我要操作一台岛津制备型高效液相色谱仪,不知道具体分析一个样品的步骤是怎样的,谁要有制备型高效液相色谱的操作视频可以拿来分享一下不?
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高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。高效液相色谱仪是通过高速进样及多样品处理大幅提高了分析效率的一体型智能化HPLC。使用自动启动、停机功能、自动有效性功能,则可实现分析、管理自动化,进一步提高生产效率。 高效液相色谱仪只要求样品能制成溶液, 不受样品挥发性的限制,流动相可选择的范围宽,固定相的种类繁多,因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。
高效液相色谱仪的使用1.色谱柱它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管,内径为4~5mm,长100~250mm。按[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法中洗涤空柱的方法洗净,用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中,用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液,用正己烷(含0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)为流动相测定柱效及分离度塔板数在2~3万/ml以上及分离度在1.5以上者,柱效好。为防止柱污染,常用1个50mm长,4~5mm内径,装有硅胶(40-50mm)或立柱相同填料的保护柱(预柱)接在主柱之前,以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经,以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚,再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。 2.流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中,经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱,最后自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法(isocratic dlution),即自洗脱开始到结束,溶剂的配比恒定。另一类为梯度洗脱法(gradicnt clution),即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比,从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离,而整个色谱过程缩短。必须注意,梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相高效液相色谱法中。 3.检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸收,荧光发射和电化学三种。紫外检测器应用于对紫外光有吸收的药物,大多数药物分子对紫外光有吸收,故能较普遍采用,检测限有0.1μg左右。紫外检测器有固定波长型、可变波长型及扫描器,既能使流动相停流作组分的定性定量检测,又能提高测定灵敏度,重现性较好。荧光发射检测器对能产生荧光的药物才能使用。80年代应用激光替代氙灯光源,光强度增加了3~4倍,对某些药物的检测限可达pg级。电化学检测器是由一个碳糊或破碳做成的蒲层电解池。常用于检测儿茶酚胺类及有酚类基团的各种药物和代谢物。流出组分进入2μl的薄层电解池,在一暄电压下电解产生电流,放大后检测,检测限pg级。 4.数据处理现代高效液相色谱仪带有数据处理系统,除记录谱外,还能自动记录峰的保留时间,能自动积分求算峰面积,并能按照预定的程序作有关计算,报告分析结果。高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法 1 液相色谱仪系统 液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(如图1所示)。对于整个系统而言,柱子、泵和检测器是核心部件,同时也是容易出事故的主要场所。 2 常见问题及解决方法2.1 针对柱压问题(表1)柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值,而是指压力波动范围在50PSI之间。压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题,但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动相种类相联系。值得注意的是在使用梯度洗脱时,进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。在实际应用中柱压过高可从以下几个方面来考虑[1]。首先考虑柱子是否被堵,此时可更换一根新柱子进行检测。2.2 针对保留时间漂移的问题 [2,3] (表2)保留时间的改变是很多液相色谱使用者常碰到的问题,其包括了保留时间增大和减小。它的产生与很多原因有关。2.3 针对异常色谱峰问题[2-4] 异常的色谱峰指的是色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。具体情况与原因分析如表3。3 高效液相色谱仪的保养[5-7]3.1 HPLC的日常操作条件 工作温度10~30℃; 相对湿度80%; 最好是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备。 3.2 泵的保养 使用流动相尽量要清洁;进液处的沙芯过滤头要经常清洗;流动相交换时要防止沉淀;避免泵内堵塞或有气泡。3.3 进样器的保养 每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染。3.4 柱的保养 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;当柱子和色谱仪连接时,阀件或管路一定要清洗干净;要注意流动相的脱气;避免使用高粘度的溶剂作为流动相;进样样品要提纯;严格控制进样量;每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭。3.5 检测器(UV)的保养 紫外灯的保养要在分析前、柱平衡得差不多时,打开检测器;在分析完成后,马上关闭检测器。同时样品池要保养。4 结语 在高效液相色谱使用过程中故障排出时要遵守以下原则:一次只改变一个因素,从而确定假定因素与问题之间的联系;如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位,从而避免浪费;养成良好的记录习惯,一个良好的记录是成功地进行故障排除的关键。 总之,在使用高效液相色谱时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养,仪器系统的干净是用好仪器和维护维修仪器的关键。
目前主要用的液相色谱仪是大连依利特公司的,我经常使用的就是P2OOⅡ型高效液相色谱仪,由于使用期限较长和使用频率很高,在使用过程中难免会遇到这样或那样的问题,所以对其有了更深刻的了解,遇到问题或许会有很多的帮助P200II型高效液相色谱恒流泵结构与特征http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2010/10/201010221335_252963_1638724_3.jpg
1.色谱柱它包括空柱和填料。空柱是内壁抛光的不锈钢管,内径为4~5mm,长100~250mm。按[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相色谱[/url]法中洗涤空柱的方法洗净,用匀浆法填充固定相。将此柱装入仪器的管路中,用柱式机械往复泵输入新鲜脱气的流动相。等基线平直后可用苯、萘、菲的混合试液,用正己烷(含0.05%甲醇)或甲醇:水(83:17)为流动相测定柱效及分离度塔板数在2~3万/ml以上及分离度在1.5以上者,柱效好。为防止柱污染,常用1个50mm长,4~5mm内径,装有硅胶(40-50mm)或立柱相同填料的保护柱(预柱)接在主柱之前,以延长色谱柱的寿命。反相键合相柱用毕。必须用水充分流经,以洗去盐类、酸碱等杂质防止柱生锈及填料中杂质的积聚,再用甲醇流经洗涤使色谱柱获得再生。 2.流动相的洗脱方式配好经脱气的流动相放于贮液瓶中,经过有滤过头、内径2mm的聚四氟乙烯管流入高压泵进入色谱柱,最后自检测器流出或收集或作废液回收。用流动相洗脱的方式有恒溶剂脱洗法(isocratic dlution),即自洗脱开始到结束,溶剂的配比恒定。另一类为梯度洗脱法(gradicnt clution),即使溶剂的极性强度在色谱过程中逐渐增加。须按一定程序不断改变流动相的浓度配比,从而使同一个试样中组分性质相差较小的及较大的都能在一次色谱过程中很好分离,而整个色谱过程缩短。必须注意,梯度洗脱法不能用于分子排阻色谱及用电化学检测的反相高效液相色谱法中。 3.检测器适用于血药浓度的检测器有紫外线吸收,荧光发射和电化学三种。紫外检测器应用于对紫外光有吸收的药物,大多数药物分子对紫外光有吸收,故能较普遍采用,检测限有0.1μg左右。紫外检测器有固定波长型、可变波长型及扫描器,既能使流动相停流作组分的定性定量检测,又能提高测定灵敏度,重现性较好。荧光发射检测器对能产生荧光的药物才能使用。80年代应用激光替代氙灯光源,光强度增加了3~4倍,对某些药物的检测限可达pg级。电化学检测器是由一个碳糊或破碳做成的蒲层电解池。常用于检测儿茶酚胺类及有酚类基团的各种药物和代谢物。流出组分进入2μl的薄层电解池,在一暄电压下电解产生电流,放大后检测,检测限pg级。 4.数据处理现代高效液相色谱仪带有数据处理系统,除记录谱外,还能自动记录峰的保留时间,能自动积分求算峰面积,并能按照预定的程序作有关计算,报告分析结果。高效液相色谱仪使用过程中常见问题及其解决方法 1 液相色谱仪系统 液相色谱仪主要由贮液瓶、泵、进样器、柱、柱温箱、检测器、数据处理系统组成(如图1所示)。对于整个系统而言,柱子、泵和检测器是核心部件,同时也是容易出事故的主要场所。 2 常见问题及解决方法2.1 针对柱压问题(表1)柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要密切注意的地方,柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分离效果及保留时间等密切相关。所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值,而是指压力波动范围在50PSI之间。压力过高、过低及波动较大都属于柱压问题,但柱压的高低与色谱柱的种类、品牌、液相系统本身及使用的流动相种类相联系。值得注意的是在使用梯度洗脱时,进柱压的平稳缓慢的变化是允许的。 在实际应用中柱压过高可从以下几个方面来考虑[1]。首先考虑柱子是否被堵,此时可更换一根新柱子进行检测。2.2 针对保留时间漂移的问题 [2,3] (表2) 保留时间的改变是很多液相色谱使用者常碰到的问题,其包括了保留时间增大和减小。它的产生与很多原因有关。2.3 针对异常色谱峰问题[2-4] 异常的色谱峰指的是色谱图中无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。具体情况与原因分析如表3。3 高效液相色谱仪的保养[5-7]3.1 HPLC的日常操作条件 工作温度10~30℃; 相对湿度80%; 最好是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备。 3.2 泵的保养 使用流动相尽量要清洁;进液处的沙芯过滤头要经常清洗;流动相交换时要防止沉淀;避免泵内堵塞或有气泡。3.3 进样器的保养 每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染。3.4 柱的保养 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;当柱子和色谱仪连接时,阀件或管路一定要清洗干净;要注意流动相的脱气;避免使用高粘度的溶剂作为流动相;进样样品要提纯;严格控制进样量;每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭。3.5 检测器(UV)的保养 紫外灯的保养要在分析前、柱平衡得差不多时,打开检测器;在分析完成后,马上关闭检测器。同时样品池要保养。4 结语 在高效液相色谱使用过程中故障排出时要遵守以下原则:一次只改变一个因素,从而确定假定因素与问题之间的联系;如果通过更换组件来排查故障时要注意将拆下的完好组件装回原位,从而避免浪费;养成良好的记录习惯,一个良好的记录是成功地进行故障排除的关键。 总之,在使用高效液相色谱时一定要注意样品的前处理与仪器的正确操作和保养,仪器系统的干净是用好仪器和维护维修仪器的关键。
[em0808] 我知道论坛上有位大虾有"高效液相色谱仪应用领域以及有关分析实例",这是一个总结性的资料吧,但是我忘记是谁有了,麻烦帮我找找,因为他给我同事一份[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/Mp]气相[/url]相色谱仪应用领域以及有关分析实例,我想也应该有液相的吧,拜托了.
本人想分析氨基酸和糖, 想采购一台国产的液相色谱仪,对国产的高效液相色谱仪不是很了解,所以求助大家帮个忙,帮参考,谢谢!
[em52] [em52] 我想买一台半制备型高效液相色谱仪,但不知道如何确定仪器的质量,请各位高手帮帮忙吧,我应该注意哪些问题?非常感谢!!急!!!
[img]http://www.instrument.com.cn/bbs/images/affix.gif[/img][url=http://www.instrument.com.cn/bbs/download.asp?ID=33164]高效液相色谱仪常规分析操作步骤及规程[/url]
高效液相色谱仪的正确使用与维护姜维林 李蕾 姜胤 摘要 在使用高效液相色谱仪的过程中,难免会碰到各种各样的问题,本文从进样阀、色谱柱以及流动相等几个方面介绍了色谱仪的正确使用、常见故障的成因及排除方法。 关键词 高效液相色谱仪 故障排除 正确使用 高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一,其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中,难免会出现各种各样的问题,并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因,即可清楚预防和排除这些故障的方法,就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。因此,从以下几个方面说明在使用高效液相色谱仪中需注意的几个问题。1. 使用试管的问题 (1) 试管的洁净问题。高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法,如果因使用不洁净的试管,便会影响试验结果的准确性。例如,在用甲醇作溶剂来溶解样品时,所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的,因此,在每次进样时,都有一个保留时间固定的干扰峰存在,后经证实,此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生,换用玻璃试管后,干扰峰消除。 (2) 塑料试管的溶解问题。近年来,一次性塑料试管给试验人员带来了极大的方便,但是,在使用过程中一定要注意有机溶剂对试管的溶解现象,在利用此种试管提取样品时,有些有机溶剂(如氯仿等)对管壁有溶解现象,这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号,从而干扰样品的测定。这时,可用相同的实验条件先行试验一下,看看不含被抽提物时,提取液在检测器上能否产生干扰信号,如确有干扰信号存在,就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。 (3) 被测样品在试管壁上的吸附问题。这个问题也应引起注意,否则也会影响测试结果的准确性,在治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TDM)中,有些被测药物如阿米替林,丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上,因此,操作中宜采用聚丙烯管,为防止提取中吸附现象的发生,可采用0.5%的已二胺已烷液做为提取剂,可有效地防止吸附。2. 操作进样阀的问题 目前,在分析型高效液相色谱仪中常用的进样阀是7125型进样阀,其内部的六通阀结构使进样操作非常方便,但是,如果使用不当,也会带来问题。例如,在高效液相色谱法的试验过程中,有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题,这主要是由于操作方法不当所引起,要想解决此类问题,需从以下几个方面入手。 (1) 进样量的控制。用进样阀来进样时,阀内的样品环是定量的,(一般分析型进样阀的样品环体积为20ul),由于进样时,注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度(即管轴处比管壁处的液流速度快)。因此,要想使样品环中充满样品溶液,从而使用进样阀来准确地定量,则必须使进样量大于样品环体积的2倍。如果用注射器来控制进样量,则最大只能注射样品环体积1/2的量,这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。 (2) 进样阀的清洁问题。如果样品环中有上次进样时样品的残留,必然会污染下次注射进的样品,为防止这种现象的发生,应按下列步骤操作:a.进样阀有2个位置,INJECT和LOAD。首先在LOAD位置时,以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次,每次用量大约40ul;b.然后将进样阀板手扳至INJECT位置时,再以流动相清洗几次,每次用量还是40ul;c.最后,再将样品注射到进样阀里。 按照上述的步骤操作,可以避免由进样阀引起的污染,从而使干扰峰消除并提高分析结果的准确性。 (3) 进样阀溢流管的堵塞。有时,进样阀的溢流管会发生堵塞现象,向进样阀内注射样品时,注射针推不动。此故障是由于溢流管的堵塞所致。堵塞的原因多半是由于溶解样品的流动相用的是盐溶液,而其中的盐在溢流管的排空端口处结晶所致。此时,可用小烧杯盛少量蒸馏水对溢流管口稍加浸泡,端口处盐的结晶就能被溶解掉,故障排除。如能在每次进样完成之后,用蒸馏水反复冲洗至溢流管中的盐分全部冲出,则可避免此故障的发生。
惠普-1100型高效液相色谱仪视频:http://v2.56.com/id390225.html
[color=#444444]今天用高效液相色谱仪分析一个产品,突然压力下降,无法排气,怎么整。哪位大神,指导一下啊啊啊[/color]
高效液相色谱仪新手一枚,快要放假了,如何保存高效液相色谱仪,色谱柱如何保存?求大神指点,谢谢!!
用高效液相色谱仪可以分析什么?高效液谱仪可不可以分析混合物有哪些组成
近些年来,随着科技的飞速发展,液相色谱技术应用也逐渐步入快车道,沃特世、岛津、安捷伦、戴安等分析仪器知名公司都相继研发成功并将最新的的超高效液相色谱仪推向市场,业界内外纷纷一味追求高精尖,追逐快速高效,殊不知液相色谱类仪器并非一味追求快速,而是好比谈恋爱,要看是不是适合自己的工作要求,这其中难免就会涉及到分析项目、分析精度以及工作成本等等一系列因素,本文就自己心得以及所学在此做与大家一起来探讨交流: 首先,众所周知,高效液相色谱是以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有异极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入不同类型的检测器进行检测,从而实现对样品的定性定量分析。而超高效液相色谱与高效液相色谱原理基本相同,不同之处就是:1、色谱柱发生了变化 小颗粒高性能微粒固定相出现,2、流动相超高压输液泵出现 3、采集速度更快的检测器出现 ,主要因素就是基于这三点。但是,超高效液相色谱仪并非针对每一种分析样品,每一种分析化合物都如此高效快速,必须因样而选,否则的话,就会适得其反,事倍功半,前功尽弃。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201023_561650_2328678_3.jpg 笔者单位去年采购一台 Waters ACQUITY UPLC H-CLASS,在国内环境监测业界还算是高大尚的液相色谱仪器,根据介绍可以实现:无需更改现有工作流程即可获得UPLC性能灵活和简便的四元溶剂混合和直接注射取样 完美兼容HPLC方法,无缝转换至UPLC方法 方法转换包可保证分离方法的一致性,流速范围0.010 ~ 2.000 mL/min,以0.001 mL增速步进,最高操作压力:15,000 psi最高到1 uL/min,9,000 psi最高到2 mL/min,据于此类性能,加之单位以前有一台服役多年面临脱保的安捷伦LC-1100,可以接班服役,同时提高工作效率,不必再劳神费心,一个样品等待大把时间,因此,趁着还在维保范围内,迅速入手,希望短时间之内形成"作战“能力,投入实战。 恰逢迪马科技在论坛搞一个色谱柱试用活动,遂参加尝试用液相色谱法分析水中苯系物,以做直观比较:色谱柱型号:迪马 DiamonsilPlus (固定相),250mm(柱长)4.6 mmx5 μm色谱柱型号:Agilent Eclipse PAH固定相),250mm(柱长) 4.6 mm x 5 μm WATERS XBridge C18 250mm(柱长)4.6 mmx 5 μm 以及 UHPLC WATERS 50mm(柱长)2.1mm x 1.7 μm,其中HPLC分析条件如下: 流动相: 甲醇 :水= 65: 35 (如有梯度请注明梯度表)流速: 1.0 mL/min柱温: 40 ℃检测器:UV 260 nm 或其他检测器 进样量: 10 μL分析结果如下:Diamonsil Plus谱图http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201112_561654_2328678_3.jpgAgilent Eclipse PAHhttp://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201113_561655_2328678_3.jpgWATERSXBridge C18http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2015/08/201508201114_561656_2328678_3.jpg上述结果分析:分析比较:Diamonsil Plus与Agilent EclipsePAH WATERS XBridge C18所分析谱图比较:前者为甲醇中的六中苯系物谱图,后者为二硫化碳中的苯系物,其他条件相同,前者流速为1mL/min进样量为20ul,后者流速为0.5mL/min进样量为5ul,通过比较可以基本得出如下结论:Diamonsil Plus 可以承受大进样量的化合物分析,柱效表现良好,在20/5的情况下,峰形保持较好;Agile
拿到高效液相色谱仪不懂操作.有谁可以告诉我高效液相色谱仪的操作步骤么?
高效液相色谱仪对实验室的要求1、环境:干燥、清洁、防潮、防尘,建议配置空调;2、电源:电压稳定,配有地线,至少5个插孔以上的多功能插座需2个,建议配置UPS电源(1000W以上);3、实验台:按一般实验室要求;4、试剂:甲醇、乙腈等为色谱纯或HPLC级,其他试剂为分析纯,水为蒸馏水或双蒸水,最好为超纯水;5、人员:掌握基本化学分析知识,熟悉电脑操作;6、药品:至少拥有一个2000版药典要求的用高效液相色谱仪测定的供试品或对照品,并能按照药典要求配置出相应的溶液及流动相。
目的:规范BECKMAN 125型高效液相色谱仪的使用操作,保证高效液相测量结果的准确性。1. 适用范围本标准适用于BECKMAN 125型高效液相色谱仪的使用操作。2. 目的与意义规范BECKMAN 125型高效液相色谱仪的使用操作,保证高效液相测量结果的准确性。3. 责任质量分析人员全面负责本SOP的实施。4. 仪器的组成本系统由SYSTEM GOLD 125溶剂输送泵、SYSTEM GOLD 166检测器(190~360 nm)、Rheodyne 7725i手动进样阀、HT-330 柱温箱、BECKMAN色谱工作站、打印机等组成。5. 操作步骤5.1. 准备5.1.1准备所需的流动相,用合适的0.45μm滤膜过滤,超声脱气20min。5.1.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱(注意方向)。5.1.3配制样品和标准溶液,用合适的0.20μm滤膜过滤。5.2. 开机接通电源,依次开启泵、检测器开关,打开计算机进入win2000操作系统,双击桌面的32 Karat图标进入主菜单对话框,双击Instrument图标进入色谱分析界面(包括Direct Control、Det166、Instrument Setup等界面)。5.3. 创建分析方法可在Direct Control界面直接点击各设备单元的图像进行流动相比例、流速、最大压力限、最小压力限、检测波长以及检测器开启与关闭等参数的设定,亦可点击 “Methed/Instrument Setup” 进行相应的设定,然后点击 “File/Methed/Save As”保存设定的方法。
高效液相色谱仪 滤芯如何清洗
高效液相色谱仪 注射器旁边的洗瓶里装的是什么溶液 是干什么的 多久更换一次
高效液相色谱仪检测器的成交价有哪位大侠知道下列高效液相色谱仪的成交价格吗?Waters 高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)岛津高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)Agilent 高效液相色谱仪(二极管阵列检测器)
[align=center][b]高效液相色谱仪故障分析-泵无法正常抽吸流动相[/b][/align]高效液相色谱系统硬件一般很稳定,一套安捷伦系统甚至在合理使用的情况下,使用10年依旧可以保证保留时间的稳定。而新手在使用高效液相色谱系统时,对部件不了解导致各个部件容易出现故障。其中液相色谱系统中,色谱泵无法正常抽吸流动相是困扰各位老师的常见故障之一。本文为大家介绍解决办法及措施,遇到类似问题再也不用麻烦工程师啦![img=,690,920]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907241648112426_1300_3922638_3.jpg!w690x920.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907241648319487_9751_3922638_3.jpg!w690x517.jpg[/img]泵无法正常抽吸流动相,典型的表现为流动相试剂瓶中有小段空气,设置泵流速后,空气在管路中徘徊,无法抽吸流动相,这时大家应卸下管路与泵头连接的旋钮,将流动相管路中气泡排出。检查试剂瓶中没有出现负压现象的前提下,观察试剂瓶中的流动相是不是乙腈。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907241648485262_7281_3922638_3.jpg!w690x517.jpg[/img] 乙腈经常放置于棕色试剂瓶,其原因是在光照下乙腈分子直接容易产生黏连,而泵无法正常抽吸流动相,正是乙腈黏连将色谱泵堵塞,导致色谱泵无法正常抽吸流动相。此时不需要将泵头拆除,只需要将泵头前的单向阀拆下,超声10分钟即可。下图是色谱泵各部件的示意图。[img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907241649140208_3906_3922638_3.jpg!w690x517.jpg[/img][img=,690,517]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2019/07/201907241649223426_5553_3922638_3.jpg!w690x517.jpg[/img]
引言 高效液相色谱(HPLC)是色谱法的一个重要分支,它以液体为流动相,采用高压泵将流动相(不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等)泵入装有固定相的色谱柱中,被分析样品在流动相与固定相之间通过不同的作用力以及作用力大小的细微差别,实现样品移动速度的细微差别,最终完成被分析样品的快速分离,该方法已成为化学、医药、食品、工业、农业、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术,具有非常广泛的应用。 高效液相色谱法是通过高效液相色谱仪来完成的,仪器的性能对实验结果有着重要的影响,保持仪器的稳定是保证每次实验结果具有重复性的保证。但是由于高效液相色谱仪设计复杂,在使用过程中难免会出现一些问题,影响实验。本文针对高效液相色谱仪日常中可能出现的一些故障做了分析与总结,并给出相应的参考意见与合适的解决方案。1 易故障部件工作原理 高效液相色谱仪主要由溶剂系统、泵、进样器、色谱柱、检测器与数据处理系统组成(如下图1.1),仪器通过往复泵将溶剂(流动相)泵入整个仪器的管路,经过进样器时将被分析样品带入流动相中,然后快速进入色谱柱,经过色谱柱的分离后,各组分先后到达检测器,检测器采集的数据经计算机处理后得到我们最终看到的色谱图。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608301002_607357_2984502_3.png 为了降低样品的扩散,提高柱效,一般仪器厂商都会将整个仪器的管路设计得比较细,但是太细的管过又容易出现堵塞,因此保证整个溶剂系统干净,没有固体杂质至关重要的,为此仪器生产商为仪器设计了几个过滤装置来保证溶剂中没有固体杂质进入仪器的核心。如下图1.2所示,其中的吸滤头与在线过滤器均是为了过滤固体杂质。 与此同时,为了保证流动相能够连续稳定、不间断的泵入系统,仪器生产商将每个泵都设计成由两个往复泵组成,一个泵抽溶剂时另一个泵刚好将溶剂均匀推入系统,但是整个过程要保证泵的密封性,不能让溶剂渗出,因此延展性与机械性都很好的柱塞密封圈至关重要。往复泵的工作原理与注射器很像,它先从一个方向将溶剂抽到泵腔里,柱塞杆再将溶剂从另一个出口推出去,但是这两个出口必须装上单向阀(只允许液体按一个方向流动),防止溶剂回流。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608301002_607360_2984502_3.png2 吸滤头吸滤头作为整个液相流路的第一道关卡,它能将流动相中的杂质很好的阻挡在外面,防止堵塞管路。材料:不锈钢或玻璃(如下图2.1)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608301003_607362_2984502_3.png故障:堵塞。表现:堵塞的吸滤头导致溶剂无法正常输入系统,管路内出现大量气泡,造成系统压力波动。处理方法:将吸滤头拔下来,玻璃材质的用30%HNO3水溶液浸泡过夜,再用纯水与甲醇反复清洗,金属滤头则可以直接超声清洗。3 在线过滤器在线过滤器是接在泵与进样器之间的一个过滤装置,主要作用是过滤泵中柱塞杆与密封圈反复摩擦产生的固体碎屑。材料:不锈钢或聚四氟乙烯(如下图3.1)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608301003_607364_2984502_3.png故障:堵塞。现象:系统压力波动大或压力偏高。处理方法:超声波清洗或更换滤芯,不锈钢材质的可以用30%H3PO4水溶液超声清洗20分钟,纯水反复超声清洗至清洗后的水pH值呈中性,然后用甲醇超声清洗10分钟,聚四氟乙烯材质的建议直接更换。4 单向阀单向阀是一种溶剂只能沿进口流动,出口溶剂却无法回流的装置,它保证了流动相可以只沿一个方向均匀稳定的流动。材料:机械宝石球或电磁阀(如下图4.1)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608301004_607365_2984502_3.png故障:宝石球或塑料垫片受污导致密封不好或者电磁体内起密封作用的透明膜片会老化,产生微小的裂缝,泵工作时流动相在压力作用下渗漏到电磁阀体内。表现:系统压力有规律的波动,且波动范围大。处理方法:宝石球单向阀先放在超纯水中超声10分钟,再放在甲醇中超声10分钟或更换;电磁单向阀更换透明膜片或更换整个电磁阀体。5 柱塞密封圈材质:聚四氟乙烯(如下图5.1)。http://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2016/08/201608301004_607367_2984502_3.png故障:磨损,密封性变差,流动相渗入泵腔引起泵的故障。表现:在线过滤器容易堵塞,更换周期变短。处理方法:更换密封圈总结液相色谱日常容易出现的故障主要就是压力高、压力低或压力波动,遇到问题时千万不要慌张,首先确认故障的真实性,即问题至少发生两次以上,如果问题不重复,很难证实其确实为问题。发现问题时先从简单的因素入手,采用排除法,一次只变化一个因素,保持其他因素不变,确认所变因素与问题之间的关联,再采取相应的措施解决问题。平时养成记录的好习惯,一个完整的好记录是成功地进行故障排除的关键。
请问为啥用甲醇清洗高效液相色谱仪?谢谢哦
[color=#444444]一台高效液相色谱仪的进样环为20微升,做定量分析,一次进样注射了26微升,另一次注射了18微升。请问这两次进样对分析结果分别有何影响,解释的详细点谢谢啊[/color]
利用高效液相色谱仪分析类胡萝卜素,应该使用什么样的流动相能有很好的分离度?我用的是YMC C30的柱子。谢谢各位。
我们想用高效液相色谱仪分析饲料中的氨基酸(呵呵,我们也只有一台waters的e2695型液相色谱仪,没有氨基酸分析仪),请问大家都用什么方法啊,我们买了郑州牧专的氨基酸分析包,可是作出来结果老是不准,就是结果偏低。另外之前负责氨基酸分析的女孩突然辞职了,可我只见过她前处理的大致步骤,不知道里面有啥关键点要必须掌握,所以我想问问大家你们有用氨基酸分析包的没啊,请指教一下吧,谢谢了
高效液相色谱仪怎么快速排气炮?
高效液相色谱仪转移方案怎么写