细胞培养气体控制器

生物反应器的应用生物反应器在生物技术，工艺开发和研究中发挥着至关重要的作用，其主要应用包括：1. 细胞株开发：台式生物反应器可用于评估各个细胞株的性能，包括生长和表达效率，这有助于确定最适合进行进一步工艺开发和放大的候选细胞株。2. 工艺开发：台式生物反应器广泛应用于工艺开发的早期阶段，包括了参数优化和工艺放大两方面，首先在较小规模上优化温度，pH，DO等工艺控制参数，然后再进行工艺放大研究，降低放大至较大体积的生物反应器中可能存在的成本和风险。更复杂的工艺开发包括了增强型工艺，例如灌流培养和连续培养。3. 培养基优化：台式生物反应器可以用于优化培养基和补料策略，以改善细胞生长、活力和蛋白质表达，有助于实现高效，稳定且成本可控的大规模细胞培养。4. 工艺表征：台式生物反应器可进行工艺缩小研究，在较小规模上模拟较大生物反应器的条件，有助于了解和解决工艺放大过程中可能出现的限制性因素，如氧气传质、混合效率、CO2分压和剪切力。5. 质量源于设计（QbD）：可以在台式生物反应器规模实施QbD开发原则，系统地研究和优化关键工艺参数，以确保产品质量的一致性。6. 临床样品制备：符合GMP要求的台式生物反应器系统，可用于临床前研究或早期临床试验中的小规模生产，以快速、经济地生产小批量的治疗性产品。Reference:cell culture bioprocess engineering, second edition细胞生长所处的生理压力生物制药中，CHO细胞作为常用的重组蛋白的表达体系，优化其生长和产物表达效率至关重要，然而生物反应器中CHO细胞却面临着多方面的生理压力，包括培养条件、营养供应和环境参数有关的各种因素，因此需要反应器提供良好的工艺参数控制，以维持合适的细胞生长微环境。 营养限制：CHO细胞的能量和生物合成严重依赖葡萄糖，葡萄糖浓度过低会导致细胞新陈代谢压力和活力降低；氨基酸是蛋白质合成所必需的，特定氨基酸含量不足会影响细胞生长和蛋白表达；细胞培养基中的生长因子、维生素和微量元素的不足也会影响 CHO 细胞的生理机能。 温度：温度波动会影响细胞的新陈代谢，对于细胞生长和蛋白表达通常所需最适温度不同，需要制定针对性控制策略。 pH值波动：pH 值的变化会导致培养基的酸化，影响分子的电离状态，并影响细胞的新陈代谢，维持pH值在最佳范围内对细胞活力和表达至关重要。 溶解氧浓度：溶解氧浓度过低会导致供氧不足，造成细胞应激，影响细胞生长和蛋白质表达。 二氧化碳分压：二氧化碳分压影响了pH控制，细胞代谢和生理功能，需要加以及时的检测和有效的控制策略。 渗透压：代谢物积累或营养浓度过高导致的高渗透压会对细胞造成压力，这会影响细胞体积大小调节和整体细胞功能。 剪切力：生物反应器中的搅拌和通气产生的能量耗散会对细胞造成剪切应力，过大的剪切应力会损伤细胞结构并影响其生产率。 代谢副产物：细胞新陈代谢产生的有毒副产物（如乳酸、氨）的积累会对细胞活力和蛋白表达产生不利影响。 细胞密度：高细胞密度和细胞聚集会导致营养和氧气的限制，造成压力，有效的混合和充分的氧气供应对防止这些问题至关重要。理解细胞所处的生理压力环境对于工艺条件优化，增强细胞活率，获得高表达产物和目标质量属性非常关键。工艺过程参数的控制在了解了细胞所处的生理压力之后，遵循质量源于设计（QbD）的指导原则，通过风险评估的方式确定关键工艺过程参数（CPP）, 重要工艺过程参数（KPP）及非重要过程控制参数（Non-KPP），制定参数各自的设定空间（DS），并在操作范围内进行控制，这整体上需要工艺过程分析技术（PAT）及生物反应器所配置过程控制策略，以提供一致的工艺性能和产品质量（CQA）。图片来源于网络生物反应器常用控制策略 开环控制：开环控制系统应用一组预定义的控制输入或设定点，而不连续测量实际输出，系统假定输入将实现所需的输出，而无需实时反馈。该控制策略的准确度依赖于高精度及快速响应的硬件配置。 闭环（反馈）控制：闭环控制使用传感器持续监测系统输出，将其与所需设定点进行比较，并实时调整控制输入以保持所需的条件。这种方法能更好地适应过程中的变化和干扰。该控制策略的准确度依赖于控制器模式，参数的预设和调节。 前馈控制：前馈控制可预测系统中的干扰，并在干扰影响输出之前调整控制输入。它是对反馈控制策略的补充。生物反应器控制器策略的应用 PID控制：PID 控制是一种闭环控制策略的实现形式，通过比较设定值和实际值（误差），使用比例、积分和微分项来计算控制输出。比例部分使用增益（Gain）乘以误差进行输出；积分部分累积 CV（控制输出）随时间变化的程度，以纠正误差；微分部分分析参数过去的变化率，并将其推断到未来，其动作单位为秒（你想推断多远），可以让回路在发生突发事件时迅速做出反应，但很容易受到测量噪音的影响。 PID同时可以结合死区（DB, Dead Band）来使用，例如pH的PID控制，细胞对于pH有一个适应范围，设定合适的DB值，避免酸，碱的反复添加和渗透压的升高。 级联控制：级联控制涉及主控制器与子控制器，主控制器的输出作为子控制器的设定值，从而更好地抑制干扰；子控制器可以为一个或多个，通过顺序级联或同时级联，以满足不同复杂程度工艺的需求。例如DO控制中，主控制器为DO PID控制器，子控制器为Air，O2，搅拌等控制器。 Profile控制：为控制器的设定值设定随时间变化的程序，控制器接受该设定值进行开环或闭环控制。例如补料泵的控制中，根据预测的细胞密度增加情况调整补料速度供给率，从而实现对营养物质浓度的前瞻性控制。复杂工艺应用需求常见的细胞培养方式为补料分批工艺（Fed Batch），需要多级的种子扩增步骤，主反应器中也需生长至稳定期进行蛋白表达，因此所需设备成本高，占地空间大，生产效率较低且产品质量一致性存在差异。随着灌流培养基，细胞截留设备及PAT技术等方面的发展，增强型工艺（Process Intensification）在生物制药中逐渐得以应用。根据对细胞和蛋白的截留，增强型工艺分为Concentrate Fed Batch, Dynamic perfusion及Continuous Perfusion等不同形式。Reference：Perfusion Cell Culture Processes for Biopharmaceuticals灌流工艺的开发通常在台式反应器中进行，相比Fed Batch系统具有如下组成及特点： 反应器从结构设计到工艺验证上应能支持系统长时间无菌培养的要求。 反应器的通气及搅拌系统配置应当满足高细胞密度培养对于传质和混合的要求，并进行充分的表征，以评估放大过程中的限制性因素。 细胞截留装置：支持切向流或声学细胞截留装置的无菌连接，截留装置控制器可选择接受生物反应器控制，细胞在截留装置中所受的生理压力（剪切力，温度变化，溶解氧浓度等）应当加以控制。 PAT整合：系统应当支持额外的电极整合，实时监控细胞密度、活力、二氧化碳分压等关键参数。 外置设备的拓展：可拓展外置天平等设备。 自动化控制系统：系统应配置自动化灌流程序或配方，实现高精度自动化的灌流速率，反应器液位及细胞密度控制，减少灌流工艺长时间培养过程中复杂的人为操作所带来的风险。英赛斯NestoBR台式生物反应器NestoBR是一款基于生物工艺进行设计和研发的先进型台式生物反应器系统，应用于生物制药及生物技术等方向的工艺研究和开发，系统设计满足生物行业对于反应器的高性能及法规方面的要求，可降低用户实验的批次失败风险，提高工艺开发能力，加速生命科学的研究发现，实现稳健化的技术转移。NestoBR产品特点紧凑化的结构设计：集成式工业控制器，直观的用户界面与交互；减少设备空间需求，易于使用。严格的材料选择及处理：高硼硅玻璃，耐高温，耐腐蚀；316L不锈钢，表面抛光及钝化处理，，易清洗，易清洁；垫圈采用EPDM材质，符合cGMP要求。基于工艺理解的产品设计：从细胞生所处的生长微环境出发，进行功能设计，拓展工艺可操作空间，保障批次稳定。丰富的高性能硬件配置：灵活的硬件配置方案，满足不同细胞或工艺在培养体积、温度控制、搅拌控制、通气控制等工艺方面的差异化要求。高级自动化软件架构：ISA88批处理控制高级自动化软件架构，将物理硬件、操作程序和个性化工艺的紧密的结合，为控制系统提供安全性，稳定性保障。符合cGMP法规要求： 根据用户需求，提供从设计、测试、验证、文件等一系列技术服务；系统设计与验证遵循ISPE GAMP5。快速稳定的自动化参数控制：控制系统配置不同的控制策略，实现快速，稳定，灵活的工艺过程参数自动化控制完善的批次过程监控与管理：系统配置趋势图，批次报告，用户管理，审计追踪功能满足复杂工艺应用需求：NestoBR提供长时间运行的无菌保障，完善的设备表征数据，可集成PAT，外置设备与灌流装置，可新增控制回路实现自动化灌流工艺操作。全面的安全性保障：提供生物反应器在使用，批次，软件，数据，工艺等方面全方位的安全保障。

茂默科学以客户为本、合作共赢的理念，致力于帮忙客户提供整体实验方案。力求解决行业内客户对科学仪器选型难、维护难的处境。通过不断优化公司运作和提升服务质量，目前已赢得业内人士和广大客户广泛认可，拥有广泛而稳固的合作伙伴和客户群体。茂默科学现介绍细胞培养实验室设备配置及用途，想要了解更多仪器、实验室仪器选配、实验室整体打包方案制定，敬请咨询~1. 超净工作台实验室设备目前绝大部分细胞实验室使用超净工作台实现无菌操作，具有操作简单、安装方便、占用空间小且净化效果很好。安徽人和净化为您介绍两种主要超净工作台-侧流式（垂直式）和外流式（水平层流式）。工作原理一般是将室内空气经粗过滤器初滤，由离心风机压入静压箱，再经高效空气过滤器精滤，由此送出的洁净气流以一定的均匀的断面风速通过无菌区，从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。（1） 侧流式工作台：空气净化后的气流由左或右侧通过工作台面流向对侧，也有从上向下或从下向上流向对侧，形成气流屏障保持工作区无菌，工作台结构为封闭式；（2） 外流式工作台：净化后的空气面向操作者流动，因而外方气流不致混入操作，工作台结构为开放式，但进行有害物质实验操作对操作者不利。 超净工作台应需要定期请有关部门检查洁净度，符合要求的超净工作台其洁净度应达到100级，用尘埃粒子计数仪检测粒径≤5μm的尘埃粒子数量不应超过3.5个/L；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均1个，根据无菌状况必要时需要置换过滤器。 2. 显微镜倒置式显微镜是细胞培养实验室日常工作常规必备设备，主要用于日常了解细胞的生长情况并观察有无污染发生。如资金允许，建议选用配置有照相系统的高品质相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，可随时拍摄并记录细胞生长情况。3. 培养箱体外培养的细胞和体内细胞一样，需要在恒定的温度下生存，一般适生长温度为37℃，温差变化不应超过±0.5℃。温度升高2℃时，变不利于细胞生存，温度达到40℃以上细胞将很快死亡。因此，可精确控温的恒温培养箱、CO2培养箱是、佳选择。（1） 恒温培养箱：应选隔水式或晶体管式自控温培养箱，此类培养箱灵敏度高，温度控制较稳定。一般的恒温培养箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培养。（2） CO2培养箱：目前多数的细胞培养室已广泛使用。CO2培养箱的优点是能够提供进行细胞培养时所需要的一定量的CO2（常用浓度为5％），易于稳定培养液pH，适用于开放或半开放培养。使用培养瓶时，为使培养瓶内与外界保持通气状态，可将瓶盖略微旋松，为避免细胞被污染，使用这种培养方式时，培养箱内空气必须保持清洁，需定期用紫外线照射或酒精消毒，同时培养箱内应放置盛有无菌蒸馏水的水槽，防止培养液蒸发，保持箱内相对湿度。（3） 细胞培养耗材：培养细胞的器皿可用培养皿、培养板或培养瓶。4. 烘箱（干燥箱）用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，烘箱内温度一般要达到160℃以上，通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门，以免骤冷导致玻璃器皿破裂，应等温度自然下降至100℃以下后可开门。5. 水纯化装置细胞培养对水的质量要求较高，细胞培养、细胞培养相关液体的配制用水以及清洗细胞培养器皿用水都必须事先经过严格的纯化处理。目前有多种纯化方法相结合，可使普通水纯化为纯水和超纯水的纯水装置使用非常灵活方便，可挂壁式、台式、可配储水箱、也可直接用分液枪、还可根据各类实验用水要求选择配置杀菌功能，有效去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，更有可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水装置。6. 冰箱细胞培养实验室必备设备，应专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。一般包括普通冰箱、低温冰箱和超低温冰箱。普通冰箱：储存培养液、生理盐水、Hanks液试剂等培养用的物品，可短期保存组织样本。-20℃低温冰箱、超低温冰箱：用于储存需要冷冻以保持生物活性以及需长时期存放的制剂，如酶、血清等。7. 细胞冷冻储存器储存器常用的液氮容器，根据使用需要分为不同类型和规格。选择液氮容器时需要考虑三个因素：容积大小、取放使用方便、液氮挥发量。液氮容器的大小一般在25-500L，可以储存1ml的冻存管250-15000个左右。液氮温度、低温度可达-196℃，使用时应注意避免冻伤。由于液氮易挥发，需注意观察剩余液氮量，及时补充，避免液氮不足使细胞受损或死亡。目前有许多智能型细胞冷冻储存器可供选择，可配置有电子控制器的液氮储存器，实现冻存自动化；并可监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；可配置报警系统，设置液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况下报警；同时具备热气体旁路系统，防止高于-130℃的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止容器内升温。另外，可选择液氮供应罐通过连接管给储存罐补充液氮，保证样品安全。8. 离心机细胞培养时，通常使用离心机制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤和收集细胞。一般常规配置4000rpm台式离心机；若要做细胞沉降，需要使用80-100G离心力，因为离心力过大会损伤细胞。根据不同要求，有大容量、可调温度离心机、高速离心机和低温冷冻离心机等更多功能离心机可选择。9. 天平常用的有精密天平和分析天平。 分析天平的精确度一般为0.1mg、0.01mg和0.001mg。一般根据取样量量和精度要求选择合适的天平：取样量大于100mg宜选用精确度0.1mg的天平；取样量100-10mg，选用精确度0.01mg的天平；取样量10mg宜选用精确度0.001mg的天平。天平需要定期校准，可选择有自动校准功能的天平，方便维护。天平使用需要注意清洁，避免腐蚀性粉末、液体直接接触称量台。

哺乳动物细胞培养过程哺乳动物细胞在培养过程中会经过组织提取，原代培养，传代培养等过程。传代培养会根据具体情况分为细胞株培养和细胞系培养。如下对各个过程进行简述：原代培养：从动物机体取出组织后切碎，经过各种酶（常用胰蛋白酶），螯合剂（常用EDTA）结合机械方法（吸液管反复吸吹）处理，分散成单细胞，置于合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。一般把从动物有机体内取出细胞开始培养，到繁殖十代以内的细胞培养称为原代细胞培养。经过原代细胞培养，细胞分裂繁殖，培养物逐渐增多长满培养空间，继而相互之间接触，发生接触抑制现象，生长速度逐渐减慢甚至停止。需要重新接种到新的培养瓶内进行传（继）代培养。传（继）代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传（继）代培养。细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系。如果细胞系的生存期有限，则称为有限细胞系。已获得无限繁殖能力，能持续生存的细胞系称为连续细胞系或无限细胞系。细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系，用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增值形成的细胞群，称为细胞株。再由原细胞株进一步分离培养出与原珠形状不同的细胞群，成为亚株。哺乳动物细胞培养条件不同哺乳动物细胞在各个阶段的培养，都需要有基础的培养条件，归纳如下：1、无菌无毒的环境：对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。2、营养：液体合成培养基包含糖、氨基酸、促生长因子、水、无机盐、微量元素等；通常还需加入血浆、血清等天然成分3、适宜的温度和pH：人和哺乳动物细胞最适宜温度大多为36±0.5℃。适宜的酸碱度为pH 7.2-7.4。4、气体环境：气体环境一般为“95% 空气+5% CO2”混合气体。氧气是细胞代谢必须气体，CO2维持培养液pH。德国WIGGENS CO2培养箱，为细胞生长提供最佳环境，为您的细胞培养保驾护航。

细胞培养也叫细胞克隆技术，在整个生物工程技术领域，细胞培养都是一个必不可少的过程。目前主要有两种基本的细胞培养体系，一种是细胞在人工基质上单层生长（贴壁培养），另一种是细胞在培养基中自由漂浮生长（悬浮培养）。贴壁培养和悬浮培养的细胞无论在细胞形态和培养条件上有诸多不同。第一来源和形态不同： 悬浮细胞的生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，细胞大体呈球形或椭球型（见下图）。这类细胞一般为淋巴细胞等血液系统来源的细胞。悬浮细胞 贴壁细胞生长必须有可以贴附的支持物表面，依靠自身分泌的或培养基中提供的黏附因子才能爱表面生长和繁殖。细胞在未贴附于底物之前一般似球体样，当与底物贴附后，细胞将逐渐延伸展形成一定的形态（见下图）。贴壁培养细胞主要包括正常细胞和肿瘤细胞，比如成纤维细胞，骨骼组织（骨及软骨），心肌与平滑肌、肝、肺、肾、乳腺皮肤神经胶质细胞，内分泌细胞，黑色素细胞及各种肿瘤细胞等。 上皮细胞型 成纤维细胞型 贴壁细胞与悬浮细胞在显微镜下的区别贴壁细胞分为两种，上皮细胞型和成纤维细胞型，在显微镜下观察时，贴壁细胞在瓶底伸展并延伸成梭型或不规则的三角形或扇形，而且晃动培养液时，细胞不动。悬浮细胞漂在培养液中，呈圆形，晃动培养液时细胞也随着漂动。 第二培养条件和方式不同： 贴壁细胞一般使用滚屏或T瓶进行培养。如果使用微载体，也可以用微载体培养瓶或生物反应器进行培养。 培养过程中的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。 滚瓶机 微载体培养瓶 T瓶 悬浮细胞培养，可以使用小型细胞工厂、飞旋瓶、生物反应器进行培养。 细胞工厂和飞旋瓶培养中需要的温度/湿度/CO2的环境条件控制，可由培养箱提供。生物反应器自带条件控制功能。 小型细胞工厂Celline 飞旋瓶生物反应器 WIGGNS培养箱在设计之初就考虑了培养箱内部兼容用电设备。在具有传统培养箱的所有功能之外，WIGGENS CO2培养箱系列，采用了高效的循环系统保证了温度、CO2、湿度的均匀性。内置电源插孔设计，箱体内可以直接使用磁力搅拌器，摇床等用电设备。箱体右侧中部开孔，带硅胶塞，方便培养过程监控及对设备进行验证。箱体底部的导轨设计，可用于大型滚平机的推进和推出操作。加固隔板设计，实现了一机多能，灵活使用的特点。WIGGENS 二氧化碳培养箱

生命科学实验室设备是指在生命科学研究与产业化过程中，通过分析、存储、加工等功能来支持和促进科技研发活动的设备及仪器。主要包含培养箱、生物安全柜、超低温冰箱等为实验室提供温湿度控制、洁净空间创建、样品存储等环境条件的设备以及离心机、制冰机等为实验室提供基础性功能的设备。在刚刚过不久的BCEIA2023展会上，一直致力于细胞培养解决方案的上海润度生物科技有限公司（以下简称：润度生物）发布了全新一代细胞振荡培养箱Herocell X1和采用磁力驱动方式的新品摇床Unishaker 70。借此机会，仪器信息网特别采访了润度生物销售总监周余涛，请他谈一谈两款重磅新品的创新之处以及当前实验室设备市场竞争格局和未来发展趋势。以下为视频采访：仪器信息网：请您介绍一下润度生物，主要产品和解决方案有哪些？周余涛：润度生物是一家致力于细胞培养解决方案的专业供应商，专注于动物和微生物细胞培养环境控制技术的开发。目前，润度生物拥有培养箱类、生物安全类和培养耗材类三大核心产品，其中培养箱类包括二氧化碳培养箱、恒温培养箱、恒温恒湿箱和恒温摇床振荡培养箱等，通过多年的孜孜不倦追求，我们的细胞培养箱体在温度波动性、温场均一性、气体浓度精确性、湿度的主动控制能力以及APP远程控制能力等不逊色甚至在某些领域领先于国际一流品牌的性能质量；其次是生物防护类的柜体设备，比如超净工作台和生物安全柜；最后是细胞实验过程中所用到一次性耗材，包括细胞培养板、T型瓶、培养皿、细胞摇瓶、离心管、移液管等，在原料配比、材料改性、表面处理、溶氧系数、无菌管理等均已达到行业领先水平。仪器信息网：请介绍一下公司在所处行业中的市场地位，以及近两年取得了哪些亮眼成绩表现？周余涛：润度生物创始于2016年，而真正意义上进行市场推广则是在2019年开始。虽然我们属于生命科学仪器以及实验室设备行业中的新秀，但在细胞培养的细分领域中，润度生物成长如雨后春笋，是业内成长速度最快的公司。比如目前润度生物是国内生物医药企业中国产细胞培养摇床占有率最高的品牌，除此之外，我们的产品也已远销包括欧洲、美国、日韩、东南亚、中东等十余个海外国家和地区。将视角拉大到全球，海外仪器巨头通过并购和研发等多重优势牢牢占据着科学仪器主要市场份额，比如来自瑞士两家品牌在国内生物医药领域中占有率相对较高。近年来，国家大力扶持科学仪器行业自主创新与国产化，国产科学仪器的制造和研发水平不断提升，尤其生命科学仪器在国产化上已经取得一些积极进展。未来几年，我们非常有信心颠覆长久以来进口品牌占据国内实验室设备市场的格局，有机会成为市场占有率最高的品牌。仪器信息网：此次BCEIA 2023，润度生物带来了两款重磅新品Herocell X1 和Unishaker 70，请您分别介绍下这两款新品有哪些升级或创新之处？周余涛：Herocell X1是由润度生物结合多家生物培养用户反馈的不同需求推出的全新一代细胞振荡培养箱，适合各类细胞培养，包括 CHO、杂交瘤、哺乳动物细胞等，是细胞培养在进入生物反应器培养前的理想培养装置。Herocell X1采用无皮带的直驱方式和独特轴承技术，运行顺滑稳定，不仅可承载较高重量，而且转速范围覆盖更广（可实现1-390rpm的转速控制范围）；具备12.5/25/50mm等多个振幅可供调节，满足不同细胞培养需求，便于用户在研发方面进行工艺摸索；内嵌式主动控湿模块，能够有效保证湿度控制精准并且稳定可靠，稳定性可达±2%r.h，处于世界一流水平；除此之外，我们还推出全球独一无二的120℃高温干热灭菌新功能（选配），大大简化了清洁工作，无需单独对组件进行高温高压消毒和重新组装。Herocell X1 二氧化碳振荡培养箱Unishaker 70耐二氧化碳摇床最大优势体现在采用了目前业内公认最先进的磁力驱动方式，无需传动皮带，搭配平稳的启动和制动技术有效减弱液体剪切力对细胞的伤害；同时，控制器部分则采用分离设计，实现箱外操控摇床，有效避免污染、箱体漏气等现象；Unishaker 70机身纤薄，高度仅为7cm，是我目前看到全球范围内最薄的摇床，同样具备12.5/25/50mm等多种振幅；此外，Unishaker 70使用场景丰富多样，既可以在二氧化碳培养箱内的高温、高湿及CO2酸性环境下正常工作，也可作为普通水平摇床使用。Unishaker 70 耐二氧化碳摇床仪器信息网：请您评价一下当前实验室设备市场竞争格局。您认为应该如何做好差异化竞争？贵司的核心优势是什么？周余涛：润度生物核心优势一方面在于“专业”，虽然我们是一个年轻品牌，缺乏厚重的发展历史，但自公司成立以来一直不惜代价在各个领域招贤纳士，吸纳了来自于德克萨斯大学和上海交通大学等包括机械工程师、电气工程师、软件工程师以及生物学博士在内的多领域技术专家。况且我本人和另一位创始人王奎均是生命科学专业出身，同时，目前公司还拥有两位生物学博士顾问。综合来看，我们核心团队具备极高的专业素养和浓厚的生物学背景，在产品设计、研发和生产等各个环节都可展示出我们的专业性和技术性。此外，润度生物拥有500平米细胞生物学实验室，这是目前国内培养箱设备行业中绝无仅有的。如果缺乏细胞培养验证试验，那么无法保证培养箱适用于生物学的科学性，从而难以满足严苛的细胞培养和实验室要求，有可能影响实验一致性和可重复性。为此，润度生物专门成立一个生物学相关团队负责测试，直击用户痛点，其中多名技术团队成员曾在国际知名设备制造企业及细胞生物学领域担任研发工作，具有非常成熟的行业经验。这也是生物医药领域用户短时间内成为了我们最大客户群体的关键原因。润度生物核心优势另一方面在于“用心”。我们团队非常年轻，但始终专注于细胞培养这个细分领域，产品研发实际上是从2014年开始，期间不断认真聆听用户需求，用心打磨产品细节才使我们迅速成长，在行业内扎稳脚跟。俗话说“十年磨一剑”，但我认为十年时间还远远不够，可能需要用二三十年才能实现国产替代甚至于超越进口的目标。就像“德国制造”一样，它并非一开始就是享誉全球质量和信誉的代名词。德国进入工业化时代之初也经历了“山寨阶段”，向英、法学习并模仿人家的技术和产品，而目前“中国制造”也与“德国制造”有异曲同工之处。在科学仪器行业，中国制造留给全世界的印象仍可能是低端仪器或者通用仪器生产的代名词，但随着中国制造能力不断加强、底层技术不断创新、供应链体系逐渐完善，“中国制造”这一名词将逐渐成为质量和创新领先的象征。仪器信息网：您对未来实验室设备及细胞培养行业的发展趋势有何看法？润度生物将做哪些相应的战略部署？周余涛：无论实验室通用设备还是其他科学仪器，我认为未来发展趋势将是自动化、模块化和智能化，最终实现究极形态“黑灯实验室”，诸如“黑灯工厂”的全自动无人化生产。当然，随之而来也会产生新的问题，当前中国CDMO、CRO行业最大红利是工程师红利，也就是中国的人力成本远低于欧美发达国家，一旦实现无人化生产一定会导致大量岗位被取缔，那么原本岗位上的职工该何去何从？需要企业、社会等关注和思考的。近年来，AI、大数据、物联网、5G 等新兴技术的快速发展已经对各行各业产生了颠覆性影响，同时也促进了不同领域的合作和创新。生命科学领域同样正在进行一场实验室自动化革命，“黑灯实验室”、“无人化实验”、“智慧实验室”一时间成为近两年行业热词。燎原之势已起，润度生物也早已置身其中，并且先后参与了部分无人实验室构建项目，通过开放培养箱和摇床等产品的端口以及重新设计自动开门或者自动抽拉摇摆等模式成功嵌入到无人实验室里面。当然，自动化的形式在不断升级、技术也在随时更新换代，当前技术未必是十年后普及的技术，但润度生物一定参与其中。

1983年，上海跃进医疗器械一厂与上海医疗器械研究所联合研制CO2细胞培养箱，获得当年国家经济委员会颁发的“优秀新产品”奖，经鉴定“其主要技术指标达到了八十年代初期国外同类产品先进水平”（注：刊于《生命的化学》1986年第01期）。近40年来，我们延续经典，一直水平在线。温度波动度±0.3℃今天介绍的这款医用型CO2细胞培养箱采用水套式结构，四面加热，保温性强，降低温度波动度（在环境温度25℃时为±0.3℃）。 温度均匀度±0.5℃内箱装有风机形成微气流循环，有助于提高箱内CO2浓度和温度的均匀性（在环境温度25℃时为±0.5℃）。箱门智能感应装置箱门打开时自动感应，立即关闭风机、CO2进气阀及停止加热，减少外界空气进入，以免造成箱内污染，也能减少电力及气体的损耗。 原装进口CO2传感器采用原装进口CO2传感器，不受温湿度变化的影响，不惧开关门频繁的使用场合。 加之三组温度探头分别控制箱温/水温/门温、微电脑智能PID温度控制器，控温精准，运行稳定。独立的外置温度保护装置，安全有保障。

在细胞培养过程中，能够给细胞提供一个适合的生长环境无疑是至关重要的。从细胞能量的供应葡萄糖，到细胞呼吸所需的氧气，以及代谢产生的乳酸盐，还有培养基中钾钙钠氯等各种离子，这些参数都会显著的影响细胞的生长。但现在每种参数差异很大，测试的原理又不尽相同，如何能够快速、准确而又便捷地测试这些参数就是当前面临的一个挑战。同时随着生化分析技术的不断发展，测试仪器和芯片也在不断往微流控、智能化发展。值此2017 Biocon盛会之际，全球生命科学领域的著名厂商，贝克曼库尔特公司特地邀请相关领域知名专家和大家分享最新技术成果及应用经验，内容精彩，不容错过！会议期间，贝克曼库尔特公司还将介绍最新Vi-CELL MetaFLEX细胞培养生化分析仪，并有仪器演示活动，让您现场体验贝克曼库尔特最新技术所带来的不同凡响的实验感受。同时，我们还将为每位参会者准备一份精美纪念品。诚邀您莅临贝克曼库尔特公司专场技术交流卫星会，让我们共同探讨细胞培养及抗体研发和生产的技术发展。会议时间：2017年3月24日（周五） 上午 10:40 – 11:55会议地点：上海龙之梦大酒店 四楼 晶柳厅会议地址：上海市长宁区延安西路1116号(近番禺路)会议日程： 10:40-11:00 自身免疫系统疾病抗体药物研发 张成海 博士上海麦济生物技术有限公司 CEO Therapeutic mAbs for Autoimmune Diseases Dr. Chenghai Zhang, CEO, Shanghai Mabgeek Biotech Co., Ltd. 11:00-11:20 整合细胞系构建和工艺开发实现快速IND申报 肖志华 博士上海奥浦迈生物科技有限公司 总经理 Integrated Cell Line and Process Development Enables Speed to IND Dr. Zhihua Xiao, GM, Shanghai OPM Biosciences Co., Ltd. 11:20-11:40 细胞培养之生化分析技术的最新进展及应用 李雪冰 博士贝克曼库尔特公司 高级产品应用专家 The Latest Progress and Application of Bio-analysis During Cell Culture Dr. Xuebing Li, Senior Product Specialist, Beckman Coulter China 11:40-11:55 Vi-CELL MetaFLEX 细胞培养生化分析仪现场演示和体验 Vi-CELL MetaFLEX Analyzer Demonstration大会期间，贝克曼库尔特公司还设有展台，为您带来贝克曼库尔特在生物类似药研发和生产的最新技术和解决方案，更有丰富多彩的仪器展示和现场活动，让您惊喜连连，敬待光临！贝克曼库尔特商贸（中国）有限公司 生命科学部总部地址：上海市长宁区福泉北路518号2座5楼产品咨询热线：400 821 8899售后服务热线：400 885 5355 / 800 820 5355Email：apls@beckman.com

现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的。正在倍受重视的基因治疗、细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了关键的核心作用。开发合适的培养基配方与优化细胞培养条件是保证产品质量、产量以及批次之间一致性的重要因素，尤其是抗体药物偶联物、双靶点/特异抗体类药物、抗体片段融合蛋白等相对分子量大、结构复杂的抗体类药物，对其重要性不言而喻。而对于生物类似药的研发与质量控制来说，尽可能通过优化工艺缩小差异，更有利于生物类似药与原研参比品的质量对比研究，提高生物类似药的质量研究结果与参比品之间的相似性，从而使各项质量属性达到预先设置的可接受范围。目前生物制品公司的生物过程工艺开发与优化偏重于监测常规的温度、搅拌、溶解气体、OD值等理化条件和少数培养基成分与代谢物等的变化，缺乏对于细胞培养上清液组分直接、全面且快速的客观动态数据分析，因此无法精准优化细胞培养工艺条件，甚至影响抗体类药物等的产品品质；而培养基生产商为了开发高效低成本培养基配方，并且要保证批次间一致性，则需要投入大量的人力物力，配备不同检测功能的仪器来实现培养基成分的全方位检测。 为满足快速全面分析细胞培养上清液组分和培养基组分，将基础碳源、氮源、核酸、维生素和其他主要代谢物同时检测分析的需求，我们开发出“细胞培养上清液方法包”。该技术平台采用超快速三重四极杆液质联用仪，仅需17分钟，即可同时监测95种细胞培养上清液营养成份和代谢物等的相对丰度变化 。无需用户自行开发方法，即装即用。所有目标化合物信息与实验方法全内置，且根据需要可增加，可拓展。为增进用户对“细胞培养上清液方法包”的深入了解和方便使用，岛津企业管理（中国）有限公司分析中心整理编写了本册《细胞培养上清液及培养基组分分析应用文集》。本册文集介绍了“细胞培养上清液方法包”在不同培养基组分分析以及细胞培养过程监控中的应用，共收录应用文章 10 篇，为相关领域的客户使用该系统提供参考。 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。

阿斯利康中国创新研究中心（ICC）的科学家们开发了一项新技术，利用Tecan 全自动液体处理工作站Freedom EVO进行细胞培养微孔板自动化温控制备，进而完成药物候选化合物筛选。该研究团队在BD Matrigel&trade 加样前使用琼脂预涂微孔板，从而顺利地在96孔微孔板上实现3D细胞培养分析。 中国创新研究中心（ICC）是阿斯利康在中国上海张江高科技园区投建的研发基地。该中心于2007年正式投入使用，专注于调查研究影响亚洲人口健康的各类疾病，其中包括：胃癌、肝癌以及肺癌。该中心采用国际一流的先进技术解析这些癌症的遗传机理，并在临床上识别及确证相关的生物标记物和药物靶标。 由Yi Gu博士带领的细胞科学研究部门正在对这些疾病开展一项药物研究项目，希望通过筛选多种化合物来确定候选药物。3D细胞检测分析是该项目组基于采用BD Matrigel (BD Biosciences)作为细胞培养底物进行的二次药筛技术其中的一种。Matrigel是从EHS (Engelbreth-Holm-Swarm)小鼠肉瘤的可溶性基底膜抽提得到的细胞外蛋白凝胶复合物，能够诱导克隆细胞在标准细胞培养基表面通过不同方式生长（图1）。这些非均相构成诱发了克隆体的形成，非常适用于研究肿瘤细胞之间的粘附、生长、迁移及转移。由于克隆细胞很好地模仿了人体组织的生长与成型过程，因此研究人员能够在药筛最初期识别正确的化合物。 手工制板存在着明显的两个缺陷：容易出错且耗费时间，而通过使用全自动液体处理工作站Freedom EVO来提高检测通量并改善结果的一致性，无疑是最好的解决方案。这一自动化平台早已成熟应用于化合物梯度稀释和其他大量细胞检测实验中，可以在保持原有应用的基础上快速且低成本地修改应用程序。 ICC资深自动化科学家William Shi解释说：&ldquo 历来此类3D细胞检测都是在6孔板上进行的，由于样本需求量大且Matrigel底物处理比较复杂，因此手工制板十分困难。并且，这种6孔板型无法与大量试剂需求和大批量化合物筛选工作相匹配，因此我们开始着手不断寻找高性价比的方法。另一点很重要的是，Matrigel的异质组分具有较大表面张力且在微孔内分布不均，其低剂量加样非常困难，因此分析6孔板上的实验结果已经极其困难，更别提在96孔板内检测分析了。为了解决这一问题，我们先在微孔板上预涂一层薄薄的琼脂，然后再进行Matrigel加样。这种方法虽然解决了Matrigel的表面张力问题，却带来了如何平衡在50℃以下琼脂凝固与４℃以上Matrigel过度粘稠这两种物质的复杂加样问题。&rdquo 后来我们选用了全自动化液体处理工作站Freedom EVO，其中选配了多个温控载架，使得盛装琼脂和Matrigel的液槽一直保持适宜的温度，非常便于加样。整个加样过程都是由自动化系统的液体处理机械臂（LiHa）上的单通道完成，通过多次洗液注液循环实现预热或预冷，避免加样针堵塞。加样初期通过机械臂的多次注液将预热琼脂（55℃左右）加入提前预热的96孔板内，这样可以将琼脂冷却的可能性降到最低点，从而减少琼脂的用量，降低实验成本。随后，微孔板在载板架上经室温冷却15-20分钟，使得琼脂在加入Matrigel前得以凝固。 采用这种解决方案后，能在短短90分钟内完成6块微孔板的加样制备，而传统手工处理一天仅能完成3-4块微孔板的加样，两者形成鲜明对比。制备好的微孔板质量在使用自动化加样技术后也有了很大提升，避免了人工制板常出现的批对批、板对板、甚至孔对孔的误差问题。William总结道：&ldquo 这种高度一致性对药物筛选来说至关重要，高质量的实验结果数据有助于我们加快药物研发进程，Freedom EVO自动化平台独具的灵活性使得这一切能够轻松实现！&rdquo 更多关于Tecan　Freedom EVO液体处理工作站的信息请访问以下网站或询问当地Tecan员工／经销商：www.tecan.com/freedomevo 更多关于阿斯利康中国创新研究中心的信息，请访问以下网站：en.astrazeneca.com.cn BD和Matrigel是美国BD公司（Becton, Dickinson and Company）的注册商标。Corining是美国康宁公司（Corining）的注册商标。关于帝肯： 瑞士帝肯www.tecan.com是全球领先的生命科学与生物制药、法医和临床诊断领域自动化及解决方案供应商。公司成立于1980年，总部设在瑞士Mä nnedorf，分别在瑞士、北美和奥地利设有自己的研发和生产基地，目前公司主要经营的产品有三大类：全自动化液体处理平台( Liquid Handling&Robotics )、多功能酶标仪（Multimode Reader）和OEM组件；销售服务网络遍布世界52个国家，客户覆盖制药企业、生物技术公司、科研院所、法医、医院、血站系统和疾病控制中心（CDC）等。其液体处理技术已拥有行业经验30年，在全球处于领先地位，备受世界领先生命科学实验室的青睐。 帝肯（上海）贸易有限公司是瑞士帝肯集团公司亚太区总部，2008年4月成立于上海浦东。帝肯（上海）目前拥有一支专业的售前和售后服务团队，在科研、医院、血站和CDC领域构建了良好的经销网络，并以&ldquo 力求比客户期望做得更好&rdquo 的服务理念，给广大终端用户提供专业的服务。 欲知更多详情，请联系帝肯上海市场部：Libby ZhuTel: 021 2206 3206 / 010 8511 7823Fax: 021 2206 5260 / 010 8511 8461helpdesk-cn@tecan.com www.tecan.com

产品介绍 细胞生长对培养环境有着极高的要求， 如温度、CO2浓度、剪切、培养基浓度等。尤其是动物细胞，生长周期较长， 对培养条件运行的连续性、 稳定性和可靠性提出了非常高的要求。 ZWYC-290系列精密细胞培养振荡器是ZHICHENG公司推出的具有我国自主知识产权的细胞振荡器新品。 该产品凝聚了ZHICHENG公司中国研发团队二十年恒温振荡器的专业设计经验和现代生物技术的应用经验，携手海外专家攻关，在引进、消化、吸收国外一线同类旗舰产品的基础上，再创新提高而形成的技术成果。 应用范围ZWYC-290系列精密细胞培养振荡器是生物培养在进入发酵培养前最完善的培养装置，可广泛应用于微生物细胞发酵、动物细胞和植物细胞培养， 在生物医药、食品开发、生物农业环境治理等领域进行微生物培育、菌种或细胞系筛选等有着很好的应用前景， 也可应用于对温度、供氧、剪切等具有较高要求的细菌培养、动植物细胞培养、杂交和生物化学反应以及酶反应研究。 产品特点三大系统：指纹（密码）识别电子门系统、手机天网系统、数据无线传输采集系统五大功能：恒温、振荡、恒湿，光照、CO2六大亮点：自保温聚氨酯壳体、杀菌加湿器、紫外高效灭菌、导流冲洗通道、便捷可卸托盘，绿色粘板功能介绍:? 基本功能(恒温振荡)1、ZHICHENG公司精密细胞培养振荡器，单层振荡培养箱体，振幅12.5mm、25mm、50mm三档可调。全温型；转速为30-300r/min，可调并显示。2、专利技术的单轴悬挂滑杆五驱自平衡驱动单元，连续工作时间长，耗能少，能承受不平衡负载。3、稳定性能高，设备可在最大负荷状态下不间断运行，在启动、运转和停止过程中能保持平稳，设备在重启（包括断电来电）后，维持原有设置自动开启。4、独特的空气循环系统，内外空气持续环流，保证培养过程中有充足的空气补入确保温场均匀性，使腔体内无温度死角。5、超温报警保护功能：l 当实测温度超过报警设定值时培养振荡器报警；l 当实测温度超过断电设定值时加热器停止工作。6、 超速报警保护功能:l 当实测转速超过报警设定值时培养振荡器报警；l 当实测转速超过最高转速时，振荡平台停止振荡。 ? 可选功能（恒湿培养）l 控制范围：40-90%RH，精度：± 5%RH（可修正）l 最新发明专利技术：1）采用金属模块腔体蒸发技术，体积小，效率高，反应快。2）腔体内多通道的独特设计，形成了一次加热蒸发、二次高温消毒、三次压缩增压的制湿技术， 最终形 成高达140℃的雾状蒸汽迅速喷射，均匀扩散，不易形成水滴，而且湿度分布非常均匀。 ? 可选功能（光照培养）l 两种光照单元供选择：（1）日光光照系统：模拟日夜光照环境（2）LED不同光波组合系统：波长主要集中在红橙光和蓝紫光波段区域，主要应用于光合生物的培养 ? 可选功能（CO2培养）l 浓度范围：0-20%l 控制精度：±0.2%（浓度5%时），显示精度：±0.1%（可修正）l 国际顶级品牌的红外传感器，确保控制的高精度和高稳定性l 控制方式：P.I.D（微电脑环境扫描微处理芯片）l CO2供气瓶可自动切换 ? 可选功能（OD在线检测）l 完全替代繁琐的手工定时采样测量方法，是一种自动化教学、科研设备l 采用非接触式检测技术，在动态环境中获得真实的微生物细胞生长曲线l 可在线实时测量微生物细胞浓度的光密度（optical density,OD）值l 可选4、8、12和16通道, 适合正交试验、均匀实验和DOE设计实验l 可高效实现菌种筛选、培养基优化、发酵工艺优化研究和动力学分析l 根据研究需要，可更换激光波长，应用于酶、蛋白质等活性物质的检测 ? 可选功能（可选模块）l 具有短信报警等手机互联功能。l 数据无线传输采集系统。能更方便地记录设备的运行数据，实时监控摇床的运行状态。 ? 六大亮点l 一次成型的自保温高强度聚氨酯壳体，保温性能良好，强化了箱体的密封效果，提高了操作的稳定性和安全性。l 拥有最新发明专利技术的温度达140℃的灭菌加湿器，腔体灭菌彻底，加湿效果良好。l 紫外灭菌与循环风扇配合在风道内实现对循环空气的紫外高效灭菌功能。l 导流冲洗通道，便于及时冲洗，避免细菌污染。l 托盘与箱门连动，装卸便捷。l 独特的绿色粘板，粘性和稳定性好，节省空间，易于清洗维护。 技术参数产品名称ZWYC-290系列精密细胞培养振荡器控制方式P.I.D（微电脑环境扫描微处理芯片）显示方式5.6吋640×480点阵65K色真彩触摸式显示屏对流方式强制对流式振荡方式回旋振荡式驱动方式单轴驱动环境温度要求（℃）5～35工作室（个）1～3空气循环360m3/h曲线编程设定（段/步）反复、步调、温度阶梯、曲线编程设定：9/18(段/步)，每段时间：999.9（min）定时时间（min）0～9999温度传感器Pt100温度控制范围（℃）4～60温度分辨精度（℃）≤0.1温度波动度（℃）≤±0.1温度均匀度（℃）≤ 0.2（37℃时）可选功能湿度控制范围（%RH）40～90湿度控制精度（%RH）2～3湿度波动度（%RH）≤2振荡幅度（mm）∮12.5、25、50三档可调转速范围（r/min）30～300转速精度（r/min）≤±1平均照度（Lux）≥300紫外强度（mW/m2）≥400可选功能CO2传感器进口品牌的NDIR单束双波红外传感器CO2控制范围（%）0～20CO2控制精度（%）0.2（浓度5%时）CO2显示精度（%）0.1CO2恢复速度（开门1分钟后）10min（浓度5%时）可选功能光密度OD6000.03～2.5 OD±0.03光密度稳定性OD600=1.0±0.03 相同实验条件下的稳定性≥95%（7天）测量通道选4、8、12和16通道可选噪音水平dB（A）≤70 dB（距离设备表面1m处）安全功能上、下限超温报警，上、下限超速报警，上、下限湿度报警，传感器故障报警，独立式过升防止器，独立式超温保护器（可调），独立式漏电、过电流跳闸保护，制冷机超荷保护，门与摇板连锁保护附属功能光照培养系统、自动停机、自动开机、温度/湿度表示校正、监视计时器、时钟显示、来电恢复、参数记忆、参数加密、可扩展RS-485接口制冷功能空冷式、R134.a 功率可控式制冷、无霜运行加速度柔性慢启动摇板数量1～3托盘类型粘性托盘（八块/单元）摇板尺寸（mm）850*450容积/单元（L）225最大装瓶量（支*容量）60*250ml 32*500ml 18*1000ml 10*2000ml 　8*3000ml 内胆尺寸/单元（长*宽*高）（mm）937*572*420外型尺寸/单元（长*宽*高）（mm）1080*960*590重量/单元（kg）98电源AC 220V 50/60Hz，1200W 创新点：一次成型的自保温高强度聚氨酯壳体，保温性能良好，强化了箱体的密封效果，提高了操作的稳定性和安全性。拥有最新发明专利技术的温度达140℃的灭菌加湿器，腔体灭菌彻底，加湿效果良好。紫外灭菌与循环风扇配合在风道内实现对循环空气的紫外高效灭菌功能。采用非接触式检测技术，在动态环境中获得真实的微生物细胞生长曲线精密细胞培养振荡器

01、3D矩阵中的单细胞　　　　在许多情况下，3D环境比2D细胞培养物更接近于体内情况。单细胞可以在3D凝胶中培养和成像，以分析各种生物学问题，例如细胞变形、迁移、管形成或ECM降解。除了只有一种细胞类型的培养物外，还可以通过在同一容器中共同培养两种不同细胞类型（例如癌症细胞和成纤维细胞）来研究它们的侵袭行为。　　　　为了从凝胶基质中分离细胞，基质可以被酶降解（例如，胶原蛋白被胶原酶降解）。之后，细胞可以在新的凝胶基质中扩增，或者进一步处理以分离DNA、RNA或蛋白质。　　　　　　在µ -Slide Chemotaxis中的I型胶原蛋白、鼠尾层中表达LifeAct的HT-1080细胞（绿色）　　　　ibidi解决方案　　　　　　ibidi I型胶原蛋白是一种非胃蛋白酶化的天然胶原蛋白，用于在凝胶基质中模拟生物ECM。其快速凝胶有助于在3D凝胶中实现最佳的细胞分布。　　　　　　在µ -Slide III 3D Perfusion中，单个细胞嵌入3D矩阵中。特殊的通道几何形状允许以低流速进行灌流（例如，当使用ibidi Pump System泵系统/流体剪切力系统时）。与静态培养不同，灌流可确保最佳的氧气和营养供应。这种设置使得长达数周的长期培养成为可能。此外，超薄的盖玻片底部可实现高分辨率成像。　　　　　　µ -Slide 15 Well 3D和µ -Plate 96 Well 3D可以在3D凝胶上或内部对单细胞和共培养物进行简单、经济高效的培养和显微镜检查。凝胶层直接连接到上方的培养基储存器，通过扩散实现快速、轻松的培养基交换。对于特殊应用，ibidi还可以提供带有1.5H玻璃底部的µ -Slide 15孔3D玻璃底细胞培养载玻片。　　　　　　μ -Slide I Luer 3D设计用于在具有确定流量的3D凝胶基质上或其中培养细胞。三个孔中的每一个都可以填充凝胶，其中可以嵌入细胞。对于限定流量的应用，顶部的通道可以连接到泵（例如，连接到ibidi Pump System泵系统/流体剪切力系统），以确保最佳的氧气和营养供应。　　　　　　µ -Slide Chemotaxis和Sticky-Slide Chemotaxis非常适合分析2D和3D中的单细胞迁移。在水基3D凝胶（例如Collagen I凝胶和 Matrigel ）中可以轻松建立趋化梯度，因为凝胶结构不会阻碍通过扩散形成可溶梯度。　　　　　　大多数ibidi实验室器具，例如µ -Dish 35mm, high 或µ -Slide 8 Well high，可用于在3D矩阵中培养单细胞，是高端显微镜的理想选择。　　　　02、球体和类器官培养　　　　球体是在3D非贴壁培养条件下相互粘附的细胞。它们缺乏干细胞，这意味着它们由完全分化的细胞组成。例如，可以通过使用悬滴或强制漂浮方法将它们放入无支架悬浮液中来生成它们。　　　　球体不能自我更新和进一步分化。肿瘤细胞球体是一个例外，因为肿瘤细胞具有无限的增殖能力，它们能够分裂和更新。因此，球体是检查肿瘤细胞行为（例如大规模药物筛选）的有用模型。　　　　在µ -Plate 96 Well 3D中球体生成实验方案可点击查看→AN 32: Generation of Spheroids　　　　　　NIH-3T3细胞在ibidi µ -Pattern上形成明确的球体。将细胞接种在 µ -Slide VI 0.4中的200 µ m粘附点上，并在流动（3dyn/cm² ）下保持14天。　　　　类器官是培养的“微型器官”。它们可以由成体干细胞(ASC)或多能干细胞(PSC)产生。当在3D基质/支架（例如Matrigel 或胶原蛋白）中培养时，这些细胞分化成器官特异性细胞类型，从而构建小型功能器官。　　　　Sato等人利用Lgr5 +干细胞创建了第一代肠道类器官，启动了许多从不同器官（如肠、肝脏、大脑、前列腺、肾、胰腺、肺和甲状腺）生成类器官的方案。重要的是，它们可以使用CRISPR等技术进行编辑，使其成为个人治疗、器官发生和药物筛选研究的强大工具。　　 　　球体是细胞聚集体，通常由癌细胞产生　　 　　类器官是由干细胞培育而成的微型器官　　　　参考文献：　　　　Sato T, et al. (2009) Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature 459(7244):262–265. 10.1038/nature07935.　　　　Drost J, Clevers H (2018) Organoids in cancer research. Nat Rev Cancer 18:407–418. 10.1038/s41568-018-0007-6.　　　　Tuveson D, Clevers H (2019) Cancer modeling meets human organoid technology. Science 364(6444):952–955. 10.1126/science.aaw6985.　　　　ibidi解决方案　　　　　　µ -Slide Spheroid Perfusion是用于长期球体培养的专用流动室。每个3 x 7孔形成自己的生态位，在其中培养标本。通过孔顶部通道进行灌注可确保整个实验过程中营养和氧气的最佳扩散，而不会使样本受到显着的剪切力。　　　　　　µ -Slides With Multi-Cell µ -Pattern可实现空间定义的细胞粘附，用于球体和类器官的生成、长期培养和高分辨率成像。确定的粘附点能够从细胞悬浮液中捕获所有粘附的单细胞。周围的生物惰性表面完全不可细胞附着。这迫使所有细胞在粘附点处相互聚集，从而以明确且可控的方式形成球体。　　　　　　生物惰性是一种稳定的生物惰性表面，适用于在非粘附表面上对球体、类器官和悬浮细胞进行长期培养和高分辨率显微镜观察，没有任何细胞或生物分子粘附。目前可提供µ -Dish 35 mm高壁生物惰性、µ -Slide 8孔高壁生物惰性、µ -Slide 4 孔生物惰性和µ -Slide VI 0.4生物惰性。　　　　　　在µ -Slide III 3D Perfusion中，球体或类器官可以在凝胶层中或凝胶层上培养，或嵌入 3D 基质中。特殊的通道几何形状允许以低流速进行灌流（例如，当使用ibidi Pump System泵系统/流体剪切力系统时）。这种设置使得长达数周的长期培养成为可能。此外，超薄的盖玻片底部可实现高分辨率成像。　　　　　　µ -Slide 15 Well 3D 和µ -Plate 96 Well 3D 可以在3D凝胶上或内部对单细胞和共培养物进行简单、经济高效的培养和显微镜检查。凝胶层直接连接到上方的培养基储存器，通过扩散实现快速、轻松的培养基交换。对于特殊应用，ibidi还可以提供带有1.5H玻璃底部的µ -Slide 15孔3D玻璃底细胞培养载玻片。　　　　　　ibidi I型胶原蛋白是一种非胃蛋白酶化的天然胶原蛋白，用于在凝胶基质中模拟ECM。其快速凝胶有助于在3D凝胶中实现最佳的细胞分布。　　　　03、流体状态下的3D细胞培养　　　　间隙渗流　　　　　　在体内，许多细胞类型不断暴露于液体流动中。当在体外3D基质中培养它们时，可以通过向它们灌注生长培养基或任何选择的试剂或药物来施加柔和的间隙渗流。通过这样做，可以建立接近细胞自然环境的条件。　　　　灌流　　　　　　3D矩阵内部的细胞和上面的通道的组合可以很容易地应用流体。该实验装置通过凝胶的扩散被动地给体外3D基质内的细胞提供营养，通过轻柔的流动为细胞提供氧气和营养物质。可调节的流速决定了营养水平，使长期活细胞实验成为可能。　　　　ibidi解决方案　　　　　　ibidi Channel Slides通道载玻片，包括µ -Slide III 3D Perfusion、µ -SlideI Luer 3D和µ -Slider VI系列产品，允许在3D基质中接种细胞并应用流体（例如，使用ibidi Pump System泵系统/流体剪切力系统）。

隔壁的直男师兄今年喜得千金，最近总在实验室诡异地傻笑，问他为何，说是时常想起女儿的可爱模样。 这种感情，没养育过孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在实验室养育细胞，也一样寄托感情，生怕细胞被养坏了。一个闪失，就前功尽弃。实验结果不可靠，没有一致性和稳定性，还重复不出来，再浓密的头发也经不住这样的考验。所以，有一个稳定、一致的培养环境，那就很重要了。 培养细胞不可能24小时值守，快快请出四大护法相助！ 1. 大护法：二甲基亚砜（DMSO） 成功冻存和复苏细胞是细胞培养研究的常规操作。细胞低温储藏时，防止冰晶形成是维持细胞活力的关键。大护法DMSO作为冷冻保护玻璃化剂，可以让细胞免受冰晶导致的机械损伤。大护法法力无边，能够用于原代、继代培养和重组的异倍体和杂交瘤细胞系、胚胎干细胞 (ESC) 以及造血干细胞的冻存。 下面为大家解密DMSO这个既熟悉又陌生的细胞培养大护法～～l DMSO的摩尔浓度是多少？DMSO的摩尔浓度为14.1 M，依据是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。l DMSO的来源？过去，DMSO是从树皮中分离出来的。现在，它是一种商业合成的溶剂。l 细胞冻存培养基中应使用什么浓度的DMSO？DMSO通常以1-10％的浓度使用，具体取决于细胞系。 l DMSO应该是液体，为什么我收到后却是固体？DMSO的熔点为16-19℃，室温过低就凝固。这并不妨碍使用，可以缓慢加热令其重新液化，不会有任何影响。l 哪种类型的过滤器可用于无菌过滤DMSO？DMSO可以用带0.2 μm PTFE膜的过滤器进行无菌过滤。 每个伺候细胞宝宝的“宝爸宝妈”对棕瓶子白盖子的DMSO应该都不陌生。没错！正是Sigma-Aldrich品牌热卖的这款DMSO（货号：D2650）：明星产品，质量过硬，口碑积累，适用性广，久经验证。 2. 二护法：血清 血清里的生长因子能促进细胞的繁殖，附着因子可促进细胞的贴壁，此外矿物质、脂类及激素对细胞也大有裨益。常用的血清有胎牛血清和小牛血清，公认澳洲来源的血清品质更优、更安全。 赶快来了解一下保护细胞宝宝的二护法吧～～l 如何解冻血清？血清应在2-8°C过夜解冻以避免降解，或者在室温条件下，定期轻轻摇动使组分重悬。解冻的血清在加入细胞培养基前应该混合均匀。反复冻存会严重影响血清品质，建议将解冻的血清分装成单次使用量，并冻存于-20°C。如果储存于2-8°C的环境中，应该在2-4周内尽快使用。温度超过37°C时血清会降解，功能遭到破坏。l 如果血清收到时存在部分解冻，还能继续使用吗？血清是干冰包装运输，到达时应该是冷冻状态。运输超期，会部分解冻，但依然可以继续使用。l 培养基中加入血清和所有补充物后可以储存多久？如果正确无菌操作，添加血清的培养基可以在2-8°C最长储存6周。不论储存时间长短，一旦培养基变浑浊，应该使用适当的方法丢弃。l 为什么血清会出现浑浊或絮状物质？原因很多，主要有二：1. 反复的冻融会使血清脂蛋白发生变性造成浑浊，所以，一定要分装哦～～2. 血清加工中遗留的纤维蛋白原在解冻时会转化成纤维蛋白，过量的纤维蛋白就呈现为絮状物。不要着急，可以离心移除；不推荐过滤哦，因为容易堵。l 什么是γ辐照的血清？γ辐照的血清通过暴露于放射性60Co产生的25-40 kGy剂量的γ射线来灭活病毒和其他外来微生物(比如支原体)。γ辐照处理不影响血清的理化性质或细胞培养性能。l 为什么有些血清是热灭活的？如何热灭活？哺乳动物血清中天然存在的补体蛋白参与细胞溶解事件、收缩平滑肌、从肥大细胞和血小板中释放组胺和激活淋巴细胞和髓细胞。热灭活破坏了血清中补体的活性，因此免疫学应用，培养胚胎干细胞、昆虫细胞和平滑肌细胞时推荐使用。热灭活方法是在56°C水浴中处理30分钟，并每隔大约10分钟旋转一次瓶子。为了保持精确，可使用一个类似大小的瓶子作为对照，对照瓶内放入同等体积的水，并放置一个温度计，在温度到达56°C时开始计时30分钟。热灭活过程必须小心控制，避免血清中支持细胞和组织繁殖的关键蛋白组分发生降解。l 胎牛血清的颜色和之前使用的批次不同，会影响血清使用效果吗？血清的颜色取决于血红蛋白浓度，颜色差异不影响血清性能。 说了这么多，从哪里请到这尊神呢？当然首选默克啦～～澳洲来源的牛血清，满足培养细胞的不同需要！货号产品描述F8318-500ML胎牛血清，澳大利亚来源，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，500mLF8687-500ML胎牛血清，澳大利亚来源，γ辐照，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，500mLB7446-1000ML小牛血清，澳大利亚来源，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，1000mLB7447-1000ML小牛血清，澳大利亚来源，γ辐照，无菌，适合细胞培养，适合杂交瘤细胞，1000mL 3. 三护法：胰蛋白酶 在细胞培养中，从组织上解离或从贴壁基质上分离细胞的步骤很关键，一般使用胰蛋白酶。胰蛋白酶作用于赖氨酸或精氨酸的C末端，在37°C时具有最佳的效率，因此使用期前要预热。当然，高浓度的胰蛋白酶长期孵育会去除细胞表面蛋白而损伤细胞，甚至杀死细胞。看来，这个护法的脾气可不好哦～～ 根据应用和细胞类型的不同，胰蛋白酶的组分和浓度也不同。比如，粘附分子在钙离子存在时决定细胞-细胞和细胞-基质的相互作用，为了削弱折衷联系，通常使用含EDTA的胰蛋白酶螯合二价阳离子（Ca, Mg）（点击这里，了解更多：T4049）。 胰蛋白酶的主要来源是猪的胰脏，产品是冻干粉或溶液。为了避免动物或微生物物质，现在也有技术可以在玉米中重组表达牛胰蛋白酶，厉害吧？(点击这里，了解更多：T3449)。 胰蛋白酶的使用浓度也很有讲究。对于强贴壁细胞系，常使用0.25%-2.5%的胰蛋白酶。如果实验需要细胞表面蛋白完整，则应降低使用浓度（0.05%胰蛋白酶）。 4. 四护法：抗生素 细菌宝宝的生存环境这么好，肯定有坏蛋觊觎，这就需要请出四护法——抗生素。 常见的生物污染由细菌、真菌和支原体造成，部分由病毒、化学物和细胞交叉污染造成。抗生素可以控制细胞培养中的生物污染。灵活使用抗生素是控制污染的方法，但千万不要偷懒，还是要注意无菌操作哦～～ 青霉素对大多数革兰氏阳性菌和少数革兰氏阴性菌有效，链霉素对革兰氏阴性菌和少数革兰氏阳性菌有效，联合使用青霉素和链霉素（简称双抗），就能有效控制细胞培养中大多数细菌的污染啦～～ 默克旗下有相当靠谱的抗生素。Sigma-Aldrich品牌热卖的青链霉素溶液（货号为V900929）不仅性能稳定，超高性价比；而且还是即用型经典配方（10KU青霉素和10mg链霉素/mL），直接以1:100比例添加到培养基中就全搞定！ 怎么样？这四大护法，是不是各个身手不凡呀！有了他们，细胞宝宝就可以健康无忧啦～～ 友情提醒，11月起我们会推出四大护法优惠组合套装，敬请留意~也欢迎大家在留言区分享自己培养细胞的心得体会～～我们会精选出五个有趣有料的留言，送上默克超可爱的萌娃家族盲盒一个，共有5位幸运儿，快来留言参与吧！ 留言截止时间：2020年10月30日12：00

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生产生物燃料或生物制药的工业发酵需要常规监测介质条件， 如 pH、溶解气体、碳源（葡萄糖）和氮源（谷氨酰胺）等，从而优化及控制发酵过程。然而除上述因素外，培养基中还包含其他一些重要生物成分如维生素、核酸和其他主要代谢物，如果一起监控，可以得到更多有关生物过程技术的详细信息。为满足全面分析培养基成分的需求，我们优化了分析条件，开发出“细胞培养分析方法包”，该方法包可以监控下面列出的95种化合物的相对丰度。使用这个方法包，我们研究在杂交癌细胞一周期5天内生长过程中培养基成分的丰度变化。 结果表明，主要的碳源和氮源即葡萄糖、谷氨酰胺以及几种氨基酸随着细胞生长信号强度逐渐减弱。因为消耗葡萄糖，所以分泌的代谢物乳酸随着培养时间的延长信号逐渐增强。观察其他几种化合物也表现为类似模式的增强。必需氨基酸和几种维生素的强度并不随着培养时间的延长而发生变化。 了解详情，敬请点击《使用三重四极杆 LC/MS/MS 同时分析哺乳动物的细胞培养上清液》 关于岛津 岛津企业管理（中国）有限公司是（株）岛津制作所于1999年100%出资，在中国设立的现地法人公司，在中国全境拥有13个分公司，事业规模不断扩大。其下设有北京、上海、广州、沈阳、成都分析中心，并拥有覆盖全国30个省的销售代理商网络以及60多个技术服务站，已构筑起为广大用户提供良好服务的完整体系。本公司以“为了人类和地球的健康”为经营理念，始终致力于为用户提供更加先进的产品和更加满意的服务，为中国社会的进步贡献力量。更多信息请关注岛津公司网站www.shimadzu.com.cn/an/ 。岛津官方微博地址http://weibo.com/chinashimadzu。岛津微信平台

细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养液或培养基的含义几乎相同，英文都是medium。当它是粉剂时，倾向性地称为培养基，而将粉剂配成液体后，多称为培养液。培养液中常常补加血清、抗生素等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。细胞培养基的质量标准和检测方法澄清度水是细胞培养基的溶剂。细胞培养基中的营养成分只有完全溶解于水才能被细胞吸收摄取，细胞才能生长增殖，因此细胞培养基是否溶解以及培养液是否透明澄清直接影响培养基使用。该项目是通过对水溶解后的细胞培养基的澄清度检查，判断细胞培养基的澄清度。 按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅸ B进行。pH 值哺乳类动物细胞生长需要合适的酸碱度，pH过高或者过低都会导致细胞死亡。pH值的测定也可以检查细胞培养基的批间差。清大天一标准规定取规定量供试品，用注射用水（水温20℃-30℃）溶解至1L，加入规定量碳酸氢钠到上述溶液中，用与细胞培养基溶液pH值相近的两点标准缓冲液校准后的酸度计进行测定。按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅵ H进行；加入规定量的碳酸氢钠到上述溶液中，按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅵ H进行干燥减量的质量分数细胞培养基具有吸湿性，在空气中放置水分会很快升高，干燥减量的质量分数表示产品中含湿量。细胞培养基是有菌制剂，其丰富的营养成分有利于微生物生长，控制细胞培养基中的水分可以防止微生物的繁殖，保持细胞培养基的养分。按中华人民共和国药典2005 年版二部附录Ⅷ L 干燥失重测定法进行。渗透压溶剂通过半透膜由低浓度向高浓度溶液扩散的现象称为渗透，阻止渗透所需施加的压力，称为渗透压。细胞必须生活在等渗环境中，动物细胞借助K＋、Na＋维持渗透平衡。大多数细胞对渗透压有一定的耐受性。但是培养液渗透压过高容易使细胞脱水wei缩，培养液渗透压过低容易使细胞膨胀破裂，因此要控制培养基的渗透压范围。按中华人民共和国药典2005 年版二部附录Ⅸ G 渗透压摩尔浓度测定法进行。细菌内毒素细菌内毒素是许多病原性细菌所产生的毒素。它的特殊性在于不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有生物活性的物质。培养基细菌内毒素过高，对生物制品疫苗（如狂犬、乙肝疫苗）、基因工程药品等注射用的药品都需要检查细菌内毒素。 因此本项目的检验符合生物制品质量控制要求。常规细胞培养基的细菌内毒素标准定为＜10 EU/ml。称取本品规定量（见表4-12）的1/100，加入细菌内毒素检查用水10 mL溶解，吸取该溶液0.1 mL加细菌内毒素检查用水3.9 mL，混匀即得试样。按中华人民共和国药典2005 年版二部附录Ⅺ E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。微生物限度细胞培养基不是无菌产品，其中的微生物在一定条件下会吸收细胞培养基中的营养物质滋生繁殖，导致细胞培养基变质失效。控制细胞培养基中细菌和霉菌，是延长细胞培养基有效期的方法之一。清大天一在参考《中华人民共和国药典》2005版二部附录第100页的口服给药制剂的微生物限度标准，并严于该标准，规定细胞培养基产品的细菌数每1g不得超过200个，霉菌数每1g不得超过50个。称取样品1 g，加入无菌纯化水10 mL溶解，混匀即得试样。按中华人民共和国药典2005年版二部附录Ⅺ J 微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。细胞生长试验这是一个性能特性表述的要求。细胞培养基的功能就是培养哺乳类动物细胞，因此经过细胞培养效果的检验是产品质量优劣的直观表述，这也是很多生物制药用户要求的一项指标。目前国内尚无细胞培养和计数的法定方法，可参考《体外培养的原理与技术》中细胞计数fa论述的内容给出。按产品说明书配制培养液进行细胞培养，前四天用含10％小牛血清的培养液培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基是否有促生长的能力。后三天用不含小牛血清的培养液维持培养，观察细胞形态并计数，检查细胞培养基中是否有不利细胞生长的毒素。本试验用细胞为VERO细胞。细胞培养液的储存，细胞培养液的储存条件一般为2－8℃、密闭、避光保存，但要注意如下几点：1） 过滤后的完全培养液，即添加了血清、谷氨酰胺、抗生素等的培养液要尽快使用，一般在2－3周内使用完。培养液中的L-谷氨酰胺是不稳定的，不同温度L－谷氨酰胺的降解。2） 灭菌后的未加L-谷氨酰胺等添加剂的培养基溶液，一般可在4℃保存6～9个月，也可冷冻保存，用时解冻3） 高压除菌后的培养基应置4℃保存，不能因为其可耐受高温而忽略储存温度。4） 添加某些生长因子、激素等添加物，可能会改变培养液的储存条件，比如温度、时间等方面的要求

细胞在体外能够成功生长，培养基的选择及培养方法的优化十分关键。细胞在单纯的培养基中不能存活，各种类型的细胞培养中必须提供某些生长因子、黏附和伸展因子、微量元素等营养物质。传统培养基中一般会添加动物血清如牛血清等。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。其中胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。 血清培养的优势与局限采用天然来源的血清作为细胞培养添加物，优势在于提供丰富全面的细胞生长必需的营养，并且提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，调节其活性。结合蛋白还能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。血清还是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。但血清的使用也存在一定局限性。(1)血清可能含有细胞生长抑制因子和毒性因子，存在潜在毒性；(2)血清的获取成本高，价格较为昂贵；(3)血清由于成分不完全明确，给细胞培养的标准化带来困难，同时也给细胞表达目的产物纯化等下游操作带来困难。 无血清培养优势由于常规血清培养基存在上述问题，近年来无血清培养基越来越受到重视，其开发和应用渐成趋势。无血清培养基不含动物血清或其他生物提取液，仍可使细胞在体外较长时间生长、增殖或维持。无血清培养基可以针对特定的细胞类型配制专用的培养基，如爱必信生物研发推出的人间充质干细胞培养基，可以帮助精确地控制细胞的增殖和分化过程等。无血清培养基尤其应用于哺乳动物细胞的大规模工业培养。同时，它也是研究细胞生长、增殖、分化及基因表达调控的有力工具。无血清培养基具有以下优点：(1)其组成明确，可避免血清不同批次带来的质量变动，提高可重复性。(2)避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染风险。(3)避免血清不明组分对实验研究的影响。(4)有利于体外培养细胞的分化。(5)可提高细胞产物的表达水平并易于纯化。 所以，说了这么多，您是在进行细胞的常规有血清培养还是无血清培养呢？您更看好哪一方呢？爱必信生物提供优质、高性价比的血清产品，降低您的常规细胞培养成本！ 货号 品名 规格 价格 abs972 胎牛血清(优级) 500ml 3465 abs973 胎牛血清(优级),辐照 500ml 3675 abs974 胎牛血清(标准级) 500ml 2541 abs975 胎牛血清(标准级),辐照 500ml 2751 abs993 无外泌体胎牛血清 50ml 2478 abs976 新生牛血清(超级) 500ml 2268 abs980 澳洲新生牛血清 500ml 1155 abs981 BHK细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs983 Vero细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs985 二倍体细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685 abs987 CHO细胞专用新生牛血清(特级) 500ml 1685针对现今越来越旺盛的无血清培养需求，爱必信生物特研发推出无血清干细胞培养的全面解决方案：！ 产品用途 货号 品名培养基 abs9401 Xeno-Free人间充质干细胞培养基（无酚红） abs9402 Xeno-Free人间充质干细胞培养基 abs9403 人多能干细胞条件培养基 abs9404 人多能干细胞完全培养基 abs9405 人多能干细胞分化培养基 abs9419 人脐带间充质干细胞无血清培养基(无酚红） abs9420 人脂肪干细胞无血清培养基(无酚红）基质胶 abs9410 即用型基质胶潜能分化 abs9406 人间充质干细胞成软骨分化试剂盒 abs9407 人间充质干细胞成脂分化试剂盒 abs9408 人间充质干细胞成骨分化试剂盒分化鉴定 abs9414 成脂检测染液 abs9415 成骨检测染液 abs9416 成软骨检测染液消化液 abs9409 人多能干细胞消化液 abs9411 Xeno-Free细胞消化液冻存液 abs9417 无血清细胞冻存液（科研级） abs9412 ES/iPS细胞冻存液 abs9413 无血清细胞冻存液（治疗级）添加物 abs9120 B27 NeuroMix (50x) abs44077956 Recombinant Human Transferrin重组人转铁蛋白更多细胞培养产品： 产品用途 货号 品名血清 abs972 胎牛血清(优级) abs973 胎牛血清(优级),辐照 abs974 胎牛血清(标准级) abs975 胎牛血清(标准级),辐照 abs976 新生牛血清(超级) abs980 澳洲新生牛血清 abs993 无外泌体胎牛血清抗生素 abs9245 青霉素-链霉素-庆大霉素混合溶液(100×三抗) abs9246 青霉素-链霉素-两性霉素B混合溶液(100×三抗) abs9244 青霉素-链霉素溶液(100×双抗) abs47014828 Hygromycin B(潮霉素B)消化液 abs47047375 胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) 不含酚红 abs47014935 Accutase Cell Detachment Solution abs47014937 Trypsin (0.25%), Phenol Red abs47014938 Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol RedDMSO abs9187 二甲基亚砜(DMSO)(细胞培养级)添加物 abs9156 BSA（细胞培养级） abs42019847 Insulin重组人胰岛素 abs9169 Insulin, from Bovine Pancreas abs9119 Bovine Pituitary Extract (BPE) abs80002 鸡胚提取物Absin特色产品线（全部现货）：WB相关：ECL发光液、预染marker、预制胶；IHC相关：二抗试剂盒、组化笔；IP/CoIP试剂盒；激动剂/抑制剂；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡试剂盒；呼吸爆发试剂盒；ELISA试剂盒；重组蛋白；抗体: 二抗、标签抗体、对照抗体；定制服务(抗体/多肽/蛋白/标记/检测)... 爱必信(上海)生物科技有限公司联系邮箱：info@absin.cn公众平台：爱必信生物

生物药凭借其药理活性高、特异性强、治疗效果好、毒副作用较小的特点，已在全球医药市场大放异彩。在中国，随着抗体药物的医保覆盖和不断获批，越来越多的生物药已经进入了大众的视线。预计 2021 年中国生物制剂市场规模将达到 92 亿人民币，迈入快速发展阶段。在上一期的推文中提到，新冠疫苗的制备中很多环节离不开细胞培养。细胞培养工艺是生物制药产业核心技术之一，其技术改变将为生物医药产业的长足发展带来了新动能。移液技巧对细胞实验的重要性？重复实验间的差异是如何避免？如何去处理细胞实验中的样品？细胞培养过程中，需要对细胞的生长环境和细胞的状态进行实时监控。样品的质量对后续的细胞分析应用至关重要。其中，培养基的作用尤为重要，为细胞生长提供充足的营养，并提供良好的生长和代谢环境。在实验室中，对各类培养基分装也是必不可少的，同时对培养基质量的要求也越来越高。人工手动进行培养灌装时容易出现人为错误，而且在不同操作者之间还可能产生较大的结果变异性。此外，该项工作还需要耗时以及专注，造成重复性劳损的风险很高。在样品制备环节，移液操作与细胞的状态息息相关，会直接影响细胞分析的结果。作为一家流体传输解决方案供应商，兰格完善的蠕动泵产品线，可简化实验室的日常工作，并缩短获得可靠数据的时间，助力实验室/药企全方位提升工艺效率，推进药物上市进程。客户案例国外一家专为生物技术实验室而开发的培养皿自动灌装机，可将培养基自动灌装到培养皿板/SBS板中。通过配置兰格蠕动泵实现培养基介质的高重复性输送，减少人为操作和等待时间。兰格OEM蠕动泵体积小巧，具有多种安装方式，可直接安装固定在系统中。而且，蠕动泵灌装精度高，校准后可达到±0.5%的精度，为小容量高精度的灌装需求提供了可靠方案。采用无菌密封管路设计，可实现系统的在线清洁和培养基的无菌转移，为整个细胞培养流程消除污染风险。同时，软管更换操作简单快捷，缩短停机时间，减少灌装机的消毒和维护成本。随着新技术的发展，工艺也在不断地发展和改进。如果您正在寻找优化移液工作流程的方法，我们可提供优质可靠的精密流体元件，既有泵也有管路套件及阀类产品，让其轻松组装到您的产品中。

公司近日获得Celartia公司的Petaka细胞培养板的中国区代理权！ Petaka细胞培养板对于国内的用户来讲，或许是一个比较陌生的产品。单是却已经风靡欧美等国，受到各国科学家的一致追捧！甚至有专家预言，它的出现，将改变大家的细胞培养观念！ Petaka细胞培养板为什么会如此之大的影响力呢？首先，基本性能优于传统的细胞培养；其次，高仿真的体外模拟环境；最后，多功能用途，一板多用； 更多的信息请查看http://premedlab.com/productshow.aspx?id=92&proid=300或者查询www.celartia.com。 更多的操作显示，请观看v.youku.com/v_show/id_XNDQ5ODkyNjky.htmlPetaka细胞培养板-操作演示 简而言之， Petaka细胞培养系将改变研究人员传统的培养观念！为细胞培养提供更加真实的体外模拟环境，为获得更加精确的数据提供有理的保证。

p style="text-indent: 2em text-align: justify "细胞培养技术是细胞生物学研究方法中重要和常用技术，广泛应用于医学研究、试剂研发和生命科学等领域。作为细胞实验中的关键步骤，培养细胞的过程要求保证严苛的环境条件以及精细、稳定的操作。那么细胞培养的工作内容是怎样的呢？需要用到哪些必备的科学仪器来保证细胞培养的顺利进行呢？/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "近日，仪器信息网走访了中国知名培养基生产企业——甘肃健顺生物科技有限公司（以下简称“健顺生物”）的上海研发中心实验室，以探寻以上问题的答案。走访过程中健顺生物副总裁张业炘与研发中心实验室负责人明庆中就实验室的情况做了详细介绍。/pp style="text-align: center "img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/c30d1471-dd72-47b4-a378-88bab1a11bdf.jpg" title="11.jpg" alt="11.jpg"/br//pp style="text-align: center "span style="font-size: 14px "strong健顺生物副总裁张业炘（左）、健顺生物上海研发中心实验室负责人明庆中（右）/strong/span/ppspan style="color: rgb(0, 112, 192) "strong仪器信息网：请您介绍实验室日常的工作内容？ 过程中会用到哪些仪器？/strong/span/pp style="text-align: justify "strong明庆中：/strong我们实验室主要承担快速细胞培养测试，用客户提供的细胞进行培养基测试，具体是用客户提供的目标细胞或基因指令进行构建细胞，用于相应的培养基优化以及工艺改进，直到做到50升的反应器规模。br//pp style="text-indent: 2em text-align: justify "实验室中工业优化用到的仪器有：培养箱、摇床、生物反应器、超净工作台等；测试用到的仪器设备有：生化分析仪、渗透压测试仪、质量分析检测相应的仪器等。/ppstrongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "仪器信息网：贵实验室采购仪器会考虑哪些方面？/span/strong/pp style="text-align: justify "strong明庆中：/strong由于培养细胞需要很精准的条件，对于温度、湿度、二氧化碳浓度都有很高的要求，实验中细微的偏差就会导致一系列产品出问题，因此精细、稳定、高性能是对仪器设备的最基本要求和标准。保证实验的精准性就离不开具有良好性能以及高稳定性的仪器，所以目前主要使用进口仪器，其优势在于准确度高、稳定耐用、性能优异，可将细胞实验的误差尽可能降到最小。但是，近年来随着一些国产仪器的技术和质量水平不断提高，我们实验室陆续引进了一些国产品牌仪器，比如上海智城的ZWYC-290A精密细胞智能培养摇床和ZSB-1200ⅡA2型智能型生物安全柜等。在这个用于细胞研究对实验设备性能近乎苛刻的实验室内，全是欧美一线进口产品，唯有智城的精密细胞智能培养摇床以及智能型生物安全柜是来自国产厂商的设备。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/8a6200bd-9c30-4efb-a9f9-a05bd72cc6db.jpg" title="ZWYC—290A精密细胞智能培养摇床.jpg" alt="ZWYC—290A精密细胞智能培养摇床.jpg"//pp style="text-align: center "span style="font-size: 14px "strong上海智城ZWYC-290A精密细胞智能培养摇床在建顺企业浦东基地的实验室内与国际一线品牌产品相邻为伴，“并肩作战”！/strong/span/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "实验室中常用的来自国产厂商智城的ZWYC-290A精密细胞智能培养摇床是在引进、消化、吸收国外一线同类旗舰产品的基础上，再创新，再提高而形成的技术成果。该产品拥有指纹（密码）识别电子门、手机天网和数据无线传输采集三大系统，具备恒温、振荡、恒湿，光照、COsub2/sub五大功能，另外，还含有自保温聚氨酯一体壳体、杀菌加湿器、紫外高效灭菌、导流冲洗通道、便捷可卸托盘和绿色粘板六大产品亮点。/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "产品广泛应用于微生物细胞发酵、动物细胞和植物细胞培养，在生物医药、食品开发、生物农业环境治理等领域进行微生物培育、菌种或细胞系筛选等有着很好的应用前景，也可应用于对温度、供氧、剪切等具有较高要求的细菌培养、动植物细胞培养、杂交和生物化学反应以及酶反应研究。/pp style="text-align: center"img src="https://img1.17img.cn/17img/images/201810/uepic/5c7d4492-7278-47a2-87a2-e8da19c99bc9.jpg" title="ZSB-1200A2型智能型生物安全柜.jpg" alt="ZSB-1200A2型智能型生物安全柜.jpg"//pp style="text-align: center "span style="font-size: 14px "strong建顺浦东基地的生物细胞实验室内的两台上海智城ZSB-1200ⅡA2型智能型生物安全柜/strong/span/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "生物细胞实验室中的两台ZSB-1200ⅡA2型生物安全柜具有独创的五大生物安全保护屏障：1.恒风速技术。具有自动跟踪调节功能，有效克服电源电压起伏和ULPA/HEPA阻力变化引起的负压波动，杜绝气体外泄；2.独立低风速报警技术。当主控电路故障导致恒风速功能以及低报警系统失灵时，自动启动独立的低风速声光报警；3.ULPA/HEPA失效预、报警技术。当ULPA/HEPA临近失效或已经失效时，自动启动声、光和中文可视方式的失效预警或失效报警；4.ULPA/HEPA破损报警技术。当ULPA/HEPA由于阻力增大和表面风压增大出现破损时，自动启动声、光和中文可视方式的破损报警；5.全程跟踪、多参数监控技术。实测风速、压差、风量、ULPA/HEPA运行状态以及运行时间参数的中文可视、声、光报警，可为操作人员提供全方位的设备运行状态的安全隐患警示。/pp style="text-indent: 2em text-align: justify "该设备广泛应用于生物制药、生物化学、医疗卫生、环境监测及电子仪器仪表等研究、应用领域。/pp style="text-align: justify "span style="color: rgb(0, 112, 192) "strong仪器信息网：那智城的仪器如摇床、培养箱、超净工作台等在试用期间表现如何？/strong/span/pp style="text-align: justify "strong明庆中：/strong 在为期一年的使用过程中，智城的摇床、培养箱、超净工作台等仪器符合细胞实验室的高标准，可用于日常的实验操作，并且ZWYC-290A精密细胞智能培养摇床在细胞实验室中与国际一线品牌的细胞摇床在一起同台竞技，承担着与进口仪器完全相同的工作任务。仪器在使用期间相对稳定，未出现任何问题；值得肯定的是，智城对用户的反馈可做到迅速处理，快速改进产品以满足用户的需求，从而保证用户的工作流程顺利进行。比如我们在超净工作台的日常维护中发现工作台脚架清洁难度大，而智城方面听取我们的反馈后，响应十分迅速，并对仪器进行了改进完善，使得我们在使用时更加便捷。智城在反馈用户这一方面做的很好，改进做的很及时。/p

对于外泌体研究的新手来说，细胞培养上清液是非常好的实验材料，外泌体相对容易收集。我们可以首先从细胞上清开始来熟悉整个外泌体的研究流程，充分了解整个流程需要使用的仪器、试剂以及准备时间，对我们后续的实验安排有很大帮助。其中比较重要的一点是要确定有足够的初始细胞上清液来收集外泌体，以保证我们能够拿到足够多的蛋白、核酸来进行后续分析。我们可以逆向思维，通过后续检测所需蛋白/核酸量——外泌体量——细胞上清量，来确定初始细胞上清体积。先从细胞上清开始，熟悉了整个过程后，我们再进行其他相对较难的实验材料进行研究。01细胞系选择无论贴壁细胞或是悬浮细胞，能分泌更多外泌体的细胞系肯定是优先选择的。一般说来，肿瘤细胞的外泌体分泌水平要高一些，但并不是所有肿瘤细胞系都能分泌足够多的外泌体，我们可以借鉴文献中的细胞系推荐1。以常用基因转染的HEK293为例，是比较公认的分泌外泌体水平较高的细胞系。或者，以每100ml的细胞上清收集到的外泌体蛋白可达到5~20μg范围作为标准2，例如我们可以从100ml的细胞上清中获得10μg的外泌体蛋白，如果后续要做蛋白质组学分析（需50μg蛋白），那么初始细胞上清就需要扩大到之前的5倍，500ml，500ml上清差不多是通过离心方法可处理的大样品量了。如果后面收集到的外泌体蛋白都不够进行一次WB，那就要考虑一下是不是要换个细胞系了。如果外泌体蛋白小于3μg，那么考虑到扩大体系的实验难度和后续实验的顺利进行，那证明我们用的细胞系不太合适做外泌体研究。*虽然很多生物样品或是细胞系在文献中没有出现过，许多外泌体相关的数据库（ExoCarta, Vesiclepedia, Evpedia等）可以提供帮助，在上面我们可以查到有哪些细胞系已经有人成功进行外泌体提取了。或者也可以咨询一些做外泌体的生物公司，看看他们是用哪些细胞系来制备商业化的标准外泌体样品的。02优化细胞培养条件及细胞系选择影响外泌体质量和回收率的另外一个重要因素是在收集之前细胞的培养状态。好的收集时间段是细胞状态好、生长旺盛，即处于对数期的细胞3，并且在细胞传代之前收集细胞上清，这个时候细胞所分泌的外泌体量达到高4。准备好的细胞上清液，细胞密度也要适合，贴壁细胞如果细胞密度过高会出现接触抑制，对所分泌的外泌体也会有影响。所以，理想的条件是在细胞融合达到70%~80%后的40~48h后收集外泌体（此时约融合至90%）。要注意，为了避免FBS外泌体的污染5，收集外泌体的40~48h之前需换成无血清培养基，注意此时40~48h仅作为推荐参考。像有些细胞在无血清培养基培养24h后没有发生存活率和细胞形态改变，那么可以进行上清收集。如果出现死细胞增加、细胞形状改变、状态变差等情况时，使用EV-delepted FBS培养基来代替无血清培养基，EV-delepted FBS可以直接购买也可以自己制备（使用SW 41Ti转头在4℃，35,000rpm(Rmax 210,000 ×g)离心16h后小心收集上清）。但是这样仍无法完全避免血清外泌体的污染，需要清楚样品中血清外泌体的含量，增加一组没有培养细胞的培养基的平行样品作为阴性对照是必要的。03外泌体的提取方法目前被大家认可的方法就是超速离心，因为超离的方法可以收集到完整的细胞外囊泡群，并且几乎所有的实验材料（细胞上清、血液、体液等）都可以通过超离的方法来进行外泌体提取。当然超离的方法也有需要改善的地方，比如样品量很小的情况下，超离对外泌体的回收率不高，但是超离作为一种物理分离的方法，可以在不破坏外泌体群体特性的情况下进行分离的。当前，除了超离外还有许多外泌体分离方法，每种方法都有它的优势和劣势，首先我们需要理解各种分离方法的原理和特点，再根据我们的实验需求才能找到合适的外泌体提取方法。超离方法是可以获得整个外泌体群体，适合于研究整个外泌体群体特性。Yoshioka博士：众多外泌体分离方法中，我们使用超离沉降的方法作为实验室提取外泌体的标准方法5（见下图）。这个Protocol主要包括三个步骤：1.小心收集细胞上清并低速（4℃，2,000xg，10分钟）去除悬浮细胞（死细胞）。2.用0.22μm孔径过滤器过滤上步中收集到的包含外泌体的上清液，去除大颗粒和细胞碎片。3.将上步中的滤液进行超离处理，使用贝克曼库尔特SW 41Ti水平转头、13.2ml超净离心管（Product Number:344059，Beckman Coulter），4℃下35,000rpm(Rmax 210,000xg)离心70分钟。离心过后外泌体在离心管底聚集成沉淀，通常是肉眼不可见的。然后用预先过了0.22μm孔径过滤器的PBS进行清洗，洗掉与外泌体一起沉降的成分，例如微颗粒和蛋白。小心倾倒掉第3步超离后的上清，残留少量液体进行2~3s的涡旋振荡重悬沉淀，然后加入PBS，重悬后的样品同样的条件再进行一次超离。再次超离过后的外泌体仍然需要重悬，倾倒掉上清后，再进行2~3s的涡旋振荡重悬，这时的外泌体样品就可以进行下步分析了。从离心管中转移外泌体样品到储存管（比如1.5ml微量离心管）时，在吸取时我们可以用移液枪先大概测量一下样品体积，后面在储存管中补充PBS到我们之前预估的样品体积，比如，我们想收集到100μl的外泌体样品，但是从离心管中转移到微量管中只有80μl（注意：使用13.2ml超净离心管，平均下来每次收集到的外泌体样品大概80μl），我们加20μl PBS到微量管中再混匀一下就可以保存了。外泌体样品可以在4℃保存，并且要尽量早的用于分析。另外，外泌体样品是不能反复冻融的，与细胞类似，反复冻融过程会破坏外泌体。现在大家普遍认为外泌体是具有异质性的，整个外泌体群还可以细分为亚群（例如尺寸、蛋白表达等），不同的亚群也具备不同的特性，正如前文所说，通过超离的方法可以收集完整的外泌体群体。也有些文献也报道过使用不同的离心条件，可以将尺寸大小不同的外泌体亚群分开。目前，还没有特别统一的外泌体超离提取步骤，像转头类型、离心管类型、离心力以及离心时间等离心条件在不同的文献上都会有些许的差异。04参考文献1. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]2. Valadi H et al. Nat Cell Biol. 2007 9(6): 654–6593. Beckman Coulter. Interview article: Basics and Vision of Exosome Research. 20154. Urabe F et al. Clin Transl Med. 2017 6(1): 455. Yokoi A. In Takahiro Ochiya, Yusuke Yoshioka. Exosomes encourage the medical innovation. Kagaku-Dojin Publishing Co., 2018 p.122-134 [Article in Japanese]

自动化3D细胞培养、简化BIO CELLXCELLINK最新推出的自动化3D细胞生物学流程可促进肿瘤研究与药物研发的进展。▍升级自动化高通量、全自动的生物分配解决方案利用BIOPOD（按需生物打印）技术和预先设定和预先验证的协议，将 3D 细胞生物学的力量带到您的工作台上。▍易于操作该平台利用 BIOPOD 技术，将最先进的仪器与预先验证的内置协议和材料混合盒相结合，提供比市场上任何其他系统更易于使用的解决方案：即插即用-play用户体验。▍无细胞沉淀只需按一下按钮，墨盒就可以自动将细胞与水凝胶混合均匀。这种新方法可确保高细胞活力并自动中和胶原蛋白。▍轻松挤出水凝胶三个墨盒站中的每一个都提供从 0°C 到 60°C 的精确温度控制，可以轻松打印 ECM 水凝胶和胶原蛋白、GelMA 和 GelXA 等生物墨水。▍精确且可重复无论分配的材料如何，高精度正位移挤出系统每次都能提供可重复的结果。▍预先验证的协议，易于使用由科学家，为科学家使用预先验证的协议可以让您轻松制作 3D 细胞模型。预加载的详细计划涵盖从构造几何形状到生物材料选择再到分配设置的所有内容。此外，每个协议都包含上游和下游分析的分步说明，因此在您过渡到 3D 细胞培养时，您的工作流程中没有瓶颈。从系统上预加载的协议或作为基于云的更新提供的不断增长的协议数据库中进行选择。

成立于2000年的上海山富科学仪器有限公司从事生物成像类仪器研发多年。今年我们成功研发了两款专用于细胞培养的转瓶机以及低速磁力搅拌器。参加了2011北京cisile展会以及宁波的高教会，取得了用户以及经销商的关注以及好评。 Cellnest roller 滚瓶机提供稳定精确的转速控制系统，步进电机保证在启动或停止时的平稳流畅。能跟市面上绝大多数二氧化碳培养箱兼容。升级方便，客户可以根据自己的需要来扩展瓶位架。可以配套110-120mm标准内径滚瓶。在控制面板上直观显示当前速率与工作时间，容易操作与安装。滚瓶转速在0.1-2rpm可调。 CellNest SOLO超低速细胞培养磁力搅拌器，通过搅拌式细胞培养，可提高细胞周围培养液的流动以及细胞对微载体的粘附，促进细胞生长。适合悬浮、贴壁微载体等的培养，速度极低且精准，能有效提高细胞的生长率。转动速率在5-150rpm可调。欲了解更多产品信息，请登陆以下相关链接。细胞培养滚瓶机 http://www.instrument.com.cn/netshow/C129065.htm超低速磁力搅拌器http://www.instrument.com.cn/netshow/C129034.htm# 欢迎各省市经销商与我司联系代理合作等事宜，询价请直接联系我公司。 上海山富科学仪器有限公司上海市曲阳路851弄沪办大厦9号楼506室电话021-65550736 65558758 传真021-65522489E-mail:info@shbiotech.comhttp://www.shbiotech.com

阿拉丁细胞培养总动员，一起快乐实验吧 Aladdin&i-Quip的优势细胞培养细胞培养技术也叫细胞克隆技术，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术，还是其中之一的生物克隆技术。细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的多细胞，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的 技术。 细胞培养泛指所有体外培养，其含义是指从动物活体体内取出组织，于模拟体内生理环境特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、医学、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。 阿拉丁为您提供全面的细胞培养技术，现货充足的各种培养所需试剂。芯硅谷作为阿拉丁的耗材品牌，为细胞培养实验准备了各系耗材，包括：细胞培养板，深孔板，各容积培养皿、培养管等。阿拉丁-芯硅谷是您细胞培养实验的首选。 产品列表&mdash &mdash 细胞培养专用试剂货号品名规格CAS号包装A103539抗坏血酸 用于细胞培养50-81-7500gA103540抗坏血酸 用于植物细胞培养50-81-7100g,500gP110425L-苯丙氨酸 非动物源，EP, JP, USP ；用于细胞培养，98.5 to 10163-91-225g,100g,500gT108222L-苏氨酸JP, USP ；用于细胞培养，99.0-101.0%72-19-525g,100gI115775L-异亮氨酸EP, JP, USP73-32-525g,100g,500gE103809乙醇胺 99%，细胞培养专用141-43-5100ml,500mlT100896噻唑蓝(MTT) 98%298-93-11g,5g,25g,250mgC114435矮壮素 植物细胞培养级,&ge 99%(HPLC)999-81-55g,25gG115554D-半乳糖胺盐酸盐 for cell culture,99%1772-03-81g,5g,250mgC111538氯化钠 用于细胞和昆虫细胞培养，&ge 99.5% (T)7647-14-52.5kg,1kg,500gP100088亚碲酸钾 99.5%7790-58-125g,100gC139524干酪素 suitable for insect cell culture9000-71-9500gC110500干酪素 technical grade9000-71-92.5kg,500g,500mlH104201肝素钠 185 USP units/mg9041-08-11g,5gH123383肝素钠 &ge 180 USP units/mg9041-08-1100KU,250KU,500KU,1000KUB111605硼酸 用于细胞培养和植物细胞培养, &ge 99.5%10043-35-3500gM112543氯化锰,四水 昆虫细胞培养级，&ge 99%13446-34-9100gS104205水合胆酸钠 98%206986-87-05g,25g,100gS104206水合胆酸钠 for cell culture，&ge 99.0%206986-87-025g,100g产品列表&mdash &mdash 细胞培养专用耗材货号包装品名详细参数B1559-03100EA三角形细胞涂布棒三角推边宽度:30mm 全长:208mm 颜色:蓝色 材料:PP 是否消毒:是 包装类型:热封袋B1559-05100EA三角形细胞涂布棒三角推边宽度:60mm 全长:235mm 颜色:蓝色 材料:PP 是否消毒:是 包装类型:热封袋C1623-0250EA6孔细胞培养板孔数:6 孔径:35mm 生长面积:9.61cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-0450EA24孔细胞培养板孔数:24 孔径:16mm 生长面积:1.91cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-0650EA96孔细胞培养板孔数:96 孔径:7mm 生长面积:0.35cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-1250EA6孔细胞培养板,TC处理孔数:6 孔径:35mm 生长面积:9.61cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C1623-1650EA12孔细胞培养板,TC处理孔数:12 孔径:22mm 生长面积:3.87cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C1623-1750EA12孔细胞培养板孔数:12 孔径:22mm 生长面积:3.87cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:否 是否灭菌:是C1623-1850EA24孔细胞培养板,TC处理孔数:24 孔径:16mm 生长面积:1.91cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C1623-1950EA96孔细胞培养板,TC处理孔数:96 孔径:7mm 生长面积:0.35cm 类型:平底,加盖 是否TC处理:是 是否灭菌:是C4219-0120EA细胞刮刀手柄长度:250mm 刀片长度:30mm 是否灭菌:是C4219-0220EA细胞刮刀手柄长度:250mm 刀片长度:30mm 是否灭菌:是C4219-0320EA细胞刮刀手柄长度:400mm 刀片长度:18mm 是否灭菌:是C4219-0420EA细胞刮刀手柄长度:400mm 刀片长度:30mm 是否灭菌:是C6057-0150EA细胞筛材质:尼龙网 颜色:蓝色 尺寸:40&mu m 是否灭菌:是C6057-0250EA细胞筛材质:尼龙网 颜色:白色 尺寸:70&mu m 是否灭菌:是C6057-0350EA细胞筛材质:尼龙网 颜色:黄色 尺寸:100&mu m 是否灭菌:是D3815-0110EA384孔深孔板,方形孔类型:普通型 材质:聚丙烯 容积:120&mu l 颜色:透明 底部形状:V型 是否灭菌:否D3815-0310EA384孔深孔板,方形孔类型:低吸附型 材质:聚丙烯 容积:120&mu l 颜色:透明 底部形状:V型 是否灭菌:否D3815-0510EA384孔深孔板,方形孔类型:普通型 材质:聚丙烯 容积:190&mu l 颜色:透明 底部形状:V型 是否灭菌:否L1557-01100EAL型涂布棒长度:156× 38mm 颜色:蓝色 材质:ABS 是否消毒:是 包装类型:纸塑袋M4939-011EA覆四氟涂层微量取样匙类型:海曼型 长度:150mmP4184-0160EA60mm细胞培养皿尺寸:60× 15mm 生长面积:26.17cm2 TC处理:否 灭菌:伽马 描述:普通型适合悬浮培养P4184-0260EA60mm细胞培养皿,TC处理尺寸:60× 15mm 生长面积:26.17cm2 TC处理:是 灭菌:伽马 描述:标准型适合贴壁培养P4184-0360EA100mm细胞培养皿尺寸:100× 20mm 生长面积:55.65cm2 TC处理:否 灭菌:伽马 描述:普通型适合悬浮培养P4184-0460EA100mm细胞培养皿,TC处理尺寸:100× 20mm 生长面积:55.65cm2 TC处理:是 灭菌:伽马 描述:标准型适合贴壁培养P4940-011EA外覆PTFE涂层取样匙,双平头类别:双平头,圆形平头和锥形平头 长度:200mm 刀片尺寸(最宽的部位):约44× 6mmP4941-011EA外覆PTFE涂层取样匙,平头和勺头类别:平头和勺头 长度:225mm 直径:4.7mmR1596-04500EAPP培养管,无边外径× 高:12× 75mm 容量:5ml 材质:PP 类型:无刻度 是否消毒:否 包装类型:热封袋R1596-05500EAPS培养管,无边外径× 高:13× 75mm 容量:5ml 材质:PS 类型:无刻度 是否消毒:否 包装类型:热封袋R1596-11250EAPS培养管,无边外径× 高:16× 100mm 容量:8ml 材质:PS 类型:无刻度 是否消毒:否 包装:热封袋T1558-01500EAT型细胞涂布棒,已灭菌长度:140mm 颜色:蓝色 材料:ABS 是否消毒:是 包装类型:纸塑袋D1554-011000EA普通型接种环类型:1&mu L环形 材料:软性PP 全长:200mm 环直径:30mm 颜色:蓝色 是否消毒:是 包装类型:纸塑袋更多产品请访问阿拉丁官网www.aladdin-e.com

近期我公司推出了新一代LAB-MI远程智能二氧化碳培养箱，二氧化碳培养箱通常用于细胞体外培养，可为细胞模拟一个类似细胞或组织在生物体内生长环境。提供一个稳定的温度（37°C），CO2浓度，相对饱和的湿度（通常90%）用于恒定细胞培养环境的渗透压和pH值，且还要为培养细胞提供一定防污染能力，以保证细胞健康地生长。那什么是好的培养箱呢？ 所谓不破不立，就是要打破墨守成规，带入新的设计，让科研机构使用工具更简单，更方便，且更安全，而这真是LAB-MI远程智能二氧化碳培养箱想要带给用户的使用感受。采用超大触摸屏画面，替代传统的按键式操作方式，操作简便、程式编辑容易。控制器操作界面中英文可选。智能二氧化碳培养箱，内分门数量可选，单门、2门、4门，定制可选，让成长中的细胞最小限度的受环境影响 有助于保护腔体内部环境的独立性，减少开门时箱体内所有空间环境都产生剧烈变化。有效的缩短参数恢复时间，减少污染风险，确保安全，保障环境稳定。(选配)进口红外线(IR)传感器控制在实验过程中需要频繁打开箱门的，红外线传感器是当仁不让的选择。选用的进口红外线(IR)传感器对CO2浓度的变化十分敏感，并且不受培养箱内部其它条件影响，测量精度高，避免了传统的热导探头在监测CO2，浓度时，箱内温度、湿度对其的影响。如开门30秒后关门，可以在≤3分钟内恢复到5%的CO2,设定浓度，即使在多人使用，需频繁开门、关门的情况下，仍能保持箱内CO2,浓度快速稳定和均匀。该系列产品可用于细胞学、生物学、肿瘤学、遗传学、免疫学、病毒研究及基因工程研究等领域的细胞、组织、细菌培养等。适用于医院、医药工业、生物化学实验室、科研院所、工业生产部门等。1 ► 远程设置 远程观察◇ 远程知晓二氧化碳培养箱的工作状态，并对参数进行设置；◇ 通过多屏互动，确保细胞的健康生长；实现远程观测及通知功能，随时获取培养环境的关键信息。2 ► 精准控温控湿 全效保温保湿◇ 采用CO2红外传感器，NDIR数字传感器，精确测量和温度补偿，降低测量误差；◇ PT100温度探测器，PID微处理器扫描处理芯片，实时控制加热模块，确保箱体内部温度精准。用户开门取样和放样后，可快速恢复箱体内部至设置温度。◇ 采用高效风机，每小时对箱内完成5次完整换气，确保箱内各处环境的温度、浓度、湿度均匀。3 ► 温度 浓度 湿度报警◇ 具备完善的报警系统，有箱体喇叭声及智能终端APP报警功能；◇ 可实现箱体内参数异常报警、腔体内湿度报警等功能，报警湿度值可按需设定；◇ 多重保护功能，为腔体内保持合适湿度提供保障。4 ► 高效消毒 安全可靠◇紫外灭菌、湿热灭菌、高温灭菌，三种消毒方式供用户选择。5 ► 人性化设计◇ 售后服务期限1年，关键传感器正常使用寿命5年以上，免维护；◇ 长达一万分钟的数据存储，记录培养箱参数的历史曲线，点开数据菜单，可查看近一月任意一天的运行数据；◇ 采用HEPA滤芯，配合先进的风路设计，有效滤除实验室常见污染物，并捕捉气流中的污染物。

Eppendorf一直致力于为细胞培养领域的研究人员提供可靠、便捷的设备。新款New Brunswick S41i CO2恒温摇床秉承这一优良传统，专为悬浮细胞培养设计，以CO2培养箱的标准制造，与同类产品相比箱体密封性更佳，温度与CO2浓度控制更为精准稳定，并且可将CO2消耗量控制到最低，大幅降低您的使用成本。内置New Brunswick三偏心轴平衡驱动，高负载状态下运行平稳、安静。New Brunswick S41i CO2恒温摇床为您进行哺乳动物、人类细胞及干细胞悬浮培养提供强有力的支持和帮助。 优越性能 绿色环保New Brunswick S41i CO2恒温摇床培养哺乳动物细胞的可行性首次通过培养中国仓鼠卵巢细胞（CHO）得到了验证（细胞密度：4.72×106个/mL，活细胞率：98%）。并将其与市售两款主流CO2恒温摇床的性能进行比较。使用New Brunswick S41i培养杂交瘤细胞（DA4-4）在细胞密度（1.81×106个/mL）和活细胞率（95%）方面与其他同类产品相比性能同等。同时研究还比较CO2气体的消耗量，凭借高端的环保设计及先进的参数控制，New Brunswick S41i CO2恒温摇床的CO2消耗量（0.175升/小时）与同类产品相比低5-10倍，显示出优越性能和环保理念。 CO2培养箱与摇床完美组合New Brunswick S41i CO2恒温摇床的核心是其内置New Brunswick首创的三偏心轴驱动，为悬浮细胞培养提供稳定均一、无震动的运行条件。独特的保护罩设计将整个驱动结构与培养腔体完全隔离，使摇床在运行时对培养环境的影响降至最低。同所有的New Brunswick CO2培养箱一样，S41i拥有多种先进功能。独创的六面直接加热设计，在箱体内提供温和的热对流循环，从而实现出色的恒温控制。标配120℃高温消毒功能，为细胞培养提供洁净安全的培养环境。标配红外（IR）CO2感应器，具备自动调零校准功能，保证精确的CO2浓度监测和控制，密封内外门最大程度降低热量及CO2气体的逃逸，为细胞生长创造高度稳定的培养环境。标配一块带孔搁板，在进行悬浮细胞的同时还可进行贴壁细胞的静置培养。如果您需要稳定的培养环境，实现高细胞产量和活细胞率，结合先进CO2培养箱和摇床技术的是您的最佳选择。 了解更多产品信息请浏览http://www.eppendorf.cn/int/index.php?l=71&sitemap=2.1&pb=ce9641afe377db7b&action=products&contentid=1&catalognode=91741。 应用文献No.AA255：《环保、低耗气New Brunswick S41i CO2恒温摇床培养杂交瘤细胞及中国仓鼠卵巢（CHO）细胞》Nick Kohlstrom, George Wang, Linette Philip and Ma Sha, Eppendorf Inc., Enfi eld, CT, U.S.A.http://de.sitestat.com/eppendorf/cn/s?en.download.applicationnote.255_hybridoma_and_cho_cell_culture_using&ns_type=pdf&ns_url=http://www.eppendorf.at/script/binres.php?RID=146623&DOW=1&pb=f55f633bdb454203 Eppendorf生物过程工艺微信：Eppendorf的E课堂Eppendorf官方微博：http://weibo.com/eppendorfchina Eppendorf中文官网：http://www.eppendorf.cn Eppendorf中国培训中心：http://tools.eppendorf.cn/etc 关于艾本德(Eppendorf)德国艾本德股份公司于1945年在德国汉堡成立，是一家全球领先的生物技术公司。产品包括移液器、分液器和离心机以及微量离心管和移液吸头等耗材，此外还提供从事细胞显微操作的仪器和耗材、全自动移液系统、DNA扩增的全套仪器。产品主要应用于科研、商业化的研发机构、生物技术公司以及其他从事相关生物研究的领域。2007年Eppendorf收购美国New Brunswick Scientific(NBS)公司，2012年Eppendorf收购德国DASGIP公司，拓展了其细胞培养领域的产品线。 关于艾本德中国(Eppendorf China Ltd.)2003年Eppendorf正式进入中国，分别在上海、北京、广州设立分公司，启动直销的经营模式，为中国客户提供更便捷的技术售后服务。目前全国雇员数量200多名，产品销售覆盖各大中型城市，是Eppendorf全球发展最快的子公司。

一提到细胞培养，这是多少实验者的噩梦，简直… … 说多了都是泪。小编经过软磨硬泡终于从师兄师姐那里讨到了细胞培养秘籍，今天就大方一回，分享给大家。★ 血清与培养基的选择一般实验血清的添加比例为10%，也可根据细胞状态和生长速率适当增加或减少添加比例。对于培养基，建议选择商品化的，比较成熟，稳定性也较好。★ 培养瓶的选择目前商品化的细胞培养瓶主要为瓶盖是否带气孔两种。其中不带透气孔细胞培养瓶拧紧后需适当回旋瓶盖，保证CO2能顺利进入细胞培养瓶。细胞培养过程中，对于适应能力强的肿瘤细胞，可在传代3-4次后更换新的细胞培养瓶。对于非肿瘤细胞系如293T等细胞，建议每次传代更换新的细胞培养瓶来保证细胞状态。★ 细胞传代传代时通常使用胰酶消化法。该方法又分为干消化法和湿消化法。▶ 湿消化法：待细胞变圆，成流沙状脱落时即可加入新鲜培养基终止消化，1000rpm离心5min，弃去上清，用新鲜培养基重悬传代。▶ 干消化法：胰酶浸润后弃去胰酶，待细胞变圆后加入新鲜培养基吹下后再进行细胞传代。不同细胞的细胞间连接强度不一样，消化时间不同；不同细胞的贴壁能力不同，消化时间不同；消化时应观察细胞形态，避免因过度消化影响细胞活性。★ 细胞冻存与复苏当细胞生长状况较好或者代数较早时，需及时大量的冻存。细胞冻存密度通常为1-3×106个/ml。通常4℃放置0.5h，-20℃放置2h，-80℃冰箱中过夜，取出冻存管，移入液氮容器内。细胞复苏38℃水浴不时摇动，在1分钟内使其完全融化，1000rpm离心5min,弃去上清，用新鲜培养基重悬移入培养瓶中。★ 污染防控细胞培养最基本的是做好污染防控，包括微生物污染的防控和细胞系间交叉污染的防控。实验中需保持良好的操作习惯，所用材料的位置摆放要顺手，污染源和已灭菌物品要分开放置。实验室也需定期清洁与消毒。ECHO强大的活细胞成像工作站INCUBATOR+REVOLUTION智能电动化显微镜

p　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "简介/span/strong/pp　　用于重组蛋白和单克隆抗体(mAb)生产的细胞培养工艺有不同的方式。补料分批(Feb-Batch)工艺由于操作简单，且较易规模放大，被临床和商业化生产广泛采用，目前的技术发展已可在18天内获得20-30x10^6cells/mL的细胞密度，同时获得 10g/L的滴度水平。/pp　　灌流工艺以往更多用于生产不稳定的产品，如血液凝集因子和酶类产品，但也有用于生产 mAb产品，如Remicade(英利昔单抗)。在灌流培养中，通过培养基置换，降低产物在反应器内的滞留时间，而灌流速率取决于特异性的产物和/或工艺需求。/pp　　近几年，在上游工艺中，基于灌流的工艺强化获得了极大的发展，驱动力主要来自于对降低成本和占地的需求，以及提高设备灵活性。随着细胞系、培养基和细胞截留设备的发展，现在的灌流工艺已可获得较高的细胞密度和产量，使其成为一个非常有吸引力的选择，包括mAb的生产。例如，在mAb生产中，结合2vvd的培养基置换速率，通常可达到50-60x10^6cells/mL的稳态细胞密度，以及高达4g/L/day的生物反应器产率。此外，浓缩补料分批(CFB)也可以通过培养基置换，维持高细胞密度，而将产物截留在生物反应器内。/pp　　灌流和CFB的差异在于所用的中空纤维膜的孔径。对于抗体，使用Per.C6细胞系，可在12-13天内，达到21.4g/L的终产物滴度(峰细胞密度 150x10^6cells/mL)，而使用CHO细胞系时，可在16天内达到25.3g/L的滴度，峰细胞密度 180x10^6cells/mL。随着生物反应器产率的提高，可使用占地更小、成本更低的一次性设备，来替代大规模的不锈钢设备(10,000-25,000L)，通过增加设备轮转或连续工艺，生产等量的产物。/pp　　尽管灌流工艺可使用基于过滤的细胞截留设备，如TFF和ATF，在生物反应器内获得并维持高细胞密度，但通常会要求使用较高的培养基置换速率，以将高密度细胞的活性维持在可接受的水平。与不同工艺相关的培养基成本是评估其生产等量产物时经济性的关键因素。而即使单位培养基成本适当，较高的培养基置换速率也会显著影响生产产品成本(CoG)，亦即，上游操作成本与培养基成本紧密相关。/pp　　生产单位产品的总生产CoG和上/下游成本的比重会随产物滴度和设备尺寸的变化而变化。在分析CoG的所有输入值中，一旦工艺确定，培养基用量及其成本是固定的，不管设备、设施等是否发生改变。细胞培养工程师的一个主要目标是降低培养基成本，同时获得高产量。本文使用相同的基础(basal)和补料(feed)培养基，稍作优化，开发了具有高生物反应器产率的不同细胞培养工艺(补料分批、灌流和CFB)，并比较了不同操作模式的生物反应器产率及其相关的培养基成本。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "实验/span/strong/pp　　实验使用生产单克隆抗体的重组CHO细胞系，不同工艺使用相同的3L生物反应器，培养基使用专利的基础(basal)和补液(feed)培养基，后者又分为两种补液-A和补液-B，均富含葡萄糖、氨基酸、维他命等。详细细胞系和种子扩增、生物反应器操作信息请参看原文。/pp　　对于补料分批培养，反应器起始工作体积1.5L，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过3天的N-1灌流来达到目标密度。生物反应器补液以每日葡萄糖水平为基础进行。/pp　　对于CFB工艺，使用50kD PS中空纤维过滤器的灌流设备，对于灌流，使用0.2μm PES中空纤维过滤器的灌流设备。接种密度1x10^6cells/mL，工作体积1.3L，一般第2天开始培养基置换，最大置换速率1vvd。灌流培养在第8天开始进行细胞废弃(cell bleeding)，以维持所需细胞密度和活性。/pp style="text-align: center"img src="http://img1.17img.cn/17img/images/201711/insimg/b370cbae-a09d-4aad-901e-9998bacb5c16.jpg" title="1_副本.jpg"//pp style="text-align: center "　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "不同细胞培养模式图解(xu et al, 2017)/span/strong/pp　　细胞培养每日取样分析，详细分析内容和方法，请参考原文。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "讨论/span/strong/pp　　不同操作模式的细胞培养性能/pp　　实验测试操作模式包括：补料分批、灌流和CFB，使用相同的3L生物反应器规格以及基础和补料培养基组合，以便比较细胞/生物反应器产率和培养基成本。/pp　　补料分批模式 对于补料分批模式，接种密度为0.5或2x10^6cells/mL，后者通过N-1灌流，可使对数生长期降低2天，所以8天就可达到峰密度，而前者需要10天。两种条件达到的峰细胞密度范围均为20.2-26.2x10^6cells/mL。两种接种密度在第14天分别达到5.4± 0.1g/L和6.8± 0.2g/L的滴度。生物反应器单位体积产率(VPR)按最终生物反应器滴度除以培养周期计算。2x10^6cells/mL接种密度条件，相比0.5x10^6cells/mL，可获得更高的VPR(0.49± 0.01g/L/day vs. 0.39± 0.01g/L/day)，主要是由于前者降低了起始生长阶段的时间，延长了生产期。/pp　　灌流模式 在灌流培养中，使用了2种不同的培养基组成：1种只使用基础培养基，另一种为基础加补液-A。在培养过程中，通过合适的cell bleeding，维持较高的活性 85%。只使用基础培养基时，平均细胞密度为44± 4.1x10^6cells/mL，从第8天至32天的日产量为0.7± 0.04g/L/day。在基础+补液条件中，随细胞密度的增加，补液-A作为培养基置换的一部分，逐渐引入，而总培养基置换率保持为1vvd，平均细胞密度增加至73.9± 5.4x10^6cells/mL，日产量增加至2.29± 0.28g/L/day。细胞特异性产率从16.0± 1.2pg/cell/day增加至30.1± 2.3pg/cell/day，从而使反应器产量增加~230%。/pp　　浓缩补料分批模式(CFB) 与灌流相似，评估了只使用基础培养基和使用基础+补液培养基的条件。与灌流工艺相比，CFB不需要进行cellbleeding，细胞质累积至更高的水平。当只使用基础培养基时，在第18天达到峰细胞密度72.0± 9.6x10^6cells/mL，上清液滴度为12.2± 0.6g/L。使用基础+6%补液-A+2%补液-B时，峰细胞密度为117.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为21.4g/L，使用基础+8% 补液-A +8% Feed-B时，峰细胞密度为83.4x10^6cells/mL，第18天上清液滴度为36.7g/L。可见，增加补液-A和补液-B的量，可显著提高细胞特异性产率至45.1pg/cell/day。/pp　　细胞特异性产率、生物反应器产率和产物质量/pp　　当只使用基础培养基时，批次、灌流和CFB工艺可达到相似的qP，范围为14.7-17.1pg/cell/day。在此条件下，累积的细胞数量会直接影响产物滴度和单位体积产率。正如预期，批次培养的VPR显著较低，仅为0.08g/L/day，而灌流和CFB工艺由于可维持更高的细胞密度，可获得相当的VPR，0.68-0.70g/L/day。/pp　　浓缩补液培养基通常用于补料分批工艺，以提高细胞生长和细胞特异性产率。在此研究中，补加补液培养基，可显著提高qP和VPR。对于补料分批培养，qP提高至29.4-32.0pg/cell/day，VPR达到0.39g/L/day(接种密度0.5x10^6cells/mL)或0.49g/L/day(接种密度2x10^6cells/mL)。N-1灌流获得的更高的接种密度可提高VPR，因为缩短了生长期的时间，延长了生产期，提高产量。但是，即使与只使用基础培养基的灌流和CFB相比，补料分批培养的VPR仍较低，因为细胞密度差别显著。/pp　　相比补料分批工艺，只使用基础培养基以1vvd的速率进行培养基置换时，可轻松地将细胞密度提高2-3倍。而与只使用基础培养基的条件相比，在灌流培养中补充10%补液-A可使VPR提高~230%，qP提高~90%。相似的，在CFB工艺中，补充不同比例的补液-A和补液-B可将VPR提高至1.19-2.04g/L/day。/pp　　最近有报道显示，长寿命的人浆细胞可在体外维持120pg/cell/day的IgG分泌率，对于基因工程哺乳动物细胞，最高生产速率估计为~100pg/cell/day。qP的提高将来自于细胞系和培养基的优化。所以，理论上，在灌流工艺中，如稳态细胞密度维持为100x10^6cells/mL时，每日产量可高达10g/L/day。/pp　　实验同时评估了不同操作模式的产物质量特征，结果显示，CFB会形成更高水平的HMW和稍高的酸性异构体，主要是由于产物所暴露的细胞培养环境。在补料分批和浓缩补料分批中，产物滞留时间为整个培养周期。此外，在仅使用基础培养基的CFB工艺中，HMW最高，说明培养基组成可能在HMW形成中扮演了重要的角色。但是，产生的HMW仍低于5%，且大部分可在纯化步骤中去除。另一方面，即使是相同的高细胞密度环境和相似的培养基组成，灌流培养的酸性异构体和HMW更低，可能是由于产物在罐内更低的滞留时间。/pp　　培养基成本分析/pp　　由于细胞系或培养基组成的变化会显著影响产物滴度/产率，所以对不同操作模式的比较需使用相同的细胞系和培养基条件才有意义。本文使用从小规模生物反应器获得的细胞培养性能，来比较不同操作模式的培养基成本，并假定在规模放大时，不同工艺没有显著的产率下降。需要指出的是，实验中的灌流速率没有在对数生长期，以细胞特异性为基础，进行良好的优化。相反，在整个培养周期中，将灌流速率固定为1vvd。在不同的培养阶段，对细胞特异性灌流速率进行精细调节，应可进一步降低培养基用量和成本。/pp　　当只使用基础培养基时，生产每克抗体的培养基成本在批量和灌流工艺中都很高。加入适量的补料培养基，可降低每克mAb的培养基成本，且即使补料培养基相对较贵，细胞密度和qP的增加相比培养基成本的增加更加显著。/pp　　使用N-1灌流的补料分批的培养基成本比常规补料分批工艺低，N-1灌流需要3x基础培养基置换，但因接种密度的提高，继而获得的滴度的增加，抵消了培养基用量的增加。N-1灌流的补料分批和灌流的培养基成本相当，~$10/g mAb。这说明，虽然往常认为由于较高的灌流速率，灌流的培养基用量更高，继而培养基成本更高，但只需要生物反应器产率达到一定的阈值，从培养基成本上来看，还是相当有竞争力的。/pp　　CFB工艺的培养基成本与其它操作模式的趋势不同。在只使用基础培养基的条件中，成本与批量和灌流工艺相当，但CFB培养基成本会随补料培养基的使用而增加，其相对较高的培养基成本( $17/g)可能是因为需要较长的细胞生长时间，在培养中，直到第10天，细胞密度达到峰水平，才开始出现显著的产物滴度增加。降低CFB培养基成本的一种方法是优化细胞寿命，延长批次时间，但更长的罐内滞留时间，可能会影响产物质量属性，或是进一步优化培养基，如替换昂贵的成分和优化其滴度。/pp　　总生产COG/pp　　除了培养基成本的不同，使用诸如灌流和CFB之类的工艺，结合一次性设备，在小规模上进行生物制品生产，可显著降低成本投入，从而获得更加灵活的生产策略，当产品需求增加时，可以快速地进行规模扩展(scale out)，而不是规模放大(ScaleuP)。与传统不锈钢设备相关的固定成本，可以转变为“可变”的成本结构。基于此处的案例，灌流工艺的培养基成本实际上低于补料分批工艺。/pp　　进行总成本分析时，如下游均以批量模式进行，且认为不同工艺的劳动力成本相当，则本文建模分析结果显示，N-1灌流的补料分批和灌流工艺的下游CoG/g相当，分别为$63/g和$59/g，而标准补料分批和CFB工艺的下游CoG/g稍高，分别为$71/g和$81/g。对于mAb和不稳定的产品，基于灌流的连续工艺都可以提供显著的经济优势。/pp　　strongspan style="color: rgb(0, 112, 192) "总结/span/strong/pp　　在本研究中，比较了不同操作模式下，生物反应器的产率，包括补料分批、灌流和CFB工艺。对于研究的细胞系，qP高度取决于所用的培养基，不管采用哪种操作模式，这使得累积细胞密度成为决定产物滴度和生物反应器产率的主要因素。结果显示，补料分批培养生物反应器产率最低(0.39-0.49g/L/day)，而基于灌流的培养方式，由于可维持更高的细胞密度，产率相对较高，灌流为2.29g/L/day，CFB为1.19-2.04g/L/day。灌流的一个显著优势是可以达到并维持极高的细胞密度，用于产物形成。/pp　　灌流工艺一个经常观察到的缺点是培养基用量较高，因为需要进行连续的培养基置换，以维持所需的高活细胞密度。这里的研究显示，高产率灌流培养的培养基成本实际上低于补料分批工艺。CFB工艺的培养基成本最高，虽然在18天内达到了36.7g/L的极高滴度，为降低CFB工艺的培养基成本，建议可以精调培养基置换率，以在起始的生长阶段获得更好的培养基利用，或通过培养基优化，提高细胞特异性产率。/pp　　i小编出于交流目的编译此文，由于水平有限，不当之处，敬请谅解，详细内容，请参看原文。/i/ppi　　原文：S.Xu, J.Gavin, R. Jiang, et al., Bioreactor Productivity and Media Cost Comparison for Different Intensified Cell Culture Processes. Biotechnol. Prog., 2017, Vol. 00, No.00./i/ppbr//p

细胞培养产品质量有了标准保障，由中国计量大学教授陈春主持制定的国家标准《细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的测定 气相色谱-质谱（GC-MS）法》（GB/T 43778-2024）近日正式发布并实施。该标准有效填补了当前细胞培养过程中有毒有害物质残留检测方法的空白，为细胞培养产品的质量控制提供了更为科学可靠的依据。细胞（含体细胞、干细胞）制剂的质量控制及其潜在有毒有害物质检测限值是其开展临床应用的前提。随着细胞制剂在生命健康领域中应用的快速发展和不断扩大，其临床应用及科研实验相关标准的制定成为关注焦点。“在细胞的分离培养制备过程中，实验人员会大量使用和接触培养瓶、移液管，这些材料属于非医疗器械，使用过程中有毒有害物质可能残留、迁移到培养液中，而且目前尚无相应的检测标准。”陈春介绍说，已有医疗器械类材料中有毒有害物质的检测标准，并不适用于细胞制备过程中培养液里有毒有害残留物的检测，且缺乏相应的检测标准，风险难以得到有效控制，可能引起不同细胞（干细胞）的分化潜能改变和致突变等，给后续的临床应用带来不良影响。陈春团队联合中国测试技术研究院生物研究所、中国计量科学研究院等10家单位，历时30个月，建立了气相色谱-质谱法检测标准，为细胞培养液中苯乙烯、2-氯乙醇的残留量提供灵敏、快速、有效的检测方法，保证细胞制剂质量安全及临床应用安全。

瑞士Tecan近期升级了多功能酶标仪Infinite 200 PRO的气体控制模块技术GCM&trade （专利申请中）。此模块能够精准地同时调节仪器腔体内O2 和 CO2 的浓度水平，为更广泛的细胞生物学研究与应用提供了严格的环境控制方案。作为细胞学研究实验的重大突破，最初的GCM模块如今被进一步强化完善，现在它不仅能够大幅提高O2浓度检测的精确度，还能最大限度地减少交叉干扰。该升级模块整合了重新设计的独立气流通道，能够对仪器腔体内的O2 和 CO2 的浓度水平进行精准且独立的控制调节，同时，协同独特的高度修正技术对CO2气体分压的变化进行自动补偿。 这项最新升级模块确保了多种细胞学应用研究的生物学相关性，为基于微孔板的厌氧菌或兼性厌氧菌研究开启了新窗口，同时也非常有利于真核细胞在低氧或生理环境中进行DNA复制。除此之外，Infinite 200 PRO多功能酶标仪的细胞生物学导向功能还包括增强荧光强度底部阅读模块(OR)、线性与环形振板模式、高级温控模块以及自动Z 轴聚焦调整功能。这一全方位解决方案为以细胞为基础的检测分析技术设立了新标准。 更多关于Tecan Infinite 200 PRO多功能酶标仪的气体控制技术GCM，请访问以下网站或咨询Tecan当地员工/经销商：www.tecan.com/gcmTecan最新气体控制模块GCM可以同时检测控制O2 和 CO2 的浓度水平Talk to Tecan欲知更多详情，请联系帝肯（上海）贸易有限公司Tel: 021 2206 3206 / 010 8511 7823Fax: 021 2206 5260 / 010 8511 8461infotecancn@tecan.com www.tecan.com

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