核酸提取(核酸的分离与纯化)主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开,但在分离核酸时,应保证核酸分子一级结构的完整性,并排除其他分子污染。核酸提取方法一般包括细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤,而每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。操作过程中首先通过物理、化学或酶解作用裂解细胞,使核酸释放出来,并去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂肪类等生物大分子的过程。在此基础上,沉淀核酸、去除盐类和有机试剂等杂质,从而得到纯化的核酸。核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器。在传统的手工核酸提取过程中通常采用离心澄清的方法,操作时费时费力。近年来,出现了磁珠分离技术,利用磁珠在一定条件下对核酸具有很强亲和力的特点,吸附核酸。当条件改变时,磁珠又可以与其吸附的核酸分离,从而得到纯化的核酸。这种方法简便、高效、易于操作,是目前核酸提取仪采用的主要方法。具体来说,磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞,从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面,而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后,再在磁场作用下,使磁性颗粒与液体分开,回收颗粒(即磁珠-DNA 混合物),再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂,操作简单,符合核酸自动化提取要求,是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。
[img=,257,264]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2017/06/201706301258_01_3194653_3.png[/img]Aurora全自动核酸提取系统采用专利SCODA( Synchro-nous Coefficient of Drag Alteration)电泳DNA操作技术,从具有挑战性的样品中浓缩和纯化DNA.SCODA根据DNA的物理特性选取长的带电聚合物(而非通过其其化学性质或化合物亲合力分离DNA).因此,系统可提供卓越的污染物排斥.此外,Aurora系统可从单一样本中提取高达100倍浓度,从几百分子到100微克的DNA.可高效稳定地纯化提取核酸和蛋白,尤其适合珍贵样品、低生物质低丰度样品、土壤、环境等各类型难提取样品的提取. 产品特征电泳纯化高分子量DNA的提取低生物量和严重抑制样品处理样品成本为零,适合低通量样品处理宏基因组学/NGS/光学测绘/单分子测序应用应用领域生命科学研究土壤与环境农业生物技术法医学 技术参数样品处理时间:2-4小时,样品盐度60%DNA / RNA片段大小: 500 nt RNA,300 bp - 50 kb DNA,可扩展到1Mb污染物抑制: 10-50,000X2产量: 60 uL 该系统避免了研磨、匀浆等传统方法的费力、耗时、低效等诸多缺点,通过非机械过程直接从环境样品,细胞提取物,或带电泳插头的琼脂糖中回收完整的高纯大片段DNA。DNA提取缓冲液、DNA凝胶柱可用于进行后续的克隆,归档,光学标测,或PCR、测序等遗传分析。系统可从至多5毫升稀释裂解液或洗出液中提取核酸,回收低生物质样品包括沉积物,土壤,苔原,和水样中的微量核酸。系统还可净化商业试剂盒受污染洗脱液,提高样品利用率,并无缝对接到现有的工作流程中.
问题描述:核酸提取方式主要有哪些?有何差异?解答:[align=left][font=宋体][color=black]目前主流的核酸提取方法有煮沸裂解法、苯酚氯仿抽提法、离心柱法、磁珠法,接下来介绍这几个方法的原理、优劣势及适用场景。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]1[/color][/font][font=宋体][color=black])煮沸裂解法:原理是通过加热使细胞膜破裂,充分暴露核酸,核酸可溶解于上层水溶液中,通过高速离心沉淀变性蛋白质和细胞碎片,上清液即为核酸粗提液。此方法的操作相对简单,成本低,但由于是粗提,成分比较复杂,有时可能带来一定的体系干扰或者裂解不充分的情况,一般用于细菌定性鉴定时使用。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]2[/color][/font][font=宋体][color=black])苯酚氯仿抽提法:原理是苯酚和氯仿抽提除去蛋白和多糖类杂质,获得相对较为纯净的基因组核酸。成本比较低廉。缺点是试剂毒性较大,长时间操作对人员健康有较大影响。试剂需要自行配制,批次间差异显著。提取效率相对较低,不适宜少量或者微量操作。一般用于大量核酸样本的抽提。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]3[/color][/font][font=宋体][color=black])离心柱法:原理是利用裂解液促使细胞破碎,使细胞中的核酸释放出来,利用柱子中的载体吸附提纯核酸。它的优点是比传统的酚氯法提取纯度高、毒性低,有利于[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]RNA[/color][/font][font=宋体][color=black]保护,而且能进行微量操作,价格较低。缺点是不便于高通量、自动化操作,对实验室设备和人员的操作技能要求较高。目前应用广泛,常用于细菌、病毒、动物组织等多种样本的核酸提取[/color][/font][sup][font='Times New Roman','serif'][color=black][13][/color][/font][/sup][font=宋体][color=black]。[/color][/font][/align][align=left][font=宋体][color=black]([/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]4[/color][/font][font=宋体][color=black])磁珠法:与离心柱的操作原理基本相同,利用交换吸附材料吸附核酸,从而将核酸和蛋白质等细胞中其他物质分离。优点是能够实现自动化、高通量操作,配合核酸自动提取仪使用,操作简单、用时短,核酸纯度高、浓度大,可广泛用应用于血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]DNA[/color][/font][font=宋体][color=black]和[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]RNA[/color][/font][font=宋体][color=black]分离,但超高通量样本同时进行时,可能存在一定的污染风险。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
核酸提取仪有两种分类分类方式,一种是按用途进行分类,另一种是按照应用试剂的不同进行分类。(1)按照用途分类:一类是自动液体工作站,自动液体工作站是功能非常强大的设备,液体分液、吸液等自动完成,甚至可以整合扩展、检测等仪器设备,实现标本提取、扩增、检测全自动化。提取核酸只是其功能的一个应用,不太适合常规实验室提取核酸,一般都应用在单一类标本并且一次提取标本量非常大(至少96个,一般几百个)的实验需求上。自动工作站的平台建立及平台的运作,需要比较大的资金。另一类是小型的自动化仪器,小型的自动化仪器是通过运行结构的特殊设计来达到自动提取核酸的目的,可以在任何实验室得到应用,最近几年有很多机型陆续投放市场。(2)根据应用的试剂不同分类:一类是应用磁珠法试剂的仪器,另一类是应用离心柱法试剂的仪器。应用磁珠法的自动核酸提取仪操作简便,容易自动化,是目前市场上的主流,如QAGEN、Lab-Aid 820等仪器。与传统的手工操作相比核酸提取仪的优势:核酸提取仪一般具有以下的特点:(1) 无交叉污染:仪器部件未接触到生物学样本;(2) 自动化系统:每次提取工作,操作者只需要做好安装工作,布置好孔板(提供提取所需要的试剂).提取整个过程都不需要人为的帮助,仪器自动完成;(3)提取控制:在提取过程中,如果操作者需要,该系统允许您对提取过程进行控制。
你们在对样本中的核酸提取时,都使用的什么仪器去进行的提取?
想买个核酸提取仪,做动植物组织DNA荧光定量PCR检测,有什么好的仪器,国产进口都可以,请用过的推荐下。谢谢
单位计划采购自动核酸提取仪,听几个进口厂家推介了,得出来的观点相悖,特求助高人指点一二。到底是滤膜法好还是磁珠法好?是否为真正的全自动怎样去区分?高通量与否怎样鉴定?
问题描述:核酸提取中裂解液的使用量为多少合适?解答:[align=left][font=宋体]裂解液的用量原则是确保能彻底裂解样品,同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低,将导致沉淀效率低,影响得率;浓度过高,去除杂质的过程复杂且不彻底,导致纯度下降。另外,裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的,而不是以核酸含量为基准,这一点务必牢记。[/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
出售赛默飞核酸提取仪kingfisher prime,仪器未使用过。开机正常。有意义私聊。[img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/11/202211120846072310_5286_4092743_3.png[/img]
核酸纯化柱(微/小提)http://www.biocomma.cn/images/2mlxiaoti.jpg核酸纯化小提柱产品组成外管医疗级PP,2ml,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,收集离心试剂。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,底部鲁尔接口设计,方便试剂流出。筛板特殊纤维材料,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,厚度仅为0.3mm,孔径50um,致孔,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极大降低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。核酸纯化微提柱http://www.biocomma.cn/images/2mlweiti.jpg产品组成外管医疗级PP,2ml,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,用来收集离心液。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,底部鲁尔接口设计,方便离心液收集。装配位(这里指装配硅胶膜、筛板和压圈处)1直径为7.4mm,与市场上核酸小量提取同等规格。装配位2,直径为5.4mm,此处为微量核酸提取装配位,面积为小量提取装配位的一半。筛板特殊纤维材料,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的有机溶剂,厚度仅为0.3-0.5mm,孔径50um,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。CommaPrep™核酸微提/小提柱可用在核酸提取过程(见图1)中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中http://www.biocomma.cn/images/nucleic-2.jpg 图1 核酸提取过程核酸吸附量:核酸纯化小提柱:0-20ug核酸纯化微提柱:0-10ug规格:2ml离心管+吸附柱 适用范围:核酸提取原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改 变溶液环境使DN A溶解到纯水或TE中。DNA提取:核酸提取柱用于基因组DNA抽提,不需要使用平衡液。抽提缓冲液,或者结合液中需要胍盐(如硫氰酸胍等) 辅助DNA吸附到膜上。RNA提取:裂解液建议使用含有硫氰酸胍(异硫氰酸胍)可以抑制RNA酶活性,保证RNA酶完整性;可以配合Trizol使用,样品经Trizo裂解后,氯仿分相去除蛋白等杂质,取上层过柱,然后70%乙醇洗涤,即可得到纯净的RNA。【注意事项】 1.上柱前溶液的PH值应小于7;2.洗涤液中的乙醇浓度不得低于50%,一般55%--80%之间。3.最后洗脱,可以用去离子水或者TE(10 mmol/LTris-Cl,1 mmol/L EDTA (pH8.0))。如果长期保存DNA,建议使用TE。定购信息Cat#品名离心柱规格提取量包装DNAK1001CommaPrep™质粒小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1004CommaPrep™琼脂糖凝胶回收纯化柱2ml0-10μg100套/包DNAK1007CommaPrep™ 核酸纯化柱(微小提)2ml0-10μg100套/包DNAK1008CommaPrep™基因组小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1009CommaPrep™RNA小提纯化柱2ml0-20μg100套/包DNAK1002CommaPrep™质粒中提纯化柱15ml0-100μg20套/包DNAK1003CommaPrep™质粒大提纯化柱50ml0-500μg10套/包定制
问题描述:为了保证分离核酸的完整性和纯度,在实验过程中应注意哪些?解答:[align=left][font=宋体][color=black]尽量简化操作步骤,缩短提取过程,以减少各种有害因素对核酸的破坏;减少化学因素(酶、[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]PH[/color][/font][font=宋体][color=black])对核酸的降解,提取核酸过程中所用枪头、容器等与核酸直接接触的实验用具应保证无酶,避免核酸被酶解。为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏,操作多在[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]pH[/color][/font][font=宋体][color=black]为[/color][/font][font='Times New Roman','serif'][color=black]4.0-10.0[/color][/font][font=宋体][color=black]的条件下进行;减少物理因素对核酸的降解,物理降解因素主要是机械剪切力,其次是高温。[/color][/font][/align]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
2022年新冠疫情来势汹汹,做核酸成为许多人的日常,核酸检测实验也成为许多生物实验人的日常。核酸检测实验过程复杂,病毒灭活是非常重要的一步,其中,水浴锅作为常见的恒温仪器,在病毒灭活中发挥着重要作用。[img=,630,]https://pic1.zhimg.com/80/v2-e8a3063325978b82ec93ba0bb143a178_720w.jpg[/img][b][i]一、哪个实验步骤能用到水浴锅?[/i][/b]核酸检测过程复杂,包括信息录入、核酸提取、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]基因扩增[/color][/url]、结果分析等环节。核酸样本收集之后,首先要做的就是将样本中的病毒进行灭活,灭活之后才能开启信息录入、核酸提取等一系列的环节。经研究人员测试发现,新冠病毒对紫外线和热敏感,只需高温就可以把新型冠状病毒灭活。目前,国家卫健委相关指南就要求,在提取样本核酸前需将样本置于56℃以上以灭活病毒。因此,将病毒样品放入56℃的恒温水槽或是水浴锅中,高温消毒30分钟以上,成为新冠病毒灭活的常用方法。[img=,623,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-5cb88675f34cdc6a354f242c10bb2679_720w.jpg[/img][b][i]二、力辰水浴锅的优势有哪些?[/i][/b]疫情反复突增,核酸检测任务量大且紧急,缩短实验时间,提升检测效率成为各生物实验室的亟需解决的痛点之一。力辰数显恒温水浴锅,控温精准、升温迅速、性能稳定,可以有效缩短预热时间,精准控制加热温度,适用于实验室[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]核酸检测的病毒灭菌环节。[img=,625,]https://pic1.zhimg.com/80/v2-4746ea8d3c01f1bf78f7097bd45b94a0_720w.jpg[/img][b]1、微电脑控温仪表、PT100温度传感器,控温准确[/b]力辰数显恒温水浴锅采用抗振动、稳定性好、准确度高、耐高压的PT100温度传感器,同时使用数显控温仪表,按键控制,能做到准确控温。从控温精度来看,力辰水浴锅的温度范围在室温+5℃-100℃之间,控温精度≤±1℃,部分机型可做到≤±0.5℃的控温精度,充分满足用户精准控温需求。[img=,588,]https://pic4.zhimg.com/80/v2-fa2d2ed62ded9533223366a99f5c7ccb_720w.jpg[/img][b]2、大功率变压器,升温快、受热均匀[/b]机身内部设有大功率变压配套电路板,可控硅控制,配套不锈钢加热管,升温速度快。容积3-38L的水浴锅,由室温升至沸点(100℃)均小于70分钟。同时部分型号配备磁力搅拌功能,边加热边搅拌,使受热更均匀,能有效缩短实验时间,提升实验效率。[img=,602,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-e2358e4366ba4e4495eb331b077ec195_720w.jpg[/img][b]3、可拆卸式锅盖,适配多种规格容器、保温性能高[/b]锅盖采用可拆卸式,能适配多种规格容器,保温性能好,有效保证温度精准性,确保样本处在稳定的恒温环境中;同时采用耐高温塑料,使用寿命长,节约实验室成本。[img=,619,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-4e01da7de94c634a57134b428b0e845d_720w.jpg[/img][b]4、冷轧钢外壳、304不锈钢内胆,耐腐蚀性强、易清洗[/b]外壳采用冷轧钢,防生锈、防静电;内胆使用优质304不锈钢,一次性冲压成型,耐腐蚀,易清理消毒,杜绝病毒的残留。[img=,616,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-d1b917968d59035122412f8b341f8162_720w.jpg[/img]在生物和制药行业,水浴锅是必备的实验仪器。核酸检测、疫苗研制等需要灭活病毒的实验,其他需要培养微生物的实验等等,都需要水浴锅提供恒温环境;除此之外,水浴锅可以结合旋转蒸发器、真空冷冻干燥箱等仪器,进行多功能化学反应作业及药物储存,用途十分广泛。【参考文献】张沁欣,赵庆顺.(2020).病毒核酸提取前的高温灭活过程显著降低可检出病毒核酸模板量.[ChinaXiv:202002.00034]
质粒提取柱(大中/硅胶膜)CommaAffin™质粒中提柱http://www.biocomma.cn/images/nucleic-11.jpg产品组成外管医疗级PP,15ml,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,用来收集离心液。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,底部鲁尔接口设计,方便离心液收集。直径11.0mm筛板特殊 纤维材料 ,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,厚度仅为0.3-0.5mm,孔径50um,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。CommaAffin™质粒大提柱http://www.biocomma.cn/images/nucleic-3.jpg产品组成外管医疗级PP,50ml,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,用来收集离心液。内管医疗级PP,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,底部鲁尔接口设计,方便离心液收集。直径24.0mm筛板特殊 纤维材料 ,在高速离心过程中,支撑硅胶膜,保证硅胶膜的完整性,耐受酸碱和大部分的 有机溶剂 ,厚度仅为0.3-0.5mm,孔径50um,孔隙率只有不到百分之二十,相比市场上同类产品,比面积小,静电小,DNA吸附极低。硅胶膜孔径1um,高盐低pH值选择性吸附DNA、RNA,低盐高pH值释放DNA、RNA压圈医疗级PP,固定筛板与硅胶膜。CommaAffin™核酸中/大提柱可用在核酸提取过程(见图1)中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中核酸吸附量:CommaAffin™质粒中提柱:0-100ug 规格:15ml离心管+吸附柱CommaAffin™质粒大提柱:0-500ug 规格:50ml离心管+吸附柱 http://www.biocomma.cn/images/nucleic-7.jpg 图1 质粒提取过程适用范围:核酸提取原理是在特定溶液环境下(高盐、低pH)使核酸吸附在固相介质(硅胶膜)上,洗涤去除杂质后,再改 变溶液环境使DN A溶解到纯水或TE中。质粒DNA提取:抽提缓冲液,或者结合液中需要胍盐(如硫氰酸胍等) 辅助DNA吸附到膜上。【注意事项】 1.上柱前溶液的PH值应小于7;2.洗涤液中的乙醇浓度不得低于50%,一般55%--80%之间。3.最后洗脱,可以用去离子水或者TE(10 mmol/LTris-Cl,1 mmol/L EDTA (pH8.0))。如果长期保存DNA,建议使用TE。订购信息Cat#品名柱管规格包装004407质粒中提过滤管20ml50套/包004410质粒中提过滤管30ml50套/包004416质粒大提过滤管60ml20套/包
ZHD型紫外蛋白核酸检测仪使用说明 一、系统简介 蛋白核酸检测仪是层析分析的主要装置,配上层析柱、恒流泵、部分收集器(根据需要选配)和电脑打印设备即构成一套完整的液相色谱分离系统。它是当今从事生命科学研究、药物测定、化工、食品科学及医学研究等行业的现代分析实验仪器。广泛用于工业、农业、科研和大专院校的科学研究和教学实验。其原理是根据物质(样品)对紫外光有明显吸收的特征,实现对样品成份含量比对分析,以便进行样品蛋白、核酸物质识别检测和含量测定。然而,目前国内生产的蛋白检测仪虽然种类繁多,但均采用记录仪描谱且预热时间较长。 ZHD型紫外蛋白核酸检测仪的研制成功,为科研和实验人员利用电脑系统实现核酸蛋白检测和分析提供了一种先进的手段,其特点是系统稳定、操作简便、电脑显示谱图、数据分析和打印谱图。 二、系统特点 本系列检测仪有别于其他检测仪,主要有以下特点: 1、预热时间短,一般做实验只要预热10分钟左右。 2、稳定性高,预热后每小时漂移一般小于0.001。 3、操作简洁,开机后仪器自动调整透光率(T)到100%,吸光度(A)调整到0.000。 4、透光率(T)和吸光度(A)对应准确,点两者误差小于1%。 5、双数据显示,仪器适时显示吸光度(A)和透光率(T)。 6、仪器带有电脑接口和记录仪接口(吸光度0—200mv)。 7、工作软件提供谱图采集、分析计算、保存、打印等功能,可将谱图插入文档(word)文件中。 8、一台电脑可配多台检测仪(由电脑有效端口数决定)。 三、 技术性能 1、通过测量选择菜单,在电脑屏幕上可描出吸光度(A)谱图,透过率(T%)谱图以及A-T%谱图。 2、通过图形平移、复读伸缩和压缩选择等菜单,可对谱图并进行幅度、宽度调整和谱图参数计算,预览满意后打印输出。 3、在描谱过程中,电脑会自动将图形左移(也可人工调整),电脑描谱最长时间为20小时。 4、采集数据自动保存。 四、主要参数: 1、波长:254nm,280nm(可根据用户需要调配)。 2、样品池100ul,光程3mm。 3、量程:吸光度(A):0--2.000 透光率(T):1%—100%。 4、分辩率:吸光度(A):0.001 透光率(T):0.1%。 5、电脑分析参数:峰高、峰宽、峰面积、峰面积比、保留时间、面积含量(归一化)、层析柱分辩率等。 6、电源220V±10%,50HZ。 7、主机重量:约3.5Kg。 五、系统安装与操作步骤 1、将仪器背板上的输出端通过一根串行口连接电缆与电脑主机的COM1或COM2串行口相连。 2、打开紫外蛋白核酸检测仪电源,仪器预热10分钟左右。 3、打开电脑后,将应用软件(ZHD.exe)复制到硬盘上。钦一下仪器面板上的复位按钮,待仪器显示0.000A和100%T后,双击ZHD.exe启动应用软件,系统进入采集(分析)状态。 4、在“测量选择”菜单下,用鼠标选择检测项目。 5、在“检测操作”菜单下点击“测量开始”,电脑开始采集。 6、要停止采集,点击“检测操作”下的“测量结束”菜单,然后关闭紫外蛋白酸检检测仪。 六、层析普工作站软件使用 1、 对硬件的基本要求: a、电脑在简体中文Windowsxp操作系统上运行; b、显示器分辩率为1024*768,小字体,256色配置; c、图形打印机; d、电脑系统必须正常工作,并保证串行口(COM2或COM1)有效; 2、系统连接无误后先让检测仪工作,再执行应用软件ZHD.exe; 3、 点击文件操作菜单下的“打开谱图”,出现文件操作对话框,打开随机盘上的数据文件(.ran),图形被打开,熟悉菜单操作。菜单介绍如下: a、“文件操作”菜单下有打开谱图、保存谱图、打印谱图、打印预览等; b、“检测操作”菜单下有测量开始、测量结束(测量结束后,系统在应用程序目录下生成“文件名.TXT”文件,此格式文件可在Excel软件中打开,并可转贴到Word文档中使用); c、“灵敏度选择”菜单下有A、T%、A-T%选项; d、“谱图平移”菜单后有向左慢移动 []和向右快移动[]; e、“谱图重绘”菜单:从起始点描谱;清理屏幕;释放压缩; f、“谱图全貌”菜单:在屏幕上观察全部谱图。 g、“参数选择”菜单:可对谱图进行参数分析计算。方法如下:在吸光度状态下,点击鼠标左键选取基线及时间范围(第一次点击选取第一点,第二次点击选取第二点),点击“选择参数”下拉菜单的峰高、标准差、半峰宽、峰底宽、峰面积、峰面积比、面积含量及保留时间等参数进行计算,还可间接计算出层析柱分辨率;双击鼠标左键,即可取消本次计算。 h、在吸光度(A)或透光率(T%)状态下,单击鼠标右键,屏幕显示该鼠标点的数值;双击鼠标右健,擦除屏幕显示数值。 七、注意事项: a、 更改波长方法:打开样品池挡板后,可见到滤光片的燕尾型支架和印字(245或280代表当前所使用的波长),用手将其轻轻抽出,换向后插入原位,再将样品池挡板装上,拧紧固定螺钉即可。 b、 在检测仪和电脑正常工作后才能运行应用软件; c、 应用软件执行后,十秒钟后不出现采集分析界面,说明电脑未收到数据,需检查系统连接是否正常; d、 在A—T%描谱过程中,开始1小时内,T%谱以实蓝线表示;1小时后(或点击“图形重绘” ),已描过的T%谱会以虚蓝线表示; e、 测量开始后(特别是出峰以后)不要按复位按钮。 f、 要停止采集,请点击“测量结束”后,先点击“EXIT”,再关闭检测仪。 g、 开始测量时,屏幕会弹出保存文件对话框,要求输入数据文件名及存放路径;之后,电脑自动保存数据。 I、基线选取要保证基线与所选峰必须要有两个焦点,并与其他峰无焦点。
请问用SDE提取致香成分,大家能提取到佳乐等沸点高的组分吗?
有谁用过FOSS2045型自动索式提取仪做PBB、PBDE啊!这个参数该怎么设置,主要是指沸腾时间、浸提时间该怎么设置啊!第一次用这个,不知道这两个参数该设置多久?有谁用过,指导下,谢谢了!
核酸蛋白检测仪是层析分析的主要装置,核酸蛋白检测仪配上层析柱、恒流泵、部分收集器、层析谱分析系统(根据需要选配)和电脑打印设备即构成一套完整的核酸蛋白检测仪分离层析系统。它是当今从事生命科学研究、药物测定、化工、食品科学及医学研究等行业的现代分析实验仪器。核酸蛋白检测仪分析系统广泛用于工业、农业、科研和大专院校的科学研究和教学实验。其原理是根据物质(样品)对紫外光有明显吸收的特征,实现对样品成份含量比对分析,以便进行样品蛋白、核酸物质识别检测和含量测定。在生化分析、环保科学、食品研究、毒理研究、新药开发等领域中对核酸、蛋白检测、纯化和提取提供了一种独特的分析手段。
[size=16px][color=#ff0000][b][url=https://www.instrument.com.cn/job/position-88822.html]立即投递该职位[/url][/b][/color][/size][b]职位名称:[/b]核酸提取试剂盒研发员-苏州市[b]职位描述/要求:[/b]岗位职责:负责针对各种临床样本的核酸提取试剂的开发和优化;配合磁珠进行核酸提取试剂盒的开发和优化;如游离DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]纯化试剂盒、DNA片段筛选试剂盒等。岗位要求:拥有相关学科的大专/硕士或博士学位,如生物技术、分子生物学等。至少1年以上核酸提取的开发经验,熟悉相关实验操作和技术原理。[b]公司介绍:[/b] 未名环诊是国内成立最早的环境分子诊断企业,以北京大学研究成果和团队基础,研发基于污水流行病学的大数据监测评估技术,开创了污水毒情监测业务,为各级政府提供毒情监测和溯源服务。为全国行业龙头,细分领域市场占有率超60%。与公安部、18个省级公安厅、200多个地市级公安局合作,为我国公安禁毒事业做出了巨大贡献和技术突破。 企业的发展目标为以城市生活污水为载体,不断挖掘污水中蕴含的城市大...[url=https://www.instrument.com.cn/job/position-88822.html]查看全部[/url][align=center][img=,178,176]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2021/08/202108160948175602_3528_5026484_3.png!w178x176.jpg[/img][/align][align=center]扫描二维码,关注[b][color=#ff0000]“仪职派”[/color][/b]公众号[/align][align=center][b]即可获取高薪职位[/b][/align]
利用硅胶膜法提取纯化质粒DNA摘要:系统的阐述了质粒核酸提取过程中针对裂解和核酸纯化两大关键步骤的研究,重点介绍了利用硅胶膜法提取纯化核酸,以及在实验过程中的一些经验。关键词:硅胶膜法;纯化;质粒DNA一、前言随着分子生物学技术的发展,核酸的分子生物学技术成为了药物研发、遗传病和感染性疾病的诊断、基因研究及物种鉴定等的常用研究手段之一。然而,核酸提取质量是进行下游一系列研究的关键,因此提取的方法会直接影响后续实验。细菌质粒是一类双链闭合环状的DNA,大小范围从1kb至200kb以上不等。各种质粒都是存在于细胞质中、独立于细胞染色体之外的自主复制的遗传成份。质粒已成为目前最常用的基因克隆的载体分子,重要的条件是可获得大量纯化的质粒DNA分子。硅胶膜法是一种应用最为广泛的提取纯化质粒DNA的方法,因硅基质材料可特异吸附核酸DNA,使用方便、快捷,不需要使用有毒溶剂如酚、氯仿等,使得提取质粒核酸像过滤一样简单。二、实验部分2.1 原理硅基质材料吸附核酸的原理主要利用DNA在高盐低pH值环境下与硅基质材料相结合,在低盐高pH值环境下与硅基质材料脱离的特征。其机理是带负电荷的DNA和带正电的二氧化硅粒子之间有很强的亲和力。在高浓度盐离子的作用下,盐离子打破水中的氢和二氧化硅上带负电荷的氧离子间的氢键,DNA与硅基质紧密结合,洗涤除去其他杂质;再用低离子强度的TE缓冲液或蒸馏水洗脱结合的DNA分子,机理是当盐被清除后,再水化的硅基质破坏了基质和DNA之间的吸引力,因而DNA从硅基质上被洗脱下来。2.2 主要试剂溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0)。溶液Ⅱ:0.2NNaOH,1% SDS。溶液Ⅲ:醋酸钾(KAc)缓冲液,pH 4.8。漂洗液:60mM 乙酸钾、10mM Tris-HCl (pH 7.5) 、60% 乙醇TE:10mMTris-HCl(pH 8.0),1mM EDTA(pH 8.0)。2.3 主要步骤该步骤采用CommaPrePTM的质粒小提纯化柱。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171513_556042_3310_3.jpgCommaPrep™核酸小提柱可用在核酸提取过程中过柱结合、洗涤、洗脱步骤中http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171516_556043_3310_3.jpg1. 取1.5ml过夜培养的菌液,加入离心管中,使用常规台式离心机,12,000 rpm 离心1 min, 尽量吸除上清。 (注意:应根据所培养菌体的浓度与质粒的拷贝数,确定收集的菌液量。菌量过大可能导致溶菌不充分,纯化时会影响质粒纯度菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。2. 将细菌沉淀重悬于100uL溶液Ⅰ中,移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀,使菌体分 散混匀。 (注意:如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。并且溶液Ⅰ中 要加入适量的RNA酶)3. 向离心管中加入200uL溶液Ⅱ,温和地上下翻转数次,并将离心管放置于冰上2-3min,使细胞膜裂解。(注意:温和地混合,不要剧烈震荡,以免污染基因组DNA。此时菌液应变得清亮,如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。)4. 加入150uL溶液Ⅲ,立即将管温和颠倒数次混匀,见白色絮状沉淀。12000rpm, 离心2分钟。 (注意:加入溶液Ⅲ后,要立即将管温和颠倒,避免产生局部沉淀。如果上清液中存在沉淀,可再一次离心。溶液Ⅲ为中和溶液,此时质粒DNA复性,染色体和蛋白质不可逆变性,形成不可溶复合物。)5. 吸取上清至吸附柱(内管)中(吸附柱在离心管中),尽量不要吸出沉淀,12000rpm,离心30秒。弃去废液,将吸附柱重新放入一个新的离心管中。6. 加入750uL的漂洗液(漂洗液要在实验前加入无水乙醇)12000rpm离心,1min。取出 DNA结合柱,弃废液,重新插入DNA结合柱到离心管中。7. 用500uL漂洗液重复冲洗过程。12000rpm离心,1min。(注意:重复一次可以增加质粒的回收效率。)8. 转移DNA结合柱到1个新的1.5mL离心管中,加入60uL的无核酸酶的水到DNA结合柱中,洗脱质粒DNA,室温条件下,12000rpm离心,1min。 (注意:不要转入DNA结合柱中的漂洗液,如果混有,就需要12000rpm离心,1min。洗脱缓冲液体积不少于50uL,体积小会影响回收效率。 洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大的影响,若用水洗脱应保证pH值在7.0-8.5范围内, pH小于7会降低洗脱效率。如果长期保存DNA,洗脱液建议使用TE。)9. 加入100uL的无核酸酶水到结合柱中,洗脱质粒DNA,离心12000rpm,1min。(注意:重复一次,增加洗脱效率。)10.洗脱DNA后,从1.5mL离心管中取出DNA结合柱并废弃。11.取2uLDNA进行电泳,检测DNA质量。12.将纯化的DNA溶液于-20℃中。三、实验结果图为质粒DNA(10kb)的凝胶电泳图,说明提取效果较好。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/07/201507171525_556044_3310_3.jpg
请把健康码统一下不要一个中国无数个码北京有健康宝,福建有八闽健康码内蒙有青城码,各地搞一个,一堆App不仅核酸要统一,健康码也要统一集中力量办大事,社会主义的优越性要体现
[font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号:SHZC20242033项目名称:核酸提取或纯化试剂采购项目预算金额:84.000000 万元(人民币)最高限价(如有):0.000000 万元(人民币)采购需求:[font=inherit]预算金额:84.00万元(预估)[/font][font=inherit]核酸提取或纯化试剂采购,限定单价:7元/人份,投标人报价超过[/font][font=inherit]限定单价[/font][font=inherit]的,将作无效报价处理[/font](具体项目内容、采购范围及所应达到的具体要求,以招标文件第三章—招标需求相应规定为准)合同履行期限:合同签订后一年本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、申请人的资格要求:[/font]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定;2.落实政府采购政策需满足的资格要求:本次招标执行政府强制或优先采购节能和环境标志产品、促进中小微企业、促进残疾人就业、支持监狱和戒毒企业、扶持不发达地区和少数民族地区以及限制采购进口产品等相关政策。如投标产品的制造商(或服务提供商)为符合《政府采购促进中小企业发展管理办法》(财库〔2020〕46号)第二条要求的中小微企业(本招标文件中所称的中小微企业的含义均与此相同),则投标人须在投标文件中提供格式符合财库〔2020〕46号附1要求的《中小企业声明函》;如投标人为残疾人福利性单位,则须在投标文件中提供格式符合财库〔2017〕141号文要求的《残疾人福利性单位声明函》,一旦中标将在中标公告中公告其声明函,接受社会监督;若提供声明函与事实不符的,将依照《中华人民共和国政府采购法》第七十七条第一款的规定追究法律责任。3.本项目的特定资格要求:1) 投标人单位负责人为同一人或者存在控股、管理关系的不同单位,不得参加同一标段投标或者未划分标段的同一招标项目投标;2) 为采购项目提供整体设计、规范编制或者项目管理、监理、检测等服务的供应商,不得再参加该采购项目的其他采购活动;3) 投标文件递交截止时间前三年内,未被国家财政部指定的“信用中国”网站(www.creditchina.gov.cn)、“中国政府采购网”(www.ccgp.gov.cn)列入失信被执行人、重大税收违法案件当事人名单或政府采购严重违法失信名单;4) 法人依法设立的分支机构以自己的名义参与投标时,应提供依法登记的相关证明材料和由法人出具的授权其分支机构在其经营范围内参加政府采购活动并承担全部民事责任的书面授权。法人与其分支机构不得同时参与同一项目的采购活动;5) 本项目面向大、中、小、微型企业,事业法人等各类供应商采购(但不接受公益一类事业单位投标,若为事业单位,应提供本单位为非公益一类事业单位的证明材料或承诺书);6)本项目不得转包、分包。[font=inherit]三、获取招标文件[/font]时间:2024年01月24日 至 2024年01月31日,每天上午9:00至11:00,下午13:00至16:00。(北京时间,法定节假日除外)地点:上海政采项目管理有限公司(上海市静安区天目中路380号11楼)方式:现场或通过邮箱wangjingwen@shzfcg.cn售价:¥600.0 元,本公告包含的招标文件售价总和[font=inherit]四、提交投标文件截止时间、开标时间和地点[/font]提交投标文件截止时间:2024年02月19日 10点30分(北京时间)开标时间:2024年02月19日 10点30分(北京时间)地点:上海政采项目管理有限公司(上海市静安区天目中路380号11楼会议室)[font=inherit]五、公告期限[/font]自本公告发布之日起5个工作日。[font=inherit]六、其他补充事宜[/font]1、 报名需提交的资料:(1) 供应商法人资格证明文件(如营业执照或法人登记证书等);(2) 法定代表人证明文件及法定代表人身份证或法定代表人授权委托书、被授权人身份证及本单位社保缴纳证明或劳动合同;2、 凡有意参加此次招标投标并满足上述条件的合格投标人,供应商携带上述报名资料复印件一套,在上述时间段内至代理公司进行现场报名或通过电子邮件(wangjingwen@shzfcg.cn)、领购招标文件,逾期不再办理。本项目将对完成报名的供应商同时发售招标文件。报名时提供的资料应与投标文件中的资格证明文件一致,如有不同,以投标文件为准。投标人的合格与否,将由评审小组决定。投标人须保证登记及获得招标文件需提交的资料和所填写内容真实、完整、有效、一致,如因投标单位递交虚假材料或填写信息错误导致的与本项目有关的任何损失由投标单位承担。[font=inherit]说明:获取招标文件环节对潜在供应商部分证明资料的审核系[/font][font=inherit]招标人[/font][font=inherit]为便于后续采购活动开展、减少无效投标响应的前置服务,该服务不属于前置资格审查,该服务产生的建议不影响供应商参与后续采购活动的权利,正式供应商资格审查按法定程序进行[/font][font=inherit]。[/font]3、 本招标公告的公告期限为5个工作日,有效期至2024年1月31日止。4、 投标人购买招标文件后若决定放弃投标的,请至少在投标文件递交截止前3天以书面或邮件形式通知招标代理机构。[font=inherit]5、 开标携带资料:届时请投标人的法定代表人或其授权代表出席开标会,并携带出席人的身份证和法定代表人授权委托书原件及本单位缴纳社保证明,如法定代表人出席开标会的携带法定代表人证明书原件。[/font]如上述日程安排发生变更,以招标机构发出的书面变更通知为准。[font=inherit]七、对本次招标提出询问,请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称:上海国际旅行卫生保健中心(上海海关口岸门诊部)地址:上海市长宁区金浜路15号联系方式:刘老师 021-626861712.采购代理机构信息名 称:上海政采项目管理有限公司地 址:上海市静安区天目中路380号11楼联系方式:单杰、王静雯 021-62091253*80033.项目联系方式项目联系人:单杰电 话: 021-62091253*8003
问题描述:核酸洗涤过程中应注意什么?解答:[font=宋体]洗涤对于整个提取过程来说,也是非常重要的。洗涤,首先一定要将沉淀悬浮起来;第二就是要控制一定的时间,尤其是当核酸沉淀比较大时[/font][font='Times New Roman','serif'] ([/font][font=宋体]使核酸沉淀最终蓬松[/font][font='Times New Roman','serif'])[/font][font=宋体];第三是少量多次;第四则是去上清要彻底。大部分资料中的操作基本上都是[/font][font='Times New Roman','serif']“[/font][font=宋体]倒掉上清后倒置在吸水纸上片刻[/font][font='Times New Roman','serif']”[/font][font=宋体],这一说法,对于质量好的离心管,如果离心管是经过硅化的,因为液体几乎不挂壁,所以上清可以去除得非常彻底;好的离心管,即使没有经过硅化,残留量也非常少,也没有什么问题;差的离心管,液体挂壁非常可观,其残留量多到会影响后续的实验。避免液体残余的一个好方法,就是倒掉液体后再短暂离心,将残液用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]吸出。还有需大家牢记的是,残液中都含有上一步操作中的杂质,其残留量与混匀程度、核酸沉淀的大小都有关。挥发时去掉的是乙醇,杂质是不会被挥发去除的。这步,切忌不要用手甩,这样容易将核酸甩掉。另外,核酸沉淀的大小及裂解液的裂解能力也决定了洗涤的强度。沉淀越大,裂解液的裂解能力越强,洗涤越要彻底:放置时间相对要长一点,洗涤次数也要考虑增加。[/font]以上内容来自仪器信息网《PCR实战宝典》
1、核酸抽提原理 简单地讲,核酸抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的核酸游离在裂解体系中的过程,纯化则是使核酸与裂解体系中的其它成分,如蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。 经典的裂解液几乎都含有去污剂 (如 SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐 (如Tris、EDTA、NaCl 等)。盐的作用,除了提供一个合适的裂解环境 (如 Tris),还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如 EDTA)、维持核酸结构的稳定 (如 NaCl)等。去污剂则是通过使蛋白质变性,破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质,从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶;利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段,促进核酸与蛋白质的分开,同时,也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂 (如GIT、GuHCl 等) 裂解的,该方法已经成为了 RNA 抽提的主流,却不是基因组 DNA 抽提的主流。 最常用的纯化方法,一是PC 抽提 + 醇沉淀,二是介质纯化。第一种方法是利用 PC对裂解体系进行反复抽提以去除蛋白质,实现核酸与蛋白质的分离;再用醇将核酸沉淀下来,实现核酸与盐的分离。第二种方法则是利用某些固项介质,在某些特定的条件下,选择性地吸附核酸,而不吸附蛋白质及盐的特点,实现核酸与蛋白质及盐的分离。高盐沉淀去除蛋白质是第一种纯化方法的一个变体,省略了 PC操作的麻烦。当然,也有不纯化的抽提方法,但是用途多局限于简单的 PCR。其它杂质 – 如多糖、多酚等 -的去除,基本上都是在这两种方法的基础上,通过增加一些特别的试剂,或者增加一些额外的步骤来实现的。2、了解你的实验样品 如果你研究某个实验样品,并且要抽提它的核酸,以下的信息一定要先行收集:该样品的核酸含量、酶含量、特殊杂质含量。如果你对样品的特点一无所知,当样品稍微有一点复杂时,抽提核酸的实验就会碰到许多问题。以血液为例,如果你不知道鸟的血液中有核细胞的含量是人血的千倍左右,而使用人血一样的起始量去抽提鸟血的基因组 DNA,怎么可能成功?失败了又怎么知道原因所在?同时,只有对实验样品有所了解,才能正确选择裂解方法。 绝大部分情况下,使用新鲜样品可以获得最好的结果。对一些杂质含量高的样品,如果使用新鲜样品抽提基因组 DNA 是碰到杂质残留过大的问题,可以试一下 -20C保存一天后再抽提的对策,可能会有意想不到的效果。样品如果因为某些原因必须先行保存,也要先简化一下样品:血液最好只保存有核细胞;将样品分割后保存,避免反复冻融。如果实验室不具备合适的保存条件,将样品先裂解后再保存,是一个不错的选择。3、裂解方法的评价 含蛋白酶的裂解方法,可以认为是抽提基因组 DNA 的首选。裂解包括膜蛋白的游离和与基因组 DNA相连接的蛋白质的游离。蛋白酶的作用是使蛋白质变小,故而对蛋白质的游离有巨大的促进作用;同时,巨大的基因组 DNA是很容易“缠”住大分子的东西的,蛋白质被蛋白酶消化变小后,则不容易被基因组 DNA“缠”住,有利于蛋白质在纯化操作中的去除,使最终获得的基因组 DNA 的纯度更高。另外一个思路是,如果基因组 DNA 与蛋白质“缠”在一起,在纯化的过程中有两种可能:如果基因组 DNA 的特性占优势,则纯化时以 DNA的形式被保留下来,导致蛋白质的残留;如果蛋白质的特性占优势,则纯化时以蛋白质的形式被去除,导致 DNA 的损失。有些样品,如肌肉,即使是RNA 抽提,也强烈建议使用含蛋白酶的裂解液 (或者在操作中的某个时候使用蛋白酶消化蛋白质),原因在于这些样品中的蛋白质,是非常难以去除的。该方法是获得最大得率和最高纯度的基础。 不使用蛋白酶的去污剂裂解方法,仍然在细胞基因组 DNA抽提方面有优势,尤其是当得率和纯度要求不是最高,而经济性及操作简单很重要时。控制好裂解液/样品的比例是该方法成功的关键。该方法结合高盐沉淀,可以实现最简单的操作,但纯度及得率的稳定性可能会比用 PC 抽提的差一些。 高浓度蛋白质变性剂 (如 GIT、GuHCl 等)的裂解方法,是抽提 RNA 的首选。总 RNA 的抽提,最重要的是快速裂解细胞膜,至于与基因组 DNA 相连接的蛋白质的裂解以及基因组与蛋白质“缠”住的问题,因为都不会对以后的纯化产生大的影响,可以不考虑。高浓度蛋白质变性剂能快速破坏细胞膜,进而迅速抑制住细胞内的 RNA酶,从而确保了 RNA 的完整性。除了极少量不适用该方法的样品 – 主要是植物,其它绝大部分样品的 RNA的抽提,都可以以高浓度的蛋白质变性剂为基础的。该方法也可用于基因组 DNA 抽提,非常快速简单,但纯度不是很高。 含 CTAB的裂解液,几乎成为富含多糖的样品,如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解方法。该方法成功与否与两个因素有关:一是 CTAB的质量,二是洗涤的彻底程度。CTAB 的质量对裂解效率有很大的影响,而且,似乎还说不清楚原因,因为即使是同一公司生产的纯度一样的CTAB,批号不同,效果就可能差别很大。洗涤去除 CTAB 要比其它的盐难一些,同时, CTAB的少量残留也会对酶活性有巨大影响,所以洗涤是否彻底也是该方法成功与否的关键。裂解时的温度,多使用65C;但如果发现降解严重或者得率太低,可以试一下 37C – 45C 这个相对低温的区域。 SDS碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法,具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA污染的特点。控制好裂解液/菌体的比例和操作的温和是该方法成功的关键。蛋白质的沉淀效率在 4C 会更好一些,所以,加入溶液 III 后在 4C静置一段时间以及采用 4C 离心去蛋白质,都可以提高质量。该方法不一定要使用 PC 纯化,但结合 PC 纯化,可以获得纯度很高的质粒。RNA的去除可以靠在溶液 I 中加入 RNase A (100ug/ml) 或者在最后的溶解液中加入 RNase A (25 ug/ml)来实现。总的感觉是,在溶液 I 中使用 RNase A,RNA 的残留少一些。不过,经典沉淀几乎没有办法彻底去除 RNA 残留。另外,对大质粒(50 kb 以上),该方法可能会有问题。 PCR模板的简易裂解方法,也是使用面很广的一类方法。该方法的特点是无须纯化,样品被裂解后即可直接取裂解液用于PCR,非常快速。也正因为不纯化,所以,假阴性 (即没有扩增出来的阳性)比例也比较高。该方法最简单的裂解液就是水,复杂一点的就会含有一些不会抑制后续的 PCR 反应,而且能提高裂解效率,甚至还可能部分消除样品内抑制PCR 反应杂质的东西,如 Triton X-100、甲酰胺等。再复杂一点的就会含有诸如 Chelex 100之类的能吸附部分杂质的介质。操作也非常简单,多使用温度的变化来实现样品的裂解,如煮沸、或者高温-低温的多次循环等。该方法最适合从一大堆样品中找出阳性样品,但却不适合用于判断某一个样品是阳性还是阴性。降低样品使用量可以提高阳性率,因为样品量的降低,同时意味着 PCR 的抑制物量的降低。 选择了合适的裂解液,下一步就是要控制好样品与裂解液的比例。这个问题非常重要,但却没有获得足够的重视。严肃的参考资料,都应该会提供一个简单的比例,如1ml 裂解液可以用于 T mg 组织或者 C个细胞;我的建议是,你的样品量绝对要小于资料所提供的。起始样品用多大,并没有具体的说法。如果不是样品量有限,则以能抽提出满足数次成功实验所需的核酸量,作为决定样品起始量的基础,会比较合理的。不要因为 1ml 裂解液可以抽提 100mg 样品,就一定使用 100mg样品。裂解液的用量,表面上与抽提的结果 (纯度及得率)没有关系,然而,在实际操作中,对结果是有比较大的影响的。裂解液的用量原则是:确保能彻底裂解样品,同时使裂解体系中核酸的浓度适中。浓度过低,将导致沉淀效率低,影响得率;浓度过高,去除杂质的过程复杂且不彻底,导致纯度下降。另外,裂解液的用量是以样品中蛋白质的含量为基准的,而不是以核酸含量为基准,这一点务必牢记。4、纯化方法 评价 PC 抽提/醇沉淀方法,是一个永不过时的方法。稳定、可靠、经济、方便。PC抽提可以彻底去除蛋白质,醇沉淀可以去除盐,对于一般的干净的样品 (杂质为蛋白质),该方法完全可以获得高质量的核酸。虽然每次 PC抽提都会损失一部分核酸(因为不可能将水相全部移取),以及低浓度核酸的醇沉淀效率低,但这些问题都可以靠操作的调整而得以解决或者减少影响。该方法的最大的问题是不适合大规模抽提。 PC抽提是去除蛋白质的一个非常有效的手段。苯酚能使蛋白质变性,变性后的蛋白质从水相中被析出,处于苯酚中或者苯酚/水相之间。PC抽提的关键是,一要混匀彻底,二要用量足够。彻底混匀,才能确保苯酚与蛋白质的充分接触,使蛋白质完全变性。许多人总是担心混匀的剧烈程度是否会对核酸,尤其是基因组 DNA 造成破坏,实际上大可不必如此小心。剧烈的混匀操作,是会部分打断大分子的基因组 DNA,但该破坏作用不会强烈到 DNA变成 10kb 以内的小片段。手剧烈晃动混匀后,基因组 DNA 的片段,大部分会大于 20kb,这个大小,除了一些特别的要求外,对 PCR和酶切,都是完全适用的。如果要求的片段非常大,如构建文库用,则不能使用剧烈的混匀方法,而只能来回温和颠倒混匀 –此时的关键是:裂解液的比例要足够大,使体系不要太粘稠。用量要足够,是因为苯酚去除蛋白质是有一定的饱和度的。超过了该饱和度,裂解体系中的蛋白质不会被一次去除,必须靠多次抽提,方可
[quote]项目概况北京市密云区疾病预防控制中心2023年病毒监测项目核酸试剂耗材 采购项目的潜在供应商应在中招联合招标采购平台: http://www.365trade.com.cn获取采购文件,并于2023年04月13日 09点30分(北京时间)前提交响应文件。[/quote][font=inherit]一、项目基本情况[/font]项目编号:TC230402K项目名称:北京市密云区疾病预防控制中心2023年病毒监测项目核酸试剂耗材采购方式:竞争性谈判预算金额:0.0000000 万元(人民币)最高限价(如有):0.0000000 万元(人民币)采购需求:[table][tr][td][align=center]标的名称[/align][/td][td][align=center]单价预算金额(元)[/align][/td][td][align=center]简要技术需求或服务要求[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]甲型/乙型/甲型H1N1亚型/季节性H3亚型人类流感病毒核酸四重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]9600[/align][/td][td][align=center]适用于定性检测从咽拭子、鼻拭子和痰液中提取的甲型、乙型、甲型H1N1亚型和季节性H3亚型人类流感病毒核酸。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]柯萨奇病毒A6型/A10型/A16型/肠道病毒71型/肠道病毒核酸四重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒(2+3版本)[/align][/td][td][align=center]12000[/align][/td][td][align=center]适用于定性检测从咽拭子、肛拭子、粪便和环境样本中提取的柯萨奇病毒A6型(CA6)、A10型(CA10)、A16型(CA16)、肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型核酸。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]6种腹泻病毒试剂盒三重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒(50人份)[/align][/td][td][align=center]18000[/align][/td][td][align=center]适用于从粪便、肛拭子和呕吐物中提取的诺如病毒GⅠ型、诺如病毒GⅡ型、札如病毒、A组轮状病毒、腺病毒、星状病毒的核酸检测。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]诺如病毒双重(GI/GII)核酸检测试剂盒(50人份)[/align][/td][td][align=center]6000[/align][/td][td][align=center]适用于定性检测从粪便、肛拭子和呕吐物中提取的诺如病毒GI、诺如病毒GII核酸。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]18种食源性病原体核酸多重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]50000[/align][/td][td][align=center]适用于定性检测从粪便、污染食品或培养物中提取的金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157、单核细胞增生性李斯特氏菌、克罗诺杆菌属、小肠结肠炎耶尔森氏菌、弧菌属、志贺氏菌、蜡样芽胞杆菌、气单胞菌属、产气荚膜梭菌、弯曲菌属、诺如病毒GⅠ型、诺如病毒GⅡ型、札如病毒、A组轮状病毒、腺病毒、星状病毒核酸。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]A组轮状病毒基因分型多重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]27000[/align][/td][td][align=center]适用于定性检测从粪便、肛拭子和呕吐物中提取的A组轮状病毒中6种G基因型和3种P基因型。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]24种常见腹泻病原体核酸多重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]72000[/align][/td][td][align=center]适用于定性检测从呕吐物、肛拭子、粪便、污染食品或培养物中提取的沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌、产志贺毒素大肠埃希氏菌、弯曲菌属、霍乱弧菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、类志贺邻单胞菌、气单胞菌属、产气荚膜梭菌、溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫、诺如病毒GⅠ型、诺如病毒GⅡ型、札如病毒、A组、B组、C组、H组轮状病毒、腺病毒、星状病毒、肠道腺病毒41型的核酸。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]27种呼吸道病原体核酸实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]10160[/align][/td][td][align=center]用于定性检测从咽拭子、痰液、培养物等样本中提取的甲型流感病毒、乙型流感病毒、鼻病毒、冠状病毒NL63/229E/OC43/HKU1、副流感病毒I/II/III/IV型、人偏肺病毒、博卡病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、肠道病毒、新型冠状病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、嗜肺军团菌、肺炎克雷伯菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、A组乙型链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌的核酸。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]五种脑炎脑膜炎病毒核酸多重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]15000[/align][/td][td][align=center]用于定性检测从脑脊液、血清等临床样本或培养物中提取的流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)、人双埃可病毒(human parechovirus, HPeV)、西尼罗病毒(West Nile virus, WNV)、单纯疱疹病毒1型和单纯疱疹病毒2型核酸检测。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]13种发热伴出疹病原体核酸多重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]39000[/align][/td][td][align=center]适用于定性检测从临床样本、病毒分离物中提取的水痘-带状疱疹病毒、人细小病毒B19、肠道病毒、风疹病毒、麻疹病毒、EB病毒,人疱疹病毒6型、登革热病毒、A组β溶血性链球菌、伤寒沙门菌、副伤寒沙门菌、伯氏疏螺旋体、立克次体常见发热伴出疹病原体核酸。[/align][/td][/tr][tr][td][align=center]副溶血性弧菌tdh/trh双重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]6000[/align][/td][td]可定性检测从污染食品增菌液或临床样本中提取的副溶血性弧菌致病相关的耐热性溶血毒素(TDH)编码基因tdh和TDH相关溶血毒素(TRH)编码基因trh。[/td][/tr][tr][td][align=center]五种致泻大肠埃希氏菌核酸多重实时荧光[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测试剂盒[/align][/td][td][align=center]15000[/align][/td][td]适用于定性检测从临床样本、食品样品、菌种及其培养物中提取的肠道致病性大肠埃希氏菌(EPEC)、肠道侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)、产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)、肠道出血性大肠埃希氏菌(EHEC)/产志贺毒素大肠埃希氏菌(STEC)、肠道集聚性大肠埃希氏菌(EAEC)的毒力基因谱及其致病型别[/td][/tr][/table]合同履行期限: 1年(合同期限以采购人与供货方签订合同约定的起止日为准)本项目( 不接受 )联合体投标。[font=inherit]二、申请人的资格要求:[/font]1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定;2.落实政府采购政策需满足的资格要求:关于印发《政府采购促进中小企业发展管理办法》的通知(财库〔2020〕46号)、《关于中国环境标志产品政府采购实施的意见》(财库【2006】90号)、《国务院办公厅关于建立政府强制采购节能产品制度的通知》(国办发【2007】51号)、《关于开展政府采购信用担保试点工作的通知》(财库【2011】124号)、《财政部、司法部关于政府采购支持监狱企业发展有关问题的通知》(财库【2014】68号)、《三部门联合发布关于促进残疾人就业政府采购政策的通知》(财库【2017】141号)、《北京市财政局关于新型冠状病毒感染肺炎疫情防控期间加大政府采购支持中小微企业力度的通知》3.本项目的特定资格要求:1.满足《中华人民共和国政府采购法》第二十二条规定2.本项目专门面向中小企业采购[font=inherit]三、获取采购文件[/font]时间:2023年04月04日 至 2023年04月10日,每天上午9:00至12:00,下午12:00至17:00。(北京时间,法定节假日除外)地点:中招联合招标采购平台: http://www.365trade.com.cn方式:详见特别告知。登录http://www.365trade.com.cn网址进行供应商注册。2、注册完成后,进入系统,点击 “查找商机”进行项目名称查询,找到项目点击“我要参与”。3、等待项目经理审核通过后,供应商选中需要投标的包加入购物车进行标书费用支付。4、支付完成后,供应商可以进行招标文件下载和交投标保证金。售价:¥200.0 元(人民币)[font=inherit]四、响应文件提交[/font]截止时间:2023年04月13日 09点30分(北京时间)地点:北京市海淀区学院南路62号中关村资本大厦会议室(详见六层中招公司前台大屏幕所示会议室)[font=inherit]五、开启[/font]时间:2023年04月13日 09点30分(北京时间)地点:北京市海淀区学院南路62号中关村资本大厦会议室(详见六层中招公司前台大屏幕所示会议室)[font=inherit]六、公告期限[/font]自本公告发布之日起3个工作日。[font=inherit]七、其他补充事宜[/font][align=center]特别告知[/align]各潜在投标人:本项目接受网上发售、下载电子版招标(采购)文件/资格审查文件(下简称“标书”),现将有关注意事项特别告知如下:[list][*]网上注册:凡有意在线获取电子版标书的潜在投标人,请务必在本项目电子版标书发售截止时间前,登录中招联合招标采购平台([url=http://www.365trade.com.cn/]http://www.365trade.com.cn[/url];下简称“交易平台”)或在中招国际招标有限公司网站主页进行免费注册。潜在投标人只需注册一次,不同的经办人可建立多个账户。交易平台负责对投标人注册信息与其提供扫描件信息进行一致性检查。[*]标书下载:经办人凭获得的用户名、密码验证身份登录、上传《招标(采购)公告》要求的报名资料(如有)、购买并下载电子标书,逾期将无法下载获取。[/list]潜在投标人可选择现场购买纸质标书,但仍需完成免费注册事宜。购买纸质标书后,仍可在交易平台缴费下载电子版标书。[list][*]电子版标书下载收费:如在线购买并下载电子版标书,除标书款外还需通过网银支付标书下载服务费,收费标准为每标包50元,由中招联合信息股份有限公司出具增值税电子普通发票,标书购买人可登录“中招联合招标采购平台”自行下载增值税电子普通发票。标书下载费一经收取不予退还。[*]潜在投标人成功下载电子版标书后,标书款发票、纸质标书可与中招国际招标有限公司本项目联系人确定领取方式。[*]其它事项[/list][list][*]交易平台首页帮助中心提供操作手册,潜在投标人可以下载并根据操作手册提示进行注册、登录、网上购买下载电子版标书及下载费支付、发票开具领取等操作。[/list]如遇平台操作问题,可拨打交易平台统一服务热线:400-092-8199,热线服务时间为工作日上午9点到12点,下午1点30分到5点。[font=inherit]八、凡对本次采购提出询问,请按以下方式联系。[/font]1.采购人信息名 称:北京市密云区疾病预防控制中心地址:北京市密云区密云镇新西路50号联系方式:张老师 010-690548392.采购代理机构信息名 称:中招国际招标有限公司地 址:北京市海淀区学院南路62号中关村资本大厦联系方式:苏俊玮、杨嵬 010-62108055、010-621082293.项目联系方式项目联系人:苏俊玮、杨嵬电 话: 010-62108055、62108229
1. 使用正确的细胞或组织储存条件 在样品用液氮瞬间冻结之后,应该储存在-80°C,千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻,也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉,然后置于裂解液中进行匀浆。RNAfixer使样品储存更为便利。储存在RNAfixer中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期,在4°C可稳定保存长达1个月,或永久保存在-20°C。2. 消除环境RNase的污染为了得到完整的、高品质RNA,在整个RNA制备过程中,当RNA离开强蛋白变性剂(如离液裂解液或酚)的保护时,避免引入新的RNase污染就非常关键。由于RNase几乎是无所不在,所以必须确保与纯化的RNA接触的每一样东西都是无RNase污染的。所有的表面,包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备,都必须用表面去污净化溶液如RNase喷雾清除剂 来处理过,去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的RNase污染,可以用RNAsafe。必须保证一直使用无RNase的枪头、试管和溶液,手套也应经常更换。3.迅速灭活内源的RNA酶,以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活:1)用含离液(如胍盐)的细胞裂解液收获样品,并立即匀浆。2)用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是:组织块必须保证足够小,在浸入液氮的瞬间就能冻结,以确保瞬间令RNA酶失活。3)立即将样品置于RNAfixer无液氮RNA样品储存液中。它是一种水相、无毒的收集试剂,能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄(0.5 cm),这样RNAfixer才能在RNase破坏RNA之前迅速渗入组织块中。4. 选择合适破壁方法细胞或组织的彻底匀浆对RNA提取来说,是一个很关键的步骤,它能够防止RNA的损失和降解。匀浆的方法应根据细胞或组织的类型来选择。大部分培养的细胞可以置于细胞裂解液中,通过简单的涡旋震荡来匀浆;而动物组织、植物组织、酵母和细菌、真菌则常常需要更加剧烈的方法,通常用液氮研磨。比如说细菌(特别是革兰氏阳性菌)的细胞壁,就需要溶菌酶消化来实现彻底的细胞裂解和RNA的最大回收,酵母提取时加入破壁酶帮助破壁,再用TRIpure或RNApure进行提取。5. RNA提取少走弯路——不同材料如何选择最适RNA提取试剂现有众多的RNA分离方法也许令人难以取舍。目前最简单也是最安全的方法是柱式分离,如RNApure 因为操作简单,时间短,纯度高而受到大家的喜爱,RNApure不需要DNA酶消化DNA,节省了时间,避免RNA的降解,从而提高了产量;相对非柱式分离(如TRIzol),去除蛋白及其他杂质干净,提高了纯度,对于细胞、组织、一般植物均非常适合。植物RNA的提取比较难抉择,植物RNA提取受酚、多糖、蛋白杂质、次生代谢物含量的影响,一般用TRIzol提取纯度不高,而且很多植物用TRIzol提取不出来。这时候可以选择多糖多酚植物总RNA提取试剂盒(水仙、辣椒、胡萝卜、玉米、百合、小麦、西红柿、花菜、油菜等)和通用植物RNA提取试剂盒(适合绝大多数植物提取,包括:各种中草药、植物种子、苹果、葡萄、草莓、香蕉、龙眼、荔枝、草坪植物、松树、杉树、白桦、紫松果、彩叶草、一品红、夹竹桃、垂叶榕、紫罗兰、月季、天竺蓝、牵牛花等);非常值得一提的是血液(包括血清、血浆、脑脊液、各种拭子或其他液体含量高的样本)RNA的提取用TRIzol和红细胞裂解的方法效果都不好,因为红细胞裂解液不含有RNA酶的抑制成分,这个过程RNA很容易降解,推荐使用TRIpure LS (RP1101)或者血液总RNA提取试剂盒(RP4001),该方法适用于表达谱芯片实验中RNA的提取,并成为博奥生物芯片北京国家工程研究中心的推荐方法: 著名实验室推荐:全血RNA提取 6. 低浓度RNA的沉淀纯化得到的RNA可能需要通过沉淀来浓缩,以满足一些下游应用的需要。醋酸铵(NH4OAc) 沉淀(加0.1体积的5M 醋酸铵、2-2.5体积的无水乙醇,-20°C放置25分钟以上)可以很好地回收RNA。如果需要定量回收低浓度的RNA(ng/ml),可以采用共沉淀(如linear acrylamide糖原glycogen,、酵母yeast RNA )的方法。核酸助沉剂是linear acrylamide,当RNA用于RT-PCR分析时,线性的丙烯酰胺和DNase处理的糖原都可以作为理想的共沉淀剂,因为它们都不含DNA污染,糖原含量高会抑制PCR反应,应注意控制浓度,核酸助沉剂对PCR无影响,成为病毒核酸提取的首选。酵母RNA和未处理的糖原会给样品带来核酸污染,有可能影响RT-PCR的结果。沉淀后,注意避免RNA沉淀过分干燥,因为这可能导致很难重新溶解。7. 提取好的RNA如何储存如果只是短期储存,重悬的RNA应放置于-20°C;如果是长期储存的话,就应该放置于-80°C。储存RNA时,可以加入少量的RNA酶抑制剂(RP5601),避免RNA的降解,RNA可以直接做下游实验。如果要长期保存RNA,可以加入RNAlong。我们推荐将RNA溶液分装在几支管中。这会避免反复冻融损伤RNA,并预防偶然的RNase污染。
[font=-apple-system, BlinkMacSystemFont, &][size=18px]截至4日,新疆霍尔果斯市第一轮核酸检测结果全部为阴性。目前已开展第二轮核酸检测。[/size][/font]
五季智能核酸采样亭的消毒简单方便。室内采用紫外线杀毒,可以在工作前对采样亭进行自助消毒,并确保无菌和卫生。采样人员在核酸采样亭内与外部人员不产生直接接触,医废和垃圾会进行消杀并进行统一回收处理,不会对周边环境造成影响。采样人员通过特制的手套来采集样本,并透过玻璃进行观察。样品采集后,采样人员将样本直接放样本存储区内,大大减少了面对面接触,避免了触摸和呼吸造成的感染。[align=center][img=单人核酸采样工作站,690,460]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281424200807_3234_5635765_3.jpg!w690x460.jpg[/img][/align]具体点位选择以室外空旷、手机信号强、通风良好、面积较大为参考标准,可设置在社区卫生服务站、学校操场、体育场、楼宇园区广场、社区空地等。核酸采样场所应划分为等候区、扫码区和采样区,有效分散待检人员密度。每采样点设1-2个工位,每天1-2班,可根据采样人数需求及时增减。与传统核酸采样不同,医护人员在核酸采样亭内与居民无接触即可完成信息登记和采样操作。[align=center][img=移动核酸采样工作站,690,566]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281424511064_5867_5635765_3.jpg!w690x566.jpg[/img][/align]如遇正在开展采样的核酸采样亭,建议市民与排队做核酸的人员保持两米以上距离,以避免人员聚集所带来的危险。目前市面上出售的岗亭以单人操作和双人操作两种规格为主,主要配备的设施包括空调、对讲机、紫外消毒设备、离心风机、过滤器等,每台核酸检测亭都配有空调一台。尽管核酸采样亭已在多地铺设,但目前相关的配置规范和标准仍较少,仅有个别地市如无锡市出台了相关管理规范,对采样亭的选址、设施配套、人员配备等作出明确。核酸检测采样亭配置规范需要根据行业标准去制定,比如负压要求、空调设备要求、采样隔离要求等。杭州、广州、无锡等地比上海更早开始布局建设,相关标准也在参考前人经验。核酸采样亭的快速布局落地,势必给全民的工作生活带来极大的方便,助力全国的精准防疫。五季智能核酸采样亭厂家——欢迎咨询17201681858[align=center][img=便民核酸采样小屋,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/05/202205281425565485_2290_5635765_3.jpg!w690x690.jpg[/img][/align]
话说无论是初接触分子生物学的新手,还是久经考验的“老鸟”,都知道EB染料的有害性,这种有害性表现在三个方面:接触致癌性,紫外观测的诱变性,以及麻烦的后处理。但是要说到EB的替代品,好像又都不是那么合心意,比如SYBR类染料在紫外下不稳定,容易降解,一些像是GelRed之类的染料虽然毒性低,但是价格却不亲民。想要避免EB的影响,又不想影响实验的效果,许多实验人员常陷入两难中,另一方面,经典的凝胶成像系统一般都是采用的紫外成像,在这种波长下,EB的灵敏度和价格都是比较合适的,而其它的染料又存在不稳定性这一瓶颈式缺点,所以导致了虽然知道EB的有害性,但许多实验室还是采用EB染料的现状。国内生物技术自主研发着名企业:百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪,可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。这种凝胶透射仪:UltraPowerTM采用的是可见光光源,如果配合新一代核酸染料UltraPowerTM或者其他花菁类荧光染料,可检测出几十pg的dsDNA,灵敏度比紫外凝胶透射仪配合EB染料高10-25倍。这是由于花菁染料具有摩尔吸收系数大和荧光量子产率高的优点,通过共轭链长度的调节,花菁的光谱可以从可见光区一直延伸到近红外区,采用红区测量可有效地排除背景干扰,获得更为理想的分析灵敏度和选择性。花菁染料的光谱对外界微环境的变化极为敏感,非常适合生物及环境样品的分析研究。除此之外,UltraPowerTM可见光凝胶透射仪还可以用于多数荧光染料,比如SYBR Green I、绿色荧光蛋白(EGPF)等(具体染料见附表)。这可以算得上是一套多色荧光成像分析系统,而且UltraPower可以采用普通数码相机拍照,从而摆脱了高昂造价得黑白CCD时代,可以拍出多姿多彩的电泳图片来。
键合硅胶基质的正相色谱在分离小核酸中的应用小核酸异构体的纯化通常是用正相硅胶或者反相C18或C8。这两种模式都有它的缺陷:反相的分离度比较好,但相比正相,它的上样量较小,且后处理中,由于流动相中大量水的存在,导致旋蒸会比较麻烦,甚至会出现温度过高或者处理时间过长而使样品变质的情况;纯硅胶的正相色谱,尽管比较便宜,但由于小核酸的极性较大,导致固定相对样品的西服严重,回收率比较低,而且硅胶不能多次利用,所以,换来换去的,人力成本也是很贵的。用酰胺键合硅胶作为正相色谱固定相,综合了硅胶和反相C18/C8的优势:具有特殊的立体选择性,对小核酸异构体的分离较好,极性较硅胶弱,解决了由于吸附造成的低回收率问题,而且它可以反复使用数百次,所以用这种填料分离纯化小核酸,优势明显。 下面是小核酸在结构修饰过程中,产生的几种异构体:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209281145_393548_2593977_3.jpg 2’-BaG 3’-BaG Dimer-BaG 2’-BaG 是目标物,占到30-40%,几种异构体的性质差别不大,分离比较有难度。用硅胶柱,过柱需要10个小时,回收率不到40%,装柱和卸柱一次需要7个小时,所以使用成本还是很高的。反相色谱,后期除水的旋蒸温度要超过50℃,样品很容易在这个温度变质。用键合硅胶(amide),上样量、回收率、纯度、样品分离时间和后处理都表现不俗。下图是反相色谱的分析图谱:http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209281146_393549_2593977_3.jpgFigure 1 the sample analysis chromatogram used column Venusil® XBP C18(L)(4.6×250 mm,5 μm,150Å);Elution condition was the mixture of 0.03%TFA and CAN(25:75);wavelength was 254 nm and flow rate was 1ml/min with 35℃ column temperature制备时就用到了我们的amide。Venusil® Hilic Flash柱(120g,20-45μm, 100Å), 流动相用正己烷混合乙酸乙酯(2:8),分离可以在两个小时内解决战斗,上样量为2.5g, 三种异构体得到了很好的分离。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/09/201209281146_393550_2593977_3.jpgFigure 2 The sample preparation chromatogram used colu
2020年4月18日,《[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E5%8D%8E%E7%9B%9B%E9%A1%BF%E9%82%AE%E6%8A%A5&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]华盛顿邮报[/url]》(WashingtonPost)爆出一则重磅新闻,美国CDC在实验室生产的新冠病毒检验试剂出现了污染问题(图1),导致全美的核酸检测推迟最少一个月。2020年1月21日,美国CDC开发了新冠病毒检测方法,1月下旬,美国CDC对26个公共卫生实验室发放新冠病毒试剂盒,有24个实验室出现了假阳性,美国CDC紧急召回诊断试剂,直到3月2日,IDT公司生产新冠试剂重新投入使用。由于实验室污染,美国错过了黄金的疫情防控窗口。[img=,919,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-cd8d1d3aca2679ba712ee37665d3f292_720w.jpg[/img][img=,979,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-b0ffe581305755a0db617c2b5e98eaf6_720w.jpg[/img]二、核酸污染与分类2.1 核酸污染,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室绕不开的“疼”[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url](聚合酶链式反应简称)检测因其灵敏度高、快速、操作方便等优势被广泛应用,不过正是由于它灵敏度极高,极微量的污染源都有可能导致检测结果的假阳性。因此,如何避免以及处理实验室污染,对[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测人来说是一种挑战。2.2 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]污染分类(1)样本间交叉污染:主要是在采(取)样的过程中,由于取样工具之间的交叉造成污染;或者在核酸提取的过程中,由于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]、离心管等使用不当导致的样本间污染。(2)[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂的污染:主要是在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]试剂配制过程中,由于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/9p][color=#3333ff]移液器[/color][/url]、容器、阴性对照及其它试剂被核酸模板或阳性对照污染。(3)克隆质粒的污染:在实验室操作中经常会用到阳性参考品,这些阳性参考品大多数是由某些克隆质粒制作而成,克隆质粒在单位容积内浓度高,使用不当极易造成污染。(4)CR扩增产物污染:这是[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]反应中最主要、最常见,也是最令人头疼的污染问题。因为[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物拷贝量大,远远高于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]检测数个拷贝的极限,所以极微量的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物污染,就可造成假阳性结果。[img=,966,]https://pic2.zhimg.com/80/v2-ef39f2836cc5d3c8b081f0916a887635_720w.jpg[/img]图2 [url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物拷贝量示意三、扩增产物[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E6%B0%94%E6%BA%B6%E8%83%B6&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]气溶胶[/url]污染—核酸污染中的“牛皮藓”[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室核酸污染中最难消除的是气溶胶污染,尤其是扩增产物的气溶胶污染。污染主要发生在[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]的扩增和产物分析阶段。因为,[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物拷贝量大(一般为1013拷贝/mL)(图2),扩增产物液面与空气摩擦时会形成气溶胶。所以,比较剧烈地摇动反应管、开盖时吸样,以及反复吸样都可形成气溶胶污染。飞溅的扩增产物会形成气溶胶漂浮在空气中,粘附到物体表面及检测人员身体上,随着人员及物料流动而污染整个实验室。如果这种污染能及时发现,实验室空置几天,采取积极有效的处理措施,情况会好转。四、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室核酸污染传统处理方法4.1 物理方法使用紫外灯照射是目前[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室预防污染最常规的方法。由于DNA链上相邻的嘧啶在254nm紫外诱导下发生交联,[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E5%98%A7%E5%95%B6%E4%BA%8C%E8%81%9A%E4%BD%93&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]嘧啶二聚体[/url]不能被切除,导致DNA聚合酶在空间上被阻碍或者DNA不能被完全变性,从而使扩增反应终止。由于小的扩增子只有较少的临近嘧啶,所以该方法对小的扩增子效果不明显,对富含G+C的和短的(300bp)的扩增产物污染效果不大。4.2 化学方法包括使用商品化的DNA去除剂、次氯酸钠、1mol/L的盐酸等各种化学物质去降解DNA。化学方法主要通过氧化损伤核酸的作用,从而使留在实验室的扩增产物被破坏掉。4.3 顺其自然法停下所有实验,靠通风和时间抹掉核酸的痕迹。4.4 绝地求生法换一种试剂盒,只要两种试剂的扩增产物不一致,没有交叉反应,可以继续做实验。五、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室核酸污染的整体解决方案根据《[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E5%8C%BB%E7%96%97%E6%9C%BA%E6%9E%84%E6%96%B0%E5%9E%8B%E5%86%A0%E7%8A%B6%E7%97%85%E6%AF%92&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]医疗机构新型冠状病毒[/url]核酸检测手册(试行第二版)》(联防联控机制医疗法〔2020〕313号)中提到:实验室结束后空气清洁要求。必要时可采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸(图3)。[img=,795,]https://pic4.zhimg.com/80/v2-86e6a5ba788dad4f3b9aae8016e0ce0f_720w.jpg[/img]图3《医疗机构新型冠状病毒核酸检测手册(试行第二版)》的要求5.1 全自动核酸气溶胶污染清除仪—预防、清除气溶胶污染的得力助手[img=,829,]https://pic4.zhimg.com/80/v2-232699116e0e539fab32efb00bd91db3_720w.jpg[/img]Ares Y2000 / Ares Y1000图4 熠创鼎惠全自动核酸气溶胶污染清除仪Ares Y2000 / Ares Y1000熠创鼎惠(上海)生物科技有限公司推出的全新全自动核酸气溶胶污染清除仪(图4),清除仪采用独特配方的配套核酸清除剂(片剂溶解),经Ares系统顶尖的Dry Fog剪断作用,雾化的清除剂被超音速空气再次微粒化,与另一喷口同样被雾化的水滴在中央撞击,相互反复剪断的同时,发生3.3万-4万赫兹的超声波,使清除剂更加微粒化,均等化,形成真正的Dry Fog。超级雾化的清除剂通过无规则的布朗扩散运动,充分捕捉空气中[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]气溶胶,高效破坏DNA的嘌呤和嘧啶碱的共轭双键,从而实现清除的目的。Ares在氧化处理[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]气溶胶后,通过空气置换,由气溶胶吸附屏吸附DNA气溶胶,在设备内部LED紫外灯光照下,二氧化钛发生光触媒反应,产生数以亿计具有超强氧化能力的羟基自由基,进一步降解[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]气溶胶,从多维度协同清除气溶胶。Ares还能起到分解细菌和病毒,净化空气,保证实验室生物安全性的多重作用。另外可以一机多用,还具有雾化过氧化氢消毒消毒功能,更加全面保障实验室的安全。可广泛使用于[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室样本处理区、核酸提取区、试剂配制区、[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]扩增或检测区,适用于医院检验科、疾控、海关、食药监、血站、科研院校等[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室。图5为RCR气溶胶清除仪使用效果验证示意。为配合气溶胶清除仪对物表核酸污染的高效清除,配套的核酸气溶胶清除剂采用接触催化协同作用,非酶性高效降解[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]产物或DNA/RNA,高效防止[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]假性的扩增。该型清除剂使用简单,不影响实验结果,无腐蚀性和[url=https://www.zhihu.com/search?q=%E8%87%B4%E7%99%8C%E6%80%A7&search_source=Entity&hybrid_search_source=Entity&hybrid_search_extra=%7B%22sourceType%22%3A%22article%22%2C%22sourceId%22%3A%22387158915%22%7D]致癌性[/url],对皮肤无刺激性,无毒性,是可安全使用的产品。对不锈钢和铜、铝等材料也基本无腐蚀。且其作用有效,可以全面解决困扰实验室的气溶胶污染问题。[img=,970,]https://pic3.zhimg.com/80/v2-e051cd9b0d92ab8423b60f253f39f3b2_720w.jpg[/img]结语[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]实验室污染引起的检测结果假阳性风险极大,因此需要采取积极有效的预防措施。进行[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]操作时,操作人员应该严格遵守一些操作规程,最大程度地降低可能出现的[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/jp][color=#3333ff]PCR[/color][/url]污染或杜绝污染的出现。实验结束后,对实验室环境进行清洁,必要时采用核酸清除剂等试剂清除实验室残留核酸。熠创鼎惠气溶胶污染清除仪可有效预防和清除气溶胶核酸污染,保障实验室安全。熠创鼎惠厂家13728031910