水平,而且可以实现大规模定量。借用听来的一个比喻来说明:DDA就像机关枪扫射,数量多、体积大的目标命中的概率要大一些。靶向扫描(SRM或PRM)就像精准狙击,排除干扰,目标明确,每一枪直指目标,但是难以大规模消灭敌人。SWATH/DIA就是地毯式轰炸,只要暴露在我方攻击范围内的敌人,不管三七二十一,全部炸完。图4. 定量方法与采集方式结合如果将上述的定量方法(图2)和质谱数据采集方式(图3)结合起来,就得到了现在基于质谱的蛋白质组学研究的各种策略(图4)。再打个比方,保证吃货们一听就懂:鸡、鱼、肉、蛋、蔬菜要通过炒锅、烤箱、高压锅、微波炉等烹调之后才能变为美食,填饱肚子。同样的,各种定量方法(非标的和标记的)处理的样品,要通过质谱各种采集方式变为电脑中的数据,才能分析并从中得到蛋白的信息。本次的介绍就先到这里了,如果其中有什么问题,欢迎您批评和建议,我们会努力变得更好;如果需要跟我们进行技术交流和讨论,欢迎大家联系武汉金开瑞。后续我们还会继续推出对质谱技术各方面进行解析的文章,敬请期待。ReferencesA draft map of the human proteome. Nature 509: 575–581 (2014)Mass-spectrometry-based draft of the human proteome. Nature 509: 582–587 (2014)A review: Annu. Rev. Biochem. 80: 273–99 (2011)SILAC: Molecular & Cellular Proteomics 1: 376-386 (2002)iTRAQ: Molecular & Cellular Proteomics 343: 91–99 (2010)SRM: Nature Methods 9: 555–566 (2012)SWATH: Molecular & Cellular Proteomics 11: 1–17 (2012)
[font=&][size=16px]仪器信息网将于 [/size][/font][font=&][size=18px][i][b]7月22日[/b][/i][/size][/font][font=&][size=16px][i] [/i]举办 [/size][/font][font=&][size=18px][i][b]第一届女性质谱学者国际研讨会[/b]([url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/fems2021/]会议页面戳这里[/url])。[/i][/size][/font][align=center][i][img=,690,151]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107141042105831_9881_2507958_3.jpg!w690x151.jpg[/img][/i][/align][font=&][size=18px][b]会议介绍[/b][/size][/font][font=&] 科学究其本质就是一种磨练,得益于那些好奇心无限、智慧超然并愿意为世界和个体生活带来真正改变的人们。正因如此,科学界一直不乏杰出的女性智者和先驱,她们为其所在领域带来了翻天覆地的改变。在质谱学领域,越来越多的女院士、女教授、女专家,还有资深女工程师……正在通过自己的思考与行动影响着该行业的发展。[/font][font=&] 当前,质谱技术在生物、医药、材料、食品、环境、公共安全等众多领域发挥着不可替代的作用。女性学者在质谱领域的占比也越来越高,并在其各自的岗位发挥着重要作用。受社会角色影响,女性学者面临工作和生活中更多的困难和挑战。[/font][font=&] 基于此,仪器信息网在Females in Mass Spectrometry(FeMS)组织的大力支持下,于2021年[b][color=#ff0000]7月22日[/color][/b]举办“第一届女性质谱学者国际研讨会”,旨在[b][color=#ff0000]为质谱领域的女性学者从学业生活到个人心路历程等方面搭建沟通、交流的平台[/color][/b],激励质谱领域女性学者的工作热情、帮助领域内女性学者的事业发展。[/font][b]会议日程[/b][table=92%][tr][td=1,1,189]分会场Sessions[/td][td=1,1,87]时间 Time[/td][td=1,1,203]报告题目Topic[/td][td=1,1,250]演讲嘉宾The Speakers[/td][/tr][tr][td=1,13][b]Multi-omics Enlightens Chemistry and Life Sciences (质谱在多组学研究的技术应用进展)(07月22日)[/b][/td][td=1,1,87]09:00[/td][td=1,1,203]Multidimensional Characteristics for Highly Confident Measurements and Scientists基于多维特征分析实现高可信度高可信度质谱检测[/td][td=1,1,250]Erin S. Baker( North Carolina State University[北卡罗莱纳州立大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]09:30[/td][td=1,1,203]Single cell proteomics in neurons 单神经元蛋白组学[/td][td=1,1,250]John R. Yates III(Scripps Research[斯克利普斯研究所])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]10:00[/td][td=1,1,203]On-tissue Spatially Resolved Multiomics Analyses Enabled by MALDI MS Imaging Coupled with In-situ Chemical Reactions MALDI质谱成像辅助原位化学反应实现空间分辨的组织原位多组学分析[/td][td=1,1,250]Lingjun Li[李灵军](School of Pharmacy University of Wisconsin[威斯康星大学麦迪逊分校])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]10:30[/td][td=1,1,203]Top-down Proteomics and Metabolomics for Precision Medicine 精准医学中的Topdown蛋白组学和代谢组学研究[/td][td=1,1,250]Ying Ge[葛瑛](University of Wisconsin-Madison[威斯康星大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]11:00[/td][td=1,1,203]Community-building: Plasma Lipidomics and Beyond 搭建研究群体:血浆脂质组学[/td][td=1,1,250]Anne K Bendt( National University of Singapore [新加坡国立大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]11:30[/td][td=1,1,203]Lunch Break[/td][td=1,1,250]午休[/td][/tr][tr][td=1,1,87]14:00[/td][td=1,1,203]In-depth urine and serum proteome maps immune responses associated with the COVID-19 disease 深度尿液和血清蛋白质组与新冠的免疫谱图[/td][td=1,1,250]Catherine Wong [黄超兰](Peking University [北京大学医学部精准医疗多组学研究中心])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]14:30[/td][td=1,1,203]Chemical proteomics reveal functional targets for glycolytic metabolites 化学蛋白质组学解密糖酵解代谢物的功能靶标[/td][td=1,1,250]Hui Ye[叶慧](China Pharmaceutical University[中国药科大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]14:50[/td][td=1,1,203]MS-based approaches for analysis of glycosylation and their application 蛋白质糖基化质谱分析新方法及应用[/td][td=1,1,250]Ying Zhang [张莹](Fudan University [复旦大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]15:30[/td][td=1,1,203]Fragment Ion-based Quantitation Methods enable accurate, precisive and dynamic proteome analysis 基于碎片离子的高精准蛋白质组动态分析新方法[/td][td=1,1,250]Jianhui Liu[刘健慧](CAS[中科院大连化学物理研究所])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]15:45[/td][td=1,1,203]Redox Chemoproteomics氧化还原蛋白质组学[/td][td=1,1,250]Ling Fu[付玲](National Proteome Center[国家蛋白质科学中心])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]16:00[/td][td=1,1,203]Deep-Profiling of Aminophospholipids from Biological Samples via Two Orthogonal Derivatizations 基于正交衍生的氨基磷脂组深度分析策略[/td][td=1,1,250]Qiaohong Lin[林巧红](Tsinghua University[清华大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]16:15[/td][td=1,1,203]Microparticle assisted protein precipitation strategy for drug target screening基于微球辅助的蛋白质沉淀策略的药物靶点筛选研究[/td][td=1,1,250]Jiawen Lyu[吕佳纹](CAS[中科院大连化学物理研究所])[/td][/tr][/table][font=&][color=#ff0000][size=18px]欢迎大家参会,[url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/fems2021/]报名请戳这里[/url][/size][/color][/font]
[font=宋体][font=宋体]泛素化是一种细胞内的蛋白质标记系统,蛋白质泛素化是指将小的蛋白质泛素共价地连接到其他蛋白质分子上的过程。泛素([/font][font=Calibri]ubiquitin[/font][font=宋体])是一种高度保守的蛋白质,其结构由[/font][font=Calibri]76[/font][font=宋体]个氨基酸残基组成。泛素连接到目标蛋白质上的过程,经历了泛素激活、泛素转移和靶蛋白接受三个主要步骤。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体]蛋白质泛素化具有多种特点,例如它是高度选择性的,不同蛋白质泛素化的位置和数量可以影响其功能;它是可逆的,通过去泛素化反应可以调控蛋白质的泛素化状态;它还是动态调控的,受到多种因素的调控,如细胞信号通路和环境刺激。[/font][b][font=宋体]泛素化蛋白大小:[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]蛋白泛素化是指将小蛋白颗粒泛素([/font][font=Calibri]Ubiquitin[/font][font=宋体])与其他蛋白质共价结合的修饰过程。 泛素化修饰通常会导致泛素共价连接在蛋白质的赖氨酸残基上形成多重泛素链。 这种蛋白质泛素化增加了蛋白质的分子量,因为每个泛素分子的质量大约为[/font][b][font=Calibri]8.5[/font][font=宋体]千达尔顿([/font][font=Calibri]kDa[/font][/b][font=宋体][b])[/b]。[/font][/font][font=宋体] [/font][font=宋体] [/font][b][font=宋体]泛素化蛋白质组学在许多领域有重要的应用,主要包括:[/font][/b][font=宋体] [/font][font=宋体]①疾病机制研究:泛素化是一种广泛存在于细胞中的蛋白质修饰方式,参与了细胞的生长、分化、修复和调控等多个生命活动。泛素化蛋白质组学的研究可以帮助我们了解泛素化修饰的生物学功能和调控机制,为疾病发生机制和治疗策略的研究提供重要线索。例如,在癌症、代谢综合征、神经退行性疾病等疾病中,则会出现异常泛素化。[/font][font=宋体]②药物研发:通过分析药物对泛素化蛋白质的影响,可以评估药物的效力和选择性,为药物研发提供指导。[/font][font=宋体]③临床诊断:泛素化蛋白质组学鉴定与定量分析技术可以揭示细胞调控的机制,通过分析泛素化蛋白质的组学数据,可以确定泛素化修饰在细胞信号转导、蛋白质降解和细胞周期调控等过程中的重要作用。此外,通过比较病态和正常样品中泛素化蛋白质的差异,可以鉴定与疾病发生发展相关的泛素化修饰靶点,并进一步理解疾病的分子机制。因此,这些技术也可用于临床诊断。[/font][font=宋体]④蛋白质降解调控:在癌症、神经退行性疾病和免疫相关疾病等病症中,蛋白质降解调控出现异常。而泛素化蛋白组在调控蛋白质降解中发挥重要作用。通过与泛素连接,目标蛋白质被送入蛋白酶体或蛋白酶体样体中进行降解。这个过程是细胞清除异常、老化或受损蛋白质的重要途径。[/font][font=宋体]⑤高通量技术应用:高通量泛素化蛋白质组学鉴定与定量分析技术的发展包括质谱鉴定和抗体鉴定两种方法。质谱鉴定技术利用质谱仪的高灵敏度和分辨率,能够鉴定泛素化修饰的蛋白质及其泛素化位点。抗体鉴定技术则通过特异性抗体的使用,可以富集和鉴定泛素化修饰的蛋白质。这些技术为全面了解泛素化在细胞中的作用机制和调控网络提供了可能。[/font][font=宋体]总的来说,泛素化蛋白质组学在多个领域都有重要的应用价值,推动了我们对生命过程的深入理解以及疾病治疗的创新发展。[/font][font=宋体] [/font][font=宋体]更多详情关于[url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][b]蛋白资源[/b][/url]详情可以参看:[/font][url=https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review][u][font=宋体][color=#0000ff][font=Calibri]https://cn.sinobiological.com/resource/protein-review[/font][/color][/font][/u][/url][b][font=宋体] [/font][font=宋体][font=宋体]义翘神州:蛋白与抗体的专业引领者,欢迎通过百度搜索[/font][font=宋体]“义翘神州”与我们取得联系。[/font][/font][/b]
[size=16px]仪器信息网将于 [/size][size=18px][i][b]7月22日[/b][/i][/size][size=16px][i] [/i]举办 [/size][font=&][size=18px][i][b]第一届女性质谱学者国际研讨会[/b]([url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/fems2021/]会议页面戳这里[/url])。[/i][/size][/font][font=&][size=18px][i][/i][/size][/font][align=center]=======================================================================[/align][align=center][i][img=,690,151]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/07/202107141042105831_9881_2507958_3.jpg!w690x151.jpg[/img][/i][/align][font=&][size=18px][b]会议介绍[/b][/size][/font] 科学究其本质就是一种磨练,得益于那些好奇心无限、智慧超然并愿意为世界和个体生活带来真正改变的人们。正因如此,科学界一直不乏杰出的女性智者和先驱,她们为其所在领域带来了翻天覆地的改变。在质谱学领域,越来越多的女院士、女教授、女专家,还有资深女工程师……正在通过自己的思考与行动影响着该行业的发展。 当前,质谱技术在生物、医药、材料、食品、环境、公共安全等众多领域发挥着不可替代的作用。女性学者在质谱领域的占比也越来越高,并在其各自的岗位发挥着重要作用。受社会角色影响,女性学者面临工作和生活中更多的困难和挑战。 基于此,仪器信息网在Females in Mass Spectrometry(FeMS)组织的大力支持下,于2021年7月22日举办“第一届女性质谱学者国际研讨会”,旨在为质谱领域的女性学者从学业生活到个人心路历程等方面搭建沟通、交流的平台,激励质谱领域女性学者的工作热情、帮助领域内女性学者的事业发展。[b]会议日程[/b][table=92%][tr][td=1,1,189]分会场Sessions[/td][td=1,1,87]时间 Time[/td][td=1,1,203]报告题目Topic[/td][td=1,1,250]演讲嘉宾The Speakers[/td][/tr][tr][td=1,13][b]Multi-omics Enlightens Chemistry and Life Sciences (质谱在多组学研究的技术应用进展)(07月22日)[/b][/td][td=1,1,87]09:00[/td][td=1,1,203]Multidimensional Characteristics for Highly Confident Measurements and Scientists基于多维特征分析实现高可信度高可信度质谱检测[/td][td=1,1,250]Erin S. Baker( North Carolina State University[北卡罗莱纳州立大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]09:30[/td][td=1,1,203]Single cell proteomics in neurons 单神经元蛋白组学[/td][td=1,1,250]John R. Yates III(Scripps Research[斯克利普斯研究所])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]10:00[/td][td=1,1,203]On-tissue Spatially Resolved Multiomics Analyses Enabled by MALDI MS Imaging Coupled with In-situ Chemical Reactions MALDI质谱成像辅助原位化学反应实现空间分辨的组织原位多组学分析[/td][td=1,1,250]Lingjun Li[李灵军](School of Pharmacy University of Wisconsin[威斯康星大学麦迪逊分校])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]10:30[/td][td=1,1,203]Top-down Proteomics and Metabolomics for Precision Medicine 精准医学中的Topdown蛋白组学和代谢组学研究[/td][td=1,1,250]Ying Ge[葛瑛](University of Wisconsin-Madison[威斯康星大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]11:00[/td][td=1,1,203]Community-building: Plasma Lipidomics and Beyond 搭建研究群体:血浆脂质组学[/td][td=1,1,250]Anne K Bendt( National University of Singapore [新加坡国立大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]11:30[/td][td=1,1,203]Lunch Break[/td][td=1,1,250]午休[/td][/tr][tr][td=1,1,87]14:00[/td][td=1,1,203]In-depth urine and serum proteome maps immune responses associated with the COVID-19 disease 深度尿液和血清蛋白质组与新冠的免疫谱图[/td][td=1,1,250]Catherine Wong [黄超兰](Peking University [北京大学医学部精准医疗多组学研究中心])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]14:30[/td][td=1,1,203]Chemical proteomics reveal functional targets for glycolytic metabolites 化学蛋白质组学解密糖酵解代谢物的功能靶标[/td][td=1,1,250]Hui Ye[叶慧](China Pharmaceutical University[中国药科大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]14:50[/td][td=1,1,203]MS-based approaches for analysis of glycosylation and their application 蛋白质糖基化质谱分析新方法及应用[/td][td=1,1,250]Ying Zhang [张莹](Fudan University [复旦大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]15:30[/td][td=1,1,203]Fragment Ion-based Quantitation Methods enable accurate, precisive and dynamic proteome analysis 基于碎片离子的高精准蛋白质组动态分析新方法[/td][td=1,1,250]Jianhui Liu[刘健慧](CAS[中科院大连化学物理研究所])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]15:45[/td][td=1,1,203]Redox Chemoproteomics氧化还原蛋白质组学[/td][td=1,1,250]Ling Fu[付玲](National Proteome Center[国家蛋白质科学中心])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]16:00[/td][td=1,1,203]Deep-Profiling of Aminophospholipids from Biological Samples via Two Orthogonal Derivatizations 基于正交衍生的氨基磷脂组深度分析策略[/td][td=1,1,250]Qiaohong Lin[林巧红](Tsinghua University[清华大学])[/td][/tr][tr][td=1,1,87]16:15[/td][td=1,1,203]Microparticle assisted protein precipitation strategy for drug target screening基于微球辅助的蛋白质沉淀策略的药物靶点筛选研究[/td][td=1,1,250]Jiawen Lyu[吕佳纹](CAS[中科院大连化学物理研究所])[/td][/tr][/table][color=#ff0000][size=18px]欢迎大家参会,[url=https://www.instrument.com.cn/webinar/meetings/fems2021/]报名请戳这里[/url][/size][/color]
[table=100%][tr][td]想请教一下,做完胶内酶解肽段后的质谱,如何处理数据寻找差异蛋白,并进行相关分类呢,这方面没接触过,希望懂的赐教一下,谢谢[/td][/tr][/table]
[font='times new roman'][size=18px]常规蛋白组学分析方法[/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]蛋白质组学是中心法则的下游,因此它要比基因组学更加复杂。和以相对稳定的方式存在的基因组比较,蛋白质组会由于蛋白质和基因的多种生化反应以及环境的影响而发生多种改变。首先计算并比较两组中三种样品之间蛋白质的差异表达状况,然后计算每组样品中蛋白质差异表达的显著性[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]值,选定表达差异倍数大于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]1.5[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]倍或小于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.67[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]倍且[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P-value[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]significance A[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])小于[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]0.05[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的蛋白质界定为差异表达蛋白质。通过基因本体数据库([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Gene Ontology[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]GO[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])分析和京都基因与基因组百科全书([/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Kyoto encyclopedia of genes and genomes[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000],[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]KEGG[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000])通路富集分析进行相关生物信息学分析[/color][/size][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]。[/color][/size][/font][font='宋体'][size=16px][color=#000000]1 火山图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]火山图可查看蛋白在两组样品中表达水平的差异以及差异的统计学显著性。图中每一个点表示一个蛋白,横坐标表示某一个蛋白在两样品中表达量差异倍数的对数值[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]纵坐标表示[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]P-value[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]的负对数值。横坐标绝对值越大,说明表达量在两样品间的表达量倍数差异越大[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]纵坐标值越大,表明差异表达越显著,筛选得到的差异表达蛋白越可靠。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]2 [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]热图[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]差异表达蛋白层次聚类分析热图:前三列代表对照组样品,后三列代表实验组样品。红色代表与对照组相比表达上调的蛋白,蓝色代表下调的蛋白。颜色亮度的深浅代表差异表达蛋白表达上调或下调的程度。[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]3[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]在对目标蛋白质集合进行[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]GO[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]注释或[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]KEGG[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路注释的富集分析时,使用[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000] [/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]Fisher[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]精确检验来比较每个[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]GO[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]分类或[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]KEGG[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路在目标蛋白质集合和总体蛋白质集合中的分布情况,然后再评价某个[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]GO term[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]或[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]KEGG[/color][/size][/font][font='times new roman'][size=16px][color=#000000]通路蛋白质富集度的显著性水平。[/color][/size][/font]
PS1利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间(MALDI-TOF)技术来表征生物分子。样品溶于固定的底物中形成晶体,用激光脉冲使其离子化,离子被加速后通过飞行管时分离,所有离子均可被检测。系统包括三个组成部件:样品点样制备工作站(SymBiot 1)、生物质谱工作站(Voyager-DE PRO)和自动化分析软件(AutoMS-Fit)。SymBiot1 是一个自动样品处理系统,支持亚微升级微量点样,具有快速省时、重现性好的特点;Voyager-DE PRO是为蛋白质组研究专门设计的自动飞行时间质谱分析系统,配有AB公司之专利—延迟检测技术,具有高分辨率、质荷比宽等特点;AutoMS软件可以批处理方式或实时动态方式检索Protein Prospector蛋白数据库或您指定的蛋白数据库,查询参数可以任意设定,检索结果以Microsoft Access格式分类编号及储存。 PS 1技术平台建立伊始便受到了许多蛋白质课题研究组的关注。中国科学院上海生物化学研究所戚正武院士课题组从猪肝中提取某一活性蛋白组分,该组分理化性质不清楚,天然含量十分低,并无相关文献报道。用HPLC分离以后对活性组分的成分不能确定。上海基康生物技术有限公司运用PS 1系统对HPLC分离后的活性组分作了质谱分析,仅在一个工作日内就精确确定该组分由分子量极为相近的几种蛋白质构成,分子量精确度达到10 ppm。后经HPLC再次细分(洗脱梯度增加了2.5倍),证实了质谱的结论。此活性组分曾滤过1kD分子筛,基康的质谱数据纠正了研究人员过去对该活性组分分子量的误判,为研究人员明确实验方向、优化实验步骤提供了强有力的依据。 PS1除了可以进行生物大分子的精确分子量测定,还可用于蛋白的肽指纹图谱分析(peptide mass fingerprint,PMF),提供相关生物信息学服务,并且还可以利用源后衰变(Post Source Decay,PSD)技术来获得样品的MS/MS数据,以得到一级结构信息。PSD方法通常增加了激发激光的功率,使其超过产生一般肽指纹谱图所需功率的阈值,过剩的能量使前体离子在源内离子化之后发生裂解,产生一系列碎片离子,在反射器的作用下,最终可以得到一张连续的碎片离子图谱。经特定的软件分析后,即可在数据库中检索到肽段的氨基酸序列。利用PSD分析技术,还可以对磷酸化,糖基化等翻译后修饰进行定位分析,同样也可以鉴定产生翻译后修饰肽段的蛋白质。Neville et al.(1997)将这一方法成功的用于磷酸肽的序列分析。作为重要的蛋白质鉴定手段之一,PS1的精确度可以达到10 ppm,灵敏度为fmol,分子量检测范围可达到500 kDa,每天可自动分析40-100个样品,适用于大规模“蛋白质组学”研究。
【网络会议】:蛋白组学新领域——食品品控研究【讲座时间】:2015年12月03日 14:00【主讲人】:丁小军赛默飞大分子质谱应用工程师。致力于蛋白质组学、生物制药、大分子食品安全领域的应用开发、技术支持和科学研究。拥有一线科研机构七年的生物质谱蛋白质定性分析,翻译后修饰以及定量研究相关的技术咨询与技术服务工作经历,参与完成过nature,science等数十篇高水平文章的质谱部分工作。【会议介绍】自从2013年欧盟“马肉风波”之后,中国肉类掺假的现象也屡见报道,进一步加深了人们对肉类真实性的担忧。这种非标明的添加,极大的扰乱的市场次序,影响相关宗教人士、特殊风俗与部分肉类禁食人士的情感与健康,也带来了潜在致病性和疾病控制的难题。随着生物质谱技术的成熟,大规模的定性和定量研究蛋白表达谱的技术已经很成熟。因此,利用质谱技术寻找不同肉类样品特征性蛋白或者多肽,并进行定量,能够避免现在最常用的PCR技术和ELISA所面临的上面的种种问题,其优点包括:不受食品加工的过程影响,因为氨基酸序列比核酸序列在加工过程中更容易保存;同时实现定性与定量,避免假阳性且定量结果更加准确可靠;能够同时监测多种添假。本期讲座的主要内容为:肉类真实性鉴别研究;食品中的过敏原研究。-------------------------------------------------------------------------------1、报名条件:只要您是仪器网注册用户均可报名,通过审核后即可参会。2、报名并参会用户有机会获得100元手机充值卡一张哦~3、报名截止时间:2015年12月03日 13:304、报名参会:http://www.instrument.com.cn/webinar/meeting/meetingInsidePage/15895、报名及参会咨询:QQ群—379196738 快速报名,请扫描或长按下方二维码!http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/10/201510301029_571692_2507958_3.png
[b]职位名称:[/b]产品与应用专员(蛋白组学)[b]职位描述/要求:[/b]岗位职责:1、有机质谱与生物质谱产品管理2、售前支持、新产品培训、演示应用和方案开发3、技术研发及项目管理4、成果发布与文献整理任职要求:1、生物、生物化学、组学及蛋白组学类相关专业,硕士及以上学历2、有1年以上经验者优先,硕士应届生亦可3、优秀的执行力、亲和力、表达和抗压能力4、英语六级以上,听说读写优良薪资待遇: 带薪休假+五险一金+定期培训+补贴工作时间:9:00-18:00 周末双休[b]公司介绍:[/b] 华质泰科生物技术(北京)有限公司(简称“华质泰科”或“ASPEC”)是一家为用户提供生物分析和测试仪器及总体解决方案的专业供应商,在制药、食品与药品安全检测、生命科学、临床检验、物证分析、生物预警、环境保护、化工与材料、三方检验等领域提供端到端的领先产品与服务。面对日益增长的、复杂的生物及化学样品分析需求及法规全球化挑战,我们提供全方位的一站式项目咨询、方法开发、人员培训、技术指导、设备提...[url=https://www.instrument.com.cn/job/user/job/position/67932]查看全部[/url]
我们单位要做蛋白组学,可是自己又是新手,最近一直在联系几个公司想买一台[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url], 但是又不知道哪个厂家的最合适。现在可以供考虑的就是:1)Thermo-fisher (和finnigan是不是一家啊?)2) varian3) waters4) agilent5) shimadzu其实如果不考虑品牌,不考虑预算,主要想知道哪一种mass analyser(或者串联的)最适合于做蛋白组学(定性,定量),哪位大虾知道的话告诉我吧。还有就是:obitrap这种mass analyser的应用主要在哪些方面呢?好像是比较新的技术,成熟么?谢谢了
一、 前言基因工程已令人难以置信的扩展了我们关于有机体DNA序列的认识。但是仍有许多新识别的基因的功能还不知道,也不知道基因产物是如何相互作用从而产生活的有机体的。功能基因组试图通过大规模实验方法来回答这些问题。但由于仅从DNA序列尚不能回答某基因的表达时间、表达量、蛋白质翻译后加工和修饰的情况、以及它们的亚细胞分布等等,因此在整体水平上研究蛋白质表达及其功能变得日益显得重要。这些在基因组中不能解决的问题可望在蛋白质组研究中找到答案。蛋白质组研究的数据与基因组数据的整合,将会在后基因组研究中发挥重要作用。目前蛋白质组研究采用的主要技术是双向凝胶电泳和质谱方法。双向凝胶电泳的基本原理是蛋白质首先根据其等电点,第一向在pH梯度胶内等电聚焦,然后转90度按他们的分子量大小进行第二向的SDS-PAGE分离。质谱在90年代得到了长足的发展,生物质谱当上了主角,蛋白质组学又为生物质谱提供了一个大舞台。他们中首选的是MALDI-TOF,其分析容量大,单电荷为主的测定分子量高达30万,干扰因素少,适合蛋白质组的大规模分析。其次ESI为主的LC-MS联机适于精细的研究。本文将简介几种常用的生物质谱技术,并着重介绍生物质谱技术在蛋白质组学各领域的应用。二、 生物质谱技术1.电喷雾质谱技术(ESI)电喷雾质谱技术( Electrospray Ionization Mass Spectrometry , ESI - MS) 是在毛细管的出口处施加一高电压,所产生的高电场使从毛细管流出的液体雾化成细小的带电液滴,随着溶剂蒸发,液滴表面的电荷强度逐渐增大,最后液滴崩解为大量带一个或多个电荷的离子,致使分析物以单电荷或多电荷离子的形式进入气相。电喷雾离子化的特点是产生高电荷离子而不是碎片离子, 使质量电荷比(m/ z) 降低到多数质量分析仪器都可以检测的范围,因而大大扩展了分子量的分析范围,离子的真实分子质量也可以根据质荷比及电荷数算出。2.基质辅助激光解吸附质谱技术(MOLDI)基质辅助激光解析电离(MOLDI)是由德国科学家Karas和Hillenkamp发现的。将微量蛋白质与过量的小分子基体的混合液体点到样品靶上,经加热或风吹烘干形成共结晶,放入离子源内。当激光照射到靶点上时,基体吸收了激光的能力跃迁到激发态,导致蛋白质电离和汽化,电离的结果通常是基体的质子转移到蛋白质上。然后由高电压将电离的蛋白质从离子源转送到质量分析器内,再经离子检测器和数据处理得到质谱图。TOF质量分析器被认为是与MALDI的最佳搭配,因为二者都是脉冲工作方式,在质量分析过程中离子损失很少,可以获得很高的灵敏度。TOF质量分析器结果简单,容易换算,蛋白质离子在飞行管内的飞行速度仅与他的(m/z)-1/2成正比,因此容易通过计算蛋白质离子在飞行管内的飞行时间推算出蛋白质离子的m/z值。与传统质量分析器相比,更易得到高分辨率和高测量精度;速度快,离子飞行时间仅为几个μs和约100μs之间;质量范围宽,可以直接检测到几十万道尔顿的单电荷离子。飞行时间质量分析器被认为是21世纪最有应用前景的质量分析器。3.傅立叶变换-离子回旋共振质谱(FT-ICR MS)傅立叶变换-离子回旋共振质谱法(FT-ICR MS)是离子回旋共振波谱法与现代计算机技术相结合的产物。傅立叶变换-离子回旋共振质谱法是基于离子在均匀磁场中的回旋运动, 离子的回旋频率、半径、速度和能量是离子质量和离子电荷及磁场强度的函数, 当对离子施加与其回旋频率相同的射频场作用时, 离子将同相位加速到一较大的半径回旋, 从而产生可被接受的类似电流的信号。傅立叶变换-离子回旋共振质谱法所采用的射频范围覆盖了欲测定的质量范围,所有离子同时被激发, 所检测的信号经过傅立叶变换, 转换为质谱图。其主要优点有:容易获得高分辨;便于实现串极质谱分析;便于使用外电离源并与色谱仪器联用。此外,他还有灵敏度高,质量范围宽,速度快,性能可靠等优点。4.快原子轰击质谱技术(FABMS)快原子轰击质谱技术( Fast Atom Bomebardment Mass Spectrometry , FABMS) 是一种软电离技术,是用快速惰性原子射击存在于底物中的样品,使样品离子溅出进入分析器,这种软电离技术适于极性强、热不稳定的化合物的分析,特别适用于多肽和蛋白质等的分析研究。FABMS能提供有关离子的精确质量,从而可以确定样品的元素组成和分子式。而FABMS -MS 串联技术的应用可以提供样品较为详细的分子结构信息,从而使其在生物医学分析中迅速发展起来。三、蛋白质的分析鉴定随着质谱技术的发展,分子量的测定已从传统的有机小分子扩展到了生物大分子。MALDI-MS技术以其极高的灵敏度、精确度在蛋白质分析中得到了广泛的应用。该技术不仅可测定各种疏水性、亲水性和糖蛋白的分子量,还可直接测定蛋白质混合物的分子量。这可认为是蛋白质分析领域的一项重大突破。蛋白质组的研究是从整体水平上研究细胞或有机体内蛋白质的组成及其活动规律。质谱技术作为蛋白质组研究的三大支撑技术之一,除了用于多肽,蛋白质的分子量测定外,还广泛的应用于肽指纹图谱测定及氨基酸序列测定。肽指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)测定是对蛋白酶解或降解后所得多肽混合物进行质谱分析的方法。质谱分析所得肽断与多肽蛋白数据库中蛋白质的理论肽断进行比较,判断出所测蛋白是已知还是未知。由于不同的蛋白质具有不同的氨基酸序列,不同蛋白质所得肽断具有指纹特征。采用肽指纹谱的方法已对酵母、大肠杆菌、人心肌等多种蛋白质组进行了研究。对肽序列的测定往往要应用串连质谱技术,采用不同的技术选择特定质核比的离子,并对其进行碰撞诱导解离,通过分析肽段的断裂情况推导出肽序列。四、后转录修饰的蛋白质的检测和识别在蛋白质组的研究中,蛋白质和多肽的序列分析已不局限于阐明蛋白质的一级结构,对翻译后的修饰的进一步分析也是蛋白质化学的一项重要任务。这种修饰对于蛋白质的功能非常重要,如:细胞识别中的蛋白质相互作用,信号传导和蛋白质定位。1. 蛋白质的糖基化糖蛋白在细胞内部,细胞膜和细胞外均有发现,实际上大部分蛋白质是糖蛋白。对糖蛋白的检测和分析发现,糖蛋白中糖组分的结构和功能具有多样性。糖蛋白中的糖通常是不同种类的,而且是由一些可控数量的单糖组成。糖基化的多样性与细胞周期,细胞分化和发展的状态有关。在蛋白组时代中,蛋白质的修饰会引起其理化性质的改变,因此是不容忽视的。从1D或2D凝胶得到的糖基化蛋白的识别,一般是进行MALDI-MS指纹分析, 或是对MALDI-PAD或ESI-MS/MS得到的碎片谱进行分析。对完整的糖蛋白的研究是非常困难的,所有已知的离子化技术都有其局限性。目前,人们主要研究糖肽,其好处之一就是质量减小了,这就会得到更好的分辨率,而且糖肽仍保留了糖基化位点。将分离的糖蛋白用不同的蛋白酶消化后就可进行糖肽的研究。一旦糖肽被识别出,就可以用串连质谱(ESI-MS/MS)来阐明肽序列。当蛋白的序列已知时,计算质量差就可推出其上附着的寡糖的质量。要将糖部分从糖蛋白中释放出来,可用化学切割或酶切割(流程图见图1)。目前,连有结构专一性糖苷酶的质谱在提供序列,分支和链接数据方面是最有力的技术。对于N糖基化常用的糖苷内切酶有PNGase-F, PNGase-A, EndoF和EndoH。化学切割也可以用来释放O-连接和N-连接的多糖,但经常出现的缺点是他会完全破坏所有的肽键,因而丢失了关于糖附着位点的信息。而且这些切割不能从糖肽中连续释放单糖。用肼的化学切割可以除去两种类型的糖基化。在60℃可专一性的释放O-连接的糖,而在95℃能释放N-连接的糖。释放O-原子更常用的方法是用碱进行β消除。通常,糖基中加入金属离子在MALDI和ESI中离子化。用MALDI-MS分析糖类的一个好的选择是将之与其他一些化合物混合,这样可以进一步提高灵敏度和分辨率。不同的质谱方法可以产生多糖的源后裂解(PSD)和碰撞诱导解离 (CID)谱,这可以给出有关糖的序列,分支及糖间的连接等信息。2. 蛋白质的磷酸化蛋白质中氨基酸的磷酸化在生命系统中起重要的作用。磷酸化经常作为分子开关控制不同过程蛋白质的活性,如新陈代谢,信号传导,细胞分裂等过程。因此,蛋白质中磷酰氨基酸的识别在蛋白质分析中是一项重要的工作。已知的磷酰氨基酸的类型有四种:1.O-磷酸盐,通过羟氨酸的磷酸化形成的,如丝氨酸,苏氨酸,酪氨酸。2.N-磷酸盐,通过精氨酸,赖氨酸或组氨酸中的氨基的磷酸化形成的。3.乙酰磷酸盐,通过天冬氨酸或谷氨酸的磷酸化形成的。4.S-磷酸酯,通过半胱氨酸的磷酸化形成的。
生物质谱在糖蛋白结构分析中的应用项目完成人:桑志红 蔡 耘项目完成单位:国家生物医学分析中心 随着人们对糖蛋白参与生命活动机理的日益深入了解,对天然糖蛋白及重组糖蛋白类药物的分析越来越受到重视。重组糖蛋白类药物的质量控制更是直接关系到药物的疗效及至人类的健康。九十年代以来,随着带有反射功能的基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和纳升电喷雾串联质谱(nano-ESI-Q-TOF)等具有软电离方式的现代质谱 技术的发展,质谱以其高灵敏度和强有力的分析混合物的能力,提供了生物大分子的分子量、序列、一级结构信息以及结构转换、修饰等方面的信息,使糖基化分析有了重要的进展。 通常研究糖蛋白的方法是把蛋白链上的寡糖切下来,分别研究蛋白部分和寡糖部分的结构,因此无法研究与两部分共同相关的结构问题,也不能区分不同糖基化位点上切下来的寡糖。自90年代初,国外有人开始用质谱法研究糖蛋白的结构,同时描述了各个位点的不均一性。我们用建立的现代生物质谱技术研究糖蛋白一级结构的方法,将其应用与基因重组糖蛋白的结构分析。为糖蛋白结构分析及基因重组糖蛋白类药物的质量控制提供新的手段。一、 生物质谱研究糖蛋白结构方法的建立实验所用仪器为:1.德国BRUKER 公司的REFLEXIII型基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪,N2激光器,波长337nm,线性飞行距离150cm,加速电压2kv。2.英国Micromass 公司Q-TOF型电喷雾串联质谱仪。源温80°C,气体流速40L/h,枪头电压650V,检测频率2.4S,氩气碰撞池压力6*10-5mbar。1. 基质的选择,在MALDI-TOF-MS分析中,基质起着相当重要的作用。不同的基质对不同类的物质响应不同,a-氰基-4-羟基肉桂酸用于测定糖蛋白核糖核酸酶B效果相对较好。2. 糖蛋白分子量的测定,糖蛋白核糖核酸酶B由124个氨基酸组成,在34位Asn处连有一个高甘露糖型N-糖链。由于糖链的微不均一性,与普通蛋白质及核酸不同,其分子离子峰在MALDI-TOF-MS 质谱图上表现为一簇峰,各峰之间约相差一个糖基。正是由于这种微不均一性,使得其分子离子峰变宽,灵敏度降低。糖链分子量越大,峰越宽,灵敏度越低,所以一般只有糖链较短,蛋白的质量不太大的糖蛋白才能测定其平均分子量。用MALDI-TOF可直接测定糖蛋白核糖核酸酶B的平均分子量为 15208.6Da。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/03/201103211511_284179_1604317_3.jpg3. 糖含量的测定,采用O聚糖酶及内糖苷键酶F分别作用于核糖核酸酶 B,只有内糖苷键酶F能够是其分子量发生变化,表明核糖核酸酶B分子中不存在O-连接糖链存在着N-连接糖链。内糖苷键酶F切断N-糖链五糖核心最内侧的GlcNAc-GlcNAc糖苷键,得到含一个GlcNAc的肽链,减去GlcNAc,可以计算出准确的肽链分子量T=13695.6,与糖蛋白平均分子量之差为糖链的平均分子量G=1513.4,平均糖含量为:(糖链大小/糖蛋白分子量)×100%=9.95%。4. 糖基化位点的确定,研究糖基化类型及糖基化位点的策略:采用蛋白酶酶解与糖苷内切酶酶解相结合的方法,通过酶切前后含糖肽片的位移,结合网上数据库检索,可以确定糖基化类型和糖基化位点。以不同类型的糖苷内切酶作用于糖蛋白(N-糖苷键酶或O-糖苷键酶),在MALDITOF-MS 上观察其质量的变化,可以直接确定糖蛋白中是否含有响应类型的糖链,这是我们确定糖蛋白中糖苷键类型的基础。我们采用先将核糖核酸酶B还原烷基化,加Glu-C酶切,产物再用内糖苷肩酶F酶切,可观察到含糖肽段出现位移,将核糖核酸酶B的肽质量指纹图进行数据库检索,证实发生位移的肽段中含有N-糖链特异连接位点,由此确定34位Asn为糖基化位点。另外我们采用内糖苷键酶F及肽-N-聚糖酶F两种酶进行差位酶切法对含糖肽段进行验证,两种酶酶切后分子离子峰的差值除以GlcNAc的质量,结果就是N-糖基化位点的个数5. 质谱测定氨基酸序列, 我们对核糖核酸酶B肽质量指纹谱中的含糖肽段进行了串联质谱测定,首先在一级质谱图中选择离子4972.23,在串联质谱的碰撞活化室以氩气与其碰撞产生碎片,从碎片的质荷比推算出此肽片中的一段氨基酸序列,检索结果为核糖核酸酶B,从而判断其理论序列是否一致。6. 糖链结构的研究,凝集素对糖肽的亲和提取,进一步分析糖肽序列及糖链结构的关键是含糖肽段的提取。核糖核酸酶B中糖链为高甘露糖型,我们选用对其有特异性吸附的伴刀豆球蛋白对其进行提取利用这种简捷的亲和质谱的方法,对糖肽段进行了分析。建立了亲和质谱分析糖肽类物质的方法,为今后糖肽序列分析及糖链结构分析奠定了基础。二、基因重组糖蛋白人促红细胞生成素(rhEPO)的结构分析。 利用以上建立的方法,我们对样品重组人促红细胞生成素进行了分析,断定此样品为非完全糖基化,样品中只存在N-连接的糖链,无O-糖链。应用酶切法用肽-N-聚糖酶处理后,得到两个含糖肽段,进行数据库检索,测得38位及83位为N-糖基化位点,与文献报道相符,结果可靠。因此,该项课
生物质谱技术帮助发现精神分裂症特征蛋白 (2006-12-28 9:34:47,新闻来源:人民网) 日前,四川泸州医学院附属医院硕士研究生姜伟,在导师王开正教授指导下,利用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术,发现了一组对精神分裂症的早期预警、鉴别诊断、治疗观察具有重要意义的蛋白标志物。 目前鉴别诊断精神分裂症缺乏有效的病理学、影像学和实验诊断依据,也缺乏客观的检查指标用于早期诊断,这也是造成对某些精神分裂症的评定产生分歧、鉴定困难的原因之一。 姜伟等人应用获得诺贝尔化学奖、高灵敏度高解析度的表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术,检测精神分裂症血清蛋白质指纹图谱,将40名精神分裂症患者血清与44名其他人对照血清随机分为训练集和验证集,将筛选训练集精神分裂症差异蛋白建立人工神经网络诊断模型,再将验证集验证该模型的诊断效率。结果发现精神分裂症患者与对照组血清蛋白质指纹图谱有15个差异表达的蛋白质荷比峰,筛选出其中6个有明显表达差异的标志蛋白,建立的人工神经网络诊断模型对精神分裂症的诊断灵敏度和特异性分别为95.0%和95.8%,阴性预测值和阳性预测值分别为95.8%和95.0%。姜伟等人依据这一结果认为,精神分裂症患者血清具有高表达的特征蛋白,建立的人工神经网络模型为精神分裂症的实验诊断提供了一种蛋白组学的新方法。这种方法检查过程快速、简便,不会破坏所测定的蛋白质,结果可靠,可重复检测。 ————2006.12.27健康报也有报道--------------------------------------------------------------------另:两毫升血5小时鉴别精神分裂症 作者:周丽 文章来源:泸州晚报 点击数:0 更新时间:2006-12-20 只需要从体内抽取两毫升鲜血,经过5个小时的实验室检测,就能诊断是否患有精神分裂症。昨(19)日记者获悉,如此简便的方法已经在我市投入使用,这也是西南地区首次将诺贝尔化学奖应用到精神分裂症的实验室诊断中。 据悉,该技术在泸医附院检验科正式投入使用。泸医附院检验科主任王元正告诉记者,泸医附院引进的表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术是获得2002年诺贝尔化学奖的高新技术,通过对患者的抽血检测,发现了一组对精神分裂症的早期预警、鉴别诊断、治疗观察具有重要意义的蛋白标志物。 而泸医附院引进的这种技术,将精神分裂症患者血清蛋白指纹图与健康人做差异蛋白组学分析,利用计算机程序找到了精神分裂症患者特征表达的蛋白质,将6个蛋白的相对含量建立人工神经网络诊断模型并进行盲法验证。结果显示,对精神分裂症的诊断灵敏度为95.0%,特异性为95.8%。整个实验检测过程只需要5个小时。 目前,全国对此技术的利用并不广泛,泸医附院在西南地区率先引进使用。这种技术还用于肿瘤、心血管疾病、风湿免疫性疾病、感染性疾病等疑难疾病的鉴别诊断,特别是对各种肿瘤的早期诊断灵敏度和特异性都在95%以上。
蛋白组学谁用过安捷伦的QTRAPTOF这款仪器么?,如何啊?
质谱与蛋白质组学蛋白质组学对一个细胞或组织所表达的蛋白质进行的系统分析,而质谱是它的关键性分析工具。在过去的两年中,标准蛋白质组技术中的进展增进了更高水平自动化和敏感性的蛋白质识别技术。另外,新的技术促成了鉴定蛋白质功能相关特性的里程碑性的进展,包括它们的定量和在蛋白质复合物中复杂情况。缩写2DE two-dimensional gel electrophoresis双向凝胶电泳CID collision-induced dissociation碰撞诱导的解离ESI electrospray ionization电喷雾离子化FT-ICR Fourier-transform ion cyclotron resonance傅里叶-变换离子回旋加速器共振ICAT isotope-coded affinity tagsIEF isoelectric focusing等电聚焦MALDI matrix-assisted laser desorption ionization基质辅助的激光解析离子化Q-TOF quadrupole-TOFRP reversed phase反向TOF time-of-flight飞行时间简介蛋白质组学的核心组成是系统识别一个细胞或组织中表达的每一个蛋白质,以及确定每个蛋白质的突出特征(比如,丰度、修饰状态以及在多蛋白质复合体中的复杂状态)。这些分析的技术包括分离蛋白质和肽的分离科学、识别和定量分析物的分析科学和数据管理和分析的生物信息学。它的初步工具包括使用IEF(等电点聚焦)/SDS-PAGE凝胶的高分辨率的双向凝胶电泳(2DE),结合质谱和数据库搜索来分离、识别和定量在一个复合样本中存在的个体蛋白质,最终识别被分离的蛋白质。一个常用的方法用在Fig1中用图解说明。此技术以及由此而来的变化(综述见[1])已经被用来识别和分类在复杂样本中存在的大量蛋白质,并在蛋白质组数据库中呈现它们,该过程我们这里称之为"描述蛋白质组学"比如,Shevchenko等[2]从2D凝胶上系统地鉴定了150个蛋白质。数目庞大的这样的数据库现在可以找到。同样的技术现在已经被作为普遍的发现工具来动态检测一个细胞或组织对外来或内部干扰反应而在蛋白质组中的改变。因为检测动态改变需要精确定量每个被检测成分,我们使用"定量蛋白质组学"来定义。在此报告中,我们总结了自1999年1月至2000年4月来报道的与蛋白质组学和质谱相关的最重要的进展。在核心质谱技术中的进展已经导致2DE为基础的蛋白质组学技术的进一步改进。它们同时又促进了传统凝胶为基础的方法的替代方法,诸如引入以同位素稀释理论为基础的精确蛋白质定量技术和蛋白质复合物的系统分析。蛋白质组分析的MS技术进展在此部分,我们总结了在MS设备、它们的控制和操作中的进展,以及比较质谱数据和序列数据库识别蛋白质所用的搜索工具的进展。随着新型质谱仪的引入,蛋白质组学研究现存类型的质谱仪性能已经显著改进了。在此综述期间最普遍使用的仪器是可以分为两类:单一阶段的质谱仪和串联质谱为基础的系统。单一阶段的质谱仪,最显著的是基质辅助的激光解吸电离(MALDI)飞行时间(TOF)仪器,被用于无数通过肽质谱图谱技术大规模蛋白质识别的项目中。此方法在鉴别表达自小一些的和完全测序的基因组的蛋白质特别成功[3,4]。串联质谱仪器诸如triple quadrpole、离子捕获(ion-trap)和近来引进的混合quadrupole飞行时间(Q-TOF)被常规应用于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS或用电喷雾电离(ESI)来生成肽片段离子谱,以便通过搜寻序列数据库进行蛋白质鉴定。使用仪器控制程序来自动选择肽离子进行碰撞诱导的解离(CID)(数据依赖CID)的不断增多是这些MS/MS仪器的一个明显的趋势。一些新的构造的具有高潜能的质谱仪被引入到蛋白质组学研究中产生深刻影响。两个研究组近来一个MALDI离子源和一个混合Q-TOF耦联了起来[5,6]。Q-TOF提供的质量准确性和敏感性提升了数据库搜寻结果并同时使它成为MS/MS从头测序的当然仪器选择。MALDI Q-TOF构造提供了激动人心的机会进行自动化和高通量应用以及在一个样品盘上存档样品进行日后研究的可能。Medzihradszky等[7]描述了一个不同的混合仪器称之为MALDI TOF TOF。此设备享有许多MALDI Q-TOF的优点,另外能够进行高能量CID和非常快速的扫描速率。傅里叶-变换离子回旋加速器共振(FT-ICR)质谱对于蛋白质组学来说相对陌生。这些设备具有非常高的敏感性和分辨率,质量精确性可以达到1ppm。这些特征被用来在一次分析中测量和定量几百种蛋白质的完整的分子质量[8]。Goodlett等[9]表明FT-MS测量的一个肽的准确质量以及可以容易获得的限制因素能够通过序列数据库搜索被用来识别蛋白质。蛋白质组学如果没有软件工具来进行质谱数据和序列数据库的关联将变得几无可能。现存的数据库搜索程序已经变得越来越成熟和可以(从网络)可获得。另外,引入了新的算法。主要相关程序是Sequest[10],MASCOT[11],PeptedeSearch[12],PROWL[13]和Protein Prospector[14]。在它们中间,Sequest使用CID谱设置了蛋白质识别的实验室标准(benchmark),因为它与边界MS/MS数据工作得最好,并高度可信,可以从整个[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]LC-MS[/color][/url]/MS实验中自动分析数据,并不需要任何使用者的破译工作。在所提的程序中,然而,只有Sequest不能在网络上搜索。MASCOT是一个新的、快速、网络可进入和多功能的程序,具有进行肽指纹分析、用部分破译或未破译的CID谱进行数据库搜索的功能。
求购 质谱分析的蛋白标准品,MALDI-TOF-MS上用的。 分子量在400--30000da 的或者接近这个质量范围的,如有请联系我。直接给我这个留言就可以,谢谢!
以下不同时段做的粗蛋白数据,大家认为如何计算平均值,样品中有异常数据吗?这是处于边缘数据,在不合格与合格之间,所以要求很慎重些,但又不知道如何让检测数据更加准确?http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2011/05/201105231027_295650_1641058_3.jpg
本期专家访谈Ben C Collins教授给我们讲述DIA方法的开发和应用,以及对蛋白质组学领域未来发展的看法。[align=center][img=11.png]https://img1.17img.cn/17img/images/202403/uepic/2746ed7e-17c9-4976-9771-4e0640377366.jpg[/img][/align][align=center] Ben C Collins[/align] 英国贝尔法斯特女王大学生物科学学院教授 主要从事定量蛋白质组学研究,研究方向主要集中在三个方面:数据非依赖采集的质谱方法(DIA)开发和应用;蛋白质相互作用网络和蛋白质复合物分析中的方法开发和应用;在宿主-病原体生物学、先天免疫、癌症生物学和药物发现中的应用。 [color=#0070c0][b]DIA的优势是什么,还有哪些问题亟待解决?[/b][/color] 在早期阶段,DIA获得认可面临的挑战之一是软件工作流程的复杂性。幸运的是,随着时间的推移,这一挑战已基本得到解决,DIA 数据分析也变得更加容易。数据采集过程本身变得更加简单,现在的方法也可以得到令人印象深刻的结果。特别是随着仪器的进步和新的分析采集方法的出现,许多基本问题已经得到解决。目前的重点应该是展示DIA的实际应用和优势,这包括进行广泛的基准测试和成功的示例展示。虽然持续的技术发展很有价值,但最紧迫的任务是有效利用现有技术。因此,应高度重视DIA技术的推广应用。DIA 最显著的优势是其已证明的有效性,它已被证明是一种可靠且稳健的蛋白质组学研究方法。在我目前的工作中,我对DIA在规模化蛋白质相互作用研究和化学蛋白质组学中的应用特别感兴趣,并启动了与参与药物发现的制药公司的合作。过去,这些公司在蛋白质组学方面投入了大量资金,但技术还不够先进,无法满足他们的需求。然而,我们现在正处于 DIA 可以为药物发现提供有价值线索的阶段。我们与这些行业合作很有前景,因为可以帮助他们识别有用的化合物、进行筛选并做出明智的决策。这是 DIA 如何为药物发现和其他领域的实际应用做出贡献的一个很好例子。 [b][color=#0070c0]您如何看待蛋白质组学领域学术界与工业界的关系?[/color][/b] 在考察蛋白质组学领域学术界和工业界的关系时,有必要分别考虑供应商和制药公司。从供应商看,我必须说学术研究人员和供应商之间的合作非常成功,双方都需要彼此的专业知识。我们一直与各种供应商合作,开发方法和应用的学术研究人员与开发仪器的供应商之间的协同作用是显而易见的。但与医药行业的关系却有些不同。近年来,药物发现领域发生了转变,开始认识到蛋白质组学可以为其工作带来价值。这种认识的转变在为制药公司提供服务的合同研究组织 (CRO) 数量不断增加中得到体现。这些 CRO 正在扩大并展示其对制药行业的作用。此外,有一种趋势是基于蛋白质组学技术建立药物研发公司。此类公司从风投获得大量资金的例子有很多。这些公司认为,他们独特的蛋白质组学技术可以显著帮助确定化合物的优先级、进行化合物筛选以及推进药物开发的各个阶段。这一趋势表明蛋白质组学技术在行业中变得越来越有价值。然而,在促进学术机构和制药公司之间的关系方面还有改进的空间。例如制药专业人士较少参与会议上的演讲报告。我们这样的组织提供了弥合鸿沟的机会,召开化学工程、蛋白质组学和药物发现领域的研讨会和活动等举措有助于提高知名度,加强学术界和制药界之间的联系。这种积极主动的方法可以进一步推动蛋白质组学技术与药物发现过程的整合。 [b][color=#0070c0]应该如何看待 AlphaFold 和 ChatGPT 等人工智能工具?蛋白质组学和人工智能如何共同激发更大的进步?[/color][/b] 从根本上讲,人工智能已经在质谱数据处理、信号预测、物理化学性质预测和分类任务等任务中展示了其实用性,这些应用已经显示出巨大的前景,并且已经为蛋白质组学领域做出了贡献。这种趋势可能会持续并扩大,进一步增强我们的数据分析和解释能力。然而,当涉及到揭示生物学机制等更复杂的问题时,人工智能的应用仍然是一个悬而未决的问题。例如,AlphaFold 在预测蛋白质结构方面的成功是一项重大成就,但将人工智能模型应用于深入理解生物学机制是一项更具挑战性的工作。一个关键挑战在于人工智能模型的“可理解性”。无论是在生物学还是在一般的人工智能应用中,了解人工智能系统如何得出结论和预测都是至关重要的。“可理解的智能”一词强调了这种需求。能够解释人工智能生成的见解背后的推理非常重要,尤其是在涉及复杂的生物系统时。从本质上讲,人工智能在蛋白质组学和生物学中具有多个层面的适用性。它已经在数据驱动的任务中证明了自己的价值,并且可能进一步扩展到预测药物敏感性或进行生物学预测等领域。然而,从人工智能模型中获得机械理解和真正的生物学见解是一项更具挑战性的工作。它需要解决与模型透明度和可解释性相关的问题。随着我们的前进,科学界应该将人工智能视为一种强大的工具,并共同努力,利用其潜力获得更深入的生物学见解。尽管还有一些挑战需要克服,但人工智能有能力在未来几十年内推动蛋白质组学和生物学的重大进步。 [b][color=#0070c0] 您认为全球蛋白质组学研究人员应该如何合作实现“π-HuB”计划的目标?[/color][/b] “π-HuB”计划无疑是一项具有全球影响力的开创性举措,科学界也渴望共同努力,为该项目做出积极的贡献。目前,该项目还处在讨论制定具体的合作机制和形式阶段。为了推进这种合作,科学家必须与政策制定者和政府联络沟通以获得必要的支持和资源。“π-HuB”计划国际合作将通过持续的讨论和规划继续完善。从本质上讲,虽然具体的合作结构尚未完全确定,但中国和国际科学界的共同承诺,使实现“π-HuB” 计划宏伟目标变得更有希望。 [b][color=#0070c0]您对蛋白质组学领域未来5-10年的发展有何预测?[/color][/b] 预测科学的未来总是充满挑战,但我可以对未来 5-10 年蛋白质组学领域的潜在发展提供一些见解。令人感兴趣的领域之一是基于质谱的方法和非质谱方法之间的平衡。我们正在见证基于亲和力的方法、纳米孔测序和单分子方法等技术的进步。关于哪种方法进展更快并有可能主导该领域的争论仍在继续。然而,重要的是不要教条地选择自己喜欢的方法,而是让数据来决定。在未来 5-7 年中,质谱分析可能会继续占据主导地位,但除此之外,其他方法也可能会占据主导地位,每项新技术都应根据其优点和缺点进行评估。另一个有进步空间的领域是研究蛋白质复合物和翻译后修饰的无偏性方法。目前,这方面的大规模检测方法还比较有限,需要进行创新。此外,蛋白质组学还有更广泛应用的潜力,特别是在药物发现和开发方面。在这方面,蛋白质组学可以成为宝贵的资源,并且其应用还有显著增长的空间。[b]制药行业越来越认识到蛋白质组学在决策过程中的效用。在临床应用方面,蛋白质组学在发现工作方面具有巨大的潜力。[/b]然而,关于是否在临床环境中使用质谱或选择其他平台的争论仍将继续。这两种方法都应该探索,并根据实用性和有效性选择最合适的一种,常规且简单的技术可能更适合临床检测。值得注意的是,长期以来人们一直希望将高分辨率质谱技术整合到临床环境中。虽然这一目标过去设定为 10 年,但事实证明实现这一目标具有挑战性。供应商和研究人员一直在努力实现这一目标,但在临床实践中广泛采用的时间表仍不确定。总之,蛋白质组学领域是动态且不断发展的。未来 5-10 年,技术、应用领域和方法可能会取得进步, 灵活性、数据驱动的决策和创新对于塑造蛋白质组学研究的未来至关重要。[来源:π-HuB][align=right]标签: [/align]
[b]职位名称:[/b]精准医疗多组学研究中心质谱工程师[b]职位描述/要求:[/b] 工作职责:1)蛋白组学或代谢组学研发及相应技术服务项目的实验方案设计;2)蛋白组学或代谢组学样品制备与质谱分析;3)质谱检测数据的处理与分析;4)撰写实验报告、操作规程;5)质谱液相的日常维护和中心其他工作。 招聘要求:1)具有丰富的高分辨质谱,三重四极杆质谱,HPLC色谱,及其联用的组学实验仪器操作经验;2)熟练组学数据分析,及数据库构建和维护的能力;3)具有多组学研究经历者优先考虑;4)具有化学,生物化学,分子生物学,代谢组学,药物,生物工程,医学检验,生命科学以及相关专业硕士或博士学位;5)具有非常主动和独立的工作能力,责任心强,善于沟通,具有团队合作精神。[b]公司介绍:[/b] 北京大学医学部精准医疗多组学研究中心,在“双一流”的支持下,正式成立于2018年6月,为北京大学医学部直属二级单位。黄超兰教授担任中心主任。中心的发展战略基于临床医学热点和难点问题,通过临床医学,创新技术和基础学科的交叉,开展协同创新研究和研发,攻克医学重大难题。中心是集研发、学术交流、科技成果转化等为一体的研究中心,目标成为国内乃至国际领先的精准医疗研究组织。在“健康中国”的国策之下,中心以重要...[url=https://www.instrument.com.cn/job/user/job/position/57405]查看全部[/url]
[size=16px][color=#ff0000][b][url=https://www.instrument.com.cn/job/position-92510.html]立即投递该职位[/url][/b][/color][/size][b]职位名称:[/b]蛋白或代谢组学分析-长春市[b]职位描述/要求:[/b]招聘部门:长春中医药大学公共实验中心编制类型:实验系列薪资待遇:正常事业单位待遇岗位职责:1、完成蛋白组学、代谢组学或者中药小分子分析相关实验;2、根据需要进行测试服务或技术辅导。3、部门安排的其他工作。任职条件:1、博士学历,化学、分析化学、生物、药学及相关专业;2、有组学研究相关工作经验者优先;3、专业理论基础扎实,熟悉质谱测试原理、技术,做事认真负责,有条理,善于思考;4、有良好的英文阅读及写作能力,能够主动解决实验中的相关问题;5、有较好的团队协作能力,及良好的沟通能力。联系人:杨老师,yanghm0327@sina.cn[b]公司介绍:[/b] 为更精准的帮用户选择高校,科研院所相关就业机会,特发布此职位专区,便于求职者第一时间锁定优质的就业机会。...[url=https://www.instrument.com.cn/job/position-92510.html]查看全部[/url][align=center][img=,178,176]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108160948175602_3528_5026484_3.png!w178x176.jpg[/img][/align][align=center]扫描二维码,关注[b][color=#ff0000]“仪职派”[/color][/b]公众号[/align][align=center][b]即可获取高薪职位[/b][/align]
自80年代以来一系列新的软电离技术如快原子轰击电离 、基质辅助激光解吸电离 、电喷雾电离等发现后,生物质谱技术迅速发展,已成为现代科学研究前沿的热点之一。而其中又以基质辅助激光解吸质谱(MALD I2MS)和电喷雾电离质谱(ESI2MS)应用最为广泛。基质辅助激光解吸质谱灵敏度高、可操作性强且对生物样品中的无机盐和缓冲溶液具有较好包容性;电喷雾电离质谱选择性好、分析质量范围宽、样品消耗量小、易于与各种色谱联用。在生物样品的处理中常常需要用到非挥发性的盐,用于为细胞营造无毒的环境,稳定溶剂化的样品及维持酶的活性等。此外,许多用于分离生物分子的分离方法也需要高浓度的盐和缓冲溶液 。但是,样品处理及分离过程中所用的NaCl、十二烷基磺酸钠、盐酸胍、尿素、甘油、二甲基亚砜等都会影响后续质谱高灵敏的分析 。因为这些不挥发的低分子量污染物会导致复杂加合物的形成,增加噪音及造成明显的信号抑制 。此外,在复杂的组织或细胞蛋白质组中,与疾病和信号传导相关的蛋白质往往是属于低丰度的蛋白质,这些重要的蛋白质由于本身存在的量极少而很难得以有效鉴定 。因此,对蛋白质/多肽样品的预富集处理将是MALD I2MS或ESI2MS得到高质量质谱图的前提,也是成功鉴定蛋白质的关键。该文献主要侧重于相关工作的概述。