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色谱纸抗体固定方法

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色谱纸抗体固定方法相关的方案

  • 使用BioResolve SCX mAb色谱柱开发单克隆抗体电荷异构体分析方法
    盐梯度下阳离子交换色谱的方法开发参数。 由于蛋白质治疗药物(包括单克隆抗体(mAb))的电荷异质性可能会影响生物治疗药物的生物活性、安全性和稳定性,所以需要对这种电荷异质性进行表征和监测1。离子交换色谱(IEX)一直被广泛应用于蛋白质电荷异构体的纯化、表征和常规监测分析。由于mAb的等电点(pI)相对较高,与阴离子交换色谱分离相比,阳离子交换色谱(CEX)更适合用于mAb电荷异构体的表征分析。本应用纪要介绍了开发CEX固定pH盐梯度方法时需要考虑的因素。其它与使用pH梯度有关的信息请参阅单独的沃特世应用纪要2。借助沃特世高分离度强阳离子交换色谱柱(即BioResolve SCX mAb)和 Waters AutoBlend Plus技术,可以高效实现盐梯度方法开发,得到可重现、稳定的分离。
  • 使用半制备型FcR亲和色谱柱和HILIC-MS表征单克隆抗体
    单克隆抗体是一类重要的治疗药物,拥有治疗多种疾病的巨大潜力。由于其结构具有高度复杂性和聚糖异质性,因此必须对其关键质量属性进行表征和严格控制,才能保证药物的质量和功效。与Fc区Asn-297糖基化位点相连的mAb聚糖会影响生物活性,如抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和稳定性。TSKgel FcR-IIIA系列色谱柱根据单?克隆抗体对Fcγ RIIIA配体的亲和力,将其分为3个组分:低亲和力、中亲和力和高亲和力。这主要取决于mAb的糖型及其ADCC活性。为了定量和阐明基于FcRIIIA亲和力分离的不同组分糖型聚糖谱,需要首先对馏分中的抗体聚糖进行释放并标记,再使用HILIC-MS 的分析。TSKgel FcR-IIIA-5PW是一种半制备型亲和色谱柱,其固定相是将重组Fcγ RIIIA 配基,键合到10 μ m粒径的多孔聚甲基丙烯酸酯聚合物基质上,上样量最高可达5 mg mAb。它与分析柱 (TSKgel FcRIIIA-NPR) 不同,分析柱采用的是无孔填料基质,上样量通常 ≤ 50μ g mAb。因此,使用半制备型TSKgel FcR-IIIA-5PW色谱柱,单次可收集更多的样品,对这一工作流程大有裨益。该半制备型色谱柱的附加效用是可以通过收集足量的样品,通过酶促聚糖释放和HILIC-MS方法对mAb糖型进行深度分析。
  • 冰冻切片免疫荧光中组织固定方法研究
    通过对3种不同固定液对肝组织冰冻切片免疫荧光过程中固定情况的比较,探寻保存抗原最佳固定效果的方法。本文探讨在保存肝组织中抗原活性方面,相对于10%甲醛和1%多聚甲醛液,以丙酮固定液固定效果最好。
  • 离子色谱法测定固定污染源废气中硝酸雾、磷酸雾
    本文使用离子色谱仪,建立了固定污染源废气中硝酸雾、磷酸雾的检测方法。本方法参考生态环境部发布的《HJXXX-20XX固定污染源废气 硝酸雾、磷酸雾的测定 离子色谱法》(征求意见稿),在0.5~50 μ g/mL浓度范围内建立标准曲线,各化合物线性相关系数均在0.999以上,线性良好。空气样品采样体积为0.4 m3制成50 mL试样,进样体积为25 μ L时,硝酸雾方法检出限为0.012 mg/m3,磷酸雾方法检出限为0.013 mg/m3,1 μ g/mL标准溶液重复分析6次,硝酸根峰面积相对标准偏差为1.53%,磷酸根峰面积相对标准偏差为2.83%,重复性良好。加标回收实验中,各组分回收及精密度良好。6次加标实验相对标准偏差小于4%。该方法简单方便,能有效的对固定污染源中硝酸雾、磷酸雾的含量进行测定。
  • 离子色谱法测定固定污染源废气中硝酸雾
    本文建立了一种使用离子色谱法测定固定污染源废气中硝酸雾的方法。参考2021年版《固定污染源废气 硝酸雾的测定 离子色谱法(征求意见稿)》标准,用HIC-ESP进行定性定量分析。结果显示硝酸根线性良好,标准曲线相关系数均≥0.999;低中高浓度连续分析6次,保留时间RSD≤0.03%,峰面积的RSD≤0.6%;低中高浓度加标样品回收率在99.4%~102.3%之间,方法准确可靠。该方法重现性好,灵敏度高,可用于固定污染源废气中硝酸雾的测定。
  • 气袋法-气相色谱法测定固定污染源废气中8种苯系物
    HJ1261-2022《固定污染源废气 苯系物的测定 气袋采样/直接进样-气相色谱法》将于2023年1月15日正式实施,首次规定了固定污染源废气中8种苯系物的检测方法。参考此新标准,福立仪器采用福立GC 9720Plus 气相色谱仪采用气袋进样法对上述标准中8种苯系物进行了测定,仪器方法符合标准要求。
  • 固定污染源废气 硫酸雾的测定 离子色谱法(暂行)
    本标准规定了测定固定污染源废气中硫酸雾的离子色谱法。本标准适用于固定污染源废气中硫酸雾的测定。对于有组织排放废气,将滤筒制备成 250ml 试样时,本方法检出限为 0.12μg/ml,当采样体积为 400L,检出限为 0.08mg/m3 ,测定下限为 0.3 mg/m 3 ,测定上限为 500mg/m 3 。对于无组织排放废气,将滤膜制备成 250ml 试样时,本方法检出限为 0.12μg/ml,当采样体积为 3m3 , 检出限为 0.01mg/m 3 ,测定下限为 0.04 mg/m 3 。
  • 环氧树脂载体蛋白/酶固定化工艺
    环氧树脂是现成的载体;没有强制的活化步骤。然而再开始固定程序前,可以使用具有所需缓冲液的步骤清洗。由于环氧基团倍蛋白石/酶基团的亲和攻击打开,所以会发生固定化。环氧开环将在载体与蛋白/酶亲核基团之间形成共价键。 蛋白质/酶固定化试验通常是分批进行的,用搅拌或轨道振动筛(不要使用磁棒搅拌器),以保持树脂悬浮状态,避免产生泡沫,这通常是蛋白质变性的结果。所提供的建议必须作为一般准则加以考虑,并不是针对所有具体的固定案例都详尽无遗。
  • 监测固定污染源排放的有机废气、VOCs,用吸附管采样,热脱附/ 气相色谱质谱法分析
    本应用案例展示了英国Markes International公司生产的全自动热脱附系统对固定污染源排放的有机废气、VOCs卓越的分析结果。该解决方案符合中国环境保护标准《固定污染源废气 挥发性有机物的测定固相吸附-热脱附/气相色谱质谱法》(HJ 734-2014)规定。本文还展示了通过使用该系统特有的定量再收集功能对样品的重复分析、方法开发和结果验证提供了强有力的支持。
  • 直接进样-气相色谱法测定固定污染源废气中8种苯系物
    HJ 1261-2022《固定污染源废气 苯系物的测定 气袋采样/直接进样-气相色谱法》将于2023年1月15日正式实施,首次规定了固定污染源废气中8种苯系物的检测方法。参考此新标准,福立仪器采用福立GC 9720Plus 气相色谱仪分别采用直接进样法和气袋进样法对上述标准中8种苯系物进行了测定,目标组分重复性结果、线性相关系数良好,方法检出限符合标准要求。
  • 基于新型Fc受体色谱技术表征单克隆抗体
    迄今为止,经临床批准的大多数单克隆抗体类生物治疗药物,主要是IgG1形式,其次是IgG2和IgG4形式。糖基化是导致单克隆抗体翻译后修饰异质性的主要原因,会影响药物的治疗作用机制(MOA)。同时,糖基化也是影响药物溶解度、动力学、稳定性和疗效的关键因素之一。因此,监测聚糖的关键质量属性(CQA)在药物开发阶段显得至关重要。IgG与其细胞Fc受体(FcR)的结合亲和力取决于其IgG亚类和Fc区的糖基化修饰。并且,N-聚糖的结构也与抗体ADCC活性密切相关,因此需要对单克隆抗体制剂及其生物类似药进行糖基化修饰的监测。东曹生命科学(Tosoh Bioscience)开发出了一种基于Fcγ IIIa的亲和色谱法来评价单克隆抗体糖型差异的全新方法。在文章中,首先简要概述了Fc受体的功能。然后,阐述了基于FcR的亲和色谱的原理、新型FcR色谱柱根据抗体N-聚糖分离多种单克隆抗体具有高选择性。最后,我们举例介绍了FcR色谱柱在细胞株筛选、糖工程监测、工艺开发和生产过程监控中的应用。
  • TSK色谱柱在抗体药HPLC分析中的应用
    抗体是一种结构复杂的糖蛋白。即使是天然抗体,其结构也是各不相同。抗体类药物在其生产工艺(培养、分离纯化)或存储过程中容易导致产品的不均一性,所以在药物研发以及纯化和生产过程中,对抗体药物的定量和定性的分析是非常重要的。 高效液相色谱法(HPLC)可以对抗体药物以及重组蛋白药物中的不均一性进行有效的分析。比如,尺寸排阻色谱法利用分子空间结构的不同,可对多聚体、抗体片段、PEG化蛋白等样品进行有效分离。离子交换、疏水、反相以及正相色谱法可对抗体中的带电异构体、结构异构体,或由于糖基化、托酰胺化和氧化等作用引起的杂质进行高分辨率的分析。 本目录汇总了SEC/IEC/HIC/RPC/HILIC法分析抗体药物的应用实例,同时也涵盖了最新最全的TSK色谱柱产品的选择指南。
  • 固定污染源中24种挥发性有机物测定的应用(HJ734-2014)
    挥发性有机物(Volatile Organic Compounds,VOCs)是重要空气污染物,而且VOCs也是促成空气中臭氧生成的关键化合物。VOCs在环境中的主要人为排放源包括固定污染源及移动污染源两种,其中以固定污染源监控较为有效。为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国大气污染防治法》,保护环境,保护人体健康,生态环境部于2014年发布《HJ734-2014 固定污染源废气 挥发性有机物的测定 固相吸附-热脱附/气相色谱-质谱法》国家环境保护标准,该标准规范固定污染源废气中挥发性有机物的测定方法。采用TD+GC-MS用于固定污染源废气中24种挥发性有机物的检测。该方案满足HJ734-2014的要求,且具有优异的线性关系,良好的重现性以及大大提高工作效率的优势,确保实验结果的准确并提高实验室的产率。
  • 液相色谱法测定固定污染源废气中醛、酮类化合物
    本文使用高效液相色谱仪,建立了固定污染源废气中12种醛、酮类化合物的检测方法。在0.10~4.00 μ g/mL浓度范围内建立标准曲线,各化合物线性相关系数均在0.999以上,线性良好。方法检出限在 0.001~ 0.013 mg/m3。0.1 μ g/mL标准溶液重复分析6次,峰面积相对标准偏差均小于3.32 %,重复性良好。加标回收率为81.48 %~ 99.93 %,6次加标实验相对标准偏差小于3 %。该方法简单、准确,重复性好,能够有效检测固定污染源废气中醛、酮类化合物的含量。
  • 固定污染源废气苯系物的测定—气袋采样/直接进样气相色谱法
    本文参考生态环境部发布的标准《HJ 1261- 2022 固定污染源废气 苯系物的测定 气袋采样/直接进样-气相色谱法》,使用磐诺气相色谱仪,进行苯系物含量测定。
  • 使用BioResolve RP色谱柱对完整抗体进行高效分离
    本研究开发了一种能够高效分离完整抗体的反相分离方法,该方法充分利用了BioResolve RP色谱柱专为这类应用而设计的各项特性。BioResolve RP色谱柱中填充有经过优化的硅基实心核颗粒,这些颗粒被具有450 Å 孔径的创新多苯键合相多孔涂层包裹,有效提高了完整抗体分离的效率和选择性。与目前业内先进的多孔和非多孔色谱柱相比,这种色谱柱在分离度、峰宽、峰形和残留方面的性能均有所提升。文中所示的数据表明,与传统的RP色谱柱相比,BioResolve RP色谱柱所得的峰宽窄20%,残留降低50%,对完整抗体的分离能力大幅提升,是抗体表征和分析的理想工具。
  • 人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)检测试剂盒
    人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)检测试剂盒人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)抗原、生物素化的人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗类固醇生成细胞抗体(SCA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 抗体理化性质研究
    基于2020年新版中国药典,根据重组单克隆抗体制品内在固有质量属性的差异与不同,确定制品的关键质量属性,选择相应适宜的分析方法开展质量检定,检定内容包含以下方面,纯度,杂质,及含量的测定,效价的评估,无菌,内毒素,支原体等的检测,修饰抗体的检测,及鉴别与一致性分析。
  • 新型离子交换色谱柱在pH梯度下检测 不同类型的双特异性抗体
    本文使用新型离子交换色谱柱ProPac Elite WCX 5 μ m 4.0mmX150 mm色谱柱和CX- 1Buffer缓冲液,进行pH梯度高分辨率分析非对称型双特异性抗体和对称型的IgG类抗体,使用MAbPac SCX-10 RS 5um 4.6 mmX50 mm色谱柱和CX-1 Buffer缓冲液,进行pH梯度高分辨率分析片段型双特异性抗体。解决了等电聚焦电泳和其他色谱分离模式不能分离的杂质异构体。给双特异性抗体的QC方法控制提供参考。
  • 抗体药物的层析纯化工艺及HPLC质量控制方法
    抗体是一种结构复杂的生物大分子,由多个氨基酸组成。即便是天然的抗体,其结构也是各不相同。抗体药物中使用到的单克隆抗体(IgG)在生产工艺(细胞培养、分离纯化)与保存过程中易发生不均一性的变化,包括抗体蛋白的二聚体、多聚体、脱酰胺化、末端氨基酸突变以及糖链部分的结构差异。这些不均一性会使药物的药效、安全性方面受到影响。 而随着生产工艺及分析手段的进步,单克隆抗体类药物的质量控制将更加严格。高效液相色谱(HPLC)作为一种分离技术,在蛋白质、抗体等生物大分子的分离分析方面已得到越来越广泛的应用。近年来,东曹生物的科学家们一直致力于在生物药分离领域开发具有革新性的色谱分离介质,基于尺寸排阻、离子交换色谱等多种HPLC分离技术实现了对抗体多聚体、各种抗体异构体的高效分离,在抗体药物的质量控制方面提供了有效地监控手段。
  • 人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)检测试剂盒
    人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)检测试剂盒人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)抗原、生物素化的人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗丁型肝炎病毒抗体(anti-HDV)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
  • 使用高分辨色谱-质谱联用系统和最新反相色谱柱改善单克隆抗体和抗体偶联药物表征
    本研究使用新型反相色谱柱来解决这些问题,以期改善抗体偶联药物的表征分析。在此之前,已有研究表明,抗体偶联药物因含有疏水性极强的Fd' 亚基(负载数为3)而更加难以进行有效分析。
  • 胶粘性医用固定敷料透湿性的测试方法与意义
    透水蒸气粘贴膜医用固定敷料是临床常用的医用材料,需具有良好的透湿性,其透湿率应大于皮肤的水分挥发速率。本文主要介绍胶粘性医用固定敷料透湿性的测试方法与意义。
  • 高效液相色谱法测定固定污染源废气中丙烯酸和甲基丙烯酸含量
    本文参照《固定污染源废气 丙烯酸和甲基丙烯酸的测定 液相色谱法》(征求意见稿),使用液相色谱仪建立了高效液相色谱法测定固定污染源废气中丙烯酸和甲基丙烯酸含量的分析方法,并对方法的线性、精密度及加标回收率进行了考察。分析结果表明,丙烯酸和甲基丙烯酸在线性范围内线性关系良好;精密度溶液连续进6针,目标物保留时间相对标准偏差不大于0.1%,峰面积的相对标准偏差不大于1.5%,重复性好,稳定性强;分别对空白加标量为1.00 μg、15.0 μg、150 μg的样品进行6次重复测定,加标回收率为90.5%~114.3%。方法的线性、重复性及加标回收率符合标准要求,可为固定污染源废气中丙烯酸和甲基丙烯酸含量测定提供参考。
  • 液相色谱耦联Q Exactive 台式轨道阱质谱仪分析利妥昔单克隆抗体
    在本研究中,我们提供一种新流程,结合快速色谱,利用两种规格的整体柱和高分辨Orbitrap质谱仪,对完整及还原利妥昔进行了分析,采用AIF,Multiplexed HCD自上而下的裂解,以及自下而上的分析方法进行序列验证。即使抗体的上样量低至500pg,我们仍可以得到高质量的质谱图,该数据证明了LC-MS仪器的高灵敏度。此外,为了分析还原型单克隆抗体,我们采用色谱的方法将抗体的重链和轻链分开,设置不同的分辨率对其进行检测。通过这个流程,我们可以测定完整抗体的分子量,对轻链和重链的氨基酸序列进行确认和验证,对该抗体不同糖基化形式的相对丰度进行鉴定和评价。
  • 《固定污染源废气 丙烯酸和甲基丙烯酸的测定高效液相色谱法》解决方案
    《固定污染源废气 丙烯酸和甲基丙烯酸的测定 高效液相色谱法》(HJ 1316-2023)规定了固定污染源有组织废气和无组织排放监控点空气中丙烯酸和甲基丙烯酸的高效液相色谱法。
  • 使用圆二色谱法评估HOS身份和VHH抗体与冠状病毒的结合
    生物制药从研发到消费者可用性的道路是一个漫长而彻底的过程,旨在确保有效和质量控制。生物仿制药的开发需要与原始生物制药一起评估分子的高阶结构(HOS)。此外,生物制药的结构对制造过程或储存环境的变化很敏感,有必要评估这些分子在任何加工或储存改变后所保持的更高阶结构。关键词:新型冠状病毒,SARS-CoV-2,新冠肺炎,生物制药,抗体药物,生物相似,VHH抗体,HOS,二级结构,三级结构,圆二色性
  • 组织固定固定液的选择标准
    影响标本固定的因素很多,如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等;除此之外,固定液本身也很重要,若所选固定液不当,细胞内蛋白质、脂类、核 酸等成 分将会有不同程度地损失。固定剂最好随配随用,并注意其浓度和酸碱度。因此根据实际工作的目的,选用合适的固定液非常重要
  • 气雾阀固定盖密封性、畅通性、密封性测试方法
    气雾阀是固定在气雾剂容器上的机械装置,关闭时保证内容物不泄露,促动时使内容物以预定的形态释放出来。按气雾阀与气雾罐口径配合尺寸常分为φ 25.4mm和φ 20mm两种规格,常被应用于杀虫剂、自喷漆、喷雾剂等产品包装中。气雾阀的畅通性、密封性及固定盖耐压性的优良,严重影响产品的正常销售与使用。本文结合GB/T17447-2012气雾阀标准重点介绍气雾阀的畅通性、密封性及固定盖耐压性的要求及具体测试方法。
  • 人抗骨骼肌抗体(ASA)检测试剂盒
    人抗骨骼肌抗体(ASA)检测试剂盒人抗骨骼肌抗体(ASA)检测试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围: 规格:96T/48T使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人抗骨骼肌抗体(ASA)含量。实 验 原 理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中人抗骨骼肌抗体(ASA)水平。用纯化的抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人抗骨骼肌抗体(ASA)抗原、生物素化的人抗骨骼肌抗体(ASA)抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗骨骼肌抗体(ASA)呈正相关。 使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度
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