色谱条件进行保护柱

我正在使用一根手性色谱柱oc柱，在使用过程中其寿命很短，问：怎样对其组进行保护？特谢！[em06]

进行样品分析。进行分析条件摸索时，各色谱柱条件应在什么范围在设置。如进样量。柱流量，线速度，压力控制等有没有什么范围下设置对仪器无太大的影响。还有一个问题是不是不同的色谱柱柱流量，线速度，总流量的对应的比例关系不同。柱温提高是不是也会影响流量。

[b]如何进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]柱分析条件的选择？[/b]柱温的选择　　柱温是影响分析时间和分离度的重要因素。选择柱温的依据是样品的沸点范围，固定液的配比，允许使用温度，以及检测器的灵敏度。　　柱温主要影响分配系数、容量因子以及组分在流动相和固定相中的扩散系数，从而影响分离度和分析时间。选择温柱的原则，一般是在使难分离物质对达到要求的分离度条件下，尽可能采用低温柱，其优点是可以增加固定相的选择性，降低组分在流动相中的纵向扩散，提高柱效，减少固定液的流失、延长柱寿命和降低检测器的本底。　　提高柱温可以使保留时间减少，加快分析速度，使样品中组分完全流出，但是分离效果不好。降低柱温，样品有较大的分配系数，选择性高，有利于分离。但温度过低，容易引起峰形拖尾或前伸，并且分析时间长。可根据固定液的使用温度极限和样品组分沸点调节柱温。　　对于高沸点混合物，在保证分离完全的前提下，尽量降低柱温。可在低于分析物沸点180℃～200℃的柱温下进行分析；对沸点不太高(200～300℃)的样品，柱温可选100℃以下；对于气体、气态烃等低沸点混合物，一般选择室温或50℃以下进行分析。对于宽沸程样品，需采用程序升温法进行分离，即柱温按预先设定的程序随时间成线性或非线性增加，从而获得最佳的分离效果。　　载气的选择　　一般说来，痕量分析或毛细管色谱的载气纯化程度，要高于常规分析。特别是电子捕获、热导池检测器，载气纯度直接影响灵敏度和稳定性，一定要严格净化。　　根据分析对象，对于色谱柱的类型，操作仪器的档次和具体检测器，若使用不合要求的低纯度气体，不良影响有以下几种可能：　　a.样品失真或消失：如H2O气使氯硅样品水解；　　b.色谱柱失效：H2O，CO2使分子筛柱失去活性，H2O气使聚脂类固定液分解，O2使PEG固定液断链；　　c.有时某些气体杂质和固定[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p][color=#3333ff]液相[/color][/url]互作用而产生假峰；　　d.对柱保留特性的影响：如H2O 对聚乙二醇等亲水性固定液的保留指数会有所增加，载气中氧含量过高时，无论是极性或是非极性固定液柱的保留特性，都会产生变化，使用时间越长影响越大；　　e.检测器：TCD：信噪比减小，无法调零，线性变窄，文献中的校正因子不能使用，氧含量过大，使元件在高温时加速老化，减少寿命；FID：特别是在Dt≤1×10-11/S下操作时，CH4等有机杂质会使基流激增，噪声加大不能进行微量分析；　　f.在做程序升温操作时，载气中的某些杂质，在低温时保留在色谱柱中，当柱温升高时不但引起基线漂移，还可能在谱图上出现比较宽的“假峰”；　　g.仪器影响：各类过滤器加速失效；调节阀(稳压阀，稳流阀，针形阀) 被污染，气阻堵塞，调节精度降低或失灵；气路系统被污染，若要恢复仪器在高灵敏度情况下操作，有时要吹洗很长时间(可能一周以上), 污染严重时有时再也无法恢复；对于FID，水蒸气会影响分析结果，直至影响检测器的寿命；对ECD和TCD的寿命最明显，这点应引起用户特别注意。　　载气的压力和流速　　载气压力对柱效率有直接的影响。如提高柱内压力，有助于提高柱效率。但只提高入口压力，使流速加大且压降太大时，反而会降低柱效率，因此也必须提高出口压力。一般采用在柱后加装适当气阻的方法来解决这一问题。　　载气流速主要影响分离效率和分析时间。为获得高柱效，应选用最佳流速，但所需分析时间较长。为缩短分析时间，一般选择载气速度要高于最佳流速，此时柱效虽稍有下降，却节省了很多分析的时间。常用的载气速度流速为20～80mL/min。　　对于FID 或FPD 检测器，氢气和空气的比例是影响分离度和灵敏度的重要因素，只有反复试验，才能确定最适合的比例。对于填充柱色谱柱，载气流入方向要尽量与色谱柱内固定相装填方向一致，以减小压差，提高效率。　　进样量的选择　　进样量的多少直接影响谱带的初始宽度。因此，只要检测器的灵敏度足够高，进样量越少，越有利于得到良好的分离。一般情况下，柱越长，管径越粗，组分的容量因子越大，则允许的进样量越多。一般气体进样量在1～10mL，液体进样量在0.5～10μL 之间，可取得较好的分析效果。此外，进样速度要快，进样时间要短，以减少纵向扩散，有利于提高柱效。　　气化温度的选择　　气化温度取决于样品的挥发性、沸点范围及进样量等因素。气化温度选择不当，会使柱效下降。通常气化室的温度选择为样品沸点或高于沸点，以保证样品能瞬间气化；但不要超过沸点50℃以上，以防止样品分解。　　对于一般的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]分析，气化温度比柱温高10～50℃即可。但对于某些高沸点组分或热稳定性差的组分，在其沸点左右分析会产生分解现象。此时应采取的措施是减少进样量，采用高灵敏度检测器，气化室温度的选择应低于其沸点100～200℃。　　从以上介绍的选择原则可以看出，各种条件往往同时影响色谱柱的选择性和效率，它们之间既密切联系又互相制约。因此在实际分析中，要作综合考虑，灵活地运用这些原则，既要保证良好的选择性，又要保证分离效率，合理地选择最佳色谱分析条件。

[font=宋体][color=#555555][font=宋体]色谱操作条件的选择，常常决定是够能够达到分离的目的，而选择试验条件的主要依据是范氏方程和分离度与各种色谱参数的关系式。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]柱分析条件的选择包括柱温、载气种类和流速等。[/font] [font=宋体] [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体]色谱操作条件的选择，常常决定是够能够达到分离的目的，而选择试验条件的主要依据是范氏方程和分离度与各种色谱参数的关系式。[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]柱分析条件的选择包括柱温、载气种类和流速等。适当的分析条件，可以再较短的时间内完成分析工作，并达到良好的定性定量目的。在日常工作中，如何进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp][color=#3333ff]气相色谱[/color][/url]柱分析条件的选择。[/font] [font=宋体] [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体]1柱温的选择 [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体] 选择柱温的依据是样品的沸点范围，固定液的配比，允许使用温度，以及检测器的灵敏度。 [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体] 柱温选择的原则，一般是在使难分离物质对达到要求的分离度条件下，尽可能采用低温，其优点是可以增加固定相的选择性，降低组分在流动相中的纵向扩散，提高柱效，减少固定液的流失、延长柱寿命和降低检测器的本底。 [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体]2载气的选择[/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体] 一般来说，痕量分析和毛细管色谱的载气纯化程度，要高于常规分析。特别是电子捕获、热导池检测器，载气纯度直接影响灵敏度和稳定性，一定要严格净化。 [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体]3载气的压力和流速 [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体] 提高柱内压力有助于提高柱效率。但只提高入口压力，使流速加大且压降太大时，反而会降低柱效率，因此也必须提高出口压力。一般采用柱加装适当气阻的方法来解决这一问题。 [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体] 为获得高柱效，应选用最佳流速，但所需分析时间较长。为缩短分析时间，一般选择载气速度要高于最佳流速，此时柱效虽稍有下降，却节省了很多分析时间。 [/font][/color][/font][font=宋体][color=#555555][font=宋体] 在实际分析中，要作综合考虑，灵活地运用这些原则，既要保证良好的选择性，又要保证分离效率，合理地选择最佳色谱分析条件。[/font][/color][/font][font=Calibri] [/font]

[font=arial, helvetica, sans-serif]恒谱生色谱柱网站： www.hplcs.cn 色谱柱的保护柱芯怎么换[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　更换色谱柱的保护柱芯大致步骤如下：[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　1. 准备工具和耗材：新的保护柱芯、保护柱焊接器、双面胶带、色谱柱安装工具。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　2. 将色谱柱从系统中取出，拆下保护柱上的金属连接件。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　3. 用保护柱焊接器将固定在色谱柱上的旧保护柱芯剪断。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　4. 将新保护柱芯的两端分别用焊接器连接到金属连接件上。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　5. 在保护柱芯的柱底处涂抹胶带，确保保护柱与色谱柱的紧密连接，防止产生泄漏。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　6. 重新将保护柱安装在色谱柱上，使用专用安装工具将保护柱拧紧。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　7. 接通色谱仪系统，进行测试并校验。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]　　需要注意的是，更换保护柱芯的操作需要十分谨慎，必须保证换芯后的保护柱与色谱柱的连接紧密，且不会产生泄漏。操作前应仔细查看设备说明书，或者请专业技术人员进行操作。[/font][img=空柱管柱筛板5]https://www.hplcs.cn/uploads/4ec892851.jpg[/img]

G使用保护柱和在线过滤器G经常用强溶剂冲洗色谱柱G对脏样品进行预处理，最大限度减少强保留组分和颗粒G按照色谱柱生产商的温度上限指标之下操作色谱柱G在压力上限之下10%使用色谱柱G按标注方向操作色谱柱G询问色谱柱生产商确定色谱柱是否可以反冲

[align=center][b]液相色谱为什么要使用保护柱[/b][/align]一般情况下，大多数色谱柱峰形变差的原因都是色谱柱收到了污染，而保护柱，顾名思义就是保护色谱柱的，使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命，使其可以大于一万次进样，虽然保护柱的使用会增大柱压，延长分析时间，但是保护柱应当被认为是延长色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲。保护柱的填料应该与分析色谱柱保持一致。良好的、优质的保护柱还可以起到改善分析色谱柱的分离效率。我们实验室进行了尝试，所以购买了液相色谱保护柱！

用在线过滤器和保护柱维护色谱柱 http://simg.instrument.com.cn/bbs/images/brow/em09503.gif使用在线过滤器和保护柱维护色谱柱能够有效避免微粒和杂质在色谱柱头的聚集,增加色谱柱寿命,在进样阀和色谱柱之间依次安装在线过滤器和保护柱的效果最好.用在线过滤器维护色谱柱: http://www.101718.com/blog/wp-content/uploads/2011/09/zaixianguolvqi-300x251.jpg进样阀和色谱柱之间的在线过滤器能够有效阻止来自流动相,泵密封圈和样品的微粒.在线过滤器筛板的孔径小于色谱柱入口筛板孔径时效果最好.在线过滤器常用孔径为0.5m,系统压力升高时需要更换在线过滤器.用保护柱维护色谱柱: http://www.101718.com/blog/wp-content/uploads/2011/09/baohuzhu-300x264.jpg保护柱实际上通常是比较短的分析柱,通过吸附可能污染分析柱的强保留杂质达保护色谱柱的目的.保护柱的筛板与在线过滤器一样可以阻挡微粒杂质.为了达到最好的保护效果同时避免导致色谱的改变,最好选用与分析柱相同或相似的填料填充保护柱(如C18分析柱用C18保护柱).保护柱不要选用保留太强的填料,以免使保留整体增加.为了降低保护柱对分离的贡献,可以用比分析柱填料保留弱的填料填充,如用150C18分析柱时,可以选用比表面积较小的300大孔C18填充保护柱.分离明显变差或反压明显升高时需要更换保护柱.用在线过滤器和保护柱维护色谱柱的相同之处：1）两者都有卡套；2）两者所接的位置相同，都是接在色谱柱前面，紧挨着色谱柱；3）两者都有筛板，防止固体颗粒物质到达色谱柱，堵塞色谱柱筛板；用在线过滤器和保护柱维护色谱柱的不同之处：1）在线过滤器只有一个筛板，它的功能比较单一。只能防止固体颗粒物质到达色谱柱。但是它有一些很显著的优点是：i）可以与所有的不同厂家的柱子一起使用；ii）一次性购买长时间使用、甚至永久性使用；2）保护柱的卡套中放置的是保护柱芯，柱芯内含有填料。这些填料的存在可以拦截样品中的一些强保留、强酸性和强碱性物质，防止它们对色谱柱内填料的污染和损坏。因此使用保护柱，可以对色谱柱进行全方位的保护，是保护色谱柱最佳的方式。保护柱的使用有一个缺点就是，填料类型相匹配的要求比较高，通常柱芯的填料需要和色谱柱内的填料相同，如果不同，有可能对分析造成干扰。需要注意的是，保护柱只能对样品中含有的少量的污染物起防护作用，对流动相中pH的超标等并不能够起到很好的保护作用，因为流动相的用量太大了，保护柱不能完全阻止污染物到达色谱柱，超过了它的保护限度。

各位朋友，我现在想用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]对大豆浸油中挥发到空气中的正己烷进行定量测定，但是没做过不太知道需要什么色谱条件（如柱子要求，柱温，进样室温度，检测器最佳温度等等）和实验条件。请大家帮忙。[em61]

请问色谱柱的保护柱和在线过滤器有什么异同吗？提起液相色谱的保护柱和在线过滤器，很多人会很困惑，它们长得好像呀，是不是一种东西吗？有什么区别呢？[b]1、保护柱[/b]液相色谱的保护柱，顾名思义是用来过滤样品和流动相中的杂质，保护色谱柱，延长色谱柱的使用寿命的。它的安装位置通常在进样器之后，色谱柱前端。保护柱在选择时分为两种：一种是[b]独立式卡套保护柱[/b]。卡套内放有柱芯，柱芯内含有填料，柱芯可以更换，而柱芯是根据色谱柱的类型来选择的。目前[b]Kromasil的保护柱采用的就是这种模式。[/b]另一种是一体化卡套保护柱。这是一种特殊的色谱分析柱构造，色谱柱前端是一体化的，可以直接打开保护柱卡套。这种保护柱带来的死体积较小，但是分析柱选择时的成本较普通分析柱更高。值得注意的是，保护柱的柱芯除了需要根据色谱柱的类型进行选择，在[b]第一次使用时是没有方向的，但初次使用后就有了方向[/b]，不能再调换方向使用。这个问题也困惑过我！[b]2、在线过滤器[/b]而在线过滤器是用来过滤流动相中的杂质和固体颗粒，用来保护液相系统的。它通常被安装在[b]泵后端，自动进样器的前端[/b]。虽然也是卡套式，但是它的过滤芯只是一个筛板，和色谱柱的类型无关。在实际使用时，由于[b]在线过滤器的安装位置和过滤芯只是一块筛板[/b]，它仅仅只能用来过滤流动相中的杂质。而保护柱因为具有和分析柱一样的填料，所以它不仅可以过滤流动相和样品中的杂质，更可以拦截样品中的一些强保留、强酸性和强碱性物质，防止它们对色谱柱内填料的污染和损坏。另外，由于保护柱和在线过滤器的安装都是为了降低仪器的维护成本。所以当系统出现[b]压力变高、杂质峰、色谱峰拖尾、或者色谱柱的分离效果[/b]等问题时，建议直接更换保护柱或者在线过滤器的筛板。本文来源于公众号《色谱学堂》，作者对部分内容进行了部分修改

[font=宋体]发帖人：[/font]v3240303[font=宋体]链接：[/font][url]https://bbs.instrument.com.cn/topic/7319468_1[/url][b][font=宋体]问题描述：[/font][/b][font=宋体][url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]柱是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱仪[/url]的核心部件之一。有机磷农药多用中等极性色谱柱来进行分离，但是柱子用一段时间后，会有一定污染，而柱子的失效是不可逆的，所以需要对色谱柱进行保护，那么保护色谱柱的小妙招是什么？[/font]

问下大家在色谱柱的使用时，都有保护柱么？保护柱对于增长色谱柱的使用寿命究竟能起多大的作用？保护柱的选择应注意哪些事项呢？大家都讨论一下

通常，一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好，但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多，而有些因素是操作者很难控制的，如果被分析的样品（如分析生物样品），怎么净化样品也是“脏”的，好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后，在多数情况下总能够人为地减少柱上故障，达到延长柱寿命的目的。 1．加流路过滤器和保护柱 流路过滤器紧靠进样阀后面，位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中，挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差，样品量少过滤更困难，因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱，放在流路过滤器和分析柱之间，或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积，用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当，对分离无影响，好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长，内径2～3mm，用较大粒度的填粒（15～20μm）干法填装，会使分析柱的效能有所降低。 2．避免高压冲击 一般色谱柱都能经得起高压，但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击，主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快，柱切换操作等。等面已讨论过，转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高，在阀的柱侧压力降低（变化超过20%）。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常，手动进样阀的变化不大，自动进样阀比较慢，可能造成压力冲击，可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快，可分步操作。如用3ml/min流速，先从1mL/min到2mL/min，然后再3ml/min，每个间隔应大于20s。 柱切换技术的应用也很广泛，切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化，会很快使柱报废。 3．分离条件 多数色谱柱有很宽的试验条件范围，但具体应用又受到限制，主要是pH值、柱温和流动相的选择。 硅胶为基质的键合相要求pH在2.5～7之间，极端pH的流动相能“溶解”硅胶，使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相，可加预柱（饱和柱）。预柱装在泵和进样阀之间，用分析柱相同的填料填装，或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高，用价格低的一般硅胶疏松地填装，按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡，保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器，以防止硅胶微粒引起的麻烦。 以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后，会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，会使N值降低50%。 有些流动相中的溶剂不能用于某些柱，如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面，有些柱与某些溶剂（如四氢呋喃）一旦达到平衡，不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料，可以参见有关资料。 水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中，同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。 4．净化样品 用溶剂溶解的样品，多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来，不会造成危害。 有些样品可能含有微粒物质，样品中的某种组分（如蛋白质）在柱头上沉积下来，组分在固定相上保留很强，溶剂带走柱填料，等等，这些都会造成柱效能下降或柱寿命的影响，有必要采取措施防止柱变坏。 如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色，进样前必须要过滤。虽然流路上装有过滤器和保护柱，但不能代替样品的前处理，样品中过多的微粒会使过滤器和保护柱超载，很快阻塞，或者微粒进入分析柱，所以在进样前必须过滤样品。 若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞，应先试验一下，看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小，表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件，包括换样品溶剂和流动相；或处理样品去掉不溶物质。应尽量用小体积的样品。 有些样品能很强地吸附在柱填料上，这样会降低塔板数，改变样品的保留时间、峰形，并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外，还要加保护柱，定期清洗色谱柱。有时因为疏忽，用对柱有害的溶剂溶解样品，比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品，这样的样品只要进50～100μL到硅胶基质柱中，硅胶就很快溶解而使柱报废。在这种情况下，应立即中和样品，或除去原溶剂中的有害成分。 5．用强溶剂定期冲洗柱 每次工作结束，用强溶剂冲洗柱是良好的习惯。可用甲醇、乙腈冲反相柱，冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇/水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。 柱头的烧结不锈钢滤片，要求平整，死体积小，孔径适当（2～5μm）。过滤片选择不好会改变色谱峰形，增加阻力或起不到阻挡污染物的作用（填料很快变色）。 此外，对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点：1、 接头要配套，用同一厂商的组接件；2 、接头之间、柱压帽螺母与密封卡磁之间无微粒（填料），否则收紧时容易咬死；3 、密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动，所以拆开柱头再上紧时要小心，不能使卡套移动，原来柱端的不锈钢滤片和垫片的厚度和强度也不能改变（改变这些附件的性能就促使卡套移动）；4 、接头等组接件不要拧得过紧，适当上紧后接上泵试验，分步拧紧，直到不漏为止。还有非常重要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。

[align=center]色谱柱与保护柱式如何连接的？[/align]今天我要做山梨酸的测量审核，早些日子买了kromasil的色谱柱和保护柱，今天就派上用场了！色谱柱和保护柱如何连接啊？这个是摆在我面前的一个大问题。在配件盒里，我找到一个陀螺式的peek连接，但是在peek连接处有一根小黑管，我以为这根小黑管没任何用处，打算扔掉，本着认真的态度，我给经销商打了电话，很快对方给了我回复。对方给我的答复是，[b]这根小黑管叫脉管，如果没有这根脉管，保护柱和色谱柱两头的死体积就非常大了。不同品牌的色谱柱和保护柱不能混用，很大程度上就是因为这根脉管的长度不一样。[/b]然后我开始装保护柱，保护柱没有正反之分，但是套管的一头有螺丝，一头没有螺丝，到底那头向外？后来我仔细分析了一下，螺口应该朝外，这样便于拧紧。第一次使用保护柱，虽然闹出了不少笑话，却也学到不少东西。另外保护柱套管一定要拧紧，这样可以避免漏液！至于PEEK管，只要拧好就行，塑料有张力，松紧合适效果最好！今天实验紧张，图随后再附！

通常，一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好，但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多，而有些因素是操作者很难控制的，如果被分析的样品（如分析生物样品），怎么净化样品也是“脏”的，好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后，在多数情况下总能够人为地减少柱上故障，达到延长柱寿命的目的。 1．加流路过滤器和保护柱 流路过滤器紧靠进样阀后面，位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中，挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差，样品量少过滤更困难，因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱，放在流路过滤器和分析柱之间，或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积，用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当，对分离无影响，好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长，内径2～3mm，用较大粒度的填粒（15～20μm）干法填装，会使分析柱的效能有所降低。 2．避免高压冲击 一般色谱柱都能经得起高压，但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击，主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快，柱切换操作等。等面已讨论过，转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高，在阀的柱侧压力降低（变化超过20%）。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常，手动进样阀的变化不大，自动进样阀比较慢，可能造成压力冲击，可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快，可分步操作。如用3ml/min流速，先从1mL/min到2mL/min，然后再3ml/min，每个间隔应大于20s。 柱切换技术的应用也很广泛，切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化，会很快使柱报废。 3．分离条件 多数色谱柱有很宽的试验条件范围，但具体应用又受到限制，主要是pH值、柱温和流动相的选择。 硅胶为基质的键合相要求pH在2.5～7之间，极端pH的流动相能“溶解”硅胶，使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相，可加预柱（饱和柱）。预柱装在泵和进样阀之间，用分析柱相同的填料填装，或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高，用价格低的一般硅胶疏松地填装，按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡，保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器，以防止硅胶微粒引起的麻烦。 以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后，会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，会使N值降低50%。 有些流动相中的溶剂不能用于某些柱，如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面，有些柱与某些溶剂（如四氢呋喃）一旦达到平衡，不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料，可以参见有关资料。 水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中，同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。 4．净化样品 用溶剂溶解的样品，多数组分在一定的时间内能完全从柱中流出来，不会造成危害。 有些样品可能含有微粒物质，样品中的某种组分（如蛋白质）在柱头上沉积下来，组分在固定相上保留很强，溶剂带走柱填料，等等，这些都会造成柱效能下降或柱寿命的影响，有必要采取措施防止柱变坏。 如在光线照射下观察样品是浑浊的或带有乳白色，进样前必须要过滤。虽然流路上装有过滤器和保护柱，但不能代替样品的前处理，样品中过多的微粒会使过滤器和保护柱超载，很快阻塞，或者微粒进入分析柱，所以在进样前必须过滤样品。 若怀疑样品与流动相混合有沉淀而对色谱柱有阻塞，应先试验一下，看样品溶液加入流动相中有无变浑或乳白色出现。如果进样后压力突然增加而后又慢慢减小，表明样品中有微粒或发生沉淀。如有沉淀要设法改变分离条件，包括换样品溶剂和流动相；或处理样品去掉不溶物质。应尽量用小体积的样品。 有些样品能很强地吸附在柱填料上，这样会降低塔板数，改变样品的保留时间、峰形，并且使得基线变差。除了用预处理的方法除去强保留物质外，还要加保护柱，定期清洗色谱柱。有时因为疏忽，用对柱有害的溶剂溶解样品，比如用6mol/L的氢氧化钠溶解样品，这样的样品只要进50～100μL到硅胶基质柱中，硅胶就很快溶解而使柱报废。在这种情况下，应立即中和样品，或除去原溶剂中的有害成分。 5．用强溶剂定期冲洗柱 每次工作结束，用强溶剂冲洗柱是良好的习惯。可用甲醇、乙腈冲反相柱，冲去留在柱上的强吸附组分。用甲醇/水为流动相时也应冲洗。冲洗的程序在以下章节中介绍。 柱头的烧结不锈钢滤片，要求平整，死体积小，孔径适当（2～5μm）。过滤片选择不好会改变色谱峰形，增加阻力或起不到阻挡污染物的作用（填料很快变色）。 此外，对柱硬件的保养也不可忽视。实际操作中应注意以下几点：1、 接头要配套，用同一厂商的组接件；2 、接头之间、柱压帽螺母与密封卡磁之间无微粒（填料），否则收紧时容易咬死；3 、密封卡套与柱管一次性卡紧后再也不能松动，所以拆开柱头再上紧时要小心，不能使卡套移动，原来柱端的不锈钢滤片和垫片的厚度和强度也不能改变（改变这些附件的性能就促使卡套移动）；4 、接头等组接件不要拧得过紧，适当上紧后接上泵试验，分步拧紧，直到不漏为止。还有非常重要的是柱硬件的损坏往往会造成不可挽回的损失。

[font=arial, helvetica, sans-serif]色谱柱保护柱采购联系：www.hplcs.cn色谱柱的保护柱，也叫前柱或者预柱，是放置在主要分离柱之前的一段小柱子。它的主要作用是防止主色谱柱被样品中的杂质污染和损坏，从而延长主柱的使用寿命，并保证分离结果的准确性。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]具体来说，保护柱的作用包括：[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]1.防止样品中的杂质进入主色谱柱，降低主色谱柱表面的污染程度。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]2.保护主色谱柱不受样品热稳定性不良、pH值变化、盐度变化等因素影响，延长主柱的使用寿命。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]3.可以固定一些离子，如Na+、Ag+、Cu2+、Fe3+等，为有机反应提供催化作用，提高分离效果。[/font][font=arial, helvetica, sans-serif]总之，保护柱在色谱分析中是非常重要的辅助工具，它可以提高分离准确性，延长主色谱柱使用寿命，提高方法的可靠性。欢迎咨询恒谱生网站客服购买。[/font][img=空柱管柱筛板5]https://www.hplcs.cn/uploads/4ec892851.jpg[/img]

气相色谱操作条件的选择，常常决定是否能够达到分离的目的，而选择试验条件的主要依据是范氏方程和分离度与各种色谱参数的关系式。气相色谱柱分析条件的选择主要包括柱温、载气种类和流速等的选择。适当的分析条件，可以在较短的时间内完成分析工作，并达到良好的定性定量目的。在日常工作中，如何进行色谱柱分析条件的选择呢？

我们的仪器是盛瀚的CIC-D100，前段时间不知道从哪搞来了一根全新的赛默飞AS23色谱柱。正好原来的色谱柱SH-AC-3有点故障，分离度不好了。就想起来了这根AS23色谱柱，但是没有配套的保护柱。那么盛瀚的保护柱能不能，敢不敢给这个色谱柱用呢？

通常，一根色谱柱在分析数千个样品之后性能仍然保持良好，但也有的柱仅分析不多的样品后几乎就报废了。影响柱寿命和其它问题的因素很多，而有些因素是操作者很难控制的，如果被分析的样品（如分析生物样品），怎么净化样品也是“脏”的，好于色谱柱的影响是非常大的。然而采取下列措施后，在多数情况下总能够人为地减少柱上故障，达到延长柱寿命的目的。 1．加流路过滤器和保护柱 流路过滤器紧靠进样阀后面，位于分析柱前。0.5μm烧结不锈钢片夹在死体积很小的套子中，挡住来源于样品和进样阀垫圈的微粒入柱。因为每个样品都过滤既费事又带来误差，样品量少过滤更困难，因此流路上装过滤器是比较省事的办法。也可以在流路加上保护柱，放在流路过滤器和分析柱之间，或者代替流路过滤器。保护柱的使命是收集阻塞柱进口的来自样品的化学“垃圾”。这程垃圾最终隐藏低柱效能。保护柱应该是小体积，用分析柱的同种填料填装。保护柱使用得当，对分离无影响，好像未装保护柱一样。有些厂商的商品将保护柱都是用短柱、不超过3cm长，内径2～3mm，用较大粒度的填粒（15～20μm）干法填装，会使分析柱的效能有所降低。 2．避免高压冲击 一般色谱柱都能经得起高压，但经不起突然变化的高压冲击。引起高压突然冲击，主要是因样品阀的缓慢转动、泵起动快，柱切换操作等。等面已讨论过，转动六通进样阀时从泵到柱的液流会瞬时切断。在阀的泵侧压力升高，在阀的柱侧压力降低（变化超过20%）。阀转到底后压力突然冲击一下恢复正常，手动进样阀的变化不大，自动进样阀比较慢，可能造成压力冲击，可用氦气代替空气驱动进样阀。因氨压缩系数小。另外泵起动不应过快，可分步操作。如用3ml/min流速，先从1mL/min到2mL/min，然后再3ml/min，每个间隔应大于20s。 柱切换技术的应用也很广泛，切换过程中在色谱柱的入口处压力在零到很大数字之间变化，会很快使柱报废。 3．分离条件 多数色谱柱有很宽的试验条件范围，但具体应用又受到限制，主要是pH值、柱温和流动相的选择。 硅胶为基质的键合相要求pH在2.5～7之间，极端pH的流动相能“溶解”硅胶，使键合相流失。结果非碱性组分峰变宽。如果一定要用高或低pH的流动相，可加预柱（饱和柱）。预柱装在泵和进样阀之间，用分析柱相同的填料填装，或者用普通硅胶。硅胶饱和了流动相。减少了分析柱填料的损失。预柱不要求柱效高，用价格低的一般硅胶疏松地填装，按期检查硅胶的溶解情况。用预柱也有不利的影响。即新流动相难以平衡，保留时间不稳定或稳定慢。使用了预柱一定要加流路过滤器，以防止硅胶微粒引起的麻烦。 以硅胶为基质的柱和阴离子交换柱超过60℃后，会增加对流动相中化学物质的吸附。在高温下用小颗粒柱引起柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。在4℃以上使用3μm柱，70℃以上使用5μm柱，会使N值降低50%。 有些流动相中的溶剂不能用于某些柱，如小颗粒的聚苯乙烯填料不能用于非水的排阻色谱。另一方面，有些柱与某些溶剂（如四氢呋喃）一旦达到平衡，不要随意改用其它溶剂。有关这些特殊填料，可以参见有关资料。 水溶性流动相会引起微生物生长而造成阻塞柱。色谱柱应存放在纯有机溶剂或加了50%有机溶剂的水中。凝胶柱可存放在水溶性缓冲液中，同时加0.01%叠氮钠以防止微生物的生长。

保护柱的作用在高效液相分析检测样品的过程中，色谱柱会受到来自于样品及色谱系统的污染，从而导致色谱柱耐用性差、寿命缩短。来自于色谱系统的污染主要指：1、HPLC仪器系统中部件磨损而产生的固体颗粒2、以及流动相系统过滤不完全残留的固体颗粒来自于样品的污染主要指：1、未完全溶解的样品或者已完全溶解的样品进入色谱系统中。2、由于样品溶剂和流动相溶剂对样品溶解存在的溶解度差异，导致沉淀析出污染系统。特别是对于中药、天然产物、合成中间体及生物药品的检测，因基质的复杂性，色谱柱受污染的情况会更加严重。污染会导致色谱系统压力升高、色谱柱塌陷、填料变色等，从而带来检测成本高，测试结果不准确等各种影响。保护柱是液相色谱分析中重要的色谱耗材，使用保护柱可大大降低分析柱受污染的程度，延长分析柱使用寿命。保护柱位于进样器与分析柱之间， 作用主要两方面：　　1. 截留不溶性颗粒　　2. 吸附样品基质中的杂质

怎样选择保护柱，但又不影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁。对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的保护柱便能提供充分的保护作用。但是，如果样品非常不清洁，或工作中发现要经常更换1cm的保护柱，那么就应选择2cm或3cm长的保护柱。保护柱越长，自然所装填的色谱填料越多，则其越能避免污染物进入分析色谱柱的机会。当然，随着保护柱的长度加长，样品的保留时间会比使用短保护柱长。一般来说，保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。保护柱的填料装填方式也很重要。目前有薄膜装填法的保护柱，使用过程很简单方便，而且可以在实验室中进行干装。但是，其最大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的保护柱所装填的色谱填料有限，只能提供很有限的保护作用；不过也因为所装填的色谱填料较少，保护柱的长度也较短，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。另一种保护柱结构其实质是缩短了的色谱分析柱，设计方式上有直连式、手紧式或整体式。整体式设计是由色谱柱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候由色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的保护柱长度。手紧式保护柱从结构上讲是与直连式保护柱一样，只是在连接时不需要借助扳手等工具，直接用手上紧即可。另外从保护柱结构的角度看，保护柱的结构又分为是否可以更换保护柱柱芯。现在大多数的保护柱均可以更换保护柱柱芯，可以降低保护柱的使用成本。大多数人是根据色谱分析柱的填料选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。 对于选择保护柱的原则是：在满足分析分离要求的前提条件下，尽可能地选择较短的保护柱结构，尽可能选择对分离样品小一些保留性的填料。

怎样选择保护柱，但又不影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁。对于大部分分析工作者来说，一只1cm长的保护柱便能提供充分的保护作用。但是，如果样品非常不清洁，或工作中发现要经常更换1cm的保护柱，那么就应选择2cm或3cm长的保护柱。保护柱越长，自然所装填的色谱填料越多，则其越能避免污染物进入分析色谱柱的机会。当然，随着保护柱的长度加长，样品的保留时间会比使用短保护柱长。一般来说，保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。保护柱的填料装填方式也很重要。目前有薄膜装填法的保护柱，使用过程很简单方便，而且可以在实验室中进行干装。但是，其最大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。另外，薄膜装填法的保护柱所装填的色谱填料有限，只能提供很有限的保护作用；不过也因为所装填的色谱填料较少，保护柱的长度也较短，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。另一种保护柱结构其实质是缩短了的色谱分析柱，设计方式上有直连式、手紧式或整体式。整体式设计是由色谱柱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。直连式结构设计可在任何时候由色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的保护柱长度。手紧式保护柱从结构上讲是与直连式保护柱一样，只是在连接时不需要借助扳手等工具，直接用手上紧即可。另外从保护柱结构的角度看，保护柱的结构又分为是否可以更换保护柱柱芯。现在大多数的保护柱均可以更换保护柱柱芯，可以降低保护柱的使用成本。大多数人是根据色谱分析柱的填料选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。对于选择保护柱的原则是：在满足分析分离要求的前提条件下，尽可能地选择较短的保护柱结构，尽可能选择对分离样品小一些保留性的填料。

在选择保护柱时，保护柱的长度要与色谱柱的长短相匹配吗？也就是说色谱柱越长，保护柱要越长吗？

液相色谱保护柱压力过大，更换新的保护柱柱芯，1ml/min甲醇，压力达到10MPa，取下保护柱，在异丙醇中超声1h，还是没有效果，请教如何处理？