色谱定量百分比方法

引言&beta 淀粉样肽（A&beta ）的不溶性聚集物在脑中沉积／形成被看作为早老性痴呆病（AD）的一个关键事件。治疗策略集中于用以减少&beta 淀粉样肽生成或提高其清除水平的小分子抑制剂或免疫疗法。因此，找到能对脑脊液中的淀粉样肽进行高灵敏且稳定可靠的定量分析方法以确定其与AD关系对很多研究者来说至关重要。然而，对这些A&beta 肽的分析极具挑战性，这不仅因为其在生物液体内的丰度相对偏低，而且也因为它们可能被其它蛋白质结合并具有形成低聚体的趋势。这些肽的测定常规采用免疫测定法（因其选择性和灵敏度）或者通过冗长的免疫沉淀之后再进行SPE。免疫测定所需的方法开发时间比LC/MS/MS方法开发时间长；它们需要对多种A&beta 肽进行多次测定，并且与LC/MS/MS相比其线性动态范围有限。免疫测定存在交叉反应性和非特异性结合，需要使用价格昂贵的抗体，并且样品／标本的富集依赖于抗体的选择性。免疫测定的劳动强度大，并且测定不准确和基质干扰也是常见的问题。因此，需要开发一种基于LC/MS/MS的高通量、选择性好的生物分析方法，使样品制备能够实现在存在高浓度干扰蛋白和肽的情况下回收得到pg/mL水平的淀粉样肽。虽然开发免疫测定方法所需的时间在后期药物发展过程中是可接受的，但在较早的阶段中则几乎不切实际；这时，如能有一种可定量多种肽的高通量且可靠的方法则是众望所归。本研究工作集中于开发用于淀粉样前体蛋白（APP）的1-38、1-40和1-42片段的LC、MS和选择性SPE样品制备方法，以支持临床前研究。使用单一、高通量方法用于多种A&beta 肽的分析测定而无需耗时的免疫沉淀步骤，被成功开发并经过验证。特别是，A&beta 类肽存在很多独特的分析挑战，其中包括非特异性结合、溶解性差、聚集和质谱灵敏度偏低。在方法开发各阶段所进行的步骤尽可能减小或消除了这些问题所带来的影响。随着AD病情缓解策略的出现，对除了A&beta 38、40和42之外的多种可能与AD病征相关的A&beta 进行定量分析可有助于提供关于此病及其发展过程的更多认识。本文所述的方法也有可能进行相应的修改，以使其适用于那些肽的定量分析。&beta 淀粉样1-38肽，分子量4132，pI 5.2DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGG&beta 淀粉样1-40肽，分子量4330，pI 5.2DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVV&beta 淀粉样1-42肽，分子量4516，pI 5.2DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA图1：&beta 淀粉样肽1-38、1-40和1-42的氨基酸序列和pI数据 实验UPLC方法的条件色谱柱： ACQUITY UPLC BEH C18，300Å ，2.1× 150nm，1.7µ m流动相： A：0.3% NH4OH（按体积计算）的水溶液 B：90%乙腈，10%流动相A梯度： 90% A保持1分钟，5.5分钟内降低至55% A并保持0.2分钟，然后返回至初始水平流速： 0.2 mL／分钟进样量： 10µ L温度： 50℃质谱条件系统：沃特世XevoTM TQ三重四极杆质谱仪，在ESI+MRM模式下运行去溶剂化气体流速：800L／小时源温度：120℃去溶剂化温度：450℃碰撞室压力：2.6× 10(-3)毫巴MRM跃迁态和条件：见表1样品预处理用5M盐酸胍以1:1的比例稀释200µ L脑脊液（人脑脊液、猴脑脊液或加标人工脑脊液+5%大鼠血浆），并在室温下振摇45分钟。然后，用200µ L 的4%H3PO4水溶液进一步稀释样品。注意：对于加标样品而言，在加标后、用盐酸胍稀释前，可在室温下让样品平衡30分钟。固相萃取（SPE）基于µ Elution 96孔型的Oasis MCX 预处理：200µ L甲醇平衡：200µ L 4% H3PO4水溶液上样：600µ L预处理后的样品清洗1：200µ L 4% H3PO4水溶液清洗2：10% ACN水溶液洗脱：2× 25µ L 75:15:10 ACN:水:NH4OH浓溶液稀释：25µ L水进样量：20µ L 肽名称 前体离子 产物离子 产物离子ID 锥孔电压（V） 碰撞能量（eV） &beta 淀粉样1-38肽 1033.5 1000.3 b 36 33 23 &beta 淀粉样1-38肽的N15内标 1046 1012.5 30 22 &beta 淀粉样1-40肽 1083 1053.6 b 39 33 25 &beta 淀粉样1-40肽的N15内标 1096 1066.5 35 22 &beta 淀粉样1-42肽 1129 1078.5 b 40 28 30 &beta 淀粉样1-42肽的N15内标 1142.5 1091.5 35 28 表1：&beta 淀粉样肽及其N15标记型内标的MRM跃迁态和质谱条件 结果和讨论开发这些方法所遇到的最大挑战就是克服溶解性、吸附性和聚集性问题并获得能满足该应用要求的足够选择性和灵敏度。适当的流动相和进样溶剂构成以及明智选择SPE洗脱溶剂仅仅是应对这些问题的几个关键因素。质谱分析质谱分析在正离子模式下进行，因为4+前体的CID产生了几种与固有的特异性b序列离子相对应的不同产物离子（典型光谱如图2所示）。负离子模式下的MS/MS出现了明显的水分流失。图3给出了关于两种方法特异性区别的一个示例。虽然对于溶剂标准品时使用负离子模式的总体灵敏度较高，但在基质存在时负离子模式的灵敏度优势减弱，而正离子模式下的特异度和信噪比的提高对于脑脊液样品中的准确定量具有决定性作用。超高效液相色谱分析图4显示了对这三种&beta 淀粉样肽的分离情况。虽然流动相中NH4OH的精确百分比对负离子灵敏度具有关键作用，但ESI+模式下的信号经证实对流动相构成的细微变化更具稳健性，可使液相色谱／自动取样器至少在24小时以上的时间段中保持稳定。与此相反，50%或以上的ESI-信号在10-12小时后因流动相中NH4OH浓度的自然变化（挥发）而损失。这进一步强调了ESI+MS方法的稳健性。固相萃取（SPE）SPE使用Oasis MCX（一种混合模式的吸附剂）进行，以加强萃取过程的选择性。该吸附剂同时依赖于反相和离子交换保留机制，以从复杂脑脊液样品中的其它高丰度多肽中选择性分离&beta 淀粉样肽组分。使用特定的96孔Oasis µ Elution提供了明显的浓缩效果，无需溶剂挥干和复溶，从而尽可能减少了肽损失。此外，通过离子交换进行肽结合为整个方法提供了正交性。在最初的方法开发过程中，萃取人工脑脊液时观察到了大量非特异性结合（NSB）。我们添加了5%大鼠血浆（有一个不同的&beta 淀粉样肽序列），以消除NSB。SPE是整个方法中较为重要的环节之一。对淀粉样组分选择性极高的分离再加上标准流速下UPLC的分辨率实现了对临床前研究样品的超快分析。线性、准确度和精确度对每种肽均使用了N15标记型内标。对于0.1-10ng/mL人工脑脊液+5%大鼠血浆的等分样本，三种&beta 淀粉样肽的标准曲线均呈线性。&beta 淀粉样1-38肽的典型标准曲线如图5所示。淀粉样肽的基线水平根据同时使用过量加标的人脑脊液和&ldquo 人工脑脊液+5%大鼠血浆&rdquo 而得到的两条标准曲线进行定量分析，基线水平的计算值没有统计学意义上的差异。选择人工脑脊液是因为它的价格不贵，而且是一种比较易得的基质。从3种人脑脊液和1种猴脑脊液萃取得到的&beta 淀粉样1-42肽的基线水平如图6所示。所有3种&beta 淀粉样肽的基线水平测定值的统计结果如表2所示。用3种人脑脊液混合样品和1种猴脑脊液混合样品配制了0.2、0.8、2和6ng/mL的过量加标的质控样品。准确度和精确度数值符合LC/MS/MS测定的控制标准。质控样品分析的典型结果如表3所示。 结果和讨论开发这些方法所遇到的最大挑战就是克服溶解性、吸附性和聚集性问题并获得能满足该应用要求的足够选择性和灵敏度。适当的流动相和进样溶剂构成以及明智选择SPE洗脱溶剂仅仅是应对这些问题的几个关键因素。质谱分析质谱分析在正离子模式下进行，因为4+前体的CID产生了几种与固有的特异性b序列离子相对应的不同产物离子（典型光谱如图2所示）。负离子模式下的MS/MS出现了明显的水分流失。图3给出了关于两种方法特异性区别的一个示例。虽然对于溶剂标准品时使用负离子模式的总体灵敏度较高，但在基质存在时负离子模式的灵敏度优势减弱，而正离子模式下的特异度和信噪比的提高对于脑脊液样品中的准确定量具有决定性作用。超高效液相色谱分析图4显示了对这三种&beta 淀粉样肽的分离情况。虽然流动相中NH4OH的精确百分比对负离子灵敏度具有关键作用，但ESI+模式下的信号经证实对流动相构成的细微变化更具稳健性，可使液相色谱／自动取样器至少在24小时以上的时间段中保持稳定。与此相反，50%或以上的ESI-信号在10-12小时后因流动相中NH4OH浓度的自然变化（挥发）而损失。这进一步强调了ESI+MS方法的稳健性。固相萃取（SPE）SPE使用Oasis MCX（一种混合模式的吸附剂）进行，以加强萃取过程的选择性。该吸附剂同时依赖于反相和离子交换保留机制，以从复杂脑脊液样品中的其它高丰度多肽中选择性分离&beta 淀粉样肽组分。使用特定的96孔Oasis µ Elution提供了明显的浓缩效果，无需溶剂挥干和复溶，从而尽可能减少了肽损失。此外，通过离子交换进行肽结合为整个方法提供了正交性。在最初的方法开发过程中，萃取人工脑脊液时观察到了大量非特异性结合（NSB）。我们添加了5%大鼠血浆（有一个不同的&beta 淀粉样肽序列），以消除NSB。SPE是整个方法中较为重要的环节之一。对淀粉样组分选择性极高的分离再加上标准流速下UPLC的分辨率实现了对临床前研究样品的超快分析。线性、准确度和精确度对每种肽均使用了N15标记型内标。对于0.1-10ng/mL人工脑脊液+5%大鼠血浆的等分样本，三种&beta 淀粉样肽的标准曲线均呈线性。&beta 淀粉样1-38肽的典型标准曲线如图5所示。淀粉样肽的基线水平根据同时使用过量加标的人脑脊液和&ldquo 人工脑脊液+5%大鼠血浆&rdquo 而得到的两条标准曲线进行定量分析，基线水平的计算值没有统计学意义上的差异。选择人工脑脊液是因为它的价格不贵，而且是一种比较易得的基质。从3种人脑脊液和1种猴脑脊液萃取得到的&beta 淀粉样1-42肽的基线水平如图6所示。所有3种&beta 淀粉样肽的基线水平测定值的统计结果如表2所示。用3种人脑脊液混合样品和1种猴脑脊液混合样品配制了0.2、0.8、2和6ng/mL的过量加标的质控样品。准确度和精确度数值符合LC/MS/MS测定的控制标准。质控样品分析的典型结果如表3所示。 1. 我们开发了一种用于同步定量分析人和猴脑脊液中多种&beta 淀粉样肽的SPE-LC/MS/MS生物分析方法并对其进行了验证。2. 将基于µ Elution型混合模式SPE的高选择性萃取方法与UPLC色谱分析的分辨率相结合是实现对人和猴脑脊液中3种主要&beta 淀粉样肽进行准确、精确而可靠的定量分析的关键。3. 正离子MS/MS和b离子序列碎片的使用提供了本应用所需的质谱特异度。4. 用不到30分钟的时间即可完成对96份样品的萃取并作好进样准备，从而满足了临床前研究所需的样品制备处理通量要求。5. 本文所述的方法避免了在临床前研究工作中进行耗时的免疫测定或免疫沉淀步骤。6. Xevo TQ质谱的质量范围和灵敏度允许选择高m/z前体进行破碎并能选择特异度高的b离子碎片，从而增加了此项测定的信噪比并总体提高了其特异度。7. 此类方法也可允许选择性的、特异性的、并按高通量方式同时测定一份样品中的几种不同&beta 淀粉样肽，而同时仍能达到低浓度内源性&beta 淀粉样肽分析所需的高灵敏度。这是一个明显的优点，因为ELISA测定需要使用多种抗体进行多次测定。所选择的参考文献1. T.A. Lanz、J.B. Schachter．神经科学方法杂志，169 (2008) 16-22.2. T. Oe等．质谱分析中的快速通讯，20 (2006) 3723-3735.3. JR Slemmon等．色谱分析杂志：生物分析，846 (2007) 24-31.4. NT Ditto等．神经科学方法杂志，182 (2009) 260-265.5. T.A. Lanz、J.B. Schachter．神经科学方法杂志，157 (2006) 71-81.6. MJ Ford等．神经科学方法杂志，168 (2008) 465-474.7. E. Portelius等．蛋白质组学研究杂志，6 (2007) 4433-4439.致谢本文作者希望向Wenlin Li（辉瑞公司PDM部）表达谢意，感谢她在使用免疫亲和LC/MS/MS分析&beta 淀粉样肽所作的前期工作。沃特世公司美国马萨诸塞州米尔福德Maple街34号，01757电话：(508) 478-2000；传真：(508) 478-1990 http://www.waters.com

4月4日消息，海能技术（430476）近日接待开源证券、中信证券等40家机构网络调研。近年，公司重点布局色谱领域成效显著，色谱光谱系列产品销售收入同比增长近90%，毛利率增加13.46个百分点，成为业绩新增长点。海能技术表示，公司未来将持续加码色谱领域高效液相色谱仪、气相色谱-离子迁移谱联用仪等产品研发和市场投入，助推产品收入持续攀升。资料显示，海能技术是一家专业从事科学仪器及分析方法的研发、生产及销售的高新技术企业，为广大科研工作者和质量控制从业人员提供生产工具和分析检测方法。目前，公司已拥有有机元素分析和样品前处理两大成熟系列产品。近年来，海能技术持续拓宽业务增长空间和产品领域，产品向系统复杂、技术含量更高、应用范围广、市场空间大的色谱领域拓展，重点布局高效液相色谱仪、气相色谱-离子迁移谱联用仪两大产品，打开新业务增长空间，成为业绩增长主要动力。2022年，公司色谱光谱系列产品销售收入6339.76万元，同比增长89.23%；毛利率63.86%，同比增加增加13.46个百分点。此次调研中，海能技术称，公司去年色谱光谱系列产品收入大幅攀升，主要原因是2022年度合并海能吉富及其控制的子公司，以及前期重点布局的气相色谱-离子迁移谱联用仪与高效液相色谱仪为代表的色谱光谱系列产品收入大幅增长所致。未来，公司将重点加大高效液相色谱仪、气相色谱-离子迁移谱联用仪等产品研发和市场投入力度，进而推动产品收入持续增长。据了解，海能技术于2021年末完成对联营企业海能吉富75%的认缴出资额的收购，主要是为有效提升GC-IMS（气相色谱-离子迁移谱联用）相关产品及技术研发和运营服务，进一步优化产业布局，丰富产品线，发挥各产业板块协同效应。值得注意的是，在购买日前海能技术已直接持有海能吉富25%的出资份额及直接持有海能吉富下属公司G.A.S.30.01%股权，按照公允价值重新计量产生利得1359.72万元。资料显示，海能吉富主要从事对外投资业务，子公司G.A.S主要从事气相色谱-离子迁移谱联用仪的研发、生产及销售。除此之外，海能技术在调研期间还详细介绍了投资天津海胜能光科技有限责任公司、控股济南海森分析仪器有限公司、增资白小白未来科技（北京）有限公司、投资上海安杰智创科技股份有限公司的背景及目的，以及在上海新设全资子公司的目的和规划等方面问题。

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p　　2015年新食品安全法出台，规定“采用快速检测方法对食品进行抽查检测，被抽查人对检测结果没有异议的，可以作为行政处罚的依据”，某种程度上给快检结论赋予了法律效力，由此催生食品快检行业及快速检测方法的高速发展。/pp　　2017年3月28日，为保证食品快速检测方法评价工作的科学性和规范性，食品药品监管总局组织制定了《食品快速检测方法评价技术规范》。这也意味着风头正劲的快检技术自此有了评价规范，变得有据可依。详情如下：/pp style="text-align: center "strong食品快速检测方法评价技术规范/strong/pp　　strong1　目的/strong/pp　　为保证食品快速检测方法评价工作科学合理、标准统一，特制定本规范。/pp　　strong2　适用范围/strong/pp　　本规范适用于食品药品监管部门组织开展的食品(含食用农产品)中农兽药残留、非法添加、真菌毒素、食品添加剂、污染物质等定性快速检测方法及相关产品的技术评价。/pp　　strong3　评价指标/strong/pp　　3.1　灵敏度/pp　　3.2　特异性/pp　　3.3　假阴性率和假阳性率/pp　　3.4　与参比方法一致性分析/pp　strong　4　评价方法/strong/pp　　最低检出水平(检出限)设置对于禁用物质或者无残留限量的物质应小于或者等于参比方法的检出限水平，对于存在国家标准限值规定的物质应小于或等于限值规定。所有参数需要在不同种类或者类型的食品中测定的实际结果进行统计。/pp　　4.1　灵敏度/pp　　灵敏度是指方法在实验条件下达到的实际最低检出水平时，检出阳性结果的阳性样品数占总阳性样品数的百分比，具体计算要求见附表，评价中可描述为该百分比下方法的检出限。/pp　　4.2　特异性/pp　　特异性是指方法在实验条件下达到的实际最低检出水平时，检出阴性结果的阴性样品数占总阴性样品数的百分比，具体计算要求见附表，评价中可描述为方法检出限下不存在干扰的百分比。/pp　　4.3　假阴性率和假阳性率/pp　　假阴性率是指方法在实验条件下达到的实际最低检出水平时，阳性样品中检出阴性结果的最大概率(以百分比计)，具体计算要求见附表，计算结果为方法最大假阴性率的结果。/pp　　假阳性率是指方法在实验条件下达到的实际最低检出水平时，阴性样品中检出阳性结果的最大概率(以百分比计)，具体计算要求见附表，计算结果为方法最大假阳性率的结果。/pp　　4.4　与参比方法一致性分析/pp　　快速检测方法应与方法中规定的参比方法进行一致性比较。与参比方法一致性分析统计方法常见卡方检验，具体可见附表中显著性差异(c2)所示，一般：/pp　　c2=(?a-b?-1)2/(a+b)/pp　　a：样品被待确认方法证实为阳性而参比方法检验为阴性的数目 /pp　　b：样品被待确认方法证实为阴性而参比方法检验为阳性的数目。/pp　　c2 3.84表示待确认方法与参比方法的阳性确证比率在95%的置信区间内没有显著性差异。但是如果待确认方法比参比方法存在更高的回收率，则以上两种方法的阳性确证比率存在显著性差异是可以接受的。/pp　　c2 3.84表示两种方法的阳性确认比率在95%的置信区间内有显著性差异。/pp　　如果能够证实待确认方法灵敏度优于参比方法，则两种阳性比例的显著性差异可以接受。/pp　　在考察与参比方法的一致性分析中，也需要考察在检出限或者报告限度水平附近的检测结果与浓度之间的趋势一致性。/pp　　strong5　评价步骤/strong/pp　　5.1　拟定评价技术方案/pp　　在比较快速检测方法与待评价方法的适用范围、性能指标和要求等符合性情况的基础上，评价机构应针对待评价食品快速检测方法及相关产品制定评价方案。应包括但不限于：方案实施程序、评价内容及依据、评价比较用参考限值标准及方法标准、参考样品制备、参考值选择、参考样品定值及依据、参考样品编码及说明、测试程序、结果判断及统计方式、结论出具等，最终结论的出具应附相关判别依据，并给出相应判别指标。/pp　　5.2　盲样制备/pp　　试验评价需使用盲样检测进行。试验评价盲样涉及空白、阴性、阳性样品等均应进行实验室测定赋值，并出具均匀性和稳定性结果，相应盲样的均匀性和稳定性测试结果计算的重复性相对标准偏差，应为参比方法要求对应浓度应符合重复性相对标准偏差的1/3。可使用有证标准物质、参考物质或者质量控制品等进行溯源参考，测定完成后的各类样品应进行随机编号处理，形成盲样。用于试验评价的盲样或者质量控制样品，可自行制备，应符合：/pp　　1)基质符合性和与实际食品样品所含物质成分相似性 /pp　　2)考虑成分存在的浓度水平，应涵盖涉及产品的检出水平、标准限量值(标准规定值)、对应标准的检出水平等，选择多个水平进行测定 /pp　　3) 根据标准方法规定的食品类别或者评价范围适用的食品，盲样制备时应重点考虑典型样品基质或相似基质，结合相关食品类别和测定目标物存在形式，按照食品宏观组分进行区分，综合考虑蛋白、脂肪、水分、糖分、高聚物或者多聚体物质、色泽、酸碱性等影响检测的组分进行区分选择，必要时应按照食品生产工艺制备添加样品 /pp　　4)对于多种成分检测，应选择其分析成分进行分类比较(结构类似程度、危害程度等)，综合选择几种代表性成分进行评价 对于易于获得的成分组合，尽可能考虑全部进行试验评价 /pp　　5)盲样测定方式按照单位样品量以及添加目标物的情况，样品处理可以采用部分样品、全量处理等方式进行。盲样必须进行批内均匀性检查，对于一定时间范围内检测的样品，需要进行稳定性检查，保证在评价期限内样品稳定，以上均需评价机构提供检测报告。/pp　　5.3　试验测试/pp　　5.3.1 试验评价可按照方法前期验证结果(如有)，进行浓度水平和基质设计，应比较空白检测、对照检测、标准方法平行对照检测等内容，附带考察方法操作环境、方法用时、操作难易等情况 对于多检测规格产品，应根据其实际规格制定具体评价浓度范围和水平，并在结果判断中注明适用检测范围。/pp　　5.3.2 评价应进行双盲检测，对待评价食品快速检测方法和用于比较的参比方法平行利用盲样进行测试，并对样品进行平行测定，分别计算获得平均检测结果，用于方法间一致性评价，检测过程中应利用根据检测物在食品中实际可能存在的水平，设置质量控制样品，考察检测稳定性。实验中测试样品包括但不限于：/pp　　1) 食品基质空白样品 /pp　　2) 测试水平一般应包括标准方法检出水平(或者标准限量值)的0.5、1、2倍水平或者其他可检测区分的水平(不少于3个) 或者方法标称检出限0.5、1、2倍水平或者其他可检测区分的水平(不少于3个) /pp　　3) 依据相关分析检测统计计量要求，一般检测样品每种基质空白及每个浓度水平不得少于50例，对于非法添加等重点项目的检测，可考虑在低浓度水平设置为100例，以便更好地评价出假阳性率和假阴性率 /pp　　4) 如存在或易获得，应进行阳性样品复核测试 /pp　　5) 针对多成分方法，每种典型物质均需有检测结果和相应评价参数结果 /pp　　6) 应给出差异比较结果，具备数值的应有统计识别结论，统计方法可根据实际情况进行设定，但需说明理由。/pp　　strong6　评价结果及报告出具/strong/pp　　6.1　评价结果/pp　　评价结果应计算快速检测方法可检出限度水平的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率以及检测结果与参与方法的一致性。一般可考虑(但不限定)每个基质每个浓度水平应在数据采集数不少于50例情况下，获得假阴性率和假阳性率的结果。食品快速检测方法技术评价机构应根据项目实际情况给出上述指标评价结果，并提供具有统计意义的说明。/pp　　6.2　报告出具/pp　　专业技术评价机构应出具技术评价报告，对评价整体情况和结果进行汇总整理和分析，报告中应有被评价的食品快速检测方法或相关产品是否符合国家有关规定或产品标称的结论。/pp　　strong附表：快速检测方法性能指标计算表/strong/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201703/insimg/8b238909-f584-4c8e-b5a9-c3f8fbcc66de.jpg" title="2017-03-31_100839.jpg"//pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201703/insimg/dd44e98c-4521-431f-9aaa-5688f8e89803.jpg" style="" title="2017-03-31_100738.jpg"//ppbr//p

#本文由马尔文帕纳科应用专家冯慧庆供稿# 基因治疗是生物制药行业中一个快速增长的领域，通过基因治疗可实现疾病的治疗或预防。其中，重组腺相关病毒(rAAV)是目前基因治疗领域研究较多的一类病毒载体。腺相关病毒（adeno-associated virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一，一般，研究中采用的重组腺相关病毒载体（Recombination adeno-associated virus, rAAV）是在非致病的野生型AAV基础上改造而成的基因载体，由于其种类多样、免疫原性极低、安全性高、宿主细胞范围广、扩散能力强、体内表达基因时间长等，rAAV被视为最有前途的基因研究和基因治疗载体之一。目前，rAAV的准确定量分析和表征的难度是阻碍基因治疗快速发展的关键因素。我们常常需要对rAAV进行综合全面表征，比如衣壳数量、实心率、颗粒尺寸、聚集体比例等。传统情况，rAAV滴度和病毒载量采用ELISA、ddPCR、AUC和EM等技术进行测量。但这些方法通常费时费力，而且精确度不高。本文通过GPC/SEC和多角度动态光散射（MADLS）两种分析技术分析rAAV5样品，展示了快速、准确和可靠地定量测量AAV的病毒滴度（AAV Titer）和实心率(% full AAV)的方法。 01仪器参数OMNISEC GPC/SEC多检测器系统非常适合于生物医药行业，可用于全面表征rAAV样品。OMNISEC包含一个示差折光检测器(RI)，紫外线全波长阵列检测器(UV-Vis 190-900 nm)和光散射检测器，仅需一次进样，可精确测量绝对分子量、聚集体比例、病毒滴度和实心率。与传统HPLC不同，测量过程不依赖柱保留体积，也不需要一系列标样进行色谱柱校正。图1显示了使用OMNISEC测量的CQA关键质量参数。02检测方法我们采用Empty和Full rAAV5两个样品作为分析案例。Full rAAV5 载有已知分子量为785 kg/mol的PFB-GFP ssDNA。经qPCR和ELISA测量方式可知，该样本的病毒滴度为2.5x1013。采用色谱柱P4000和P3000串联，对rAAV样品的进行色谱分离。由OMNISEC软件采集分析测试结果，其中硬件系统包含OMNISEC RESOLVE(包含泵、自动进样器和柱温箱)和OMNISEC REVEAL（包含示差、UV/PDA和直角90°/小角7°光散射检测器）。样品经过分离洗脱后，使用共聚物分析方法确定样品两种不同组分的浓度和分子量。计算方法如下：其中，ConcCapsid是衣壳浓度(mg/mL)，NA是阿伏伽德罗数，Mwcapsid是衣壳的分子量(g/mol)，ConcDNA是DNA浓度(mg/mL)，MwSeqDNA是来自序列的ssDNA的分子量。因此，通过计算出的颗粒浓度，可以很容易地得出样品实心率的百分比。 03检测结果案例一：图2显示了Empty rAAV5的三检测色谱图。RI信号由红色曲线表示，260 nm紫外信号由紫色曲线表示，直角光散射(RALS)信号由绿色曲线表示。样品包含四个部分：单体峰保留体积(RV)在12.5ml，碎片在16ml ，二聚体在10.5ml ，聚集体在8.5ml 。使用共聚物分析方法，可以得到表1结果。单体的分子量为3.84×106g/mol。衣壳的理论分子量为3.8×106g/mol，证实分析结果与预期相符。MW/Mn为分子量分布，描述了样品的分散性，单体和二聚体的值接近1，而聚集体和片段均显着高于1，表明在同一峰内有多个不同分子量的组分。Fraction of Sample表示样品组分百分含量，单体所占百分比为84.7%。Fraction of Protein显示了样品中衣壳的百分比，单体包含99.8%的衣壳。这证实了样本确实是Empty rAAV5。最后Empty rAAV5样品总滴度为5.91x1013Vp/ml。 案例二：第二个样品Full rAAV5的三检测器色谱图如图3所示。图中显示了与Empty rAAV5截然不同的色谱峰。分析色谱图可以看出，只包含两个不同的组分，其中单体峰，大概12.5ml RV处，包含Full 和Empty rAAV5的混合物，而聚集体出现在8ml RV处。测试结果见表2。对于主体的单体峰，计算出其混合物分子量为4.49×106g/mol，其中86%为衣壳。rAAV5的蛋白质组分的分子量为3.89×106g/mol，这与表1中Empty rAAV5 的数据一致。单体是总体的93.2%，样本的总滴度为7.48x1013VP/ml。其中单体包含78% Full rAAV5，22% Empty rAAV5。需要注意的是，这种分析方法假设样品要么是Full ，要么是Empty ，忽略部分装载或过度装载情况。Zetasizer Ultra纳米粒度及电位仪可以使用MADLS方式快速确定病毒滴度。从OMNISEC获得的数据与Zetasizer Ultra的粒子滴度进行了比较，两种技术之间有很好的相关性，见图4。另外，本文将Full rAAV5和Empty rAAV5以确定比例混合，来对Full rAAV5样品进行分析。表3显示了每个样品的预期值和实际值Full rAAV百分比。图5显示了期望值和实际值之间有很强的相关性，证实了OMNISEC确定样品实心率结果的可靠性。为了进一步评估OMNISEC对rAAV样品准确表征能力，我们进行了rAAV5样品的热应力稳定性研究，同时，基于ZS Ultra对聚集体的极高灵敏度，我们利用了ZS Ultra表征rAAV5聚集体的微小变化。测试条件是将rAAV5样品置于25oC到80oC之间进行测试。在不断加热过程中，在每个温度下测量rAAV5样品的粒径。在25oC和35oC之间，没有观察到粒径的变化。从35oC开始，可以观察到粒径开始增大，这表明样品开始发生变化(图6A)。30oC和45oC下的数据比较清楚地显示了这些样品之间的大小差异(图6B)。我们选择45oC条件，对OMNISEC进行进一步稳定性研究。将rAAV5样品在稳定在45oC，分别在2min 、5min、10min和15min后，取样品到OMNISEC上测试。图7色谱叠加图显示样品发生了明显的变化，聚集体百分含量增加，单体浓度含量降低。表4显示MW在此潜伏期内保持稳定，单体峰中的AAV百分比也保持稳定。结论：在这项研究中，我们展示了OMNISEC和Zetasizer Ultra在综合分析表征rAAV5样品的能力，以及将两者联合使用的应用价值。 OMNISEC多检测SEC系统将示差折光检测器、紫外全波长检测器、光散射检测器集成一体化设计，具有更高的灵敏度和准确度，通过一次进样分析，可提供各种血清型AAV样品的绝对分子量、衣壳大小、滴度、实心率、聚集体、片段和样品稳定性等关键质量属性。虽然这些参数中很多都可以使用传统的生物化学方法来确定，但OMNISEC提供了更为简单、可靠的方法，正逐渐成为一种表征分析AAV通用的技术工具。

答疑解惑时间：2009年4月3日---4月18日热烈欢迎yuen72先生再次光临仪器论坛进行讲座!　　自2008年以来我们已经举办了10期线上讲座,线上讲座用户参与度越来越高。线上讲座的第一期是从气相色谱开始，而我们的第十一期的线上讲座又回到气相色谱版面。本期讲座我们邀请了GC版面的专家yuen72先生就气相色谱定量方法进行了一期专题讲座。本期讲座共分两章，第一章是针对检测器的响应来进行详细阐述，第二章就对色谱定量方法来进行详细的解剖。　　再次感谢气相色谱版面的专家yuen72先生提供的丰富的讲座，也感谢yuen72先生与大家一起交流心得和经验。yuen72先生，高级工程师，有15年以上石化行业色谱分析经历，拥有安捷伦、岛津等公司多种色谱仪的操作经验，国家一级化工分析竞赛命题专家，从事气相色谱讲授多年，在多本化工分析工教材中主笔色谱部分。　　欢迎大家就气相色谱定量方法方面的问题前来提问，也欢迎高手前来与yuen72先生交流切磋～　　参与本期活动的地址：http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20090403/1819316/ 　　相关地址：　　论坛线上活动导览：http://www.instrument.com.cn/bbs/shtml/20081203/1618059/

水是生活必备品，对于水的质量监管重中之重。目前，我国瓶装和桶装饮用水质量如何？国家食品药品监督管理总局29日公布了新的抽检结果，不合格率为23.83%。　　本次专项抽检共抽检样品1863批次，样品涉及全国31个省(区、市)1197家生产企业，抽检项目包括菌落总数、致病菌、铅、镉、亚硝酸盐、溴酸盐等36项；共检出不合格样品444批次，抽检不合格率23.83%，涉及22项不合格项目，主要不合格项目为菌落总数、大肠菌群、酵母菌、霉菌等微生物指标和溴酸盐超标，微生物指标不合格样品大多是大桶水。 东南科仪小编看到，在总局公布的抽检不合格名单中，乐百氏等品牌名列其中，不合格项目被标明为“菌落总数”方面。 在桶装水的菌落总数检测中，我们从微生物检验国家标准可以了解到，实验过程中，高压灭菌器是一个必备仪器，然而选择安全性高、性能好的高压灭菌器非常重要。目前市面上质量口碑最好的是日本ALP高压灭菌器。 桶装水应如何让国人百分百放心呢？对于桶装水微生物超标情况，须加大桶装水质量检查力度，严格管理生产流程、加强包装容器和设备设施的清洗消毒；按要求存放桶装水，避免产品露天堆放或在阳光下暴晒；严格控制桶装水包装盖密封性，避免在运输、流通环节中可能导致的微生物污染等。 更多了解高压灭菌器的应用，请登录东南科仪www.sinoinstrument.com

寻求改进质量和提高效率的药品生产商对使用Sievers 总有机碳（TOC）分析仪进行清洁验证的兴趣越来越浓。大多数制药或生物科技厂家目前都配有TOC分析仪以符合美国药典USP、中国药典ChP的水检测要求，以放行纯化水或注射用水用于清洁或生产过程。因此，大多数厂家已经拥有用于清洁验证的TOC测定方法。TOC是FDA认可的一种方法①，用于评估所给样品中所有含碳的化合物，以确保所有设备的清洁都符合所建立的清洁标准。TOC分析允许开发一种方法，用于检测由化合物、分析物或残留物通过直接（擦拭）或间接（冲洗）取样而形成的碳浓度。潜在目标残留物包括药物活性成分（API）、药品赋形剂、蛋白质、蛋白质副产品和清洁剂或成分。1996年，国际协调会议（ICH）在FDA（CDER & CBER②）的协助下，创建了指导文件《Q2B：分析步骤的验证》。该文档的目的是为制药公司如何考虑清洁验证分析程序的各种验证特征提供参考。本文提供了与下列参数相关的多个实例，这些实例均与TOC方法验证有关，因而此应用说明呼应了Q2B指导文件：检出限和定量限确定分析物的准确度和精确度线性和回收百分比分析方法的稳固性③检出限和定量限检出限（LOD）用于评估何时信号是仪器噪音的结果还是化合物的反应。LOD被视为样本中分析物的最低检测量，但没有必要的足够的统计确定性来定量。定量限（LOQ）是对数据有意义还是无意义提供指导而建立的值。低于LOQ的仪器反应表示存在有机物，但无法定量实际浓度。分析仪中的读数高于已建立的LOQ则被视为可定量或有意义的数据。为了确定背景TOC的浓度并推导出用于清洁验证方案的LOD和LOQ，必须准备低TOC的水空白或棉签空白（如果适用）来计算实验中水和小瓶的碳成分。一旦已经从这些样本中确定了标准偏差，则通常是将标准偏差分别乘以3和10来获得LOD和LOQ④。确定分析物的准确度和精确度了解TOC分析方法验证中准确度和精确度的区别非常重要。准确度与测得值和分析物的真实值的接近程度相关。通常，准确度是计算仪器验证时测得的标准品的TOC浓度与预期的标准品TOC浓度的差值百分比（即+7%）所得。精确度通过标准偏差或RSD（相对标准偏差）度量。精确度与所给样本的多个分析结果相互之间的接近程度相关。在TOC方法验证期间，通过分析加了（添加）已知浓度的目标残留物的样品可以测定准确度和精确度，并可以评定差值百分比和RSD。ICH文件推荐至少在三个浓度级别上至少进行九次测定来评估准确度和精确度，这三个浓度级别涵盖了仪器的指定范围⑤。线性和回收百分比验证通常，线性测试校验仪器反应值是否与所研究分析物的浓度具有线性关系。图1演示了TOC浓度范围从1.00 ppm到7.50 ppm，牛血清白蛋白（BSA）的线性关系，其中含低TOC水的小瓶中加了已知浓度的BSA。这个例子演示了理论浓度（x轴）对所测得的浓度（y轴）作图所得到的两者之间的线性关系，y=(m)x+b。分析仪的反应值与所研究化合物的相关系数（R² ）应大于0.97。图1. 数据使用Sievers实验室TOC分析仪获得为了确定TOC方法用于分析目标残留物的适用性，有必要确定分析方法可达到的回收率。以下例子使用CIP-100制备已知TOC度的溶液，并将已知量的样本放到不锈钢片上，演示了直接取样方法。在BSA的例子中，在不锈钢片上添加三个递增浓度的CIP-100清洁液，擦拭不锈钢片，然后将此棉签放到已知量的低TOC水中。表1提供了从不锈钢片表面获得的回收百分比结果。分析方法的稳固性与实际回收率同样重要的是，用于确定所研究化合物回收百分比的TOC分析方法的重现性或稳健性。在清洁验证方法开发中稳固性是指结果不受方法中参数、或样本之间的小而微妙的变化的影响的能力。还提供了正常使用期间的可靠性指示（例如各个分析员的取样方法）。若希望得到高回收率，回收率一直保持可重复性也同等重要或更为重要，并在整个方法开发期间一直需要对回收率进行检测。表1和表2提供了CIP-100棉签回收率分析信息，由两个不同的分析员测试样本间的变化。要考虑的最后几点评估制药产品质量水平的测试步骤要遵从各项要求。具体到清洁验证来说，当前的药品生产质量管理规范［21 CFR 211.194(a)] 要求，用于评估药品是否符合已建立规范的测试方法必须满足准确度和可靠性的合适标准⑦。同时考虑到分析方法的验证是通过实验室研究建立的过程，本应用说明中说明的（TOC）方法的性能特征满足计划进行的分析应用的某些要求，例如符合药典的水排放和清洁验证。参考文献FDA网站：www.fda.gov/cder/guidance/cGMPs/equipmenthtm。药品评估与研究中心（CDER）和生物制品评估和研究中心（CBER)。Guidance for industry Q2B: Validation of Analytical Procedures. Methodology. November 1996. ICH, FDA, CDER, CBER.Taylor, John K. Quality Assurance of Chemical Measurements. Lewis Publishers imprint of CRC Press 1987.USP Validation of Compendial Methods.The Swab Recovery Determination of CIP-100 in Solutions by TOC Analysis Using a Sievers TOC Analyzer, Steris Corporation Analytical Method 1993. 7. 21 CFR 211.194(a) Laboratory Records.21 CFR 211.194(a) Laboratory Records.◆ ◆ ◆联系我们，了解更多！

液相色谱常见问题及处理方法 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 1、样品量不足，解决办法为增加样品量 2、样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子 3、样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 4、检测器衰减太多。调整衰减即可。 5、检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数 6、检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗。 7、检测池中有气泡。解决办法为排气。 8、记录仪测压范围不当。调整电压范围即可。 9、流动相流量不合适。调整流速即可。 10、检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。 为什么HPLC柱柱压过高 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。 1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查； 2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查； 3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。这时，如果柱压仍不下降，再检查； 4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高，请与厂商联系。 一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。 液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？ 1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。 2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子 如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化 漂移现象 1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定 2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡 快速变化现象 1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定 2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。 3、流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合 HPLC 仪器问题 1、 我的HPLC泵压明显的偏高，请问可能的原因？ 答：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成保护柱、柱前筛板或在线过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。 2、 基线不稳，上下波动或漂移的原因是什么，如何解决？ 答：a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氦气脱气 　　b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波在纯水中超20分钟左右，去处堵塞物 　　c.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封 　　d.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修 　　f.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器 　　g.检测器没有设定在最大吸收波长处；将波长调整至最大吸收波长处 　　h.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。 3、 接头处为何经常漏液，如何处理？ 答：接头没有拧紧；拧松后再紧，手紧接头以手劲为限，不要使用工具，不锈钢接头先用手拧紧，再用专用扳手紧1/4-1/2圈，注意接头中的管路一定要通到底，否则会留下死体积。接头被污染或磨损；建议更换接头。接头不匹配，建议使用同一品牌的配件。 4、 进样阀漏液是如何造成的？ 答：a.转子密封损坏；更换转子密封 　　b.定量环阻塞；清洗或更换定量环 　　c.进样口密封松动；调整松紧度 　　d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状） 　　e.废液管中产生虹吸；清空废液管 谱图问题 1、 问：造成峰拖尾的原因是什么，如何消除？ 答：a.筛板阻塞；反冲色谱柱、更换进口筛板 　　b.色谱柱塌陷；填充色谱柱 　　c.有干扰物质的存在；使用更长的色谱柱、改变流动相或更换色谱柱 　　e.流动相PH值不合适；调整PH值，对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰 　　f.样品与填料表面的溶化点发生反应；加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂或更改色谱柱 2、 问：造成峰分叉的原因是什么，如何消除？ 答：保护柱或分析柱污染；取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。样品溶剂不溶于流动相；改变样品溶剂，如果可能采取流动相作为样品溶剂。 3、 问：K值增加时，拖尾更严重，这是为什么？ 答：反相模式，二级保留效应； 　　a.加入三乙胺（或碱性样品） 　　b.加入乙酸（或酸性样品） 　　c.加入盐或缓冲剂（或离子化样品） 　　d.更换一支柱子 4、 问：保留时间的波动有几种可能的原因？ 答：温控不当；调节好柱温。流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有平衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。 液相色谱常用符号与术语表 ACN 乙腈 Acetonitrile AUFS 满量程的吸光度单位 Absorbance units, full scale As 峰不对称因子 B 二元流动相中的强溶剂；例如：反相HPLC的甲醇/水混合液中的甲醇 BSA 牛血清白蛋白（一种蛋白质） Bovine serum albumin CAF 咖啡因（中性溶质） Caffeine CRF 色谱响应因子 Chromatographic response function；色谱图总分离度的定量指标 dc 色谱柱内径（cm） DMOA 二甲基辛胺 Dimethyloctylamine DNB 2,4-二硝基甲酰（基） 2，4-Dinitrobenzoyl dp 色谱柱填料的粒度（cm） DRYLAB 液相资源公司（LC Resources INC.)的计算机模拟软件。DRYLAB I用于等度预测，DRYLAB G用于梯度预测 F 流动相的流速（ml/min） FC-113 1，1，2-三氟-1，2，2-三氯乙烷 GPC 凝胶渗透色谱法 Gel-permeation chromatography HA 酸性溶质，能电离出A- Hex 己烷 Hexane hr 二相邻谱带之间的谷高 HVA 高香草酸 Homovanillic acid h&rsquo 峰高 h1,h2 相邻谱峰1和谱峰2的峰高 IEC 离子交换色谱法 Ion-exchange chromatography IP 离子对 Ion-pair IPC 离子对色谱法 Ion-pair chromatography J 色谱峰强度参数 K&rsquo 所给谱峰的容量因子，k&rsquo =(tR-t0)/t0=tR&rsquo /t0，tR=t0(1+k&rsquo ) k 梯度洗脱过程中，某溶质的k&rsquo 的平均值或有效值 kw 以水做流动相k&rsquo 的外推值 k1,k2 相邻谱峰1和谱峰2的容量因子 L 色谱柱长度（cm） Lc 检测器流动池光路的长度（cm） M 溶质的分子量 MC 二氯甲烷 Methylene chloride MDST 混合设计统计技术 Mixture-design statistical technique；一种优化流动相的软件 MeOH 甲醇 Methanol MTBE 甲基叔丁醚 Methyl-t-butyl ether MW 溶质的分子量 N 色谱柱塔板数 NAPA N-乙酰普鲁卡因胺 N-Acetylprocainamide（碱性溶质） N0 检测器的基线噪音 ODS 十八烷基硅烷 Octadecylsilyl P 色谱柱的压力降[通常以巴（bar）表示，也用psi；另外，也用作柱极性参数 PA 普鲁卡因胺 Procainamide（碱性物质） PAH 聚芳香烃 Polyaromatic Hydrocarbon PESOS 优化流动相的计算机软件（美国Perkin-Elmer产品） pKa 溶质酸性常数的负对数；当pH=pKa时，溶质中有一半是电离的 Rk 保留值范围，Rk=（最末谱峰k&rsquo ）/（最初谱峰k&rsquo ） RRM 相对分离度图（通常N=10000） Rs 相邻二谱峰的分离度 S 当流动相中的%B改变时，测量溶质保留值的变化速率的参数 SAL 水杨酸 Salicylic Acid SEC 尺寸排阻色谱法 Size-exclusion chromatography S/N 信噪比 Signal to noise ratio t 分离时间（min）（样品进样时t=0） tp 梯度系统的滞后时间（min） TBA 四丁基铵离子 Tetrabutylammonium ion TEA 三乙胺 Triethylamine THF 四氢呋喃 Tetrahydrofuran tk 在用于校正等度洗脱溶剂强度的流动相离开梯度混合器时，梯度洗脱的时间 TLC 薄层色谱法 Thin-layer chromatography TMA 四甲基铵 Tetramethylammonium（盐） TMS 三甲基硅烷 Trimethylsilyl t0 色谱柱的死时间（min） tR 溶质的保留时间（min） tG 梯度时间（min），即梯度开始至结束的时间 t1,t2 相邻谱峰1和谱峰2的保留时间（min） ti 色谱图中第一峰的保留时间（min） tf 色谱图中最末峰的保留时间（min） △tg tf-ti tx (tf-ti)/2 UV 紫外光 Vm 色谱柱的死体积（mL），Vm=t0F VMA 香草扁桃酸 Vanillymandelic acid wm 化合物的进样量 w1,w2 相邻谱峰1和谱峰2于半峰高处（W1/2）的宽度（min） W1,W2 相邻谱峰1和谱峰2的基线宽度（min） W1/2 半峰高处的谱带宽度 xd,xe,xn 溶剂选择参数，分别用于测定溶剂的酸度、碱度和偶极性的程度 ? 分离因子，?=k2/k1 △? 梯度洗脱期间流动相成分的变化 ?o 溶剂强度参数 ? 化合物的克分子吸收系数 ? 流动相的粘度（Pa?s) ? 流动相中强溶剂的体积份数%B 二元流动相中强溶剂的体积百分比（%v） 液相色谱法简介 气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。当无纯物质对照时，定性鉴定就很困难，这时需借助质谱、红外和化学法等配合。另外大多数金属盐类和热稳定性差的物质还不能分析。此缺点可高效液相色谱法来克服。在经典液相色谱的基础上，引入了气相色谱的理论与技术，在70年代初建立了高效液相色谱分析法（以HPLC表示）。在常压下操作的液相色谱，分离一个样品往往长达几小时至几十小时，因此工作效率很低。人们曾对这种经典液相色谱法试用了柱前加压或柱后减压的办法来提高流速，以缩短分离时间，但是结果失败了。根据液相色谱理论，因为随着载液（流动相）流速的提高，板高则增大，所以柱效会显着降低。随着生产技术的提高，人们制成了细小（10?m）而高效的填充物，从而使柱效大大提高。但是随着填充物粒度的减小，柱压降显着增大，为了得到合理的载液流速，使用了高压；输液泵，使流速达到1~10mL/min。从而使分析一个多组分样品只需几分钟到几十分钟时间。随着高效固定相、高压泵和高灵敏度检测器以及电子技术和计算机技术的应用，70年代以业逐步实现了液相色谱分析的高效、高速、高灵敏和自动化操作。因此人们常称它为高效液相色谱或现代液相色谱，以区别于经典液相色谱。高效液相色谱法的分类与经典液相色谱法一致。按固定相的聚集状态不同分为液固色谱法和液液色谱法。按分离原理不同分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱法四类。 高效液相色谱所用基本概念： 保留值等色谱分析有关术语，以及分配系数、分配比、塔板高度、分离度、选择性等方面均与气相色谱相一致；高效液相色谱所用基本理论：塔板理论与速率理论也与气相色谱一致。因液相色谱以液体代替气相色谱中的气体作流动相，则速率议程H=A+B/?+C?。式中：纵向扩散项（分子扩散项）B/?对板高的影响与气相色谱不同，由于液相色谱中组分分子在流动相中的扩散系数Dm仅为气相色谱中的万分之一，因此纵向扩散项对板高的影响可以忽略不计。于是影响液相色谱的主要因素是传质项Cu。由图14&mdash 可知，气相色谱（GC）的流动相流速u增大时，板高H显着增大（即柱效显着降低），而液相色谱（LC）的流速增大时，板高增大不显着（即柱效降低不显着）。这说明高效液相色谱也有很高的分离效能，此外，气相色谱的载气权数种，其性质差别也不大，对分离效果影响也不大。而液相色谱的载液种类多，性质差别也大，对分离效果影响显着。因此流动相的选择很重要，并且在选择流动相对应注意以下几点：流动相对样品有适当的溶解度，但不与样品发生化学反应，也不与固定液互溶；流动相的纯度要高（至少分析纯）、粘度要小，以免带进杂质和组分在流动相中扩散系数下降；流动相应与所用检测器相匹配，不应对组分检测产生干扰作用。高效液相色谱不但具有高效、高速、高灵敏度的特点，还由于它的流动相（载液）种类比气相色谱的流动相（载气）多，因此可选用两种或多种不同比例的液体作流动相，从机时可提高选择性。此外，液相色谱的馏分比气相色谱易于收集。便于为红外、核磁等方法确定化合物结构提供纯样品。由于高效液相色谱法具有以上特点，它适于分离、分析沸点高、热稳定性差、分子量大（大于400）的气相色谱法不能或不易分析的许多有机物和一些无机物，而这些物质占化合物总数的75~80%。因此它已广泛用于核酸、蛋白质、氨基酸、维生素、糖类、脂类、甾类化合物、激素、生物碱、稠环芳烃、高聚物、金属螯合物、金属有机化合物以及多种无机盐类的分离和分析。但是，高效液相色谱的固定相的分离效率、检测器的检测范围以及灵敏度等方面，目前还不如气相色谱法。此外对于气体和易挥发物质的分析方面也远不如气相色谱法，因此高效液相色谱法和气相色谱法配合使用可互相取长补短，相辅相成。 1.分离原理 凝胶色谱，又称空间排阻色谱。它是利用某些凝胶对混合物各组分因分子量不同，其阻滞作用也不同而进行分离、分析的方法。凝胶色谱的分离要理和其它色谱法不同，它类似于分子筛的作用，但凝胶的孔径要比分子筛大得多，一般为几百至几千埃。色谱柱内填充具有一定大小孔穴的凝胶。当样品进入色谱柱后，不同大小的样品分子（图14&mdash 2中以黑点表示）随流动相沿凝胶颗粒（图14&mdash 2中以空心圈表示）外部间隙和凝胶孔穴旁流过，体积在的分子因不能渗透到凝胶孔穴里而得到排阻，因此较为顺利地通过凝胶柱而较早地被流动相冲洗出来。中等体积的分子产生部分渗透作用，小分子可渗透到凝胶孔穴里去而受阻滞，因有一个平衡过程而较晚地被流动相冲洗出来。这样，试样组分基本上按分子大小受到不同阻滞而先后流出色谱柱，从而实现分离目的。光凝胶色谱采用水溶液作流动相进，称为过滤凝胶色谱（HFC），而用有机溶剂为流动相时，称为凝胶渗透色谱（GPC）。 2．固定相 凝胶色谱的固定相凝胶，是含有大量液体（一般是水）的柔软而富于弹性的物质，是一种经过交联而具有立柱网状结构的多聚体。根据凝胶的交联程度和含水量的不同，分了软质、半硬质和硬质三种。软质凝胶（如葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶等）交联度低，膨胀度大，容量大，可压宿，不能用于高压（使用压力低于3.5kg/㎝2或更低），主要用于含水体系的常压凝胶色谱，半硬质凝胶（如苯乙烯一二乙烯基苯交联共聚凝胶），容量中等，渗透性较高，压力可用到70kg/㎝2。适用于非水溶剂流动相；硬质凝胶（如多孔硅胶、多也玻球等），膨胀度小，不可压缩，渗透性好，可耐高压，适于高流速下操作。 3．流动相 在凝胶色谱中，为提高分率效率，多采用低粘度、与样品折光指数相差大的流动相。常用的流动相有苯、甲苯、邻二氯苯、二氯甲烷、1，2一二氯乙烷、氯仿、水等。 高效液相色谱仪操作步骤： 1)、过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。 2)、对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)、打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)、进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)、有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)、调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)、设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)、进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)、关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)、填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)、流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)、柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)、所有过柱子的液体均需严格的过滤。 4)、压力不能太大，最好不要超过2000 psi。

安捷伦科技公司发布超临界流体色谱系统 2010 年 3 月 3 日，佛罗里达州奥兰多市，Pittcon 2010&mdash 安捷伦科技公司（NYSE：A）日前发布 Agilent 1200 系列分析型超临界流体色谱（SFC）系统。这套全新的系统将 Agilent 1200 系列高分离度快速液相色谱系统与 Aurora SFC Fusion A5 组合成完善的超临界流体色谱系统。Aurora SFC 系统公司与安捷伦科技公司已签署 OEM 协议，根据协议，安捷伦将销售该组合系统并提供支持。 与现有的 SFC 解决方案相比，全新 Agilent 1200 系列分析型 SFC 系统将检测灵敏度开创性地提高了十倍。该系统整合了 Aurora SFC Fusion A5 和安捷伦溶剂输送系统，二氧化碳流动相的高传输精度可与水和无机溶剂相同，从而得以实现这一突破性的灵敏度。该系统的动态范围大于 20000，研究者能够测量对映体过量百分比，还可以定量分析峰面积仅相当于主组分峰 0.05% 的杂质。基于二氧化碳的流动相扩散性能使仪器系统可采用常规规格的色谱柱、以中等操作压力就能实现高分离度和超速分离。 除了将灵敏度提高十倍以外，Agilent 1200 系列分析型 SFC 系统的操作成本仅为现有系统的十分之一至十五分之一，这是因为其使用标准级二氧化碳而非价格昂贵的液态SFC 级二氧化碳。此外，溶剂的用量极少，更加环保。 &ldquo SFC 的分析速度可比 HPLC 快三至五倍，是分析小分子药类的理想选择；还可成为手性化合物分离的可选方法，&rdquo Aurora SFC 系统公司的创始人和首席科学家 Terry Berger 博士说，&ldquo 安捷伦与我们紧密合作，将这些还有更多优势带给分析界。&rdquo &ldquo 我们非常荣幸能够与 Aurora 合作，将这项划时代的技术推向药学界和其他需要检测痕量手性化合物以及测量对映体过量的科学家，&rdquo 安捷伦液相色谱业务部高级市场总监 Stefan Schuette 说道，&ldquo 如今的 SFC 可视为 HPLC 技术的完美延伸。&rdquo Aurora SFC Fusion A5 连接到 Agilent 1200 RRLC 系统，将 Agilent LC 技术的稳定性、可靠性以及高性能性与 SFC 的高速、高分离度和灵敏度完美结合。安装是完全可逆的，安捷伦仪器仍可采用 RRLC 配置进行分析。 SFC 与正相 HPLC 相似，但绝大多数流动相为液态二氧化碳所代替。按比例增加每次可运行的样品数可以获得更高的流速，还可节省相应费用。 4 月起开始接受 Agilent 1200 系列分析型 SFC 系统的订购。有关更多信息，请访问 www.agilent.com 和 www.aurorasfc.com 。 关于 Aurora SFC 系统公司 Aurora SFC 系统公司提供基于新一代超临界流体色谱（SFC）技术的科学色谱仪器。Aurora SFC 系统公司由 Terry Berger 博士创建，由 SFC 专家组成的专业团队进行领导，自 1985 年以来在分析型和制备型 SFC 技术上取得了重大进展。作为唯一一家专注于 SFC 技术的科学仪器公司，Aurora 的宗旨是为客户提供创新型解决方案，建立性能、价格和易用性的全新标准。有关 Aurora 的更多信息，请访问网站 www.aurorasfc.com 。 关于安捷伦科技公司 安捷伦科技（NYSE：A）是全球领先的测量公司，是通信、电子、生命科学和化学分析领域的技术领导者，公司的 17,000 名员工在 110 多个国家为客户服务。在 2009 财政年度，安捷伦的业务净收入为 45 亿美元。要了解安捷伦科技的信息，请访问：www.agilent.com.cn 。

关于印发化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范的通知　　国食药监许[2010]455号　　2010年11月29日 发布各省、自治区、直辖市食品药品监督管理局(药品监督管理局)：　　为规范化妆品检测方法的验证程序，《化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范》已经国家食品药品监督管理局化妆品标准专家委员会审议通过，现予印发。　　国家食品药品监督管理局　　二○一○年十一月二十九日附录：《化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范》　　化妆品中禁用物质和限用物质检测方法验证技术规范　　为加强对化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究工作的技术指导，规范化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和验证工作，明确检测方法验证内容和评价标准，有效保证研究制定的检测方法具备先进性和可行性，特制定本规范。　　1 适用范围　　本规范规定了化妆品中禁用物质和限用物质检测方法研究和建立过程中检测方法验证内容、技术要求和评价指标。　　本规范适用于化妆品中禁用物质和限用物质检测方法的验证与评价。　　2 依据　　《化妆品卫生规范》　　3 释义　　3.1 本规范中所指化妆品中禁用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品禁用组分。　　3.2 本规范中所指化妆品中限用物质是指《化妆品卫生规范》中规定的化妆品组分中限用物质、限用防晒剂、限用防腐剂、限用着色剂、暂时允许使用的染发剂等。　　4 定义与术语　　4.1 被测物质　　是指本规范第3项规定的禁用物质和限用物质。　　4.2特异性　　在确定的分析条件下，检测方法所具备的检测和区分共存组分中被测物能力的特性。　　4.3 线性及线性范围　　4.3.1 线性　　是指在设计范围内检测响应值与样品中被测物质浓度或量成比例关系的程度。　　4.3.2 线性范围　　是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的检测结果，而且呈线性的被测物质浓度或量的变化范围。　　4.4检出限和定量下限　　4.4.1 检出限：被测物质能被检测出的最低量。　　4.4.2 定量下限：能够对被测物质准确定量的最低浓度或质量。　　4.5 检出浓度和最低定量浓度　　4.5.1检出浓度：按照检测方法操作，方法检出限对应的被测物质浓度。　　4.5.2最低定量浓度：按照检测方法操作，定量下限对应的被测物质浓度。　　4.6 精密度　　在确定的分析条件下，相同浓度被测物质的一系列独立测量结果的一致程度，包括日内精密度和日间精密度。　　日内精密度：同一天测定的精密度。　　日间精密度：不同天测定的精密度。　　4.7回收率　　提取回收率：是指在确定的分析条件下，回收到物质的实际浓度的百分比，以样品提取和处理过程前后被测物质含量百分比表示。　　方法回收率：是指在确定的分析条件下，被测物质测得值与真实值的接近程度，以百分比表示。　　4.8 实验样品　　为建立和验证检测方法而使用的化妆品。　　4.9 空白样品　　能够以可重复方式获得或制备的，不含被测物质的化妆品。　　4.10 稳定性　　在确定的分析条件下，一定时间内被测物质在一定溶剂或空白样品中的化学稳定性，包括日内稳定性和日间稳定性。　　日内稳定性：在一定溶剂或空白样品中的被测物质在正常实验条件或适宜样品保存的条件下放置一天的稳定性。　　日间稳定性：在一定溶剂或空白样品中的被测物质在正常实验条件或适宜样品保存的条件下放置多天的稳定性。　　5 检测方法验证的内容　　方法验证包括实验室内验证和实验室间验证。　　实验室内验证的内容一般包括：方法特异性、线性及线性范围、检出限和定量下限、检出浓度和最低定量浓度、精密度、准确度、回收率和实验样品检测。　　实验室间验证的内容一般包括：方法特异性、线性及线性范围、检出限、最低定量浓度、日内精密度、回收率和实验样品检测。　　6 检测方法验证的技术要求　　6.1 实验室内方法验证　　6.1.1特异性　　所采用的检测方法需要克服任何可预见的干扰，特别是来自实验样品中除被测物质以外的其他组分的干扰，一般对具有代表性的空白样品和空白样品加被测物质的样品，按照确定的样品前处理方法处理后，进样检测分析，考察实验样品中除被测物质以外的其他组分对被测物质的测定有无干扰。　　6.1.2 线性及线性范围　　线性考察：制备至少5个系列浓度(不包括零点)的被测物质标准品溶液，进行检测分析，记录相应的信号响应值，以被测物质标准品溶液的浓度为横坐标(x)、信号响应值为纵坐标(y)建立标准曲线，进行相关性分析，并回归得到线性方程和相关系数(r)。呈线性的被测物质的浓度或量的变化范围确定为线性范围。　　方法线性考察：在空白样品中加入被测物质标准品，制备成至少5个系列浓度(不包括零点)的样品溶液，进行检测分析，记录相应的信号响应值，以被测物质的浓度为横坐标(x)、信号响应值为纵坐标(y)建立方法标准曲线，进行相关性分析，并回归得到线性方程和相关系数(r)。呈线性的被测物质浓度的变化范围确定为线性范围。　　必要时，信号响应值可进行数学转换，再进行回归计算。　　6.1.3 检出限和定量下限　　检出限和定量下限考察见《化妆品卫生规范》。　　6.1.4 检出浓度和最低定量浓度　　按照检测方法操作，能够从实验样品背景中区分出被测物质响应信号的最低浓度为检出浓度，能够对实验样品背景中被测物质进行准确定量的最低浓度或质量为最低定量浓度。　　6.1.5 精密度　　6.1.5.1日内精密度　　通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，其中：高浓度的标准溶液应接近标准曲线或方法标准曲线的最高点(下同) 低浓度的标准溶液应接近最低定量浓度(下同)，于同一日内测定至少6次，记录被测物质的信号响应值，考察该组测量值的彼此符合程度，以相对标准偏差(RSD)表示。　　6.1.5.2日间精密度　　通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，于不同日测定，记录被测物质的信号响应值，考察该组测量值的彼此符合程度，以相对标准偏差(RSD)表示。　　6.1.5.3相对标准偏差(RSD)的计算， 其中：　　6.1.6 回收率　　6.1.6.1提取回收率　　采用在空白样品或实验样品中添加高低两种浓度被测物质标准品的方法测定，记录被测物质的信号响应值，代入标准曲线计算被测物质的浓度，计算提取回收率。　　6.1.6.2方法回收率　　采用在空白样品或实验样品中添加高低两种浓度被测物质标准品的方法测定，记录被测物质的信号响应值，代入方法标准曲线计算被测物质的浓度，计算方法回收率。　　6.1.6.3回收率的计算公式　　回收率= (样品中被测物质的测定量-样品中被测物质的原有量)/实际添加量×100%　　6.1.7 稳定性　　6.1.7.1日内稳定性　　通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，在正常实验条件或适宜样品保存的条件下，在不同时间点分别测定，代入标准曲线或方法标准曲线计算被测物质的浓度，并计算其准确度和RSD值，考察被测物质在溶液或空白样品中放置一天内的稳定性。　　6.1.7.2日间稳定性　　通常至少采用高低两种适宜浓度的被测物质或在空白样品中加入被测物质的标准溶液，在正常实验条件或适宜样品保存的条件下，连续多天测定，代入标准曲线或方法标准曲线计算被测物质的浓度，并计算其准确度和RSD值，考察被测物质在溶液或空白样品中放置多天的稳定性。　　6.1.8 实验样品检测分析　　选择具有代表性的实验样品，按照《化妆品卫生规范》规定取样，严格按照检测方法进行检测分析。　　6.1.9 禁用物质阳性结果判定依据考察　　化妆品中禁用物质阳性结果必须采用适宜的、可靠的方法进行确证。采用色谱-质谱技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，按照确定的分析条件，考察实验样品与加入被测禁用物质的空白样品的质量色谱峰保留时间以及浓度相当时的定性离子的相对丰度比的一致性。采用其他技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，应建立能够保证确证结果正确性的依据和评价指标。　　6.2 实验室间方法验证　　6.2.1 参加检测方法验证的机构或实验室　　参加检测方法验证的机构或实验室必须是按照国家有关认证认可的规定，取得资质认定，其检测人员、环境条件、设施设备等应满足检测方法验证的要求。每种检测方法参加方法验证的检测机构或实验室应不少于3家。　　6.2.2 方法验证样品的提供　　方法建立机构或实验室应向参与方法验证的机构或实验室提供一致的实验样品、空白样品和标准品，并应注意样品的被测物质的本底情况。　　6.2.3 方法验证技术要求　　实验室间的具体验证技术要求同6.1实验室内方法验证。　　6.3方法验证内容的评价指标　　6.3.1特异性　　实验样品中共存物质应对被测物质的测定结果无干扰。　　6.3.2 线性及线性范围　　线性范围适宜，能够满足化妆品中被测物质测定要求，且线性良好，线性相关系数≥0.99。　　6.3.3 检出限和定量下限　　具有足够低的检出限和定量下限，能够满足化妆品中被测物质测定要求。　　6.3.4 检出浓度和最低定量浓度　　具有足够低的检出浓度和最低定量浓度，能够满足化妆品中被测物质测定要求。通常要求方法最低定量浓度的精密度的相对标准偏差(RSD)应不超过20%，方法回收率要求在80%-120%之间。　　6.3.5 精密度　　根据化妆品中被测物质的含量及确定的分析方法，精密度应能够满足化妆品中被测物质的测定要求，通常日内和日间精密度的相对标准偏差(RSD)应不超过表1所列水平。特殊情况应予以说明。　　表1：精密度的接受范围被 测 物精密度RSD含量 ≤10 µ g / kg20%10 µ g / kg ＜ 含量 ≤ 100 µ g / kg15%100 µ g / kg ＜ 含量 ≤ 1000 µ g / kg10%含量 ＞1000 µ g / kg5%　　6.3.6 回收率　　根据化妆品中被测物质的含量及确定的分析方法，回收率应能够满足化妆品中被测物质的测定要求。通常提取回收率要求在85%-115%之间，如果提取回收率超出85%-115%的范围，则要求方法回收率在85%-115%之间。特殊情况应予以说明。　　6.3.7 稳定性　　要求被测物质的标准溶液或前处理后的样品在稳定时间内使用和测定。　　6.3.8 实验样品分析结果　　在重复条件下两次独立测定结果的标准偏差在已确定分析方法的精密度接受范围内。　　6.3.9 禁用物质阳性结果判定依据　　采用色谱-质谱技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，实验样品与加入被测禁用物质的空白样品的质量色谱峰保留时间要求一致，至少两组浓度相当时的定性离子的相对丰度比一致，定性离子的相对丰度比的最大偏差应不超过表2的规定。采用其他技术确证化妆品中禁用物质阳性结果时，要求满足阳性结果确证依据和评价指标。　　表2：禁用物质阳性结果判定时相对离子丰度比的最大允许偏差相对离子丰度比（k）k ≥50%50 % k ≥ 20 % 20 % k ≥ 10 %k≤ 10 %最大允许偏差±20%±25%±30%±50%　　6.3.10 实验室间验证结果的评价　　实验室间验证结果应相符。

卡林型金矿的显著特征是金在载金矿物（主要为含砷黄铁矿）中常以晶格金（Au+）和纳米级包体金（Au0）的形式赋存，因无法通过光学显微镜观察而被称为“不可见金”。“不可见金”的量化表征是卡林型金矿研究的热点，理解“不可见金”赋存状态有利于改善卡林型金矿这种难处理金矿的选冶，以及完善金的微观成矿机制。然而，“不可见金”难以通过常规方法进行分离和分析，目前关于卡林型金矿中不同赋存状态金量化表征的工作鲜有发表，该研究方向急需分析技术与方法的突破。　　基于此，中国科学院地球化学研究所研究员万泉及其团队采用逐级酸蚀与XPS相结合的手段建立了有效且可靠定量表征卡林型金矿中金赋存状态的方法，并以贵州贞丰水银洞金矿样品为例，获得了一系列金赋存状态的定量化数据。该方法采用非氧化性酸去除了造成XPS金信号屏蔽的贫金层（位于含砷黄铁矿最外层）以及造成XPS金信号干扰的Mg（主要来源于白云石），并首次采用XPS获得了“不可见金”的定量数据，包括Au、As含量、Au+与Au0的比例、Au0纳米颗粒的尺寸以及上述参数随黄铁矿颗粒不同深度的变化规律。该方法通过检测酸蚀溶液中的Fe、As、Au含量，计算出各次酸蚀被溶解的表层黄铁矿中Au、As的含量，并估算出被溶解黄铁矿的厚度。除最表面氧化层外，非氧化性酸在黄铁矿上的刻蚀深度可以稳定控制在纳米级范围内。　　黄铁矿中含量的最表面约几百纳米厚的黄铁矿中存在Au含量极低的贫金层，其Au含量远低于XPS的常规检出限（~0.1 at%）且厚度远大于XPS的检测深度（~10 nm），因而贫金层的存在是XPS无法直接获取金信号的原因。酸蚀可有效去除黄铁矿表面的贫金层并暴露出内部的富金环带，首次酸蚀即可去除黄铁矿表面的氧化层。根据酸蚀前后样品Au 4f谱图分峰拟合结果，水银洞金矿样品中金同时存在Au+与Au0两个价态。图2(a)中未经酸蚀处理的黄铁矿的Au 4f谱图中存在显著的Mg 2s信号且Au信号极弱，导致Au 4f信号几乎被Mg 2s掩盖。酸蚀后样品中绝大多数Mg被去除，Au 4f谱峰表现出良好的信噪比，验证了白云石会对XPS测Au造成信号干扰（图2(b)）。根据Au0 4f7/2 的结合能大小，推测本样品中纳米金颗粒的粒径绝大多数小于6 nm，最小达1-2 nm。根据Au 4f谱图分峰拟合的峰面积，研究估算出Au0和Au+在样品中的百分占比（图3），其中Au0的百分比变化范围可从31.2至59.8%，Au的物种在同一样品的不同测试位置之间有轻微的分布不均。　　该工作获得了卡林型金矿中“不可见金”具有合理统计意义的化学状态，有助于卡林型金矿研究，并且该分析方法有望用于分析低品位金矿石以及其他地质样品。　　相关研究成果近期以封面文章形式发表在Journal of Analytical Atomic Spectrometry上。研究工作得到中科院战略性先导科技专项（B类）、国家自然科学基金与贵州省特色重点实验室项目的联合资助。

图1. 《Journal of Analytical Atomic Spectrometry》封面文章导读卡林型金矿（Carlin-type gold deposit)，于20世纪60年代初期在美国西部内华达州的卡林镇被发现，从而得名，其显著特征是金在载金矿物（主要为含砷黄铁矿）中常以晶格金（Au+）和纳米级包体金（Au0）的形式赋存，因金无法直接通过光学显微镜观察而被称为“不可见金”。“不可见金”赋存状态的研究对卡林型金矿的选冶及其微观成因机制有重要的指示意义，然而“不可见金”的定量表征仍然存在较大难点。中国科学院地球化学研究所万泉研究员及其团队采用逐级酸蚀与XPS分析相结合的手段建立了卡林型金矿中金赋存状态的定量表征方法，首次通过XPS分析成功获得了“不可见金”的量化分布规律，相关研究成果以封面文章形式发表于《Journal of Analytical Atomic Spectrometry》期刊。图2. 期刊首页截图及摘要译文分析利器图3. 岛津AXIS Supra+ X射线光电子能谱仪及其五大核心技术- 研究成果概览 -黄铁矿表面通常覆有厚达几百纳米的贫金层（该层主要为FeS2），通过EPMA（电子探针）测试可得到S、As、Au元素分布，如图4，可见Au含量较低且主要存在于黄铁矿中贫金层下的富As区域。图4. 黄铁矿中微量Au的确认及其在富As环带中的分布地质矿产领域中，黄铁矿中Au化学状态的研究对卡林型金矿的选冶及其微观成因机制有重要的指示意义。一般情况下，表面贫金层厚度远大于XPS的检测深度（~10 nm），且其中金含量远低于XPS的元素检出限（~0.1 at%），因此直接测试几乎得不到有效的Au信号，无法进行价态分析。中科院地化所矿床室万泉研究员及其团队以贵州贞丰水银洞金矿样品为例，采用非氧化性酸简单有效地去除了屏蔽XPS金信号的贫金层（位于含砷黄铁矿最外层）以及干扰XPS金信号的含镁矿物（如白云石），首次采用XPS获得了“不可见金”的一系列重要定量数据。图5.酸蚀前样品Py0 (a)和酸蚀后样品Py1 (b)上三个不同位置获得的Au 4f XPS谱图图5(a)中未经酸蚀处理的黄铁矿的Au 4f谱图中存在显著的Mg 2s信号干扰且Au信号极弱，导致Au 4f信号几乎被Mg 2s掩盖。酸蚀后样品中绝大多数含Mg矿物被去除，Au 4f谱峰表现出良好的信噪比（图5(b)）。根据Au0 4f7/2的结合能位置可推测出本样品中纳米金颗粒的粒径绝大多数小于6 nm，最小可达到1-2 nm。根据Au 4f谱图分峰拟合的结果可估算出Au0和Au+在样品中的百分占比（图6），其中Au0的百分比变化范围可从31.2%至59.8%，Au的物种和含量在同一样品的不同深度之间有轻微的分布不均。图6. 利用 Py1-Py4的Au 4f XPS光谱分峰拟合估算的Au+和Au0的百分占比该工作获得了卡林型金矿中“不可见金”具有合理统计意义的化学状态，有助于卡林型金矿成矿作用的研究，并且该工作建立的分析方法有望应用于分析低品位金矿石以及其他地质样品。中国科学院地球化学研究所万泉研究员表示：由于样品中金含量低、分布不均且谱峰间存在互相干扰，因此利用XPS表面敏感的特征结合合理的样品表面前处理方法才能得到较好的测试结果，借助岛津XPS仪器高功率的特性，改进测试条件得到了信噪比较好的谱峰数据，成功实现了金价态的定量分析，使得卡林型金矿的研究领域取得了突破性进展，期待今后能与岛津共同开发其他地质相关样品的表征研究。本文内容非商业广告，仅供专业人士参考。如需深入了解更多细节，欢迎联系津博士 sshqll@shimadzu.com.cn撰稿人：崔园园

4月21-23日，“第22届全国色谱学术报告会及仪器展览会”在上海光大会展中心国际大酒店隆重举行。本次大会云集了众多色谱领域大咖和专业学者，吸引了1000多位专业观众共同分享交流我国在色谱及相关技术领域的研究、开发和应用成就。 ASDevices公司结合先进的创新技术，在气相色谱和气体分析领域拥有40多年的创新历史，本次应邀参会，为广大色谱工作者带来耳目一新的创新产品和专业解决方案。 高端专业报告 22日，亚太区总经理Frank Zhu在分析检测专题论坛为大家带了《增强型等离子检测器介绍和应用》的专业报告，重点介绍了核心传感技术---增强型等离子放电技术Epd及其在气相色谱中的实例应用。 作为等离子发射光谱技术的全球发明者，ASD推出的Epd技术是气相色谱应用开发的一个量子式跳跃，克服了原有技术的许多不足之处，扩展了很多新的应用和性能，用这个扩展平台可以针对目标应用的简单或复杂程度来选择所需要的模块和检测方式（发散、示踪、能量平衡），从而配置一个定制化、低成本的检测器解决方案。精彩绝伦的报告引起与会者浓厚兴趣，纷纷来到展台进行深入了解。部分明星产品展示▉可扩展的增强型等离子体放电检测器SePddSePdd不仅仅是一个检测器，还是在增强型等离子体放电技术专利基础上为OEM和系统集成商设计的可充分扩展的开发套件。产品特点替代DID,PDID,ECD,FPD,FID和TCD检测器，多种检测模式用于本底校正的差异化检测模式等离子体可以随时开／关，允许反应背景气流过而没有任何负面影响能够在氩，氦，氮，氧，氢的载气情况下运行ppb到百分比检测范围▉创新气相色谱阀PLSV系列GC阀具有颠覆性阀门技术，可实现隔膜阀的使用寿命和恒定的压降以及旋转阀的简单性，采用全新的嵌入滑阀技术取代了传统转子的内插件，减少了密封表面积，满足检测要求的高标准。产品特点提供4、6、10、12通(14通可选) 样品流选择版本内置定量环版本，提供三种温度范围版本提供两种压力范围版本可选择不同材料的内插件▉模块化高端气相色谱Ka PLUS8000Ka PLUS8000拥有被中国专利局认可的等离子放电检测器发明专利，是等离子体发射光谱技术和气相色谱的技术领先和创新产品。产品特点具有简化维修概念的工业在线／实验室色谱。专利全模块化并可独立控温柱温箱，独特的电子压力调节器和无死区的色谱Liplock接头。升级换代的增强型等离子放电检测器(EPD)，是FID,PDHID,PED,RGD和其它检测器的自然替代产品；有发射模式和示踪模式两种测量模式，可根据所选模式测量波长和处理算法，可以量化从ppt到％的宽范围浓度，同时实现更低的检测下限。具有先进的数字信号处理平台，独特的嵌入式色谱平台和软件。 同时紧凑型过程气相色谱仪、氧氩分离色谱柱、专利无死区色谱接头、5N秒变9N的气体纯化器等高端技术产品也异常吸睛，与会者在展台深入了解沟通、试用体验，共同探讨针对复杂基质如何选择合适的检测器及相关检测方案等新技术、新应用、新发展。 ASDevices公司具有深厚的行业经验，在将新的颠覆性技术推向市场方面拥有良好的记录，目前拥有了100多项国际专利。本次成功亮相，得到了专家们的高度认可，为广大色谱工作者提供了可靠的参考！

赛默飞与合作实验室成功开发标准化hrms1-dia方法关注我们，更多干货和惊喜好礼癌症moonshot计划启动后，出现了许多精zhun医学项目，该计划旨在通过改善早期发现，患者分类以及监测治疗效果和复发来增强癌症患者的管理，从而加速癌症研究。有关蛋白质型的信息，定义为蛋白质组的实际状态，其数量，时间和空间的表达以及与基因型的相关性（所谓的蛋白质组学），将大大增加我们对包括癌症在内的各种人类疾病的理解。在这一过程中，迫切需要一种质谱分析策略，以提供可靠且可重现的定量数据。orbitrap已经成为蛋白质组学实验室的金标准，赛默飞全球高级产品经理轩玥博士联合多个实验室瞄准数据非依赖性质谱采集（data-independent acquisition，dia）的非标记定量蛋白质组方法，用于支持精zhun医学的高通量临床蛋白质组学分析。作者首先建立了高通量、简化的hrms1-dia工作流程，该工作流程在随后的11个实验室中连续7天测试和集中的数据处理；开发了一种质量控制（qc）系统，以监视整个工作流程的性能，即时发现仪器性能的变化，并在必要时指导故障排除，确保维持较高水平的数据质量，以实现大型临床队列研究所需的通量；在整个研究过程中，每个实验室都使用一套完善的非标记定量样品对定量性能进行评估，从而可以进行分布式和纵向数据分析，并可以在大数据分析时进行比较和标准化。 简化的hrms1-dia工作流程进行数据采集和分析 ?鉴定qc:piercetm hela protein digest standard?定量qc:sample a(20%e.coli,15%yeast和65%hela),sample b(4%e.coli,30%yeast和65%hela)?色谱条件:es806(acclaim pepmap rslc c18, 2 μm,100 ?,150 μm i.d. × 150 mm),60min色谱梯度，流速1.2μl/min?质谱:qehf?dia数据采集方法:hrms1-dia，1个cycle包括3个r120k ms1扫描，每个ms1扫描之间穿插18个15 da 隔离窗口的r30k dia ms / ms扫描（总共54个dia ms/ms扫描）。高分辨的一级用于定量分析，二级用于肽段鉴定。此处采用的hrms1-dia方法中，ms1扫描周期速率（1.7s）与ms2循环时间无关，可确保有足够数量ms1扫描的数量保证定量的重现性。相比之下，ms2采集时设置相对较窄15da的隔离窗口，能够最da限度的提高肽检测效率。?数据分析:11个实验室的数据统一上传至thermo cloud云平台，spectronauttm软件提取dia色谱峰。hrms1-dia实验流程（点击查看大图）鉴定qc质控标准每个实验室根据鉴定qc进行系统质控，作者提出了多个质控的指标，蛋白质组学实验室可以作为参考，包括色谱的峰宽、ms1和ms2采集的点数、precursor和蛋白数目以及定量的cv。只有符合qc相应的指标才能继续实验。如果不满足条件，需要排查是色谱问题还是质谱问题。定量qc的质控定量qc的目的是考察hrms1-dia定量流程的准确性，samplea/b中hela的理论比例是1:1，yeast是1:2，e.coli是4:1。作者提出了两种方法对定量qc进行质控：（1）定量真实比值与理论比值的偏差，不超过25%；（2）定量的重现性，cv小于25%。 hrms1-dia的重现性 sample a和sample b在11个实验室进行7天的数据采集，一共产生了240个dia数据，共鉴定超过7600个蛋白，其中4000个人蛋白，2000个酵母蛋白以及400个e.coli蛋白。首先看单个实验室7天内定量的重现性，平均每个实验室每天均可以分别定量超过6500个蛋白；然后看实验室间的重现性，5784个蛋白被每个实验室定量到，4564个蛋白被每个实验室每天定量到。hrms1-dia定量的重现性。（a）每个实验室平均定量到的蛋白，共定量的蛋白，共同定量到的蛋白数目和百分比；（b）各个实验室组合中共同定量的蛋白质数量。（点击查看大图） 如何获取hrms1-dia方法？ 点击文末左下角阅读原文，可查看本实验hrms1-dia全部的方法，包括色谱、质谱和数据分析方法，有兴趣的老师可以查阅。文章中使用的液相色谱、液相色谱柱等备件我们已经做成了相应的货号，可以和当地销售联系。 详细hrms1-dia方法 hrms1-dia工作流助力精zhun医学转化研究（上）hrms1-dia工作流助力精zhun医学转化研究（下） “码”上下载 填写表单即刻获取【赛默飞临床组学研究解决方案】如需合作转载本文，请文末留言。 end扫描下方二维码即可获取赛默飞全行业解决方案，或关注“赛默飞色谱与质谱中国”公众号，了解更多资讯+了解更多的产品及应用资讯，可至赛默飞色谱与质谱展台。https://www.instrument.com.cn/netshow/sh100244/

大家好，本栏目供稿来自于中山大学李惠琳课题组，以后将定期为大家带来质谱新技术、新方法领域的前沿文献与工作交流，欢迎评论互动。本周为大家分享一篇发表在mAbs上的文章，Non-targeted characterization of attributes affecting antibody-FcγRIIIa V158 (CD16a) binding via online affinity chromatography-mass spectrometry1，通讯作者是美国加利福尼亚州Amgen公司的Pavel V. Bondarenko。Fcγ受体（FcγR）是免疫球蛋白（Ig）超家族的膜结合糖蛋白，存在于免疫系统的许多造血细胞表面。这些受体可以结合IgG免疫复合物，在免疫反应的调节中发挥重要作用。FcγRIIIa（CD16a）是一种低亲和力Fc受体，与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）有关。研究表明FcγRIIIa结合亲和力与治疗性单克隆抗体（mAb）的ADCC效力之间存在良好的相关性，测量这种相互作用的亲和力是体外评估单克隆抗体疗法ADCC效力的一个重要部分。Fc上保守N糖基化位点（N297）的聚糖组成对CH2结构域的构象动力学和灵活性有显著的影响，并进一步关系到该结构域与Fcγ受体的亲和力，这种亲和力的差异为区分单克隆抗体糖型提供了一种独特的方法。在文章中，作者描述了一种使用固定化FcγRIIIa受体的亲和层析方法，通过在线质谱（MS）和离线馏分收集，在单个非靶向大规模实验中研究影响FcγRIIIa亲和性的因素。一、基于Fcγ受体亲和层析的抗体糖型鉴别图1显示了利妥昔单抗的糖型分离。从个体保留时间来看，半乳糖基化在与受体的结合亲和力中起着重要作用，更高水平的半乳糖导致亲和力增加（图1b）。几种糖型在提取质谱图（XMC）中含有多个峰（图1c），例如G1F/G1F。这是因为可能存在质量相同的位置异构体（例如G1F/G1F和G0F/G2F含有相同数量的糖，但排列方式不同）。此外，一次只有一个Fc-聚糖与Fc-γRIIIa相互作用，因此不对称糖基化单抗的一侧比另一侧具有更高的亲和力，这可以表现为两个不同的亲和力峰。此外还检测到两种无核心岩藻糖基化物种（M5/M5和G0F/G0）。据报道，这些物种的亲和力和ADCC效价显著增加，但这似乎并未反映在本实验中的保留时间上。最值得注意的是，据报道，M5/M5糖型对FcγRIIIa的亲和力增加了4-6倍，但在所有糖型中洗脱时间最早。仅观察到相对于岩藻糖基化G0F/G0F，无岩藻糖基化G0F/G0糖型的亲和力略有增加，保留时间偏移的幅度与G1F/G1F糖型相当，而不是文献中报道的增加10-50倍。作者推测，与大多数已发表的结合研究中使用的糖基化FcγRs相比，这种偏离预期保留行为的现象可能源于柱上的FcγRIIIa受体是无糖基化的。观察到具有唾液酸化的抗体分子的洗脱时间比其无唾液酸化的对应物稍早。例如，在图1c中，糖型G0F/S1G1F的洗脱时间与G1F/G1F相同。G0F/S1G1F的结构类似于G0F/G2F，在一个半乳糖上带有末端唾液酸，但其洗脱时间更早（类似于G1F）。这表明唾液酸残基可能阻止或抑制第二半乳糖与FcγRIIIa的相互作用，使其更类似于G1F聚糖。图1 利妥昔单抗的FcγRIIIa亲和LC-UV-MS表征。（a） 整个样品的去卷积质谱；（b） 280 nm紫外检测的LC色谱图。星号表示A1G0F的洗脱。（c） 提取的质谱图（XMC）用于检测含有M5/M5、G0F/G0F、G0F/G1F、G1F/G1F、G1F/G2F和G2F/G2F聚糖的单个完整抗体分子。二、亲和层析结果与AlphaLISA结合分析结果的相关性 图2显示了根据平均加权保留时间（根据峰面积加权）排列的四种治疗蛋白质的亲和色谱图。图2b和c显示了平均保留时间与AlphaLISA结合试验的相对亲和力百分比之间的线性相关性。这两种试验报告了类似的趋势，其中糖基化Fc融合蛋白显示无结合，mAb3（IgG2）显示非常弱的结合，与mAb1相比，mAb2（具有高水平半乳糖基化的IgG1）的结合增加。这为使用FcγRIIIa亲和层析方法表征影响结合的产品属性的影响提供了验证。图2 （a） 四种具有代表性的治疗蛋白模式的FcγRIIIa亲和色谱图：无糖基化Fc融合蛋白（紫色）、IgG2单抗（红色）和两种具有不同糖基化模式的IgG1单抗（蓝色和绿色）。（b） 相关图显示了相对结合亲和力与平均加权保留时间之间的关系，去除了异常样本。（c） 相对结合亲和力与加权保留时间的相关图，包括异常样本。三、受体亲和力的差异导致IgG亚类效应器功能的变化IgG亚类（IgG1、IgG2、IgG3和IgG4）的Fc区域具有高度的序列同源性，但在几个关键残基上有所不同，这决定了它们与各种Fc受体的亲和力。为了探究不同Fc结构域的角色，作者对具有相同Fab结构域，但Fc结构域分别来自IgG1、IgG2和IgG4的mAb2变体，以及一种工程化稳定效应器无功能变体（SEFL2）进行亲和分离（图3b）。SEFL2变体是一种无糖基化IgG1变体（N297G），带有额外的工程铰链二硫键，设计为不具有ADCC功能。保留时间数据表明，工程SEFL2-IgG1模式的亲和力最低，其次是IgG2、IgG4，然后是IgG1，这些样品的整体洗脱顺序与已有文献报道的结果一致。然而，IgG4变体的洗脱时间似乎高估了结合亲和力，洗脱时间仅略早于IgG1变体。这种增加的表观亲和力或许与柱上受体的糖基化性质有关，不应用于评估FcγRIIIa对IgG4亚类单克隆抗体的亲和力。图3 （a） 人类IgG重链CH2区域的对齐序列（EU编号）。参与FcγRIIIa结合的IgG Fc残基以绿色突出显示（本研究中通过实验测量），蓝色和红色突出显示（文献报道），二硫键以黄色突出显示。与IgG1序列不同的残基以粗体显示。（b） 具有相同Fab区和不同Fc区的四种mAb2变体的紫外色谱图（λ=280 nm），对应于IgG1（蓝色）、IgG2（品红）、IgG4（褐红色）和带有N297G突变的IgG1 SEFL2（黑色）。插图显示了AlphaLISA测量的相对FcγRIIIa结合亲和力值。亲和力是相对于mAb2参考标准物质的IgG1变体测量的。四、二硫化物异构体对IgG2单抗中FcγRIIIa结合的影响鉴于IgG2亲和色谱图的异质性，作者选择具有二硫化物变体的IgG2（mAb3）进行进一步表征。该IgG2单抗存在几种天然的二硫键结构异构体，它们可以影响疗效和Fc受体结合行为。对二硫化物异构体的反相和FcγRIIIa亲和分离的并排比较（图4）。有趣的是，亲和分离方法中使用的类天然条件仍然能够区分这些结构异构体，这表明这些异构体对Fc和FcγRIIIa的结合亲和力也存在一定影响。图4 （a） 在280 nm处进行紫外检测的反相色谱图，显示天然产生的IgG2二硫化物变体和富集IgG2-a和IgG2-B的纯化样品的混合物分离。（B）相同样品的FcγRIIIa亲和紫外色谱图，显示IgG2二硫化物亚型的部分分辨率。六、在应力条件下识别对FcγRIIIa结合产生负面影响的修饰对受体结合位点或其附近的残基进行化学修饰可影响抗体-受体相互作用的亲和力，从而导致ADCC和疗效的变化。这种修饰可以在各种应激条件下诱导。本研究使用热应激利妥昔单抗样品（40°C，持续6周），通过LC-MS/MS肽图谱检测到200多个修饰。对比具有温度应力的样品和保持在4℃的对照样品的亲和色谱图，每个样品的主峰收集为四个组分（F1–F4）。40°C下的应力导致FcγRIIIa结合的最低亲和组分F1的峰面积略有增加（2%~4%）。对每个收集的组分进行肽图谱绘制，以确定组分中修饰相对百分比的趋势（图5）。馏分被分别赋值为0.1、0.2、0.3、0.4，以便斜率与R2进行比较，并且斜率的R2与绝对值之和可用作评分。具有正斜率的修饰（如半乳糖基化和唾液酸化）表明对受体结合有有利影响，而具有负斜率的修饰（如去酰胺化）表明对结合有不利影响。应激后，组分中的化学修饰斜率（N329脱酰胺）更高（图5b、d、f），而应激前后糖类的斜率（图5c、e、g）保持相似，表明斜率主要由聚糖对受体亲和力的影响以及组分中存在的糖类来定义。图5 （a）亲和色谱图突出显示了在40°C下热应激6周后，相对于4°C对照样品，mAb1峰值强度的变化。（b–g）FcγRIII亲和组分F1、F2、F3和F4中所选修饰的相对丰度变化。（h，i）R2与4°C组分中PTMs的百分比变化斜率的关系。R2与斜率的关系由组分中所有检测到的PTMs的线性回归确定。在所有面板中，红色表示热应力样本（40°C，6周），黑色表示4°C对照样本。所有统计分析中确定的关键属性汇总如表1所示。选择六个指标来评估数据的显著性，以确定修饰是否对FcγRIIIa结合至关重要。评估显示，利妥昔单抗P231（EU P227）、N301（EU N297）和N329（EU N325）三个残基上的11个修饰对结合的影响具有统计学意义。作者进一步分析了这些残基的空间分布，结果显示每个已鉴定的残基都与IgG1到FcγRIIIa的结合域非常接近，为确认这些属性对结合有重要影响提供了额外的信心。表1 确定关键性属性的统计分析总结撰稿：夏淑君编辑：李惠琳文章引用：1 Daniel W. Woodall, Thomas M. Dillon, Kevin Kalenian, et al. Non-targeted characterization of attributes affecting antibody-FcγRIIIa V158 (CD16a) binding via online affinity chromatography-mass spectrometry. mAbs, 2022, 14(1): 2004982.

——RIGOL荣获R&D100大奖　　2011年6月22日，普源精电(英文名：RIGOL)DS6104数字示波器荣获美国R&D100年度产品奖。R&D100自设立49年来，已成为全球高科技领域极为推崇的大奖，被誉为科技界的“创新奥斯卡奖”。2011年， RIGOL与安捷伦、赛默飞世尔、戴安、日立、卡尔蔡司、戴尔、英特尔、麻省理工大学、3M等多家国际公司和著名实验室共同分享了R&D100 年度产品奖。在这一百名获奖者中， RIGOL是唯一一家来自于中国的仪器厂商，这也是近年来中国仪器首次获得R&D100大奖的青睐。　　RIGOL本次获奖，不仅是对RIGOL一款仪器产品的肯定，更是对于RIGOL公司科技创新能力与产品开发能力的认可，同时也标志着一个来源于中国创造的高技术测试测量仪器跨入了世界主流产品行列。　　RIGOL作为一家坚持自主创新的中国仪器公司，秉承持续为客户创造价值的理念，专注于电子测试测量和化学分析领域的技术研发，通过先进的精密加工和严谨的质量控制，向全球客户提供高性能和高稳定性的仪器产品。RIGOL的技术专家通过深入了解行业需求，为电子、化工、环保、医药、食品等多领域客户提供整套测试测量解决方案，其产品及一站式的服务为客户带来超值的使用体验。目前，RIGOL的产品已销往全球60多个国家和地区，并在亚太、欧洲以及北美建立了本土化的服务体系。RIGOL希望充分发挥公司在测试测量领域的优势积累，在更广泛的领域为客户提供更优质的产品及服务。R&D100奖介绍： R&D 杂志创刊于1959年，是一份工业研究领域的权威杂志，为全世界的科学家、工程师和研发队伍服务，为他们提供及时的信息和技术文章，致力于扩大研究与开发的知识面、提高他们的工作效率。 从1963年开始，R&D 100奖项专门授予具有革命性的技术。R&D 100大奖被誉为科技界的“创新奥斯卡奖”,是由R&D杂志为当年最具创新和技术意义的100个上市产品颁发的奖项。所有的“R&D 100大奖”入围产品最终都由独立专家评审。独立专家选自专业顾问、大学教授和工业界的研发人员，他们在其评审领域具有出色的专业技术和经验。他们必须公正，与评审的入围产品没有利益关系。每年有50多位独立评审专家参加。很多曾获得R&D 100大奖的技术现在已家喻户晓，进入了人们的日常生活。例如闪光灯（1965），自动对讲机(1973)，卤素灯(1974)，传真机(1975)，液晶显示屏(1980)，打印机(1986)，Kodak相片光盘(1991)，紫杉醇抗癌剂(1993)，实验室芯片(1996)，高清晰电视(1998)等。 RIGOL公司介绍 RIGOL是业界领先从事电子测量和分析仪器研发、生产和销售的多元化高新技术企业，产品已销往全球60多个国家和地区，并在全球50个国家注册了RIGOL商标，已成为世界级的供应商和客户首选伙伴之一。　　RIGOL科技园区占地约120亩，是国内技术领先的生产、研发基地，其中技术人员占40%。RIGOL拥有世界领先的SMT产线、精密的CNC数控机床加工中心和注塑车间、先进的影像分析系统及多种生产线设备，建立了一流的生产工艺及严格的质量保证体系，已通过ISO9001：2000 质量管理体系认证和ISO14001：2004 环保管理体系认证。　　RIGOL秉承为客户创造价值、持续创新的公司理念，为客户提供具备国际领先技术水准，更高性价比的产品、系统、服务以及一站式的解决方案。RIGOL致力于成为分析仪器行业技术领先的革新者，其产品正在化学、环保、食品、医药和生命科学领域中广泛使用。　　RIGOL自主研制的L-3000高效液相色谱系统，已获得8项专利。该仪器耐压高达8000psi，具有2.5AU的线性范围及最高100Hz的采样率，整机性能稳定，自上市以来受到广大用户的一致好评。业界专家评价RIGOLL-3000整机性能已经达到同类仪器的国际先进水平。RIGOL科学仪器介绍 L-3000高效液相色谱系统 Ultra-6000系列紫外可见分光光度计

色谱，作为分离分析的利器，在分析实验室中发挥着关键作用，在制药、食品、环境、石油化工等行业的应用更是日益普及。目前，中国是色谱仪的最大增量市场之一，市场规模已超百亿元。　　随着技术的进步和市场需求的进一步增长，众多色谱厂商也在不断推陈出新。据仪器信息网新品栏目不完全统计，2022年共有12款各类色谱仪器新品问世，涵盖气相色谱、液相色谱、制备液相色谱、离子色谱等多个类别。　　2023年，还有哪些仪器厂商正在研制新型色谱仪器，从上市仪器公司披露的财报数据中，我们得以洞察先机。　　注：以下信息由仪器信息网整理自上市仪器公司公开资料。力合科技　　项目名称：离子色谱分析仪开发　　项目目的：完成离子色谱分析仪检测器、抑制器等核心部件自主开发，自主研制大气颗粒物水溶性离子分析仪和水质分析仪，实现进口替代。　　项目进展：已完成电导检测器、抑制器和仪器电路设计，搭建大气颗粒物水溶性离子分析仪工程样机。　　拟达到的目标：掌握离子色谱检测核心技术，进一步完善公司自主研发的水质监测和大气监测产品结构，实现产品研制自主可控，提高公司产品市场竞争力。先河环保　　项目名称：色谱法 PAMS(57种组分)自动监测仪开发及中试　　项目目的：根据《打赢蓝天保卫战三年行动计划》《2019 年地级及以上城市环境空气挥发性有机物监测方案》(监测函〔2019〕11 号)和《关于加强挥发性有机物监测工作的通知》(环办监测函〔2020〕335 号)要求，全国地级及以上城市继续加强 VOCs 组分监测和光化学监测能力建设。　　项目进展：研究阶段　　拟达到的目标：采用富集~色谱技术开发低成本设备，可测量 57 种 VOC 组分，相比常用的富集-色谱-质谱技术，价格可以降低 1/2~2/3，主要应用颗粒物与臭氧协同监测方向。　　预计对公司的影响：为气相色谱原理类产品开发打下坚实的基础，为拓展公司产品开发打好技术储备。海能技术　　项目名称：K2025 Pro高效液相色谱仪　　项目目的：对 K2025 高效液相色谱仪进行升级，提升液相色谱仪的配置、性能和可靠性，拓展应用场景。　　项目进展：工程化样机研制阶段　　拟达到的目标：研制四元低压梯度输液泵技术、二极管阵列检测技术、样品控温技、液面和样品盘智能监控技术、新型流通池技术、大体积柱温箱技术等技术　　预计对公司的影响：产品的自动进样控温技术、预载样技术及超低交叉污染技术，可达到国内先进水平，对公司未来发展具有积极影响。　　项目名称：GC-IMS 技术的应用开发和软件研发　　项目进展：样品测试 、数据收集和软件开发阶段　　拟达到的目标：1、环境恶臭物质检测方法开发、汽车舱内 VOCs 检测与溯源、粮食霉变的筛查、农产品产地鉴别和食品真实性检测、在白酒生产过程中的应用探索、电子烟烟气检测方法开发 2、新版 GC-IMS 软件的研发：采用最新的 NIST 2020 保留指数数据库 增加自动选峰功能 增加修改样品名功能 增加校准曲线线性化功能 增加百分比模块。　　预计对公司的影响：解决气相色谱-质谱联用等技术在相关应用领域的不足，开拓 GC-IMS 仪器在相关应用领域的市场，对公司未来发展具有积极影响。　　项目名称：基于数据库存储的色谱工作站　　项目进展：软件研制阶段　　拟达到的目标：基于数据库存储的工作站是专门针对制药领域开发的工作站软件，在合规性和积分算法上都有严格的标准，以充分满足制药领域对于数据可靠性的要求。　　预计对公司的影响：通过技术突破为制药领域用户提供国产化的色谱工作站软件，可达到国内先进水平,对公司未来发展具有积极影响。　　扩展阅读：2022年上市仪器公司色谱在研项目

珀金埃尔默工程色谱解决方案推出最新解决方案——Arnel 8071型成品汽油分析仪，遵循ASTM D8071要求，利用气相色谱-真空紫外光谱法 (GC-VUV) 对成品汽油样品中的正构烷烃、支链烷烃、烯烃、环烷烃和芳烃等油品族组分 (PIONA) 进行完整的化合物类别表征。Arnel 8071型成品汽油分析仪组合了Clarus 690气相色谱和VUV PIONA+检测器，具备以下特点：设备简单，单柱单次进样，无需预柱和阀切换，运行时间仅为35分钟，实现快速的数据自动分析。VUV Analyze™ 数据分析软件可采集三维GC-VUV吸光度数据（保留时间、吸光度和波长），直观获得单个化合物的高度结构化特性。VUV Analyze数据分析软件实现对共洗脱峰进行解卷积的方程和拟合程序，准确报告单个化合物和族组成碳氢化合物的质量或体积百分比。遵循ASTM D8071要求，在一次进样测量中获得所有PIONA化合物类别信息，无需使用多种ASTM方法等对不同族组分单独测量。VUV Verified™ 分析物鉴别技术将PIONA化合物吸光度数据与VUV光谱库数据进行快速比较和验证，避免了仅仅通过比较保留时间进行验证所产生的误差。Clarus 690气相色谱配有专利的高性能柱温箱，具有现有市售柱温箱中最快的加热和冷却速度，进而可显著缩短运行时间，缩短进样之间的间隔时间，提高检测通量和效率。珀金埃尔默Arnel 8071型成品汽油分析仪在35分钟内成功完成正构烷烃、异构烷烃、烯烃、环烷、芳烃、乙醇、异辛烷、萘、甲基萘、苯、甲苯、乙苯和二甲苯总量等13个ASTM能力验证样品的同时检测。可靠的PIONA化合物类别和形态表征清晰的共洗脱化合物分辨率相较于传统ASTM方法明显缩短的运行时间与使用ASTM备选方法分析结果相当，准确可靠欲详细了解珀金埃尔默Arnel 8071型成品汽油分析仪，扫描下方二维码即刻获取珀金埃尔默工程色谱解决方案——《8071型气相色谱-真空紫外法成品汽油分析仪》，或与珀金埃尔默当地销售人员联系。扫描上方二维码即可下载右侧资料?

方法优势■ 筛选海产品中的多环芳烃（PAHs）用时不到4分钟■ 通过更快、更简单的样品制备取得准确的结果■ 通过使用荧光检测进行选择性测定沃特世解决方案配有荧光检测器的ACQUITY UPLC@ H-Class系统DisQuETM基质分散样品制备试剂盒Empower&trade 2软件关键词多环芳烃，PAHs，QuEChERS，荧光检测，食品安全目的证实DisQuE基质分散样品制备试剂盒和UPLC-FLR的组合能够提供一种适合海产品中PAHs检测的快速筛选工具。引言以往重大漏油事件，如：1989年瓦尔迪兹号（ExxonValdez）漏油和2010年4月墨西哥湾漏油事件，已经引起人们对出自这些地区的海产食品质量的担忧。鱼、甲壳类动物以及软体动物可能会接触或摄食石油，从而给消费者带来潜在的健康风险。在石油中发现的多种化合物中，一组重要的化合物是多环芳烃（PAHs）。美国环境保护局（US EPA）已经将这些化合物确定为重点污染物1。美国食品药品管理局（US FDA）还确定了多个方面的问题，包括鱼类中苯并（a）芘的含量达3.5 x 10-2mg/kg，牡蛎中菲和蒽的总含量达2.0 x 103mg/kg。2如果PAHs的含量达到关注水平的一半，则必须进行确证实验分析2。为避免食用受污染的海产食品并尽可能减小对海产食品业的影响，需要采用一种快速筛选法对这些令人担忧的化合物进行分析。我们在这里证明了通过使用.DisQuE基质分散样品制备试剂盒（QuEChERS）进行简单萃取后，配有荧光检测器的ACQUITY UPLC H-Class系统可用不到4分钟的时间完成一次PAHs分析。试验LC条件系统： 带大容量流动池（LV FC）的ACQUIT Y UP LCH-Class色谱柱： PAH 4.6 x 50 mm，3&mu m柱温： 35℃进样量： 10&mu L采样率： 20点/秒检测： 采用程序定时控制荧光检测波长变化软件： Empower 2流动相A： Milli-Q 水流动相B： 甲醇，Fisher最优级流动相C： 乙腈，Fisher最优级标准品： PAH认证标准，AccuStandard M 8310流速： 2.0 mL/min梯度程序： 时间 流速 %A %B %C 梯度线型 （ 分钟） （mL/min） 0.00 2.0 30 70 0 2.25 2.0 0 70 30 6 3.50 2.0 0 0 100 6 3.60 2.0 30 70 0 6样本制备用食品加工机按Ramalhosa等人3描述的方法对鱼肉块（比目鱼）、带壳虾以及带水的去壳牡蛎分别进行均质化处理。每个样品取15g均质后的组织到离心管中，按三种不同水平加入认证的PAH标准溶液。向鱼和虾样品中加入5ml水来帮助混合，牡蛎不需要另外加水。加标后的各种样品彻底混合，并允许在室温下放一个小时。向每个离心试管中加入DisQuE管（P/N 186004571）的试剂，即6 g硫化镁 + 1.5 g醋酸钠以及15 mL乙腈。用力摇动试管至少1分钟，从而形成海产食品组织、缓冲盐和乙腈的一种乳浊液。这次还按照Ramalhosa3的程序进行，因为既未向乙腈中加入醋酸，也没有执行二次PSA清洗步骤。我们试验室的初期工作证明，对于带荧光检测器的液相色谱法分析不必采取PSA步骤（数据未公布）。按3000 rpm的转数离心5分钟后，一部分乙腈浮层被转移至一个自动取样管进行进样。1&mu g/g和10&mu g/g浓度的加标样品分别用1:10和1:100的乙腈稀释。用6-点线性校正曲线对样品进行定量。标准曲线是用乙腈稀释认证的标准品来绘制的。结果和讨论分散样品制备通常也称为QuEChERS，是用于食品中农药分析的一种行之有效和快速的样品制备方法4。就在最近，该方法已被用来从食品基质中萃取其他污染物，包括多环芳烃3。利用ACQUITY UPLC H-Class系统，在短短的3.5分钟内就将被US EPA列为重点污染物的15种荧光PAHs分离出来了。分析物的分离如图2所示，箭头所指向的是程序定时控制波长的变化。图3所示为以10&mu g/g的浓度加标的虾、鱼和牡蛎基质的色谱图实例。如图3D中所示，同样通过样品制备程序制备出的空白水样显示了非常清晰的色谱图。本样品制备程序中使用的未加标型海产食品基质的实例同样未见基质干扰，如图4所示。各样品按照每一种分析物的6-点校正曲线进行定量。苯并(a)芘的示范校正曲线如图5所示。所有分析物的线性系数（R2） 0.995。通过Waters DisQuE基质分散样品制备试剂盒，从三种不同的海产品基质中提取多环芳烃。虾、鱼和牡蛎的回收率和RSD百分比如表1～表3所示。回收率范围为68%～149%。表4中列出了一系列QC水样加标的回收率，按所列水平浓缩，并贯穿于前述样品制备过程。这些结果对于所有化合物在每一种添加水平下都非常好，除了水中的苊的最低添加水平外（5 ng/g）。在该低水平上，由于峰面积小而且基线倾斜导致苊的检测结果变化波动很大，所以只能在这个水平以上检出。表5是根据7份各种海产品基质按5 ng/g的浓度加标后估算出的检测限，计算依据为US EPA 40 CFR，附录B至第136部分，修订号1.15.应用说明证实了DisQuE基质分散样品制备试剂盒和液相荧光色谱法的组合能够提供一种适合海产品中PAH检测的快速筛选工具。■ 分散样品制备提供了从不同海产品基质中提取多环芳烃的快速有效的方法。■ 实践证明，该方法比其他样品制备技术更有优势，因为通过很少的样品制备和较短的时间就能够得到准确的结果3。表5 加标型虾、鱼和牡蛎的检测限（LOD），根据每种海产品基质在5 ng/g浓度下个7个单标的检测结果计算出标准方差，计算依据为US EPA 40 CFR，附录B至第136部分，修订号1.1.■ 鉴于样品制备的时间缩短了，快速色谱分离对于通过该方法来分析样品、标准和相关QC样品十分重要。■ ACQUITY H-Class系统的分离时间还不到4分钟，能够满足方法要求。■ 本解决方案可帮助实验室筛选海产食品中的PAHs，并能经济、及时地给出结果；这样，消费者就可对这些产品的安全性感到放心。参考文献[1] USEPA Method 8310 &ldquo PolyNuclear Aromatic Hydrocarbons &ldquo 修订号 0，1986年9月。[2] Gratz et. al., &ldquo SCREEN FOR THE PRESENCE OF POLYCYCLICAROMATIC HYDROCARBONS IN SELECT SEAFOODS USING LCFLUORESCENCE&rdquo ,USFDA Laboratory Information Bulletin,页：2010年7月29日[3] Ramalhosa等人，&ldquo Journal of Separation Science&rdquo ，2009，32，页码： 3529-3538.[4] Anastassiades等人，Journal of the AOAC Int，2003，86，页码： 412.[5] EPA 40 CFR，第136部分之附录B，修订号：1.1 页码 566.

中国经济网北京1月27日讯 最近几天，关于新西兰少量奶粉检测出微量双氰胺的消息被媒体广泛报道，部分消费者也感觉无所适从，不知道应该如何选择奶粉。　　记者就消费者关心的相关问题查阅了众多资料和报道，并对相关乳企进行了问询。中国食品安全经历过几次大的事件，民众和媒体对本次新西兰奶粉少量批次检测到微量双氰胺一事表示关注和担忧是可以理解的，记者认为正确理性看待新西兰乳品乃至国内品牌奶粉对消费者和公众来说，似乎更加有益。　　针对媒体有关报道，新西兰官员有话说　　最近媒体报道关于新西兰奶粉事件的标题结论新西兰政府有不同的声音：媒体称含有极微量双氰胺的个别新西兰奶粉批次是毒奶粉，而新西兰官员称有科学依据证明无毒无害。　　部分媒体还称，问题奶粉未向中国停止销售。新西兰第一产业部官员韦恩. 麦克尼介绍，该国去年9月仅在少量奶粉中检测到微量双氰胺残留物。目前，新西兰生产的所有乳制品也不会再存在双氰胺残留。　　所谓的“问题奶粉瞒报三个月”，新西兰官员称去年9月就做了风险提示，最近中国国内转炒，只是因为《华尔街日报》转载而已。　　恒天然有关人员：新西兰乳品可放心食用。本次个别批次奶粉检出双氰胺含量不到欧盟标准的百分之一，“毒性比食盐还低”。　　据凤凰卫视新闻报道，新西兰本国及销往全球各地的乳制品均没有安全问题，可以放心食用。记者今天亦从恒天然有关人员获悉：新西兰个别批次奶粉被检测出含有少量双氰胺(简称DCD)，其含量不到欧盟规定标准的百分之一。新西兰第一产业部声明称，本次检测出的双氰胺“毒性比食盐还低”，民众无需过度紧张。按照欧盟制订的每日摄入限值，拿这次新西兰检出的双氰胺最高值来折算，一个60公斤的成人每日要喝130升牛奶或者进食60公斤冲调的奶粉，才有可能达到欧盟限值，如果要导致健康问题还得喝更多。　　新西兰政府并称：所有的新西兰奶粉在新西兰本国内部都在正常销售，不存在因质量问题下架。　　相关国家、地区政府管理部门表态　　台湾食品药物管理局公告称:不必恐慌,无毒无害。根据台湾食品药物管理局的公告，依目前所收集之资料显示，双氰胺急毒性很低，不具生殖、基因、致癌等毒性，经实验动物急性毒性试验、重复性试验及慢性毒性试验结果，估算双氰胺之无不良反应剂量(No observable adverse effect, NOAEL)约为1000 mg/kg bw。本次检测的含量远远低于这一剂量。目前没有任何证据显示新西兰奶粉对人体健康造成危害，无需下架。　　香港卫生管理署:高枕无忧,未有表态。香港市面新西兰奶粉都在正常销售，没有产品下架的任何报道。　　印度政府、美国政府、日本政府、东南亚国家政府均没有表态，也没有产品下架的任何报道，没有受到影响。　　乳企纷纷表态　　主要的知名乳企均对在中国所销售的产品充满信心，并表示不会受此事件影响。据悉，雅士利、雅培两家乳企均表态所购买的原料奶粉不涉及相关批次。雅士利销售人员表示，雅士利销售也没有受到任何影响。另，新西兰相关部门及世界最大的乳品供应商都确认供应给中国的产品完全符合中国相关生产和检测标准，也完全符合中国食品安全标准，并通过了中国监管机构规定的检测 向中国出售的所有批次的乳制品都不存在任何食品安全风险或对人体、动物造成健康威胁。美赞臣、多美滋、雀巢也都表示，其产品不受影响。(原标题：权威:新西兰乳品是安全的 微量双氰胺毒性比食盐还低)

各省、自治区、直辖市和新疆生产建设兵团市场监管局（厅、委）：为发挥食品快速检测（以下简称食品快检）排查食品安全风险隐患的作用，依据《中华人民共和国食品安全法》有关规定，现就规范食品快检使用提出以下意见：一、食品快检应具备的条件和能力食品快检可用于对食用农产品、散装食品、餐饮食品、现场制售食品等的食品安全抽查检测，并在较短时间内显示检测结果。（一）开展食品快检要有相应设施设备和制度。食品快检单位应具备相应设施设备和环境条件，并制定食品快检人员培训、设施设备管理、操作规程等制度。（《食品快速检测操作指南》见附件1）（二）食品快检操作人员要经过专业培训。食品快检操作人员应经过食品检验检测专业培训，熟悉相关法律法规、技术标准，掌握食品快检操作规范、质量管理等知识和技能。属地市场监管部门对食品快检操作人员的专业培训情况进行检查。二、真实客观记录和公开食品快检信息（三）真实、客观记录食品快检过程信息。应记录食品快检食品和被检测单位（或摊位）名称、售货人姓名及联系电话、检测项目、检测日期、检测结果、食品快检产品和试剂、检测人员签名等信息。食品快检操作人员及所在机构应对食品快检过程、数据和结果信息的真实、完整和可追溯负责。（四）公布食品快检信息应真实、客观、易懂。食品快检结果是否在检测场所公布由组织方确定。如公布，应按照食品快检信息公布要求，公布样品名称、被检测单位（或摊位）、检测日期、检测项目（注明俗称）、检测结果、判定结论等信息。公布的食品快检信息应真实、客观、易懂，不得误导消费者。（《食品快速检测信息公布要求》见附件2）三、依法处置食品快检发现的问题产品（五）市场监管部门应依法规范使用食品快检。市场监管部门在日常监管、专项整治、活动保障等现场检查工作中，依法使用国家规定的食品快检方法开展抽查检测。对食用农产品快检结果有异议的，可以自收到检测结果时起四小时内申请复检，复检不得采用快检方法。食品快检不能替代食品检验机构的实验室检验，不能用于市场监管部门组织的食品安全抽样检验。（六）妥善处置食品快检发现的问题产品。食品快检抽查检测结果表明可能不符合食品安全标准的，被抽查食品经营者应暂停销售相关产品；属地市场监管部门应及时跟进监督检查或委托符合法律规定的食品检验机构进行检验，及时防控食品安全风险。抽查检测结果确定有关食品不符合食品安全标准的，可以作为行政处罚的依据。四、切实提升食品快检产品质量水平（七）开展食品快检结果实验室验证。省级市场监管部门组织对食品快检结果进行实验室验证。有关验证工作应做到程序规范、记录完整、数据真实、过程可追溯；验证结果及时上传国家食品安全抽样检验信息系统，并在该信息系统中对食品快检结果的准确率进行动态排名。（《食品快速检测结果验证规范》见附件3）（八）稳妥推进食品快检产品符合性评价和认证。完善食品快检用仪器设备、试剂等相关标准，鼓励开展食品快检产品认证，加强食品快检方法研制。市场监管总局对声称采用市场监管总局公布食品快检方法的快检产品，组织开展符合性评价。有关评价工作应做到公平、公正、过程可追溯，确保评价结果客观、科学、准确。食品快检产品评价结果在国家食品安全抽样检验信息系统内公布。鼓励市场监管部门采购通过符合性评价或获得认证的食品快检产品。（《食品快速检测产品符合性评价程序》见附件4）五、因地制宜开展“你送我检”便民服务活动（九）指导食品快检“你送我检”便民服务活动。鼓励食品快检机构现场接收消费者送检的自购食品，并及时告知和解读检测结果；检测人员要科学回答消费者有关的食品安全咨询，宣传食品安全科普知识。县级市场监管部门应加强对本地区“你送我检”便民服务活动指导。本意见适用于规范市场监管部门、销售食品的市场开办者使用食品快检的行为。销售食品的市场是指销售食品的农产品批发市场、零售市场（包括农贸市场）、商场、超市、便利店和餐饮店等场所。本意见自发布之日起实施。《食品药品监管总局关于规范食品快速检测方法使用管理的意见》（食药监科〔2017〕49号）、《食品药品监管总局办公厅关于印发食品快速检测方法评价技术规范的通知》（食药监办科〔2017〕43号）同时废止。附件：1.食品快速检测操作指南2.食品快速检测信息公布要求3.食品快速检测结果验证规范4.食品快速检测产品符合性评价程序市场监管总局 2023年1月18日 （此件公开发布）附件1食品快速检测操作指南　　第一条　为了规范食品快速检测（以下简称食品快检）操作，制定本指南。　　第二条　开展食品快检，应依照有关法律、法规和标准等规定，建立相应的质量管理体系，制定人员培训、设施设备管理和操作规程等制度。　　第三条　食品快检操作人员应熟悉相关法律法规、检测方法原理，掌握食品采样、操作规程、质量控制、实验安全等要求，经食品检验检测专业培训并考核合格后上岗。　　第四条　食品快检操作人员和所在机构应尊重科学，恪守职业道德，出具的快检数据和结论真实、客观，不得出具虚假快检结果。出具虚假快检结果的，应按照有关法律法规规定进行处罚。　　第五条　采样人员应详细记录被检测单位（或摊位）、样品类别、名称、数量、采样时间、采样人员等信息；应对样品编号登记和标注唯一性标识。采样人员和被检测单位（或摊位）食品生产经营者需在样品信息单上签字或盖章确认。　　第六条　食品快检样品在运输和贮存过程中，应避免样品污染、变质或混淆，不发生影响检测结论的变化。　　第七条　开展食品快检的环境应保持整齐清洁，检测过程应避免不同样品之间的交叉污染。　　第八条　样品的取样部位、数量、制备方法和贮存条件应满足相关标准、技术规范等要求。　　第九条　食品快检应当严格按照食品快检方法或快检产品说明书要求规范操作，详细记录样品编号、类别、名称、检测项目、检测时间、检测人员、快检产品信息、检测结果、检测结论等内容。　　第十条　通过食品快检仪器生成的检测结果，应作为原始记录存档。对无法作为原始记录长期保存的检测结果，应通过拍照等电子化方式存档。　　第十一条　食品快检操作人员和审核人员不得是同一人。　　第十二条　食品快检产品应按使用要求开展质量控制试验。标准物质、质控样品应按规定条件储存，并确保在有效期内使用。　　第十三条　市场监管部门组织或委托的抽查检测，样品检测结果为不符合食品安全标准的，检测机构应及时报送属地市场监管部门。　　第十四条　不合格样品应依法依规采取风险管控措施。　　第十五条　被抽查人对食用农产品抽查检测结果有异议时，可以自收到检测结果时起四小时内申请复检。复检不得采用快检方法。复检为不合格产品的，组织方应及时通报属地市场监管部门。附件2食品快速检测信息公布要求　　第一条　为了规范食品快速检测（以下简称食品快检）信息公布，制定本要求。　　第二条　食品快检结果是否在检测场所公布由组织方确定。　　第三条　公布信息主要包括样品名称、检测项目（注明俗称）、检测结果、检测结论、销售者（被检测单位或摊位）、生产厂家或供应商（若有）、采样时间、检测时间、检测方式等。公布食品快检信息应真实、客观、易懂，不得误导消费者。　　第四条　市场监管部门或者市场开办者可在食品销售区域设立快检信息公布专栏，或采取LED、电视屏等形式公布食品快检结果信息。　　第五条　对食品快检提出异议复检后，复检结果应在原食品快检信息公布渠道及时公布。　　第六条　对发现公布的食品快检信息存在错误的，信息公布单位应在原食品快检信息公布渠道及时进行更正。附件：食品快速检测信息公布参考样式附件3食品快速检测结果验证规范　　第一条　为了科学组织食品快速检测（以下简称食品快检）结果验证，制定本规范。　　第二条　食品快检结果验证，是指将食品快检结果与实验室检验结果比对等方式，验证食品快检结果准确性的过程。　　第三条　省级市场监管部门负责委托验证单位开展本辖区食品快检结果验证工作，原则上验证单位不超过10家。　　第四条　验证单位应具备以下条件：　　（一）具有独立法人资格，拥有完善的检验检测机构管理体系；　　（二）具有食品检验检测机构资质，且相关验证项目通过资质认定；　　（三）具有与食品快检结果验证工作相匹配的人员、设备设施及场所环境；　　（四）同等条件下，可优先考虑食品检验复检机构；　　（五）近三年无违法违规行为。　　第五条　省级市场监管部门应组织制定或审核食品快检结果验证实施方案，确保验证数据和结论客观、公正、可追溯。　　第六条　在市（地、州、盟）辖区内，开展食品快检最多的检测机构和检测量最多的食品快检产品，一般应参加食品快检结果验证。其他食品快检机构可自愿申请参加食品快检结果验证。　　第七条　对食品快检结果呈阳性的，参加食品快检结果实验室验证；对食品快检结果呈阴性的，也应抽取一定量的同一样品或对其备份样品进行实验室验证。　　第八条　参加实验室验证的食品快检机构和快检产品，对食品快检阳性检出率最高或者最低的，也可以采取盲样检验验证方式。由省级市场监管部门组织制备盲样，发放快检结果验证单位。盲样检测所采用的阳性样品与阴性样品应数量相当。　　第九条　盲样验证如使用基质加标样品作为阳性样品，目标物为禁用物质时，其目标物含量原则上不高于参比方法检出限的3倍；目标物为有限量要求的物质时，其目标物含量原则上不高于标准限量的3倍。样品也可采用实际阳性和阴性样品。　　第十条　食品快检结果实验室验证可纳入食品安全监督抽检计划，并参照监督抽检采用的相关标准和检验方法。　　第十一条　食品快检结果实验室验证的判定要求如下：　　（一）当快检结果呈阳性，其对应项目的实验室验证结果大于或等于快检检出限（最低检出水平）的最大负偏离（一般情况不超过20%，对于痕量物质检测时可达30%）时，则判定为验证通过。　　（二）当快检结果呈阴性时，实验室验证结果小于快检检出限水平，则判定为验证通过，反之为不通过。　　第十二条　省级市场监管部门对验证单位食品快检验证结果定期或不定期组织审核，审核后及时将验证结果录入国家食品安全抽样检验信息系统，在该信息系统内对食品快检结果准确率进行动态排名。　　第十三条　省级市场监管部门对验证单位进行监督和现场检查。对发现验证数据造假等严重违规行为的验证机构和有关人员，取消验证资格，并通报授予其检验资质的主管部门或者机构。附件4食品快速检测产品符合性评价程序第一章　总　则　　第一条　为了科学组织食品快速检测（以下简称食品快检）产品符合性评价，制定本程序。　　第二条　食品快检产品符合性评价是指对声称采用市场监管总局发布食品快检方法的食品快检产品进行符合性评价。　　第三条　市场监管总局委托技术机构组织开展食品快检产品符合性评价工作。　　第四条　根据市场监管需求，委托的技术机构制定食品快检产品符合性评价计划和组织方案，开展或委托食品快检产品符合性评价机构（以下简称评价机构）开展具体食品快检产品符合性评价。　　第五条　食品快检产品符合性评价过程应公平、公正、公开，接受各方监督。第二章　选定评价机构　　第六条　委托的技术机构组织遴选评价机构，检验检测机构可自愿申请。　　第七条　食品快检产品符合性评价机构应当具备以下条件：　　（一）拥有与食品快检产品符合性评价工作相匹配的人员、设备设施及环境条件，并保证质量管理体系有效运行；　　（二）具备食品中污染物、农药残留、兽药残留、非法添加物质等实验室检验检测资质；　　（三）从事食品快检方法研制、使用、验证或评价活动五年以上；　　（四）在相关食品检验领域具有国内领先水平，近五年参加国际或国家行政主管部门组织的实验室间比对活动，并获得满意结果；　　（五）同等条件下，可优先考虑市场监管总局批准的食品安全领域国家市场监管重点实验室、技术创新中心，以及食品检验复检机构；　　（六）近三年无违法违规行为。第三章　受　理　　第八条　食品快检产品生产或代理企业自愿向委托的技术机构提出食品快检产品符合性评价书面申请。生产企业应具有固定的生产场所和良好的质量管理体系，代理企业申请产品符合性评价应取得相关产品生产企业授权。如发现不符合质量管理体系要求以及生产销售假冒产品等情况的，应终止评价。　　第九条　申请食品快检产品符合性评价的食品快检产品生产或代理企业，应向委托的技术机构提交书面申请材料。材料包括但不限于产品技术参数、检验报告、产品说明书及中文标签等。申请人应当对所提交材料的真实性负责。　　第十条　委托的技术机构组织对企业提交材料进行初审，与符合要求的食品快检产品符合性评价申请人签署技术服务合同，组织评价机构开展评价。第四章　评　价　　第十一条　评价机构应根据所评价的食品快检产品制定评价实施方案，方案包括评价目的、评价项目、评价程序等内容。委托的技术机构对实施方案进行审核把关。　　第十二条　评价机构应组织不少于1/3人数的非本单位专家参与，做到程序规范、记录完整、数据真实、过程可追溯，关键实验环节应进行全程录像，确保评价结果的公正、科学、准确。　　第十三条　食品快检产品符合性评价采取盲样测试的方式进行，食品快检产品符合性评价技术要求见附件。　　第十四条　评价机构组织专家对评价结论进行审评，并出具审评意见。评价机构将产品符合性评价意见报送委托的技术机构。　　第十五条　评价工作实行评价机构与评价人负责制。评价机构和评价人对出具的食品快检产品符合性评价数据和意见负责。　　第十六条　委托的技术机构对评价实施过程进行监督。对发生数据造假等严重违规行为的评价机构和有关人员，市场监管总局不再委托其承担评价任务，并通报授予其检验资质的主管部门或者机构。第五章　报　告　　第十七条　委托的技术机构组织对评价机构的评价意见审核后出具评价报告，对评价整体情况和结果进行汇总整理和分析。报告中应包含快检方法、产品名称、评价时间、产品的基本信息（生产企业、批次等）、盲样基质、评价结论及评价有效期。评价结论为：“经评价，***快检产品的***指标（不）符合《***快速检测方法》（方法号***）的要求。”　　第十八条　食品快检产品符合性评价结果在国家食品安全抽样检验信息系统内公布。 附件：食品快速检测产品符合性评价技术要求附件食品快速检测产品符合性评价技术要求　　1　评价指标　　食品快速检测产品符合性评价指标包括灵敏度、交叉反应率、假阴性率和假阳性率。　　2　盲样要求　　2.1　可使用盲样基质一致的有证食品标准物质、参考物质作为盲样，也可以是均匀性和稳定性满足统计学要求且经过参比方法定值的实际样品或基质加标样品。　　2.2　自行制备的盲样，其均匀性和稳定性计算参照CNAS-GL003《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》。　　2.3　盲样基质应根据食品快检方法的应用需要，覆盖相应的典型样品基质。　　2.4　盲样应随机编号，并随机派发给不同评价人员进行独立测试。　　3　评价方法　　对禁用物质或者无残留限量的物质，检出限设置（最低检出水平）应尽量与参比方法的定量限（若无定量限则选择检出限）一致；对存在国家标准限值规定的物质，应尽量与限值一致。所有参数需要在不同种类或者类型的食品中测定的实际结果进行统计。　　3.1　灵敏度　　灵敏度是指方法在实验条件下达到的实际检出限时，检出阳性结果的阳性样品数占总阳性样品数的百分比。　　3.2　交叉反应率　　采用快检方法及其相关产品的交叉反应率反映产品的特异性，即目标物质检出限与干扰物质检出阳性的最小浓度的比值（以百分比计）。　　3.2.1　以空白样品分别加入不同浓度水平干扰物质的标准溶液进行测试，记录检测结果为阳性的最小浓度。　　3.2.2　交叉反应率计算公式　　交叉反应率（%）=目标物质检出限×100%/干扰物质检出阳性时的最小浓度。　　3.3　假阴性率和假阳性率　　假阴性率是指方法在实验条件下达到的检出限时，阳性样品中检出阴性结果的最大概率（以百分比计），计算结果为方法最大假阴性率的结果。　　假阳性率是指方法在实验条件下达到的检出限时，阴性样品中检出阳性结果的最大概率（以百分比计），计算结果为方法最大假阳性率的结果。　　3.3.1　应首先对实际阳性样品（指经参比方法检测超过国家限量标准要求的真实或模拟阳性样品）进行测试，不少于2份。当实际阳性样品的检测结果出现阴性时，不再进行后续实验。　　3.3.2　目标物为禁用物质时，原则上，盲样浓度水平包括空白样品、检出限的1倍浓度水平。每个浓度水平的盲样不少于50份。空白样品以考察快检方法及其产品的假阳性率，检出限1倍浓度水平用以评价快检方法及其产品的假阴性率。　　3.3.3　目标物为有限量要求的物质时，原则上，空白样品、标准限量要求的0.5倍浓度水平用以评价快检方法及其产品的假阳性率，每个浓度水平的盲样不少于50份；标准限量要求1倍浓度水平的盲样不少于50份，用以考察快检方法及其产品的假阴性率。　　3.3.4　在不同检测对象中具有不同的标准限量要求时，应按不同检测对象的典型基质样品评价快检产品的假阴性率与假阳性率。　　3.3.5　假阴性率与假阳性率计算公式如下：　　假阴性率（%）=阳性样品的阴性结果数×100%/阳性样品总数。　　假阳性率（%）=阴性样品的阳性结果数×100%/阴性样品总数。

在旋转流变仪上使用触变性测试定量评估挤出或喷涂后的粘度恢复简介许多消费产品包装在管或者瓶中，其使用方法牵涉到以泵送的方式让产品通过喷嘴。这类产品多表现为剪切变稀特性，在挤出过程中，由于剪切速率的增加导致粘度下降，然后在离开孔口后，随着剪切速率的降低，粘度恢复。此过程涉及的剪切速率与孔口半径r、体积流速Q相关，可由下式表示：参数n是幂律指数，对于牛顿流体为1，对于非牛顿流体为0 - 1之间。对样品进行变剪切速率测试，再使用幂律模型对数据进行拟合，可得到这一数值。通过测量体积流速（在一定时间内挤出的体积）和孔的内半径，可以估算挤出过程的相关剪切速率。该值可以输入到步阶式剪切速率测试（图1）中。测试首先在一定的时间内以低剪切速率剪切样品（模拟挤出之前），然后再提高到目标剪切速率（模拟挤出过程）。随着剪切速率下降到其初始值，粘度逐渐恢复。该测试展示了样品在挤出后的粘度恢复快慢，并与产品使用过程中的厚度或粘度相关。图1 步阶速率测试中的触变性可以通过在第一阶段结束时测量最终粘度，以及在第三阶段计算粘度恢复到一定比例所花费的时间，来对触变性进行量化表征。该数值可用于产品或配方之间的比较，广泛地应用于各个行业。方法在与产品使用过程中的挤出相关的剪切速率条件下，评估了牙膏和润肤露的粘度恢复特性。测量使用Kinexus旋转流变仪，Peltier温控单元，糙面平行板夹具，以及rSpace软件中标准的预配置程序。使用标准的装样步骤，以确保两个样品都经历一致且可控的装样方式。所有流变学测量均在25°C下进行。输入挤出体积，挤出时间和孔径半径，可以自动计算出相关的挤出剪切速率，并将其作为测试程序的一部分。在步阶式剪切速率测试中，以该计算值作为中间阶段的剪切速率，其前后使用0.1s-1的恒定剪切速率。自动测定产品恢复90％原始粘度所需时间，并在测试结束时报告。结果使用自动计算器，计算了产品挤出时的剪切速率为：牙膏为34 s-1，润肤露为840 s-1。在步阶测试的中间阶段应用了这些剪切速率。图2显示了牙膏的测试结果。 显然，这是一种高度触变性的材料，因为它无法在测试时间内完全恢复其结构，大约需要6分钟才能恢复到其原始粘度的70％。图2 牙膏的阶段剪切速率曲线相比之下，图3中所示的润肤露几乎可以完全恢复其原始粘度，并且仅需7秒即可获得与牙膏相同百分比的恢复，恢复到90％也仅需23秒即可。该材料可归为基本没有触变性。图3 润肤露的步阶剪切速率曲线对于消费者来说，这意味着润肤露在与皮肤接触后会很快重组结构，这可以防止过度铺展或可能发生的滴落。牙膏在刷牙之前停留在牙刷上的粘度较低，这将使其更易于在口腔中分布开，并可能影响感官特性。当然，牙膏的粘度也不能低到可以流过刷毛、或在刷毛上下垂的程度。结论对牙膏和润肤露进行了三步剪切速率测试，用来评估分别从管和瓶中挤出后的粘度恢复程度。牙膏显示出高度的触变性，需要6分钟才能恢复其原始粘度的70％。然而润肤露仅需7秒即可达到相同程度的恢复，两相比较，可以认为润肤露是非触变性的。

左右滑动查看更多 ✦ &bull ✦ 同样以“分离”为目的，还有Biozen系列反相色谱柱，助力新型HER2靶向ADC药物质控，为乳腺癌带来希望✦ &bull ✦ 2023年2月24日，中国国家药品监督管理局官网最新公示，注射用德曲妥珠单抗已正式在中国获批上市。这款药物由阿斯利康和第一三共联合开发，科研代号DS-8201。截至目前，德曲妥珠单抗已在全球至少获批5项肿瘤适应证，包括两种乳腺癌。DS-8201由抗HER2人源化单克隆抗体与载药拓扑异构酶Ⅰ抑制剂DXd（payload）通过可裂解连接子（linker）组成，其DAR值达理论最大值8，具有避免耐药、特异性强、高细胞毒性和安全性良好的特点。对于ADC这类药物来说，DAR的测定是非常重要的关键质量属性。今天我们将为大家展示Biozen这种生物惰性的反相柱在这个重要检项上的应用案例。小分子毒素抗体比DAR（drug-to-antibody ratio）是ADC药物独特的重要质量属性，它代表抗体偶联小分子毒性药物的平均数量。DAR值分析常见的模式为HIC，该模式下根据分子疏水性逐渐增加的顺序洗脱。荷载小分子药物最多的分子由于疏水性最强最后洗脱，分离过程类似于反相色谱。但是随着ADC药物的payload不断发展，近期科研工作者发现对于偶联较强亲水性payload的ADC药物而言，不同荷载分子之间的疏水性差异不是特别明显，HIC模式下无法很好的分离不同载药数量的ADC分子。此时反相色谱就成为一种适合的替代方案，该方法特别适合基于半胱氨酸偶联的ADC。通过对ADC药物进行还原，使抗体还原为轻链和重链，含不同数量小分子载药数的轻链和重链依据载药数量从少到多依次洗脱。再通过计算各轻、重链的峰面积百分比，并结合每个峰偶联小分子药物的个数，计算加权平均DAR值。本案例使用Biozen的400&angst 孔径的WidePore C4色谱柱对DTT还原后的Trastuzumab-deruxtecan供试品进行分析，并计算其平均DAR值。01样品Trastuzumab-deruxtecan对照品购自第一三共，DAR值为8。用纯水稀释为浓度为1.0mg/mL；Trastuzumab-deruxtecan供试品，由客户慷慨赠送，先用纯水稀释为浓度为1.0mg/mL；再用1M DTT还原后上样。Trastuzumab购自MCE；先用纯水稀释为浓度为1.0mg/mL；再用1M DTT还原后上样。02色谱条件色谱柱：Biozen WidePore C4（2.6μm，400&angst ，150*4.6mm）；P/N：00F-4786-E0流动相A：0.1%TFA水流动相B：0.1%TFA乙腈流速：0.5mL/min柱温：60℃波长：280nm进样量：10μL03结果与讨论通过对Trastuzumab-deruxtecan供试品，Trastuzumab单抗和Trastuzumab-deruxtecan对照品进行还原（100μg蛋白中加入5μL 1M DTT，37℃分别孵育半小时和一小时），我们可以在反相色谱上通过梯度优化，清晰的分离轻链和重链以及荷载不同小分子数量的轻重链。通过对峰面积进行加权计算，我们可以计算得供试品的平均DAR值为3.98。裸抗（蓝）、供试品（黑）和DS-8201（红）轻重链保留时间对比Tips:反相测DAR的方案，是正交于HIC方法的很好的补充。同时，这种方法可以直接上质谱进行表征，对于含偏亲水性payload的ADC来说，也能够得到比HIC更好的分离结果。本应用使用的Biozen WidePore C4采用核壳技术结合丁基的键合相，核壳的设计不仅可以大幅提高柱效，也可以减少蛋白与固定相的次级作用，改善蛋白回收率，峰形和残留的问题；三键键合工艺能够耐受90度的高温；Bio Ti生物惰性的钛合金柱硬件也最大程度的减少了对生物样品的干扰，保证分析结果的稳健可靠。Biozen WidePore C4pH范围：1.5-9.0**USP分类：L26孔径：400&angst &bull 完整蛋白与片段分析&bull 完整质量数测试&bull ADC药物抗体比（DAR值）Biozen Intact XB-C8pH范围：1.5-9.0**USP分类：L7孔径：200&angst &bull BioTi硬件与核壳硅胶颗粒帮助降低吸附,提升回收率&bull 较低背压下实现高柱效分离&bull 温度可达90℃当然，除了Biozen WidePore C4，稍长碳链的Biozen Intact XB-C8也是键合相互补的优选。特别是对于MMAE这类疏水性payload来说，可以优先尝试空间位阻填料工艺的Biozen Intact XB-C8。

以柠檬酸盐缓冲体系的QuEChERS方法为前处理方法，气相色谱-串联质谱联用仪为检测仪器，建立了葡萄中78种农药残留的检测方法。以添加回收法评估了葡萄中4种基质匹配校准方法的定量结果，评估了4种校准方法的线性回归系数，回收率和精密度。结果表明：在添加回收试验中，添加水平为0.01 mg/kg时，4种校准方法在0.005～0.1 mg/L范围内，78种农药的质量浓度与对应的峰面积间线性关系良好，R2均大于0.99，大部分农药的精密度均可满足农药残留检测的要求。然而，在使用空白基质溶液配制的标准工作溶液进行校准时，无论是外标法还是内标法，回收率均无法兼顾所有分析对象。使用基质匹配标准溶液得到的基质标准曲线表现更好，其外标法和内标法的回收率范围分别为82%～114%和81%～110%，相对标准偏差范围分别为2.3%～18%和1.2%～17%，符合食品理化检测的质量控制要求，适合实验室日常监测采用。 气相色谱_串联质谱法测定葡萄中78种农药残留的定量校准方法评估_余巍.pdf

2012-2021，由仪器信息网主办的光谱网络会议(iCS)走过了十年的历程。在过去的十年间，iCS 见证了光谱技术的发展与进步：拉曼、近红外、激光诱导击穿光谱、太赫兹、高光谱、超快光谱、光谱成像......这十年间，光谱仪器及技术突飞猛进，不仅给科研注入了新的活力，更是给企业带来了客观的经济效益。　　为了更深入的了解光谱技术在生产生活中所起到的作用，并倾听用户的声音，仪器信息网特别策划《光谱十年》系列采访活动。本期我们特别采访到了晨光生物科技集团股份有限公司质量主管石文杰，听一听他们使用光谱仪器的感受!　　晨光生物科技集团股份有限公司是以农产品为原料进行天然植物有效组分提取的高新技术企业，主要研制和生产四大系列共80多种产品，包括天然色素、天然香辛料肯精油、天然营养及药用提取物、油脂和蛋白等，从原料筛选鉴别开始，到收购现场质量控制、生产过程质量控制、收率核算、调配控制等都与光谱仪器有着密不可分的关系。　　据石文杰介绍，他们最早使用分光光度计，后陆续用到ICP、原子荧光、原子吸收，最近开始用红外和近红外光谱技术，同时也开始了解调研拉曼光谱技术。石文杰在报告中曾指出，在过程质量控制环节，小型化、微型化近红外光谱仪更具有性价比，甚至将来探针式、传感器式光谱设备将有更大的应用空间。据悉，目前，晨光生物拥有21台近红外光谱仪，其中在线12台、离线8台、手持3台，并建立了包括辣椒、叶黄素、甜菊糖、葡萄籽等十多个品种共计55个相关模型。　　对于光谱仪器在生产研发以及质控方面的价值体现，石文杰说，“由于近红外光谱仪检测速度非常快，给质量保证提供了很大的的优势，给我们企业也带来了很大的效益。”采访中，石文杰还以晨光生物为例给大家算了一笔账：“之前我们的产品质量波动非常大，为了让客户满意，只能把含量调整上去，比如为了避免出现不合格的情况，蛋白含量高于50%的产品需要把含量调整到53%客户才会满意。而有了近红外光谱技术之后我们的产品质控就非常稳定了，同样要求50%的蛋白我们可以控制在50±0.5%，这前后相比就差了两个百分点，一年几亿的产品销售百分之几就是好几百万！”　　从企业用户的角度出发，石文杰还谈到了其对光谱仪器未来发展的期待，据其介绍，晨光生物目前特别注重数字化、智能化的发展，对先进仪器技术的需求也非常明显。不过，由于植物提取过程钟质量控制需要的监控点多，仪器的成本也在一定程度上制约了在线应用的进度。石文杰表示，希望未来可以降低仪器的使用成本，并且希望仪器企业能从容易应用的角度出发为客户提供定制化的服务。

如果是黄金交易商或典当行老板，就需要适当的工具来确保您提供给客户的是纯金、白银和其他贵金属。有几种方法可以用来检测黄金和其他贵金属的纯度和真伪。这些方法包括电导率测量、酸划痕试验，以及X射线荧光（XRF）检测。这篇文章将详细介绍每一种黄金检测方法，并对它们进行比较，以便您利用正确的技术帮助实现贵金属真伪判断。电导率测量电导率测量涉及到使用电子设备来测量金属的导电性。不同的金属有独特的电导率水平，所以这种方法可以用来识别某一金属类型。然而，这种方法并不总是准确的，因为一些合金和混合金属可能有类似的电导率水平。实际上，样品的温度也会影响测试结果。酸划痕试验酸划痕试验涉及到在金属的一小块区域滴上一小滴酸，并观察其反应。不同的酸被用来测试不同的金属，如用盐酸测试金，用硝酸测试银。如果金属是真的，酸不会对其表面造成明显的影响。如果金属不纯或为合金，酸会与其发生反应，金属表面会出现划痕或变色。尽管这种方法快速且容易执行，但可能得到主观的结果。此外，通常认为酸划痕试验的准确度很低。因此，酸划痕试验不能被认为是一种定量方法。XRF检测XRF检测是一种更加准确和全面的测试贵金属含量和贵金属纯度的方法。X射线荧光分析仪向金属发射X射线，测量受激电子释放的能量以确定样品的成分，并在几秒钟内提供结果。这种检测方法不仅快速简单，而且X射线荧光分析仪通常被认为是测试金属的较为可靠的方法。下表显示了X射线荧光分析仪的准确度和精度，该表将贵金属X射线荧光分析仪的检测结果（测试样品中元素的百分比）与黄金珠宝合金的认定参考标准进行了比较。XRF检测也是一种无损贵金属分析方法。换句话说，XRF检测不会对被评估的金属（而酸划痕试验可能会在金属上面留下痕迹）造成损害。为了提高灵活性，X射线荧光分析仪有坚固耐用的手持式版本，用于在现场测试金属，也有为展厅环境设计的台式版本。介绍一种检测金银珠宝的更简单的方法全新Vanta GX贵金属分析仪可满足此需求，这是一种台式X射线荧光分析仪，易于使用且价格合理。只需按下一个按钮就能证实金、银、白金、钯和其他贵金属的纯度和百分比。该分析仪还提供内容全面的成分结果，以便您能准确地为物品定价。检测多达27种化学元素，包括有害元素（铅或镉）和低价元素。有了这些可操作的检测结果，一旦出现镀金警报，我们就能很容易地识别出赝品。Vanta GX贵金属分析仪使用贵金属X射线荧光分析仪来验证贵金属，可以保证您向客户提供的是正品。您可以对产品的纯度充满信心。您的客户也可以在现场测试自己的贵金属。这对那些从其他矿场或经销商处购买贵金属的人来说特别有用。有了贵金属X射线荧光分析仪，贸易商可以对他们所销售产品的纯度充满信心。例如，如果一件物品被认为是纯金，但实际上是一种合金，卖方可能会错误地将其作为纯金定价，进而导致交易亏损。同样，如果一件物品被认为是低档次金属，但实际上是一种贵价金属，买方可能会大大低估该物品的价格，并错过一次高回报的投资机会。使用Vanta GX贵金属分析仪，黄金交易商和他们的客户可以充满信心地确定珠宝的成分，从纯金物品中识别出镀金物品，并做出明智的购买决定。

1、目视评价法评估LOD 目视评价法是通过在样品空白中添加已知浓度的分析物，然后确定能够可靠检测出分析物最低浓度值的方法。即在样品空白中加入一系列不同浓度的分析物，随机对每一个浓度点进行约7次的独立测试，通过绘制阳性(或阴性)结果百分比与浓度相对应的反应曲线确定阈值浓度。该方法也可用于定性方法中检出限的确定。 2、空白标准偏差法评估LOD 即通过分析大量的样品空白或加入最低可接受浓度的样品空白来确定LOD。独立测试的次数应不少于10次(n≥10)，计算出检测结果的标准偏差(S)，计算方法参见表。 样品空白值的平均值和标准偏差均受样品基质影响，因此最低检出限也因受样品基质种类的影响而不同。如果利用此条件进行符合性判定时，需要定期用实际检测数据更新精密度数值。 3、校准方程的适用范围评估LOD 如果在LOD或接近LOD的样品数据无法获得时，可利用校准方程的参数评估仪器的LOD。如果用空白平均值加上空白的3倍标准偏差，仪器对于空白的响应即为校准方程的截距a，仪器响应的标准偏差即为校准的标准误差(Sy/X)。故可利用方程 此方程可广泛应用于分析化学。然而由于此方法为外推法，所以当浓度接近于预期的LOD时，结果就不如由实验得到的结果可靠，因此建议分析浓度接近于LOD的样品，应确证在适当的概率下被分析物能够被检测出来。 4、信噪比法评估LOD 对于定量方法来说，由于仪器分析过程都会有背景噪音，常用的方法就是利用已知低浓度的分析物样品与空白样品的测量信号进行比较，确定能够可靠检出的最小的浓度。典型的可接受的信噪比是2:1或3:1。对于定性方法来说，低于临界浓度时选择性是不可靠的。该临界值会随着试验条件中的试剂、加标量、基质等不同而变化。确定定性方法的LOD时，可以通过往空白样品中添加几个不同浓度水平的标液，在每个水平分别随机检测10次，记录检出结果(阳性或阴性)，绘制样品检出的阳性率(写)或阴性率(%)对添加浓度的曲线，临界浓度即为检测结果不可靠时的拐点。定性分析中临界值的确定可参考下表进行。如表示例中，当样品中待测物浓度低于100μg/g时，阳性检测结果已经不具备100%的可靠性。

随着质谱技术以及色谱与质谱联用技术的快速发展，蛋白质组学分析技术在未知蛋白质的鉴定、蛋白质结构的解析、靶向蛋白质定量、以及生物技术药物研发、质量控制和体内药代动力学研究方面应用越来越广泛。药典委拟制定《中国药典》蛋白质组学分析方法及应用指导原则，并于2024年2月20日发布第一版公示稿并征求意见。为确保标准的科学性、合理性和适用性，现将拟增订的蛋白质组学分析方法及应用指导原则（第二次）公示征求社会各界意见（详见附件）。公示期自发布之日起一个月。蛋白质组学分析方法及应用指导原则公示稿（第二次）.pdf蛋白质组学分析基本流程主要包括：1. 蛋白样品的提取，变性还原，酶解与多肽分离富集；2. 多肽的分析与鉴定；3. 数据分析。在分离和富集中采用凝胶电泳和色谱技术，分析与鉴定中采用质谱、二维凝胶电泳、X射线分析、核磁共振波谱和透射电子显微镜技术。蛋白质组学分析方法及应用指导原则第二次公示稿修改说明 根据 2024 年 2 月蛋白质组学分析方法及应用指导原则第一次公示稿的反馈意见和建议，国家药典委员会相关专业委员会进行了研讨，在第一次公示稿的基础上修订了部分内容，主要为：一、适用范围1. 将文中“蛋白”修改为“蛋白质”。二、蛋白质组学的分析策略 1. 将“通过质谱分析技术检测到肽指纹图谱进行多肽的鉴定和定量分析”修改为“通过质谱分析技术检测肽段一级与二级谱图进行多肽的鉴定和定量分析”。2. 将文中“图谱”修改为“谱图”。三、蛋白质组学分析方法 1.“2.1 质谱技术”增加其他质谱碎裂技术，修订为：“蛋白质组样品经过提取、分离富集或者进一步变性还原、酶切、多肽分离富集处理后，选择适宜的分离系统导入离子源离子化，电离生成带电荷离子，离子通过碰撞诱导解离（Collision induced dissociation, CID）、高能碰撞诱导解离 High energy collision dissociation, HCD）、电子活化解离（Electron activated dissociation，EAD）或其它适宜的解离技术进行碎片化，后在加速电场的作用下形成离子束进入质量分析器，通过质量分析器分离和过滤不同质核比的离子，过滤后的离子最终经检测系统转换为可测量的信号，从而得到质谱图，以获得蛋白质的相关信息”。 2. 将文中“质核比”修改为“质荷比”。 3. 将“数据库检索对肽段碎裂质谱谱图和数据库中的理论序列谱图进行匹配，实现肽段鉴定”修改为“质谱数据文件的数据库检索对肽段碎裂质谱谱图和数据库中的蛋白质计算机模拟消化肽段碎裂模式进行匹配，以进行肽段鉴定”。4. 将“肽谱图匹配（peptide spectrum matching，PSM）”，“肽谱图匹配（peptide-spectrum matches，PSM）”，统一为“肽段谱图匹配 (peptide-spectrum matches, PSMs)”。 5. 将“统计学分析（如 p 值）”修改为“统计学指标（如 p 值）”。 2024 年 6 月 与第一次公示稿比较，修改处加橙色标记 四、蛋白质组学分析的质量控制 1. 在表 1 中增加样品处理中酶解漏切率、酶解位点特异性等 QC 评价指标及描述；增加色谱分析中峰宽和半峰宽等 QC 评价指标及描述；增加质谱分析中TIC 图等 QC 指标及描述。2. 调整仪器性能参数的描述顺序。将“建议结合仪器的性能进行设置，例如可将两个参数均设置为 20ppm，也可以将母离子质量误差设置为 10ppm，子离子质量误差设置为 0.02Da”修改为“建议结合仪器的性能设置质量误差，如将母离子质量误差设置为 10 ppm，子离子质量误差设置为 0.02 Da，也可将两个参数均设置为 20 ppm”。3. 将“鉴定的蛋白质应具有至少 70%的覆盖率，即被鉴定的多肽的氨基酸序列覆盖蛋白质氨基酸序列的百分比，70%的蛋白覆盖率可提高鉴定结果的可信度和全面性”修改为“蛋白质覆盖率是指被鉴定的多肽的氨基酸序列覆盖蛋白质氨基酸序列的百分比，70%及以上的蛋白质覆盖率可提高鉴定结果的可信度和全面性”。