1、标准品 标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。 按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物 标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。 要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体 应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。 根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂 以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制: 活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型) 右旋糖酐T200.2g 加0.1mol/L PB 至100ml 电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液 放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。 目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。 在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。 在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6): 0.1mol/l PB 980.0ml 0.3mol/L EDTA2Na 10.0ml 0.2%洗必泰溶液 10.0ml 溶菌酶 1.0g
1、标准品 标准品是放射免疫分析法定量的依据,由于以标准品的量用来表示被涮物质的量,故标准品与被测物质应当化学结构一致并具有相同免疫活性。标准品作为定量的基准。应要求高度纯化。标准品除含量应具有准确性外,还应具备稳定性,即在合理的贮存条件下保持原来的特性。 按实验要求,将标准品用缓冲液配成含不同剂量的标准溶液,用于制作标准曲线。2、标记物 标记抗原应具备:①比放射性高,以保证方法的灵敏度;②免疫活性好;③所用的核素的半衰期尽可能长,标记一次可较长时间使用,这对来之不易的抗原尤其重要;④标记简便、易防护。 要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。3、抗体 应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。 根据稀释曲线,选择适当的稀释度,一般以结合率为50%作为抗血清的稀释度。4、B与F分离剂 以2%加膜活性炭溶液为例,2%加膜活性炭溶液的配制: 活性炭2g(杭州木材厂生产,森工牌732型) 右旋糖酐T200.2g 加0.1mol/L PB 至100ml 电磁搅拌1h,然后置于变通冰箱冰箱待用。5、缓冲液 放射免疫分析技术所用的缓冲液有多种,要通过实验选用抗体和抗原结合最高的缓冲液。 目前最常用的缓冲液有下列几种:①磷酸盐缓冲液;②醋酸盐缓冲液;③巴比妥缓冲液;④Tris –HCl缓冲液;⑤硼酸缓冲淮。其中以磷酸盐缓冲液应用最多。 在缓冲液中,除必须有弱酸及弱酸的盐成分外,还应根据不同检测项目加入下列物质:①保护蛋白:常用的有牛血清白蛋白或白明胶,浓度为0.1%~0.2%,用以降低试管对抗原的非特异性吸附。②防腐剂:多采用0.1%叠氮钠、0.01%柳硫汞、溶菌酶或抗菌素。③酶抑制剂:如测定心钠素等肽类激素时,要加入适量的抑肽酶,用以抑制血浆内源性水解酶对待测物的降解;又如测定cAMP、cGMP时,需加入EDTA• 2Na,抑制磷酸二酯酶的活性。④阻断剂:在测定甲状腺激素或测定某些甾体激素时,必须加阻断剂,使和蛋白质相结合的激素,变为游离型。常用的阻断剂有8—苯胺—1—萘磺酸、柳硫汞、水杨酸钠、三氯醋酸钠等。⑤载体蛋白:采用二抗作B与F分离剂时,要向反应液中加入适量与第一抗体同种动物的正常血清。在测定不含有血浆蛋白的样品时,用PEG沉淀剂分离B、F,必须加适量γ球蛋白或正常人混合血清。 在神经肽的RIA时,常用PELH缓冲液,(按1000ml,pH7.6): 0.1mol/l PB 980.0ml 0.3mol/L EDTA• 2Na 10.0ml 0.2%洗必泰溶液 10.0ml 溶菌酶 1.0g
工作人员被放射性同位素污染是生物医学实验中最大的危害之一,为了在操作过程中确保安全,有许多严格的规定和要求。虽然在通常实验中所用同位素的量相对地讲是低的,但这些预防措施必须严格遵守。现对从事这一工作的一些原则作一简述,多半是一些普通的常识,但在执行时往往容易忽略而造成严重的后果。 1.放射免疫实验室中的放射性危险 对于没有封闭的放射性物质,主要的危险有下面三种: (1)β-或γ-射线的外照射 在放射免疫测定实验中,这方面的危险不大,因为放射性同位素的使用总量相当小,最常用的125I,它的能量也较小(0.027MeV),因此,其穿透能力是很小的。 (2)皮肤污染 这是在放射免疫测定中最常见的危害。高剂量的污染会导致皮肤的坏死,更为严重的是由于不注意手上污染的同位素而非常容易随着吃东西进入体内,随后又分布到全身。 (3)同位素进入人体 这是最主要的危险,通常是由于被那些皮肤或衣服上污染了同位素的人制作食品和饮料所致。同样也可能从空气中吸入。因为125I集中于甲状腺会导致甲状腺严重坏死,而且在体内长期受125I放射损伤还会导致癌症。 2.管理总则 对于操作放射性同位素的实验室应该这样设计:这些实验室应该符合使用和贮存同位素的要求。实验区域应该用国际上所接受的警告标志显示。在一些较大的实验室,对于操作大剂量放射性同位素(1mCi)的设计应该进行特别的审查。实验室内应该有通风良好的通风橱,而且还应该有淋浴的地方以便对可能出现的皮肤污染及时冲洗。对于一些没有经过同位素安全知识训练的人员不能允许进入实验室。 每一个实验室,即使是小实验室,应该指定专人(RSO)负责安全检查,此人将对有关人员进行同位素使用的安全教育,定期检查工作人员和仪器的污染情况,并帮助处理一些事故。该人对进入实验室的的所有放射性物质负责,并按照有关法令来处理同位素。 3.标记规则 下面的规则适用于所有水平的同位素标记工作。 (1)在实验室必须穿上带有从事同位素工作标记的实验服。(2)不准在实验室里吃、喝和抽烟。(3)如果溶液的放射性强度超过0.1μCi/ml,或虽然溶液中放射性强度较低,但总的放射性超过10μCi时,操作时均需戴上手套。(4)当操作的剂量大于1mCi时,手必须要用放射监测仪进行测定,这包括移去手套前后均需测定。(5)所有放射性材料,其浓度大于0.01μCi/ml或总放射强度大于1μCi时,均须标上同位素标签,标明强度、日期和体积; (6)不准用嘴来吸移液管; (7)应该尽可能采用有防护物的吸管装置; (8)所有操作台面需有保护层覆盖,并定期检查,在必要时把保护层换掉; (9)放射活性大于0.1mCi时,所有操作应在盘中进行,并在用过以后立即进行检查; (10)对于非消耗性设备(柱、注射器、吸管),若使用过高剂量放射活性材料后,必须在使用后用自来水冲洗,并浸泡在有去污剂的溶液中,直到下次再用,那些设备应该指定放在同位素实验室,不允许拿到别的地方再去使用;
放射免疫治疗对于淋巴瘤效果良好 经过对多种肿瘤的大量试验发现,放射免疫治疗对于淋巴瘤效果良好。目前经FDA 批准上市的治疗淋巴瘤的放射免疫药物有90Y-ibritu-momab(Zevalin)和I131-tositumomab(Bexxar),两者的靶抗原都是CD20。另外,所有研究均显示放射免疫治疗有很好的安全性,骨髓抑制是其主要不良反应。北京佑安医院肿瘤介入治疗中心李睿晚期肺癌患者新的生命希望 由上海美恩研发的131I-chTNT(碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗注射液)经中国SFDA批准用于放化疗失败的晚期肺癌治疗。131I-chTNT的上市为广大一线治疗失败的晚期肺癌患者提供了一种新的生命希望。据介绍,TNT抗体仅锁定实体瘤的变性坏死组织,131I-chTNT与肿瘤细胞核抗原结合,与单抗chTNT结合的放射性核素对坏死区边缘的肿瘤活细胞进行杀伤,造成新的坏死,接着单抗chTNT扩展到新的坏死区,周而复始使肿瘤坏死区不断扩大,由内向外摧毁肿瘤,达到治疗目的。肝癌治疗新突破利卡汀是由第四军医大学和成都华神生物研发,2005年获得新药证书,2007年上市,这个抗体的轻、重链可变区基因序列以及抗原蛋白结构都是我们首次发现并确定的,也是我国唯一具有自主知识产权全新靶点的抗体药物。美国FDA批准的26个抗体药物只有12个靶点,比如EGFR、VEGF等,我国批准的抗体药物的靶点也只有5个,利卡汀的靶点是第四军医大学确认的,国际上还没有同类药物上市。 从单抗制备、中试放大、新药申报、抗原分析、靶点确定、临床研究和产品GMP论证,历经25年,于2007年5月成功上市的我国自主研发的国家生物制品一类新靶点肝癌靶向药物:“碘美妥昔单抗注射液”——“利卡汀”,实现了该抗体药物的产业化。利卡汀用于治疗原发性肝癌的临床控制率(CR+PR+MR+SD)为86.3%,临床有效率(CR+PR+MR)为27.40%,临床缓解率(CR+PR)为8.22%,24[/
化学发光免疫分析放射免疫分析法有很高的灵敏度,但存在着放射性防护和同位素污染等问题。近年来,许多非放射性同位素标记的免疫分析方法相继出现。其中,在化学发光反应及抗原-抗体特异性识别基础上建立起来的一种新的非放射免疫分析技术--化学发光免疫分析法,由于这种方法具有灵敏度高,特异性强,精密度好,线性范围宽,仪器设备简单,试剂价格低廉,方法稳定、快速等优点,已成为一种重要的非同位素标记免疫分析方法,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测。 化学发光免疫分析包括三大类型:即标记化学发光物质的化学发光免疫分析;标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析。下面以偶合放大化学发光酶联免疫分析法检测人血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)为例。 (一) 原理 尽管辣根过氧化物酶(HRP)可以催化Luminol-H2O2反应体系产生化学发光,但由于该体系的检测灵敏度不够高,不能满足酶联免疫测定的要求。因此,为了提高体系的检测灵敏度,可将HRP催化H2O2氧化曙红(Eosin)的反应与该反应产物增强HRP催化luminol-H2O2的化学发光反应相偶合,建立偶合放大化学发光酶联免疫分析法。这里,酶的活性是基于下列发光反应进行检测的: HRP luminol+H2O2───→产物+hν 产 物 ↑ Eosin+H2O2 ──────┘ HRP 二) 操作步骤 1. 包被抗体 在每个小试管中加入聚苯乙烯珠各一枚,再加入300μl用0.05M,PH9.6 碳酸盐缓冲液稀释的抗HBsAg抗体,同时设空白对照,置4℃过夜。 2. 洗涤 用抽滤针头吸干管内液体,加入Tris-HCl-Tween20洗涤3次,每次加2ml,放置3~5min,用抽滤针头吸干管内液体。 3. 加待检血清和阳性标准品 用PBS-Tween20缓冲液不同倍数稀释HBsAg阳性标准品或待检血清,每管加入300μl。同时设阴性对照;空白对照管只加抗体稀释液。置37℃孵育2h。 4. 洗涤 同2。 5. 加酶标抗体 用含小牛血清的PBS-Tween20缓冲液稀释HRP标记的抗HBsAg抗体,每管加入300μl,空白对照管只加用于稀释酶标抗体的稀释液。置37℃孵育2h。 6. 洗涤 同2。 7. 化学发光测定 给每管加入300μl底物溶液,置37℃保温20min。犎;后将小试放入LKB-1250 lumimeter中,并置于测量位置,加入300μl 5.0×10-4M luminol。记录仪记录化学发光强度。 8. 同时用ELISA方法进行对照,结果测量采用DG3022型酶联免疫检测仪。 结果判定(1) 定性 按下列公式判别阴、阳性: L样品-L空白 ┌≥2.1 为阳性 S/N = ──────── = 商│ L阴性对照-L空白 └<2.1 为阴性 (2) 定量 以不同稀释度的HBsAg阳性标准品的化学发光强度为纵坐标,不同稀释倍数为横坐标,作出剂量反应曲线(标准曲线),犜r待测样品中HBsAg的含量就可由测量的化学发光强度换算得到。
http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/04/201204261141_363473_1699466_3.jpg ACS全自动化学发光免疫分析系统由拜耳公司生产,采用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合的免疫分析系统。20世纪90年代初首次推出全自动化学发光免疫分析系统ACS:180。90年代中期推出第二代产品为ACS:180SE分析系统(图2),最 近该公司又推出了ACS:CENTAUR。第二代产品将微机与主机分开,软件程序加以改进,使操作更灵活,结果准确可靠,试剂贮 存时间长,自动化程度高等优点。 1.仪器测定原理 该免疫分析技术有两种方法:一是小分子抗原物质的测定采用竞争法;二是大分子的抗原物质测定采用夹心法。该仪器所用固相磁粉颗粒 极微小,其直径仅1.0µ m,这样大大增加了包被表面积,增加抗原或抗体的吸附量,使反应速度加快,也使清洗和分离更简便。其反应基本过程:⑴竞争反应: 用过量包被磁颗粒的抗体,与待测的抗原和定量的标记吖啶酯抗原同时加入反应杯温育,其免疫反应的结合形式有两种,一是标记抗原与 抗体结合成复合物;二是测定抗原与抗体的结合形式。⑵夹心法:标记抗体与被测抗原同时与包被抗体结合成一种反应形式,即包被抗体 -测定抗原-发光抗体的复合物。 上述无论哪种反应凡所结合的免疫复合物均被磁铁吸附于反应杯底部,上清液吸出后,再加入碱性试剂;其免疫复合物被氧化激发,发射 出 430nm波长的光子,再由光电倍增管将光能转变为电能,以数字形式反映光量度,计算测定物的浓度。竞争法是负相关反应。夹心法 是正相关反应。 2.实验操作 本仪器测定所用试剂均包括两种:固相磁粉和液相发光试剂。每套试剂可放置于试剂托盘的任意位置上,由仪器扫描标签条码后自动加样 。根据测定项目不同,试剂用量在50~450µl之间。测定标本必须用血清,禁止用血浆,以防纤维蛋白将管路堵塞。 由于是自动化仪器,其操作极其简单:①将样品编号排入样品盘。②按试验项目将所用试剂放入试剂盘,并观察辅助试剂。③自由编排程 序,按“START”键运行,根据所编工作表,在微机的控制下,仪器自动放置反应杯,自动加样与试剂,并根据实验项目不同进行温育。温育时间一般在 2.5~7.5分。从第一个测定开始至16分钟,分析仪自动计算报告结果。然后每20秒有一个结果报出,即每一分钟报告3个结果 。如果60个样品同时测定,120个实验项目仅用一个小时即可完成。④随时可加入急诊检查项目。⑤打印报告方式可有三种:按测定 混合项目排列报告;按病人编号排列报告;按每一种项目排列报告。 3.仪器组成及特点 该仪器由主机和微机两部分组成。主机部分主要是由仪器的运行反应测定部分组成,它包括原材料配备部分、液路部分、机械传动部分及光路检测部分。微机系统是该仪器的核心部分,是指挥控制中心。该机设置的功 能有程控操作,自动监测,指示判断,数据处理,故障诊断等,并配有光盘。主机还配有预留接口,可通过外部贮存器自动处理其他数据 并摇控操作,以备实验室自动化延伸发展。 ACS:180SE分析仪为台式,其主要特点为:①测定速度:每小时完成180个测试,从样品放入到第一个测试结果仅需要15分 钟,以后每隔20秒报一个结果。②样品盘:可放置60个标本,标本管可直接放于标本盘中,急诊标本可随到随做,无需中断正在进行 的测试。③试剂盘:可容纳13种不同的试剂,因此每个标本可同时测定13个项目。④全自动条码识别系统:仪器能自动识别试剂瓶和 标本管,加快了实验速度。⑤灵敏度:达到放射免疫分析的水平。 4.测定项目 现有检测项目 47项,更多的项目还在开发之中。①甲状腺系统:总、游离T3,总、游离T4,促甲状腺素,超敏促甲状腺素,T3摄取量。②性腺 系统:绒毛膜促性腺激素,泌乳素,雌二醇,雌三醇,促卵泡成熟素,促黄体生成素,孕酮,睾酮。③血液系统:维生素B 12,叶酸,铁蛋白。④肿瘤标记物:AFP,CEA,CA15-3,CA125,CA19-9,β2 微球蛋白,PSA。⑤心血管系统:肌红蛋白,肌钙蛋白T,肌酸激酶-MB。⑥血药浓度:地高辛,苯巴比妥,茶碱,万古霉素,庆大 霉素,洋地黄,马可西平。⑦其他:免疫球蛋白E,血清皮质醇,尿皮质醇,尿游离脱氧吡啶。
我国检验医学技术的发展长期落后于世界先进水平,这极大地阻碍了我国临床检验和诊断产品的产业化。随着国家的改革开放,引进外资、引进技术,加快了诊断试剂产业化进程,提高了临床应用及诊断水平。但引进的往往是较落后的非主流技术和产品,而关键技术依然被少数发达国家垄断着。在上世纪90年代初期,国内诊断试剂的厂家虽然众多,可是产品品种单一,造成市场竞争白热化,产品质量参差不齐。由于低水平的产品重复研发,国内诊断产品企业在基础技术方面投入较少,具有自己的专利和自主知识产权的企业凤毛麟角,因此国内诊断试剂产品在与进口产品的竞争中远远处于劣势。 在20世纪90年代开始推广的磁微粒分离酶联定量检测分析克服了普通微孔板酶联免疫分析(ELISA)的缺点,成为全球广泛应用在磁微粒化学发光免疫分析的基础技术。1999年我国引进了磁微粒分离酶联定量检测分析的先进生产技术,通过引进、消化吸收,在此基础上自行研制、开发出磁微粒分离化学发光免疫分析试剂。项目被列为了国家“十一五”国家“863”计划重点项目,得到国家的全方位的支持。使得我国免疫试剂产品的再创新和自主创新能力进一步提高,形成了拥有自主知识产权的体外免疫诊断试剂,在方法学上的先进程度和产品质量均接近国际先进水平。它克服了放射免疫分析的高污染、有效期短和普通微孔板酶联免疫分析精密度差、灵敏度差的缺点,使用碱性磷酸酶——APS-5化学发光系统、磁微粒分离系统、独特的蛋白质保护技术,使得本项目方法的灵敏度、精密度、稳定性、有效期、安全性、环保性能大大提高。 化学发光免疫分析技术是继放射免疫技术、酶免技术、荧光免疫技术和时间分辨荧光免疫技术之后发展的一项新兴免疫分析测定技术。化学发光具有荧光的灵敏性,同时不需要激发光,避免了荧光分析中激发光、杂散光等背景荧光的影响,有很高的灵敏度,避免了放射免疫分析给操作者带来的健康隐患和对环境的污染。此项技术在体外免疫诊断试剂上的应用是先进的、科学的,可以说是非常理想的检测方法,也是国际主流技术之一。目前,国家已将使用该技术的部分产品列入行业标准中并推广使用。 化学发光免疫分析技术拥有众多的优点和特性,是其他方法不可代替的。目前在市场上的认可度也明显提高,已经逐步占据主导地位。我国掌握的磁微粒化学发光分析技术与国际主流的技术相当,但在临床诊断和应用上与国外进口产品还有较大的差距,如产品数量少,自动化程度低等。因此,重视产业化进程,提倡拥有自主知识产权,加强配套全自动化仪器的研发,加快与国际主流诊断技术接轨,已成为国内体外免疫诊断产品行业发展的迫切需求,具有重要的战略意义。(转自:http://www.fswenxiu.com/)
Elecsys 2010 电化学发光全自动免疫分析仪产于Roche公司(罗氏公司),Roche公司是世界上最大的检验产品提供商之一。 http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203300841_358158_1699466_3.jpghttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2012/03/201203300841_358157_1699466_3.jpgElecsys 2010全自动电化学发光免疫分析仪是应用先进的电化学发光(ECL)技术的全自动台式分析仪。电化学发光(ECL)技术己应用于甲状腺,激素,心肌损伤和肿瘤标志、传染病、贫血、骨代谢等广泛的测定项目。Elecsys 2010仪器全自动数据处理的特点是使用了二维条形码技术,避免了手工操作,保证数据输入的准确。 Elecsys 2010的临床应用: 广泛应用于甲状腺、激素、心肌损伤和肿瘤标志、传染病、贫血、骨代谢等的测定项目。目前我院已开展项目: 甲状腺功能:游离甲状腺素(F T4),游离三碘甲状腺原氨酸(FT3),促甲状腺素(TSH),抗甲状腺球蛋白抗体(Anti-TG),抗甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO) 性激素类:绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-HCG),雌二醇(E2),促黄体生成激素(LH),促卵泡激素(FSH),泌乳素(PRL),孕酮(PROG),睾酮(TesTo) 肿瘤标记:甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),乳腺癌相关抗原(CA153),卵巢癌相关抗原(CA125),胰腺癌相关抗原(CA199) 肝炎病毒类: 乙肝表面抗原(HBsAg),乙肝表面抗体(Anti-HBs),乙肝核心抗体(Anti-HBc),乙肝e抗体(Anti-HBe),乙肝e抗原(HBeAg) 糖尿病检测:胰岛素(Ins),C-肽(CP) 化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、分析方法简便快速、标记物稳定性好、无污染、结果稳定、误差小、安全性好等优点更免除了使用放射性物质。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者,是免疫分析重要的发展方向。化学发光免疫分析的优点: 1.灵敏度高:这是CLIA关键的优越性,其灵敏度可达1E-16mol/L(RIA为1E-12mol/L)。又如化学发光底物(如AMPPD)可检测出的碱性磷酸酶的浓度比显色底物要灵敏5E5倍。 2.宽的线性动力学范围:发光强度在4~6个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度(OD值)为2.0的范围相比,优势明显。虽然RIA也有较宽的线性动力学范围,但放射性限制了其应用。 3.光信号持续时间长:辉光型(glow type)的CLIA产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。 4.分析方法简便快速:绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂(或复合试剂)的一步模式。 5.结果稳定、误差小:样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种可能因素(光源稳定性、光散射、光波选择器等)给分析带来的影响,使分析结果灵敏稳定可靠。 6.安全性好及使用期长:在上述优点前提下,更免除了使用放射性物质。到目前为止,还未发现CLIA的危害性。
为什么要开展化学发光 ――化学发光的优势 ---一、 化学发光免疫分析简介 化学发光免疫测定是目前世界公认先进的标记免疫测定技术,化学发光 免疫分析技术具有高度的准确性和特异性,成为检验方法中最为重要的技术之一。 化学发光 免疫分析技术作为疾病诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病、内分泌功能、肿瘤标志物、 性激素、甲状腺功能 等方面的体外诊断实验中。 化学发光是一种特异的化学反应,有机分子吸收化学能后发生能级跃迁,产生一种高能级的电子激发态不稳定的中间体,当其返回到基态而发出光子,即为化学发光。将化学发光与抗原抗体相结合而形成的免疫分析技术,即为化学发光免疫分析。 化学发光的发光类型通常分为闪光型(flash type)和辉光型(glow type)两种。闪光型发光时间很短,只有零点几秒到几秒。辉光型又称持续型,发光时间从几分钟到几十分钟,或几小时至更久。闪光型的样品必须立即测量,必须配以全自动化的加样及测量仪。测量辉光型的样品可以使用通用型仪器,也可以配全自动化仪器。 泰格科信的化学发光免疫分析诊断试剂 发光类型 为 辉光型 。 化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析。它具有高灵敏度、检测范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、仪器简单经济等优点。它是放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者,是免疫分析重要的发展方向。CLIA发展迅猛,已占各种免疫分析的首位 ,是目前放射免疫分析和酶联免疫分析最佳的取代者。 二、 化学发光免疫分析的 优势 : 1、 灵敏度高 灵敏度高 是 化学发光免疫分析 关键的优越性,其灵敏度可达 10 -16 mol/L ( RIA 为 10 -12 mol/L )。 化学发光免疫分析能够检出放射免疫分析和酶联免疫分析等方法无法检出的物质,对疾病的早期诊断具有十分重要的意义。 2、 宽的线性动力学范围 发光强度在 4 ~ 6 个量级之间与测定物质浓度间呈线性关系。这与显色的酶免疫分析吸光度( OD 值)为 2.0 的范围相比,优势明显。虽然 RIA 也有较宽的线性动力学范围,但放射性限制了其应用。 3、 光信号持续时间长 辉光型的 CLIA 产生的光信号持续时间可达数小时甚至一天。简化了实验操作及测量。 4、 分析方法简便快速 绝大多数分析测定均为仅需加入一种试剂 ( 或复合试剂)的一步模式。 5、 结果稳定、误差小 样品系直接自己发光,不需要任何光源照射,免除了各种可能因素(光源稳定性、光散射、光波选择器等)给分析带来的影响,使分析结果灵敏稳定可靠。 6、 安全性好及使用期长 免除了使用放射性物质。到目前为止,还未发现其危害性;试剂稳定,保存期可达一年。 三、市场前景 化学发光免疫分析法作为非放射性的免疫分析法,具有灵敏度 高、所需时间短、无污染、检测范围宽等特点,随着各种自动发光分析仪器面市,以及不同类型的化学发光免疫分析试剂盒的不断推出,使得检测项目更多,检测速度提高,这些势必推动化学发光免疫分析的迅速发展, 成为时间分辨、放射免疫和酶联免疫分析的取代者,将成为检验的主流。 使实验室更好、更快地为临床服务。
化学发光放大技术同样利用抗原一抗体反应原理,将酶或其他非放射性标记物标记于抗原或抗体,然后与已知抗原或抗体反应,标记的酶使反应底物进行发光,经光电倍增管测量后可得到被测样本的每秒钟发光计数CPS,再根据内置的标准曲线将CPS转换为样本的浓度值"由于这项技术的应用,使抗原一抗体的反应时间缩短,特异性程度和灵敏度得到提高,同时辅以单克隆技术的应用,使整个反应的全自动化实现成为可能,并一改过去依赖于手工加样,再交由仪器测量的半自动化技术的局面,也是近十年来免疫检验技术的一个飞跃。 化学发光免疫分析系统由以下子系统构成:反应杯传送系统,测试包被珠装载系统,样本装载系统,条码读取系统,试剂装载系统,加样系统,温育系统,离心清洗系统,发光计数测量系统,计算机控制系统组成。1.微粒子捕捉酶免疫分析技术(MEIA) 下面以双抗体夹心法为例介绍微粒子捕捉酶免疫分析技术:已包被了抗体的塑料微珠试剂中,加入待测标本后,经温育,再加入碱性磷酸酶标记的抗体!形成抗体一抗原一酶标记抗体复合物"然后将其转移到玻璃纤维柱上,用缓冲液洗涤,没有结合的抗原!酶标抗体被洗掉,结合抗原抗体的塑料微珠则被保留在纤维柱滤膜的上方"这时再加入底物,4一甲基伞型酣磷酸盐,酶标抗体上的碱性磷酸酶将4一甲基型酣磷酸盐分解,脱磷酸后形成甲基伞型酣,在365nm激发光的照射下,发出448nm的荧光,经过荧光读数仪的记录、放大,计算出所测物质的含量"。2.荧光偏振免疫分析技术(FPIA) 这是一种均相荧光免疫分析法,主要用于测定小分子量物质,如药物浓度测定"原理是:标记在小分子抗原上的荧光素经485nm的激发偏振光照射后,吸收光能,越入激发状态,激发状态的荧光素不稳定,很快以发出光子的形式释放能量而还原"发射出的光子经过偏振仪形成525~55Onm的偏振光,这一偏振光的强度与荧光素受激发时分子转动的速度呈反比,游离的荧光素标记抗原,分子小,转动速度快,激发后发射的光子散向四面八方,因此通向偏振仪的光信号很弱,而与抗体大分子结合的荧光素标记抗原,因分子大,分子的转动慢,激发后产生的荧光比较集中,因此偏振光信号比未结合时强得多",在测定过程中待测抗原小分子!荧光标记抗原小分子和特异性抗体大分子同时加入到一反应杯中,经过温育,待测抗原和荧光标记抗原竞争性地与抗体结合,待测抗原越少,与抗体竞争结合的量越少,而荧光标记抗原与抗体结合量就越多,当激发光照射时,荧光偏振的程度与荧光标记物分子转动的速度成反比,而荧光标记的小分子抗原与大分子抗体结合后,其分子的转动速度减慢,因此荧光偏振信号强"结果是待测抗原的浓度低,可以通过计算获得其含量。3.利用化学发光技术和磁性微粒子分离技术相结合此方法以叮咤酶为发光的标记物,固相载体为极细小的磁性颗粒"其测定原理与放射免疫和酶联免疫中的双抗体夹心法和竞争结合法相似。4.采用酶联免疫技术!生物素亲和素技术和增强化学发光技术此方法是用辣根过氧化物酶(日RP)标记抗原或抗体!以子弹头型塑料小孔管为固相载体,鲁米诺为化学发光剂,并加入化学发光增强剂,可使化学发光强度增强,时间延长而且稳定。 在链霉亲和素包被的子弹头型塑料小孔管中,加入生物素标记的特异性抗体和待测标本,经过37e温育,链霉亲和素与生物素结合,特异性抗体与标本中的抗原结合,形成链霉亲和素一生物素一抗体一抗原复合物,经过洗涤,将多余的标本和生物素标记抗体除去,加入辣根过氧化物酶标记抗体,经37e温育,形成链霉亲和素一生物素一抗体一抗原一酶标抗体复合物,并固定在小孔管壁上,加入氧化剂日202,增强化学发光剂和鲁米诺,这时结合在固相载体上的辣根过氧化物酶在强氧化剂的作用下将增强化学发光剂亚铁原吟琳激活,接着它催化并激活鲁米诺发光,这种化学发光强渡比单独鲁米诺发光强,持续时间长,而且稳定,易于测定。鲁米诺发光强度经光量子记录系统记录,经计算从标准曲线上得出待测抗原含量。
请问:能谱型X射线荧光分析仪的放射源FE55、PU238几年更换?
中国科学院高能物理研究所2011年04月29日 来源: 科技日报 作者: 石伟群 赵宇亮 柴之芳 专家谈核 常见放射性元素包括天然放射性元素和人工放射性元素。我们介绍几种主要的放射性元素。 放射性铯:铯是一种银金色的碱金属元素,化学符号是Cs,原子序数是55,在1860年由德国化学家本生和基尔霍夫发现。铯的熔点低,熔点约为28.44°熔化。在空气中它容易氧化,可用于制造真空件器、光电管等,在化学上还可用做催化剂。 在核电站的乏燃料(燃烧以后的核燃料)的裂变产物中,长半衰期的铯-137的裂变产额较高,是重要的放射性元素。目前已发现的铯放射性同位素有34个。铯-137是裂变产生的最重要的放射性铯同位素,其半衰期约需30年,完全消失则长达300年。由于具有放射毒性,一旦环境中的铯-137被人体吸收,就会对人体产生危害。因此,在核爆炸或者核事故所致的环境污染检测中,铯-137是重点检测的放射性元素。铯作为γ辐射源的半衰期较长,且易造成扩散。目前铯-137源已逐渐被钴-60源取代。 放射性碘:碘也是核电站燃料的主要裂变产物。已表征的碘的同位素有37种。碘-131是核废料中的主要裂变产物之一,由于碘具有易挥发的特点,在核爆炸及反应堆事故中,它是早期污染环境的主要核素。 碘-131半衰期为8天,用铅屏蔽就可以阻隔其放射线。在碘的放射性同位素中,碘-131和碘-125是毒性相对较大的放射性核素。进入血液中的放射性碘,约70%存在于血浆中,30%很快转移到体内各组织器官内,且呈高度不均匀分布,大部分选择性地富集于甲状腺,通常甲状腺内碘浓度可达血浆浓度的25倍,在供碘不足的情况下其浓度可达到血浆浓度的500倍,所以,放射性碘对人体的危害主要表现为甲状腺辐射损伤。医学上也正是利用碘在甲状腺中的富集行为,来利用放射性碘-131治疗甲状腺疾病。 核电站严重事故有可能向环境释放大量放射性碘,但目前已运行的和未来的先进核能循环系统均有较高的安全防护设施,通常会尽量防止放射性碘排放到环境中。以美国三里岛事故为例,反应堆核燃料元件熔化导致大量放射性碘元素释放出来,但均被控制在安全壳内,只有少量放射性碘由于操作失误释放到环境中。类似日本福岛核电站这样的较大规模放射性元素泄漏事件是较为罕见的,同时,也为将来的核电站设计提出了更高安全性的新要求。 放射性锶:放射性锶可以作为环境放射性污染的重要标志物:锶-90和锶-89是用来评估核试验所致环境污染物的主要核素之一。 锶-90居于被选对象的首位是因为它在裂变产物中的份额较高、物理半衰期较长、及进入人体后有重要的毒理学意义。反应堆运行和乏燃料后处理产生的放射性废物中含有较多的锶-90。锶-90可作为β辐射源,在军事,科学研究及医学上均有重要用途。锶-89也可作β放射源。锶-85则是纯γ辐射源,是一种常用的示踪剂。动物实验证明,进入体内的放射性锶主要造成骨髓造血组织和骨骼的损伤,其随机性效应主要是骨组织瘤,其次为白血病。 放射性氡:氡是天然放射性惰性气体(故也称氡气),无色无嗅,可溶于水,其化学符号为Rn。氡有很多放射性同位素,其中半衰期最长的同位素是氡-222(半衰期为3.82天),前面所说的氡通常即是指氡-222。有人把氡气比做“无形的杀手”,虽然有些夸大其词,但氡确实可以对人的健康构成危害。世界卫生组织已把氡列为19种致癌物质之一,研究表明氡吸入是仅次于吸烟的第二大致肺癌因素。 由于氡-222的放射性子体是固态放射性核素,能在空气中形成气溶胶被人吸入。氡-220是氡的另一种同位素,半衰期为55秒。由于氡-220是钍-222的衰变产物,也把它称为钍射气。在我国,已发现泥土房和窑洞中氡-220的浓度较高。 氡无所不在,遍布在我们的生活环境之中,而我们需要特别警惕的是室内的氡。室内的氡气可以来自地基下的土壤,也可来自各种建筑材料,或来自空气或用水。一般地下室、窑洞或土坯房子的氡气浓度较高,为了减少氡及其子体的危害,要保持室内良好通风。 放射性氚:氚是元素氢的一种放射性同位素。可写为3H,氚还有其专用符号T。它的原子核由一颗质子和二颗中子组成。1934年,英国卢瑟福等人在加速器上用加速的氘核轰击氘靶,通过核反应发现氚,1939年美国科学家阿耳瓦雷等证明氚有放射性。氚会发射β射线而衰变成氦3,半衰期为12.5年。自然界的氚是宇宙射线与上层大气间作用,通过核反应生成的。氚主要用于热核武器、科学研究中的标记化合物,制作发光氚管,还可能成为热核聚变反应的原料。 氚及其标记化合物在军事、工业、水文、地质,以及各个科学研究领域里均起着重要的作用;在生命科学的许多研究工作中,氚标记化合物则是必不可少的研究工具。例如,酶的作用机理和分析、细胞学、分子生物学、受体结合研究、放射免疫分析、药物代谢动力学,以及癌症的诊断和治疗等,都离不开氚标记化合物。
为确保蔬菜安全,农药残留速检仪器应运而生,快速检测主要有以下方法。 (1)免疫分析法,主要有放射免疫分析和酶免疫分析,最常用的是酶联免疫分析(ELISA),基于抗原和抗体的特异性识别和结合反应,对于小分子量农药需要制备人工抗原,才能进行免疫分析。 (2)活体检测法,主要利用活体生物对农药残留的敏感反应,例如给家蝇喂食样品,观察死亡率来判定农残量。该方法操作简单,但定性粗糙、准确度低,对农药的适用范围窄。 (3)酶抑制法,是研究最成熟、应用最广泛的快速农残检测技术,主要根据有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酶的特异性抑制反应。 (4)化学速测法,主要根据氧化还原反应,水解产物与检测液作用变色,用于有机磷农药的快速检测,但是灵敏度低,使用局限性,且易受还原性物质干扰。
x射线衍射仪和荧光分析仪卫生防护标准Radiological standards for X-ray diffraction and fluorescence analysis equipmentGBZ115-20021 范围 本标准规定了X射线衍射仪和X射线荧光分析仪的放射防护标准和放射防护安全操作要求。 本标准适用于X射线衍射仪和X射线荧光分析仪的生产和使用。2 规范性引用文件 下列标准中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版本均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB4075 密封放射源分级 GB4076 密封放射源一般规定 GB8703 辐射防护规定 ZBY226 X射线衍射仪技术条件3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3.1 X射线衍射仪和X射线荧光分析仪 X-ray diffraction equipment and X-ray fluorescence analysis equipment X射线衍射仪 利用X射线轰击样品,测量所产生的衍射X射线强度的空间分布,以确定样品的微观结构的仪器。 X射线荧光分析仪 利用射线轰击样品,测量所产生的特征X射线,以确定样品中元素的种类与含量的仪器。 以下把X射线衍射仪和X射线荧光分析仪统称为分析仪。3.2 闭束型分析仪和敞束型分析仪 enclosed-beam analytic analytical equipment and open-beam analytical equipment 闭束型分析仪 以结构上能防止人体的任何部分进入有用线束区域为特征的分析仪。 敞束型分析仪 结构上不完全符合闭束型分析仪特征的分析仪,操作人员的某部分身体有可能意外地进大有用线束区域。3.3 射线源 radiation source 本标准中,射线源特指X射线管或能便样品受激后发出特征X射线的密封型放射性核素源(以下简称密封型源)。3.4 联锁装置 interlocking device 分析仪的一种安全控制装置,当其中相关的组件动作时可以发出警告信号,或能够阻止分析仪进入使用状态,或使正在工作的分析仪立即关停。3.5 有用线束 primary radiation 来自射线源并通过窗、光栏或准直器射出的待用射线束。3.6 受照射部件 exposed components 分析仪中受到有用线束照射的部件,如:源套、遮光器、准直器、连接器、样品架、测角仪、探测器等。3.7 源套 radiation source housing 套在射线源外部的具有一定防护效能的壳体,分为密封源套和X射线管套。3.8 防护罩 protective enclosure 敞束型分析仪中,用来屏蔽源套和所有受照射部件的一种防护设备。在防护罩的侧面,通常装有可以平移的防护窗,调试、校准等操作结束后,关闭防护窗,能够有效地防止人员受到有用线束和较强散射线的照射。3.9 遮光器 shutter 安装在有用线束出口处的可以屏蔽有用线束的器件。
化学发光酶标仪与化学免疫分析仪的是什么区别?
化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。简介化学发光免疫分析仪包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。 化学发光免疫分析仪器中核心探测器件为光电倍增管(PMT),由单光子检测并传输至放大器,并加高压电流放大,放大器将模拟电流转化为数字电流,数字电流将发光信号由R232数据线传输给电脑并加以计算,得出临床结果。 分类化学发光标记免疫分析法 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) ,是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridin ium ester (A E) ,是有效的发光标记物 , 其通过起动发光试剂(N aOH2H2O 2 ) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成,为快速的闪烁发光(见图1)。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法 ,大分子抗原则采用夹心法 , 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 发光酶免疫分析法 从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析( chem ilum inescen t enzym e imm unoassay,CL E IA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂,操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物,在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) ,它们有各自的发光底物。 发光试剂 HRP 标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺(32氨基邻苯二甲酰肼,lum ino l) ,或其衍生物如异鲁米诺(42氨基邻苯二甲酰肼) , 是一类重要的发光试剂。其结构如图4 所示。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,在过氧化物酶及活性氧存在下,生成激发态中间体, 当其回到基态时发光, 其波长为425nm。 早期用鲁米诺直接标记抗原(或抗体) ,但标记后发光强度降低而使灵敏度受到影响。近来用过氧化物酶标记抗体, 进行免疫反应后利用鲁米诺作为发光底物, 在过氧化物酶和起动发光试剂(NaOH2H2O 2) 作用下, 鲁米诺发光, 发光强度依赖于酶免疫反应物中酶的浓度。Kodak Am erliteTM半自动分析系统就是利用这一体系专门设计的。 增强发光酶 增强发光酶免疫分析(enhanced luminescence enzyme immunoassay, ELEIA )在发光系统中加入增强发光剂, 如对2碘苯酚等, 以增强发光信号,并在较长时间内保持稳定, 便于重复测量, 从而提高分析灵敏度和准确性。在全自动分析仪上, 还可通过计算机严密控制, 进行自动操作, 如加试剂,混合, 温育, 洗涤, 加发光试剂, 发光计数, 数据处理, 绘制标准曲线, 直至完成病人血清样品的分析并打印出结果。Am erliteTM发光增强酶免分析系统用荧光素、噻唑等增强剂, 其发光时间可持续长达20m in, 试剂盒有甲状腺功能检测的 促甲状腺素、三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、甲状腺素结合球蛋白、游离甲状腺素, 与性激素有关的有促黄体激素、促卵泡激素、人绒毛膜促性腺激素、甲胎蛋白、雌二醇、睾酮, 以及其他方面的如癌胚抗原、铁蛋白、地高辛等。 ALP标记的CLEIA所用底物为环1, 22二氧乙烷衍生物, 这是一类很有前途的发光底物 ,用于化学发光酶免分析底物而设计的分子结构中包含起稳定作用的基团——金刚烷基, 其分子中发光基团为芳香基团和酶作用的基团,在酶及起动发光试剂作用下引起化学发光。最常使用的底物是AM PPD , 中文名为: 32(2’2螺金刚烷) 242甲氧基242(3’2 磷酰氧基) 2苯基21, 22环二氧乙烷)。在碱性磷酸酶(AL P) 作用下,磷酸酯基发生水解而脱去一个磷酸基, 得到一个中等稳定的中间体AM PD (半寿期为2~ 30m in) ,此中间体经分子内电子转移裂解为一分子的金刚烷酮和一分子处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子, 当其回到基态时产生470nm 的光,可持续几十分钟。AM PPD 为磷酸酯酶的直接化学发光底物,可用来检测碱性磷酸酯酶或酶和抗体、核酸探针及其它配基的结合物。可检测到碱性磷酸酯酶的浓度为10- 15mol/L 。
虽然酶标仪价格低廉、仪器简单、方便操作,但在越来越多的项目检测中,化学发光免疫分析仪逐渐取代酶标仪的使用。 化学发光的优点到底在哪里呢?从原理上说,酶标仪是通过对酶标板中液体的吸光值检测,获得一个OD值后进行定性或半定量的分析,达到检测的目的。化学发光免疫分析仪是化学发光反应(酶促发光或直接发光)产生的光信号通过光电倍增管进行信号转换后等到相应的信号值,用RLU(相对光单位)表示,以达到定量或定性的检测目的,其更加灵敏,线性范围更宽,而且可以做定量检测,可进行全自动操作,而酶标仪无论检测还是线性范围都不如发光仪,且只能做定性检测,但是目前国内酶标仪较为成熟,化学发光尚处于成长期。
在我们国内免疫学的发展主要经过了三个阶段:放射免疫法(RIA)已经处于衰退期,仍普遍用于县级以上医院,试剂系列化;酶联免疫发(ELISA)普遍用于临床机构,产品成熟,试剂尚未系列化(运用色原ADPS,TOOS,MAOS等同过氧化氢偶联的方法就是属于此类);化学发光免疫法(CLIA)这个是比较先进的方法,个别较大医院应用,在国外已经比较成熟,但国内尚属于导入期或成长期,主要依赖进口。这里重点介绍下化学发光免疫中的发光底物试剂
求助:哪位大侠能不能告诉我偏振荧光免疫分析仪是属于哪仪类医疗器械,还有就是有哪些厂家生产这类仪器啊,万分感谢
免疫学检测是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种手段,由于其可以利用同位素、酶、化学发光物质等对被检测信号进行放大和显示,因此常被用于检测蛋白质,激素等微量生物活性物质,我国免疫学检测基本经历了放射免疫检测(兴起于20世纪70年代,现仍普遍使用于县级以上医院);酶联免疫检测(兴起于20世纪80年代,各临床机构普遍使用);以化学发光为代表的光生物学标记及免疫检测技术(20世纪90年代开始推广使用,产品步入成长期)三个阶段。 增敏化学发光免疫分析(Enhanced Chemiluminescence Immunoassay, ECLIA)是近十年来在世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术。检测原理是以发光物质作为信号放大系统并籍助其发光强度直接测定免疫结合。由于具有超过放射免疫的高灵敏度,又具有酶联免疫的操作简便,快速的特点,且测试中不使用有害的试剂,试剂保存期长,标记物稳定性好,检测范围宽等优点,已成为放射性免疫分析与普通酶免疫分析的取代者,是免疫学检测重要的发展方向。目前已有若干国际知名公司的化学发光免疫分析仪器及配套试剂进入我国,并陆续在国内大型医院得到应用,但高昂的购机费用及试剂成本,抑制了该先进技术在国内医院的普及。基于这种现状,中国医疗技术公司率先推出了MPC—1普及型增敏化学发光免疫分析系统,此举必将加速化学发光免疫分析这一先进技术在国内各医疗机构的普及应用。
YY_T_1155-2009_全自动发光免疫分析仪.pdf
电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay,ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。 它的标记物的发光原理与一般的化学发光(CL)不同,是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应,实际上包括了电化学和化学发光二个过程。ECL与CL的差异在于ECL是电启动发光反应,而CL是通过化合物混合启动发光反应。ECL 不仅可以应用于所有的免疫测定,而且还可用于DNA/RNA探针检测。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290841_24973_1636364_3.gif[/img]
化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型。第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物,通过发光反应增强测定的敏感性;第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物,直接通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。 一、化学发光酶免疫测定 从标记免疫测定来看,化学发光酶免疫测定(chemiluminescentenzymeimmunoasssay,CLEIA)应属酶免疫测定。测定中2次抗原抗体反应步骤均与酶免疫测定相同,仅最后一步酶反应所用底物为发光剂,通过化学发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。两种常用的标记酶,辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)均有其发光底物,由此建立的CLEIA均在临床检验中应用。 (一)HRP标记的CLEIA 常用的底物为鲁米诺或其衍生物。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,通常以0.1mol/LpH8.6Tris缓冲液作底物液,鲁米诺和H2O2在无HRP催化时也能缓慢自发发光,而在最后光强度测定中造成空白干扰,因而宜分别配制成2瓶试剂溶液,只在用前即刻混合。 HRP催化鲁米诺氧化的反应可被某些酚试剂(如邻-碘酚)或萤火虫荧光素酶等加强。加强剂的作用是增强发光和延长发光时间,由此可提高敏感度。 (二)AP标记的CLEIA 在以AP为标记酶的CLEIA中,应用的底物为adamantyldioxetasephosphate,有不少衍生物的商品试剂如PPD可供应用。发光反应的反应式如下:[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290913_24989_1636364_3.jpg[/img]二、化学发光标记免疫测定 化学发光标记免疫测定亦称化学发光免疫测定(chemiluminescentimmunoassay,CLIA),是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的一类免疫测定方法。用作标记的化学发光剂应符合以下几个条件:①能参与化学发光反应;②与抗原或抗体偶联后能形成稳定的结合物试剂;③偶联后仍保留高的量子效应和反应动力;④应不改变或极少改变被标记物的理化特性,特别是免疫活性。鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用的标记发光剂。 鲁米诺类的发光反应须有催化剂(例如过氧化物酶)催化,且与蛋白质或肽结合后其发光作用减弱,因此鲁米诺类在CLEIA中是很好的底物,但已较少用于CLIA的标记。吖啶酯类对CLIA更为适用,其显著的优点是:①氧化反应不需催化剂,只要碱性环境中就可以进行。反应物在加入H2O2后再加氢化钠溶液,发光反应迅速,本底低。②在氧化反应过程中,结合物被分解,因此游离的吖啶酯的发光不受抑制。试剂稳定性好。 三、电化学发光免疫测定 在电化学发光免疫测定(electrochemluminescenceimmunoassay,ECLI)中应用的标记物为电化学发光反应的底物三联吡啶钌,其衍生物N-羟基琥珀酰胺(NHS)酯可通过化学反应与抗体或不同化学结构的抗原分子结合,制成标记的抗体或抗原。ECLI的测定模式与ELISA相似,分二个步骤进行。以双抗体夹心法测定抗原为例,第一步在试管中进行,反应物为Ru(bpy)32+标记的抗体、吸附在磁性微球上的固相抗体以及受检的标本,反应式如图[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290914_24990_1636364_3.jpg[/img]反应后除由标记抗体、固相抗体与标本中的抗原形成的夹心复合物外,尚有多余的标记抗体和固相抗体。第二步是将反应液输入特殊的检测仪器的反应室中(图18-3),随即用含三丙胺(TPA)的缓冲液冲洗。反应室电极下有磁铁。含磁性微球的夹心复合物及游离的固相抗体被吸附在电极表面,游离的标记抗体随冲洗液流出。此时在反应室中即发生如图18-1的电化学发光反应。发出的光由光电倍增管转为信号,通过电信号的测定反映标本中抗原的含量。[img]http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2006/08/200608290915_24991_1636364_3.jpg[/img]ECLI具有以下优点:①标记物在再循环利用,使发光时间更长、强度更高、易于测定;②敏感度高,可达pg/ml或pmol水平;③线性范围宽,>104;④反应时间短,20min以内可完成测定;⑤试剂稳定性好,2~5℃可保持一年以上。 四、在医学检验中的应用 放射免疫分析因标记物的放射性在应用中存在不少问题。为替代这一广被采用的测定方法,近年来创立了多种新的标记免疫技术。化学发光免疫测定具有明显的优越性:①敏感度高,甚至超过RIA;②精密度和准确性均可与RIA相比;③试剂稳定,无毒害;④测定耗时短;⑤测定项目多;⑥已发展成自动化测定系统。因此化学发光免疫测定在医学检验中不仅能取代RIA,而且可得到更为广泛的应用。
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全自动化学发光免疫分析仪的原理以及了临床应用。全自动化学发光免疫分析仪采用光电比色原理来测量体液中某种特定化学成分的仪器。是用于检测肿瘤标志物、贫血、甲状腺、孕筛查等项目,是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术,目前应用的自动化分析仪是分析中的取样、加试剂、去干扰物、混合、保温、比色、结果计算、书写报告和清理等步骤的部分或全部由模仿手工操作的仪器来完成,大大提高了工作效率及准确性。
[size=16px] 酶联免疫分析(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一种常用于检测生物分子(如蛋白质、抗体、激素等)在样本中的定量或定性测量的实验技术。以下是使用酶联免疫分析仪检测生物实验的一般步骤: 准备实验材料和试剂: 样本:可以是血清、尿液、细胞上清等。 标准品:已知浓度的目标分子,用于绘制标准曲线以计算未知样本中的浓度。 酶标抗体:用于与目标分子结合的抗体,被标记上酶以便后续检测。 捕获抗体:涂覆在微孔板上,用于捕获目标分子和酶标抗体复合物。 涂覆微孔板: 向微孔板中加入捕获抗体,使其在孔底吸附。 将孔板放置在冰箱或其他适当条件下孵育,让抗体吸附稳定。 加入样本和标准品: 加入待测样本和一系列已知浓度的标准品到不同的孔中。 标准品的浓度通常是一个浓度梯度,用于绘制标准曲线。 孵育和洗涤: 孵育样本和标准品,使目标分子与捕获抗体结合。 之后,使用洗涤缓冲液洗涤孔板,去除未结合的物质。 加入酶标抗体: 加入带有酶标记的抗体,它会与样本中的目标分子结合形成复合物。 孵育和洗涤: 孵育酶标抗体,使其与捕获的目标分子结合。 再次用洗涤缓冲液洗涤孔板,去除未结合的物质。 加入底物: 加入含有底物的溶液。底物被酶催化后会产生颜色或荧光,信号强度与目标分子的浓度成正比。 停止反应: 加入停止液终止底物的反应,防止颜色或荧光的继续产生。 测量信号: 使用酶联免疫分析仪读取每个孔的颜色或荧光信号强度。 将信号与标准曲线进行比较,计算样本中目标分子的浓度。 数据分析: 根据标准曲线和信号强度,计算样本中目标分子的浓度。 请注意,每个实验都需要根据具体的样本和目标分子进行优化和调整。操作过程中应严格遵循实验操作规程,以确保结果的准确性和可重复性。如果你是初次进行ELISA实验,建议在有经验的实验室或专业人士的指导下进行。[img=,690,690]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2023/08/202308311608055074_5122_6098850_3.png!w690x690.jpg[/img][/size]
近二十几年来,免疫学分析方法发展很快,特别是在使用标记了的抗原和抗体的分析技术以后,使原来许多经典的分析方法在敏感性和特异性方面都不能相比。继50年代的免疫荧光(IFA)和60年代的放射免疫(RIA)分析技术之后,在70年代初期又建立了用酶来标记抗原或抗体的分析技术。由于酶的高效生物催化作用,一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应,产生了放大作用,使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分钟后就可被识别出来,这种技术被称为酶联免疫吸附试验法(Enzyme—Linked Immunosorbent Assay,ELISA),本法自70年代初期由VAN WEEMEN、SCHUARS.ENGVALL及PERLMARN等相继分别报道后,现已引起广泛重视。 ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗体,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,可概括四个方面: 1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。 2、研究抗酶抗体的合成。 3、显现微量的免疫沉淀反应。 4、定量检测体液中抗原或抗体成份。 二、方法的基本原理和种类 ELISA的基本原理有三条: (1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性; (2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性; (3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。 由于ELISA法一方面是建立在抗原与抗体免疫学反应的基础上,因而,具有特异性。而另一方面又由于酶标记抗原或抗体是酶分子与抗原或抗体分子的结合物,它可以催化底物分子发生反应,产生放大作用,正因为此种放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此,ELISA法是一种既敏感又特异的方法。
1. 分析仪器1.1 气相色谱仪,配FID、FPD、ECD、NPD、TCD检测器。1.2 液相色谱仪,配紫外-可见、荧光、示差折光、二极管阵列检测器,柱后衍生装置。1.3 气相色谱-质谱联用仪,配EI、NCI、PCI离子源。1.4 液相色谱-质谱联用仪,配ESI、APCI离子源。1.5 紫外-可见分光光度计。1.6 原子吸收分光光度计,配火焰、石墨炉、氢化化发生、冷原子发生原子化器。1.7 原子荧光光度计。1.8 等离子发射光谱仪,配氢化物发生器。1.9 电位滴定仪,配各种阳离子和阴离子电极及参比电极。1.10 PCR仪。1.11 全自动放射免疫检测仪。1.12 酶标仪。
医院质谱能和生化免疫分析仪器组合成流水线自动化吗?
为探讨一起食物中毒的病原菌,按照GB/T4789-2003及WS/T9-1996中食源性致病菌的检验方法,应用mini-VIDAS全自动荧光免疫分析仪等对所采集的食物中毒标本进行检验。结果 25件标本中检出的5株菌均为都柏林沙门氏菌,说明本次食物中毒的病原菌为都柏林沙门氏菌。