培养基制备分装系统

培养基制备后应保持一定的透明度，下面制备操作影响最大的是()。 A、原料称量混合溶解 B、加热煮沸，调PH值 C、过滤、分装容器 D、消毒或灭菌

名称：培养基制备的标准操作程序(SOP)关键词：培养基制备 标准操作程序目的：如何使用成品培养基干粉制备各种合格的分离培养基。背景知识：选填项目原理：选填项目主体内容：操作步骤1.在玻璃容器中加入所需蒸馏水的二分之一量，然后放入一定量培养基干粉，补足水量，轻轻搅拌以促进溶解。2.校正pH：高压灭菌前可用pH计或精密pH试纸校正培养基的pH。3.分装：液体培养基一般在灭菌前分装，分装时应注意每管的分装量不应高于试管的2/3。琼脂平板是在培养基高压灭菌后冷至50-600C时再倾注平板。4.质量检查 无菌试验：将制好的培养基在350C孵育过夜，判定是否灭菌合格。 效果检验：按不同的培养要求，接种相应的菌种，观察细菌的发育、菌落形态、色素、溶血等特征，判断培养基是否符合要求。5.保存：液体培养基及琼脂平板须在40C保存，一般不超过7天，如用塑料袋密封至多保存2周。

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1.培养基配方的选定同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外．一般均应尽量收集有关资料．加以比较核对．再依据自己的使用目的加以选用，记录其来源。2 ．培养基的制备记录每次制备培养基均应有记录，包括培养推各称，配方及其来源．和各种成份的牌号。最终pH 值、消毒的温度和时间制各的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。3.培养基成分的称取培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱．最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方上做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后．还应进行一次检查。4.培养基各成份的混合和溶化培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢锅加热溶化．也可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动，以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如为琼脂培养基，应先用一部分水将琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两溶液充分混合。在加热溶化过程中，因蒸发而丢失的水分，最后必须加以补足。5.培养塞pH 的初步调整培养基各成分完全溶解后，应进行pH 的初步调正，因培养基在加热消毒过程中、pH 会有所变化，例如，牛肉浸液约可降低pH0.2.而肠浸液pH 却会有显著的升高。因此，对这个步骤，操作者应随时注意探索经验、以期能掌握培养基的最终pH ，保证培养基的质量。pH 调正后，还应将培养基煮沸数分钟，以利培养基沉淀物的析出。6．培养基的过滤澄清液体培养基必须绝对澄清，琼脂培养基也应透明无显著沉淀，因此，须要采用过滤或其它澄清方法以达到此项要求。一般液体培养基可用滤纸过滤法，滤纸应拆叠成折扇成漏斗形，以避免因液压不均匀而引起滤纸破裂。琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55-60℃ 的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/ 2 ，每1000ml 培养基加入1-2个鸡蛋的蛋白．强力振摇3-5 分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。若能自行沉淀者，亦可静置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。7.培养基的分装培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。分装量不得超过容器装盛量的2/ 3 。容器口可用垫有防湿纸的棉塞封堵，其外还双用防水纸包扎（现试管一般多有用螺旋盖者）。分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂抖面培养基时，分装量应以能形成2 / 3 底层和1/ 3 斜面的量为恰当。分装容器应予先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml 培养基于一小玻瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。8.培养基的灭菌一般培养基可采用121℃ 高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。某些畏热成分，如糖类，应另行配成20% 如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃ 左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。9. 培养基的质量测试每批培养基制备好以后．应仔细检查一遍：如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。将全部培养基放入36±1℃ 恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。用有关的标准菌株接种1-2 管或瓶培养基，培养24- 48 小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。10.培养基的保存培养基应存放于冷暗处，最好能放于普通冰箱内。放置时间不宜超过一周，倾注的平板培养基不宜超过3天。每批培养基均必须附有该批培养基制各记录副页或明显标签。

培养基的制备方法 以下为常规方法，如配方中有特殊规定或要求，以配方为第一依据。1.根据配方，计算各种营养成分用量。一般药品可用普通药物天平称量，用量少的药品，可按比例配成高浓度溶液，再按所需量用移液管吸取。称好的药品放入玻璃烧杯或搪瓷杯中。2.在另一容器中将所需量的水(一般可用自来水，有特殊要求时需用蒸馏水)加热，取全量的1/3左右倒入放药品的容器中，用玻璃棒搅拌，待药品全溶后，再将其余热水全部倒入。3.若配制固体培养基，则称取1.5～2％的琼脂放入已溶化的营养液中，继续加热至琼脂全部溶解。加热中随时搅拌，防止溢出或糊底。烧糊的培养基营养物质破坏，并产生有毒物质，不宜再用。4.待溶化的培养基稍冷却后，按配方要求调整pH值。先取10毫升培养基装入试管中，用pH试纸测其自然pH，再用1％NaOH(或1％HCl)调至所需pH，根据用量计算，换用10％NaOH(或10％HCl)调整所配全量培养基的pH。加碱(或酸)溶液时，应边滴加边搅拌，至应加量将近用完时，再次测试，最后调至要求的pH值。5.配好的培养基，根据需要趁热分装至试管或锥形瓶中。分装需用漏斗，以免琼脂粘在管口或瓶口上。装瓶量一般为瓶容量的1/3～1/2；装试管一般为试管高度的1/5～1/4，以免灭菌时培养基上溢，粘湿棉塞。6.用预先制好的棉塞塞住管口或瓶口。棉塞既有利于通气，又有滤菌作用，故松紧、大小应适当，以免使用时影响操作(如图)。最后用牛皮纸或报纸包住棉塞，扎紧在瓶颈或试管上方，以免灭菌时水蒸汽沾湿棉塞或脱落。7.灭菌后取出的固体培养基，根据需要可将试管立即斜放，冷凝后即成斜面培养基，用于菌种扩大培养及保藏；锥形瓶中的培养基，倒入无菌培养皿中，冷凝后即制成平板培养基，可用于菌种的分离、鉴定等。液体培养基冷却后可直接根据需要接入菌种

一、实验目的1、了解并掌握培养基的配制、分装方法；2、掌握各种实验室灭菌方法及技术。二、实验原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。三、实验材料 1、器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 2、药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 3、流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 四、实验步骤 1 培养基的制备 1.1 称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 1.2 溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 1.3 调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 1.4 溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 1.5 过滤分装 分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞，引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 1.6 包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 1.7 灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。1.8 倒平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃,立刻倒平板。2、灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。 2.1 湿热灭菌 煮沸消毒法 ：注射器和解剖器械等均可采用此法。先将注射器等用纱布包好，然后放进煮沸消毒器内加水煮沸。对于细菌的营养体煮沸约15～30min，对于芽孢则需煮沸约1～2h。 高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。 2.2 操作方法和注意事项 加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。 装料、加盖：灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。 排气：打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。 升压、保压和降压：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 灭菌后的培养基空白培养：灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。 2.2 干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。 干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。 2.2.1 灭菌前的准备 玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。 2.2.2 干燥箱灭菌 将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。 [/siz

因环境监测需要定期配制大量营养琼脂平皿，手动分装工作量大而且易污染，故有意求购培养基分装系统，有意者请联系

一、目的要求了解合成培养基、半合成培养基和天然培养基的配制原理。　　学习和掌握麦芽汁培养基、马铃薯葡萄糖培养基、豆芽汁葡萄糖培养基和察氏培养基的配制方法。二、基本原理 麦芽汁培养基和马铃薯葡萄糖培养基被广泛用于培养酵母菌和霉菌。马铃薯葡萄糖培养基有时也可用于培养放线菌。豆芽汁葡萄糖培养基也是培养酵母菌及霉菌的一种优良培养基。察氏培养基主要用于培养霉菌观察形态用。麦芽汁培养基为天然培养基，马铃薯葡萄糖培养基和豆芽汁葡萄糖培养基二者均为半合成培养基，而察氏培养基则为合成培养基。培养基配方中出现的自然pH系指培养基不经酸、碱调节而自然呈现的pH。 三、实验材料 (一) 药品 葡萄搪、蔗糖、NaN03、K2HP04、KCl、MgSO4·7H2O，FeS04、琼脂。 　　(二) 仪器 天平、高压蒸汽灭菌锅。 　　(三) 玻璃器皿 移液管、试管、锥形瓶、烧杯、量筒、培养皿、玻璃漏斗等。 　　(四) 其他物品 药匙、pH试纸、称量纸、记号笔、棉花、纱布、线绳、塑料试管盖、牛皮纸、报纸、新鲜麦芽汁、黄豆芽、马铃薯等。四、实验内容 (一) 麦芽汁培养基的配制 1．培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2．配制方法 (1) 用水将大麦或小麦洗净，用水浸泡6-12h，置于15℃阴凉处发芽，上盖纱布，每日早、中、晚淋水一次，待麦芽伸长至麦粒的两倍时，让其停止发芽，晒干或烘干，研磨成麦芽粉，贮存备用。 　　(2) 取一份麦芽粉加四份水，在65℃水浴锅中保温3-4h，使其自行糖化，直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液，加2滴碘液，如无蓝色出现，即表示糖化完全)。 　　(3) 糖化液用4-6层纱布过滤，滤液如仍混浊，可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清，加水20 ml，调匀至生泡沫，倒入糖化液中，搅拌煮沸，再过滤)。 　　(4) 用波美比重计检测糖化液中糖浓度，将滤液用水稀释到10-15波林，调pH至6．4。如当地有啤酒厂，可用未经发酵，未加酒花的新鲜麦芽汁，加水稀释到10-15波林后使用。 　　(5) 如配固体麦芽汁培养基时，加入2％琼脂，加热融化，补充失水。 　　(6) 分装、加塞、包扎。 　　(7) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。 (二) 马铃薯葡萄糖培养基的配制1．培养基成分 　　马铃薯　　　20g 　　葡萄糖　　　2 g 　　琼脂　　　　1.5-2g 　　水　　　　　100ml 　　自然pH　　2．配制方法　　(1) 配制20％马铃薯浸汁 取去皮马铃薯200g，切成小块，加水1000ml。80℃浸泡lh，用纱布过滤，然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20％马铃薯浸汁，贮存备用。 　　(2) 配制时，按每100 ml马铃薯浸汁加入2g葡萄糖，加热煮沸后加入2g琼脂，继续加热融化并补足失水。 　　(3) 分装、加塞、包扎。 　　(4) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。 (三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制 1．培养基成分 　　黄豆芽　　　10g 　　葡萄糖　　　5g 　　琼脂　　　　1.5-2g 　　水　　　　　100ml 　　自然pH 　　2．配制方法　　(1) 称新鲜黄豆芽10g，置于烧杯中，再加入100 ml水，小火煮沸30 min，用纱布过滤，补足失水，即制成10％豆芽汁。 　　(2) 配制时，按每100 ml10％豆芽汁加入5g葡萄糖，煮沸后加入2 g琼脂，继续加热融化，补足失水。 　　(3) 分装、加塞、包扎。 　　(4) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。(四)察氏(czapck)培养基的配制1．培养基成分 　　蔗糖　　　　　　　3g 　　NaN03　　　　　0.3g 　　K2HP04 　　　　0.1g 　　KCl 　　　　　　 0.05g 　　MgSO4·7H2O 　0.05 g 　　FeS04 　　　　　0.001 g 　　琼脂　　　　　　1.5-2g 　　蒸馏水　　　　　100ml 　　自然pH 　　2．配制方法　　(1) 称量及溶化 量取所需水量约2／3左右加入到烧杯中，分别称取蔗糖、NaNO3 、K2HP04 、KCl、MgSO4。依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入1ml 0.1％的FeS04溶液。 　　(2) 定容 候药品全部溶解后，将溶液倒入量筒中，加水至所需体积。 　　(3) 加琼脂 加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。 　　(4) 分装、加塞、包扎。 　　(5) 高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。

培养基使用说明中有加热溶解后高压灭菌，有的加热沸腾后高压灭菌，见过一些实验室，不经加热直接高压灭菌，也有的实验室一律加热沸腾后高压灭菌。大家是怎们制备的，不加热或全部沸腾对检测结果有没有影响？

因环境监测，需定期配制大量平板，需求购培养基分装设备，有意者请将设备资料及报价发至邮箱hgj@kangh.com

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实验室培养基制备质量保证通则（中文和英文版）SNT 1538.1-2005 培养基制备指南 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则及等于ISO/TS 11133-1

（1）容器：配制和分装培养基的烧瓶、平皿或试管等器材应为中性，无酸、碱抑制物残留，平皿底部要平，以免琼脂厚薄不一，影响药敏试验结果。（2）成分来源：各种成分来源可靠，不含对目的菌生长有抑制的物质。特殊要求的培养基，如葡萄糖氧化发酵试验（O／F 试验），除加入葡萄糖外，不能含有其他糖类，指示剂不能用乙醇溶液，避免O／F试验的假阳性。培养基配制用水应是蒸馏水。（3）pH值调整：根据培养基的不同要求调整pH 值，控制在要求范围的±0.2之内。应当注意，培养基在高压灭菌后其pH 值降低0.1～0.2，故矫正时应比实际需要p H值高0.1～0.2。（4）灭菌：根据培养基所含成分及配制数量的不同，选择不同的灭菌方式，既要达到灭菌效果，又不破坏培养基成分。一般对稳定的培养基，如MH琼脂、营养琼脂可用高压灭菌，即121℃15min ；而含糖的培养基则以108℃灭菌为好，以防止糖类破坏。不耐高热的物质如血清、牛乳等，可采用间隙灭菌法灭菌。（5）分装：根据使用的目的和要求决定分装量。分装培养基所用的平皿、试管要求清洁，不残留酸碱；制备平板培养基时，操作台要水平，以避免琼脂平板厚薄不一，同时确保无菌操作。

找培养基制备指南的第二部分好久了，都没找到！有的能分享不？谢谢！

如何有效管理微生物实验室干粉培养基在微生物检验中，培养基的质量关乎微生物的检验结果。加强对培养基的质量管理，能够有效提升微生物检验结果的准确性和科学性，因此需要注重培养基的质量管理工作。?本文从培养基的采购验收、质量控制、培养基制备后的质量控制以及培养基的灭菌和储存等环节简要分析了培养基的质量控制工作。1、培养基供应商选择培养基应当从可靠的供应商处采购，必要时应当对供应商进行评估。评估应确定其生产工艺，运输条件是否符合规定，资质是否齐全，质量保证能力和生产能力是否符合需求。如果新增培养基供应商，应对该厂家所生产的不同批次的培养基理化及微生物指标进行检测，并进行审计评估，评估合格后才可以将该品牌纳入合格供应商名录。2、培养基初步验收在培养基到达实验室后，应安排专业的人员对培养基进行验收，首先查看培养基的名称是否正确、配方是否符合药典或国标等相应的法规文件的要求、是否临近有效期、生产批号是否清晰、能否提供商品质检报告、检查包装是否完整，规格、数量是否与采购申请一致。在接收完毕后安排管理人员进行入库保存，并尽快安排对培养基进行入厂检测。3、培养基理化及微生物检测培养基的理化指标主要包括pH值、澄明度以及凝胶强度（琼脂类），培养基的微生物指标一般包括：灵敏度、促生长能力、抑制能力以及指示特性，即培养基适用性检查。这些指标供应商在培养基出厂前就已经进行了检测，合格后放行。使用单位验收时仍需进行培养基适用性检查，并与厂家提供的质检报告进行对比，看与报告内容是否一致。使用单位也可采用有资质的第三方检测报告。4、干粉培养基储存对入库保存的培养基应张贴标签，以区分验收与未验收的培养基，避免混淆与差错。在此为大家提供一个简单的标签，仅供参考：?点击重新加载使用单位存储培养基时标签也可以做编号处理，例如购进100瓶TSB，产品号为11104，其编号为11104-100-1、11104-100-2、...、11104-100-100按照流水号领用培养基，可减少对培养基的盘点，方便管理。培养基的储存条件一般为常温、干燥、密闭，当然不同供应商的存储条件稍有差别，按照标识执行即可。称量后应及时旋紧瓶盖，避免后期存储因空气湿度较大受潮或结块，如出现结块现象，该瓶培养基不可继续使用。培养基开瓶后在称量和存储的过程中会不可避免的吸收空气中的水分，而水分含量的增加，培养基的微生物负载可能亦随之增大，进而影响到干粉培养基的质量。所以干粉培养基在开瓶后，应定期进行复检，并对复检结果进行统计分析，确定开瓶有效期。如果实验室所在地区湿度较大（相对湿度高于75%），开瓶后的培养基应采取适宜的保护措施，如果数量较少，可放置于干燥器内，如果数量较多，可使用封口膜瓶口位置缠绕数匝。5、培养基配制--称量培养基的制备环节，应当严格按照培养基配方制备，在培养基的称量过程中，建议在干爽、无风的区域或者通风柜中进行，这样能够避免培养基吸潮使称量结果不准。应当选择灵敏度较高的称重天平，这样能够保证称量的准确性，同时称量过程中要选择专用的称量匙，避免其他杂质混入培养基中。操作人员应当对称量过程进行详细的记录，记录中应该体现培养基名称、批号、称量数量、具体配制方法、制备人姓名日期、复核人姓名日期等信息，方便后期的溯源调查。6、培养基配制--容器和水配制培养基所用的容器不得影响培养基质量，一般为玻璃容器，培养基配制所用的容器和配套器具应洁净，可用纯化水冲洗玻璃器皿以消除清洁剂和外来物质残留。在大体积配制培养基时，企业也可根据自己的情况采用不锈钢容器，建议专锅专用，且容器应洁净。不建议使用陶瓷或搪瓷容器。培养基用水是培养基制备过程中非常重要的一个物质。不可以使用自来水，自来水中的杂质可能会对检验结果有一定的影响。许多法规在培养基配方中采用蒸馏水作为配制用水，实际上纯化水的洁净程度不差于蒸馏水，甚至更优，所以不必单独制备蒸馏水，直接使用纯化水即可，配制用纯化水应按药典的要求定期进行检测。在制备过程中，可先加入培养基，再将纯化水倒入容器内，同时需要将器具内壁上的培养基粉末一同带到容器中，然后根据说明书的要求进行操作。涉及到大体积配制后要分装的培养基（例如TSA、TSB、FTM等），分装前一定要将培养基加热至完全溶解，避免后续可能会出现的瓶间差异。7、培养基的灭菌培养基的灭菌过程是影响培养基质量的关键环节。大部分培养基需要高温高压湿热灭菌，但部分选择性培养基由于一些组分不可高温高压灭菌，所以会采用煮沸灭菌，因此灭菌前应阅读培养基使用说明。?点击重新加载培养基灭菌应采用验证过的灭菌程序，灭菌参数应通过无菌性试验和促生长试验的验证。此外，对高温高压灭菌器的蒸汽循环系统也要加以验证，以保证其在一定装载方式下的正常热分布。温度缓慢上升的高压灭菌器可能导致培养基过度加热，过度灭菌会影响绝大多数的细菌和真菌培养基的促生长质量。灭菌器中培养基的容积和装载方式也会影响加热的速度。因此应根据灭菌培养基的特性，进行全面的灭菌程序验证。煮沸灭菌的培养基建议现配现用，高温高压湿热灭菌的培养基可以大量配制，在适宜的条件下储存，固体培养基灭菌后只允许一次再融化。灭菌后培养基的储存效期应进行验证。制备好的培养基，使用前需进行pH的监测。对于固体培养基pH监测，可使用平头电极或固液两用电极。

培养基制备、消毒与灭菌档.doc

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ISO/TS 11133-1:2000 食品和动物饲料微生物学－培养基制备指南－实验室培养基制备质量保证通则ISO/TS 11133-1:2000 Microbiology of food and animal feeding stuffs— Guidelines on preparation and production of culture media— Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=86091]ISO/TS 11133-1:2000 食品和动物饲料微生物学－培养基制备指南－实验室培养基制备质量保证通则[/url]

培养基制备（按1000ml计）1、 营养肉汤（Nutrient broth）培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，加水至1000ml，pH7.2~7.42、 营养琼脂培养基(Nutrient agar)培养基: 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g,加水至1000ml，pH7.2~7.43、 肉汁葡萄糖培养基: 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖20g,琼脂15~20g,，pH7.2~7.44、 察氏培养基:NaNO32g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,蔗糖30g, 琼脂15~20g,加水至1000ml，pH自然5、 高氏一号培养基:可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl 0.5g, K2HPO4 0.5g, MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g, 琼脂20g,加水至1000ml，pH7.2~7.4。此培养基适用于多数放线菌,孢子生长良好,宜保藏菌种。制法:先用少量冷水将淀粉调成糊状,再取700ml水盛于烧杯中,在电炉上加热,沸腾时边搅拌边将淀粉糊倒入,待透明后再将其他成分加入,最后补足水分至1000ml.6、 无碳基础培养基(NH4)2SO4 5g,KH2PO4 1g,NaCl 0.1g, MgSO4·7H2O 0.5g,CaCl2 0.1g,酵母膏0.2g, 加蒸馏水至1000ml,pH6.5.加2%水洗琼脂即成固体培养基.于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对碳源的利用(加待测碳源2%).7、 无氮基础培养基:葡萄糖20g, K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g,酵母膏 0.1g或20%豆芽汁20ml,水洗琼脂20g,加无氨蒸馏水至1000ml.pH6.5. 于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对氮源的利用(加待测氮源0.5%).8、 营养缺陷型筛选用培养基⑴ 普通营养肉汤培养基⑵ 加倍营养肉汤培养基: 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，加水至500ml，pH7.2⑶ Vogel 50×(即浓缩50倍): MgSO4·7H2O 10g,柠檬酸100g,NaNH4HPO4·4H2O175g,KH2PO4·2H2O599.88g,K2HPO4·3H2O656.31g,加蒸馏水至1000ml.配置时先加水500ml,加热使药品溶解后,再定容1000ml.配好后放入冰箱备用.⑷ 固体基本培养基: Vogel 50×20ml,葡萄糖20g,水洗琼脂20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0,⑸ 2氮液体基本培养基:K2HPO4 7g,KH2PO4 3g,柠檬酸纳·3H2O 5g,MgSO4·7H2O 0.1g,(NH4)2SO4 2g,葡萄糖20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0, 于4.9×104Pa压力下灭菌20~30min.⑹ 无氮液体基本培养基:在⑸的配方中除去(NH4)2SO4即可.⑺ 混合氨基酸和混合维生素的配置:将氨基酸分为七组(如下表),其中六组各有6种氨基酸,每种氨基酸等量研细,充分混匀.若所选的氨基酸为DL型,则用量加倍.第七组只有一中氨基酸.第八组为混合维生素.Ⅰ 赖氨酸 精氨酸 甲硫氨酸 半胱氨酸 胱氨酸 嘌呤Ⅱ 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 谷氨酸 天冬氨酸 嘧啶Ⅲ 丙氨酸 甲硫氨酸 苏氨酸 羟脯氨酸 甘氨酸 丝氨酸Ⅳ 亮氨酸 半胱氨酸 谷氨酸 羟脯氨酸 异亮氨酸 缬氨酸Ⅴ 苯丙氨酸 胱氨酸 天冬氨酸 甘氨酸 异亮氨酸 Ⅵ 色氨酸 嘌呤 嘧啶 丝氨酸 缬氨酸 酪氨酸Ⅶ 脯氨酸 Ⅷ 维生素B1 维生素B2 维生素B6 泛酸 对氨基苯甲酸 烟碱酸及生物素因脯氨酸容易潮解,所以单独列为第七组.把维生素B1、B2、B6、泛酸、对氨基苯甲酸（BAPA）、烟碱酸及生物素等量研细，充分混匀，配成混合维生素为第八组。

沙氏琼脂培养基（SDA）用途：用于医药工业洁净室（区）沉降菌的测试（GB/T 16294—2010）用法：取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节ph值使灭菌后为5.6 ±0.2，假如琼脂，加热融化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿（￠90mm3 ）中。加盖后在室温放至凝固。平皿培养及保存：制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃保存，一般以一周为宜或按厂商提供的标准执行。采用适宜方法在平皿上做好培养基的名称、制备日期记录的标记。

[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=59358]146种培养基的制备[/url]和大家一起分享知识

作环境监测每周都需要几百几百的平板，手动分装太累，而且分装量不是很准，有时还污染，大家都怎么分的呢？有没有人用培养基分装器？

实验室培养基制备质量保证通则（中文和英文版）

实验室培养基制备质量保证通则（中文和英文版）

在培养基的配制过程中，实验室购买的是粉状培养基，配液过程是依据包装标签说明；这种情况配液记录应该如何填写好？填写标签说明，还是自己编制一个作业指导书？

1.配制溶液　　向容器内加入所需水量的一部分，按照培养基的配方，称取各种原料，依次加入使其溶解，最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质，需加热溶解，加热过程所蒸发的水分，应在全部原料溶解后加水补足。　　配制固体培养基时，先将上述已配好的液体培养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至完全融化。并不断搅拌，以免琼脂糊底烧焦。　　2.调节pH值　　用pH试纸（或pH电位计、氢离子浓度比色计）测试培养基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH进行调节，直到调节到配方要求的pH值为止。　　3.过滤　　用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时，最好折叠成六层，用滤纸过滤时，可将滤纸折叠成瓦棱形，铺在漏斗上过滤。　　4.分装　　已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基，须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基，则须将培养基分装于锥形瓶内。　　分装时，一手捏松弹簧夹，使培养基流出，另一只手握住几支试管或锥形瓶，依次接取培养基。分装时，注意不要使培养基粘附管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起杂菌污染。　　装入试管的培养基量，视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时，每只15×150毫米的试管，约装3～4毫升（1/4～1/3试管高度），如制作深层培养基，每只20×220毫米的试管约装12～15毫升。每只锥形瓶装入的培养基，一般以其容积的一半为宜。　　5.加棉塞　　分装完毕后，需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气，避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作，不要用脱脂棉，以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。制作棉塞时，要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度，揪取手掌心大小一块，铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中，用右手食指插入棉花中部，同时左手食指与姆指稍稍紧握，就会形成1个长棒形的棉塞。棉塞作成后，应迅速塞入管口或瓶口中，棉塞应紧贴内壁不留缝隙，以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内，上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札，准备灭菌。　　6.制作斜面培养基和平板培养基　　培养基灭菌后，如制作斜面培养基和平板培养基，须趁培养基未凝固时进行。　　(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5～1米左右的木条，厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上，使管内培养基自然倾斜，凝固后即成斜面培养基。　　(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上，点燃酒精灯，右手托起锥形瓶瓶底，左手拔下棉塞，将瓶口在酒精灯上稍加灼烧，左手打开培养皿盖，右手迅速将培养基倒入培养皿中，每皿约倒入10毫升，以铺满皿底为度。铺放培养基后放置15分钟左右，待培养基凝固后，再5个培养皿一叠，倒置过来，平放在恒温箱里，24小时后检查，如培养基末长杂菌，即可用来培养微生物。

原理培养基是人工地将多种物质按各种微生物生长的需要配置而成的一种混和营养基质，用以培养或分离各种微生物。因此，营养基质应当有微生物所能利用的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因素）和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。操作步骤1、计算称量 根据配方，计算出实验中各种药品所需要的量，然后分别称(量)取。2、溶解 一船情况下，几种药品可一起倒入烧杯内、先加入少于所需要的总体积水进行加热溶解。加热溶解时，要不断搅拌。如有琼脂在内，更应注意。待完全溶解后，补足水分到需要的总体积。3、调节pH 用滴管逐滴加入1N NaOH或lN HCl边搅动；边用pH试纸测其pH值，直到符合要求时为止。4、过滤 要趁热用四层纱布或滤纸过滤。5、分装 按照实验要求进行分装。6、加塞 培养基分装好以后，在试管口或烧瓶口上应加上棉塞。7、灭菌 在塞上棉塞的容器外面再包一层牛皮纸，便可进行灭菌。

一、玻璃器皿的清洗　　在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。　　1、新购的玻璃器皿　　除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于1～2%的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。　　2、用过的玻璃器皿　　凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。

配制后质量控制（1）培养基外观情况：包括颜色、透明度、有无沉淀和凝固。如发现培养基表面有裂纹或与培养皿的边缘分离，说明培养基有脱水现象，必须丢弃。（2）无菌试验：每一批配好的培养基均须进行无菌试验。先灭菌后分装的培养基，可采用抽样方法试验，少于100个样本通常选取5％～10％的量，如果配制大量培养基，则任意选取10 个培养基；无菌分装培养基则需全部做无菌试验。样本在35 ℃ 或其他适宜的温度下隔夜培养，如培养基含有血液，则需再置于室温1天，以检查嗜冷菌。选择性培养基因含有抑制物质，能抑制许多微生物，因此，可加入10倍量的无菌液体培养基，稀释抑制物质，以利于检出污染菌。即使做过无菌试验，接种时，也要检查每个平板上的可见菌落。（3）性能测试：每一批新制或新购的培养基，使用前均须取已知性质的库存菌种进行性能测试。培养基按目的不同可分为增菌培养基、分离培养基和鉴定培养基。①增菌培养基：接种少量难以生长的细菌，在一定时间内观察增菌情况，细菌能生长的最小接种浓度越小，说明增菌培养基性能愈好。②分离培养基：要求目的菌生长良好，非目的菌被抑制。一般要求生长的目的菌接种量不可过多，较好的方法是将测试菌调成0．5麦氏浊度的菌悬液，再用0.001ml的标准接种环涂划在培养基上，观察菌落生长。③鉴定培养基：应选择具有典型特征的菌株作性能试验。如三糖铁琼脂，须用弗劳地枸橼酸杆菌、福氏志贺菌及铜绿假单胞菌3种菌分别接种3支培养基，若反应结果为斜面产酸／高层产酸、硫化氢阳性，斜面产碱／高层产酸，斜面产碱／高层产碱，质量才算合格。

1、培养基 除另有规定外，培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。 1.1 营养琼脂培养基与营养肉汤培养基 1.1.1 营养琼脂培养基 胨 10g 琼脂 15～20g氯化钠 5g 肉浸液 1000ml 取胨、氯化钠和琼脂加入肉浸液，加热溶解后，调PH为弱碱性，煮沸、滤清，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。 1.1.2 营养肉汤培养基 胨 10g 肉浸液 1000ml氯化钠 5g 取胨和氯化钠加入肉浸液，微温溶解后，调PH为弱碱性，煮沸，滤清，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，灭菌。 1.2 玫瑰红钠琼脂培养基 胨 5g 玫瑰红钠 0.0133g葡萄糖 10g 琼脂 15～20g 磷酸二氢钾 1g 水 1000ml 硫酸镁 0.5g 除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。 1.3 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（YPD） 胨 10g 琼脂 15～20g 酵母浸出粉 5g 水 1000ml 葡萄糖 20g 除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。 1.4 胆盐乳糖培养基（BL） 胨 20g 磷酸二氢钾 1.3g乳糖 5g 牛胆盐（或去氧胆酸钠0.5g） 2g 氯化钠 5g 水 1000ml 磷酸氢二钾 4.0g 除乳糖、牛胆盐外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节PH值使灭菌后为7.4±0.2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。 1.5 曙红亚甲蓝琼脂培养基（EMB） 营养琼脂培养基 100ml 曙红钠指示液 2ml20%乳糖溶液 5ml 亚甲蓝指示液 1.3～1.6ml 取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。 1.6 麦康凯琼脂培养基（MacC） 胨 20g 1%中性红指示液 3ml乳糖 10g 琼脂 15～20g 牛胆盐 5g 水 1000ml 氯化钠 5g 除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节PH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。 1.7 4-甲基伞形酮葡糖苷酸（4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide，MUG）培养基 胨 10g 磷酸二氢钾 0.9g硫酸铵 5g 磷酸氢二钠（无水） 6.2g 硫酸锰 0.5mg 亚硫酸钠 40mg 硫酸锌 0.5mg 去氧胆酸钠 1g硫酸镁 0.1g MUG 75mg 氯化钠