皮革水解蛋白检测仪

浙江金华晨园乳业生产的牛奶中被查出使用皮革水解蛋白，以增加产品中蛋白质的含量。想问问这方面的高手，目前国内外有没有皮革水解蛋白的检测方法，可否给个标准号？谢谢了

请教一下各位：用氨基酸分析仪能检测皮革水解蛋白吗？

检测皮革水解蛋白的方法有哪些？目前找不到一个国家标准或行业标准，大家知道吗？楼下是我收集到的文献，检测时有哪些问题？有奖讨论，只要参与，有积分奖励。

“三聚氰胺毒奶”的阴影尚未从消费者的心中散去，“皮革毒奶”又开始威胁消费者的生命安全。在三聚氰胺成为严打对象后，又有不法企业为提高乳制品中的蛋白质含量，在乳制品中混入皮革水解蛋白，制造出“皮革毒奶”。 皮革水解蛋白就是利用已经废弃的皮革制品或动物毛发，水解之后制成粉状，因其氨基酸或者说蛋白含量较高，故人们称之为“皮革水解蛋白粉”。 “皮革水解蛋白粉”中含有的有毒物质被人体吸收、积累，可导致中毒，使关节疏松肿大，甚至造成儿童死亡。 为此，中国农业部2月12日下发2011年度生鲜乳制品质量安全监测计划，其中除要检测三聚氰胺外，还要检测“皮革水解蛋白”和碱类物质。据称，皮革水解蛋白的检测难度比三聚氰胺更大，因为它本来就是一种蛋白质。当前，国内多数参考1978年版《ISO：3496-1978肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定》使用分光光度法测定乳品。主要检测方法是检查牛奶中是否含有羟脯氨酸，这是动物胶原蛋白中的特有成分，在乳酪蛋白中则没有，所以一旦验出，则可认为含有皮革水解蛋白。 已经在消费者心中树立起“食品安全卫士”形象的岛津公司，长期关注中国的乳制品安全问题，为中国用户提供了一系列的乳制品检测解决方案。其中，岛津上海分析中心结合岛津独特的氨基酸分析系统和欧洲药典收录的氨基酸分析方法，率先开发出柱后衍生液相色谱分析乳制品中L(-) - 羟脯氨酸的检测方法。 该方法使用岛津氨基酸柱后衍生系统锂型分析柱建立了牛奶制品中24种氨基酸的高效液相色谱柱后衍生分析方法，柱后衍生及样品测定为全自动完成，消除了柱前衍生不同操作人员引入的人为误差，大大简化了样品前处理步骤，节约了时间，是一种可靠快速的检测方法。本方法可以直接用于检测牛奶中24种氨基酸。

我的硕士研究课题是乳制品中非乳蛋白的检测，主要针对于研究植物水解蛋白和动物水解蛋白，想请教有谁做过皮革，羽毛等动物水解蛋白的蛋白质成分分析，这方面的文献很少，希望得到大家的帮忙！正在焦急中[em30] [em06] [em53]

生乳中皮革水解蛋白的封管技巧与注意事项

目前，想要用[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]分析牛奶中皮革水解蛋白。但试过加乙腈沉淀，不行。不知可否用SPE柱解决问题。敢请哪位高手解疑。

往往食品安全事件爆发就会有相应的试剂盒出售，此次皮革奶事件爆发水解蛋白检测应该也会有试剂盒吧？哪位大侠能说说其原理和操作方法？请勿发布广告，谢谢

有没有哪位兄台能告诉我下，水解蛋白中的铬离子（六价铬）检测方法有哪些，有没有现行存在或者是常规的检测办法呢？？[em09509][em09509][em09509][em09509]

有没有哪位兄台能告诉我下，水解蛋白中的铬离子（六价铬）检测方法有哪些，有没有现行存在或者是常规的检测办法呢？？[em09509][em09512]

我们用紫外做革皮水解蛋白，曲线很不好，不知道是哪里出错了？谢谢[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2022/04/202204072126007561_7839_4193820_3.png[/img]

昧着良心，太可恶了！浙江晨园乳业牛奶中又被检出一种名为“皮革水解蛋白粉”的物质，这种物质为可疑致癌物，达人介绍一下“皮革水解蛋白粉”。

请问哪位前辈有下表中的乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。这个文本啊！附件1食品中可能违法添加的乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。非食用物质名单（第二批） 序号名称主要成分可能添加的主要食品类别可能的主要作用检测方法1皮革水解物皮革水解蛋白乳与乳制品含乳饮料增加蛋白质含量乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定－L（－）－羟脯氨酸含量测定（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。联系方式： Wkzhong@21cn.com）2溴酸钾溴酸钾小麦粉增筋GB/T 20188-2006 小麦粉中溴酸盐的测定 离子色谱法3β－内酰胺酶（金玉兰酶制剂）β－内酰胺酶乳与乳制品掩蔽抗生素液相色谱法（检测方法由中国检验检疫科学院食品安全所提供。联系方式： Wkzhong@21cn.com）4富马酸二甲酯富马酸二甲酯糕点防腐防虫气相色谱法（检测方法由中国疾病预防控制中心营养与食品安全所提供）

关于皮革奶的检测方法有一篇网络资料：“皮革水解蛋白粉检测只需取5ml乳样，加除蛋白试剂5ml混合均匀、过滤、沿滤液试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.6ml形成环状接触面。如果环状接触面清亮，就表明不含皮革水解蛋白;如果环状接触面呈现白色环状，说明乳样含皮革水解蛋白。”===============================================================================================请大家讨论这种方法真的是简单易行的吗？是不是只能用于定性？原理是什么？能不能介绍一下？欢迎大家讨论！

蛋白饲料中水解皮革粉怎么检验

[em09507][img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=189941]序号65-乳制品中水解蛋白.doc[/url]我们研究出来的快检方法没有派上用处。

谁有乳制品中动物水解蛋白的检测方法？急急急

乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定—L(-)-羟脯氨酸含量测定法1 主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。2 引用标准GB9695.23-90 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定 3 原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。4 试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。4.1 氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。 4.2 盐酸(GB622):6mol/L溶液。4.3 氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。4.4 缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5 氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。4.6 显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1 标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。4.7.2 标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。5.1 实验室常规设备。5.2 配有冷凝管的三角瓶:250mL。5.3 恒温水浴。5.4 试管加热器或水浴,可控温于60℃。5.5 分光光度计。 6 试样处理：6.1 方法1：准确称取样品2-5g（液体样品5-10g）放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。6.2 方法2：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸10～15mL（视样品蛋白质含量而定）或加入12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚（3.3）3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0 psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解24h后（如加入12mol/L盐酸，水解时间可缩短至6h）后，取出冷却。 打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于50mL容量瓶中,用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。 7 分析步骤7.1 测定7.1标准曲线的绘制吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL,分别加入20mL具塞试管中,加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出,迅速冷却,在波长558±2nm处测定吸光值,绘制标准曲线。7.2 试样测定从待测液中吸取已制备好的样液4.00mL于20mL具塞试管中,以下按7.1步骤进行,同时作空白试验。8 分析结果的计算C•V1•AX= ───————×100m×1000式中:X——样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,％;C——从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,μg;m——称取试样的质量,g;V1——样液体积,mL。A——稀释倍数当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01％。9 允许差同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5％。10 判定方法因L(-)-羟脯氨酸为胶原蛋白中的特有组分，其含量占10%以上；而乳蛋白中不含有此成分，如若样品中含有L(-)-羟脯氨酸，可判定添加了动物水解蛋白。

乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定—L(-)-羟脯氨酸含量测定法1 主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。2 引用标准GB9695.23-90 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定 3 原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。4 试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。4.1 氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。 4.2 盐酸(GB622):6mol/L溶液。4.3 氢氧化钠(GB629);1mol/L、10mol/L溶液。4.4 缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5 氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。4.6 显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1 标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。4.7.2 标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。5.1 实验室常规设备。5.2 配有冷凝管的三角瓶:250mL。5.3 恒温水浴。5.4 试管加热器或水浴,可控温于60℃。5.5 分光光度计。6 试样处理：6.1 方法1：准确称取样品2-5g（液体样品5-10g）放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。6.2 方法2：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸10～15mL（视样品蛋白质含量而定）或加入12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚（3.3）3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0 psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解24h后（如加入12mol/L盐酸，水解时间可缩短至6h）后，取出冷却。 打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于50mL容量瓶中,用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。7 分析步骤7.1 测定7.1标准曲线的绘制吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL,分别加入20mL具塞试管中,加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出,迅速冷却,在波长558±2nm处测定吸光值,绘制标准曲线。7.2 试样测定从待测液中吸取已制备好的样液4.00mL于20mL具塞试管中,以下按7.1步骤进行,同时作空白试验。8 分析结果的计算C•V1•AX= ───————×100m×1000式中:X——样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,％;C——从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,μg;m——称取试样的质量,g;V1——样液体积,mL。A——稀释倍数当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01％。9 允许差同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5％。10 判定方法因L(-)-羟脯氨酸为胶原蛋白中的特有组分，其含量占10%以上；而乳蛋白中不含有此成分，如若样品中含有L(-)-羟脯氨酸，可判定添加了动物水解蛋白。

1前言某些非法厂家在乳粉，尤其是在婴幼儿配方乳粉中掺入廉价的水解动物蛋白来冒充或替代乳蛋白质。水解动物蛋白是将牛皮下脚料等有害成分粗加工后制成的水解蛋白质，因其氨基酸的组成不合理，且不易消化，所以营养价值低下，导致人体吸收利用率低，严重影响到婴幼儿的生长发育和智力水平。2检测基本思路：动物水解蛋白是利用皮革下脚料等水解制成，其中的特有成分L-羟脯氨酸和羟赖氨酸，且羟脯氨酸的含量较高，达10%以上，而大豆蛋白与乳蛋白中不含此成分。利用这一特性就可进行动物水解蛋白质的鉴定，即通过对羟脯氨酸的测定来鉴定乳与乳制品中是否添加了动物水解蛋白的成分。3检测方法3.1分光光度法3.1.1实验原理 试样经酸水解，释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化，生成还有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲胺基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长558nm处进行比色测定。通过对羟脯氨酸含量的测定，可判断是否含有动物水解蛋白。3.1.2实验仪器紫外分光光度计﹑恒温水浴锅﹑酸度计﹑恒温干燥箱等3.1.3试剂氯胺T（HG3-972）溶液，苯酚溶液，显色剂-对二甲胺基苯甲醛，L-（-）-羟脯氨酸（C5H9NO3）标准溶液。3.1.4试验步骤3.1.4.1标准曲线的制作3.1.4.2样品的前处理 准确称取0.15g样品（精确至0.0001g），放于水解管中，在水解管内加入12mol/L盐酸10~15mL,含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，再加入新蒸馏的苯酚3~4滴，然后充入纯氮气，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖，将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解6小时后，取出冷却。打开水解管，将水解溶液混匀，过滤至100mL(V1)容量瓶中，用蒸馏水反复冲洗漏斗，并定容至刻度。吸取一定量的水解液（视水解液中L（-）-羟脯氨酸的含量而定）于100mL三角瓶中，用10mol/L氢氧化钠溶液调pH为8±0.2，定容至100mL容量瓶中，摇匀备用。3.1.4.3样品的测定3.1.4.4验证结果表2 乳品中L（-）-羟脯氨酸的工作曲线回归方程和线性相关系数﹑检测线化合物线性回归方程（Y=a+bx）线性相关系数（r）检出限(g/100g)L（-）-羟脯氨酸Y=22.837a-0.14180.99920.01表3乳品中L（-）-羟脯氨酸加标回收率数据（n=6）样品添加浓度（μg/mL）加入量（μg）检出量（μg）加标回收率%1500150154.5103.02500150157.4104.93500250239.595.84500250247.298.95500500500.5100.1650050050098.73.2[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Yp][color=#3333ff]液质[/color][/url]只有文献报道：高效液相色谱-质谱法联用测定胶原蛋白中的羟脯氨酸

用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

原理 用硝酸汞沉淀除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，与饱和苦味酸产生沉淀反应。 试剂配制 除蛋白试剂：硝酸汞14g，加入100mL蒸馏水，加浓硝酸约2.5mL，加热助溶，待试剂全部溶解后加蒸馏水至500mL。溶液出现混浊等污染现象停止使用。 饱和苦味酸溶液：称取2 克固体苦味酸于烧杯中，用冷却的蒸馏水定容至100mL,后将定容好的溶液倒入烧杯中煮沸（沸腾即可），然后将液体冷却，待结晶析出后将上清液倒入试剂瓶中。 样品处理奶粉样品的处理： (1)将样品旋转振荡，使之充分混合； (2)准确称取6g 样品，加入50ml 中性温水（60℃左右），充分溶解样品。 原料奶样品：将样品充分混合即可。 操作方法 取5mL 待检处理过的样品，放入干净干燥的平皿或其他容器内，加除蛋白试剂5mL 混合均匀，边加边摇动，不可产生大体积蓄状物，将摇匀的液体用快速定量滤纸过滤于试管中，收集滤液约3mL左右。 然后沿试管壁慢慢加入饱和苦味酸溶液约0.5mL（每加0.5mL约需要30-40秒），切勿使滤液与苦味酸混合(加入的苦味酸溶液层不超出总液体体积的1/3)。 结果判断 方法判定一（沉淀圈判定）：加入苦味酸后，在10 秒内逆光或在黑色背景下）上下左右移动不同方位观察产生沉淀圈情况，无沉淀圈判定为阴性，有明显沉淀圈判定为阳性。 按产生沉淀圈情况进行“阴性、阳性”判定：

【皮革奶】是是用皮革水解蛋白生产出来的乳制品，这是一种类似于三聚氰胺的物质，加入到乳制品中的目的是提高产品蛋白含量。“皮革奶”的毒害就出在这个“皮革水解蛋白”上，它是利用皮革厂制作服装、皮鞋之后剩下的下脚料甚至是动物毛发等物质，经过水解提炼而成的一种粉状物，因其蛋白含量较高，故而被称为“皮革水解蛋白粉”。　　中国农业部发出2011年安全检测计划文件，要求各地除要检测三聚氰胺外，还要严格检测皮革水解蛋白和碱类物质。 　　皮革奶的主要添加物，皮革水解物的主要成分是皮革水解蛋白，而劣质水解蛋白的生产原料主要来自制革工厂的边角废料。制革边角废料中含有重铬酸钾和重铬酸钠。用这种原料生产水解蛋白，重铬酸钾和重铬酸钠自然就被带入产品中，被人体吸收。 　　食品专家介绍，皮革水解物主要添加的食品是乳与乳制品及含乳饮料，作用是增加蛋白质含量量。也就是说这又是一种类似于三聚氰胺的物质，而它与三聚氰胺的不同之处在于，皮革水解物的检测难度比三聚氰胺更大，轻则关节疏松重则死亡。长期食用将致癌 。三聚氰胺检测带动了液相色谱的热销，那么最近沸沸扬扬的“皮革奶”有会带动什么仪器热销呢？

[align=center][b][font=宋体][/font][/b][/align][align=center]换个角度再聊聊掺假实验之动物水解蛋白检验过程的注意事项[/align][align=center][/align][font=宋体]概述[/font][font=宋体]一说到蛋白质，大家总是想到三聚氰胺这个永远的痛点。那什么是[/font][font=宋体]动物水解蛋白[/font][font=宋体]呢？[/font][font=宋体]水解蛋白是一种被处理过的蛋白质，[/font][font=宋体]其目的[/font][font=宋体]是为了增加膳食补充剂的吸收率以及促进肌肉生长而被广泛使用。然而，水解蛋白的摄入对身体会产生一定的不良影响。它可能引起肠胃不适，长时间过量的摄入水解蛋白会导致肝脏和肾脏的负担加重，产生肝肾疾病的风险。此外，水解蛋白含有谷氨酸和天冬氨酸等氨基酸，如果过度摄入，会使脑内谷氨酸的含量过高，产生神经性问题。[/font][font=宋体]需要注意的是，水解蛋白虽然有一定的营养价值，但对于大部分人来说，摄入水解蛋白的必要性并不大，完全可以通过摄入其他蛋白质而满足身体所需。如果需要补充蛋白质，可以选择天然蛋白质来源，比如肉类、鱼类、豆类等食物。此外，如果您已经在使用水解蛋白补充剂，[/font][font=宋体]个人认为十分有必要。[/font][font=宋体]用硝酸汞沉淀方法除去乳酪蛋白，但水解蛋白不会被除去，并与饱和的苦味酸溶液会产生沉淀反应。[/font]这个方法我们再前期和大家讨论过了。今天在说说[font=Arial, Verdana, 微软雅黑, 宋体][size=16px][color=#323232]L-羟脯氨酸的方法.[/color][/size][/font][font=宋体][/font][b]1.测定原理[/b]试样经酸水解后，过滤，用稀盐酸溶解，注入氨基酸分析仪进行测定。采用外标法定量。[b]2 试剂与材料[/b]2.1除非另有规定，应选用优级纯试剂和符合GB/T 6682规定的一级水。2.2 盐酸7.8mol/L，将650mL优级纯的浓盐酸小心倒入350mL超纯水中，混匀。2.3 配制茚三酮显色液，方法如表1所示。2.4 配制苯酚水溶液（5.0%，w/v）：称取苯酚5.0g，溶于100mL水中。2.5 配制盐酸溶液（0.1 mol/L）：量取盐酸（7.8mol/L）16.6mL，倒入1000mL水中。2.6 L-羟脯氨酸标准品，纯度≥99%。2.7 配制L-羟脯氨酸标准储备液：称取100mg（精确到0.1mg）羟脯氨酸标准品，用盐酸溶液（0.1mol/L）溶解并定容至100mL容量瓶中。该溶液的浓度为1000mg/L，于4℃冰箱内贮存，有效期3个月。2.8 准备苯酚溶液。2.9 L-羟脯氨酸标准工作液：准确吸取L-羟脯氨酸标准储备液1.00mL于100mL的容量瓶内，用盐酸溶液（0.1mol/L）定容。该溶液的浓度为10.00mg/L，于4℃冰箱内贮存，有效期1周。[b]3 仪器与设备[/b]L-8900氨基酸自动分析仪、电热恒温干燥箱、配有聚四氟乙烯密封盖的水解管、电子天平（精确到0.0001g）、定量滤纸、0.45μm水性样品过滤器（直径13mm）、氮吹仪。[b]4 分析步骤4.1 样品处理[/b]称取1～2g（精确至0.001g）牛奶样品于水解管中，加8.00mL盐酸，滴入3滴苯酚溶液，用一级水补足10.00mL，充氮后封管，置于110℃烘箱中保持22～24h，冷却后经滤纸过滤。取0.400mL滤液于氮吹仪上吹干，残留物用2.00mL盐酸溶液（0.1mol/L）溶解，过0.45μm滤器，备用。同时做空白对照。[b]4.2 样品测定[/b]4.2.1 氨基酸分析仪条件①分离柱：6 0 m m×4.6 m m（i.d）不锈钢柱，交换树脂为氨基酸分析专用树脂；②柱温：反应柱57℃、分离柱135℃；③泵流速：泵10.400mL/min、泵20.350mL/min；④进样体积：20μL；⑤检测波长：440nm；⑥茚三酮显色液：可按表1配制，也可根据仪器自身要求配制；⑦流动相缓冲液：可按照表2配制，也可根据仪器自身要求配制。4.2.2 定量测定按照外标法进行定量计算。[b]5 结果计算和表述[/b]试样中L-羟脯氨酸的含量X，以质量分数mg/kg表示，单点校正按下式计算：式中：V1— 加入稀盐酸溶液定容的体积，mL；V2— 水解液的定容体积，mL；V3—水解样液的取样量，mL；AS—L—羟脯氨酸标准溶液对应的色谱峰面积响应值；A — 试样溶液对应的色谱峰面积响应值；CS— L—羟脯氨酸标准溶液的浓度，Hg/mL；m — 试样质量，g。平行测定结果用算术平均值表示，结果保留3位有效数字。[b]6 重复性[/b]在同一实验室由同一操作人员使用同一仪器完成的2个平行测定的相对偏差不大于10%。

所谓“皮革水解蛋白”，即利用皮革下脚料或是动物的皮毛、脏器等，经水解技术而生成的一种蛋白粉，将其掺入牛奶或奶粉中可提高蛋白质的含量。农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心(北京)检测员李长皓告诉记者，现在的皮革水解技术在不断提高，“如果是用皮革‘鞣革’工艺，包括鞣制、染色等中产生的下脚料，就可能含有一些重金属。”根据资料显示，这类“皮革水解蛋白”中含有重金属铬，如果被人体吸收、蓄积，可导致关节疏松、关节肿大，造成人体重金属中毒。事实上，这并非农业部首次对生鲜乳制品中是否含有“皮革水解蛋白质”进行检测。“三聚氰胺奶”事件后，农业部于2009年开始在全国范围内进行生鲜乳质量安全监测工作。但在三聚氰胺成为严打的对象后，一些不法企业和奶站便将目光锁定在“皮革水解蛋白”。2009年2月初，我国食品安全综合协调与卫生监督局所印发的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第二批)》公布后仅一个月左右，浙江金华市晨园乳业被查出仍顶风作案，生产“皮革奶”，因此而被查封。“那之后，皮革水解蛋白也被列入了生鲜乳制品的检测项目中。”今天同事在说大陆地区的同胞门在哄抢澳门的奶粉,并且每人限购三袋!刚刚看到新闻说什么皮革奶粉,怎么搞的这么乱啊!

乳制品中水解蛋白的测定有没有现成的分析方法，请各位同仁指点指点。

皮革奶和三聚氰胺都是由牛奶中的蛋白闹的，所以一起先看看牛奶中蛋白的成分：牛奶中含有3种主要的蛋白质，其中酪蛋白的含量最多，约占总蛋白量的83％，乳白蛋白占13％左右，乳球蛋白和少量的脂肪球膜蛋白约占4％左右。乳白蛋白中含有营养所必需的各种氨基酸，是一种全价蛋白。不知道皮革水解物中的蛋白是什么样的蛋白质，从检测的角度来说，可以检测牛奶中的酪蛋白，如果含量在83%左右，就可确定其为牛奶，如果这一比例相差很远的话，就可能是皮革奶。但这一前提是皮革水解物不含酪蛋白。如果皮革水解物中含有酪蛋白，那就检测乳白蛋白。检测方法1 可以利用蛋白质变性的等电点等方法将酪蛋白分开，从而进行凯式定氮法测定，确定酪蛋白的含量。2 蛋白质在紫外区有吸收，可以利用紫外分光光度法进行测定。3 可以利用显色剂茚三酮在可见区进行测定。4 水解后可以测定水解物中的氨基酸，利用液相色谱仪。以上是我个人想法，没有付诸实践，不知正确与否，希望大家一起来讨论

乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定—L(-)-羟脯氨酸含量测定法1主题内容与适用范围本方法规定了乳与乳制品制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定方法。本方法适用于乳与乳制品中L(-)-羟脯氨酸含量的测定。本方法通过对L(-)-羟脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。2 引用标准GB9695.23-90 肉与肉制品L(-) - 羟脯氨酸含量测定 3 原理试样经酸水解,释放出羟脯氨酸。经氯胺T氧化,生成含有吡咯环的氧化物。用高氯酸破坏过量的氯胺T。羟脯氨酸氧化物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物,在波长558nm处进行比色测定。4 试剂所用试剂均为分析纯,水为蒸馏水或同等纯度的水。4.1 氯化亚锡(GB638):0.75％溶液。将氯化亚锡7.5g溶于500mL水中,再加入500ml浓盐酸(GB 622)。 4.2 盐酸(GB622):6mol/L溶液。4.3 氢氧化钠(GB629) 1mol/L、10mol/L溶液。4.4 缓冲液:将50g柠檬酸,26.3g氢氧化钠和146.1g结晶乙酸钠(GB694)溶于水,稀至1L,此溶液与200mL水和300mL正丙醇混合。4.5 氯胺T(HG3-972)溶液:将1.41g氯胺T,溶于10mL水中,依次加入10mL正丙醇和80mL缓冲溶液(用时现配)。4.6 显色剂:称取10g对二甲氨基苯甲醛,用35mL高氯酸(GB623)溶解,缓慢加入65mL异丙醇。4.7 L(-)-羟脯氨酸(C5H9NO3)标准溶液。4.7.1 标准储备液500μg/mL:称取50.0mg/L(-)-羟脯氨酸用少量水溶解,加一滴6mol/L盐酸,定容至100mL容量瓶中。4.7.2 标准工作液5μg/mL:吸取标准储备液5.00mL于500mL容量瓶中,定容。 5.1 实验室常规设备。5.2 配有冷凝管的三角瓶:250mL。5.3 恒温水浴。5.4 试管加热器或水浴,可控温于60℃。5.5 分光光度计。6 试样处理：6.1 方法1：准确称取样品2-5g（液体样品5-10g）放入250mL磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入氯化亚锡溶液100mL,置于水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200mL容量瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗三角瓶和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL烧杯中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于250mL容量瓶中,用30mL水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。6.2 方法2：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/L盐酸10～15mL（视样品蛋白质含量而定）或加入12mol/L盐酸10～15mL，含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚（3.3）3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0 psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解24h后（如加入12mol/L盐酸，水解时间可缩短至6h）后，取出冷却。 打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100mL三角瓶中,用6moL/L热盐酸10mL反复三次冲洗试管和滤纸,冷却,用水定容到刻度,混匀。吸取5～25mL(V1)水解液于100mL三角瓶中,用10mol/L、1mol/L氢氧化钠溶液调节pH为8±0.2,过滤于50mL容量瓶中,用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀,反复三次,把洗液并入滤液中,以水洗至刻度,摇匀备用。7 分析步骤7.1 测定7.1标准曲线的绘制吸取L(-)-羟脯氨酸标准工作液0.00,10.00,20.00,30.00,40.00mL,分别置于100mL容量瓶中,定容摇匀。浓度分别为0.0,0.5,1.0,1.5,2.0μg/mL。取不同浓度的上述溶液4.00mL,分别加入20mL具塞试管中,加氯胺T溶液2mL,摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2mL,摇匀,塞上塞子于60℃试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出,迅速冷却,在波长558±2nm处测定吸光值,绘制标准曲线。7.2 试样测定从待测液中吸取已制备好的样液4.00mL于20mL具塞试管中,以下按7.1步骤进行,同时作空白试验。8 分析结果的计算 C• V1• AX= ───————×100 m×1000式中:X——样品中L(-)-羟脯氨酸的含量,％ C——从标准曲线上查得相应的L(-)-羟脯氨酸量,μg m——称取试样的质量,g V1——样液体积,mL。A——稀释倍数当符合允许差所规定的要求时,取两次测定结果的算术平均值作为结果,结果精确到0.01％。9 允许差同一分析者同时或相继进行的两次测定结果之差不得超过平均值的5％。10 判定方法因L(-)-羟脯氨酸为胶原蛋白中的特有组分，其含量占10%以上；而乳蛋白中不含有此成分，如若样品中含有L(-)-羟脯氨酸，可判定添加了动物水解蛋白。(资料来源：网络下载)

浙江兰溪金华市晨园乳业有限公司，多批次牛奶被检出名为“皮革水解蛋白粉”的可疑致癌物。浙江“晨园乳业”往牛奶添加怀疑致癌物皮革蛋白粉遭遇查处，但在市面上，这种物质的销售成行成市。　　　　昨日，广东省畜牧兽医局一位负责人表示，有些皮革蛋白粉通过加工合格又获得饲料主管部门发出的“批准文号”，是允许用到饲料中的。“但绝对不能作为食品添加剂来用。”　　广州市质监局食品处处长李红兵向记者表示，此前已经对广州市乳制品企业进行过针对皮革蛋白粉的抽检，目前没有发现乳制品企业的产品含皮革水解物。(广州日报 记者刘俊、何颖思)