荧光寿命成像显微镜

关于荧光寿命显微镜. 第一次发明这个技术的是小日本京都大学.现在小弟需要他们关于这个技术的第一次发表的文章.E 文,日文都可以谢谢大家了.继续这个文章用来写我的Research Paper 的.

如何延长金相显微镜的使用寿命(显微镜的使用方法）使用时显微镜时应注意以下几点：（现仅以金相显微镜的使用方法为例作为说明）1、条件许可情况下，建议您的试验室应具备三防条件：防震（远离震源）、防潮（使用空调、干燥器）、防尘（地面铺上地板）；电源：220V±10%，50HZ；温度：0°C—40°C。2、金相显微镜调焦时注意不要使物镜碰到试样，以免划伤物镜。3、当载物台垫片圆孔中心的位置远离金相显微镜物镜中心位置时不要切换物镜，以免划伤物镜。4、亮度调整切忌忽大忽小，也不要过亮，影响灯泡的使用寿命，同时也有损视力。5、所有（功能）切换，动作要轻，要到位。6、关机时要将亮度调到最小。7、非专业人员不要调整照明系统（灯丝位置灯），以免影响成像质量8、更换卤素灯时要注意高温，以免灼伤；注意不要用手直接接触卤素灯的玻璃体。9、关机不使用时，将物镜通过调焦机构调整到最低状态。

一般显微镜都是有使用寿命的，但是不同的操作人员使用，寿命会有所不同，这个跟平时的操作习惯和后期维护有很大的关系，想了解这方面知识的可以仔细看完本文，本篇文章主要以金相显微镜为例，其它类型显微镜可参考本文：1） 把所使用的金相显微镜真正当作自己的财产，轻拿轻放。2） 亮度调整方面，要适当，一般情况下建议不要调到最亮，也不要调到最暗，能满足工足条件即可。3） 工作过程中，要注意保护物镜，注意不要让硬物、尖物划伤物镜，对镜对造成损害。4） 如果操作完成，请将显微镜的亮度调到最低。5） 显微镜对于工作环境也是有要求的，理想的工作环境应该满足防潮、防震、防尘三个条件，温度也是建议不要太高或太低，0摄氏度~40摄氏度之间为最佳。6） 为了保证成像质量，显微镜的照明系统(灯丝位置灯)，不是专业人士应该严禁触碰和调整。7） 显微镜在操作完成以后，物镜的焦距要调到最低。8） 显微镜在操作完以后，停止使用，为了防尘，通常会盖上防尘罩，这个时候需要注意的就是防火，正确操作就是应该等机器等却以后再盖防尘罩。其它的各人在操作的时候都会有一些自己的技巧，也欢迎同我们分享发布。

使用时显微镜时应注意以下几点：（现仅以金相显微镜的使用方法为例作为说明）1、条件许可情况下，建议您的试验室应具备三防条件：防震（远离震源）、防潮（使用空调、干燥器）、防尘（地面铺上地板）；电源：220V±10%，50HZ；温度：0°C—40°C。2、金相显微镜调焦时注意不要使物镜碰到试样，以免划伤物镜。3、当载物台垫片圆孔中心的位置远离金相显微镜物镜中心位置时不要切换物镜，以免划伤物镜。4、亮度调整切忌忽大忽小，也不要过亮，影响灯泡的使用寿命，同时也有损视力。5、所有（功能）切换，动作要轻，要到位。6、关机时要将亮度调到最小。7、非专业人员不要调整照明系统（灯丝位置灯），以免影响成像质量8、更换卤素灯时要注意高温，以免灼伤；注意不要用手直接接触卤素灯的玻璃体。9、关机不使用时，将物镜通过调焦机构调整到最低状态。

1、条件许可情况下，建议您的试验室应具备三防条件：防震(远离震源)、防潮(使用空调、干燥器)、防尘(地面铺上地板)；电源：220V10%，50HZ；温度：0C-40C。2、调焦时注意不要使物镜碰到试样，以免划伤物镜。3、当载物台垫片圆孔中心的位置远离物镜中心位置时不要切换物镜，以免划伤物镜。4、亮度调整切忌忽大忽小，也不要过亮，影响灯泡的使用寿命，同时也有损视力。5、所有(功能)切换，动作要轻，要到位。6、关机时要将亮度调到最小。7、非专业人员不要调整照明系统(灯丝位置灯)，以免影响成像质量。8、更换卤素灯时要注意高温，以免灼伤；注意不要用手直接接触卤素灯的玻璃体。9、关机不使用时，将物镜通过调焦机构调整到最低状态。10、关机不使用时，不要立即该盖防尘罩，待冷却后再盖，注意防火。以上几点仅是一些应特别注意的地方。希望大家在使用过程中应小心加细心，如确实在使用显微镜时有遇到难题自己无法解决时，可立即电话联系显微镜商家寻找解决方法。

1、条件许可情况下，建议您的试验室应具备三防条件：防震（远离震源）、防潮（使用空调、干燥器）、防尘（地面铺上地板）；电源：220V±10%，50HZ；温度：0°C—40°C。 2、调焦时注意不要使物镜碰到试样，以免划伤物镜。 3、当载物台垫片圆孔中心的位置远离物镜中心位置时不要切换物镜，以免划伤物镜。 4、亮度调整切忌忽大忽小，也不要过亮，影响灯泡的使用寿命，同时也有损视力。 5、所有（功能）切换，动作要轻，要到位。 6、关机时要将亮度调到最小。 7、非专业人员不要调整照明系统（灯丝位置灯），以免影响成像质量。 8、更换卤素灯时要注意高温，以免灼伤；注意不要用手直接接触卤素灯的玻璃体。 9、关机不使用时，将物镜通过调焦机构调整到最低状态。 10、关机不使用时，不要立即该盖防尘罩，待冷却后再盖，注意防火。以上几点仅是一些应特别注意的地方。希望大家在使用过程中应小心加细心，如确实在使用显微镜时有遇到难题自己无法解决时，可立即电话联系显微镜商家寻找解决方法。

经过调查，纺织品纤维还是用红外显微镜来做比较合适和方便，感谢版上的各位大侠的指导和建议！尤其是happyalife！又出现了新的问题，红外显微镜国内用户多不多？是不是技术也和红外光谱一样成熟，故障率很少？Nicolet，Bruker，Varian，PE，哪个厂家的红外显微镜效果，质量，寿命和售后比较好啊？[em0808]

[b][url=http://www.f-lab.cn/vivo-imaging/micron-iv.html]小动物视网膜成像显微镜Micron IV[/url]特点： [/b]可用于明场、血管结构和荧光(GFP,YFP,mCherry,CFP标记)成像。定制的最先进低噪音三芯片CCD：高灵敏度捕捉微弱的荧光。 近红外成像（可达700-900nm，最高到900nm）视网膜成像精度：小鼠4 μm，大鼠8 μm位滤光片轮，双回补灯及滤光片配置，更加灵活，包含荧光及近红外滤光片，提供亮场和荧光成像模式
 实验台：可三维翻转及旋转，便于调整大小鼠眼睛角度清晰成像。[img=小动物视网膜成像显微镜]http://www.f-lab.cn/Upload/Micron-retinal-imaging.jpg[/img]小动物视网膜成像显微镜Micron IV可提供分辨率达4 μm的高清晰视网膜影像，且与荧光显微镜类似，可观察明视野和荧光（Ex. CFP, GFP, mCh erry等) 影像。方便的软件设计可直接从明场成像转换至荧光成像。[url=http://www.f-lab.cn/Upload/retinal-imaging-micron.jpg][img=小动物视网膜成像显微镜]http://www.f-lab.cn/Upload/retinal-imaging-micron.jpg[/img][/url][b]小动物视网膜成像显微镜Micron IV应用范围：[/b]荧光血管造影糖尿病视网膜病变视网膜母细胞瘤视网膜黄斑衰退症早产儿视网膜病变脉络膜新生血管小动物视网膜成像显微镜：[url]http://www.f-lab.cn/vivo-imaging/micron-iv.html[/url]

仪器名称 OLYMPUS荧光显微镜 型　　号 BX51TF 主要指标 1、目镜放大倍数10X； 2、物镜放大倍数分别为 4，10，20，40，100X（油镜）； 3、制冷CCD摄像头（300万像素）与IBM电脑连机操作； 4、除明场（Bright Field）外，还可产生四种激光（蓝Blue，绿Green，紫外UV，黄Yellow）。 功能范围 1、用于明场下染色标本的观察和拍照； 2、主要用于荧光染色标本和免疫杂交标本的观察和拍照。 荧光显微镜操作步骤 1、使用前确保你已经熟悉显微镜的基本操作，否则不允许操作。 2、先开电源（ON），启动发光器，再开照相机电源。以免先照相机再开荧光显微镜电源时，强大电源将照相机电子零件烧损。 3、在显微镜下找到需要的物象后，打开电脑的成像系统。需要使用荧光时，请务必预热荧光灯电源15分钟。 4、选择滤镜，将滤镜推入（以免光线向外散失）后，于暗室下开始观察。应一次把全部玻片观察完毕，勿中途切断电源，否则须待冷却后（约30分钟）才能再开电源。最少开机30分钟才可关机，以免缩短灯泡寿命。 5、荧光色素于普通光线照射下易消失，故未观察之标本宜置不透光盒内储存于冰箱（4～5℃）。而在荧光显微镜之紫外线照射下亦易使荧光消失，故照像宜速。 6、等冷却后，再将防尘罩罩上。 7、测试完毕后，请认真填写登记表格。 8、本区春夏气候潮湿，存放荧光显微镜暗室应有除湿设备，并每星期将荧光显微镜至少开机一次，以免显微镜发霉损及镜头与滤光镜。

荧光显微镜的原理 ：荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光、激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高，主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源 、激发滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光光源——般采用超高压汞灯(50一200W)，它可发出各种波长的光，但每种荧光物质都有一个产生最强荧光的激发光波长 ，所以需加用激发滤片（一般有紫外、紫色、蓝色和绿色激发滤片），仅使一定波长的激发光透过照射到标本上，而将其他光都吸收掉。每种物质被激发光照射后，在极短时间内发射出较照射波长更长的可见荧光。荧光具有专一性，一般都比激发光弱，为能观察到专一的荧光，在物镜后面需加阻断(或压制)滤光片。它的作用有二：一是吸收和阻挡激发光进入目镜、以免于扰荧光和损伤眼睛，二是选择并让特异的荧光透过，表现出专一的荧光色彩。两种[url=http://www.gengxu.cn]滤光片[/url]必须选择配合使用。荧光显微镜就其光路来分有两种：1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。荧光显微镜使用方法．1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的插块。3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。4．放置标本片，调焦后即可观察。 使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。荧光显微镜的观察在示教台上的荧光显微镜下用蓝紫光滤光片，可见经o．01％的丫啶橙荧光染料染色的细胞，细胞核和细胞质被激发产生两种不同颜色的荧光(暗绿色和橙红色)。

主体内容：操作步骤如下：荧光显微镜的使用程序荧光显微镜基本操作1．关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯；2．根据样品标记的荧光素选择相应的滤光片；3．放好样品，找到合适的视野；4．如需拍照，请确认照相机内已装好彩色胶卷（最好使用27定胶卷）；5．开启自拍装置，选择手动档，通常拍摄速度在0.5---10秒内；6．使用结束，关闭所有电源并做好使用记录。注：A．为延长汞灯的使用寿命，汞灯开启不到15分钟的请在15分钟后关闭汞灯。B．在荧光状态下观察标本，标本内的荧光染色会较快的衰减，所以要避免长时间的在荧光下观察。

瞬态荧光光谱是用来测荧光寿命，荧光衰减曲线的，但是荧光寿命成像（FLIM）的时候也能得到各个点的衰减曲线，也能得到荧光寿命。这两个一样么?能直接用FLIM来做荧光寿命的分析么？求高手指教~不胜感激

请问在上海什么地方可以做荧光寿命成像请问什么地方可以做荧光寿命成像（FLIM）？

显微镜(microscope)简称光镜，是一种将肉眼无法看清楚的微生物体进行光学放大成像的常用仪器。在生命科学、材料科学、基础科学及众多的微观领域中都离不开显微镜。1590年.荷兰的Han，父子始创放大10倍显微镜。175.8年，Dollond制成消色差透镜，提高了显微镜放大倍数。1873年，德国科学家Abbe设计成近代显微镜。1953年.上海江南光学仪器厂国产显微镜诞生，并陆续生产了荧光、相衬、偏光等专用显微镜。生物及医用显微镜可分为光学放大及电子放大两大类。前者按用途可分为普通型、特种型、高级型显微镜和手术显微镜。普通型生物显微镜仅供一般用途使用，通常的农用与医用显微镜、倒税显微镜均属这一类。特种型生物显微镜可作某些专用的观察和研究。暗场生物显微镜、荧光显微镜、偏光显微镜、相衬和干涉相衬显微镜等均属于这一类。高级型生物显微镜系指大型多用途的生物显微镜.研究用生物显微镜和万能研究用生物显微镜等属于这一类。一、显微镜放大成像系统显微镜光学系统由物镜和目镜两部分组成。因为被观测的物体本身不发光，而要借助于外界照明，故显微镜需要有一个照明系统，这些部分都是由较复杂的透镜组成，尤其物镜更为复杂。下图是显微镜成像的光路原理图，图中的物镜和目镜均用薄透镜表示。http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-93-1.jpg显微镜成像原理显微镜的物体AB处于物镜的2倍焦距之内一倍焦距之外，它首先通过物镜成一放大的倒立实像A'B'，且使之位于目镜的物方焦平面上或焦平面以内很靠近的地方，然后目镜将这一实像再次成一个正立虚像A"B"于无限远或人眼明视距离之外，以供眼睛观察。显微镜对物体进行2次放大，因此与放大镜相比，具有更高的放大倍率，能观察到肉眼所不能直接观察的微小物体，分辨更细小的细节。在这里目镜相当于放大镜，只不过这时放大镜的物是物镜所成的像而已。由于物镜所成的像是实像.因而可在实像处(即目镜的物方焦平面处)安放各种用途分划板.供对准或测量用。二、显徽镜的放大率与分辨本领1.显微镜的分辨本领 分辨本领主要指接物镜分辨被检查物体细微结构的能力，也就是说在显微镜下判别的最小微粒的大小或两点之间最短距离及某物点最小直径的限度，便叫做显微镜的分辨本领.或称为鉴别率。通常用d表示:http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-14-1.jpg式中.A表示波长;n sins (NA)表示数值孔径。 从式中可知，显微镜的分辨率主要取决于光的波长和数值孔径这两个因素。d值越小，分辨本领也就越强，越能看清物体的细微结构。鉴别率计算单位是Um. 显微镜的鉴别率的提高只有两个办法: (1)增大物镜的数值孔径(镜口率)。从图可以看出，影响数值孔径(n sina)的因素有两个:其一为物体上某点射人物镜光锥角(镜口角)的一半(sina);其二为检品与物镜间媒质的折射率n。即数值孔径为NA = n sine镜口角半数最大能到900，故si na的最大值为1.00，这时物镜的焦距最短而曲度也很大，制造上是极为困难的。即使能办到，在干燥系中的镜口率只有1 x sin90“（控气n二1)。若再增大镜口率便只有从媒质着手，所以便有水、甘油，石蜡油和香柏油等浸润均匀媒质的应用，确实改进了镜口率不少.它最高可到1.40。如果用澳萘液可达1.67左右，更接近盖片和透镜的折射率。http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-51-1.jpghttp://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-44-1.jpg (2)缩短光源的波长:采用紫外线作光源，波长可到0.1Um，这样放大倍数比自然光放大的倍数大3-4倍，普通紫外线光波在0.2 Um左右，即使能产生出0.1 Um波长的紫外线.一般透镜也将把它吸收干净.无法利用。显微镜的最大数位孔径可达1.5 Um左右，在这种情形下: http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-33-1.jpg即在这种显微镜里，仍可分辨的两点间最短距离差不多等于所用光波波长的1/30假定绿光的光波的波长http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-23-1.jpg那么显微镜能分辨的最短距离为:http://www.yi7.com/file/upload/201201/07/14-00-33-89-1.jpg 则这台显微镜的最高分辨距离也超不过。.182 Um。肉眼在明视距离(250 mm)能分辨的两点之间最短距离为0.1 mm，约为上述d值的560倍.因此I台光学显徽镜的放大率有100()倍也就足够了。这是因为光的本性及光的绕射现象就限制了显徽镜的放大极限。凡是光波超过微粒直径的2倍时，光线就很方便地绕过微粒而继续前进，所以普通干燥系显微镜的最大鉴别率只能达到光源波长的1/2，直径小到0.2 5m的微粒就无法被光学显微镜发觉。虽然后来应用浸润系方法，如油镜，提高了折射率，其鉴别率也只不过能提高到光源波长的1/3而已。而且还要用最好的透镜才能达到。

1．透射式荧光显微镜: 激发光源是通过聚光镜穿过标本材料来激发荧光的。常用暗视野集光器，也可用普通集光器，调节反光镜使激发光转射和旁射到标本上．这是比较旧式的荧光显微镜。其优点是低倍镜时荧光强，而缺点是随放大倍数增加其荧光减弱．所以对观察较大的标本材料较好。 2．落射式荧光显微镜这是近代发展起来的新式荧光显微镜，与上不同处是激发光从物镜向下落射到标本表面，即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜。光路中需加上一个双色束分离器，它与光铀呈45。角，激发光被反射到物镜中，并聚集在样品上，样品所产生的荧光以及由物镜透镜表面、盖玻片表面反射的激发光同时进入物镜，反回到双色束分离器，使激发光和荧光分开，残余激发光再被阻断滤片吸收。如换用不同的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的组合插块，可满足不同荧光反应产物的需要。此种荧光显微镜的优点是视野照明均匀，成像清晰，放大倍数愈大荧光愈强。

显微镜使用的光学技术是它的核心，这种显微镜产品的好坏，最主要看的当然也就是其光学系统，采购金相显微镜，最基本的原则就是要看显微镜的光学系统的好坏。金相显微镜可以在很多领域应用和发挥其重要作用，需要用显微镜进行分析和观测的物体形状、材质也都是不一样的，工作要求也千差万别，根据这些不同的要求，我们要关注的金相显微镜的光学系统要求也要不同。1、成像质量在用金相显微镜对要观察的试验件或产品使用中，显微镜的成像质量非常重要，一个合格的成像应该要满足高反差、高亮度、色还原好和高分辨率等4个条件，在显微镜的领域名里，一个高质量的成像我们称之为锐利图像，除了上面的4个基本条件，我们还有一些不应该遗漏的地方如反差、亮度、色还原，要综合来看才是最准确的，只关注成像高分辨率或高反差，都是不行的。2、机械稳定性金相显微镜的设计寿命很长，一般而言，标准的金相显微镜使用寿命应该不低于30年，所以除了关注金相显微镜的成像质量，还要关注“机械稳定性”，“机械稳定性”指的就是应该随着使用时间的变长显微镜能持续保持高稳定的工作状态的时间长久，毕竟金相显微镜不是一种易耗品，金相显微镜的价格既比较高，使用寿命也比较长，所以我们建议采购金相显微镜还需要关注1、原材料2、制造精度3、机械设计。举个例子：金相显微镜上有粗调控制按钮，这块是否能坚持长时间的使用，是否会容易损坏，使用时间变长以后，是否有顿挫感等等

显微镜是实验室，特别是生物实验室必备的仪器，配备量比较大，因此正确选购显微镜很重要，不但能满足需要，还能节约经费。一般我们可以从以下几个方面来考虑。 　　(1)显微镜按使用目镜的数目可分为单目、双目和三目显微镜，一般用户如果要求比较简单，而且只是想要个便宜一点的显微镜，那就选用单目显微镜，一般单目显微镜比较适用于小学生，中学生，还有一些小诊所使用，还有家长给孩子购买，用的比较多，价格比较实惠，一般成交价格在5百~8百左右。而双目显微镜的价格肯定比单目的高一些，可以用两只眼睛看，因此普通的成交价格在1500~2000左右。三目的显微镜一般成交价格在3千左右 　　(2)光学部分：显微镜质量的核心就是其光学部分，也就是目镜和物镜部分。对于物镜来说，一般可以分为几个级别。首先是消色差物镜，使用这种物镜，不是成像所有的地方都清晰，只有视野中央60%左右的范围清晰，外周40%部分会存在一定的缺陷。通常我们会把观察部分放在视野中央，所以并不影响观察。但是如果你想要100%视野没有缺陷的话，就要用平场消色差物镜，相对而言，这种的价格就会高很多，一般是用在医疗和科研方面。还有就是介于两者之间的，也就是半平场消色差物镜。学生用的显微镜选择前面两个级别就可以了。一般的便宜点的物镜均为普通的消色差物镜，成交价格都在2000元左右。好点的就复消色差物镜或是无限远消色差物镜，成交价格在3000元左右。如果是三目的价格还更高一千多元。所以用户选购目镜就比较简单，就是看其视野的大小，推荐用大视野的目镜，因为大视野的目镜相对与一般的具有更大开口，视觉效果更好。至于选择单筒还是双筒，要看你的用途和经费情况了。中学阶段一般单筒的显微镜完全可以达到要求，高校吗，最好还是选择双筒的。 　　(3)结构材料：显微镜的使用寿命很长，有些可以达到10年以上，那么高质量的零部件和严密的装配就成为其使用寿命的保证。因此，应选择具有稳固结实镜架的显微镜，材质最好选择是合金的，可以减少变形。另外镜头应该是光学玻璃的，外表漆层应为光滑均匀的。还要确信你所购买的显微镜是按照有关通用标准生产的，这样的话当你以后要买相关配件时候可以方便的购买到。 　　(4)光源：显微镜的光源一般有三种：钨丝灯、荧光灯、卤素灯，钨丝灯也就是白炽灯。这类灯的优点是价格便宜，能提供稳定光源，试试缺点是发出的光有明显的黄色，会影响观察，另外其产生的热量太多，长时间观察会对有些材料有影响。所以显微镜如果是钨丝灯的价格就相对便宜一点，荧光灯可以提供类似太阳光的光源，产生的热量也很少，而且同样功率的荧光灯比白炽灯要亮很多，所以荧光灯会比较省电，价格方面就要贵一些，一般价格全家的1万多，有的两三万，进口的就更贵了。卤素灯可以提供很亮很白的光源，一般配在高档的显微镜上，价格会更加贵一些，所以对于高校来说，没有必要选配。 　　现在也讲讲进口的显微镜为什么比国厂的显微镜价格来的高 　　第一：进口的显微镜光学系统比较好。成像效果比较清晰，说的具体点，，第一，他的光学系统会有所不同，，第二。他的物镜参数有所不同，，一般的便宜点的物镜均为普通的消色差物镜，好点的就复消色差物镜或是无限远消色差物镜，进口的同样的消色差物镜比国产的好，菱镜的镀膜比国产的好。其实剩下的也就没什么了，那些配件都不是很重要。，其次就是他们的品牌价值了，品牌价值占主要的部分，而且他的外观啊 材质啊 更好 更符合人机学原理。。用时间长了更不容易疲劳。。他的物镜目镜镀膜的好坏，直接影响到使用者的眼睛。所以说进口的显微镜比国厂的显微镜价格来的高，普通的生物显微镜，进口的成交价格都在1万左右。三目的就更贵7千左右。如果是配置好一些，便宜的要4万左右，贵的十几二十万 　　5.附属部件：显微镜选配时要考虑的附属部件主要集中于载物台的上面或者下面，也很重要的。比如光圈、聚光器等。在选购显微镜时，只要结合了以上这几点来选购显微镜你便会购买到适合自己的显微镜。

金相显微镜是的成像原理则是根据电子光学原理，用电子束和电子透镜代替光束和光学透镜，利用凸透镜的成像原理进行成像，使用非常高的放大倍数对细微结构的物质进行成像。普通的金相显微镜是根据凸透镜的成像原理，要经过凸透镜的两次成像。这点不同于望远镜的成像，望远镜成缩小倒立的实像。而不管是普通的金相显微镜，还是电子显微镜，都有一个重要的物件—透镜。金相显微镜当中有几个英文名词，大家可以了解一下，f 表示透镜焦距u 表示物体与透镜之间距离（简称物距）引用：www.bsdgx.com

(一)阿贝成像原理 为了理解相差尼康显微镜的原理，不得不回顾普通显微镜的成像原理。德国光学家阿贝(E. Abbe)从1874年以后创立了成像原理.在现代波动光学的发展基础上兴起的变换光学中的空间信息滤波和信息处理概念，就是奠基于阿贝成像原理。 据阿贝的看法，尼康显微镜的透镜或透镜组不只是反映物平面和像平面的共扼关系，而且也反映透镜前后的无数个对应平面的共扼关系。当然，显微镜的成像光路中最为重要的共扼面还是物平面和像平面(图10-18,0--0').显微镜成像光路中同样具有重要的共扼面是发光平面((KY1000显微镜)和光源的像平面(L')。 但是如果在显徽镜结构中在聚光镜的前焦面上放置孔径光栏时，那么光源和光源像两平面的共辘关系，代之以聚光镜前焦面的光栏平面和物镜后焦面的L"平面的共扼关系。 阿贝认为发光平面的共扼面即L’平面，是显微镜的初级成像平面，而物平面是次级成像平面。若通俗一点来讲，L‘烛光是L烛光的像，而O‘空间是L'烛光的像。 如果我们在尼康显微镜的初级成像光路上在聚光镜和物镜之间，擂入一张不同光密度的标本O(图10-20上是光栅)时，立即破坏了初级成像光路.这是因为标本细节的光密结构(栅)和光疏结构(间隙)的折射率不同，而产生光的衍射。其结果如图10-20所示，L烛光在它的像平面上出现了数支烛光。与此同时，在像平面上出现标本0的干涉像.这些干涉纹是由次波源。，一1,+1发射的衍射光的重叠所造的。这样由于标本的干涉次级成像过程，已由CM100的共扼面改变成CM300FL的共扼面。也就是说像平面上不是L，的像，而是标本0的像了。 总之，相干成像过程的第一步是形成衍射斑，而第二步是相干干涉.当然未染色生物标本细节的折射率有很小的差异，在像平面上的对比度非常小。为了提高物像的对比度(反差)，荷兰物理学家(F. Zernike(1935)设计了相差显微镜的基本部件如环状光栏和位相板。 从阿贝成像原理已经知道尼康显微镜的聚光镜前焦面上放置孔径光栏时，这个平面就成为物镜后焦面的共扼面。F. Zernike在这个平面上放置了环状光栏，按空间滤波概念，称带通滤波器。 环状光栏给物镜后焦面提供的是照射在环形甲像平面上的相干光束。照射在环形像平面上的相图10-20显徽镜的成像光路干光束，不同于线形窄缝所提供的相干光束.前者不能造成带有方向性衍射斑.在共扼面上的光分布强度也不像窄缝衍射那种零级强度。它所造成的衍射光是均匀的无方向性的. F. Zernike在相差尼康显微镜的物镜后焦面上放置了位相板。恰巧位相板的吸收环变成环状光栏的成像平面。其结果就像F. Zernike指出的，如果人工地改变照射到不吸光物体而形成初级成像光束的光波，以此来改变衍射光和直射光的位相和振幅，使之近似乎吸光物体的初级成像光束时，那么其结果就造成完全像吸光物体的次级成像，也就是加强了物体细节的反衬度。巧妙地使用位相板，就能够使物像平面上的光强度分布与物体细节的位相信息成为线性关系.也就是人工地用物体细节的位相分布调整像平面的光强分布。甚至巧妙地选配不同类型的位相板，使之适合于物体细节的折射率时，可以强使物像平面上的反衬度出现逆转，即由明反差改变为暗反差，或者反之。

实验室有两台国产的双目显微镜一台是体视的，想给它们配个电子目镜，看到网上价格从1两百到一两千都有，有些无从选择了。希望价格在1000左右，当然物美价廉更好。像素能够200万以上，成像效果较好，起码发文章能用。另外，由于需经常看荧光染色的植物（比如花粉管），微生物（荧光染色，紫外激发）的片子，打算购买一台国产的荧光显微镜。价格能控制在3 ，4万以内。看了上光的 “落射荧光显微镜XSP-63B”（http://www.sgaaa.com/yingguang1.htm），应该能满足使用。似乎贵了些。还请网上各位推荐合适的荧光显微镜，如能顺告价格，不胜感谢。

（1）严格按照荧光显微镜出厂说明书要求进行操作，不要随意改变程序。　　（2）应在暗室中进行检查。进入暗室后，接上电源，点燃超高压汞灯5～15min，待光源发出强光稳定后，眼睛完全适应暗室，再开始观察标本。　　（3）防止紫外线对眼睛的损害，在调整光源时应戴上防护眼镜。　　（4）检查时间每次以1～2h为宜，超过90min，超高压汞灯发光强度逐渐下降，荧光减弱；标本受紫外线照射3～5min后，荧光也明显减弱；所以，最多不得超过2～3h。　　（5）荧光显微镜光源寿命有限，标本应集中检查，以节　省时间，保护光源。天热时，应加电扇散热降温，新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时，须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。　　（6）标本染色后立即观察，因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延缓荧光减弱时间，防止封裱剂蒸发。（7）荧光亮度的判断标准：一般分为四级，即“一”—无或可见微弱荧光。“+”—仅能见明确可见的荧光。“++”—可见有明亮的荧光。“+++”—可见耀眼的荧光。

显微镜成像系统，是能够连接显微镜和电脑，方便教学与及研究，不知道有多少人选择了便用显微镜成像系统

透射光荧光显徽镜(transmited light fluorescence microscope)可以和暗视野置、干涉装置配合使用。因此目前奥林巴斯显微镜公司仍然出售这类型号的显微镜。但是透射光荧光显微镜的照明光路即激发光束必须通过载物玻片。为了减少激发光线的损失.透射光荧光微镜应该配用石英玻璃载物片。研究工作中大量使用石英载物片和盖玻片是一项昂贵的消耗。因为透射光荧光显微镜的这种缺点，目前愈来愈多的研究工作者欢迎落射光荧光显微镜。经济条件不足的基层研究单位急需使用荧光显微镜时，可以用尼康显微镜配制成简易但仍然很有效的荧光显微镜。例如电影放映机用的碳弧灯或高压汞灯当作光源.自制如所示透光鼓形瓶。瓶内装满5-10%硫酸铜水溶液。该溶液中逐滴加入氢氧化铁水。开始滴加时瓶内出现绵絮状沉淀物.随着铁水的滴加，绵絮状沉淀物愈来愈多。在继续加按水的过程中按水的量达到一定程度时，绵絮状沉淀物开始消融。这时要谨慎地滴加到最后的绵絮状沉淀物消失时停止加铁水。瓶内硫酸铜液由无色变成蓝紫色美丽的溶液.这种溶液可当作激发滤光片完全可以满足荧光显微镜观察的要求.激发光通过标本变成荧光成像光束进入目镜。在目镜上方或目镜体内放置黄色滤光片，以保护观察者的角膜。一般市售照像黄色滤光片可以使用。或者按着本书显微摄影一章中介绍的配方自制黄色滤光片。自制滤光片的方法比起该章介绍的方法还可以简化.例如取一段照像底片不经显影直接定影。通过定影剂将感光胶膜上的澳化银洗掉。胶片变成透明胶膜。将此膜浸泡于上述染液中即可制成滤光片。

[b]摘要[/b]在神经科学和神经外科中对活体大脑组织中神经元的成像能力是一项基本要求。尤其是需求一种具有测微计尺分辨率的大脑形态学的非侵入探针的开发，因为它可以在临床诊断上提供一种非侵入式光学活体组织检查的手段。在这一领域，双光子激光扫描显微镜(2PLSM)是一个强大工具，并已成为活体生物样品最小侵入性损害的高分辨率成像的标准方法。但是，(2PLSM)基于光学方法提供足够分辨率的同时，对荧光染料的需求妨碍了图像对比度的提高。本文中，我们提供了一种活体大脑组织以细胞分辨率的高对比度成像方法，无需荧光探针，使用光学三次谐波发生进行成像。我们利用细胞水平的特殊几何学和大脑组织的液体内容物来获取THG的部分相匹配，提供了一种荧光对比度机制的替代方法。我们发现THG大脑图像允许快速、无侵入性标记的神经元、白质结构、血管同时成像。而且，我们利用THG成像来引导微吸管指向活体组织中指定的神经元。这个工作是一个无标记活体大脑成像的主要步骤，并开启了活体大脑中激光引导的微注射技术发展的可能性。[b]材料与方法[/b]THG成像对于THG成像实验，我们使用了一台商业化双光子激光扫描显微镜([color=#ff0000]TrimScope, Lavision BioTec[/color])。光源是一个光学参量震荡器（Mira-OPO，APE），810nm泵浦光来自一个Ti：Sa锁模激光器(Coherent Chameleon Ultra II)。使用一个20X，0.95N.A水浸物镜(Olympus XLUMPFL-IR)将光聚焦到样品上。使用epidetection几何学描述THG实验。使用分光镜(Chroma T800lpxrxt)将背景散射THG光子从入射激光束中分离出来，用一个THG波段的带通滤波器(Chroma HQ390-70X)过滤。检测器是GaAsP高灵敏度光电倍增管(Hamamatsu H7422-40)，400nm处量子效率为25%。最高分辨率成像(1024×1024像素)的典型获取时间为1.6s，我们用于目标定向实验的512 X 512像素成像时间为0.6s。 为与前向端口比较，使用了一个定制的投射端口。这个端口使用了一个1.4N.A油浸物镜，一个长波分光镜（UQG optics)和一个400nm的相干窄带滤波器。对于THG与SR-101联合实验我们用1200nm的OPO来同时产生两种信号。使用一个594nm带通和561nm隔断的分光镜将SR-101荧光从THG信号中分离。SR-101信号使用一个PMT检测(Hamamatsu H6780-20)。Nile Red和THG成像也是由1200nm的OPO同步激发。在这个案例中THG信号由投射端口测量，Nile Red荧光通过一个593∕40 nm的带宽滤波器检测。对于THG和GFP联合成像，用来泵浦OPO的Ti：Sa激光被调谐到970nm并耦合到显微镜中。组织块的GFP和THG信号使用同一个检测器连续测量。但使用一个不同的(561∕40 nm)带通滤波器检测GFP。使用显微镜软件(Imspector Pro)获取图像并以16bit 的tiff格式存储，图像分析使用Image J(MacBioPhotonics)进行。[b]主要结果[/b] [img=,575,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/21.jpg[/img]Fig. 1.无标记活体大脑的三次谐波显微成像(A)脑组织THG成像的epidetection几何学图示。插图：THG原理。注意基质中没有光学激发发生。(B) 树突处的聚焦激光束。通过将激光聚焦体积设定到树突直径的几倍大小，可以获得部分相匹配，显著的THG信号将会产生。(C)细胞体内的聚焦激光束。由于不好的结构相匹配状态，没有THG信号产生。(D) 小鼠大脑组织的活神经元成像。体细胞以暗影存在。 [img=,466,500]http://qd-china.com/uploads/bio-product/22.jpg[/img]Fig. 2.活体大脑组织的THG成像(A)小鼠皮质的THG图像 (B) 与A同位置的Nile Red染色的双光子荧光图像 (C) 大鼠凹陷的脑回THG图像（水平切面） (D)小鼠脑胼胝体THG图像，轴突纤维束被清晰得分辨。Movie S1是这个结构的一个3D投影 (E)小鼠大脑纹状体的THG图像（冠状面）。白质和神经元细胞清晰可见。明亮的粒状结构是垂直穿行图像平面的轴突纤维。Movie S2是这个区域的3D投影。(F)麻醉活小鼠的脑皮质上层的血管THG图像（z栈平均投影密度是50um） [img=,510,767]http://qd-china.com/uploads/bio-product/23.jpg[/img]Fig. 3. THG与双光子成像的叠加 (A)小鼠额前叶脑皮质的THG图像 (B)SR-101标记的星细胞双光子图像 (C) A、B的叠加提供了神经网络中星细胞的分布信息 (D) 小鼠额前叶皮质的THG图像 (E) GFP标记的生长抑素神经元的双光子荧光图像 (F)D、E的叠加显示了生长抑素神经元在脑前叶皮质结构中的分布 [img=,461,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/24.jpg[/img]Fig. 4.THG成像深度与自动化细胞检测 (A-C) 小鼠额前叶皮质的THG图像，成像深度分别为100, 200, and 300 μm 。每幅图像都是3个以2微米深度间隔独立图像的最大密度投影(D) 110 μm深度处神经元细胞的自动检测THG图像。细胞检测的运算法则定义为以红色显示的神经元 (E)红色标记：来自A-C的图像栈的细胞可见性对比。黑色标记：作为一个深度功能的平均检测到的THG密度。 [img=,531,768]http://qd-china.com/uploads/bio-product/25.jpg[/img]Fig. 5. 无标记目标定向和细胞活性(A)小鼠新大脑皮层的THG图像 (B) 在对一个神经元进行THG引导膜片钳之后同一位置的THG图像 (C)一个200um深处钳住神经元的大视野THG图像（5幅深度间隔2um的图像平均） (D)记录以100pA电流脉冲刺激B中被钳住的神经元的动力势训练 (E) 测量在THG扫描期间静止膜电位的改变。即使以最高的能量，也只观察到4%的电压变化，保持了完全的可逆性。0.8秒的周期相应于图像扫描时间。(F)最大观察到的静止膜电位Vs扫描时的激光能量。没有非线性效应出现。